本发明涉及药物领域，具体是涉及一种包含雷帕霉素的组合物及其用途。
背景技术：
雷帕霉素是科学家于1975年首次从智利复活节岛的土壤中发现的一种由土壤链霉菌分泌的次生代谢物，该药物以发现岛屿的名称rapanui来命名。研究人员发现该药物对人体有多种作用：1977年发现具有免疫抑制作用，1989年开始把rapa作为治疗器官移植的排斥反应的新药进行试用，从动物实验及临床应用的效果看，是一种疗效好、低毒、无肾毒性的新型免疫抑制剂。现在经常作为维持移植器官免疫能力的药物(特别是肾移植)，以减缓器官移植手术后的免疫排斥反应。
皮肤衰老和真性皱纹是人类衰老不可避免的问题，现有的护肤产品或医疗美容产品无法真正逆转这一问题。drexel大学医学院研究人员christinaleechung等发表在geroscience上的一项研究“topicalrapamycinreducesmarkersofsenescenceandaginginhumanskin:anexploratory,prospective,randomizedtrial”首次在36位参与者中开展临床试验，发现通过外抹含有雷帕霉素的乳霜可以在8个月后减少皮肤皱纹和下垂、改善肤色，并改善胶原蛋白表达、抑制p16蛋白表达。然而，在上述研究中雷帕霉素起效时间太长，8个月后才出现明显效果，不利于临床应用和市场转化。
多糖水凝胶是多糖利用的一个重要方面，水凝胶是一类具有三维交联网络结构，能够吸收并保持大量水分，而又不溶于水的功能高分子材料。多糖水凝胶在化妆品中的应用主要有以下功能：1)提高化妆品的增黏功能；2)长时间有效的给予肌肤水分和油分；3)具有补充皮肤水分，使角质柔软，保持皮肤不干燥的作用。
cn109942905a公开一种复合水凝胶材料及其制备方法，由聚乙烯醇、壳聚糖、透明质酸钠复合而成的海绵状水凝胶材料，以壳聚糖和透明质酸钠为主要原料，通过加入聚乙烯醇，利用冻融循环法制备出了物理交联的聚乙烯醇/壳聚糖/透明质酸钠复合水凝胶。
cn106963982a公开了一种具有抗菌保湿适宜组织粘附的修复材料及其制备方法和应用，所述修复材料的制备方法如下：s1.对透明质酸进行巯基化修饰；s2.对壳聚糖进行马来酰化改性s3.将纳米纺丝纤维经多巴胺溶液浸泡后充分水洗，然后将纳米纺丝纤维依次浸入巯基化透明质酸溶液和马来酰化壳聚糖溶液中吸附，吸附完后洗脱；s4.重复吸附、洗脱步骤若干次后即得巯基化透明质酸和马来酰化壳聚糖交替吸附的修复材料。
cn109602686a公开了一种水凝胶化妆品组合物，包括水凝胶组分和透明质酸溶液，所述水凝胶组分每100份中包括原料的质量份数为壳聚糖：1～3份；保湿剂：1～10份；促透皮吸收剂：0.1～1份；中草药提取物：1～15份；植物油：0.4～1份；植物精油：0.001～0.01份，去离子水添加至100份。
然而，现有的多糖亲水性水凝胶产品的皮肤修复以及抗衰老的功效还不能达到令人满意的作用。
技术实现要素：
本发明的目的是为了克服上述背景技术的不足，提供一种包含雷帕霉素的组合物及其用途，该组合物将雷帕霉素粉末加入凝胶材料中，使其分布均匀，用于皮肤修复和抗衰老，起效快，效果好。
为达到本发明的目的，本发明包含雷帕霉素的组合物包含雷帕霉素和水凝胶材料。
进一步的，所述的水凝胶材料为多糖类亲水凝胶材料。
进一步的，所述的多糖类亲水凝胶材料选自透明质酸或其衍生物、壳聚糖或其衍生物。
本发明所述的透明质酸分子量通常在1kda-10,000kda之间，优选在800kda-3,000kda之间，特别优选在1,000kda-2,800kda之间。
本发明所述的壳聚糖的分子量通常在1kda-300kda之间，优选在10kda-100kda之间，特别优选在40kda-60kda之间。
本发明所述的透明质酸衍生物选自透明质酸盐、透明质酸酯等，优选的，所述的透明质酸衍生物为透明质酸钠盐或透明质酸钾盐。
本发明所述的壳聚糖衍生物选自壳聚糖季铵盐、壳聚糖羧酸盐、壳聚糖醋酸盐或壳聚糖盐酸盐。
进一步的，所述的组合物中雷帕霉素分布在水凝胶材料中，所述水凝胶材料为透明质酸凝胶或/和壳聚糖凝胶。
进一步地，所述雷帕霉素通过超声震荡的方式均匀分布在水凝胶材料中。
进一步地，所述透明质酸凝胶或/和壳聚糖凝胶的制备方法为本领域常规方法，例如壳聚糖凝胶的制备方法可以是利用非离子型亲水性聚合物(聚乙烯醇等)与壳聚糖共混，用戊二醛或甲醛等做交联剂来形成壳聚糖基互穿网络水凝胶。
进一步地，所述雷帕霉素在组合物中的浓度为7-13μm。
优选地，所述雷帕霉素在组合物中的浓度为9-11μm。
更优选的，所述雷帕霉素在组合物中的浓度为7、8、9、10、11、12、13μm。
进一步地，所述包含雷帕霉素的组合物还包含药学上可接受的赋形剂，例如稳定剂、抗氧剂、助溶剂、增溶剂、着色剂等。
稳定剂例如是变性淀粉、卡拉胶、果胶、魔芋胶、黄原胶、羧甲基纤维素钠、海藻酸钠、酪朊酸钠、微晶纤维素。
增溶剂例如是聚氧化乙烯单油酸山梨醇酐酯、吐温-80、维生素e琥珀酸聚乙二醇酯、甘油-聚乙二醇氧基硬脂酸酯、peg-32硬脂酸棕榈酸甘油酯、十二烷基硫酸钠、单月桂酸山梨醇酐酯、聚乙二醇、聚乙二醇、聚乙二醇-12-羟基硬脂酸酯、聚乙烯吡咯烷酮等。
助溶剂例如是乙醇、丙二醇、聚山梨酯、聚氧化乙烯/聚氧化丙烯表面活性剂、维生素e琥珀酸聚乙二醇酯、环糊精等。
抗氧化剂例如是生育酚、生育酚乙酸、苯甲酸钠、苯甲酸钙、苯甲酸钾、山梨酸钠、山梨酸钙、山梨酸钾、抗坏血酸等。
着色剂例如是亮蓝、日落黄、叶绿素、叶绿素铜钠盐、诱惑红、氧化铁、苋菜红或胭脂红。
本领域技术人员应该理解，除透明质酸凝胶或/和壳聚糖凝胶之外的其他多糖类亲水性凝胶材料也适用于本发明。
另一方面，本发明还提供了一种上述包含雷帕霉素的组合物的用途，即将所述组合物用于皮肤损伤修复或者抗皮肤衰老，例如是用于衰老皮肤上修复皮肤或者抗衰老。
另一方面，本发明还提供了一种上述包含雷帕霉素的组合物的用途，所述的用途为用于制备皮肤损伤修复或者抗皮肤衰老的化妆品或药品。
进一步的，所述的化妆品可为凝露、膏霜、啫喱、眼霜、面膜等形式。
进一步的，所述的药品可为擦剂、膏剂、贴剂等形式。
与现有技术相比，本发明将透明质酸或壳聚糖等水凝胶成分与雷帕霉素形成组合物，应用于老化皮肤的损伤修复，不仅能快速发挥雷帕霉素的作用，还能使其与水凝胶成分发挥协同增效，从而缩短起效时间(每日涂抹一次，持续4周即可)，提高皮肤修复和抗衰的效果。
附图说明
图1是第12周时裸鼠背部同一区域皮肤观察结果，其中nc为正常组；model为模型组；
图2是裸鼠皮肤he染色组织病理观察及真皮厚度测量结果，其中柱状图纵坐标为真皮层厚度(dermalthickness)；
图3是裸鼠皮肤massion染色组织病理观察及胶原比例测量结果，其中柱状图纵坐标为胶原含量(collegenratio)；
图4是裸鼠皮肤组织realtimepcr检测p16表达情况。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本发明进行进一步详细说明。本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。应当理解，以下描述仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
实施例1
分别制备透明质酸凝胶、壳聚糖凝胶，将雷帕霉素通过超声震荡的方式均匀分布在透明质酸凝胶、壳聚糖凝胶中，雷帕霉素的浓度为10μm，获得雷帕霉素-透明质酸组合物(记作lt)与雷帕霉素-壳聚糖组合物(记作lk)。
实施例2
造模与干预：取40只6周龄大的spf级雄性裸鼠，随机分成5组：正常组(nc)、模型组(model)、lt组、lk组、ly(不含凝胶的雷帕霉素生理盐水液体，雷帕霉素的浓度为10μm)组，每组10只。正常组外，其余各组动物每天背部皮下注射d-gal(1000mg/kg，皮下注射)8周，背部左右可进行对比。允许所有动物自由获取水和食物，并且每天观察背部注射部位皮肤的变化。拍照记录。在第8周开始每天在lt组、lk组、ly组分别涂抹一次雷帕霉素-透明质酸、雷帕霉素-壳聚糖和雷帕霉素液体，共4周，对照组涂抹生理盐水。第12周时处死小鼠，取背部同一区域小块皮肤进行组织学检查，进行he和masson染色，用imagej软件测量长度和区域面积。
realtimepcr检测：用trizol法提取皮肤组织总rna。用takara逆转录试剂盒将总rna逆转录成cdna。sybr反应体系：sybrgreen10μl，rnase-freewater8μl，cdna1μl,上游引物和下游引物各0.5μl进行上机。反应条件：95℃下持续6min，95℃下5s，60℃下30s，共有35个循环，每个样本设置3个复孔，以actin作为内参，检测各组p16表达水平，用2-δδct法计算mrna相对表达量。
第12周时裸鼠背部同一区域皮肤观察结果如图1所示，造模后模型组呈现明显的皮肤皱纹，而经过含雷帕霉素的各组干预后，皱纹有不同程度缓解。其中lt组和lk组裸鼠皱纹明显比ly组更少、更浅，且与正常组几乎相同，说明lt组和lk组比ly组缓解皱纹的效果更好。
组织病理观察如图2、3所示，正常组表皮层、真皮层完整，染色正常；模型组真皮层明显变薄，且染色较浅，说明真皮组织和胶原含量减少；统计结果表明，lt组、lk组和ly组的真皮层及胶原含量均多于模型组，其中lt组和lk组真皮层厚度(dermalthickness)和胶原含量(collegenratio)高于ly组。
p16蛋白是皮肤细胞衰老的关键标志，p16含量较低的皮肤衰老细胞较少，较高水平的p16可导致老年人常见的皮肤萎缩现象，这与脆弱的皮肤容易撕裂、伤口愈合缓慢、受伤后感染或并发症的风险增加有关。realtimepcr结果表明，模型组皮肤衰老指标p16显著上调，经lt、lk和ly干预后，p16表达显著下调，其中lt组和lk组的作用优于ly组，尤其是lk组，p16蛋白与正常组几乎相同。上述结果说明，4周内lt组、lk组和ly组均有修复皮肤衰老的作用，lt组和lk组的作用明显优于ly组。
本领域的技术人员容易理解，以上所述仅为本发明的实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
1.一种包含雷帕霉素的组合物，其特征在于，所述组合物包含雷帕霉素和水凝胶材料。
2.根据权利要求1所述的包含雷帕霉素的组合物，其特征在于，所述的水凝胶材料为多糖类亲水凝胶材料。
3.根据权利要求2所述的包含雷帕霉素的组合物，其特征在于，所述的多糖类亲水凝胶材料选自透明质酸或其衍生物、壳聚糖或其衍生物。
4.根据权利要求1-3任意一项所述的包含雷帕霉素的组合物，其特征在于，所述雷帕霉素通过超声震荡的方式分布在凝胶材料中。
5.根据权利要求1所述的包含雷帕霉素的组合物，其特征在于，所述雷帕霉素在组合物中的浓度为7-13μm。
6.根据权利要求5所述的包含雷帕霉素的组合物，其特征在于，所述雷帕霉素在组合物中的浓度为9-11μm。
7.根据权利要求1所述的包含雷帕霉素的组合物，其特征在于，所述组合物还包含药学上可接受的赋形剂。
8.根据权利要求7所述的包含雷帕霉素的组合物，其特征在于，所述药学上可接受的赋形剂为稳定剂、抗氧剂、助溶剂、增溶剂、着色剂中的一种或多种。
9.权利要求1-8任一项所述包含雷帕霉素的组合物的用途，其特征在于，所述的用途为皮肤损伤修复或者抗皮肤衰老。
10.权利要求1-8任一项所述包含雷帕霉素的组合物的用途，其特征在于，所述的用途为用于制备皮肤损伤修复或者抗皮肤衰老的化妆品或药品。
技术总结