本发明涉及一种复合菌菌液及其制备方法以及它在玉米专用复合生物菌肥中的应用。
背景技术：
：杏鲍菇的营养十分丰富，植物蛋白含量高达25％，含18种氨基酸和具有提高人体免疫力、防癌抗癌的多糖。同时，它含有大量的寡糖，是灰树花的15倍、金针菇的3.5倍、真姬菇的2倍，它与胃肠中的双岐菌一起作用，具有很好的促进消化、吸收功能，杏鲍菇是集食用、药用、食疗于一体的珍稀食用菌新品种，因此，在我国被广泛种植并对其进行各种加工，如进行多糖的提取以及相应食品的制作，在杏鲍菇的加工过程中，会产生大量的废料，如菇脚以及碎菇，这些废料本身含有大量的营养物质，然而，目前缺少对这些废料进行处理的技术手段，所以，这些废料常被直接丢弃，丢弃的废料不仅造成资源的浪费，而且势必污染环境，因此，有必要开发一种技术，对这些废料进行加工再利用，以减少资源的浪费。玉米是中国的高产粮食作物，它是畜牧业、养殖业、水产养殖业等的重要饲料来源，也是食品、医疗卫生、轻工业、化工业等的不可或缺的原料之一，在我国的种植范围很广，根据自然条件的不同，分为几大玉米区，但无论玉米种植如何分区，都不分程度的受到土壤肥力下降及病虫害的困扰，加之大量使用化肥，严重导致了玉米的有害物质增加，品质差，营养不全的现象，其次大量化肥的使用使土壤容易板结，土壤保水保肥性能也随着变差，这样严重影响玉米的正常生长，经济效益差。另外，玉米的病害有30多种，主要有大、小斑病，丝黑穗病，青枯病，病毒病和茎腐病等，虫害有玉米螟、地老虎、蝼蛄、红蜘蛛、高粱条螟和粘虫等，这些病害与虫害也会大大影响玉米的产量。技术实现要素：本发明的目的在于提供一种复合菌菌液及其制备方法以及它在玉米专用复合生物菌肥中的应用。该复合菌菌液能够活化土壤中的养分、提高土壤肥力，提高玉米的抗病与抗虫害能力，同时有利于玉米增产高效生长。本发明的目的通过如下技术方案实现：一种复合菌菌液，它由如下重量份的原料制备而成：杏鲍菇加工废料提取液45-55份、胶质芽孢杆菌菌剂15-20份、褐球固氮菌菌剂20-25份、淡紫色拟青霉菌剂5-8份、泾阳链霉菌菌剂5-10份、浅灰链霉菌杭州变种菌剂10-15份；所述胶质芽孢杆菌菌剂、褐球固氮菌菌剂、淡紫色拟青霉菌剂、泾阳链霉菌菌剂、浅灰链霉菌杭州变种菌剂的活菌数均为2-3亿个/ml。一种所述的复合菌菌液的制备方法，它包括以下步骤：(1)制备杏鲍菇加工废料提取液；(2)活化各菌种；(3)制备胶质芽孢杆菌种子悬液、褐球固氮菌种子悬液、淡紫色拟青霉种子悬液、泾阳链霉菌种子悬液、浅灰链霉菌杭州变种种子悬液；(4)制备胶质芽孢杆菌菌剂、褐球固氮菌菌剂、淡紫色拟青霉菌剂、泾阳链霉菌菌剂、浅灰链霉菌杭州变种菌剂；(5)制备菌液；其中，步骤(4)制备胶质芽孢杆菌菌剂、褐球固氮菌菌剂、淡紫色拟青霉菌剂、泾阳链霉菌菌剂、浅灰链霉菌杭州变种菌剂的方法为：取部分步骤(1)所得的杏鲍菇加工废料提取液并将其的ph调节至7.2-7.4，再经121-122℃，湿热灭菌10-20min，得培养液；取5个250ml的三角瓶，将所得的培养液置于三角瓶中且每个三角瓶中培养液的体积为80-90ml；接着，将步骤(3)所得的胶质芽孢杆菌种子悬液、褐球固氮菌种子悬液、淡紫色拟青霉种子悬液、泾阳链霉菌种子悬液、浅灰链霉菌杭州变种种子悬液分别接种于对应的三角瓶中，且每个三角瓶中的接种量均为4％-6％；接种之后，在28-30℃，转速为100-250rpm的条件下，进行振荡培养，其中，胶质芽孢杆菌与褐球固氮菌培养48-72h，淡紫色拟青霉、泾阳链霉菌以及浅灰链霉菌杭州变种培养7-9天，使各菌剂的活菌数均为2～3亿个/ml，即分别得所述胶质芽孢杆菌菌剂、褐球固氮菌菌剂、淡紫色拟青霉菌剂、泾阳链霉菌菌剂、浅灰链霉菌杭州变种菌剂；步骤(5)制备菌液的方法为：取部分步骤(1)所得的杏鲍菇加工废料提取液并将其经121-122℃，湿热灭菌10-20min；将灭菌后的杏鲍菇加工废料提取液、胶质芽孢杆菌菌剂、褐球固氮菌菌剂、淡紫色拟青霉菌剂、泾阳链霉菌菌剂、浅灰链霉菌杭州变种菌剂按照重量份混合均匀，即得所述复合菌菌液。所述的复合菌菌液在制备玉米专用复合生物菌肥中的应用。一种玉米专用复合生物菌肥，它包括以下重量份数的组分：所述的复合菌菌液30-40份、麸皮15-20份、凹凸棒土15-20份、泥炭30-40份、膨润土20-25份、豆饼15-25份。一种所述的玉米专用复合生物菌肥的制备方法，它包括以下步骤：ⅰ.制备所述的复合菌菌液；ⅱ.将麸皮、凹凸棒土、膨润土以及豆饼粉碎后，与泥炭以及制备的复合菌菌液搅拌混合，之后在25-30℃下干燥，使其含水量在5-8％，得所述玉米专用复合生物菌肥。较之现有技术而言，本发明的优点在于：1.本发明将废弃的杏鲍菇加工废料进行再利用，制成能够活化土壤中养分、提高土壤肥力的复合菌菌液，本发明变废为宝，具有环保的优点。2.本发明的复合菌菌液以及玉米专用复合生物菌肥能够提高土壤的肥力，充分分解土壤中难溶的磷、钾、矿物质等，促进玉米植株对土壤中营养成分的吸收，促进玉米植株生长，减少化肥的使用，提升玉米的品质。3.本发明的复合菌菌液以及玉米专用复合生物菌肥还能抑制有害微生物的生长与繁殖，达到修复土壤，防止土壤板结的效果，使土壤环境处于松弛营养状态。4.本发明的复合菌菌液以及玉米专用复合生物菌肥还能保护玉米的根系免受有害微生物的侵入，提升玉米的抗病与抗虫害能力，如提升玉米抗大小斑、青枯病、茎腐病的能力。5.本发明的杏鲍菇加工废料提取液中含有大量的氨基酸、碳水化合物以及微量元素，它与各种菌联合作用，具备协同促进效果，可以促进玉米植株对氮磷钾等元素的吸收利用，另外，因为杏鲍菇加工废料提取液本身具有大量的营养成分，所以制备玉米专用复合生物菌肥时，无需额外添加磷肥、钾肥等化肥。6.本发明的玉米专用复合生物菌肥还能提高玉米植株的抗旱性能，提高土壤的保水性能。具体实施方式下面结合实施例对本
发明内容进行详细说明：一种复合菌菌液，它由如下重量份的原料制备而成：杏鲍菇加工废料提取液45-55份、胶质芽孢杆菌菌剂15-20份、褐球固氮菌菌剂20-25份、淡紫色拟青霉菌剂5-8份、泾阳链霉菌菌剂5-10份、浅灰链霉菌杭州变种菌剂10-15份；所述胶质芽孢杆菌菌剂、褐球固氮菌菌剂、淡紫色拟青霉菌剂、泾阳链霉菌菌剂、浅灰链霉菌杭州变种菌剂的活菌数均为2-3亿个/ml。一种所述的复合菌菌液的制备方法，它包括以下步骤：(1)制备杏鲍菇加工废料提取液；(2)活化各菌种；(3)制备胶质芽孢杆菌种子悬液、褐球固氮菌种子悬液、淡紫色拟青霉种子悬液、泾阳链霉菌种子悬液、浅灰链霉菌杭州变种种子悬液；(4)制备胶质芽孢杆菌菌剂、褐球固氮菌菌剂、淡紫色拟青霉菌剂、泾阳链霉菌菌剂、浅灰链霉菌杭州变种菌剂；(5)制备菌液；其中，步骤(1)制备杏鲍菇加工废料提取液的方法为：将杏鲍菇加工过程产生的菇脚以及碎菇洗净之后粉碎至40-50目，按杏鲍菇与水的重量比为2:3的比例加入水，加热至90-98℃，在此温度下熬煮2-3h，之后冷却、过滤，收集滤液；将收集的滤液在1500-2500r/min转速下离心10-15min，取上清液；将所得的上清液利用降膜蒸发器降膜蒸发浓缩，浓缩至溶液折光率达到35-45％，得浓缩液；之后，在浓缩液中添加80～90％的乙醇，对浓缩液进行变性，其中，所加入的乙醇与浓缩液的体积比为3:2；对变性后的浓缩液进行过滤除去经变性后所产生的沉淀，收集滤液；将滤液进行旋转蒸发除去乙醇；将旋转蒸发后所得的溶液利用截留分子量为5-10k的滤膜进行切向流过滤，收集滤出液，即得所述杏鲍菇加工废料提取液。步骤(2)活化各菌种的方法为：将胶质芽孢杆菌与褐球固氮菌分别接种于含有固体培养基a的斜面上，分开培养48-72h，培养时培养温度控制在25-35℃；其中，固体培养基a为k2hpo4、kh2po4、mgso4·7h2o、caco3·2h2o、na2mo·2h2o、酵母膏、甘露醇、fecl3以及琼脂混合后制得的培养基；所述的固体培养基a的制作方法为：将k2hpo40.75-0.85g/l；kh2po40.15-0.25g/l；mgso4·7h2o0.15-0.25g/l；caco3·2h2o0.05-0.15g/l；na2mo·2h2o0.01-0.02g/l，酵母膏0.45-0.55g/l；甘露醇15-25g/l；fecl30.01-0.02g/l，琼脂10-20g/l进行混合，其余为蒸馏水，调节ph值为7.0-7.2，之后在115-122℃下灭菌15-20min，即可。淡紫色拟青霉接种于含有pda斜面培养基的斜面上培养5-7天，培养时培养温度控制在25-28℃；其中，pda斜面培养基的配置方法为：将20％马铃薯汁1l、葡萄糖20g、kh2po43g、mgso4·7h2o1.5g、vitanibb1(硫胺素)trace8mg以及琼脂20g混合，ph自然，在121℃下高压灭菌15min。泾阳链霉菌接种于含有高氏合成一号琼脂培养基的斜面上培养5-7天，培养时培养温度控制在28-30℃；浅灰链霉菌杭州变种接种于含有高氏合成一号琼脂培养基的斜面上培养5-7天，培养时培养温度控制在30℃。其中，高氏合成一号琼脂培养基的配制方法为：将kno31g、可溶性淀粉20g、k2hpo40.5g、mgso4·7h2o0.5g、nacl0.5g、feso40.01g、琼脂20g以及蒸馏水1l进行混合，调节ph值为7.2-7.4，之后在115-122℃下灭菌15-20min，即可。本发明所使用的胶质芽孢杆菌的保藏号为gim1.16、褐球固氮菌的保藏号为gim1.272、淡紫色拟青霉的保藏号为gim3.405、泾阳链霉菌的保藏号为gim4.92、浅灰链霉菌杭州变种的保藏号为gim4.96，且胶质芽孢杆菌(gim1.16)、褐球固氮菌(gim1.272)、淡紫色拟青霉(gim3.405)、泾阳链霉菌(gim4.92)、浅灰链霉菌杭州变种(gim4.96)均购自广东省微生物菌种保藏中心。步骤(3)制备胶质芽孢杆菌种子悬液、褐球固氮菌种子悬液、淡紫色拟青霉种子悬液、泾阳链霉菌种子悬液、浅灰链霉菌杭州变种种子悬液的方法为：用接种环各挑取1环步骤(2)已活化的胶质芽孢杆菌、褐球固氮菌、淡紫色拟青霉、泾阳链霉菌、浅灰链霉菌杭州变种，分别对应接入装有100-150ml的液体培养基a、液体培养基a、pda液体培养基、高氏合成一号液体培养基、高氏合成一号液体培养基的5个三角瓶中进行培养，其中，胶质芽孢杆菌与褐球固氮菌在150-200rpm、25-35℃条件下，摇床振荡培养24-48h；淡紫色拟青霉在150-200rpm、25-28℃条件下，摇床振荡培养5-7天；泾阳链霉菌在150-200rpm、28-30℃条件下，摇床振荡培养5-7天；浅灰链霉菌杭州变种在150-200rpm、30℃条件下，摇床振荡培养5-7天，即分别得所述胶质芽孢杆菌种子悬液、褐球固氮菌种子悬液、淡紫色拟青霉种子悬液、泾阳链霉菌种子悬液、浅灰链霉菌杭州变种种子悬液；其中，液体培养基a为k2hpo4、kh2po4、mgso4·7h2o、caco3·2h2o、na2mo·2h2o、酵母膏、甘露醇、fecl3混合后制得的培养基。其中，所述液体培养基a的制作方法为：将k2hpo40.75-0.85g/l；kh2po40.15-0.25g/l；mgso4·7h2o0.15-0.25g/l；caco3·2h2o0.05-0.15g/l；na2mo·2h2o0.01-0.02g/l，酵母膏0.45-0.55g/l；甘露醇15-25g/l；fecl30.01-0.02g/l；其余为蒸馏水，进行混合，调节ph值为7.0-7.2，之后在115-122℃下灭菌15-20min，即可。pda液体培养基的配置方法为：将20％马铃薯汁1l、葡萄糖20g、kh2po43g、mgso4·7h2o1.5g、vitanibb1(硫胺素)trace8mg混合，ph自然，在121℃下高压灭菌15min。高氏合成一号液体培养基的配制方法为：将kno31g、可溶性淀粉20g、k2hpo40.5g、mgso4·7h2o0.5g、nacl0.5g、feso40.01g、蒸馏水1l进行混合，调节ph值为7.2-7.4，之后在115-122℃下灭菌15-20min，即可。步骤(4)制备胶质芽孢杆菌菌剂、褐球固氮菌菌剂、淡紫色拟青霉菌剂、泾阳链霉菌菌剂、浅灰链霉菌杭州变种菌剂的方法为：取部分步骤(1)所得的杏鲍菇加工废料提取液并将其的ph调节至7.2-7.4，再经121-122℃，湿热灭菌10-20min，得培养液；取5个250ml的三角瓶，将所得的培养液置于三角瓶中且每个三角瓶中培养液的体积为80-90ml；接着，将步骤(3)所得的胶质芽孢杆菌种子悬液、褐球固氮菌种子悬液、淡紫色拟青霉种子悬液、泾阳链霉菌种子悬液、浅灰链霉菌杭州变种种子悬液分别接种于对应的三角瓶中，且每个三角瓶中的接种量均为4％-6％；接种之后，在28-30℃，转速为100-250rpm的条件下，进行振荡培养，其中，胶质芽孢杆菌与褐球固氮菌培养48-72h，淡紫色拟青霉、泾阳链霉菌以及浅灰链霉菌杭州变种培养7-9天，使各菌剂的活菌数均为2～3亿个/ml，即分别得所述胶质芽孢杆菌菌剂、褐球固氮菌菌剂、淡紫色拟青霉菌剂、泾阳链霉菌菌剂、浅灰链霉菌杭州变种菌剂；步骤(5)制备菌液的方法为：取部分步骤(1)所得的杏鲍菇加工废料提取液并将其经121-122℃，湿热灭菌10-20min；将灭菌后的杏鲍菇加工废料提取液、胶质芽孢杆菌菌剂、褐球固氮菌菌剂、淡紫色拟青霉菌剂、泾阳链霉菌菌剂、浅灰链霉菌杭州变种菌剂按照重量份混合均匀，即得所述复合菌菌液。本发明所述的复合菌菌液可用水稀释后直接施加在玉米植株的根部，且稀释时，复合菌菌液与加入的水的体积比为1:20。该复合菌菌液亦可拌入吸附剂中制成固体菌肥。即所述的复合菌菌液可用于制备玉米专用复合生物菌肥。所述玉米专用复合生物菌肥，它包括以下重量份数的组分：所述的复合菌菌液30-40份、麸皮15-20份、凹凸棒土15-20份、泥炭30-40份、膨润土20-25份、豆饼15-25份。所述的玉米专用复合生物菌肥的制备方法，它包括以下步骤：ⅰ.制备所述的复合菌菌液；ⅱ.将麸皮、凹凸棒土、膨润土以及豆饼粉碎后，与泥炭以及制备的复合菌菌液搅拌混合，之后在25-30℃下干燥，使其含水量在5-8％，得所述玉米专用复合生物菌肥。下面结合具体实施例对本发明作更细致地阐述：本发明以下实施例所使用的胶质芽孢杆菌的保藏号为gim1.16、褐球固氮菌的保藏号为gim1.272、淡紫色拟青霉的保藏号为gim3.405、泾阳链霉菌的保藏号为gim4.92、浅灰链霉菌杭州变种的保藏号为gim4.96，且胶质芽孢杆菌(gim1.16)、褐球固氮菌(gim1.272)、淡紫色拟青霉(gim3.405)、泾阳链霉菌(gim4.92)、浅灰链霉菌杭州变种(gim4.96)均购自广东省微生物菌种保藏中心。本发明以下实施例所使用的培养基有：固体培养基a、pda斜面培养基、高氏合成一号琼脂培养基、液体培养基a、pda液体培养基以及高氏合成一号液体培养基；其中，固体培养基a为k2hpo4、kh2po4、mgso4·7h2o、caco3·2h2o、na2mo·2h2o、酵母膏、甘露醇、fecl3以及琼脂混合后制得的培养基；所述的固体培养基a的制作方法为：将k2hpo40.75-0.85g/l；kh2po40.15-0.25g/l；mgso4·7h2o0.15-0.25g/l；caco3·2h2o0.05-0.15g/l；na2mo·2h2o0.01-0.02g/l，酵母膏0.45-0.55g/l；甘露醇15-25g/l；fecl30.01-0.02g/l，琼脂10-20g/l进行混合，其余为蒸馏水，调节ph值为7.0-7.2，之后在115-122℃下灭菌15-20min，即可。pda斜面培养基的配置方法为：将20％马铃薯汁1l、葡萄糖20g、kh2po43g、mgso4·7h2o1.5g、vitanibb1(硫胺素)trace8mg以及琼脂20g混合，ph自然，在121℃下高压灭菌15min。高氏合成一号琼脂培养基的配制方法为：将kno31g、可溶性淀粉20g、k2hpo40.5g、mgso4·7h2o0.5g、nacl0.5g、feso40.01g、琼脂20g以及蒸馏水1l进行混合，调节ph值为7.2-7.4，之后在115-122℃下灭菌15-20min，即可。液体培养基a为k2hpo4、kh2po4、mgso4·7h2o、caco3·2h2o、na2mo·2h2o、酵母膏、甘露醇、fecl3混合后制得的培养基。所述液体培养基a的制作方法为：将k2hpo40.75-0.85g/l；kh2po40.15-0.25g/l；mgso4·7h2o0.15-0.25g/l；caco3·2h2o0.05-0.15g/l；na2mo·2h2o0.01-0.02g/l，酵母膏0.45-0.55g/l；甘露醇15-25g/l；fecl30.01-0.02g/l；其余为蒸馏水，进行混合，调节ph值为7.0-7.2，之后在115-122℃下灭菌15-20min，即可。pda液体培养基的配置方法为：将20％马铃薯汁1l、葡萄糖20g、kh2po43g、mgso4·7h2o1.5g、vitanibb1(硫胺素)trace8mg混合，ph自然，在121℃下高压灭菌15min。高氏合成一号液体培养基的配制方法为：将kno31g、可溶性淀粉20g、k2hpo40.5g、mgso4·7h2o0.5g、nacl0.5g、feso40.01g、蒸馏水1l进行混合，调节ph值为7.2-7.4，之后在115-122℃下灭菌15-20min，即可。实施例一：一种复合菌菌液，它由如下重量份的原料制备而成：杏鲍菇加工废料提取液45份、胶质芽孢杆菌菌剂20份、褐球固氮菌菌剂20份、淡紫色拟青霉菌剂8份、泾阳链霉菌菌剂5份、浅灰链霉菌杭州变种菌剂15份；所述胶质芽孢杆菌菌剂、褐球固氮菌菌剂、淡紫色拟青霉菌剂、泾阳链霉菌菌剂、浅灰链霉菌杭州变种菌剂的活菌数均为2-3亿个/ml。所述的复合菌菌液的制备方法，它包括以下步骤：(1)制备杏鲍菇加工废料提取液；(2)活化各菌种；(3)制备胶质芽孢杆菌种子悬液、褐球固氮菌种子悬液、淡紫色拟青霉种子悬液、泾阳链霉菌种子悬液、浅灰链霉菌杭州变种种子悬液；(4)制备胶质芽孢杆菌菌剂、褐球固氮菌菌剂、淡紫色拟青霉菌剂、泾阳链霉菌菌剂、浅灰链霉菌杭州变种菌剂；(5)制备菌液；其中，步骤(1)制备杏鲍菇加工废料提取液的方法为：将杏鲍菇加工过程产生的菇脚以及碎菇洗净之后粉碎至40-50目，按杏鲍菇与水的重量比为2:3的比例加入水，加热至90℃，在此温度下熬煮3h，之后冷却、过滤，收集滤液；将收集的滤液在1500r/min转速下离心15min，取上清液；将所得的上清液利用降膜蒸发器降膜蒸发浓缩，浓缩至溶液折光率达到35％，得浓缩液；之后，在浓缩液中添加90％的乙醇，对浓缩液进行变性，其中，所加入的乙醇与浓缩液的体积比为3:2；对变性后的浓缩液进行过滤除去经变性后所产生的沉淀，收集滤液；将滤液进行旋转蒸发除去乙醇；将旋转蒸发后所得的溶液利用截留分子量为5k的滤膜进行切向流过滤，收集滤出液，即得所述杏鲍菇加工废料提取液。步骤(2)活化各菌种的方法为：将胶质芽孢杆菌与褐球固氮菌分别接种于含有固体培养基a的斜面上，分开培养48h，培养时培养温度控制在35℃；淡紫色拟青霉接种于含有pda斜面培养基的斜面上培养5天，培养时培养温度控制在28℃；泾阳链霉菌接种于含有高氏合成一号琼脂培养基的斜面上培养5天，培养时培养温度控制在30℃；浅灰链霉菌杭州变种接种于含有高氏合成一号琼脂培养基的斜面上培养5天，培养时培养温度控制在30℃。步骤(3)制备胶质芽孢杆菌种子悬液、褐球固氮菌种子悬液、淡紫色拟青霉种子悬液、泾阳链霉菌种子悬液、浅灰链霉菌杭州变种种子悬液的方法为：用接种环各挑取1环步骤(2)已活化的胶质芽孢杆菌、褐球固氮菌、淡紫色拟青霉、泾阳链霉菌、浅灰链霉菌杭州变种，分别对应接入装有100ml的液体培养基a、液体培养基a、pda液体培养基、高氏合成一号液体培养基、高氏合成一号液体培养基的5个三角瓶中进行培养，其中，胶质芽孢杆菌与褐球固氮菌在200rpm、35℃条件下，摇床振荡培养24h；淡紫色拟青霉在200rpm、28℃条件下，摇床振荡培养5天；泾阳链霉菌在200rpm、30℃条件下，摇床振荡培养5天；浅灰链霉菌杭州变种在200rpm、30℃条件下，摇床振荡培养5天，即分别得所述胶质芽孢杆菌种子悬液、褐球固氮菌种子悬液、淡紫色拟青霉种子悬液、泾阳链霉菌种子悬液、浅灰链霉菌杭州变种种子悬液；步骤(4)制备胶质芽孢杆菌菌剂、褐球固氮菌菌剂、淡紫色拟青霉菌剂、泾阳链霉菌菌剂、浅灰链霉菌杭州变种菌剂的方法为：取部分步骤(1)所得的杏鲍菇加工废料提取液并将其的ph调节至7.2，再经121℃，湿热灭菌20min，得培养液；取5个250ml的三角瓶，将所得的培养液置于三角瓶中且每个三角瓶中培养液的体积为80ml；接着，将步骤(3)所得的胶质芽孢杆菌种子悬液、褐球固氮菌种子悬液、淡紫色拟青霉种子悬液、泾阳链霉菌种子悬液、浅灰链霉菌杭州变种种子悬液分别接种于对应的三角瓶中，且每个三角瓶中的接种量均为4％；接种之后，在30℃，转速为250rpm的条件下，进行振荡培养，其中，胶质芽孢杆菌与褐球固氮菌培养48h，淡紫色拟青霉、泾阳链霉菌以及浅灰链霉菌杭州变种培养7天，使各菌剂的活菌数均为2～3亿个/ml，即分别得所述胶质芽孢杆菌菌剂、褐球固氮菌菌剂、淡紫色拟青霉菌剂、泾阳链霉菌菌剂、浅灰链霉菌杭州变种菌剂；步骤(5)制备菌液的方法为：取部分步骤(1)所得的杏鲍菇加工废料提取液并将其经121℃，湿热灭菌20min；将灭菌后的杏鲍菇加工废料提取液、胶质芽孢杆菌菌剂、褐球固氮菌菌剂、淡紫色拟青霉菌剂、泾阳链霉菌菌剂、浅灰链霉菌杭州变种菌剂按照重量份混合均匀，即得所述复合菌菌液。实施例二：一种复合菌菌液，它由如下重量份的原料制备而成：杏鲍菇加工废料提取液50份、胶质芽孢杆菌菌剂17份、褐球固氮菌菌剂22份、淡紫色拟青霉菌剂6份、泾阳链霉菌菌剂8份、浅灰链霉菌杭州变种菌剂12份；所述胶质芽孢杆菌菌剂、褐球固氮菌菌剂、淡紫色拟青霉菌剂、泾阳链霉菌菌剂、浅灰链霉菌杭州变种菌剂的活菌数均为2-3亿个/ml。所述的复合菌菌液的制备方法，它包括以下步骤：(1)制备杏鲍菇加工废料提取液；(2)活化各菌种；(3)制备胶质芽孢杆菌种子悬液、褐球固氮菌种子悬液、淡紫色拟青霉种子悬液、泾阳链霉菌种子悬液、浅灰链霉菌杭州变种种子悬液；(4)制备胶质芽孢杆菌菌剂、褐球固氮菌菌剂、淡紫色拟青霉菌剂、泾阳链霉菌菌剂、浅灰链霉菌杭州变种菌剂；(5)制备菌液；其中，步骤(1)制备杏鲍菇加工废料提取液的方法为：将杏鲍菇加工过程产生的菇脚以及碎菇洗净之后粉碎至40-50目，按杏鲍菇与水的重量比为2:3的比例加入水，加热至95℃，在此温度下熬煮2.5h，之后冷却、过滤，收集滤液；将收集的滤液在2000r/min转速下离心12min，取上清液；将所得的上清液利用降膜蒸发器降膜蒸发浓缩，浓缩至溶液折光率达到40％，得浓缩液；之后，在浓缩液中添加85％的乙醇，对浓缩液进行变性，其中，所加入的乙醇与浓缩液的体积比为3:2；对变性后的浓缩液进行过滤除去经变性后所产生的沉淀，收集滤液；将滤液进行旋转蒸发除去乙醇；将旋转蒸发后所得的溶液利用截留分子量为10k的滤膜进行切向流过滤，收集滤出液，即得所述杏鲍菇加工废料提取液。步骤(2)活化各菌种的方法为：将胶质芽孢杆菌与褐球固氮菌分别接种于含有固体培养基a的斜面上，分开培养60h，培养时培养温度控制在28℃；淡紫色拟青霉接种于含有pda斜面培养基的斜面上培养6天，培养时培养温度控制在27℃；泾阳链霉菌接种于含有高氏合成一号琼脂培养基的斜面上培养6天，培养时培养温度控制在29℃；浅灰链霉菌杭州变种接种于含有高氏合成一号琼脂培养基的斜面上培养6天，培养时培养温度控制在30℃。步骤(3)制备胶质芽孢杆菌种子悬液、褐球固氮菌种子悬液、淡紫色拟青霉种子悬液、泾阳链霉菌种子悬液、浅灰链霉菌杭州变种种子悬液的方法为：用接种环各挑取1环步骤(2)已活化的胶质芽孢杆菌、褐球固氮菌、淡紫色拟青霉、泾阳链霉菌、浅灰链霉菌杭州变种，分别对应接入装有120ml的液体培养基a、液体培养基a、pda液体培养基、高氏合成一号液体培养基、高氏合成一号液体培养基的5个三角瓶中进行培养，其中，胶质芽孢杆菌与褐球固氮菌在180rpm、28℃条件下，摇床振荡培养36h；淡紫色拟青霉在180rpm、27℃条件下，摇床振荡培养6天；泾阳链霉菌在180rpm、29℃条件下，摇床振荡培养6天；浅灰链霉菌杭州变种在180rpm、30℃条件下，摇床振荡培养6天，即分别得所述胶质芽孢杆菌种子悬液、褐球固氮菌种子悬液、淡紫色拟青霉种子悬液、泾阳链霉菌种子悬液、浅灰链霉菌杭州变种种子悬液；步骤(4)制备胶质芽孢杆菌菌剂、褐球固氮菌菌剂、淡紫色拟青霉菌剂、泾阳链霉菌菌剂、浅灰链霉菌杭州变种菌剂的方法为：取部分步骤(1)所得的杏鲍菇加工废料提取液并将其的ph调节至7.3，再经122℃，湿热灭菌15min，得培养液；取5个250ml的三角瓶，将所得的培养液置于三角瓶中且每个三角瓶中培养液的体积为85ml；接着，将步骤(3)所得的胶质芽孢杆菌种子悬液、褐球固氮菌种子悬液、淡紫色拟青霉种子悬液、泾阳链霉菌种子悬液、浅灰链霉菌杭州变种种子悬液分别接种于对应的三角瓶中，且每个三角瓶中的接种量均为5％；接种之后，在28℃，转速为200rpm的条件下，进行振荡培养，其中，胶质芽孢杆菌与褐球固氮菌培养60h，淡紫色拟青霉、泾阳链霉菌以及浅灰链霉菌杭州变种培养8天，使各菌剂的活菌数均为2～3亿个/ml，即分别得所述胶质芽孢杆菌菌剂、褐球固氮菌菌剂、淡紫色拟青霉菌剂、泾阳链霉菌菌剂、浅灰链霉菌杭州变种菌剂；步骤(5)制备菌液的方法为：取部分步骤(1)所得的杏鲍菇加工废料提取液并将其经122℃，湿热灭菌15min；将灭菌后的杏鲍菇加工废料提取液、胶质芽孢杆菌菌剂、褐球固氮菌菌剂、淡紫色拟青霉菌剂、泾阳链霉菌菌剂、浅灰链霉菌杭州变种菌剂按照重量份混合均匀，即得所述复合菌菌液。实施例三：一种复合菌菌液，它由如下重量份的原料制备而成：杏鲍菇加工废料提取液55份、胶质芽孢杆菌菌剂15份、褐球固氮菌菌剂25份、淡紫色拟青霉菌剂5份、泾阳链霉菌菌剂10份、浅灰链霉菌杭州变种菌剂10份；所述胶质芽孢杆菌菌剂、褐球固氮菌菌剂、淡紫色拟青霉菌剂、泾阳链霉菌菌剂、浅灰链霉菌杭州变种菌剂的活菌数均为2-3亿个/ml。所述的复合菌菌液的制备方法，它包括以下步骤：(1)制备杏鲍菇加工废料提取液；(2)活化各菌种；(3)制备胶质芽孢杆菌种子悬液、褐球固氮菌种子悬液、淡紫色拟青霉种子悬液、泾阳链霉菌种子悬液、浅灰链霉菌杭州变种种子悬液；(4)制备胶质芽孢杆菌菌剂、褐球固氮菌菌剂、淡紫色拟青霉菌剂、泾阳链霉菌菌剂、浅灰链霉菌杭州变种菌剂；(5)制备菌液；其中，步骤(1)制备杏鲍菇加工废料提取液的方法为：将杏鲍菇加工过程产生的菇脚以及碎菇洗净之后粉碎至40-50目，按杏鲍菇与水的重量比为2:3的比例加入水，加热至98℃，在此温度下熬煮2h，之后冷却、过滤，收集滤液；将收集的滤液在2500r/min转速下离心10min，取上清液；将所得的上清液利用降膜蒸发器降膜蒸发浓缩，浓缩至溶液折光率达到45％，得浓缩液；之后，在浓缩液中添加80％的乙醇，对浓缩液进行变性，其中，所加入的乙醇与浓缩液的体积比为3:2；对变性后的浓缩液进行过滤除去经变性后所产生的沉淀，收集滤液；将滤液进行旋转蒸发除去乙醇；将旋转蒸发后所得的溶液利用截留分子量为10k的滤膜进行切向流过滤，收集滤出液，即得所述杏鲍菇加工废料提取液。步骤(2)活化各菌种的方法为：将胶质芽孢杆菌与褐球固氮菌分别接种于含有固体培养基a的斜面上，分开培养72h，培养时培养温度控制在25℃；淡紫色拟青霉接种于含有pda斜面培养基的斜面上培养7天，培养时培养温度控制在25℃；泾阳链霉菌接种于含有高氏合成一号琼脂培养基的斜面上培养7天，培养时培养温度控制在28℃；浅灰链霉菌杭州变种接种于含有高氏合成一号琼脂培养基的斜面上培养7天，培养时培养温度控制在30℃。步骤(3)制备胶质芽孢杆菌种子悬液、褐球固氮菌种子悬液、淡紫色拟青霉种子悬液、泾阳链霉菌种子悬液、浅灰链霉菌杭州变种种子悬液的方法为：用接种环各挑取1环步骤(2)已活化的胶质芽孢杆菌、褐球固氮菌、淡紫色拟青霉、泾阳链霉菌、浅灰链霉菌杭州变种，分别对应接入装有150ml的液体培养基a、液体培养基a、pda液体培养基、高氏合成一号液体培养基、高氏合成一号液体培养基的5个三角瓶中进行培养，其中，胶质芽孢杆菌与褐球固氮菌在150rpm、25℃条件下，摇床振荡培养48h；淡紫色拟青霉在150rpm、25℃条件下，摇床振荡培养7天；泾阳链霉菌在150rpm、28℃条件下，摇床振荡培养7天；浅灰链霉菌杭州变种在150rpm、30℃条件下，摇床振荡培养7天，即分别得所述胶质芽孢杆菌种子悬液、褐球固氮菌种子悬液、淡紫色拟青霉种子悬液、泾阳链霉菌种子悬液、浅灰链霉菌杭州变种种子悬液；步骤(4)制备胶质芽孢杆菌菌剂、褐球固氮菌菌剂、淡紫色拟青霉菌剂、泾阳链霉菌菌剂、浅灰链霉菌杭州变种菌剂的方法为：取部分步骤(1)所得的杏鲍菇加工废料提取液并将其的ph调节至7.4，再经122℃，湿热灭菌10min，得培养液；取5个250ml的三角瓶，将所得的培养液置于三角瓶中且每个三角瓶中培养液的体积为90ml；接着，将步骤(3)所得的胶质芽孢杆菌种子悬液、褐球固氮菌种子悬液、淡紫色拟青霉种子悬液、泾阳链霉菌种子悬液、浅灰链霉菌杭州变种种子悬液分别接种于对应的三角瓶中，且每个三角瓶中的接种量均为6％；接种之后，在29℃，转速为100rpm的条件下，进行振荡培养，其中，胶质芽孢杆菌与褐球固氮菌培养72h，淡紫色拟青霉、泾阳链霉菌以及浅灰链霉菌杭州变种培养9天，使各菌剂的活菌数均为2～3亿个/ml，即分别得所述胶质芽孢杆菌菌剂、褐球固氮菌菌剂、淡紫色拟青霉菌剂、泾阳链霉菌菌剂、浅灰链霉菌杭州变种菌剂；步骤(5)制备菌液的方法为：取部分步骤(1)所得的杏鲍菇加工废料提取液并将其经122℃，湿热灭菌10min；将灭菌后的杏鲍菇加工废料提取液、胶质芽孢杆菌菌剂、褐球固氮菌菌剂、淡紫色拟青霉菌剂、泾阳链霉菌菌剂、浅灰链霉菌杭州变种菌剂按照重量份混合均匀，即得所述复合菌菌液。实施例四一种玉米专用复合生物菌肥，它包括以下重量份数的组分：本发明所述的复合菌菌液30份、麸皮20份、凹凸棒土15份、泥炭40份、膨润土20份、豆饼25份。一种所述的玉米专用复合生物菌肥的制备方法，它包括以下步骤：ⅰ.按照实施例二所述的方法制备复合菌菌液；ⅱ.将麸皮、凹凸棒土、膨润土以及豆饼粉碎后，与泥炭以及制备的复合菌菌液搅拌混合，之后在25℃下干燥，使其含水量在8％，得所述玉米专用复合生物菌肥。实施例五一种玉米专用复合生物菌肥，它包括以下重量份数的组分：本发明所述的复合菌菌液35份、麸皮18份、凹凸棒土16份、泥炭35份、膨润土22份、豆饼20份。一种所述的玉米专用复合生物菌肥的制备方法，它包括以下步骤：ⅰ.按照实施例二所述的方法制备复合菌菌液；ⅱ.将麸皮、凹凸棒土、膨润土以及豆饼粉碎后，与泥炭以及制备的复合菌菌液搅拌混合，之后在28℃下干燥，使其含水量在6％，得所述玉米专用复合生物菌肥。实施例六一种玉米专用复合生物菌肥，它包括以下重量份数的组分：本发明所述的复合菌菌液40份、麸皮15份、凹凸棒土20份、泥炭30份、膨润土25份、豆饼15份。一种所述的玉米专用复合生物菌肥的制备方法，它包括以下步骤：ⅰ.按照实施例二所述的方法制备复合菌菌液；ⅱ.将麸皮、凹凸棒土、膨润土以及豆饼粉碎后，与泥炭以及制备的复合菌菌液搅拌混合，之后在30℃下干燥，使其含水量在5％，得所述玉米专用复合生物菌肥。实施例七：玉米专用复合生物菌肥效果测定本实施例以实施例五所得的烟玉米专用复合生物菌肥为例，进行玉米专用复合生物菌肥效果的测定。选取同一块地，平均划分成5块，将这5块地随机分为实验组、对照组1、对照组2、对照组3、对照组4。其中，实验组施用实施例五所得的烟玉米专用复合生物菌肥；对照组1施用绿陵复合肥料；对照组2施用龙昊复合肥料；对照组3施用基质肥(以重量份数计，所述基质肥由麸皮18份、凹凸棒土16份、泥炭35份、膨润土22份、豆饼20份混合而成。)；对照组4不施用任何肥料。其中，实验组、对照组1、对照组2、对照组3的施肥量及施用时间均相同，各种肥对玉米大斑病发病率、青枯病发病率、茎腐病发病率、玉米抗倒性的影响，结果如表1所示；各种肥对玉米大小斑个数、植株株高、玉米果数、产量的影响，结果如表2所示；各种肥对玉米营养成分的影响，结果如表3所示。表1处理大斑病青枯病茎腐病倒伏度倒折率实验组0.0％0.0％0.0％8°0.0％对照组11.3％2.3％3.2％12°0.2％对照组22.5％2.8％3.5％15°0.2％对照组37.5％10％12％25°0.3％对照组49.5％12％15％32°0.4％表2处理大小斑数/个·株-1株高/cm玉米果数/(个/株)产量(kg/m2)实验组02383.52.23对照组112.718321.78对照组225.718121.75对照组356.217611.63对照组475.617211.42表3从表1-3中的数据可知，本发明的烟玉米专用复合生物菌肥能有效促进玉米植株的生长，有利于玉米对土壤中营养成分的转化与吸收，增加玉米的产量，同时能提高玉米的抗病害能力。需要说明的是，以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本
技术领域：
的普通技术人员，在不脱离本发明构思的前提下，还可以作出若干改变、改进和润饰，这些改变、改进和润饰也应视为本发明的保护范围。当前第1页1 2 3
技术特征：1.一种复合菌菌液，其特征在于：它由如下重量份的原料制备而成：杏鲍菇加工废料提取液45-55份、胶质芽孢杆菌菌剂15-20份、褐球固氮菌菌剂20-25份、淡紫色拟青霉菌剂5-8份、泾阳链霉菌菌剂5-10份、浅灰链霉菌杭州变种菌剂10-15份；所述胶质芽孢杆菌菌剂、褐球固氮菌菌剂、淡紫色拟青霉菌剂、泾阳链霉菌菌剂、浅灰链霉菌杭州变种菌剂的活菌数均为2-3亿个/ml。
2.一种如权利要求1所述的复合菌菌液的制备方法，其特征在于：它包括以下步骤：
(1)制备杏鲍菇加工废料提取液；(2)活化各菌种；(3)制备胶质芽孢杆菌种子悬液、褐球固氮菌种子悬液、淡紫色拟青霉种子悬液、泾阳链霉菌种子悬液、浅灰链霉菌杭州变种种子悬液；(4)制备胶质芽孢杆菌菌剂、褐球固氮菌菌剂、淡紫色拟青霉菌剂、泾阳链霉菌菌剂、浅灰链霉菌杭州变种菌剂；(5)制备菌液；
其中，步骤(4)制备胶质芽孢杆菌菌剂、褐球固氮菌菌剂、淡紫色拟青霉菌剂、泾阳链霉菌菌剂、浅灰链霉菌杭州变种菌剂的方法为：
取部分步骤(1)所得的杏鲍菇加工废料提取液并将其的ph调节至7.2-7.4，再经121-122℃，湿热灭菌10-20min，得培养液；
取5个250ml的三角瓶，将所得的培养液置于三角瓶中且每个三角瓶中培养液的体积为80-90ml；接着，将步骤(3)所得的胶质芽孢杆菌种子悬液、褐球固氮菌种子悬液、淡紫色拟青霉种子悬液、泾阳链霉菌种子悬液、浅灰链霉菌杭州变种种子悬液分别接种于对应的三角瓶中，且每个三角瓶中的接种量均为4％-6％；接种之后，在28-30℃，转速为100-250rpm的条件下，进行振荡培养，其中，胶质芽孢杆菌与褐球固氮菌培养48-72h，淡紫色拟青霉、泾阳链霉菌以及浅灰链霉菌杭州变种培养7-9天，使各菌剂的活菌数均为2～3亿个/ml，即分别得所述胶质芽孢杆菌菌剂、褐球固氮菌菌剂、淡紫色拟青霉菌剂、泾阳链霉菌菌剂、浅灰链霉菌杭州变种菌剂；
步骤(5)制备菌液的方法为：取部分步骤(1)所得的杏鲍菇加工废料提取液并将其经121-122℃，湿热灭菌10-20min；将灭菌后的杏鲍菇加工废料提取液、胶质芽孢杆菌菌剂、褐球固氮菌菌剂、淡紫色拟青霉菌剂、泾阳链霉菌菌剂、浅灰链霉菌杭州变种菌剂按照重量份混合均匀，即得所述复合菌菌液。
3.根据权利要求2所述的复合菌菌液的制备方法，其特征在于：步骤(1)制备杏鲍菇加工废料提取液的方法为：
将杏鲍菇加工过程产生的菇脚以及碎菇洗净之后粉碎至40-50目，按杏鲍菇与水的重量比为2:3的比例加入水，加热至90-98℃，在此温度下熬煮2-3h，之后冷却、过滤，收集滤液；将收集的滤液在1500-2500r/min转速下离心10-15min，取上清液；将所得的上清液利用降膜蒸发器降膜蒸发浓缩，浓缩至溶液折光率达到35-45％，得浓缩液；之后，在浓缩液中添加80～90％的乙醇，对浓缩液进行变性，其中，所加入的乙醇与浓缩液的体积比为3:2；对变性后的浓缩液进行过滤除去经变性后所产生的沉淀，收集滤液；将滤液进行旋转蒸发除去乙醇；将旋转蒸发后所得的溶液利用截留分子量为5-10k的滤膜进行切向流过滤，收集滤出液，即得所述杏鲍菇加工废料提取液。
4.根据权利要求2所述的复合菌菌液的制备方法，其特征在于：步骤(2)活化各菌种的方法为：
将胶质芽孢杆菌与褐球固氮菌分别接种于含有固体培养基a的斜面上，分开培养48-72h，培养时培养温度控制在25-35℃；
其中，固体培养基a为k2hpo4、kh2po4、mgso4·7h2o、caco3·2h2o、na2mo·2h2o、酵母膏、甘露醇、fecl3以及琼脂混合后制得的培养基；
淡紫色拟青霉接种于含有pda斜面培养基的斜面上培养5-7天，培养时培养温度控制在25-28℃；
泾阳链霉菌接种于含有高氏合成一号琼脂培养基的斜面上培养5-7天，培养时培养温度控制在28-30℃；
浅灰链霉菌杭州变种接种于含有高氏合成一号琼脂培养基的斜面上培养5-7天，培养时培养温度控制在30℃。
5.根据权利要求2所述的复合菌菌液的制备方法，其特征在于：步骤(3)制备胶质芽孢杆菌种子悬液、褐球固氮菌种子悬液、淡紫色拟青霉种子悬液、泾阳链霉菌种子悬液、浅灰链霉菌杭州变种种子悬液的方法为：
用接种环各挑取1环步骤(2)已活化的胶质芽孢杆菌、褐球固氮菌、淡紫色拟青霉、泾阳链霉菌、浅灰链霉菌杭州变种，分别对应接入装有100-150ml的液体培养基a、液体培养基a、pda液体培养基、高氏合成一号液体培养基、高氏合成一号液体培养基的5个三角瓶中进行培养，其中，胶质芽孢杆菌与褐球固氮菌在150-200rpm、25-35℃条件下，摇床振荡培养24-48h；淡紫色拟青霉在150-200rpm、25-28℃条件下，摇床振荡培养5-7天；泾阳链霉菌在150-200rpm、28-30℃条件下，摇床振荡培养5-7天；浅灰链霉菌杭州变种在150-200rpm、30℃条件下，摇床振荡培养5-7天，即分别得所述胶质芽孢杆菌种子悬液、褐球固氮菌种子悬液、淡紫色拟青霉种子悬液、泾阳链霉菌种子悬液、浅灰链霉菌杭州变种种子悬液；其中，液体培养基a为k2hpo4、kh2po4、mgso4·7h2o、caco3·2h2o、na2mo·2h2o、酵母膏、甘露醇、fecl3混合后制得的培养基。
6.如权利要求1所述的复合菌菌液在制备玉米专用复合生物菌肥中的应用。
7.一种玉米专用复合生物菌肥，其特征在于：它包括以下重量份数的组分：
权利要求1所述的复合菌菌液30-40份、麸皮15-20份、凹凸棒土15-20份、泥炭30-40份、膨润土20-25份、豆饼15-25份。
8.一种如权利要求7所述的玉米专用复合生物菌肥的制备方法，其特征在于：它包括以下步骤：
ⅰ.制备如权利要求1所述的复合菌菌液；
ⅱ.将麸皮、凹凸棒土、膨润土以及豆饼粉碎后，与泥炭以及制备的复合菌菌液搅拌混合，之后在25-30℃下干燥，使其含水量在5-8％，得所述玉米专用复合生物菌肥。
技术总结本发明涉及一种复合菌菌液及其制备方法以及它在玉米专用复合生物菌肥中的应用，所述合菌菌液，它由如下重量份的原料制备而成：杏鲍菇加工废料提取液45‑55份、胶质芽孢杆菌菌剂15‑20份、褐球固氮菌菌剂20‑25份、淡紫色拟青霉菌剂5‑8份、泾阳链霉菌菌剂5‑10份、浅灰链霉菌杭州变种菌剂10‑15份；所述胶质芽孢杆菌菌剂、褐球固氮菌菌剂、淡紫色拟青霉菌剂、泾阳链霉菌菌剂、浅灰链霉菌杭州变种菌剂的活菌数均为2‑3亿个/mL；本发明将废弃的杏鲍菇加工废料进行再利用，制成能够活化土壤中养分、提高土壤肥力的复合菌菌液，本发明变废为宝，具有环保的优点。
技术研发人员：黄家福;潘裕添;吴启赐;林志超;张国广
受保护的技术使用者：闽南师范大学
技术研发日：2020.02.22
技术公布日：2020.06.09
