本发明属于生物医药技术领域。更具体地，涉及抗坏血酸棕榈酸酯在抗冠状病毒中的应用，尤其是抗新型冠状病毒(sars-cov-2)的应用。
背景技术：
冠状病毒是一类具有包膜的单正链rna病毒，能够在人和其他哺乳动物以及鸟类中广泛存在，并导致呼吸、消化、肝脏和神经系统等类型的疾病。目前已报道的有6种冠状病毒可以引发人类疾病，其中，四种229e、oc43、nl63和hku1基本上只会导致免疫缺陷的人引起普通感冒症状，而另外两种就是我们熟知的sars‑cov和mers‑cov，会引发严重的传染性疾病。临床表现与病毒性肺炎极为相似，科学家们利用9例下呼吸道样本的深度测序分析表明，存在一种新型冠状病毒，who暂命名为2019新型冠状病毒(2019‑ncov)，随后国际病毒分类委员会将其命名为sars‑cov‑2。同时，世界卫生组织将新型冠状病毒感染的肺炎命名为“covid‑19”。
新型冠状病毒(sars-cov-2)是从动物传染给人的人兽共患病毒，然后该病毒的起源尚不完全清楚。就目前的报告病例统计发现，该病毒在中国的感染病死率约为2.1％。然而，新型冠状病毒的传染性极强，远远超过sars-cov和mers-cov。
新型冠状病毒肺炎的病毒来源、发病机制等尚不明确，目前认为该病毒很可能起源于蝙蝠，中间宿主暂时缺乏认知，确认出现大规模人传人征象。然而，面对当前新型冠状病毒在中国乃至世界蔓延的势头，人类却缺乏有效的抗病毒疫苗和特效药物。因此，研究抗新型冠状病毒的临床药物刻不容缓。
技术实现要素：
本发明要解决的技术问题是克服现有抗冠状病毒药物，尤其是抗新型冠状病毒sars-cov-2药物的不足，旨在针对当前疫情的急迫性探究抗sars-cov-2等冠状病毒的药物。
本发明的目的是提供抗坏血酸棕榈酸酯在制备抗冠状病毒的药物中的应用。
本发明另一目的是提供抗坏血酸棕榈酸酯在制备抗新型冠状病毒sars-cov-2的药物中的应用。
本发明再一目的是提供一种抗冠状病毒药物。
本发明上述目的通过以下技术方案实现：
本发明首先利用phiv-luc、pspax2和sars-cov-2-s质粒转染至293t细胞，包装出可以表达新型冠状病毒(sars-cov-2)包膜刺突蛋白的假病毒，再用这些假病毒来感染293t细胞，从而模拟新型冠状病毒(sars-cov-2)感染宿主细胞的一种状态。然后运用此种假病毒包装的细胞模型，经过大量的探究、筛选、研究，找到了抗坏血酸棕榈酸酯，其可以有效的抑制新型冠状病毒(sars-cov-2)感染293t细胞。并进一步地抗坏血酸棕榈酸酯抗病毒的特异性进行了探索，实验结果表明，抗坏血酸棕榈酸酯对冠状病毒显示出了特异性的抗病毒作用。
本发明针对新型冠状病毒sars-cov-2明确了一种老药的新用途，即坏血酸棕榈酸酯的抗冠状病毒，尤其是抗新型冠状病毒sars-cov-2的新用途。我们实验研究显示，坏血酸棕榈酸酯对包括sars-cov-2、sars-cov、mers-cov在内的冠状病毒具有确切显著的抗病毒作用。
而且所述抗坏血酸棕榈酸酯是现有的常见药物，抗坏血酸棕榈酸酯为棕榈酸与l-抗坏血酸等天然成分酯化而成，被世界卫生组织(who)食品添加剂委员会评定为具有营养性、无毒、高效、使用安全的食品添加剂，是我国唯一可用于婴幼儿食品的抗氧化剂，因此其应用成熟、安全，可以快速应用于临床。
抗坏血酸棕榈酸酯的分子式为c22h38o7，其结构式如式(i)所示：
因此，本发明提供以下应用，
抗坏血酸棕榈酸酯在制备抗冠状病毒的药物中的应用。
所述冠状病毒包括sars-cov-2、sars-cov或mers-cov。
抗坏血酸棕榈酸酯在制备抗新型冠状病毒sars-cov-2的药物中的应用。
抗坏血酸棕榈酸酯在制备抗重症急性呼吸综合征冠状病毒sars-cov的药物中的应用。
抗坏血酸棕榈酸酯在制备抗中东呼吸综合征冠状病毒mers-cov的药物中的应用。
另外进一步地，所述抗坏血酸棕榈酸酯的抗病毒是指其抑制病毒进入宿主细胞。
更进一步地，所述抗坏血酸棕榈酸酯的抗病毒是指其抑制病毒包膜刺突蛋白spike(s)的功能。
基于此，本发明还提供含有抗坏血酸棕榈酸酯的抗冠状病毒药物。所述冠状病毒包括sars-cov-2、sars-cov或mers-cov。
本发明具有以下有益效果：
本发明公开了抗坏血酸棕榈酸酯在制备抗冠状病毒药物中的应用。本发明研究显示，抗坏血酸棕榈酸酯对冠状病毒的包膜刺突蛋白有抑制作用，其对包括sars-cov-2、sars-cov、mers-cov在内的冠状病毒，尤其是对新型冠状病毒sars-cov-2，具有明确显著的抗病毒作用，为冠状病毒的防控，提供了一种新型药物选择。
而且该方案为老药新用，所述抗坏血酸棕榈酸酯是现有被广泛认可的营养性、无毒、高效、使用安全的食品添加剂和常见药物，其对人体的安全性早已经过了临床实践的检验，本发明目前确定了抗坏血酸棕榈酸酯抗新型冠状病毒(sars-cov-2)的明显药效，即可在国家药监局紧急备案和批准后，直接用于临床治疗的第一线，避免了新药研发的漫长周期，这为我们进一步的研发抗新型冠状病毒(sars-cov-2)提供的强有力的理论基础和实践基础，对冠状病毒的防控，尤其是当前新型冠状病毒covid-19肺炎疫情的治疗与防控，具有重大的应用应用和和推广意义。
附图说明
图1为实施例1中不同浓度的抗坏血酸棕榈酸酯对新型冠状病毒(sars-cov-2)包膜刺突蛋白s的抑制效果。
图2为实施例2中不同浓度的抗坏血酸棕榈酸酯对重症急性呼吸综合征冠状病毒(sars-cov)包膜刺突蛋白s的抑制效果。
图3为实施例3中不同浓度的抗坏血酸棕榈酸酯对中东呼吸综合征冠状病毒(mers-cov)包膜刺突蛋白s的抑制效果。
图4为对比例1中不同浓度的抗坏血酸棕榈酸酯对水疱性口炎病毒包膜vsv-g的抑制效果。
具体实施方式
以下结合说明书附图和具体实施例来进一步说明本发明，但实施例并不对本发明做任何形式的限定。除非特别说明，本发明采用的试剂、方法和设备为本技术领域常规试剂、方法和设备。
除非特别说明，以下实施例所用试剂和材料均为市购。
实施例1不同浓度的抗坏血酸棕榈酸酯对新型冠状病毒(sars-cov-2)包膜刺突蛋白s的抑制效果
(1)包病毒：将6.5μgphiv-luciferase(购买于addgene公司，货号：21375)、8μgpspax2(购买于addgene公司，货号：12260)和20μgsars-cov-2-s(序列来源于ncbi网站，由上海捷瑞生物合成)质粒转染至293t细胞(10cmdish)，48小时后，收集病毒上清，即得到sars-cov-2-s假病毒颗粒，测p24。
(2)化合物抗坏血酸棕榈酸酯的作用：将定量后sars-cov-2-s假病毒颗粒加入到细胞中，感染96孔板中的293t细胞，同时加入不同浓度的抗坏血酸棕榈酸酯。
(3)换液：感染12小时后，更换新鲜的dmem培养基。
(4)检测luciferase活性：感染48小时后，每孔用pbs洗一次，然后加入100μl细胞裂解液，震荡30min，取10μl裂解液检测luciferase活性。
结果如图1所示，结果说明，抗坏血酸棕榈酸酯可以特异性的作用于新型冠状病毒(sars-cov-2)包膜刺突蛋白s，抑制sars-cov-2病毒的进入，该抗坏血酸棕榈酸酯具有良好的抗病毒作用，ic50约为259nm。
实施例2不同浓度的抗坏血酸棕榈酸酯对重症急性呼吸综合征冠状病毒(sars-cov)包膜刺突蛋白s的抑制效果
(1)包病毒：将6.5μgphiv-luciferase(购买于addgene公司，货号：21375)、8μgpspax2(购买于addgene公司，货号：12260)和20μgsars-cov--s(序列来源于ncbi网站，由上海捷瑞生物合成)质粒转染至293t细胞(10cmdish)，48小时后，收集病毒上清，即得到sars-cov-s假病毒颗粒，测p24。
(2)化合物抗坏血酸棕榈酸酯的作用：将定量后sars-cov-s假病毒颗粒加入到细胞中，感染96孔板中的293t细胞，同时加入不同浓度的抗坏血酸棕榈酸酯。
(3)换液：感染12小时后，换新鲜的dmem培养基。
(4)检测luciferase活性：感染48小时后，每孔用pbs洗一次，然后加入100ul细胞裂解液，震荡30min，取10ul裂解液检测luciferase活性。
结果如图2所示，结果说明，抗坏血酸棕榈酸酯可以特异性的作用于重症急性呼吸综合征冠状病毒(sars-cov)包膜刺突蛋白s，抑制sars-cov病毒的进入，该抗坏血酸棕榈酸酯具有良好的抗病毒作用。
实施例3不同浓度的抗坏血酸棕榈酸酯对中东呼吸综合征冠状病毒(mers-cov)包膜刺突蛋白s的抑制效果
(1)包病毒：将6.5μgphiv-luciferase(购买于addgene公司，货号：21375)、8μgpspax2(购买于addgene公司，货号：12260)和10μgmers-cov-s(序列来源于ncbi网站，由上海捷瑞生物合成)质粒转染至293t细胞(10cmdish)，48小时后，收集病毒上清，即得到mers-cov-s假病毒颗粒，测p24。
(2)化合物抗坏血酸棕榈酸酯的作用：将定量后mers-cov-s假病毒颗粒加入到细胞中，感染96孔板中的293t细胞，同时加入不同浓度的抗坏血酸棕榈酸酯。
(3)换液：感染12小时后，换新鲜的dmem培养基。
(4)检测luciferase活性：感染48小时后，每孔用pbs洗一次，然后加入100ul细胞裂解液，震荡30min，取10ul裂解液检测luciferase活性。
结果如图2所示，结果说明，抗坏血酸棕榈酸酯可以特异性的作用于中东呼吸综合征冠状病毒(mers-cov)包膜刺突蛋白s，抑制mers-cov病毒的进入，该抗坏血酸棕榈酸酯具有良好的抗病毒作用。
对比例1不同浓度的抗坏血酸棕榈酸酯对水疱性口炎病毒包膜vsv-g的抑制效果
(1)包病毒：将phiv-luc、pspax2和vsv-g质粒转染至293t细胞(10cmdish)，48小时后，收集病毒上清，即得到vsv-g假病毒颗粒，测p24。
(2)化合物抗坏血酸棕榈酸酯的作用：将将定量后vsv-g假病毒颗粒加入到细胞中，感染96孔板中的293t细胞，同时加入不同浓度的抗坏血酸棕榈酸酯。
(3)换液：感染12小时后，换新鲜的dmem培养基。
(4)检测luciferase活性：感染48小时后，每孔用pbs洗一次，然后加入100ul细胞裂解液，震荡30min，取10ul裂解液检测luciferase活性。
结果如图4所示，结果说明，抗坏血酸棕榈酸酯对vsv-g的包膜蛋白没有任何抑制作用。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。
1.抗坏血酸棕榈酸酯在制备抗冠状病毒的药物中的应用。
2.根据权利要求1所述应用，其特征在于，所述冠状病毒为sars-cov-2、sars-cov或mers-cov。
3.抗坏血酸棕榈酸酯在制备抗新型冠状病毒sars-cov-2的药物中的应用。
4.抗坏血酸棕榈酸酯在制备抗重症急性呼吸综合征冠状病毒sars-cov的药物中的应用。
5.抗坏血酸棕榈酸酯在制备抗中东呼吸综合征冠状病毒mers-cov的药物中的应用。
6.根据权利要求1-5任一所述应用，其特征在于，抗坏血酸棕榈酸酯的抗病毒是指其抑制病毒进入宿主细胞。
7.根据权利要求1-5任一所述应用，其特征在于，抗坏血酸棕榈酸酯的抗病毒是指其抑制病毒包膜刺突蛋白spike的功能。
8.一种抗冠状病毒药物，其特征在于，含有抗坏血酸棕榈酸酯。
9.根据权利要求8所述抗冠状病毒药物，其特征在于，所述冠状病毒为sars-cov-2、sars-cov或mers-cov。
10.一种抗新型冠状病毒sars-cov-2药物，其特征在于，含有抗坏血酸棕榈酸酯。
技术总结