本发明涉及一种医药技术领域，具体涉及一种埃米银抗病毒溶液及制备方法和应用。
背景技术：
乙型肝炎病毒(hbv)感染，尤其是慢性hbv(chb)感染是全球最重要的公共卫生问题之一。据统计，全球约有20亿人曾在某一时段患hbv感染，chb感染患者约有4亿人。高达40％的chb患者最终将发展成为肝硬化、肝癌等，严重损害患者的身心健康和社会的经济利益。血清乙肝表面抗原(hbsag)水平持续升高是诊断chb感染的关键指标之一，该抗原通过抑制宿主先天免疫应答使病毒持续存在于宿主体内。持续病毒学应答(svr)是chb临床治愈的重要标准之一。临床研究表明，svr与治疗早期血清hbsag下降水平相关。治疗早期，患者血清hbsag水平下降的速度越快、幅度越大，获得svr的概率越高。目前治疗chb感染的主要手段是通过病毒dna聚合酶的核苷/核苷酸抑制剂来降低病毒在体内的复制率，但长期应用可能筛选出耐药性病毒变体，导致耐药。此外，这类抑制剂并不影响病毒合成的hbsag分泌入血，停药后病毒复制的同时宿主的先天免疫应答也将被抑制，导致服药中断后极易复发，需要终生服药。因此，迫切需要找到一种既能杀灭病毒又能抑制hbsag分泌的药物，以克服长期服药带来的不便和病毒耐药带来的风险。
技术实现要素：
为解决上述问题，本发明的目的在于提供一种埃米银抗病毒溶液及其制备方法和应用。
为了实现上述目的，本发明提供了一种埃米银抗病毒溶液，包括埃米银单质、无水蔗糖和蒸馏水，所述埃米银单质的浓度为0.5～1.0g/l；所述蔗糖的浓度为5.0～10.0g/l。
上述的埃米银抗病毒溶液，进一步的，所述埃米银单质中银颗粒的粒径为1～30埃米，银颗粒形状为球形或椭圆形，银颗粒的纯度≥99.99％。
上述的埃米银抗病毒溶液，进一步的，所述埃米银单质浓度为0.5g/l，所述的蔗糖浓度为5.0g/l，所述的双蒸水浓度为994.5g/l。
基于一个总的技术构思，本发明提供了一种所述的埃米银抗病毒溶液的制备方法，包括以下步骤：
s1、将埃米级单质银粉末添加到无菌蒸馏水中，得到埃米银溶液；
s2、对所述埃米银溶液进行第一次超声分散处理得到埃米银水溶液；
s3、加入无水蔗糖，进行第二次超声分散处理得到蔗糖包裹的埃米银分散液；
s4、加热灭菌得到埃米银抗病毒溶液。
上述的制备方法，进一步的，所述第一次超声分散处理过程中，超声波功率为5～15kw，频率为30～60khz，分散时间为50～70s。
上述的制备方法，进一步的，所述第二次超声分散处理过程中，超声波功率为10～20kw，频率为110～150khz，分散时间为10～20s。
上述的制备方法，进一步的，所述s4中所述加热灭菌的温度为100～130℃，时间为15～60min。
基于一个总的技术构思，本发明还提供了一种埃米银抗病毒溶液在制备治疗抗病毒药物中的应用。
上述的应用，进一步的，所述治疗抗病毒药物为抗hbv病毒药物。
上述的应用，进一步的，所述抗病毒药物为抗病毒注射液。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
(1)本发明提供了一种埃米银抗病毒溶液，由埃米银、蔗糖和蒸馏水组成，在确保疗效的前提下，尽可能的减少埃米银抗病毒溶液组合物的成份品种，即提高了用药安全性，又保留了强效的抗病毒能力，同时蔗糖的加入使银颗粒能够均匀单质的分布在溶液中，克服了单纯银微粒团聚的缺点。本申请采用了埃米级别的银颗粒，埃米银具有高强度、高效应、高稳定的综合作用，使得在同等浓度下，埃米银的抗病毒效能更强，只需较低浓度即可达到疗效。
(2)本发明提供了一种埃米银抗病毒溶液的制备方法，采取的药品原料和溶剂均无毒无害，制备工艺简单，可全程使用全自动化生产线进行批量生产，而且生产过程中所产生的废液只含有微量银离子，只需去除有机化合物及采取沉淀法回收废银即可，过程简单绿色环保。
(3)本发明提供了一种埃米银抗病毒溶液的制备方法，在埃米银中加入蔗糖，为了使蔗糖分子包裹住埃米银粉末，使埃米银能够在该溶液中具有良好的悬浮稳定性。在本发明制备方法的控制下，溶液中的埃米银颗粒能够均匀且单个颗粒的被蔗糖所包裹。
(4)本发明提供了一种埃米银抗病毒溶液在抗hbv病毒中的应用，埃米银既能杀灭病毒又能抑制hbsag分泌的药物，其抗病毒机制如下：1、对病毒进行机械性吸附和固定后，使病毒失去生存条件而死亡；2、抑制病毒与细胞受体的结合，阻止病毒进入并感染宿主细胞；3、与病毒核酸结合，使病毒dna或rna结构改变，抑制病毒复制；4、埃米银释放出来银离子对病毒有直接杀灭作用。同时，埃米银副作用小，可以克服长期服药带来的不便和病毒耐药带来的风险。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为本发明实施例3中埃米银抗病毒溶液对乙肝表面抗原的抑制率的柱状图。
图2为本发明实施例3中埃米银抗病毒溶液埃米银对hepg2.2.15细胞的抑制率的柱状图。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。在不背离本发明精神和实质的情况下，对本发明方法、步骤或条件所作的修改或替换，均属于本发明的范围。
若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段；若未特别指明，实施例中所用试剂均为市售。
本发明涉及到的百分号“％”，若未特别说明，是指质量百分比；但溶液的百分比，除另有规定外，是指100ml溶液中含有溶质的克数。
本发明所述重量份可以是μg、mg、g、kg等本领域公知的重量单位，也可以是其倍数，如1/10、1/100、10倍、100倍等。
无水蔗糖为药用无水蔗糖，埃米银材料是将单质金属银和其他含银化合物利用物理或化学的方法制成埃米级别的金属粉末，粒径大多为100埃米以下，故称为埃米银。获取流程大致如下：本发明的埃米银，其制备方法包括以下步骤：
(1)在爆炸室中充入惰性气体氩气使爆炸室中气压保持在1×106pa，并使其中的工作温度稳定在8～12℃。
(2)将直径为0.5mm长度为8～12cm的银线持续推入爆炸室中，当银线与正极电板接触时产生的25kv高压，使银线发生爆炸，将银线瞬间蒸发成银蒸气等离子体。
(3)将伴有氩气的银蒸汽抽吸至温度设定为0～4℃的急冷室，银蒸汽遇冷迅速凝固并形成银颗粒。
(4)将银颗粒通过高强度超声波(超声波功率为15kw，频率为15khz，)将获得的银颗粒进行分散，将分散后的银颗粒抽吸至去磁装置(相关参数设置为36v，23hz和1000ma)中消磁。
(5)通过粒子收集系统将消磁后银颗粒收集起来，根据不同粒径的粒子有不同的沉降速度，我们根据不同的沉降速度取粒径为0～30埃米，收集至保存罐，在保存罐中加入惰性气体进行钝化获得成品。
采用上述方法制备得到的埃米级单质银粉末中银颗粒的纯度≥99.99％，银颗粒粒径为0～30埃米，银颗粒形状为球形或椭圆形，椭圆形的粒径指其长直径。
实施例1：
一种本发明的埃米银抗病毒溶液，包括：0.5g/l埃米级单质银粉末、5g/l药用无水蔗糖、994.5g/l高纯度蒸馏水。其制备方法包括以下步骤：
(1)将粒径为1～30ang埃米级单质银粉末添加到高纯度蒸馏水中，得到浓度为0.5g/l的埃米银溶液。
(2)将步骤(1)获得的埃米银溶液使用超声波震荡仪进行超声波分散，超声波功率为5kw，频率为60khz，分散时间为60s得到埃米银分散液。
(3)在埃米银分散液中添加蔗糖，使得蔗糖浓度为5g/l，使用超声波震荡仪进行超声波分散，超声波功率为15kw，频率为150khz，时间为20s；得到蔗糖包裹的埃米银分散液。
(4)将步骤(3)获得的蔗糖包裹的埃米银分散液在120℃在加热灭菌60min，自然冷却得到埃米银抗病毒溶液。
实施例2：
一种实施例1的埃米银抗病毒溶液在抗hbv病毒中的应用，其应用方法为：
(1)分组：
对照组：5g/l蔗糖水溶液；
治疗组一：1ng/μl实施例1的埃米银抗病毒溶液；
治疗组二：3ng/μl实施例1的埃米银抗病毒溶液；
治疗组二：9ng/μl实施例1的埃米银抗病毒溶液。
(2)将hepg2.2.15复苏，待细胞生长至80％细胞聚合度时，更换含有1ng/μl、3ng/μl和9ng/μl的埃米银抗病毒溶液的培养基，持续培养8h、16h、24h、32h后，收集细胞上清，用elisa试剂盒检测收集样品中的hbsag含量；用cck--8试剂盒检测细胞的存活率。另一方面我们通过cck--8检测并对比了对照组和经不同浓度埃米银抗病毒溶液处理的hepg2.2.15细胞的存活率。
(3)结果：
根据申请人的研究结果显示，埃米银抗病毒溶液对肿瘤细胞hepg2有一定的抑制作用，ic50约为15ng/μl。而hepg2.2.15细胞是基于hepg2细胞改造的，所以埃米银抗病毒溶液对hepg2.2.15细胞也可能有抑制作用。因此采用hepg2.2.15乙肝病毒模型来验证埃米银抗hbv的作用时，应考虑埃米银诱导hepg2.2.15细胞凋亡导致的hbsag含量降低。一方面我们通过elisa检测并对比了对照组和经不同浓度埃米银抗病毒溶液处理的hepg2.2.15细胞上清中hbsag含量。
图1为本发明实施例3中不同干预不同时间点的hbsag抑制率的柱状图；图2为本发明实施例3中不同干预不同时间点的细胞抑制率的柱状图。
如图1和图2所示，埃米银抗病毒溶液能够显著抑制hepg2.2.15细胞分泌hbsag。埃米银抗病毒溶液对hepg2.2.15细胞有显著抑制作用，当埃米银抗病毒溶液浓度为1ng/μl时，抑制作用不明显；而当埃米银浓度达到3ng/μl时，埃米银抗病毒溶液对hepg2.2.15细胞有显著抑制作用；当埃米银浓度达到9ng/μl时，对hepg2.2.15细胞的抑制率达80％以上。当埃米银抗病毒溶液浓度≥3ng/μl时，对hepg2.2.15细胞有显著的细胞毒性，无法真实反映埃米银抗病毒溶液对hbsag的抑制作用。
表1为用埃米银抗病毒溶液对hepg2.2.15细胞上清中hbsag的抑制率减去其对hbsag细胞活性的抑制率，得到的埃米银抗病毒溶液对hbsag的真实抑制率。
表1：埃米银抗病毒溶液对hbsag抑制率结果表
如表1所示，当埃米银抗病毒溶液浓度为1ng/μl时，扣除其对hepg2.2.15细胞的抑制作用，1ng/μl埃米银抗病毒溶液对hbsag有显著抑制作用。
上述结果中，埃米银抗病毒溶液对hbsag和hepg2.2.15的抑制率是通过同对照组进行比较得出的相对值，本实施例的对照组对hbsag和hepg2.2.15的抑制率皆为0，无任何抑制效果。
显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。
1.一种埃米银抗病毒溶液，其特征在于，包括埃米银单质、无水蔗糖和蒸馏水，所述埃米银单质的浓度为0.5～1.0g/l；所述蔗糖的浓度为5.0～10.0g/l。
2.根据权利要求1所述的埃米银抗病毒溶液，其特征在于，所述埃米银单质中银颗粒的粒径为1～30埃米，银颗粒形状为球形或椭圆形，银颗粒的纯度≥99.99％。
3.根据权利要求1或2所述的埃米银抗病毒溶液，其特征在于，所述埃米银单质浓度为0.5g/l，所述的蔗糖浓度为5.0g/l，所述的双蒸水浓度为994.5g/l。
4.一种权利要求1至3中任一项所述的埃米银抗病毒溶液的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：
s1、将埃米级单质银粉末添加到无菌蒸馏水中，得到埃米银溶液；
s2、对所述埃米银溶液进行第一次超声分散处理得到埃米银水溶液；
s3、加入无水蔗糖，进行第二次超声分散处理得到蔗糖包裹的埃米银分散液；
s4、加热灭菌得到埃米银抗病毒溶液。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述第一次超声分散处理过程中，超声波功率为5～15kw，频率为30～60khz，分散时间为50～70s。
6.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述第二次超声分散处理过程中，超声波功率为10～20kw，，频率为110～150khz，分散时间为10～20s。
7.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述s4中所述加热灭菌的温度为100～130℃，时间为15～60min。
8.一种埃米银抗病毒溶液在制备治疗抗病毒药物中的应用。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述治疗抗病毒药物为抗hbv病毒药物。
10.根据权利要求7或8所述的应用，其特征在于，所述抗病毒药物为抗病毒注射液。
技术总结