本发明属于细胞免疫疗法技术领域，具体的说是涉及一种通过til免疫疗法改善肝癌的方法。
背景技术：
肝癌即肝脏恶性肿瘤，可分为原发性肝癌和继发性肝癌两大类。原发性肝脏恶性肿瘤起源于肝脏的上皮或间叶组织，前者称为原发性肝癌，是我国高发的，危害极大的恶性肿瘤；后者称为肉瘤，与原发性肝癌相比较较为少见。继发性或称转移性肝癌系指全身多个器官起源的恶性肿瘤侵犯至肝脏。一般多见于胃、胆道、胰腺、结直肠、卵巢、子宫、肺、乳腺等器官恶性肿瘤的肝转移。原发性肝癌的病因及确切分子机制尚不完全清楚，目前认为其发病是多因素、多步骤的复杂过程，受环境和饮食双重因素影响。流行病学及实验研究资料表明，乙型肝炎病毒（hbv）和丙型肝炎病毒（hcv）感染、黄曲霉素、饮水污染、酒精、肝硬化、性激素、亚硝胺类物质、微量元素等都与肝癌发病相关。继发性肝癌或转移性肝癌可通过不同途径，如随血液、淋巴液转移或直接浸润肝脏而形成疾病。
原发性肝癌的症状为：早期肝癌常症状无特异性，中晚期肝癌的症状则较多，常见的临床表现有肝区疼痛、腹胀、纳差、乏力、消瘦，进行性肝大或上腹部包块等；部分患者有低热、黄疸、腹泻、上消化道出血；肝癌破裂后出现急腹症表现等。也有症状不明显或仅表现为转移灶的症状。早期肝癌常无明显阳性体征或仅类似肝硬化体征。中晚期肝癌通常出现肝脏肿大、黄疸、腹水等体征。此外，合并肝硬化者常有肝掌、蜘蛛痣、男性乳腺增大、下肢水肿等。发生肝外转移时可出现各转移部位相应的体征。肝癌并发症常见的有上消化道出血、肝癌破裂出血和肝肾衰竭等。继发性肝癌原发肿瘤的临床表现主要见于无肝病病史的患者，肝脏转移尚属早期，未出现相应症状，而原发肿瘤症状明显多属中晚期。此类患者的继发性肝癌多在原发治疗的检查、随访中发现。继发性肝癌的临床表现患者多主诉上腹或肝区闷胀不适或隐痛，随着病情发展，患者出现乏力、食欲差、消瘦或发热等。体检时在中上腹部可摸及肿大的肝脏，或质地坚硬有触痛的硬结节，晚期患者可出现贫血、黄疸和腹水等。此类患者的临床表现类似于原发性肝癌，但一般发展相对缓慢，程度也相对较轻，多在做肝脏各种检查时疑及转移可能，进一步检查或在手术探查时发现原发肿瘤。部分患者经多种检查无法找到原发癌灶。既有原发肿瘤，也有继发性肝癌的临床表现，主要见于原发肿瘤及肝脏转移癌均已非早期，患者除肝脏的类似于原发性肝癌的症状、体征外，同时有原发肿瘤引起的临床表现，如结、直肠癌肝转移时可同时伴有排便习惯、粪便性状的改变以及便血等。
根据肝癌的不同阶段酌情进行个体化综合治疗，是提高疗效的关键；治疗方法包括手术、肝动脉结扎、肝动脉化疗栓塞、射频、冷冻、激光、微波以及化疗和放射治疗等方法。生物治疗和中医中药治疗肝癌也多有应用。1、手术治疗：手术是治疗肝癌的首选，也是最有效的方法。手术方法有根治性肝切除和姑息性肝切除等。对不能切除的肝癌可根据具体情况，采用术中肝动脉结扎、肝动脉化疗栓塞、射频、冷冻、激光、微波等治疗有一定的疗效。原发性肝癌也是行肝移植手术的指征之一。2、化学药物治疗：经剖腹探查发现癌肿不能切除，或作为肿瘤姑息切除的后续治疗者，可采用肝动脉和/或门静脉置泵皮下埋藏灌注装置作区域化疗栓塞；对估计手术不能切除者，也可行放射介入治疗，经股动脉作选择性插管至肝动脉，注入栓塞剂和抗癌药行化疗栓塞，部分患者可因此获得手术切除的机会。3、放射治疗：对一般情况较好，肝功能尚好，不伴有肝硬化，无黄疸、腹水、无脾功能亢进和食管静脉曲张，癌肿较局限，尚无远处转移而又不适于手术切除或手术后复发者，可采用放射为主的综合治疗。4、生物治疗：常用的有免疫核糖核酸、干扰素、白细胞介素-2、胸腺肽等，可与化疗联合应用。5、中医中药治疗：采取辨证施治、攻补兼施的方法，常与其他疗法配合应用，以提高机体抗病力，改善全身状况和症状，减轻化疗、放疗不良反应。
肿瘤免疫治疗，是这几年比较热门，甚至是最热门的癌症治疗手段。说起肿瘤免疫治疗，大家可能立马想到pd-1/pd-l1抗体，k药、o药、国产pd-1抗体，不少晚期癌症患者可以获益。不过，除了pd-1/pd-l1，肿瘤免疫治疗还包括免疫细胞疗法，比如大家熟知的car-t技术，是通过给癌症患者回输特殊的car-t细胞达到控制肿瘤的目的。基于肝癌的难治性，肝癌通常都是控制疾病发展，防止病情进一步恶化，尽量延长患者寿命。除了car-t，免疫细胞疗法还包括tcrt疗法/til细胞疗法，如果能够发明出一种采用免疫细胞疗法中的til细胞技术来改善肝癌患者的生活质量将成为肝癌患者的福音。
技术实现要素：
本发明为了克服现有技术存在的不足，提供一种通过til免疫疗法改善肝癌的方法。
本发明是通过以下技术方案实现的：本发明公开了一种通过til免疫疗法改善肝癌的方法，该方法的具体操作步骤为：对肝癌患者开展了试验，24名晚期肝癌患者接受了til细胞疗法治疗，使用til免疫疗法时，患者在医院里接受手术，将切下来的肿瘤组织立刻运送到gmp实验室，进行后续的处理和培养；20天之后，til细胞培养成熟，再运回医院，回输给病人，在til细胞回输后，接受5～6个疗程的白介素2皮下注射，白介素2的使用剂量为50～60万个单位/kg；6名患者的肿瘤明显缩小，15名患者病情稳定，另外有3名患者病情进展。
本发明一种通过til免疫疗法改善肝癌的方法的具体操作流程为：（1）从患者体内切除肿瘤；（2）肿瘤组织在无菌、冷链条件下运输至gmp实验室，并分离获得起始肿瘤浸润淋巴细胞；（3）起始肿瘤浸润淋巴细胞在适宜条件下培养、扩增一万倍并进一步纯化，达到108个初代种子细胞，然后进行冻存；（4）肿瘤浸润淋巴细胞复苏、扩增至5×107个，以慢病毒载体rnai技术敲低pd-1；（5）肿瘤浸润淋巴细胞进一步扩增至一千至一万倍；（6）最后肿瘤浸润淋巴细胞回输至患者，平均每次注射肿瘤浸润淋巴细胞的细胞量为9.8×1011个。
til（tumor-infiltratinglymphocytes）即肿瘤浸润淋巴细胞，是一种浸润在肿瘤组织里面，能够有效识别肿瘤细胞新抗原的t细胞。这种能够识别肿瘤细胞新抗原的t细胞，具有能够高效杀死肿瘤细胞的能力，包括杀死由该病灶转移到的其他部位的肿瘤传代细胞。
本发明的有益效果是：在2019年5月asco公布数据：til免疫细胞治疗实体肿瘤客观缓解率达44％，疾病控制率达89％。本发明til免疫疗法相比较其他治疗方法的优势：1、手术切除法：优势：是能够直接切除病灶；劣势：有出血或感染风险，愈合时间较长，肿瘤若扩散或转移，则不可手术，伤及患者元气。2、放射疗法：优势：精准、高效和副作用小等；劣势：只针对特定部位，有些部位无法使用，对正常组织细胞有伤害，副作用低。3、化学疗法：优势：肿瘤扩散或转移时可有效杀减肿瘤细胞；劣势：副作用较大，免疫系统损失严重，增加感染风险，容易产生耐药性。4、靶向药物疗法：优势：精准，高效；劣势：只针对单一的抗原靶点，容易产生耐药性和副作用。本发明公开的til免疫疗法具有高效的杀伤能力，能够识别多个抗原靶点，使用自身免疫细胞，无副作用，而且til免疫疗法能够针对复发或转移的晚期肝癌患者使用。
具体实施方式
以下结合具体实施方式对本发明作详细描述。
本发明公开了一种通过til免疫疗法改善肝癌的方法，该方法的具体操作步骤为：对肝癌患者开展了试验，24名晚期肝癌患者接受了til细胞疗法治疗，使用til免疫疗法时，患者在医院里接受手术，将切下来的肿瘤组织立刻运送到gmp实验室，进行后续的处理和培养；20天之后，til细胞培养成熟，再运回医院，回输给病人，在til细胞回输后，接受5～6个疗程的白介素2皮下注射，白介素2的使用剂量为50～60万个单位/kg；6名患者的肿瘤明显缩小，15名患者病情稳定，另外有3名患者病情进展
本发明通过til免疫疗法改善肝癌的方法的具体操作流程为：（1）从患者体内切除肿瘤；（2）肿瘤组织在无菌、冷链条件下运输至gmp实验室，并分离获得起始肿瘤浸润淋巴细胞；（3）起始肿瘤浸润淋巴细胞在适宜条件下培养、扩增一万倍并进一步纯化，达到108个初代种子细胞，然后进行冻存；（4）肿瘤浸润淋巴细胞复苏、扩增至5×107个，以慢病毒载体rnai技术敲低pd-1；（5）肿瘤浸润淋巴细胞进一步扩增至一千至一万倍；（6）最后肿瘤浸润淋巴细胞回输至患者，平均每次注射肿瘤浸润淋巴细胞的细胞量为9.8×1011个。
经试验应用til细胞技术改善肝癌患者的临床ii期研究数据表明：66例iiic/iv期肝癌患者，之前平均接受了3.3种治疗方案，pd-1阴性tsp<5％患者中有反应；平均注射til细胞量：9.8×1011个；中位随访时间12个月，尚未达到中位dor。
最后应当说明的是，以上内容仅用以说明本发明的技术方案，而非对本发明保护范围的限制，本领域的普通技术人员对本发明的技术方案进行的简单修改或者等同替换，均不脱离本发明技术方案的实质和范围。
1.一种通过til免疫疗法改善肝癌的方法，其特征在于：所述一种通过til免疫疗法改善肝癌的方法的具体操作步骤为：对肝癌患者开展了试验，24名晚期肝癌患者接受了til细胞疗法治疗，使用til免疫疗法时，患者在医院里接受手术，将切下来的肿瘤组织立刻运送到gmp实验室，进行后续的处理和培养；20天之后，til细胞培养成熟，再运回医院，回输给病人，在til细胞回输后，接受5～6个疗程的白介素2皮下注射，白介素2的使用剂量为50～60万个单位/kg；6名患者的肿瘤明显缩小，15名患者病情稳定，另外有3名患者病情进展。
技术总结