本发明涉及环丙胺的hplc分析方法。
背景技术：
环丙胺(scr-4341)为甲磺酸乐伐替尼合成反应第三步用到的起始原料。由于环丙胺无紫外吸收，常采用气相顶空法对环丙胺进行测定，但甲磺酸乐伐替尼在高温条件下，易降解生成环丙胺，干扰检测，另外采用cad检测器进行测定，检测灵敏度低，不能很好的控制甲磺酸乐伐替尼中环丙胺的含量。
现有技术中尚无记载有关从甲磺酸乐伐替尼中检测环丙胺的具体分析方法，采用hplc柱前衍生化方法对环丙胺进行测定，可以避免乐伐替尼高温降解生成环丙胺干扰检测，同时该检测方法分离度好，衍生化后产物单一，空白无干扰峰，可以准确检测样品中环丙胺的含量。
技术实现要素：
本发明提供一种检测甲磺酸乐伐替尼中的环丙胺的hplc方法，其特征在于：采用反相色谱柱；使用衍生化试剂对待测样品进行衍生化处理；流动相选自含有胺类物质的盐缓冲溶液和有机溶剂组成，检测波长为215-356nm，优选356nm。
所述衍生化试剂选自2,4-二硝基氯苯、2，4-二硝基氟苯、苯甲酰氯或n-琥珀酰亚胺对硝基苯乙酸酯。
所述衍生化处理为使用衍生化试剂与环丙胺反应生成具有紫外吸收的环丙胺衍生物，优
选为
所述衍生化处理过程中需加入碳酸钠，碳酸钠与供试品的质量比为40:1～60:1，优选50:1。
进一步，衍生化的时间为1.5～12h。
进一步，衍生化的温度为60～80℃，优选75℃。
所述盐缓冲溶液为乙酸盐缓冲溶液、甲酸盐缓冲液。
所述含有胺类物质的盐缓冲溶液的ph值为4.0-6.0，优选5.0。
进一步，含有胺类物质的盐缓冲溶液和有机溶剂的体积比为1:1～1:6，优选为1:1.2～1:4，更优选为9:11，优选洗脱过程中有机溶剂体积不变或增加。
所述有机溶剂选自乙腈、甲醇、乙醇中的一种或几种。
所述的有机溶剂优选乙腈和甲醇，其体积比为2:1～1:3，优选1:1。.
进一步，还包括使用溶剂溶解待测样品，溶剂由乙腈和水组成，乙腈和水的体积比为2:1～6:1，优选为4:1。
本发明中所述衍生化是一种利用化学变换把化合物转化成类似化学结构的物质。
有益效果
1、本发明提供的方法可以准确检测甲磺酸乐伐替尼中环丙胺的含量，避免使用气相顶空法检测时，由于高温导致甲磺酸乐伐替尼分解，导致不能准确测定环丙胺的含量。
2、本发明提供的方法可以将环丙胺与其他杂质分离，分离度均大于1.5，符合标准。
3、本发明提供的方法可以准确检测甲磺酸乐伐替尼中环丙胺的含量，衍生化条件耐用性良好，产物单一，不干扰其他杂质的检测，简单易行且分析成本低，结果准确可靠，便于生产和质控过程中产品质量的控制。
附图说明
图1：实施例1中环丙胺经衍生化色谱峰图谱
图2：实施例2中检测系统适用性图谱
图3：实施例5中对照品溶液hplc检测图谱
图4：实施例5中供试品溶液hplc检测图谱
图5：实施例11中hplc检测图谱
图6：实施例12中hplc检测图谱
具体实施方式
下面通过实施例进一步来说明本发明，应该正确理解的是，本发明的实施例仅仅用于说明本发明而给出，而不是对本发明的限制，所以，在本发明方法的前提下对本发明的简单改进均属于本发明要求保护的范围。
以下实例中检测所用的环丙胺(scr-4341)由安耐吉化学试剂提供，甲磺酸乐伐替尼样品由江苏先声药业提供，批号为150115、150119、150125。
实施例1：
取环丙胺适量，加溶剂[乙腈-水(80:20)]适量，加衍生化试剂2,4-二硝基氯苯溶液制成对照溶液，用二极管阵列检测器(dad)进行全波长光谱采集，结果表明scr-4341经过衍生化色谱峰的最大吸收在215nm，264nm、356nm，在356nm波长下，检测灵敏度更高，干扰较小，因此选择356nm波长作为本品的测定波长。检测谱图见图1。
实施例2
1)色谱条件
仪器：高效液相色谱仪
色谱柱：agilentzorbax-bonus-rp-c18(150mm×4.6mm,3.5μm)
流动相：0.05mol/l乙酸铵溶液(取乙酸铵3.85g，加水1000ml使溶解，加入冰醋酸1ml混匀，调节ph为5.0)-乙腈-甲醇(18:11:11)
溶剂：乙腈-水(80:20)
进样量：10μl
检测波长：356nm
2)样品配制
(1)精密称取scr-4341对照品适量，配制成每1ml含scr-4341约7.5mg的溶液，精密量取2ml至20ml顶空瓶中，加甲磺酸乐伐替尼10mg，精密量取碳酸钠水溶液(取碳酸钠2.5g，加水25ml溶解即得)0.5ml，加入衍生化试剂2,4-二硝基氯苯溶液(取2,4-二硝基氯苯100mg至20ml量瓶，加乙腈稀释至刻度，摇匀)0.2ml，密封、压盖，75℃水浴5小时，放冷，用溶剂多次洗涤并完全转移至10ml量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀，配制成系统适用性试验溶液。
(2)精密称取杂质scr-4338、杂质scr-4452、杂质scr-4453、杂质scr-4342各适量，配制成每1ml含各杂质约7.5mg的溶液，精密量取2ml至20ml顶空瓶中，加甲磺酸乐伐替尼10mg，精密量取碳酸钠水溶液(取碳酸钠2.5g，加水25ml溶解即得)0.5ml，加入衍生化试剂2,4-二硝基氯苯溶液(取2,4-二硝基氯苯100mg至20ml量瓶，加乙腈稀释至刻度，摇匀)0.2ml，密封、压盖，75℃水浴5小时，放冷，用溶剂多次洗涤并完全转移至10ml量瓶中，溶剂稀释至刻度，配制成含氨基杂质对照溶液。
表1杂质对照表
3)测定结果：
环丙胺的衍生化产物的保留时间为5.041分钟。系统适用性试验溶液的色谱图中5分钟附近无其他色谱峰存在；氨基杂质对照溶液的色谱图中5分钟附近未见明显色谱峰，故其他杂质的存在对环丙胺衍生化产物的检测无干扰。同时选择乙腈-水(80:20)为溶剂，杂质环丙胺衍生化组分及样品均有较好溶解度，杂质环丙胺衍生化峰型好，空白溶剂不干扰检测。检测结果见图2
实施例3：
1)色谱条件
仪器：高效液相色谱仪
色谱柱：agilentzorbax-bonus-rp-c18(150mm×4.6mm,3.5μm)
流动相：0.05mol/l乙酸铵溶液(取乙酸铵3.85g，加水1000ml使溶解，加入冰醋酸1ml混匀，调节ph为5.0)-乙腈-甲醇(18:11:11)
溶剂：乙腈-水(80:20)
进样量：10μl
检测波长：356nm
2)样品配制
精密称取环丙胺对照品适量，加溶剂乙腈-水(80:20)定量稀释制成每1ml约含7μg的溶液作为对照品溶液，取对照品贮备液2ml置20ml顶空瓶中，加入衍生化试剂2,4-二硝基氯苯溶液(1mg/ml)0.1ml或1ml，分别考察40℃、60℃和80℃条件衍生化1小时，结果表明，在40℃和60℃条件下，样品溶液中环丙胺衍生物的峰非常小(峰面积均小于2)，检测灵敏度低。因此采用80℃作为衍生化温度，并同时考察不同衍生化试剂加入量及衍生化时间。
3)测定结果：
根据表一结果表明，衍生化温度为80℃，时间为5小时，衍生化条件较稳定，且衍生化时间长度适中。由于衍生化温度80℃接近乙腈的沸点，溶剂中乙腈挥发量较大，可能导致供试品从溶液中析出，进而影响衍生化反应的重复性。调整衍生化温度为75℃，衍生化时间分别考察4.5小时、5小时、5.5小时，结果三份样品结果重复性较好。
表1环丙胺衍生化耐用性试验结果
实施例4：
1)色谱条件
仪器：高效液相色谱仪
色谱柱：agilentzorbax-bonus-rp-c18(150mm×4.6mm,3.5μm)
流动相：0.05mol/l乙酸铵溶液(取乙酸铵3.85g，加水1000ml使溶解，加入冰醋酸1ml混匀，调节ph为5.0)-乙腈-甲醇(18:11:11)
溶剂：乙腈-水(80:20)
进样量：10μl
检测波长：356nm
2)样品配制
精密称取供试品10mg，置20ml顶空瓶中，加溶剂2ml，依次精密量取碳酸钠水溶液(取碳酸钠2.5g，加水25ml溶解即得)0.5ml，加入衍生化试剂2,4-二硝基氯苯溶液(取2,4-二硝基氯苯100mg至20ml量瓶，加乙腈稀释至刻度，摇匀)0.2ml，密封、压盖，根据表2所列衍生化条件进行处理，放冷，用溶剂多次洗涤并完全转移至10ml量瓶中，溶剂稀释至刻度，即得。
表2环丙胺衍生化条件耐用性试验结果
结果表明：甲磺酸乐伐替尼在表中列出的变化条件下，经衍生化后，测定结果基本无影响，说明衍生化条件耐用性良好。
实施例5：
1)色谱条件
仪器：高效液相色谱仪
色谱柱：agilentzorbax-bonus-rp-c18(150mm×4.6mm,3.5μm)
流动相：0.05mol/l乙酸铵溶液(取乙酸铵3.85g，加水1000ml使溶解，加入冰醋酸1ml混匀，调节ph为5.0)-乙腈-甲醇(18:11:11)
溶剂：乙腈-水(80:20)
进样量：10μl
检测波长：356nm
2)样品配制
供试品及对照品适量置20ml顶空瓶中，加溶剂2ml，加入碳酸钠水溶液(取碳酸钠2.5g，加水25ml溶解即得)0.5ml，衍生化试剂2,4-二硝基氯苯溶液(取2,4-二硝基氯苯100mg至20ml量瓶，加乙腈稀释至刻度，摇匀)0.2ml，密封、压盖，75℃水浴5小时，作为衍生化条件，放冷，用溶剂多次洗涤并完全转移至10ml量瓶中，溶剂稀释至刻度，即得浓度为1.0mg/ml(甲磺酸乐伐替尼)的供试品溶液；浓度为7.5μg/ml的对照品溶液。
3)测定结果
检测结果表明环丙胺衍生化后产物单一，与其他峰分离度好，检测结果见图3和图4。
实施例6：
1)色谱条件
仪器：高效液相色谱仪
色谱柱：agilentzorbax-bonus-rp-c18(150mm×4.6mm,3.5μm)
流动相：0.05mol/l乙酸铵溶液(取乙酸铵3.85g，加水1000ml使溶解，加入冰醋酸1ml混匀，调节ph为5.0)-乙腈-甲醇(18:11:11)
溶剂：乙腈-水(80:20)
进样量：10μl
检测波长：356nm
2)样品配制
供试品及对照品适量置20ml顶空瓶中，加溶剂2ml，加入碳酸钠水溶液(取碳酸钠2.5g，加水25ml溶解即得)0.5ml，衍生化试剂2,4-二硝基氯苯溶液(取2,4-二硝基氯苯100mg至20ml量瓶，加乙腈稀释至刻度，摇匀)0.2ml，密封、压盖，75℃水浴5小时，作为衍生化条件，放冷，用溶剂多次洗涤并完全转移至10ml量瓶中，溶剂稀释至刻度，即得浓度为1.0mg/ml(甲磺酸乐伐替尼)的供试品溶液；浓度为7.5μg/ml的对照品溶液。
3)测定结果
检测结果表明环丙胺衍生化后产物单一，与其他峰分离度好。
实施例7：
1)色谱条件
仪器：高效液相色谱仪
色谱柱：agilentzorbax-bonus-rp-c18(150mm×4.6mm,3.5μm)
流动相：0.05mol/l乙酸铵溶液(取乙酸铵3.85g，加水1000ml使溶解，加入冰醋酸1ml混匀，调节ph为5.0)-乙腈-甲醇(18:11:11)
溶剂：乙腈-水(80:20)
进样量：10μl
检测波长：356nm
2)样品配制
供试品及对照品适量置20ml顶空瓶中，加溶剂2ml，加入碳酸钠水溶液(取碳酸钠2.5g，加水25ml溶解即得)0.5ml，衍生化试剂2,4-二硝基氯苯溶液(取2,4-二硝基氯苯100mg至20ml量瓶，加乙腈稀释至刻度，摇匀)0.2ml，密封、压盖，75℃水浴5小时，作为衍生化条件，放冷，用溶剂多次洗涤并完全转移至10ml量瓶中，溶剂稀释至刻度，即得浓度为1.0mg/ml(甲磺酸乐伐替尼)的供试品溶液；浓度为7.5μg/ml的对照品溶液。
3)测定结果
检测结果表明环丙胺衍生化后产物单一，与其他峰分离度好。
表3实施例5-7的检测结果
实施例8：
1)色谱条件
仪器：高效液相色谱仪
色谱柱：agilentzorbax-bonus-rp-c18(150mm×4.6mm,3.5μm)
流动相：0.05mol/l乙酸铵溶液(取乙酸铵3.85g，加水1000ml使溶解，加入冰醋酸调节ph为4.0)-乙腈-甲醇(3:2:1)
溶剂：乙腈-水(60:30)
进样量：10μl
检测波长：356nm
2)样品配制
供试品及对照品适量置20ml顶空瓶中，加溶剂2ml，加入碳酸钠水溶液(取碳酸钠2.4g，加水20ml溶解即得)0.5ml，衍生化试剂2,4-二硝基氯苯溶液(取2,4-二硝基氯苯100mg至20ml量瓶，加乙腈稀释至刻度，摇匀)0.2ml，密封、压盖，75℃水浴5小时，作为衍生化条件，放冷，用溶剂多次洗涤并完全转移至10ml量瓶中，溶剂稀释至刻度，即得浓度为1.0mg/ml(甲磺酸乐伐替尼)的供试品溶液；浓度为7.5μg/ml的对照品溶液。
3)测定结果
检测结果表明环丙胺衍生化后产物单一，测试结果与实施例5中图4所示结果相似。
实施例9：
1)色谱条件
仪器：高效液相色谱仪
色谱柱：agilentzorbax-bonus-rp-c18(150mm×4.6mm,3.5μm)
流动相：0.05mol/l乙酸铵溶液(取乙酸铵3.85g，加水1000ml使溶解，加入冰醋酸1调节ph为6.0)-乙腈-甲醇(18:11:11)
溶剂：乙腈-水(60:10)
进样量：10μl
检测波长：356nm
2)样品配制
供试品及对照品适量置20ml顶空瓶中，加溶剂2ml，加入碳酸钠水溶液(取碳酸钠2.5g，加水25ml溶解即得)0.5ml，衍生化试剂2,4-二硝基氯苯溶液(取2,4-二硝基氯苯100mg至20ml量瓶，加乙腈稀释至刻度，摇匀)0.2ml，密封、压盖，75℃水浴5小时，作为衍生化条件，放冷，用溶剂多次洗涤并完全转移至10ml量瓶中，溶剂稀释至刻度，即得浓度为1.0mg/ml(甲磺酸乐伐替尼)的供试品溶液；浓度为7.5μg/ml的对照品溶液。
3)测定结果
检测结果表明环丙胺衍生化后产物单一，不干扰检测，与其他峰分离度符合标准，测试结果与实施例5中图4所示结果相似。
实施例10：
1)色谱条件
仪器：高效液相色谱仪
色谱柱：agilentzorbax-bonus-rp-c18(150mm×4.6mm,3.5μm)
流动相：0.05mol/l乙酸铵溶液(取乙酸铵3.85g，加水1000ml使溶解，加入冰醋酸1ml混匀，调节ph为5.0)-乙腈-甲醇(8:1:1)
溶剂：乙腈-水(80:20)
进样量：10μl
检测波长：356nm
2)样品配制
供试品及对照品适量置20ml顶空瓶中，加溶剂2ml，加入碳酸钠水溶液(取碳酸钠1.6g，加水20ml溶解即得)0.5ml，衍生化试剂2,4-二硝基氯苯溶液(取2,4-二硝基氯苯100mg至20ml量瓶，加乙腈稀释至刻度，摇匀)0.2ml，密封、压盖，75℃水浴5小时，作为衍生化条件，放冷，用溶剂多次洗涤并完全转移至10ml量瓶中，溶剂稀释至刻度，即得浓度为1.0mg/ml(甲磺酸乐伐替尼)的供试品溶液；浓度为7.5μg/ml的对照品溶液。
3)测定结果
检测结果表明环丙胺衍生化后产物单一，与其他峰分离度符合标准，测试结果与实施例5中图4所示结果相似。
实施例11：
1)色谱条件
仪器：高效液相色谱仪
色谱柱：agilentzorbax-bonus-rp-c18(150mm×4.6mm,3.5μm)
流动相：0.01mol/l磷酸盐缓冲液溶液(取磷酸二氢钾1.36g，加水1000ml使溶解，磷酸调节ph为3.0)-乙腈-甲醇(18:11:11)
溶剂：乙腈-水(80:20)
进样量：10μl
检测波长：356nm
2)样品配制
精密称取杂质scr-4338、杂质scr-4452、杂质scr-4453、杂质scr-4342和各适量，配制成每1ml含各杂质约7.5mg的溶液，精密量取2ml至20ml顶空瓶中，加甲磺酸乐伐替尼10mg，精密量取碳酸钠水溶液(取碳酸钠2.5g，加水25ml溶解即得)0.5ml，加入衍生化试剂2,4-二硝基氯苯溶液(取2,4-二硝基氯苯100mg至20ml量瓶，加乙腈稀释至刻度，摇匀)0.2ml，密封、压盖，75℃水浴5小时，放冷，用溶剂多次洗涤并完全转移至10ml量瓶中，溶剂稀释至刻度，配制成含氨基杂质对照溶液。
3)测定结果
检测结果表明，已知杂质在该色谱条件下与环丙胺衍生化后产物分离度较差。见图5.
实施例12：
1)色谱条件
仪器：高效液相色谱仪
色谱柱：agilentzorbax-bonus-rp-c18(150mm×4.6mm,3.5μm)
流动相：0.01mol/l磷酸盐缓冲液溶液(取磷酸二氢钾1.36g，加水1000ml使溶解，磷酸调节ph为6.2)-乙腈-甲醇(18:11:11)
溶剂：乙腈-水(80:20)
进样量：10μl
检测波长：356nm
2)样品配制
精密称取杂质scr-4338、杂质scr-4452、杂质scr-4453、杂质scr-4342和各适量，配制成每1ml含各杂质约7.5mg的溶液，精密量取2ml至20ml顶空瓶中，加甲磺酸乐伐替尼10mg，精密量取碳酸钠水溶液(取碳酸钠2.5g，加水25ml溶解即得)0.5ml，加入衍生化试剂2,4-二硝基氯苯溶液(取2,4-二硝基氯苯100mg至20ml量瓶，加乙腈稀释至刻度，摇匀)0.2ml，密封、压盖，75℃水浴5小时，放冷，用溶剂多次洗涤并完全转移至10ml量瓶中，溶剂稀释至刻度，配制成含氨基杂质对照溶液。
3)测定结果
检测结果表明，已知杂质在该色谱条件下与环丙胺衍生化后产物峰型差，疑似有其他杂质落在环丙胺峰的位置。见图6。
1.一种检测甲磺酸乐伐替尼中的环丙胺的hplc方法，其特征在于：采用反相色谱柱；使用衍生化试剂对待测样品进行衍生化处理；流动相选自含有胺类物质的盐缓冲溶液和有机溶剂组成。
2.根据权利要求1所述方法，其特征在于所述衍生化试剂选自2,4-二硝基氯苯、2，4-二硝基氟苯、苯甲酰氯或n-琥珀酰亚胺对硝基苯乙酸酯。
3.根据权利要求1所述方法，其特征在于所述衍生化处理为使用衍生化试剂与环丙胺反应生成具有紫外吸收的环丙胺衍生物。
4.根据权利要求3所述方法，其特征在于所述衍生化处理过程中需加入碳酸钠，碳酸钠与供试品的质量比为40:1～60:1，优选50:1。
5.根据权利要求1所述方法，其特征在于衍生化的时间为1.5～12h。
6.根据权利要求1所述的一种检测甲磺酸乐伐替尼中的环丙胺的hplc方法，其特征在于衍生化的温度为60～80℃，优选75℃。
7.根据权利要求1所述方法，其特征在于所述盐缓冲溶液为乙酸盐缓冲溶液、甲酸盐缓冲液。
8.根据权利要求1所述方法，其特征在于所述含有胺类物质的盐缓冲溶液的ph值为4.0-6.0，优选5.0。
9.根据权利要求1所述方法，其特征在于含有胺类物质的盐缓冲溶液和有机溶剂的体积比为1:1～1:6，优选为1:1.2～1:4，更优选为9:11。
10.根据权利要求1所述方法，其特征在于所述有机溶剂选自乙腈、甲醇、乙醇中的一种或几种。
11.根据权利要求1或权利要求4所述方法，其特征在于所述的有机溶剂优选乙腈和甲醇，其体积比为2:1～1:3，优选1:1，优选，检测波长为215-356nm，优选356nm。
12.根据权利要求1所述方法，其特征在于还包括使用溶剂溶解待测样品，溶剂由乙腈和水组成，乙腈和水的体积比为2:1～6:1，优选为4:1。
技术总结