本发明属于微生物检测技术领域，涉及一种试剂盒及其应用，具体涉及一种用于细菌药敏检测的试剂盒及其应用，尤其涉及一种用于快速准确灵敏地检测细菌药敏性的试剂盒及其应用。
背景技术：
随着抗生素长期广泛超量使用，使得部分细菌产生变异成为耐药菌株，这种耐药性既会被其他细菌获得，也会传给下一代，这种情况继续恶化下去很可能使人类面临感染时无药可用的境地。因此，细菌耐药性研究已成为全球医学界共同关注的问题，细菌耐药性检测已成为医药卫生领域的热点之一。伴随着不同抗生素的滥用，耐药菌通常表现交叉耐药和多重耐药两种特性。细菌从单一耐药发展为多重耐药，是不同药物分别作用或耐药基因随质粒等传播的结果。总之，耐药性的产生是一个极其复杂的过程，通常由两种或多种不同类型的耐药机制相互作用，共同决定致病菌的耐药水平。细菌耐药性的普遍存在给临床治疗带来了严重的困扰，快速、准确、便捷地检测致病菌耐药性特性对临床使用抗生素具有指导性意义，谨慎合理地使用抗生素对耐药菌的控制尤为重要。
细菌药物敏感性实验是细菌耐药性检测最经典的方法，尤其稀释法是细菌耐药性检测的金标准，可获得精确的mic值、灵活性强，是临床和实验室研究最为常用的细菌耐药性检测方法。商品化自动分析系统的推广应用，相比稀释法大大缩短了实验周期，特别适用于临床细菌耐药性检测。随着分子生物技术的广泛应用，有研究人员用测耐药基因的方法用于快速药敏检测，无需培养直接对耐药基因位点进行检测，目前已出现细菌耐药基因检测试剂盒产品。
cn110541021a公开了一种中药单体药敏检测方法，采用微量肉汤二倍稀释法测定中药单体作用于细菌(包含多重耐药菌)的最低抑菌浓度，包括以下步骤：(1)将中药单体溶解于二甲基亚砜，配置成浓度为10nmg/ml的中药单体溶液；(2)取96孔板，从第二列起每孔加入二甲基亚砜10μl，第一列加入中药单体溶液20μl；(3)依次进行倍比稀释；(4)保存于温箱至二甲基亚砜全部挥发，得不同剂量梯度的中药单体；(5)将浊度为0.5的菌悬液加入96孔板，每孔100μl；37℃培养18h后观察结果；(6)结果判定：药物组出现无浑浊的最小浓度为中药单体的最低抑菌浓度(mic)。本发明检测过程简单能够简便有效测试中药单体的药敏性，可用来指导临床中药治疗细菌感染性疾病。
cn101532050公开了一种动物源细菌对β-内酰胺类药物耐药基因三重pcr检测技术，该方法包括扩增待测细菌耐药基因的三对pcr引物以及pcr模板制备试剂和细菌耐药基因多重pcr扩增试剂。较传统药敏试验，该多重pcr方法将检测时间从3-4天缩短至1天内完成。病原菌经常含有多种β-内酰胺酶基因，而该技术满足了同时检测多种基因的需求，提高了检测的准确性和特异性。该技术可用于检测临床分离菌中三种β-内酰胺类药物耐药基因。
无论是经典的稀释法亦或是自动分析系统，得出细菌药敏试验结果至少需要8小时以上。测耐药基因的方法仅可对已知耐药机制的耐药菌进行检测，对耐药机制未知的耐药菌无法检测，且有时通过耐药基因给出的细菌耐药性与表型并不密切相关，限制了该方法的广泛应用。
因此，开发出一种快速、准确、操作简单、适用范围广的检测细菌药敏性的方法是非常有意义的。
技术实现要素：
针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种试剂盒及其应用，具体提供一种用于细菌药敏检测的试剂盒及其应用，尤其提供一种用于快速准确灵敏地检测细菌药敏性的试剂盒及其应用。该试剂盒以鲁米诺-过氧化氢化学发光法为基础，能够快速准确灵敏地检测临床样本细菌耐药性，样品的前处理过程简单，样品检测时间远低于传统检测方法。本发明对解决快速指导抗生素的合理使用具有重要的现实意义。
为达到此发明目的，本发明采用以下技术方案：
一方面，本发明提供一种用于细菌药敏检测的试剂盒，所述试剂盒包括鲁米诺溶液、过氧化氢溶液和钴离子溶液。
研究发现临床大多需氧和兼性厌氧菌均产生过氧化氢酶(即触酶)，我们利用这一现象，创造性地将鲁米诺-过氧化氢化学发光反应应用于细菌药敏性检测，即通过检测不同浓度的过氧化氢来检测不同浓度的过氧化氢酶(即不同浓度的细菌)，从而可以对临床大多数的常见菌(如金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌等高感染率病原菌)进行检测。当细菌浓度低的时候，产生的化学发光信号强；反之，细菌浓度高的时候，消耗过氧化氢的量多，产生的化学发光信号弱。本发明以大肠杆菌和金黄色葡萄球菌为研究模型，根据本发明所涉及的检测方法的检测原理，所有表达触酶的细菌均能应用于本发明方法。本发明所涉及的用于细菌药敏检测的试剂盒中特定选择钴离子溶液，是因为鲁米诺-过氧化氢化学发光体系在没有催化剂或敏化剂时反应很慢，且只能产生较弱的光信号。本发明选用钴离子作为催化剂具有更强更持久的化学发光信号。本发明所涉及的用于细菌药敏检测的试剂盒能够快速、准确、灵敏地检测临床样本细菌耐药性，适用范围广，样品的前处理过程简单，样品检测时间远低于传统检测方法。本发明对解决快速指导抗生素的合理使用具有重要的现实意义。
优选地，所述试剂盒包括鲁米诺溶液0.5-1.0mmol/l、过氧化氢溶液0.5-2mmol/l和钴离子溶液10-20nmol/l。
本发明所述试剂盒中鲁米诺溶液、过氧化氢溶液和钴离子溶液的浓度特定选择上述数值范围内，是因为在此范围内，化学发光信号值与过氧化氢有很好的线性关系，通过检测不同浓度的过氧化氢进而可以很好地区分不同浓度的细菌，达到检测目的，准确度更高。
所述鲁米诺溶液的浓度可以为0.5mmol/l、0.6mmol/l、0.7mmol/l、0.8mmol/l、0.9mmol/l或1.0mmol/l等，范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再进行一一赘述。
所述过氧化氢溶液的浓度可以为0.5mmol/l、0.6mmol/l、0.8mmol/l、1mmol/l、1.2mmol/l、1.5mmol/l、1.8mmol/l或2mmol/l等，范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再进行一一赘述。
所述钴离子溶液的浓度可以为10nmol/l、12nmol/l、15nmol/l、16nmol/l、18nmol/l或20nmol/l等，范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再进行一一赘述。所述钴离子溶液例如氯化钴溶液、硫酸钴溶液等。
优选地，所述试剂盒包括鲁米诺溶液0.7-0.9mmol/l、过氧化氢溶液0.8-1.2mmol/l和钴离子溶液14-18nmol/l。上述数值范围是三种溶液配合效果最佳的范围。
另一方面，本发明提供一种检测细菌药敏性的方法，所述方法为利用如上所述的用于细菌药敏检测的试剂盒检测细菌药敏性。
优选地，所述方法包括如下步骤：
(1)制备实验组和对照组样本溶液；所述实验组样本溶液为待测菌液与药物的混合溶液；所述对照组样本溶液为待测菌液与培养基的混合溶液；
(2)取步骤(1)得到的样本溶液与过氧化氢溶液混合，反应；
(3)取步骤(2)反应后的溶液与钴离子溶液以及鲁米诺溶液混合，反应，检测化学发光值；
(4)计算实验组和对照组的化学发光值差值，即可得到该药物的细菌耐药性阈值图，由此将敏感菌和耐药菌分类，进而判断细菌耐药性。
在步骤(1)进行之前需对临床细菌样本进行前处理，示例性地可以为：取适量的细菌，挑菌落从临床样本细菌培养皿于装有培养基的试管中，混合均匀，用紫外分光光度计测菌液在波长为600nm处的od值，将其用培养基稀释到od＝0.1，从而保证每次实验菌的浓度基本一致。
优选地，步骤(1)所述药物包括抗生素。
优选地，步骤(1)所述实验组样本溶液的制备方法为：将待测菌液与药物混合后培养30-90min(例如30min、40min、50min、60min、80min或90min等)，离心，加水重悬。
优选地，步骤(1)所述培养基包括脑心浸液肉汤培养基。
此处选用脑心浸液肉汤培养基作为细菌孵育时所需要的培养基，该培养基营养丰富，一般是用于一些营养要求复杂的微生物，包括链球菌、肺炎球菌和脑膜炎双球菌，不易生长的微生物球菌等苛养菌。因此脑心浸液肉汤培养基用于细菌耐药性检测，可以为细菌生长提供充分的营养，加快细菌生长速度，进而缩短细菌孵育时间。
优选地，步骤(1)所述对照组样本溶液的制备方法为：将待测菌液与培养基混合后培养30-90min(例如30min、40min、50min、60min、80min或90min等)，离心，加水重悬。所述培养基的加入量与上述药物溶液的加入量保持一致。加水重悬过程中加入的水量也与其保持一致。
优选地，步骤(2)所述样本溶液与过氧化氢溶液的体积比为(1-2):1，例如1:1、1.2:1、1.5:1或2:1等，范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再进行一一赘述。
优选地，步骤(2)所述样本溶液中细菌浓度为在od值0.1的基础上稀释8-32倍，例如8倍、10倍、15倍、16倍、20倍、25倍或32倍等，范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再进行一一赘述。
所述样本溶液中细菌浓度会对最终的药敏性检测结果产生影响，在细菌浓度为od值0.1的基准条件下再稀释8-32倍，在稀释倍数为8-32倍时，化学发光信号对不同浓度的菌液有很好的区分度，其检测结果是更加准确的。
优选地，步骤(2)所述反应的时间为5-15min，例如5min、8min、10min、12min、14min或15min等，范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再进行一一赘述。
优选地，步骤(3)所述反应后溶液、钴离子溶液与鲁米诺溶液的体积比为1:(1-2):(1-3)，例如1:1:1、1:1:2、1:1:3、1:2:1、1:2:2或1:2:3等，范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再进行一一赘述。
优选地，步骤(3)所述检测化学发光值是指检测8-15s(8s、10s、12s、13s、14s或15s等)内的化学发光值并对其进行积分获得积分值。
所述化学发光值是指8-15s内的化学发光值的积分值，是因为该化学发光类型属于闪光型，发光持续时间很短，只有零点几秒到几秒。经实验结果显示，8-15s时的化学发光值趋于稳定，且8-15s内的化学发光积分值与对应的不同浓度的过氧化氢有很好的线性关系。
所述检测化学发光值的仪器可以是cytation系列高通量活细胞显微成像分析检测系统。
作为本发明的优选技术方案，所述检测细菌药敏性的方法具体包括如下步骤：
(1)将待测菌液与药物混合后培养30-90min，离心，加水重悬，获得实验组样本溶液；将待测菌液与脑心浸液肉汤培养基混合后培养30-90min，离心，加水重悬，获得对照组样本溶液；
(2)取步骤(1)得到的样本溶液与过氧化氢溶液以体积比为(1-2):1混合，反应5-15min；
(3)取步骤(2)反应后的溶液与钴离子溶液以及鲁米诺溶液，以体积比为1:(1-2):(1-3)混合，反应，检测8-15s内的化学发光值并对其进行积分获得积分值；
(4)计算实验组和对照组的化学发光值积分差值，即可得到该药物的细菌耐药性阈值图，由此将敏感菌和耐药菌分类，进而判断细菌耐药性。
细菌与药物共同培养时，敏感菌受药物的影响大，增长速度慢；耐药菌受药物的影响小，增长速度快。在摇床培养后，敏感菌实验组比对照组增长速度慢，加入一定量的过氧化氢，对于消耗的过氧化氢量，敏感菌实验组比对照组消耗的少，鲁米诺-过氧化氢化学发光法检测剩余的过氧化氢，敏感菌实验组比对照组产生的化学发光信号差异大；耐药菌实验组增长速度快，但也会受到很小的影响，鲁米诺-过氧化氢化学发光法检测剩余的过氧化氢，相比敏感菌，耐药菌实验组与对照组产生的化学发光信号差异小。因此我们可以通过化学发光信号差异的大小将敏感菌和耐药菌分类。
相对于现有技术，本发明具有以下有益效果：
本发明创造性地将鲁米诺-过氧化氢化学发光反应应用于细菌药敏性检测，即通过检测不同浓度的过氧化氢来检测不同浓度的过氧化氢酶(即不同浓度的细菌)，从而可以对临床大多数的常见菌(如金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌等高感染率病原菌)进行检测。本发明以大肠杆菌和金黄色葡萄球菌为研究模型，根据本发明所涉及的检测方法的检测原理，所有表达触酶的细菌均能应用于本发明方法。本发明所涉及的用于细菌药敏检测的试剂盒能够快速、准确、灵敏地检测临床样本细菌耐药性，适用范围广，样品的前处理过程简单，样品检测时间远低于传统检测方法。本发明对解决快速指导抗生素的合理使用具有重要的现实意义。
附图说明
图1是实施例2中化学发光强度随大肠埃希菌稀释倍数变化关系图；
图2是实施例3中化学发光强度随金黄色葡萄球菌稀释倍数变化关系图；
图3是实施例4中头孢曲松钠对大肠杆菌耐药性检测阈值图；
图4是实施例4中的roc曲线；
图5是实施例5中头孢西丁对金黄色葡萄球菌耐药性检测阈值图；
图6是实施例5中的roc曲线；
图7是实施例6中红霉素对金黄色葡萄球菌耐药性检测阈值图；
图8是实施例6中的roc曲线。
具体实施方式
下面通过具体实施方式来进一步说明本发明的技术方案。本领域技术人员应该明了，所述实施例仅仅是帮助理解本发明，不应视为对本发明的具体限制。
下述实施例所涉及的大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌均来源于深圳市南山医院。
实施例1
本实施例为了验证本发明所涉及的试剂盒及检测方法可以快速灵敏准确地检测不同浓度的过氧化氢，进行如下实验：
(1)配制浓度分别为2mm、1mm、0.5mm、0.25mm、0.125mm、0.06125mm、0.03125mm的过氧化氢溶液；
(2)分别取50μl上述过氧化氢溶液于避光的96孔板中，平行三组，然后加16nmol/lcocl2溶液50μl后，将96孔板置于检测仪器中，0.8mmol/l鲁米诺溶液经仪器自动进样100μl。检测仪器检测10s内的化学发光值。检测仪器选用cytation系列高通量活细胞显微成像分析检测系统；
(3)对10s内的化学发光值进行积分，平行三组积分值的平均值即为这一样本溶液的化学发光值。作化学发光强度随过氧化氢浓度变化的关系图，拟合曲线为y＝(1×106)x 34822(r2＝0.996)，由图可知：在该实验条件下检测不同浓度过氧化氢的化学发光值，结果显示不同浓度的过氧化氢与化学发光值有很好的线性关系，进一步验证了不同浓度的过氧化氢对应有不同的化学发光值。
实施例2
本实施例为了证明样本溶液中细菌浓度对检测结果的影响。抗生素作用会导致细菌浓度的不同，为了模拟这种情况，我们直接选用不同浓度的大肠杆菌菌液来检测相应的化学发光信号值。进行如下试验(以atcc号：25922大肠埃希菌敏感菌为试验模型)：
(1)从临床样本细菌培养皿中挑取大肠埃希菌菌落于装有纯水的试管中，混合均匀，用紫外分光光度计测菌液在波长为600nm处的od值，将其用培养基稀释到od＝0.1，从而保证每次实验菌的浓度差不多；
(2)再将od＝0.1的菌液分别稀释1倍、2倍、4倍、8倍、16倍、32倍、64倍、128倍；
(3)取上述样本溶液，加入1mmol/l过氧化氢溶液(样本溶液与过氧化氢溶液的体积比为1.5:1)反应10min，取反应后的溶液50μl于避光的96孔板中，平行三组对照，加16nmol/lco2 溶液50μl后，将96孔板置于检测仪器中，0.8mmol/l鲁米诺溶液经仪器自动进样100μl。检测仪器检测10s内的化学发光值。
(4)对10s内的化学发光值进行积分，平行三组积分值的平均值即为这一样本溶液的化学发光值。统计结果图如图1所示，由图1可知：不同浓度的大肠杆菌菌液会对应有不同的化学发光信号值，且在稀释倍数为8-32倍时，化学发光信号对不同浓度的菌液有很好的区分度。
实施例3
本实施例为了证明样本溶液中细菌浓度对检测结果的影响，抗生素作用会导致细菌浓度的不同，为了模拟这种情况，我们直接选用不同浓度的金黄色葡萄球菌菌液来检测相应的化学发光信号值。进行如下试验(以atcc号：29213金黄色葡萄球菌敏感菌为试验模型)：
(1)从临床样本细菌培养皿中挑取金黄色葡萄球菌菌落于装有纯水的试管中，混合均匀，用紫外分光光度计测菌液在波长为600nm处的od值，将其用培养基稀释到od＝0.1，从而保证每次实验菌的浓度差不多；
(2)再将od＝0.1的菌液分别稀释1倍、2倍、4倍、8倍、16倍、32倍、64倍、128倍；
(3)取上述样本溶液，加入1mmol/l过氧化氢溶液(样本溶液与过氧化氢溶液的体积比为1.5:1)反应10min，取反应后的溶液50μl于避光的96孔板中，平行三组对照，加16nmol/lco2 溶液50μl后，将96孔板置于检测仪器中，0.8mmol/l鲁米诺溶液经仪器自动进样100μl。检测仪器检测10s内的化学发光值。
(4)对10s内的化学发光值进行积分，平行三组积分值的平均值即为这一样本溶液的化学发光值。统计结果图如图2所示，由图2可知：不同浓度的金黄色葡萄球菌菌液会对应有不同的化学发光信号值，且在稀释倍数为8-32倍时，化学发光信号对不同浓度的菌液有很好的区分度。
实施例4
本实施例提供一种检测大肠埃希菌对头孢曲松钠的药敏性的方法，包括如下步骤：
(1)从临床样本细菌培养皿中挑取敏感型大肠埃希菌和耐药型大肠埃希菌菌落于装有脑心浸液肉汤培养基的试管中，混合均匀，用紫外分光光度计测菌液在波长为600nm处的od值，将其用培养基稀释到od＝0.1；
(2)再将上述两种菌液分别稀释10倍，按1:1的体积比，加入浓度为4μg/ml的头孢曲松钠溶液，三组平行对照，摇床培养60min后取出，两次离心，除去培养基后加入等体积的水，作为实验组样本溶液；对照组样本溶液的制备与上述基本一致，仅将头孢曲松钠溶液替换成等体积的培养基；
(3)取上述样本溶液，分别加入1mmol/l过氧化氢溶液(样本溶液与过氧化氢溶液的体积比为1.5:1)反应10min，取反应后的溶液50μl于避光的96孔板中，平行三组对照，加16nmol/lco2 溶液50μl后，将96孔板置于检测仪器中，0.8mmol/l鲁米诺溶液经仪器自动进样100μl。检测仪器检测10s内的化学发光值。
(4)对10s内的化学发光值进行积分，平行三组积分值的平均值即为这一样本溶液的化学发光值。分别计算实验组和对照组的化学发光值积分差值，即可得到头孢曲松钠的细菌耐药性阈值图，如图3所示，并获得相应的roc曲线，如图4所示。由图3可知：该方法通过相应阈值可以很好的将敏感菌和耐药菌分开，进而可以准确地判断头孢曲松钠对大肠埃希菌的耐药性，由图4可知：该方法与金标准方法(肉汤二倍稀释法)相比，检测结果具有很好的一致性，auc＝1。
实施例5
本实施例提供一种检测金黄色葡萄球菌对头孢西丁的药敏性的方法，包括如下步骤：
(1)从临床样本细菌培养皿中挑取敏感型金黄色葡萄球菌和耐药型金黄色葡萄球菌菌落于装有脑心浸液肉汤培养基的试管中，混合均匀，用紫外分光光度计测菌液在波长为600nm处的od值，将其用培养基稀释到od＝0.1；
(2)再将上述两种菌液分别稀释15倍，按1:1的体积比，加入浓度为4μg/ml的头孢西丁溶液，三组平行对照，摇床培养80min后取出，两次离心，除去培养基后加入等体积的水，作为实验组样本溶液；对照组样本溶液的制备与上述基本一致，仅将头孢西丁溶液替换成等体积的培养基；
(3)取上述样本溶液，分别加入1.5mmol/l过氧化氢溶液(样本溶液与过氧化氢溶液的体积比为2:1)反应15min，取反应后的溶液50μl于避光的96孔板中，平行三组对照，加20nmol/lco2 溶液50μl后，将96孔板置于检测仪器中，1.0mmol/l鲁米诺溶液经仪器自动进样100μl。检测仪器检测8s内的化学发光值。
(4)对8s内的化学发光值进行积分，平行三组积分值的平均值即为这一样本溶液的化学发光值。分别计算实验组和对照组的化学发光值积分差值，即可得到头孢西丁的细菌耐药性阈值图，如图5所示，并获得相应的roc曲线，如图6所示。由图5可知：该方法通过相应阈值可以很好的将敏感菌和耐药菌分开，进而可以准确地判断头孢西丁对金黄色葡萄球菌的耐药性，由图6可知：该方法与金标准方法(肉汤二倍稀释法)相比，检测结果具有很好的一致性，auc＝0.969。
实施例6
本实施例提供一种检测金黄色葡萄球菌对红霉素的药敏性的方法，包括如下步骤：
(1)从临床样本细菌培养皿中挑取敏感型金黄色葡萄球菌和耐药型金黄色葡萄球菌菌落于装有脑心浸液肉汤培养基的试管中，混合均匀，用紫外分光光度计测菌液在波长为600nm处的od值，将其用培养基稀释到od＝0.1；
(2)再将上述两种菌液分别稀释8倍，按1:1的体积比，加入浓度为1μg/ml的红霉素溶液，三组平行对照，摇床培养50min后取出，两次离心，除去培养基后加入等体积的水，作为实验组样本溶液；对照组样本溶液的制备与上述基本一致，仅将红霉素溶液替换成等体积的培养基；
(3)取上述样本溶液，分别加入0.8mmol/l过氧化氢溶液(样本溶液与过氧化氢溶液的体积比为1.5:1)反应7min，取反应后的溶液50μl于避光的96孔板中，平行三组对照，加13nmol/lco2 溶液50μl后，将96孔板置于检测仪器中，0.5mmol/l鲁米诺溶液经仪器自动进样100μl。检测仪器检测15s内的化学发光值；
(4)对15s内的化学发光值进行积分，平行三组积分值的平均值即为这一样本溶液的化学发光值。分别计算实验组和对照组的化学发光值积分差值，即可得到红霉素的细菌耐药性阈值图，如图7所示，并获得相应的roc曲线，如图8所示。由图7可知：该方法通过相应阈值可以很好的将敏感菌和耐药菌分开，进而可以准确地判断红霉素对细菌的耐药性，由图8可知：该方法与金标准方法(肉汤二倍稀释法)相比，检测结果具有很好的一致性，auc＝1。
申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的一种用于细菌药敏检测的试剂盒及其应用，但本发明并不局限于上述实施例，即不意味着本发明必须依赖上述实施例才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明产品各原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。
以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于上述实施方式中的具体细节，在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，这些简单变型均属于本发明的保护范围。
另外需要说明的是，在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征，在不矛盾的情况下，可以通过任何合适的方式进行组合，为了避免不必要的重复，本发明对各种可能的组合方式不再另行说明。
1.一种用于细菌药敏检测的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括鲁米诺溶液、过氧化氢溶液和钴离子溶液。
2.如权利要求1所述的用于细菌药敏检测的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括鲁米诺溶液0.5-1.0mmol/l、过氧化氢溶液0.5-2mmol/l和钴离子溶液10-20nmol/l。
3.如权利要求1或2所述的用于细菌药敏检测的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括鲁米诺溶液0.7-0.9mmol/l、过氧化氢溶液0.8-1.2mmol/l和钴离子溶液14-18nmol/l。
4.一种检测细菌药敏性的方法，其特征在于，所述方法为利用如权利要求1-3中任一项所述的用于细菌药敏检测的试剂盒检测细菌药敏性。
5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
(1)制备实验组和对照组样本溶液；所述实验组样本溶液为待测菌液与药物的混合溶液；所述对照组样本溶液为待测菌液与培养基的混合溶液；
(2)取步骤(1)得到的样本溶液与过氧化氢溶液混合，反应；
(3)取步骤(2)反应后的溶液与钴离子溶液以及鲁米诺溶液混合，反应，检测化学发光值；
(4)计算实验组与对照组的化学发光值差值，即可得到该药物的细菌耐药性阈值图，由此将敏感菌和耐药菌分类，进而判断细菌耐药性。
6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述药物包括抗生素；
优选地，步骤(1)所述实验组样本溶液的制备方法为：将待测菌液与药物混合后培养30-90min，离心，加水重悬；
优选地，步骤(1)所述培养基包括脑心浸液肉汤培养基；
优选地，步骤(1)所述对照组样本溶液的制备方法为：将待测菌液与培养基混合后培养30-90min，离心，加水重悬。
7.如权利要求5或6所述的方法，其特征在于，步骤(2)所述样本溶液与过氧化氢溶液的体积比为(1-2):1；
优选地，步骤(2)所述样本溶液中细菌浓度为在od值0.1的基础上稀释8-32倍；
优选地，步骤(2)所述反应的时间为5-15min。
8.如权利要求5-7中任一项所述的方法，其特征在于，步骤(3)所述反应后溶液、钴离子溶液与鲁米诺溶液的体积比为1:(1-2):(1-3)。
9.如权利要求5-8中任一项所述的方法，其特征在于，步骤(3)所述检测化学发光值是指检测8-15s内的化学发光值并对其进行积分获得积分值。
10.如权利要求5-9中任一项所述的方法，其特征在于，所述方法具体包括如下步骤：
(1)将待测菌液与药物混合后培养30-90min，离心，加水重悬，获得实验组样本溶液；将待测菌液与脑心浸液肉汤培养基混合后培养30-90min，离心，加水重悬，获得对照组样本溶液；
(2)取步骤(1)得到的样本溶液与过氧化氢溶液以体积比为(1-2):1混合，反应5-15min；
(3)取步骤(2)反应后的溶液与钴离子溶液以及鲁米诺溶液，以体积比为1:(1-2):(1-3)混合，反应，检测8-15s内的化学发光值并对其进行积分获得积分值；
(4)计算实验组和对照组的化学发光值积分差值，即可得到该药物的细菌耐药性阈值图，由此将敏感菌和耐药菌分类，进而判断细菌耐药性。
技术总结