本发明涉及用于诊断受试者中的阵发性心房颤动的方法，其包括：测定来自怀疑患有阵发性心房颤动的受试者的样品中fabp-3（脂肪酸结合蛋白3）的量，并且将测定的量与参考量进行比较。本发明的方法可以进一步包括bnp型肽的测定。进一步由本发明涵盖的是适于进行本发明的方法的装置。
阵发性心房颤动定义为复发性心房颤动（af）发作，其在小于7天（通常小于24小时）内自发终止。它可以是自终止的或间歇性的。阵发性af是常见的（5-10%的老年受试者（参见prevalence，incidenceandlifetimeriskofatrialfibrillation:therotterdamstudy.heeringa等人，eurheartj.2006；27（8）:949））。如果未施用抗凝疗法，未治疗的患者具有增加的中风危险。心脏心律失常如心房颤动的诊断，通常涉及心律失常的原因确定和心律失常的分类。检测af的黄金标准是心电图（ecg），优选作为24小时ecg（动态心电图监测（holtermonitoring））执行。然而，动态心电图监测仅在ecg记录的24小时时期内发生心律失常时才能检测到af。因此，通过动态心电图监测常常无法检测到阵发性af。
各种科学出版物涉及处于增强水平的生物标记物与心房颤动的相关性（综述于：biomarkersinatrialfibrillation:investigatingbiologicplausibility，cause，andeffectr.beckerjournalofthrombosisandthrombolysis19（1），71–75，2005）。
nt-probnp的测定允许评价收缩功能障碍。进一步地，高灵敏度的肌钙蛋白测定允许检测亚临床心脏损伤。据描述，肌钙蛋白t和nt-probnp两者的升高水平独立地预测在6或12个月后的af首次复发的较高危险（circulatingcardiovascularbiomarkersinrecurrentatrialfibrillation:datafromthegissi-atrialfibrillationtrial，r.latini等人，jinternmed2011；269:160–171）。已进一步描述了，可以基于心脏蛋白水平，肌钙蛋白t和nt-probnp来选择患者，以诊断之前已发生且甚至追溯至约1周之久的阵发性af，并且选择可能获益于抗凝疗法的患者（wo2014/072500）。
生物标记物fabp-3（脂肪酸结合蛋白3），也称为心脏型脂肪酸结合蛋白（h-fabp），已提示为心肌梗塞的早期标记物。fabp-3是低分子量胞质蛋白-人fabp-3是具有132个氨基酸和14.8kda的多肽-并且丰富地存在于心肌中。当心肌受损时，如在心肌梗塞的情况下，低分子量的胞质蛋白包括fabp-3被释放到循环内，并且升高的fabp-3水平在血液样品中是可检测的（参见例如ruzgar等人，heartvessels，21；209-314（2006）。fabp-3和h-fabp的其它名称是：fabp-11（脂肪酸结合蛋白11）、m-fabp（肌肉脂肪酸结合蛋白）、mdgi（乳腺衍生的生长抑制剂）和o-fabp。
与处于窦性心律的患者相比，在具有进行中的心房颤动（af）的患者中观察到升高的循环fabp-3水平（otaki等人，internalmedicine，（2014）第53卷，第7期，第661-8页）。
观察到升高的fabp-3循环水平与af的术后事件相关（sezai等人，carperitideandatrialfibrillationaftercoronarybypassgrafting:thenihonuniversityworkinggroupstudyoflow-dosehanpinfusiontherapyduringcardiacsurgerytrialforpostoperativeatrialfibrillation.circulation:arrhythmiaandelectrophysiology，（2015年6月4日）第8卷，第3期，第546-553页）。
增加的fabp-3水平与心脏手术后的心房颤动相关，提示缺血性心肌损伤是潜在的贡献机制（rader等人，perioperativeheart-typefattyacidbindingproteinlevelsinatrialfibrillationaftercardiacsurgery.heartrhythm:theofficialjournaloftheheartrhythmsociety，（2013）第10卷，第2期，第153-7页）。
yang等人描述了β受体阻滞剂和抗缺血药曲美他嗪（trimetadizine）的组合使用。2016年指南指出，当尽管用β受体阻滞剂（或替代品）治疗，心绞痛仍持续时，曲美他嗪可以考虑用于治疗稳定型心绞痛伴有症状的hfref，以缓解心绞痛（有效的抗心绞痛治疗，在hf中是安全的）。该建议基于提示曲美他嗪可以改善hfref患者中的nyha功能能力、运动持续时间和lv功能的大量证据。不存在单独在hf的背景下的曲美他嗪的建议。（yang等人efficacyofmetoprololincombinationwithtrimetazidineinpatientswithatrialfibrillationanditseffectsonserumconcentrationsofh-fabp.southchinajournalofcardiovasculardiseases，（2014）20（2），168-170）。该出版物的作者描述了在具有临床症状的终点改善的af患者中使用与β受体阻滞剂组合的曲美他嗪，减少af的复发且减少fabp3水平。不存在fabp3与阵发性af显著相关的暗示。通过这些药物改善的几种不同的临床参数也可以引起fabp3的减少。曲美他嗪是一种抗缺血药，其通过抑制脂肪酸代谢来改善心肌葡萄糖的利用。fabp3在缺血过程中在长链脂肪酸的胞质转运和保护心肌细胞免受脂肪酸影响中起作用。提示fabp3作为缺血性心脏损伤的参数，以与抗缺血药机制相关联。β受体阻滞剂是降压药。β受体的阻断减少心输出量和血压，以及肾血流量和肾脏的肾小球滤过率。升高的fabp3水平可以起因于由于肾功能障碍的清除率减少。提示fabp3作为肾小球滤过率减少的参数，以与抗高血压药机制相关联。
us2006/099608和us2007/218498公开了在用于诊断血管状况的几种生物标记物的列表内的fabp-3。
us2011/144205公开了处于心力衰竭危险中的无症状患者的筛查。fabp-3在几种生物标记物的列表内得到描述。
us2015/126385公开了fabp-3可以帮助缺血性中风的诊断。
根据us2016/258965，fabp-3可以指示自从作为几种心脏病症之一的中风发作以来已经过的时间，。
在具有先前短暂性脑缺血发作史的患者中，观察到升高的fabp-3循环水平与复发性中风的危险相关（segal等人population-basedstudyofbloodbiomarkersinpredictionofsubacuterecurrentstroke.stroke（2014）第45卷，第10期，第2912-2917页）。
对于大多数生物标记物包括crp观察到在从阵发性到持续性或永久性心房颤动的患者亚组中循环水平的逐渐升高（li等人，plasmaoxidativestressandinflammatorybiomarkersareassociatedwiththesizesoftheleftatriumandpulmonaryveininatrialfibrillationpatients.clincardiol（2017）40（2），第89–942017页，或kossaify等人，perspectivesofbiomarkersinacutecardiaccare.biomarkerinsights（2013）8，第115-126页）。
因此，在心房颤动的后期阶段观察到大多数af生物标记物，例如crp的显著增加。
然而，由于心房颤动是中风和全身性栓塞的重要危险因素，因此心房颤动的早期诊断，且因此阵发性心房颤动的诊断是高度需要的。心房颤动最令人恐惧的后果是（缺血性）中风，当进入脑部的血流被血块或血管衬里中称为斑块的脂肪沉积所阻塞时，所述中风发生。无论症状如何，患有心房颤动的个体具有5倍增加的缺血性中风危险。此外，由来自af的并发症引起的中风趋于比具有其它潜在原因的中风更严重。由心房颤动引起的中风造成更使人虚弱的残疾，并且具有更高的死亡率。所有中风患者中的至少30%据估计患有心房颤动，使得用于中风预防的经口抗凝剂（oac）已成为有益的常见治疗。
如从上文可以得出的，阵发性心房颤动的检测具有特别的关联性，但是挑战性的。相应地，需要用于诊断阵发性心房颤动的可靠方法。
本发明潜在的技术问题可以看作顺应上述需求的方法的提供。该技术问题通过权利要求和本文下文中表征的实施方案解决。
有利地，在本发明的研究的上下文中发现，来自受试者的样品中的fabp-3的量测定允许诊断阵发性心房颤动。与af的其它几种生物标记物形成对比，fabp-3在af的早期阶段已经显著增加。由于本发明，因此可以评价受试者是否患有阵发性心房颤动。
相应地，本发明涉及用于诊断受试者中的阵发性心房颤动的方法，其包括：
（a）测定来自怀疑患有阵发性心房颤动的受试者的样品中fabp-3（脂肪酸结合蛋白3）的量，和
（b）将如步骤a）中测定的量与参考量进行比较。
在本发明的方法的一个实施方案中，该方法进一步包括在步骤a）中测定来自受试者的样品中的bnp型肽的量，并且在步骤b）比较中所述bnp型肽的量与参考量。
相应地，本发明涉及用于诊断受试者中的阵发性心房颤动的方法，其包括：
（a）测定来自怀疑患有阵发性心房颤动的受试者的样品中fabp-3（脂肪酸结合蛋白3）的量和bnp型肽的量，和
（b）将如步骤a）中测定的量与参考量进行比较。
在一个优选实施方案中，心房颤动（af）的诊断基于比较步骤b）的结果。
相应地，本发明优选包括以下步骤：
a）测定来自受试者的样品中的fabp-3的量，以及任选的bnp型肽的量，
b）将fabp-3的量与参考量（对于所述标记物）进行比较，并且任选地将bnp型肽的量与参考量（对于所述标记物）进行比较，和
c）基于比较步骤b）的结果诊断心房颤动。
如根据本发明提及的方法包括基本上由上述步骤组成的方法或包括进一步步骤的方法。此外，本发明的方法优选是离体方法，且更优选是体外方法。此外，它还可以包括除上面明确提到的那些之外的步骤。例如，af的诊断可以进一步基于通过使用手持式ecg装置（如本文中其它地方详细描述的），在至少一周的时期内，从所述受试者获得的间歇性ecg记录的评价。此外，进一步步骤可以涉及进一步标记物的测定和/或样品预处理或通过该方法获得的结果评估。该方法可以手动进行或通过自动化辅助。优选地，对于步骤（a）中的测定或步骤（b）中的计算机实施的计算，步骤（a）、（b）和/或（c）可以全部或部分地通过自动化，例如通过合适的机器人和感官设备来辅助。
优选地，如本文使用的，术语“诊断”优选意指评价如根据本发明的方法提及的受试者是否患有阵发性心房颤动（af）。例如，该术语指受试者是否患有阵发性af的概率的评价。因此，评价受试者具有患有af的低或高概率。诊断为患有阵发性af的受试者应该具有患有阵发性af的高概率（例如约80%或更高的概率）。诊断为不患有阵发性af的受试者应该具有患有阵发性af的低概率（例如约15%或小于15%的概率）。相应地，如本文使用的，表述“诊断阵发性心房颤动”应该理解为“帮助”或“辅助”阵发性心房颤动的诊断。例如，医生可以辅助阵发性心房颤动的诊断。
如本领域技术人员将理解的，本发明的诊断通常不预期对于100%的待测受试者是正确的。术语“诊断”优选要求可以对于统计学显著的受试者部分做出正确诊断。部分是否是统计学显著的可以通过本领域技术人员使用各种众所周知的统计评估工具无需费力地测定，例如，置信区间的测定、p值测定、student'st检验、曼怀二氏检验等。细节在dowdy和wearden，statisticsforresearch，johnwiley&sons，newyork1983中找到。优选的置信区间为至少90%、至少95%、至少97%、至少98%或至少99%。p值优选为0.4、0.1、0.05、0.01、0.005或0.0001。
本领域已知生物标记物在各种疾病和病症中可以是增加的。这也适用于fabp-3和bnp型肽。例如，fabp-3已知在患有急性冠状动脉综合征的患者中是增加的，而bnp型肽已知在患有心力衰竭的患者中是增加的。然而，这由本领域技术人员加以考虑。
术语“心房颤动”（“缩写为”af或afib）是本领域众所周知的。如本文使用的，该术语优选指室上性快速性心律失常，其特征在于不协调的心房激活，伴随心房机械功能的随之恶化。特别地，该术语指特征在于快速和不规则跳动的异常心律。它涉及心脏的两个上部腔室。在正常的心律下，由窦房结生成的脉冲传播通过心脏，并且引起心肌收缩和血液泵送。在心房颤动中，窦房结的规律电脉冲替换为紊乱的快速电脉冲，其导致不规则的心搏。心房颤动的症状是心悸，昏厥，呼吸急促或胸痛。然而，大多数发作没有症状。在心电图上，心房颤动的特征是一致的p波替换为在振幅、形状和时机方面变化的快速振荡或颤动波，当房室传导完整时，伴有不规则、频繁的快速心室响应。
美国心脏病学会（americancollegeofcardiology）（acc）、美国心脏协会（americanheartassociation）（aha）和欧洲心脏病学会（europeansocietyofcardiology）（esc）提示了下述分类系统（参见fuster（2006）circulation114（7）:e257–354，其随同整体引入作为参考，参见例如文件中的图3）：首次检测到的af，阵发性af，持续性af和永久性af。
所有患有af的人最初都在被称为“首次检测到af”的类别中。然而，受试者可能具有或没有先前未检测到的发作。如果af持续超过一年，则受试者患有永久性af。特别地，不发生回到窦性心律的转变（或仅在医疗干预下）。如果af持续超过7天，则受试者患有持续性af。受试者可能需要药理学或电学干预，以终止心房颤动。因此，持续性心房颤动在发作中发生，但心律失常不会自发地转变回窦性心律。阵发性心房颤动优选指持续高达7天的心房颤动的间歇性发作。在阵发性af的大多数病例中，发作持续小于24小时。阵发性心房颤动的发作自发终止，即无需医疗干预。阵发性af是无症状的和诊断不足的（无症状性af）。本发明的优选发作长度短于48小时、24小时或12小时（阵发性af）。相应地，如本文使用的，术语“阵发性心房颤动”定义为优选在小于48小时内，更优选在小于24小时内，且最优选在小于12小时内自终止的af发作。优选地，所述发作是复发性的。进一步地，设想发作在小于6小时内自终止。
持续性和阵发性af两者均可以在数周或数月内复发，由此通过ecg记录提供阵发性和持续性af的区分：当患者已具有两次或更多次发作时，af被视为复发性的。如果心律失常自发终止，则af，特别是复发性af指定为阵发性的。如果af持续超过7天，则它指定为持续性的。
受试者是否患有阵发性或持续性心房颤动，或者受试者是否不患有af，可以通过心外膜高密度标测加以证实。实施例节段中应用的这种方法是根据起因于电激活的颤动波的不同传导模式，用于区别窦性心律、阵发性和持续性af亚群的不同手段（参见eckstein等人，transmuralconductionisthepredominantmechanismofbreakthroughduringatrialfibrillationevidencefromsimultaneousendo-epicardialhigh-densityactivationmapping.circarrhythmelectrophysiol.（2013）6，第334-341页；vanmarion等人，diagnosisandtherapyofatrialfibrillation:thepast，thepresentandthefuturediagnosisandtherapyofatrialfibrillation:thepast，thepresentandthefuturejafib:journalofatrialfibrillation；aug/sep2015，第8卷，第2期，第5页）。
如本文提及的，术语“受试者”优选是哺乳动物。哺乳动物包括但不限于驯养动物（例如牛、绵羊、猫、犬和马）、灵长类动物（例如人和非人灵长类动物，例如猴）、兔子和啮齿类动物（例如小鼠和大鼠）。在一个优选实施方案中，受试者是人。受试者可以是男性或女性。
在一个实施方案中，受试者可以具有阵发性心房颤动的至少一种危险因素。优选的危险因素是年龄（参见下一段，例如受试者为65岁或更大）、高血压例如需要抗高血压药物的高血压、心力衰竭例如心力衰竭aha阶段a-c、中风史、心脏手术或消融史。优选地，受试者还可以具有来自远程心电图诊断、手持装置包括健康应用程序的提示。
优选地，待测试的受试者为50岁或更大，更优选为60岁或更大，且最优选为65岁或更大。进一步地，设想待测试的受试者为70岁或更大。
如上文所述，生物标记物fabp-3可以在除心房颤动外的各种疾病和病症中是增加的。在本发明的一个实施方案中，设想受试者不患有此类疾病和病症。例如，设想受试者应该不患有急性冠状动脉综合症。
在本发明的方法的一个实施方案中，待测试的受试者患有心脏病，特别是需要瓣膜手术的心脏病、或需要冠状动脉搭桥手术的心脏病。因此，受试者可以患有冠状动脉疾病，即稳定的冠状动脉疾病。受试者可以具有各种程度的心血管危险概况直至患有严重心力衰竭的患者。受试者可以没有心血管疾病。
优选地，怀疑患有阵发性心房颤动的受试者是显示心房颤动的至少一种症状、和/或在进行用于评价阵发性心房颤动的方法之前已显示心房颤动的至少一种症状的受试者。所述症状通常是短暂的，并且可以在几秒内出现且可以很快消失。心房颤动的症状包括头晕、昏厥、呼吸急促，且特别是心悸。相应地，心房颤动的至少一种症状选自头晕、昏厥、呼吸急促，且特别是心悸。优选地，在获得样品之前的六个月内，更优选在一个月内，甚至更优选在两周内，并且最优选在一周内，受试者显示心房颤动的至少一种症状。特别地，设想在获得样品之前的2天内，受试者已显示af的至少一种症状。另外，设想在获得样品之前的24小时内，或甚至12小时内，受试者已显示af的至少一种症状。因此，怀疑该受试者在这些时期之一内已显示出心房颤动的发作，即阵发性心房颤动。相应地，根据本发明的前述方法进行的步骤允许诊断（或更精确地，帮助诊断）受试者最近在这些时期内是否已遭受心房颤动的发作。特别地，在获得样品之前的一周内，特别是在两天内或在24小时内或在12小时内，受试者是否遭受心房颤动的发作。因此，本发明还考虑了用于诊断心房颤动，特别是阵发性心房颤动的最近发作的方法。
在本发明的方法的一个优选实施方案中，受试者没有已知的心房颤动，特别是阵发性心房颤动史。相应地，受试者先前，即在进行本发明的方法之前（特别是在从受试者获得样品之前），不应该已诊断为患有心房颤动。然而，受试者可以具有或没有先前可能未诊断出的心房颤动发作。
在本发明的方法或用途的一个实施方案中，受试者患有传导障碍。此类传导障碍可以通过在心脏手术期间心房颤动的侵入性电标测来证实（参见实施例节段）。脂肪浸润是传导障碍的一个重要决定因素，因为电屏障阻碍脉冲传播。
进一步地，优选地，待测试的受试者不患有永久性心房颤动和持续性心房颤动。因此，受试者既不患有永久性af也不患有持续性af。进一步地，设想受试者不患有心房扑动。
特别地，设想在进行本发明的方法之前（特别是在已获得待测试的样品之前），受试者未经受复律。复律是通过其将心律失常转换为正常心律的医疗程序。这可以通过电击复律或用抗心律失常药的复律来实现。
优选地，患者在获得样品时处于窦性心律中（即，处于正常窦性心律中）。相应地，受试者在获得样品时优选不遭受心房颤动的发作。
关于正常窦性心律的标准包括：正常心率（成人通常为每分钟60至100次心跳），规律性心律，具有在连续p波之间的最短和最长持续时间中的小于0.16秒变化，窦房结应该跟随心脏–因此，p波必须是圆形的，都具有相同形状，并且以正常p波轴（0至 75度）的1:1比率存在于每个qrs复合波前。正常pr间隔、qrs复合波和qt间隔、qrs复合波在导联i、ii、avf和v3-v6为阳性，而在导联avr中为阴性。
术语“样品”指体液样品，分离细胞的样品或者来自组织或器官的样品。体液样品可以通过众所周知的技术获得，并且包括血液、血浆、血清、尿、淋巴液、痰、腹水、或任何其它身体分泌物或其衍生物的样品。组织或器官样品可以通过例如活组织检查从任何组织或器官获得。在一个实施方案中，组织样品是心肌组织样品。特别地，样品是来自右心耳的组织样品。
分离的细胞可以通过分离技术如离心或细胞分选从体液或者组织或器官获得。例如，可以从表达或产生生物标记物的那些细胞、组织或器官获得细胞、组织或器官样品。样品可以是冷冻的、新鲜的、固定的（例如福尔马林固定的）、离心的和/或包埋的（例如石蜡包埋的）等。当然，在评价样品中标记物的量之前，细胞样品可以经受各种众所周知的收集后制备和贮存技术（例如核酸和/或蛋白质提取、固定、贮存、冷冻、超滤、浓缩、蒸发、离心等）。
在一个优选实施方案中，样品是血液（即全血）、血清或血浆样品。血清是在允许血液凝固后获得的全血的液体级分。为了获得血清，通过离心去除血块并收集上清液。血浆是血液的无细胞液体级分。为了获得血浆样品，将全血收集在抗凝剂处理的管（例如，柠檬酸处理或edta处理的管）中。通过离心从样品中去除细胞，且获得上清液（即血浆样品）。
在本发明的方法的一个优选实施方案中，该方法进一步包括在步骤a）中测定来自受试者的样品中的bnp型肽的量，以及在步骤b）中比较bnp型肽的量与参考量，即所述bnp型肽的参考量。
与本发明的方法结合测定的生物标记物是本领域众所周知的：
如本文使用的，术语"fabp-3"指脂肪酸结合蛋白3。fabp-3也称为心脏脂肪酸结合蛋白或心脏型脂肪酸结合蛋白（缩写为h-fabp）。优选地，该术语还包括fabp-3的变体。如本文使用的，fabp-3优选地涉及人fabp-3。编码人fabp-3多肽的多肽的dna序列以及人fabp-3的蛋白质序列是本领域众所周知的，并且首先由peeters等人（biochem.j.276（pt1），203-207（1991））描述。此外，人h-fabp的序列可以优选地在genbank条目u57623.1（cdna序列）和aab02555.1（蛋白质序列）中找到。fabp的主要生理功能被认为是游离脂肪酸的转运，参见例如storch等人，biochem.biophys.acta.1486（2000），28-44。fabp-3和h-fabp的其它名称是：fabp-11（脂肪酸结合蛋白11）、m-fabp（肌肉脂肪酸结合蛋白）、mdgi（乳腺衍生的生长抑制剂）和o-fabp。
在本发明的一个优选实施方案中，测定fabp-3多肽的量。在本发明的另一个实施方案中，测定fabp-3转录物的量。
脑利钠肽型肽（在本文中也称为bnp型肽）优选选自pre-probnp、probnp、nt-probnp和bnp。前原肽（在pre-probnp的情况下，134个氨基酸）包含短信号肽，其被酶促切割掉，以释放前肽（在probnp的情况下，108个氨基酸）。前肽进一步被切割成n末端前肽（nt-pro肽，在nt-probnp的情况下，76个氨基酸）和活性激素（在bnp情况下，32个氨基酸）。优选地，根据本发明的脑利钠肽是nt-probnp、bnp及其变体。bnp是活性激素，并且具有比其分别的失活配对物nt-probnp更短的半衰期。优选地，脑利钠肽型肽是bnp（脑利钠肽），且更优选地nt-probnp（激素原脑利钠肽的n末端）。
术语“测定”如本文提及的生物标记物，即fabp-3或bnp型肽的量，指生物标记物的定量，例如采用本文其它地方所述的适当的检测方法，以测定样品中生物标记物的水平。术语“测量”和“测定”在本文中可互换使用（与生物标记物结合）。
在一个实施方案中，生物标记物的量通过以下进行测定：使样品与特异性结合生物标记物的试剂接触，从而在该试剂和所述生物标记物之间形成复合物，检测形成的复合物的量，且从而测量所述生物标记物的量。
可以使用本领域一般已知的方法检测fabp-3多肽或bnp型肽。检测方法一般涵盖定量样品中生物标记物的量的方法（定量方法）。技术人员一般已知下述哪种方法适合于生物标记物的定性和/或定量检测。可以使用商购可得的蛋白质印迹和免疫测定，如elisa、ria、基于荧光和发光的免疫测定，就例如蛋白质方便地测定样品。检测生物标记物的进一步的合适方法包括测量对于肽或多肽特异性的物理或化学特性，例如其精确的分子量或nmr谱。所述方法包括例如生物传感器、与免疫测定偶联的光学装置、生物芯片、分析装置例如质谱仪、nmr分析仪或色谱装置。进一步地，方法包括基于微板elisa的方法，全自动或机器人免疫测定（例如在elecsystm分析仪上可用），cba（酶促钴结合测定，例如在roche-hitachitm分析仪上可用）和乳胶凝集测定（例如在roche-hitachitm分析仪上可用）。
对于如本文提及的生物标记物蛋白质的检测，使用此类测定形式的广泛范围的免疫测定技术是可获得的，参见例如美国专利号4,016,043、4,424,279和4,018,653。这些包括非竞争性型的单位点和两位点或“夹心”测定，以及传统的竞争结合测定。这些测定还包括标记抗体与靶生物标记物的直接结合。
夹心测定在最有用的免疫测定中。
采用电化学发光标记的方法是众所周知的。此类方法利用特殊金属络合物借助于氧化来达到激发态的能力，它们从所述激发态衰变到基态，发出电化学发光。关于综述，参见m.m.，chem.rev.104（2004）3003-3036。
在一个实施方案中，待用于测量生物标记物的量的检测抗体（或其抗原结合片段）是钌化的或铱化的。相应地，抗体（或其抗原结合片段）应该包含钌标记。在一个实施方案中，所述钌标记是联吡啶-钌（ii）络合物。或者抗体（或其抗原结合片段）应该包含铱标记。在一个实施方案中，所述铱标记是如wo2012/107419中所公开的络合物。
测量多肽（例如fabp-3或bnp型肽）的量可以优选包括以下步骤：（a）使多肽与特异性结合所述多肽的试剂接触，（b）（任选地）去除未结合的试剂，（c）测量结合的结合剂，即在步骤（a）中形成的试剂络合物的量。根据一个优选实施方案，所述接触、去除和测量步骤可以由分析仪单元执行。根据一些实施方案，所述步骤可以由所述系统的单个分析器单元或彼此可操作通信的多于一个分析器单元执行。例如，根据一个具体实施方案，本文公开的所述系统可以包括：用于执行所述接触和去除步骤的第一分析器单元，以及通过运输单元（例如，机器臂）可操作地连接至所述第一分析器单元的第二分析器单元，其执行所述测量步骤。
特异性结合生物标记物的试剂（在本文中也称为“结合剂”）可以共价地或非共价地偶联至允许检测和测量结合剂的标记。标记可以通过直接或间接方法完成。直接标记涉及标记直接（共价地或非共价地）与结合剂的偶联。间接标记涉及二级结合剂与一级结合剂的结合（共价地或非共价地）。二级结合剂应该特异性结合一级结合剂。所述二级结合剂可以与合适的标记偶联，和/或成为与二级结合剂结合的三级结合剂的靶（受体）。合适的二级和更高级结合剂可以包括抗体、二级抗体和众所周知的链霉抗生物素蛋白-生物素系统（vectorlaboratories，inc.）。结合剂或底物也可以用如本领域已知的一种或多种标签“加上标签”。此类标签然后可以是更高级结合剂的靶。合适的标签包括生物素、洋地黄毒苷、his标签、谷胱甘肽-s-转移酶、flag、gfp、myc标签、a型流感病毒血凝素（ha）、麦芽糖结合蛋白等等。在肽或多肽的情况下，标签优选在n末端和/或c末端处。合适的标记是通过适当的检测方法可检测的任何标记。通常的标记包括金颗粒、乳胶珠、吖啶酯（acridanester）、鲁米诺、钌络合物、铱络合物、酶促活性标记、放射性标记、磁性标记（“例如磁珠”，包括顺磁性和超顺磁性标记）和荧光标记。酶促活性标记包括例如辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶、萤光素酶及其衍生物。用于检测的合适底物包括二氨基联苯胺（dab）、3,3'-5,5'-四甲基联苯胺、nbt-bcip（4-硝基蓝氯化四唑和5-溴-4-氯-3-吲哚基磷酸盐，可作为现成的储备溶液从rochediagnostics获得）、cdp-star™（amershambio-sciences）、ecf™（amershambiosciences）。合适的酶-底物组合可以导致有色的反应产物、荧光或化学发光，其可以根据本领域已知的方法进行测量（例如使用光敏膜或合适的照相机系统）。关于测量酶促反应，上文给出的标准类似地适用。通常的荧光标记包括荧光蛋白（例如gfp及其衍生物）、cy3、cy5、德克萨斯红、荧光素和alexa染料（例如alexa568）。进一步的荧光标签例如可从molecularprobes（oregon）获得。还考虑了量子点作为荧光标记的使用。放射性标记可以通过已知且适当的任何方法，例如光敏膜或磷光体成像仪来检测。
还可以优选如下测量多肽的量：（a）使包含如本文其它地方所述的关于多肽的结合剂的固体支持物与包含肽或多肽的样品接触，和（b）测量与支持物结合的肽或多肽的量。用于制造支持物的材料是本领域众所周知的，并且尤其包括商购可得的柱材料、聚苯乙烯珠、乳胶珠、磁珠、胶体金属颗粒、玻璃和/或硅芯片和表面、硝酸纤维素条、膜、片层、duracyte、反应托盘的孔和壁、塑料管等。
在再一个方面，在测量所形成的复合物的量之前，从在结合剂和至少一种标记物之间形成的复合物中去除样品。相应地，在一个方面，可以将结合剂固定在固体支持物上。在再一个方面，可以通过施加洗涤溶液，从固体支持物上形成的复合物中去除样品。
“夹心测定”在最有用和最常用的测定中，涵盖了夹心测定技术的许多变体。简言之，在通常的测定中，未标记的（捕获）结合剂固定或可以固定在固体基质上，并且使待测试的样品与捕获结合剂接触。在合适的温育时期后，共足以允许形成结合剂-生物标记物复合物的时间段，然后加入用能够产生可检测信号的报告分子标记的第二（检测）结合剂，并且温育，允许足以形成结合剂-生物标记物标记的结合剂的另一种复合物的时间段。可以洗掉任何未反应的材料，并且通过观察由结合检测结合剂的报告分子产生的信号，来测定生物标记物的存在。通过可见信号的简单观察，结果可以是定性的，或者可以通过与包含已知量的生物标记物的对照样品的比较，结果可以是定量的。
通常的夹心测定的温育步骤可以根据需要和适当地变化。此类变化包括例如同时温育，其中使两种或更多种结合剂和生物标记物共温育。例如，将待分析的样品和标记的结合剂两者同时加入固定的捕获结合剂中。还能够首先温育待分析的样品和标记的结合剂，并且其后加入结合固相或能够结合固相的抗体。
特异性结合剂和生物标记物之间形成的复合物应该与样品中存在的生物标记物的量成比例。应理解，待施加的结合剂的特异性和/或灵敏度限定了样品中包含的能够特异性结合的至少一种标记物的比例程度。在本文的其它地方也可以找到如何进行测量的进一步细节。形成的复合物的量应该转化成反映样品中确实存在的量的生物标记物量。
术语“结合剂”、“特异性结合剂”、“分析物特异性结合剂”、“检测剂”和“特异性结合生物标记物的试剂”在本文可互换使用。优选地，它涉及包含特异性结合相应生物标记物的结合部分的试剂。“结合剂”或“试剂”的实例是核酸探针、核酸引物、dna分子、rna分子、适体、抗体、抗体片段、肽、肽核酸（pna）或化学化合物。优选的试剂是与待测量的生物标记物特异性结合的抗体。术语“抗体”在本文中以最广泛的含义使用，并且涵盖各种抗体结构，包括但不限于单克隆抗体、多克隆抗体、多特异性抗体（例如双特异性抗体）和抗体片段，只要它们显示出所需的抗原结合活性（即其抗原结合片段）。优选地，抗体是多克隆抗体。更优选地，该抗体是单克隆抗体。
术语“特异性结合（specificbinding）”或“特异性结合（specificallybind）”指结合反应，其中结合对分子在其中它们不显著结合其它分子的条件下显示出彼此的结合。当提及作为生物标记物的蛋白质或肽时，术语“特异性结合（specificbinding）”或“特异性结合（specificallybinds）”指结合反应，其中结合剂以至少10-7m的亲和力结合相应的生物标记物。术语“特异性结合（specificbinding）”或“特异性结合（specificallybinds）”优选指对于其靶分子至少10-8m，或甚至更优选至少10-9m的亲和力。术语“特异性的”或“特异性地”用于指示样品中存在的其它分子不显著结合靶分子特异性的结合剂。
如本文使用的，术语“量”涵盖生物标记物的绝对量、生物标记物的相对量或浓度、以及与其相关联或者可以由其得出的任何值或参数。此类值或参数包含通过直接测量从所述肽获得的所有特定物理或化学性质的强度信号值，例如质谱或nmr谱中的强度值。此外，涵盖的是通过在本说明书中其它地方指定的间接测量而获得的所有值或参数，例如，响应于从特异性结合的配体获得的肽或强度信号，从生物读出系统测量的响应量。应理解，与上述量或参数相关联的值也可以通过所有标准数学运算来获得。
如本文使用的，术语“比较”指将来自受试者的样品中fabp-3多肽或bnp型肽的量与生物标记物的参考量进行比较。应理解，如本文使用的比较通常指相应参数或值的比较，例如，将绝对量与绝对参考量进行比较，而将浓度与参考浓度进行比较，或将从样品中的生物标记物获得的信号强度与从参考样品中获得的相同类型的信号强度进行比较。比较可以手动或计算机帮助进行。因此，比较可以由计算装置进行。来自受试者的样品中生物标记物的测量或检测量的值和参考量可以例如与彼此进行比较，并且所述比较可以通过执行用于比较的算法的计算机程序自动地进行。进行所述评估的计算机程序以合适的输出格式提供所需评价。对于计算机帮助的比较，可以将测量的量的值与对应于适当参考的值进行比较，所述参考的值通过计算机程序贮存在数据库中。计算机程序可以进一步评估比较的结果，即以合适的输出格式自动提供所需评价。对于计算机帮助的比较，可以将测量的量的值与对应于适当参考的值进行比较，所述参考的值通过计算机程序贮存在数据库中。计算机程序可以进一步评估比较的结果，即以合适的输出格式自动提供所需评价。
根据本发明，fabp-3的量和任选地bnp型肽的量（特别是生物标记物nt-probnp的量）应该与参考进行比较。参考优选是参考量。如本文使用的，术语“参考量”指允许将受试者分配到以下任一的量：（i）患有阵发性心房颤动的受试者组，或（ii）未患有阵发性心房颤动的受试者组。可以从待与测试样品一起分析（即同时或随后）的参考样品中测定合适的参考量。
原则上，可以通过应用标准的统计方法，基于给定生物标记物的均值或平均值，对于如上文指定的受试者群组计算参考量。特别地，测试的准确性，例如旨在诊断或不诊断事件的方法，通过其接受者操作特征（roc）得到最佳描述（尤其参见zweig1993，clin.chem.39:561-577）。roc图表是在观察到的整个数据范围内，起因于不断变化的决策阈值的所有灵敏度相对于特异性对的图。诊断方法的临床表现取决于其准确性，即其将受试者正确分配至特定预后或诊断的能力。roc图通过绘制适合于做出区分的整个阈值范围的灵敏度相对于1-特异性的两个分布之间的重叠。在y轴上的是灵敏度或真阳性分数，其定义为真阳性测试结果数目与真阳性的数目和假阴性测试结果数目的乘积之比。在疾病或状况的存在下，这也已被称为阳性。它仅从受影响的亚组计算。在x轴上的是假阳性分数或1-特异性，其定义为假阳性结果的数目与真阴性的数目和假阳性结果的数目的乘积之比。它是特异性的指标，并且完全从未受影响的亚组计算。由于通过使用来自两个不同亚组的测试结果完全分开地计算真假阳性分数，因此roc图不依赖于群组中事件的流行率。roc图上的每个点代表对应于特定决策阈值的灵敏度/1-特异性对。具有完美判别力的测试（在结果的两个分布中没有重叠）具有通过左上角的roc图，其中正阳性分数为1.0或100%（完美灵敏度），而假阳性正分数为0（完美特异性）。关于无区别的测试（两组的结果的相同分布）的理论图是从左下角到右上角的45°对角线。大多数图介于这两个极端之间。如果roc曲线完全落在45°对角线以下，则这可以通过将“阳性”的标准从“大于”反转为“小于”，或反之亦然而容易地补救。定性地，图越靠近左上角，测试的总体准确性越高。取决于所需置信区间，可以从roc曲线中得出阈值，允许分别以灵敏度和特异性的适当平衡对于给定事件的诊断。相应地，优选地，通过对于如上所述的群组建立roc，并且由其得出阈值量，可以生成待用于本发明的前述方法的参考，即允许在受试者群组中区别患有阵发性心房颤动的受试者或未患有阵发性心房颤动的受试者的阈值。取决于对于诊断方法所需的灵敏度和特异性，roc图允许得出合适的阈值。应理解，对于排除患有阵发性心房颤动的受试者（例如，拒绝）期望最佳灵敏度，而对于待评价为患有阵发性心房颤动的受试者（即，纳入）设想了最佳特异性。特别地，设想受试者被评价为患有阵发性心房颤动。
在优选实施方案中，术语“参考量”在本文中指预定值。在一个优选实施方案中，所述预定值应该允许区别患有阵发性心房颤动的受试者和不患有阵发性心房颤动的受试者（任选地与ecg记录的结果组合）。在另一个实施方案中，所述参考量应该允许诊断受试者不患有阵发性心房颤动，即用于排除患有心房颤动的受试者。
在某些实施方案中，参考量衍生自已知不患有阵发性心房颤动的受试者或一组受试者，或者衍生自已知患有阵发性心房颤动的受试者或一组受试者。
优选地，来自受试者的样品中的fabp-3的量大于参考量，指示受试者患有阵发性心房颤动。
还优选地，来自受试者的样品中的fabp-3的量低于参考量，指示受试者不患有阵发性心房颤动。
如果测定了fabp-3和bnp型肽，则优选施加下述：
优选地，来自受试者的样品中的fabp-3的量大于参考量，并且来自受试者的样品中的bnp-型肽的量大于参考量，指示受试者患有阵发性心房颤动。因此，两个量均增加。
还优选地，来自受试者的样品中的fabp-3的量低于参考量，并且来自受试者的样品中的bnp型肽的量低于参考量，指示受试者不患有阵发性心房颤动。
在本发明的方法的一个优选实施方案中，该方法进一步包括通过使用手持式ecg装置，在至少一周的时期内，从所述受试者获得的间歇性ecg记录的评价。在这个实施方案中，受试者是否患有阵发性心房颤动的诊断是基于比较步骤（b）的结果，即fabp-3的量与参考量的比较结果，以及任选地，bnp型肽的量与参考量的比较结果和间歇性心电图记录的评价。
心电描记术（缩写为ecg）是记录心脏电活动的过程。ecg装置记录由心脏产生的电信号，所述电信号遍及在身体各处传播到皮肤。电信号的记录通过使测试受试者的皮肤与由ecg装置所包含的电极接触来实现。获取记录的过程是非侵入性且无危险的。
根据本发明，应当评价用手持式ecg装置获得的记录。如本文使用的，表述“评价间歇性ecg记录”优选指评价从受试者获得的间歇性ecg记录（即，ecg读数/ecg条）中心房颤动的存在或不存在。因此，记录被加以解释。所述评价可以由医生如心脏病学家进行和/或可以是计算机帮助的。例如，可以通过自动化软件来完成预评价。预评价估结果的最终评价可以由医生进行。
因此，如本发明的方法中所提及的手持式ecg装置应该允许心房颤动的诊断，即用于评价心房颤动的存在或不存在（在从受试者获得的ecg记录中）。
允许诊断af的手持式ecg装置由各种制造商生产。实例是来自lohmantechnologies的afibalert®（专门靶向心房颤动检测的装置）、来自瑞典zenicor的zenicor-ecg、alivecormobileecg、dimetekmicroambulatoryecgrecorder、ecgcheck、heartcheck™pen手持式ecg、instantcheckrealtimedisplayecg监视器、readmyheart装置或rekae100。
在本发明的方法的一个实施方案中，手持式ecg装置是单导联装置。在另一个优选实施方案中，用于获得间歇性ecg记录的ecg装置是12导联ecg装置。
在本发明的一个实施方案中，手持式ecg装置是由待测试的受试者操作的装置。因此，如本发明的方法中所提及的手持式装置应该允许通过测试受试者的自测试。换言之，待评价的记录通过自测试获得。
根据本发明，设想手持式ecg装置包括两个干接触电极。因此，考虑间歇性ecg记录已通过将两根手指（例如左拇指和右拇指）放在干接触电极上获得。可替代地，可以将干接触电极放在裸露的皮肤例如胸部上。
根据本发明的ecg记录应该是间歇性ecg记录。因此，不应该从受试者连续获得ecg记录（其是例如动态心电图监测的情况）。相应地，待评价的ecg记录是在至少一周的时期内定期获得的记录。
然而，设想每天至少一次从受试者获得ecg记录。该装置因此每天由受试者操作至少一次。如本文使用的，表述“至少一次”指一次或多于一次，例如两次、三次、四次、五次等。在一个实施方案中，每天两次或更多次获得ecg记录。记录可以经由移动电话被贮存或传输到ecg数据库，所述移动电话内置在ecg装置内或与ecg装置连接。例如，ecg装置可以与移动电话连接（例如，经由蓝牙或无线连接），所述移动电话将记录传输到数据库。可以经由应用程序（例如android或ios应用程序）达到传输。在将记录传输到数据库之后，可以就心房颤动的存在或不存在评价记录，即由医生加以解释。
（单个）记录的长度通常在约10秒至约120秒之间。在一个实施方案中，记录的长度在约20秒至约60秒之间。例如，通过将拇指放在两个电极上约30秒钟，可以获得ecg记录。
进一步地，特别设想当受试者显示心房颤动的症状时（条件是受试者已显示症状），获得间歇性ecg记录。症状在本文其它地方描述。所述症状通常是短暂的，并且可以在几秒内出现且可以很快消失。如果受试者未显示心房颤动的症状，则仍应该如上所述每天至少一次获得记录。
在一个实施方案中，应该在至少四天的时期内获得间歇的，即非连续的ecg记录。在另一个实施方案中，应该在至少一周的时期内获得间歇的，即非连续的ecg记录。因此，应该存在应该评价的至少七个，特别是至少十四个记录。在一个实施方案中，间歇性ecg记录应该已在至少十天的时期内获得。在另一个实施方案中，间歇性ecg记录应该已在至少两周的时期内获得。进一步地，设想待评价的间歇性ecg记录已在一周至两周的时期内，特别是在十天至两周的时期内获得。在至少一个记录中af的存在指示af，特别是阵发性af的诊断。
如果该方法包括如上文阐述的间歇性ecg记录的评价，则受试者是否患有心房颤动的诊断应该基于比较步骤b）的结果和间歇性ecg记录的评价。
在一个实施方案中，诊断患者未患有阵发性心房颤动（拒绝阵发性心房颤动）。通过间歇性ecg记录中心房颤动的不存在，以及在来自受试者的样品中的fabp-3的量低于参考量（以及如果测定了bnp型肽，则bnp型肽的量低于参考量），来指示这一点。换言之，与fabp-3（以及任选的bnp型肽）的量低于参考组合的间歇性ecg记录中心房颤动的不存在，指示受试者不患有阵发性心房颤动。因此，受试者具有患有阵发性心房颤动的低概率（例如低于10%或15%的概率）。
在一个实施方案中，诊断患者患有阵发性心房颤动。通过间歇性ecg记录中心房颤动的存在（即至少一个记录中心房颤动的存在），和/或在来自受试者的样品中的fabp-3的量（以及任选地bnp型肽的量）高于参考，来指示这一点。换言之，间歇性ecg记录中心房颤动的存在和/或fabp-3的量（以及任选地bnp型肽的量）高于参考，指示受试者患有阵发性心房颤动。因此，受试者具有患有阵发性心房颤动的高概率（例如高于70%或80%的概率）
与fabp-3的量高于参考组合的来自受试者的间歇性ecg记录中心房颤动的不存在，可能指示受试者患有心房颤动。尽管在ecg中未检测到心房颤动，但受试者很可能患有心房颤动。可以通过连续监测心血管系统的电活动至少24小时，例如通过动态心电图监测或植入式循环记录仪（ilr），来确认这一点。
在本发明的方法的一个实施方案中，所述方法进一步包括基于诊断结果推荐和/或开始至少一种合适的支持性措施的步骤。对于诊断为患有心房颤动的受试者，即具有患有af的高概率的受试者，应该推荐或开始所述至少一种合适的支持性措施。
如本文使用的，术语“推荐”意指建立关于合适的支持性措施的提示，所述提示可以应用于已诊断为患有阵发性af的受试者。
合适的支持性措施指可以应用于患有af的受试者的所有措施，即具有患有阵发性af的高概率。例如，患者管理措施包括验证阵发性af的诊断（例如通过动态心电图监测）和/或药物治疗。
如果受试者患有阵发性心房颤动，则应该推荐或开始用至少一种抗凝剂的疗法。抗凝剂应该旨在减少或预防血液凝固和有关的中风。优选地，抗凝剂选自肝素、香豆素衍生物例如华法林或双香豆素、组织因子途径抑制剂（tfpi）、抗凝血酶iii、因子ixa抑制剂、因子xa抑制剂、因子va抑制剂和凝血酶抑制剂。
在一个优选实施方案中，抗凝剂是非维生素k拮抗剂经口抗凝剂（缩写为noac）。此类抗凝剂抑制血凝块形成，并且与华法林不同，不是维生素k拮抗剂。此类抗凝剂是本领域众所周知的，并例如在hijazi等人，2015.theabc（age，biomarkers，clinicalhistory）strokeriskscore:abiomarker-basedriskscoreforpredictingstrokeinatrialfibrillation中描述。优选的noac是达比加群、利伐沙班和阿哌沙班。
相应地，本发明进一步涉及推荐和/或开始如上文阐述的至少一种合适的支持性措施的方法。在一个实施方案中，该方法包括本发明的方法的步骤，即诊断阵发性心房颤动的方法，如本文其它地方阐述的，以及推荐和/或开始至少一种合适的支持性措施的进一步步骤。在一个实施方案中，通过施用抗凝剂在受试者中治疗阵发性心房颤动。
本发明进一步涉及帮助诊断心房颤动的方法，所述方法包括以下步骤：
a）与诊断阵发性心房颤动的方法结合，如本文提及的获得或提供来自受试者的样品，
b）测定所述样品中生物标记物fabp-3的量和任选地bnp型肽的量，和
c）向受试者的主治医生提供关于生物标记物fafa-3的测定量和任选地bnp型肽的测定量的信息，从而帮助诊断所述受试者中的阵发性心房颤动。
主治医生应该是要求测定生物标记物的医生。前述方法应该帮助主治医生诊断阵发性心房颤动。
获得样品的前述方法的步骤a）不涵盖从受试者抽取样品。优选地，通过从所述受试者接收样品而获得样品。因此，样品可以已被递送。
本发明进一步涉及包括以下的方法：
a）提供用于生物标记物fabp-3的测试，以及任选地用于bnp型肽的测试，和
b）提供关于在阵发性心房颤动的诊断中，使用通过所述测试获得或可获得的测试结果的说明书。
前述方法的目的优选是帮助诊断阵发性心房颤动。
说明书应该含有用于进行如本文上文所述的诊断阵发性心房颤动的方法的方案。进一步地，说明书应该含有fabp-3的参考量的至少一个值，以及任选地bnp型肽的参考量的至少一个值。
“测试”优选是适于进行诊断阵发性心房颤动的方法的试剂盒。所述试剂盒应该包含用于生物标记物fabp-3的至少一种检测剂和任选地用于bnp型肽的至少一种检测剂。可以在单个试剂盒中或在两个分开的试剂盒中提供用于两种生物标记物的检测剂。
通过所述测试获得或可获得的测试结果是来自受试者的样品中的生物标记物的量的值。
此外，本发明涉及在来自受试者的样品中的以下用于诊断阵发性心房颤动（在所述受试者中）的用途：
i）生物标记物fabp-3和任选的bnp型肽，和/或
ii）与fabp-3特异性结合的至少一种检测剂，以及任选地与bnp型肽特异性结合的至少一种检测剂。
前述用途可以进一步涵盖手持式ecg装置，和/或通过使用手持式ecg装置，在至少一周的时期内，从所述受试者获得的间歇性ecg记录的使用。
与前述用途结合提到的术语，例如“样品”、“受试者”、“检测剂”、“fabp-3”、“特异性结合”、“阵发性心房颤动”和“已与用于诊断阵发性心房颤动的方法结合进行定义。定义和解释相应地适用。
在附图中：
图1：具有循环fabp-3的升高水平（中值：30个未患有af的患者的样品中的1.92ng/ml，14个患有阵发性af的患者的样品中的2.84ng/ml；16个患有持续性af的患者的样品中的2.75ng/ml）的阵发性af诊断。
图2：图1的图例中描述的患者的血浆样品中nt-probnp的结果。
图3：图1的图例中描述的14个患有阵发性af的患者的血浆样品和30个未患有af的患者的血浆样品中hscrp（血浆样品）的结果。
图4：基于应用算法rsem和deseq2的rnaseq分析，在af患者（病例）的右心耳的组织样品或窦性心律（对照）中fabp-3的差异表达。表达中的倍数变化（fc）=1.279；fdr（错误发现率）=0.009（39个未患有af的患者和11个af患者的组织样品分析）。
实施例
下述实施例应该阐明本发明。然而，它们不应该被解释为限制本发明的范围。
实施例1：阵发性af的检测
fabp3、nt-probnp和hscrp水平已在n=60个患者的血浆样品中进行测定，其中血液取样和生物标记物在由于cabg的开胸手术或瓣膜手术之前测定。在手术过程中用同时的心外膜高密度激活标测，生成了不同类型的af、阵发性af和持续性af或sr（对照）的证据。患有af、阵发性af或持续性af的患者和对照关于性别、年龄和并存病匹配。
心外膜高密度标测是根据起因于电激活的颤动波的不同传导模式，用于区别窦性心律、阵发性和持续性af亚群的不同手段（参见两者均在上文引用的eckstein等人和vanmarion等人）。
心外膜高密度标测例如即使在不存在心房颤动发作的情况下，也允许阵发性心房颤动的诊断。因此，它允许在不患有af的受试者、患有阵发性af的受试者和患有持续性af的受试者之间的可靠区别。
在血液取样时
•患有阵发性af的患者，任选处于窦性心律中；n=14个患者
•持续性af患者未处于窦性心律中；n=16个患者
•对照患者处于窦性心律中；n=30个患者。
数据评估显示，fabp3水平（不依赖于其它生物标记物）高于参考值（在研究中>2.3ng/ml）的患者被怀疑患有阵发性心房颤动，并且可能获益于抗凝剂。如图1中所示，对于阵发性af的检测观察到的fabp3的auc为0.718。对于持续性af观察到的auc为0.718。甚至令人惊讶地显示，从阵发性af患者到持续性af患者无法检测到循环fabp3水平的逐渐增加。观察到的循环fabp3中值在30个未患有af的患者的样品中为1.92ng/ml，在14个患有阵发性af的患者的样品中为2.84ng/ml；在16个患有持续性af的患者的样品中为2.75ng/ml。
与ntprobnp的fabp3形成对比，观察到从阵发性到持续性或永久性心房颤动的患者亚组中循环水平的逐渐增加，如图2中所示。对于阵发性af的检测观察到的ntprobnp的auc为0.636，并且对于持续性af的检测为0.873。因此，在本文分析的患者中，生物标记物fabp3允许阵发性af的改善诊断。
观察到的循环ntprobnp中值在30个处于窦性心律中的患者的样品中为154.31pg/ml；在14个患有阵发性af的患者的样品中为263.93pg/ml；在16个患有持续性af的患者的样品中为1829.35pg/ml。
如图3中所示，对于阵发性af的检测观察到的crphs的auc为0.608。对于持续性af的检测观察到的crphs的auc为0.644。
得出结论fabp3显示相对于crphs的有益性能，并且因此可以个别地和/或与ntprobnp组合来辅助阵发性心房颤动发作的检测。与升高的ntprobnp水平组合、fabp3水平高于参考值（在本研究中>2.3ng/ml）的患者被怀疑患有阵发性心房颤动，并且可以获益于抗凝剂。
因此，可以通过单独检测增强水平的fabp3或与nt-probnp组合，来达到呈现窦性心律的患者中的阵发性心房颤动的诊断。
实施例2：在af患者的心脏组织中fabp3的差异表达
差异fabp3表达水平已在来自n=39个患者的右心耳的心肌组织样品中进行测定。
rnaseq分析
在由于cabg的开胸手术或瓣膜手术过程中，对心房组织进行取样。
在手术过程中用同时的心外膜高密度激活标测，生成了af或sr（对照）的证据。患有af的患者和对照关于性别、年龄和并存病匹配。
对于以下制备心房组织样品
•af患者；n=11个患者
•处于sr中的对照患者；n=39个患者。
在应用算法rsem和deseq2的rnaseq分析中测定fabp3的差异表达。
如图4中所示，相对于39个对照患者，fabp3表达在11个患有持续性af的患者的分析的心房组织中发现是上调的。
表达中的倍数变化（fc）为1.279。fdr（错误发现率）为0.009。
在受损的终末器官即心房组织中测定了fabp3的改变表达。将fabp3mrna水平与心房组织的高密度标测的结果进行比较。如通过电标测表征的，在具有传导障碍的心房组织样品中检测到升高的fabp3mrna水平。传导障碍可能由脂肪浸润或间质性纤维化引起。在患有心房颤动的患者的心房组织中观察到的fabp3的差异表达支持以下：fabp在循环中从心肌释放，特别是从右心耳释放，并且升高的血清/血浆滴度帮助af发作的检测。
得出结论fabp3从心脏释放到血液内，并且可能帮助af发作的检测。
1.一种用于诊断受试者中的阵发性心房颤动的方法，其包括：
（a）测定来自怀疑患有阵发性心房颤动的受试者的样品中fabp-3（脂肪酸结合蛋白3）的量，和
（b）将如步骤a）中测定的量与参考量进行比较。
2.权利要求1的方法，其中所述受试者是在其获得所述样品时处于窦性心律的受试者。
3.权利要求1和2的方法，其中所述样品是血液、血清或血浆样品。
4.权利要求1和2的方法，其中所述样品是心肌组织样品。
5.权利要求1至4中任一项的方法，其中怀疑患有心房颤动的受试者显示或已显示心房颤动的至少一种症状。
6.权利要求5的方法，其中所述心房颤动的至少一种症状选自头晕、昏厥、呼吸急促，且特别是心悸。
7.权利要求1至6中任一项的方法，其中所述受试者不具有已知的心房颤动史。
8.权利要求1至7中任一项的方法，其中来自所述受试者的样品中的fabp-3的量大于所述参考量，指示所述受试者患有阵发性心房颤动。
9.权利要求1至7中任一项的方法，其中来自所述受试者的样品中的fabp-3的量低于所述参考量，指示所述受试者未患有阵发性心房颤动。
10.权利要求1至9中任一项的方法，其进一步包括在步骤a）中测定来自所述受试者的样品中的bnp型肽的量，并且在步骤b）中比较所述bnp型肽的量与参考量。
11.权利要求1至10中任一项所述的方法，其进一步包括通过使用手持式ecg装置，在至少一周的时期内，从所述受试者获得的间歇性ecg记录的评价。
12.权利要求1至11中任一项的方法，其中所述受试者是人受试者。
13.一种帮助诊断阵发性心房颤动的方法，所述方法包括以下步骤：
a）与诊断阵发性心房颤动的方法结合，如本文提及的获得或提供来自受试者的样品，
b）测定所述样品中生物标记物fabp-3的量和任选地bnp型肽的量，和
c）向受试者的主治医生提供关于生物标记物fafa-3的测定量和任选地bnp型肽的测定量的信息，从而帮助诊断所述受试者中的阵发性心房颤动。
14.以下在样品中用于诊断阵发性心房颤动的用途：
i）生物标记物fabp-3和任选的bnp型肽，和/或
ii）与fabp-3特异性结合的至少一种检测剂，以及任选地与bnp型肽特异性结合的至少一种检测剂。
15.权利要求14的用途，其中所述检测剂是抗体或其片段。
16.权利要求14和15的用途，其中所述样品是血液、血清或血浆样品，或者其中所述样品是心肌组织样品。
17.权利要求14至16中任一项的用途，其中所述受试者是在其获得所述样品时处于窦性心律的受试者。
18.权利要求14至17中任一项的用途，其中所述受试者不具有已知的心房颤动史。
技术总结