本发明公开了一种银耳孢子及其发酵产品的新应用，具体涉及一种银耳孢子或发酵产品作为化妆品用隔离紫外线成分的应用，属于化妆品技术领域。
背景技术：
随着近年来大气臭氧层被破坏，导致阳光中的紫外线对地面的辐射量日益增加，从而对人们的皮肤造成损伤和破坏。因此，具有隔离防晒功能的化妆品受到人们越来越多的重视。同时，人们对化妆品质量和安全的要求也越来越高，越来越多的天然成分因其效果显著、安全温和、不刺激等优点受到人们的追捧，是今后化妆品研发的主流趋势。
目前，用于化妆品中的防晒原料主要分为物理防晒剂和化学防晒剂两种。物理防晒剂的主要作用原理是通过在皮肤表面形成一层致密防护膜阻挡或反射紫外线，常用的防晒剂有二氧化钛和氧化锌等。物理防晒剂的主要缺点是肤感较差，容易堵塞毛孔，导致皮肤出现炎症。化学防晒剂的主要作用原理是代替皮肤细胞吸收部分紫外线，从而达到减轻紫外线对皮肤的伤害。主要包括对氨基苯甲酸衍生物、邻氨基苯甲酸酯衍生物、肉桂酸酯类、水杨酸酯类等。化学防晒剂的缺点是对皮肤刺激性较大，容易导致过敏，安全性不高。
银耳是我国传统名贵食用菌之一，是重要的药食同源食品之一。具有补脾开胃、益气清肠、滋阴润肺和提高免疫力的作用。银耳多糖是银耳中的主要活性物质，被称为植物性的透明质酸，其具有一定的清除羟基自由基的能力，通过抑制细胞脂质的过氧化反应从而防止皮肤的老化、促进弹性细胞生长、减少紫外线对皮肤的伤害、修复光损伤皮肤。同时，银耳多糖具有良好的润滑性和成膜性，可在皮肤表面形成一层均匀透气的薄膜，使皮肤具有良好的滑爽感和湿润感，对皮肤起到保护作用，常作为高档原料添加到化妆品中。目前，药品和化妆品领域都是针对银耳多糖的功能进行了广泛的研究，并将银耳多糖通过浸提、发酵等方式纯化出来应用于药品、化妆品等领域，对于银耳孢子菌体的研究以及应用却很少。
技术实现要素：
本发明对银耳孢子的发酵菌体进行了研究和试验，发现其与银耳多糖以及其他现有防晒类成分相比具有很好的隔离紫外线的作用，效果突出。因此，本发明提供了银耳孢子或者银耳孢子发酵产品作为化妆品用隔离紫外线成分的应用，该银耳孢子或银耳孢子发酵产品具有天然、安全的优势，并且银耳孢子发酵产品除了具有紫外线隔离作用外还具有银耳多糖的抗氧化、保湿的功效，能同时满足护肤、隔离紫外线的需求。
本发明提供了一种银耳孢子或其发酵产品作为化妆品用隔离紫外线成分的应用。经实验验证，银耳孢子具有很好的隔离紫外线的作用，而银耳孢子发酵产品中的有效成分主要为银耳孢子和银耳多糖。银耳多糖具有很好的成膜性及抗氧化、修复等功效，银耳孢子可以隔离和吸收部分紫外线，二者共同作用，从而起到保湿和隔离防晒的作用，是一种很好的隔离紫外线成分，可应用于各种隔离类和防晒类的化妆品中。
进一步的，所述银耳孢子即为银耳的繁殖体，其可以通过发酵的方式稳定的得到。所述银耳孢子可以是现有技术中报道的任意银耳孢子。进一步的，所述银耳孢子发酵产品由银耳的繁殖体——银耳孢子发酵而得，优选的，所述银耳孢子发酵产品为银耳孢子经液体深层发酵而得的产品。液体深层发酵又叫深层液体发酵或液态深层发酵，该技术为发酵领域工业化生产常用的技术，能够得到菌体浓度更高的发酵液，一般包括种子培养、发酵培养的步骤，只是培养条件根据不同的工艺和菌种而不同。
优选的，所述银耳孢子发酵产品是将银耳孢子经发酵（优选为液体深层发酵）而得的发酵液进行后处理得到的产品，所述后处理包括发酵液高温灭菌、高温灭菌后离心得到菌体、将菌体进行冷冻干燥得到冻干粉的步骤。
在本发明某一具体实施方式中，提供了一种具体的银耳孢子发酵产品的制备方法，步骤如下：
（1）将银耳孢子接种至种子培养基中，在24～30℃、150-250转/分钟的条件下培养2-5天，得种子液；所述种子培养基由下述重量百分含量的组分组成：蛋白胨0.3%-0.7%、硫酸镁0.1%-0.3%、磷酸氢二钾0.2%-0.5%、葡萄糖1%-3%、维生素b10.001%-0.003%、水余量；
（2）将种子液按照5-10%的接种量接种到发酵培养基中，在温度25-30℃、搅拌速度600-800转/分钟、通气量0.5-2vvm的条件下发酵1-3天，得发酵液，发酵过程中维持ph为2-4；所述发酵培养基由下述重量百分含量的组分组成：蛋白胨0.1%-0.3%、硫酸铵0.1%-0.3%、硫酸镁0.1%-0.3%、磷酸氢二钾0.1%-0.3%、葡萄糖1%-4%、维生素b10.001%-0.003%、水余量；
（3）将发酵液高温灭菌，灭菌后的发酵液离心、收集菌体，将收集的菌体冷冻干燥，得银耳孢子发酵产品。所得产品性状为淡黄色至黄色粉末，有淡淡的发酵香味。
进一步的，当上述定义的银耳孢子或其发酵产品作为化妆品用隔离紫外线成分时，既可以作为化妆品隔离剂，又可以作为化妆品防晒剂。同时，因为银耳孢子发酵产品中还含有银耳多糖，还具有银耳多糖的抗氧化、保湿等功效，能同时满足护肤和隔离防晒的需求，具有很好的效果。当银耳孢子或其发酵产品用于化妆品中时，其用量优选为：每100g化妆品中含有1×1010-1×1011个银耳孢子。当含量太低时，起不到很好的隔离紫外线的作用，当含量太高时，不容易与化妆品的其他成分混合，影响化妆品的稳定性。
本发明还提供了一种化妆品，该化妆品中的原料或有效成分包括银耳孢子或银耳孢子发酵产品，优选为银耳孢子发酵产品。所述银耳孢子及其发酵产品的定义与前面所述一致。
进一步的，所述银耳孢子或其发酵产品作为化妆品的隔离紫外线成分，可以单独使用，也可以与现有技术中报道的其他隔离剂、防晒剂一起联合使用。
进一步的，每100g化妆品中含有1×1010-1×1011个银耳孢子。
进一步的，所述化妆品优选为具有隔离紫外线作用的化妆品，例如隔离化妆品或者防晒化妆品。
进一步的，所述化妆品的类型可以是化妆水、乳液、面霜、隔离霜、防晒霜等。
本发明银耳孢子或其发酵产品天然、安全、温和、与皮肤相容性好，经实验验证，其具有较好的阻挡紫外线的效果，是一种很好的化妆品用隔离防晒成分，与钛白粉及化学防晒剂相比具有安全、刺激小、透气性好等优点，同时银耳孢子发酵产品还具有一定的抗氧化、保湿功效，可更好的减少紫外线对皮肤的光损伤，能够同时满足护肤和防晒需求，可广泛应用于各类化妆品中。本发明采用发酵法生产银耳孢子及其发酵产品，产量高，均匀性好，可保证产品的稳定性，适合工业化应用。
具体实施方式
为了更好地说明本发明的优点和特征，以下结合具体实施例，对本发明做进一步详细说明。应该明白的是，下述实施例仅是为了解释本发明，并不对其内容进行限制。
下述实施例中，所用银耳孢子为实验室保存的一株银耳菌hx5-1，保藏于中国典型培养物保藏中心(cctcc)，保藏编号为：cctccm2017271。
实施例1.银耳孢子发酵产品的制备
（1）培养基的配制
种子培养基（wt%）：蛋白胨0.5%；硫酸镁0.15%；磷酸氢二钾0.3%；葡萄糖2%；维生素b10.002%，水余量。按上述比例将各成分混合，调节ph至5.0，116℃灭菌20min。
发酵培养基（wt%）：蛋白胨0.2%；硫酸铵0.3%；硫酸镁0.15%；磷酸氢二钾0.3%；葡萄糖3%；维生素b10.002%，水余量。按上述比例将各成分混合，调节ph至6.0，116℃灭菌20min。
（2）发酵
将银耳菌种的孢子接入300ml种子培养基中，25℃，200rpm培养3d，得种子液。将种子液按8%（体积百分数，下同）接种至5l发酵罐中，发酵罐装液量为3.5l。发酵罐转速为600rpm，通气量1vvm，温度25℃。发酵过程中用10mol/l氢氧化钠控制发酵时ph至2-4，至发酵液中无剩余葡萄糖时结束发酵，得发酵液。
（3）后处理
将上一步骤所得发酵液高温灭菌以灭活其中的活菌，将灭菌后的发酵液离心，收集菌体，将菌体冷冻干燥，粉碎过40目筛网，得冻干粉，即为银耳孢子发酵产品，又可以叫做银耳孢糖。经细胞计数检测，所得银耳孢子发酵产品中银耳孢子的含量为1.32×1010个/g。
实施例2.原料安全性评价
为了验证实施例1制备的银耳孢子发酵产品作为化妆品原料的安全性，招募30名志愿者进行皮肤斑贴试验。实验者年龄22-35岁，男性10名，女性20名。将银耳孢子发酵产品配制成10wt%的水溶液，定量涂抹于斑贴实验测试器上，贴于上臂内侧，观察24h后皮肤有无炎症反应。
结果显示，30名志愿者中有2人出现轻微红肿和瘙痒感觉，其余人员呈阴性反应，说明该原料具有较好的安全性，可添加至化妆品中使用。
实施例3.原料阻挡隔离紫外线功效验证
（1）实验样品
5%银耳孢糖溶液：称取5g实施例1制备的银耳孢子发酵产品粉末，溶于100ml水中，搅拌均匀。
5%钛白粉溶液：称取5g钛白粉粉末，溶于100ml碳酸二辛酯溶液中，搅拌均匀。
5%氧化锌溶液：称取5g氧化锌粉末，溶于100ml碳酸二辛酯溶液中，搅拌均匀。
4%4-甲基苄亚基樟脑溶液：称取4g4-甲基苄亚基樟脑（购自上海秋彦商贸有限公司），溶于100ml碳酸二辛酯溶液中，搅拌均匀。
4%丁基甲氧基二苯甲酰基甲烷溶液：称取4g丁基甲氧基二苯甲酰基甲烷（购自上海秋彦商贸有限公司），溶于100ml碳酸二辛酯溶液中，搅拌均匀。
（2）实验方法
将实验样品涂抹于厚度为0.5mm的圆形石英片上，上方覆盖一圆形石英盖片以保证均匀厚度。用uva和uvb混合波段紫外线对石英片进行照射，用紫外线强度检测仪（台湾先驰st-510）检测透过石英片的紫外线强度，以空载石英片透过的紫外线强度为100%计，计算实验样品对紫外线的阻挡率。
紫外线阻挡率（%）=100%-涂抹实验样品的石英片透过的紫外线强度/空载石英片透过的紫外线强度。
（3）实验结果
实验结果如下表1所示：
从上表可以看出，5%的银耳孢糖溶液具有很好的紫外线阻挡效果，紫外线阻挡率在85%以上，与现有的物理和化学防晒剂相比，紫外线阻挡效果相当，防晒效果相当，因此添加到化妆品配方中可起到阻挡紫外线、隔离防晒的效果。
实施例4.银耳孢子菌体与银耳多糖的阻挡紫外线效果对比验证
为了验证银耳孢子发酵产品阻挡紫外线效果的来源，设计以下实验：
按照实施例1（1）-（2）的步骤制备银耳孢糖发酵液1l，发酵液中同时含有银耳多糖和银耳孢子菌体。将发酵液在5000rpm离心20min，收集全部菌体，加入2l水，40℃搅拌2h后再次采用上述方法离心，离心后收集菌体并保留上清液。上述洗涤过程重复两次，以除去菌体表面残留的银耳多糖。将洗涤后所得菌体冷冻干燥并粉碎后，得到银耳孢子粉末。
将所有上清液合并，通过旋转蒸发仪浓缩至原体积的1/5，加入浓缩上清液质量2%的nacl搅拌均匀，然后用3体积倍酒精沉淀析出多糖，收集沉淀、干燥并粉碎，得银耳多糖粉末。
分别按照1%、2%、3%、4%和5%的质量浓度将上述银耳孢子粉末和银耳多糖粉末溶解于水中并充分溶解，得到不同浓度的溶液。按照实施例3中的方法检测各溶液的紫外阻挡率，结果如下表2所示：
从上表结果可以看出，在上述1-5%的浓度下，银耳孢子的紫外阻挡率远高于银耳多糖；且银耳孢子的紫外阻挡率随其浓度的增加而显著提高，而银耳多糖的紫外阻挡率并不随浓度的变化而变化。因此，银耳孢子发酵产品中起到阻挡紫外线、隔离防晒效果的成分主要为银耳孢子，而非银耳多糖。银耳多糖仅起到保湿、润滑和成膜的辅助作用，在银耳孢子发酵产品中，银耳孢子和银耳多糖二者共同作用，具有保湿和隔离双重功效，与现有物理和化学防晒剂相比更加适用于隔离防晒产品。银耳孢子的这一作用是现有技术没有公开报道的，本发明属于首次发现。
实施例5.含有银耳孢糖（即银耳孢子发酵产品）的防晒霜
该银耳孢糖防晒霜的配方如下（wt%）：
c12-15醇苯甲酸酯3%；辛酸甘油三酯3%；硬脂酸酯2.5%；碳酸二辛酯2%；生育酚乙酸酯0.5%；实施例1的银耳孢糖粉末5%；甘油6%；透明质酸钠0.1%；水解透明质酸0.1%；尿囊素0.2%；黄原胶0.25%；edta二钠0.05%；香精0.3%；苯氧乙醇0.4%；去离子水补至100%。
制备方法如下：
1、将c12-15醇苯甲酸酯、辛酸甘油三酯、硬脂酸酯、碳酸二辛酯和生育酚乙酸酯混合，搅拌加热至85℃，并保温20min，过滤后得到a相中间产物。
2、将银耳孢糖粉末、甘油、透明质酸钠、水解透明质酸、尿囊素、黄原胶、edta二钠和苯氧乙醇混合，70℃下均质溶解，过滤得到b相中间产物。
3、在搅拌状态下，将b相中间产物缓慢加入至a相中间产物中，90℃、1200rpm条件下进行均质，均质时间为10min，真空除去气泡，降温至50℃后，加入香精，800rpm均质10min，真空去除气泡，冷却至室温，即得银耳孢糖防晒霜成品。
实施例6.银耳孢糖防晒霜spf指数测试
将实施例5中所得的银耳孢糖防晒霜进行spf指数测试，确定其对uvb波段紫外线的防晒效果。招募10名志愿者，用最小红斑量方法确定涂抹防晒霜和未涂抹防晒霜的皮肤产生红斑的时间之比。志愿者年龄20-35岁，男性10名，女性20名。预测志愿者最小红斑量采用预先曝光法。
实验结果如下表3所示：
将上表10名志愿者的数据进行统计学计算，得到该银耳孢糖防晒霜的spf指数为19.1±1.2，市售防晒类产品的spf指数在15-50之间，说明该防晒霜具有良好的防晒效果，可以添加到护肤品中使用。
1.一种银耳孢子或银耳孢子发酵产品作为化妆品用隔离紫外线成分的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征是：所述银耳孢子发酵产品中包括银耳孢子和银耳多糖；优选的，所述银耳孢子发酵产品为银耳孢子经发酵而得的产品，更优选的，所述银耳孢子发酵产品为银耳孢子经液体深层发酵而得的产品。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征是：所述银耳孢子发酵产品是将银耳孢子经发酵而得的发酵液进行后处理得到的产品，所述后处理包括将发酵液进行高温灭菌、离心得到菌体、将菌体进行冷冻干燥得到冻干粉的步骤；优选的，所述发酵为液体深层发酵。
4.根据权利要求2或3所述的应用，其特征是：所述液体深层发酵包括种子培养和发酵培养的步骤。
5.根据权利要求1所述的应用，其特征是：所述银耳孢子发酵产品由以下方法制备而得：
（1）将银耳孢子接种至种子培养基中，在24～30℃、150-250转/分钟的条件下培养2-5天，得种子液；所述种子培养基由下述重量百分含量的组分组成：蛋白胨0.3%-0.7%、硫酸镁0.1%-0.3%、磷酸氢二钾0.2%-0.5%、葡萄糖1%-3%、维生素b10.001%-0.003%、水余量；
（2）将种子液按照5-10%的接种量接种到发酵培养基中，在温度25-30℃、搅拌速度600-800转/分钟、通气量0.5-2vvm的条件下发酵1-3天，得发酵液，发酵过程中维持ph为2-4；所述发酵培养基由下述重量百分含量的组分组成：蛋白胨0.1%-0.3%、硫酸铵0.1%-0.3%、硫酸镁0.1%-0.3%、磷酸氢二钾0.1%-0.3%、葡萄糖1%-4%、维生素b10.001%-0.003%、水余量；
（3）将发酵液高温灭菌，灭菌后的发酵液离心、收集菌体，将收集的菌体冷冻干燥，得银耳孢子发酵产品。
6.根据权利要求1所述的应用，其特征是：每100g化妆品中含有1×1010-1×1011个银耳孢子。
7.一种化妆品，其特征是：包括银耳孢子或银耳孢子发酵产品；优选的，所述银耳孢子发酵产品中包括银耳孢子和银耳多糖。
8.根据权利要求7所述的化妆品，其特征是：所述银耳孢子发酵产品为银耳孢子经发酵而得的产品；
优选的，所述银耳孢子发酵产品为银耳孢子经液体深层发酵而得的产品；
优选的，所述银耳孢子发酵产品是将银耳孢子经发酵而得的发酵液进行后处理得到的产品，所述后处理包括将发酵液进行高温灭菌、离心得到菌体、将菌体进行冷冻干燥得到冻干粉的步骤；
优选的，所述银耳孢子发酵产品是将银耳孢子经液体深层发酵而得的发酵液进行后处理得到的产品，所述后处理包括将发酵液进行高温灭菌、离心得到菌体、将菌体进行冷冻干燥得到冻干粉的步骤。
9.根据权利要求7所述的化妆品，其特征是：所述银耳孢子发酵产品由以下方法制备而得：
（1）将银耳孢子接种至种子培养基中，在24～30℃、150-250转/分钟的条件下培养2-5天，得种子液；所述种子培养基由下述重量百分含量的组分组成：蛋白胨0.3%-0.7%、硫酸镁0.1%-0.3%、磷酸氢二钾0.2%-0.5%、葡萄糖1%-3%、维生素b10.001%-0.003%、水余量；
（2）将种子液按照5-10%的接种量接种到发酵培养基中，在温度25-30℃、搅拌速度600-800转/分钟、通气量0.5-2vvm的条件下发酵1-3天，得发酵液，发酵过程中维持ph为2-4；所述发酵培养基由下述重量百分含量的组分组成：蛋白胨0.1%-0.3%、硫酸铵0.1%-0.3%、硫酸镁0.1%-0.3%、磷酸氢二钾0.1%-0.3%、葡萄糖1%-4%、维生素b10.001%-0.003%、水余量；
（3）将发酵液高温灭菌，灭菌后的发酵液离心、收集菌体，将收集的菌体冷冻干燥，得银耳孢子发酵产品。
10.根据权利要求3所述的化妆品，其特征是：所述化妆品为具有隔离紫外线作用的化妆品；
优选的，每100g化妆品中含有1×1010-1×1011个银耳孢子；
优选的，所述化妆品为化妆水、乳液、面霜、隔离霜或防晒霜。
技术总结