本申请涉及一种曲札提取物及其在制备预防和/或治疗病毒性肺炎的药物的应用，属于医药领域。
背景技术：
：病毒性肺炎具有强传染性，老人、婴幼儿、体质较弱及免疫力低下者容易受到感染。肺炎可引起肺组织坏死而导致肺脓肿、肺感染还可造成种种特异性并发症，如感染可蔓延至胸膜腔则可造成脓胸，而血行播散还可导致胸膜炎、心内膜炎、心包炎、关节炎等。重症肺炎可持续高热、心悸、气急、呼吸困难,甚至可伴有休克、呼吸衰竭、呼吸窘迫综合症以及多脏器官衰竭。近年来，具有胃肠道、呼吸道和神经系统嗜性的冠状病毒(coronaviridae)多次引起肆虐全球的严重急性呼吸综合征，如2002年冬到2003年春严重急性呼吸综合征(severeacuterespiratorysyndrome，sars，传染性非典型肺炎)，2012年中东呼吸综合征(mers)及2019年新型冠状病毒“2019-ncov”所引起的肺炎。近年来由sars、mers、h1n1、h5n1、h7n9及2019-ncov等病毒引起的重症病毒性肺炎给我国造成巨大的危害和损失。病毒性肺炎目前尚无理想药物。fda批准的治疗成人病毒性肺炎的唯一药物是神经氨酸苷酶抑制剂。在病毒性肺炎中，抗菌药物被严重滥用，我国疾病呼吸道感染中抗生素的使用率已接近100％，长期使用广谱抗生素可引起菌群紊乱及微生态失调。病毒性肺炎还常用抗病毒药物如利巴韦林、阿糖腺苷等广谱抗病毒药，但效果均不理想，我国将病毒性肺炎列为常见难治急危重疾病。因此，在病毒性肺炎的防治方面，寻求治疗病毒性肺炎的有效药物是临床实践的迫切需要。曲札，为一种藏药材，植物基源是拉萨大黄(rheumlhasaensea.j.lietp.k.hsiao)，属蓼科大黄属植物，产于西藏东部，四川等地，现已由香格里拉高山植物园引种驯化成功。现有对拉萨大黄化学成分和药理活性的研究，发现拉萨大黄含有以曲札茋苷、甲基虎杖苷和虎杖苷为主的高含量二苯乙烯类化合物。不同于其它大黄属植物，曲札几乎不含具有潜在严重毒副作用的蒽醌类化学成分。技术实现要素：本申请提供了一种用于解决上述技术问题的曲札提取物及其在制备预防和/或治疗病毒性肺炎的药物的应用。本申请提供了一种曲札提取物在制备预防和/或治疗病毒性肺炎药物中的应用。曲札曲札提取物中有效成分为以曲札茋苷、虎杖苷、甲基虎杖苷、白皮杉醇和白藜芦醇为主的二苯乙烯类物质。曲札提取物具有抗病毒、抗菌、抗炎、清除自由基等多种药理活性等多种药理活性，体外能够抑制sars病毒并能保护感染细胞，并对甲型h1n1流感病毒引起的小鼠病毒性肺炎具有显著保护作用，能够显著延长内毒素性休克大鼠存活时间。曲札提取物可用制备防治病毒型肺炎的药物。本申请中，“二苯乙烯类化合物”是指其化合物结构中含有二苯乙烯结构单元的化合物，二苯乙烯类化合物的化学结构通式为：式i中，r选自-h、-oh、-och3、-o-葡萄糖基、-o-取代的葡萄糖基中的至少一种。优选地，所述病毒性肺炎的病原体包括冠状病毒。优选地，所述治疗包括降低病毒性肺炎患者血液中的病毒载量。优选地，所述病毒性肺炎包括伴有休克症状的重症病毒性肺炎。优选地，所述曲札提取物的提取原料为拉萨大黄的根茎；所述拉萨大黄为野生或人工种植；曲札药材基源为拉萨大黄(rheumlhasaensea.j.lietp.k.hsiao)野生或种植根茎，所述药物为口服剂、吸入剂或注射剂。曲札提取物可按现有方法将其制成口服剂、吸入剂或注射剂，具体为注射液和气雾剂。注射液吸收快，作用迅速。特别是静脉注射，药液可直接进入血循环，更适于抢救危重病症之用。喷雾给药一种重要的局部用药途径，对于呼吸道疾病特别是肺炎患者，喷雾给药直接、快速，有利于疾病的快速防治和重症的治疗。本申请的另一方面还提供了一种如上述应用中所用曲札提取物，所述曲札提取物包括：以重量百分比计的曲札茋苷50％～100％；优选地，所述曲札提取物包括：以重量百分比计的虎杖苷50％～100％；优选地，所述曲札提取物包括：以重量百分比计的甲基虎杖苷50％～100％。该提取物中仅含有曲札茋苷、虎杖苷或甲基虎杖苷的任一种均可用于上述用途。具体地，曲札茋苷化学式为(e)-1-(3,5-二羟苯基)-2-(3-羟基-4-o-d-吡喃葡萄糖苯基)乙烯或3,5,3′,4′-四羟基茋-3′-o-β-葡萄糖苷，结构式如式ii：具体地，虎杖苷化学式4’,5-二羟基二苯乙烯-3-o-葡萄糖甙(4′,5-dihydroxy-stilbene-3-o-glucoside，polydatin,piceid)，结构式如式iii：具体地，甲基虎杖苷化学式是5-羟基-4’-甲氧基二苯乙烯-3-o-葡萄糖甙(4′-methoxy-5-hydroxy-stilbene-3-o-glucoside，deoxyrhaponticin)，结构式如式iv：优选地，所述曲札提取物包括：所述曲札提取物包括：以重量百分比计的，二苯乙烯类化合物总含量为50～100％；优选地，所述曲札提取物包括：以重量百分比计的甲基虎杖苷20～55％、虎杖苷5～35％、曲札茋苷5～35％、白藜芦醇1～35％、白皮杉醇1～35％。二苯乙烯类化合物为曲札总提取物。优选地，所述曲札提取物包括：以重量百分比计的甲基虎杖苷20～55％、虎杖苷5～35％、曲札茋苷5～35％、白藜芦醇5～9％、白皮杉醇1～30％。具体地，白藜芦醇的结构式如式v：具体地，白皮杉醇的结构式如式vi：优选地，曲札提取物由：以重量百分比计的甲基虎杖苷20～28％、虎杖苷5～35％、(e)-5-o-甲基-白藜芦醇-3-o-β-葡萄糖苷5～35％、白藜芦醇1～35％、白皮杉醇1～25％组成。其中所用(e)-5-o-甲基-白藜芦醇-3-o-β-葡萄糖苷自acermonomaxim.提取制备，参见“h.yang,s.h.sungandy.c.kim,j.nat.prod.,2005,68,101”。之前的研究中并未该物质未见活性报道。本申请中首次将其用于病毒性肺炎的预防和治疗中，并以较高的含量加入。现有技术中常将曲札茋苷作为主要有效成分，以发挥其对肺损伤的修复作用，但本申请提供提取物，在不含曲札茋苷的情况下，依然可以发挥对冠状病毒较好的抑制作用。将各物质按上述比例混合后得到所述曲札提取物，作为药剂使用，能较好的抑制病毒在人体内的活性，能够有效抑制sars病毒并能保护感染细胞，并对甲型h1n1流感病毒引起的小鼠病毒性肺炎具有显著保护作用，能够显著延长内毒素性休克大鼠存活时间。优选地，曲札提取物由：以重量百分比计的甲基虎杖苷10～15％、虎杖苷40～55％、(e)-5o-甲基-白藜芦醇-3-o-β-葡萄糖苷40～55％、甲基白藜芦醇1～2％、白皮杉醇1～5％组成。本申请提供的曲札提取物无论是以曲札总提取物作为该提取物，还是曲札茋苷、甲基虎杖苷和虎杖苷三个茋苷单体化合物单独作为该提取物，均能够抑制sars病毒并能保护感染细胞，并对甲型h1n1流感病毒引起的小鼠病毒性肺炎具有显著保护作用，能够显著延长内毒素性休克大鼠存活时间。更出乎意料的是，在药效实验中，上述曲札提取物作为注射液后，注射液在较低剂量情况下表现了非常显著(p<0.01)的降低冠状病毒h1n1所致肺炎小鼠肺指数，对病毒性肺炎所致肺水肿有良好的治疗作用，对重症病毒性肺炎患者症状的缓解有非常积极的治疗意义。另外，曲札总提取物及曲札茋苷注射液还对内毒素性休克大鼠存活时间有显著的延长作用，并能显著提高休克大鼠6小时存活率(85％)。存活率提高对于挽救重症休克患者也具有重要意义。因此所述曲札提取物可用制备防治病毒型肺炎的药物，对重症患者的治疗有积极作用。本发明还发现，曲札总提取物的效果优于单一的茋苷成分，其多成分的多效性在药效中更显优势。具体地，曲札提取物中所含各物质的提取方法包括以下步骤：a.采集曲札植株的地下根茎，水洗去泥土，通风处悬挂凉干，切碎；b.取曲札植株地下根茎颗粒，以质量浓度75％乙醇浸泡24小时后，装渗漉柱用v(乙醇体积)：w(药材重量)＝8：1倍75％乙醇渗漉，渗漉流速20ml/min，合并所得提取液，减压浓缩得曲札总提取物；曲札总提取物已含有所述的甲基虎杖苷、虎杖苷、曲札茋苷、白藜芦醇、白皮杉醇。c.将步骤b曲札总提取物加水进行沉淀，收集沉淀直接干燥或进行进一步结晶精制得到甲基虎杖苷的提取物，其中按质量百分比，甲基虎杖苷含量为50％～100％；d.将步骤c沉淀后水溶液上d101大孔树脂，30％乙醇10倍体积洗脱，3-5倍体积洗脱液减压浓缩或进一步重结晶得富集了曲札茋苷的提取物，其中按质量百分比，甲基虎杖苷含量为50％-100％；6-9倍体积洗脱液减压浓缩或进一步重结晶得富集了虎杖苷的提取物其中按质量百分比，甲基虎杖苷含量为50％-100％；e.将曲札总提取物、c步骤中所得甲基虎杖苷、d步骤中所得虎杖苷混合后得到所述曲札提取物。步骤b中，因曲札总提取物是一种以二苯乙烯类化合物为主要化学成分的混合物。可以理解，此提取物中不同化学成分的含量随原料批次不同、处理工艺参数变化而有所变化。一般地，所述总提取物中含有约50％～100％的二苯乙烯类成分，包括曲札茋苷、虎杖苷、白藜芦醇、白皮杉醇和甲基虎杖苷。所述步骤c，d中，曲札茋苷、虎杖苷和甲基虎杖苷得到分离和富集，通过反复重结晶，3种成分的质量百分比含量为50-100％。上述b，c及d步骤分别给出曲札提取物，包括曲札总提取物，富含曲札茋苷、虎杖苷和甲基虎杖苷成分的提取物制备步骤。上述曲札提取物还可采用其他植物材料和/或方法手段获得曲札茋苷、虎杖苷和甲基虎杖苷三种成分。拉萨大黄根茎中存在高含量的二苯乙烯类化合物，随采收季节、地点以及其它因素的不同，曲札根茎所含二苯乙烯类化合物的总量可达5％～14％(以干重计)。故本申请中优选采用拉萨大黄的地下根茎作为提取植物材料。按上述方法所得曲札总提取物，主要有效成分为二苯乙烯类化合物，以重量百分比计，所述提取物中二苯乙烯类化合物总含量为50～100％，其中包括20～55％甲基虎杖苷，5～35％虎杖苷，5～35％的曲札茋苷，1～35％的白藜芦醇，1～35％的白皮杉醇。以此提取物为基础，采用如层析、重结晶等常用的分离纯化手段和技术很容易制备或生产其中含量丰富的二苯乙烯成分单体化合物。如曲札茋苷、甲基虎杖苷和虎杖苷等二苯乙烯苷类成分的富集提取物和单体(百分含量：50-100％)。曲札提取物中的各成分也可由其它植物材料食用大黄(rheumrhaponticuml.)及虎杖(polygonumcuspidatumsieb.etzucc.)制备或进行化学合成获得。本申请能产生的有益效果包括：1)本申请所提供的曲札提取物的应用，首次发现其在防治病毒性肺炎方面，特别是防治冠状病毒引起的肺炎方面具有应用价值。药效学实验显示，所述曲札提取物在缓解重症病毒性肺炎患者症状中更具优势，其中，曲札总提取物的效果优于单一茋苷成分。该提取物具有抗病毒、抗菌、抗炎、清除自由基等多种药理活性，能显著降低冠状病毒感染小鼠肺指数，抗休克，可用于制备防治病毒性肺炎药物制剂。2)本申请所提供的曲札提取物，本研究发现，曲札总提取物及其中的主要单体成分注射液，体外对sars病毒具有抑制作用并能保护感染细胞，对甲型h1n1流感病毒引起的小鼠病毒性肺炎细胞具有显著保护作用，能够显著延长肺炎引起的内毒素性休克大鼠的存活时间。3)基于药理学活性及本发明药效实验结果，本申请提供的曲札总提取物和/或纯化的曲札茋苷、甲基虎杖苷和虎杖苷组合物在病毒型肺炎，特别是冠状病毒引起的肺炎防治方面具有应用价值和前景。本申请中药效学实验显示，曲札总提取物及其药物组合物在缓解重症病毒性肺炎患者症状中更具优势，其中，曲札总提取物的效果优于仅采用单一茋苷成分进行疾病预防治疗。4)本申请所提供的曲札提取物，以(e)-5-o-甲基-白藜芦醇-3-o-β-葡萄糖苷替代曲札茋苷所得提取物组合物，能更好的发挥对冠状病毒活性抑制作用。5)本申请所提供的曲札提取物，改提取物含有高活性的曲札茋苷、甲基虎杖苷和虎杖苷等茋类成分，成分明确可控。本发明所述提取物由于其药材基源含有丰富的二苯乙烯类物质，不需进行进一步的纯化精制即可得可用于制备药物的提取物原料，其制备方法简单易行，生产成本低，可连续操作，具有极强的实用性和应用价值。具体实施方式下面结合实施例详述本申请，但本申请并不局限于这些实施例。实施例如无特别说明，本申请的实施例中的原料、溶剂和助剂均通过商业途径购买，不进行处理。测试所用仪器：实施例1：曲札总提取物的制备(1)材料：曲札根茎：香格里拉高山植物园种植，除去杂质，洗净，切成片或块，晒干。批号：180902，191003，190903树脂：d101大孔吸附树脂，天津市海光化工有限公司产品，按照生产厂说明书进行预处理；80～100目聚酰胺树脂，浙江黄岩树脂化工有限公司产品，按照生产厂说明书进行预处理。(2)制备方法：i)曲札总提取物的提取采集的曲札植株，水洗去泥土，通风处悬挂凉干，分离地下根茎和地上茎叶，粉碎机分别将其粉碎成粗颗粒。取地下根茎和地上茎叶各100g，分别切碎，1l75％乙醇浸泡24小时后，装渗漉柱(φ8cm,l100cm)，75％乙醇渗漉，渗漉流速20ml/min，各用2l75％乙醇进行渗漉，合并渗漉液，减压浓缩，紫外分光光度法检测渗漉液中二苯乙烯类化合物含量。结果：批号050902的拉萨大黄地下根茎和地上茎叶中的所含二苯乙烯类化合物总量分别为10％和0.001％。结果显示拉萨大黄地下根茎二苯乙烯类化合物的含量丰富。ii)提取：拉萨大黄地下根茎3份，每份600g，切碎，分别以50％、75％、95％乙醇作为提取溶剂提取。各份药材分别以上述不同提取溶剂回流提取3次，每次4.8l相应乙醇溶剂，每次2小时。分别合并提取液，紫外分光光度法检测提取液中总二苯乙烯类化合物含量(a)，计算二苯乙烯类化合物转移率(b)：提取液二苯乙烯类化合物平均总量/药材二苯乙烯类化合物总量×100％。提取试验结果如表1所示。表1：不同提取溶剂的提取试验结果提取液50％乙醇75％乙醇95％乙醇a56.94g57.18g53.82gb94.9％95.3％89.7％a：紫外分光光度法检测的提取液中总二苯乙烯类化合物量；b：二苯乙烯类化合物转移率上述提取试验中，以50％、75％、95％乙醇作为提取溶剂提取时，提取步骤之二苯乙烯类化合物转移率在89％～95％之间。可见它们均可作为曲札有效成分提取溶剂。优选75％乙醇作为提取溶剂。经检测不同批次曲札药材75％乙醇提取物二苯乙烯和各成分百分含量如表2所示。结果显示不同批次曲札茋苷提取物均含有曲札茋苷、虎杖苷、白藜芦醇、白皮杉醇和甲基虎杖苷，以三种茋苷类成分为主。表2：不同批次药材曲札总提取物各成分百分含量试验结果实施例2：曲札茋苷、甲基虎杖苷、虎杖苷、白皮杉醇、白藜芦醇的提取及检测(1)材料：曲札根茎：曲札根茎，收购于西藏拉萨地区，除去杂质，洗净，切成片或块，晒干。批号：190903(2)曲札总提取物制备采用75％乙醇作为提取溶剂，按实施例1所述步骤制备曲札总提取物。(3)白藜芦醇、甲基虎杖苷、白皮杉醇的纯化提取曲札总提取物200克，用200ml水加热溶解，放置12小时，5000rpm离心10分钟,离心沉淀用50ml45％乙醇溶解，2克活性碳80℃回流15分钟脱色，趁热抽滤，滤液4℃下放置4小时析晶，晶体真空干燥，得62克白色针晶，经结构鉴定为甲基虎杖苷，纯度85-100％。结晶母液上d101大孔树脂(150×1000mm)，以30％乙醇洗脱，每1个柱体积为1个流分，共得到20个流分，流分1-8浓缩得到浅黄色固体10克，30％乙醇重结晶得白色粉末状固体，经结构鉴定为白皮杉醇，流分11-19浓缩得到浅黄色固体51g，50％乙醇重结晶得白色晶体，经结构鉴定为白藜芦醇。(4)曲札茋苷、虎杖苷的纯化提取离心水相上聚酰胺树脂(150×1000mm)，以35％乙醇洗脱，每1个柱体积为1个流分，共得到18个流分，流分2-9减压浓缩得到浅黄色固体125克，15％乙醇溶解，4克活性碳80℃回流15分钟脱色，趁热抽滤，滤液4℃下放置2小时析晶，晶体真空干燥，得102克白色晶体，经结构鉴定为曲札茋苷；流分11-15减压浓缩得黄色固体11克，经结构鉴定为虎杖苷。(5)曲札茋苷、甲基虎杖苷、虎杖苷、白皮杉醇、白藜芦醇结构鉴定：分别对所得曲札茋苷、甲基虎杖苷、虎杖苷、白皮杉醇、白藜芦醇依序进行uv、ms、1hnmr、13cnmr谱图，所得检测数据如下：甲基虎杖苷：白色针晶(甲醇)，mp.225-227℃。紫外灯下呈蓝紫色荧光。uv：λmax(meoh)nm：217,308,319；negativefabms[m/z]：403[m-h]-，227[m h-c6h11o6]-；1hnmr(acetone－d6)δppm：7.50(d，j＝8.0hz)，7.11(s，j＝16.3hz)，6.94(s，j＝16.3hz)，6.93(d，j＝8.0hz),6.80(s),6.67(s),6.48(s),4.83(1h,d,anomerich),3.76(3h,s,och3),3.2-3.9(4h,m,sugar-h)；13cnmr(acetone－d6)δppm:140.7(c-1),106.6(c-2),160.2(c-3),103.9(c-4),159.5(c-5),108.2(c-6),130.9(c-1′),128.9(c-2′,6′),114.9(c-3′,5′),160.5(c-4′),126.4(c-α),130.9(c-β),55.6(-och3),102.1(c-1″),74.7(c-2″),77.8(c-3″),71.5(c-4″),78.1(c-5″),62.7(c-6″)。上述uv，ms,1hnmr和13cnmr数据与文献(yoshikikashiwadaetal.chem.pharm.bull.1984,32(9):3501-3517)报道甲基虎杖苷一致(5-hydroxy-4′-methoxystilbene-3-o-glucopyranoside，deoxyrhaponticin)。虎杖苷：白色针晶(30％乙醇)，uv：λmax(etoh)：217,307,320。ms[m/z，rel.]：390[m] ，228(100)，227(12.51)，211(6.38),181(8.87)；1hnmr(acetone－d6)δppm：8.48(1h,s),8.40(1h,s),7.43(2h,d,j＝8.5hz),7.10(1h,d,j＝16.0hz),6.92(1h,d,j＝16.0hz),6.85(2h,d,j＝8.5hz),6.82-6.68(1h,s),6.68(1h,s),6.47(1h,s),4.95(1h,d,j＝7.5hz),4.60(1h,d),4.39(1h,d),4.31(1h,d),3.95-3.91(1h,m),3.82(1h,t),3.75-3.71(1h,m),3.56-3.52(2h,m),3.49-3.44(2h,m)；13cnmr(acetone－d6)δppm:159.4(c-4′),158.5(c-3),157.4(c-5),130.0(c-1),129.0(c-β,c-1′),128.8(c-2′,6′),125.6(c-α),115.6(c-3′,5′),107.31(c-6),,105.7(c-2),103.0(c-4),101.1(c-1″),77.2(c-5″),,76.9(c-3″),73.9(c-2″),70.5(c-4″),61.8(c-6″)。上述uv，ms,1hnmr和13cnmr数据与文献(fulviaorsini.j.nat.prod.1997,60,1082～1087)报道虎杖苷一致(piceid)。曲札茋苷：白色毛状晶体(水)，mp.220-225℃。紫外灯下呈蓝紫色荧光。uvλmax(metoh):217(4.38),320(4.48)；ei-ms(m/z):406[m] ,244[m-glycosy] ；negativefab-ms(m/z):405[m-h]—，243[m-h-glycosy]—；1hnmr(cd3od,500mhz)δppm:7.44(1h,d,j＝2.0hz,c2′-h),7.05(1h,dd,j1＝2.0hz,j2＝8.0hz,c6′-h),6.92(1h,d,j＝16.3hz,cα-h),6.83(1h,d,j＝16.3hz,cβ-h),6.82(1h,d,j＝8.3hz,c5′-h),6.47(1h,d,j＝2.2hz,c2,6-h),6.18(1h,t,j＝2.2hz,c4-h),4.81(1h,d,j＝7.4hz,anomerich),3.95(1h,dd,j1＝2.0,2.1hz,j2＝12.2hz,c6″-h),3.74(1h,dd,j1＝6.0hz,j2＝＝12.1hz,c6″-h),3.41-3.56(4h,msugar-h)；13cnmr(cd3od,125mhz)δppm：141.1(c-1),105.9(c-2,6),159.4(c-3,5),102.7(c-4),131.3(c-1′),116.6(c-2′),146.9(c-3′),148.1(c-4′),117.2(c-5′),123.0(c-6′),127.8(c-α),129.1(c-β),104.4(c-1″),74.9(c-2″),78.4(c-3″),71.4(c-4″),77.5(c-5″),62.5(c-6″)。白皮杉醇:白色晶体(15％乙醇)，esi-ms(m/z)243[m-h] ,1hnmr(400mhz,acetone-d6)δ7.07(d,j＝1.7hz,1h),6.95(d,j＝16.3hz,1h),6.90(dd,j＝8.0/1.7hz,1h),6.82(d,j＝16.3hz,1h),6.80(d,j＝8.0hz,1h),6.52(d,j＝1.8hz,2h),6.26(t,j＝1.8,1h).13cnmr(101mhz,acetone-d6)δ159.50(c-3,5),146.040(c-3′,4′),140.77,0(c-1)130.600(c-1′),129.310(c-β),126.800(c-α),119.930(c-6′),116.180(c-2′),113.740(c-5′),105.580(c-2,6),102.560(c-4).白藜芦醇：白色针晶(50％乙醇)，ei-ms(m/z)228[m] ,1hnmr(400mhz,acetone-d6)δ8.51(s,1h),8.23(s,2h),7.41(d,j＝8.6hz,2h),7.01(d,j＝16.3hz,1h),6.88(d,j＝16.3hz,1h),6.83(d,j＝8.6hz,2h),6.53(d,j＝2.0hz,2h),6.25(t,j＝2.0hz,1h).13cnmr(101mhz,acetone-d6)δ159.53(c-3,5),158.11(c-4′),140.80(c-1),130.01(c-1′),129.01(c-β),128.65(c-2′,6′),126.75(c-α),116.33(c-3′,5′),105.57(c-2,6),102.58(c-4)。实施例3：曲札提取物样品1～16的制备按下表将各物质混合后得到曲札提取物样品1～16，以重量百分比计。实施例4：制备曲札提取物样品注射液(1)处方(2)制法量取2.50l无水乙醇，加入1.50l丙二醇以及磷酸盐缓冲液，混匀，加入实施例1和2所述曲札茋苷提取物100.00g，超声使溶，缓冲液定容至刻度。过0.45μm的微孔滤膜，粗滤。续滤液过0.22μm的微孔滤膜，过1万截留分子量的聚醚砜膜除热原。棕色瓶充氮气灌封。其中所用曲札提取物样品为1～12。实施例5：制备曲札提取物样品气雾剂(1)处方(2)制法采用压灌法制备，先将配好的药液在室温下灌入容器内,再将阀门装上并轧紧,然后通过压装机压入定量的抛射剂(最好先将容器内空气抽去)。液化抛射剂自进口经砂棒滤过后进入压装机。操作压力80.65kpa。灌装。其中所用曲札提取物样品为1～12。实施例6曲札提取物注射液抗sars病毒活性及对病毒感染细胞的保护作用动物实验(1)试验方法按常规将vero-e6细胞(易感细胞)接种于96孔培养板，置37摄氏度，5％co2培养，sars病毒感染细胞后，分别加入不同稀释浓度的样品，实验分为病毒对照、细胞对照、曲札总提取物、曲札茋苷、甲基虎杖苷及虎杖苷注射液组(各注射液按实施例3方法制备)，四个测试样品配成高(150ug/ml)、中(80ug/ml)、低((6ug/ml)3个浓度测试。每天观察，记录cpe(细胞病变法)以“-”表示细胞附着形态完整，未见明显的脱离，以“ ”表示细胞病变程度，<25％为“ ”，25～50％为“ ”，50～75％为“ ”，〉75％为“ ”。48小时后用中性红染色测定od值，参照对照进行样品对sars病毒感染细胞的保护率计算，保护率〉1.5倍，被认为样品对冠状病毒感染细胞有一定的保护作用。(2)实验结果：各曲札提取物注射液对病毒活性及对病毒感染细胞的保护作用如表3所示。表3：曲札提取物对sars病毒感染细胞保护作用组别cpe保护率细胞对照组—病毒对照组 曲札提取物样品2注射液(150ug/ml) 2.5曲札提取物样品2注射液(80ug/ml) 2.2曲札提取物样品2注射液(6ug/ml) 2.2曲札提取物样品13注射液(150ug/ml) 2.1曲札提取物样品13注射液(80ug/ml) 2.0曲札提取物样品13注射液(6ug/ml) 1.9曲札提取物样品11注射液(150ug/ml) 2.4曲札提取物样品11注射液(80ug/ml) 2.1曲札提取物样品11注射液(6ug/ml) 2.1曲札提取物样品10注射液(150ug/ml) 2.2曲札提取物样品10注射液(80ug/ml) 2.3曲札提取物样品10注射液(6ug/ml) 2.1曲札提取物样品6注射液(80ug/ml) 2.3曲札提取物样品8注射液(80ug/ml) 2.3由上表可见，各曲札提取物注射液在高中低剂量均有抗sars病毒作用并能保护感染细胞。其中，曲札总提取物具有较好的活性，同时以(e)-5-o-甲基-白藜芦醇-3-o-β-葡萄糖苷替代曲札茋苷后，所得提取物样品同样具有较好的保护效果。实施例7：曲札提取物样品注射液对甲型h1n1流感病毒感染小鼠肺炎模型的保护作用(1)实验方法：采用icr小鼠随机分为正常组，模型组，曲札提取物注射液高、中、低剂量组(150，50，10mg·kg-1)、曲札茋苷注射液高中低剂量组(150，50，10mg·kg－1)、甲基虎杖苷注射液高中低剂量组(150，50，10mg·kg－1)，每组8只，雌雄各半。除正常组外，其余各组小鼠以乙醚轻度麻醉，用浓度15ld50的流感病毒鼠肺适应株fm1株溶液滴鼻感染小鼠，0.05ml/只，造成小鼠流感病毒性肺炎模型。感染当日开始各组分别静脉注射给药，正常组和模型组腹腔注射给予同体积纯净水(0.1ml/10g)，每日给药1次，连续给药5d。感染第6日称小鼠体重后，固定小鼠，解剖，摘取全肺称重。计算肺指数值和肺指数抑制率。肺指数抑制率(％)＝(模型组肺指数值－给药组肺指数值模)/(模型组肺指数值－正常组肺指数值)×100％(2)实验结果。实验结果见表4。表4：不同曲札提取物对甲型h1n1流感病毒感染小鼠肺指数影响((x±s，n＝8)组别肺指数肺指数抑制率(％)正常组1.76±0.12-模型组0.92±0.16△△0曲札提取物样品2注射液(150mg·kg-1)1.08±0.2180.95**曲札提取物样品2注射液(50mg·kg-1)1.13±0.1875.00**曲札提取物样品2注射液(10mg·kg-1)1.21±0.2265.48**曲札提取物样品13注射液(150mg·kg-1)1.2±0.1166.67**曲札提取物样品13注射液(50mg·kg-1)1.28±0.2557.14**曲札提取物样品13注射液(10mg·kg-1)1.32±0.2152.38**曲札提取物样品11注射液(150mg·kg-1)1.35±0.2048.81*曲札提取物样品11注射液(50mg·kg-1)1.45±0.1836.90*曲札提取物样品11注射液(6mg·kg-1)1.51±0.2329.76*曲札提取物样品10注射液(150mg·kg-1)1.28±0.1857.14**曲札提取物样品10注射液(50mg·kg-1)1.37±0.2146.43*曲札提取物样品10注射液(10mg·kg-1)1.4±0.2142.86*曲札提取物样品6注射液(50mg·kg-1)1.23±0.1763.10**曲札提取物样品8注射液(50mg·kg-1)1.33±0.2051.19**注：与正常组比较，△△p＜0.01；与模型组比较，*p＜0.05，**p＜0.01由表4结果显示甲型流感病毒感染小鼠后，模型组小鼠肺指数值明显高于正常组(p＜0.01)，曲札总提取物、曲札茋苷、甲基虎杖苷和虎杖苷注射液高、中、低剂量组肺指数较模型组显著降低(p＜0.05或p＜0.01)，表明各给药组对甲型h1n1流感病毒引起的小鼠病毒性肺炎具有显著保护作用。其中曲札提取物更显示了较好的保护作用(肺指数抑制率65.48-80.95％)，在各剂量组均显示优于3种茋苷单体注射液的作用。同时以(e)-5-o-甲基-白藜芦醇-3-o-β-葡萄糖苷替代曲札茋苷后，所得提取物样品同样对甲型h1n1流感病毒引起的小鼠病毒性肺炎具有显著保护作用。实施例8不同曲札提取物注射液对大鼠内毒素性休克的治疗作用(1)实验方法：采用sd大鼠随机分为正常组，模型组，曲札提取物注射液组、曲札茋苷注射液组(150，50，10mg·kg－1)、甲基虎杖苷注射液组(150，50，10mg·kg－1)，每组8只，雌雄各半。除正常组外，其余各组大鼠以10mg·kg-1剂量静脉注射lps(脂多糖)，造成小鼠内毒素休克模型。随即各组分别静脉注射给药，正给药组给予10mg·kg-1注射液，常组和模型组腹腔注射给予同体积生理盐水(0.15ml·kg-1)，试验过程注意保持动物的体温在37℃。6h后观察记录大鼠存活率。(2)实验结果：实验结果见表5。表5：不同曲札提取物注射液对内毒素性休克大鼠6h存活率影响((x，n＝8)组别6h存活率正常组100％模型组25.0％△△曲札提取物样品2注射液87.5％**曲札提取物样品13注射液75.0％**曲札提取物样品11注射液37.5％曲札提取物样品8注射液62.5％**曲札提取物样品9注射液50.0％*注：与正常组比较，△△p＜0.01；与模型组比较，*p＜0.05，**p＜0.01实验结果显示与模型组相比，10mg·kg－1剂量曲札总提取物、曲札茋干注射液静脉注射能显著延长内毒素休克大鼠存活时间，其中曲札总提取物使内毒素休克大鼠6h存活率达87.5％。同时以(e)-5-o-甲基-白藜芦醇-3-o-β-葡萄糖苷替代曲札茋苷后，所得提取物样品同样能显著延长内毒素休克大鼠存活时间。在本说明书中所谈到的“一个实施例”、“另一个实施例”、“实施例”、“优选实施例”等，指的是结合该实施例描述的具体特征、结构或者特点包括在本申请概括性描述的至少一个实施例中。在说明书中多个地方出现同种表述不是一定指的是同一个实施例。进一步来说，结合任一实施例描述一个具体特征、结构或者特点时，所要主张的是结合其他实施例来实现这种特征、结构或者特点也落在本申请的范围内。尽管这里参照本申请的多个解释性实施例对本申请进行了描述，但是，应该理解，本领域技术人员可以设计出很多其他的修改和实施方式，这些修改和实施方式将落在本申请公开的原则范围和精神之内。更具体地说，在本申请公开和权利要求的范围内，可以对主题组合布局的组成部件和/或布局进行多种变型和改进。除了对组成部件和/或布局进行的变形和改进外，对于本领域技术人员来说，其他的用途也将是明显的。当前第1页1 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技术特征：1.一种曲札提取物在制备预防和/或治疗病毒性肺炎药物中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述病毒性肺炎的病原体包括冠状病毒。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述治疗包括降低病毒性肺炎患者血液中的病毒载量。
4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述病毒性肺炎包括伴有休克症状的重症病毒性肺炎。
5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述曲札提取物的提取原料为拉萨大黄的根茎；所述拉萨大黄为野生或人工种植；
所述药物为口服剂、吸入剂或注射剂。
6.一种如权利要求1～5中任一项所述应用中所用曲札提取物，其特征在于，所述曲札提取物包括：以重量百分比计的曲札茋苷50％～100％；优选地，所述曲札提取物包括：以重量百分比计的虎杖苷50％～100％；优选地，所述曲札提取物包括：以重量百分比计的甲基虎杖苷50％～100％。
7.根据权利要求6所述的曲札提取物，其特征在于，所述曲札提取物包括：以重量百分比计的，二苯乙烯类化合物总含量为50～100％；优选地，所述曲札提取物包括：以重量百分比计的甲基虎杖苷20～55％、虎杖苷5～35％、曲札茋苷5～35％、白藜芦醇1～35％、白皮杉醇1～35％。
8.根据权利要求6所述的曲札提取物，其特征在于，所述曲札提取物由：以重量百分比计的甲基虎杖苷20～28％、虎杖苷5～35％、(e)-5o-甲基-白藜芦醇-3-o-β-葡萄糖苷5～35％、白藜芦醇1～35％、白皮杉醇1～25％组成。
9.根据权利要求6所述的曲札提取物，其特征在于，所述曲札提取物由：以重量百分比计的甲基虎杖苷10～15％、虎杖苷40～55％、(e)-5-o-甲基-白藜芦醇-3-o-β-葡萄糖苷20～45％、甲基白藜芦醇1～5％、白皮杉醇4～5％组成。
技术总结本申请公开了一种曲札提取物及其在制备预防和/或治疗病毒性肺炎的药物的应用，其有效成分为以曲札茋苷、虎杖苷、甲基虎杖苷、白皮杉醇和白藜芦醇为主的二苯乙烯类物质。该提取物具有抗病毒、抗菌、抗炎、清除自由基等多种药理活性，能显著降低冠状病毒感染小鼠肺指数，抗休克，可用于制备防治病毒性肺炎药物制剂。
技术研发人员：胡琳;任杨帆;李清清;胡群;尹开云;方震东
受保护的技术使用者：昆明翔昊科技有限公司
技术研发日：2020.02.12
技术公布日：2020.06.05
