本发明属于植物活性成分提取
技术领域：
。更具体地，涉及一种从苹果渣中提取多酚的方法。
背景技术：
：目前，苹果工业化生产的主要产品为浓缩苹果汁、苹果酒、果酱等，在实际生产中，苹果皮渣往往被扔掉或废弃，尤其是在生产旺季，苹果渣堆积如山，腐败后臭味熏天，不仅造成了资源的巨大浪费还严重污染环境。而研究表明：苹果皮渣中富含多酚类物质，其具有抗氧化、抗心脑血管疾病、降血压、降血脂、抗溃疡、抗癌、抗突变、抑菌、清除自由基等多种活性功能，在医药、食品、化妆品等领域具有广阔的应用前景。目前，从苹果渣中提取多酚的方法主要有超临界二氧化碳提取法、有机溶剂提取法、吸附法等。如中国专利申请cn100360516a公开了一种超临界二氧化碳从苹果渣中萃取苹果多酚的方法，该方法利用二氧化碳的高压、高渗透力，使苹果渣植物细胞壁破壁，溶出有效成分，制备得到苹果多酚，操作稳定，但是该方法还需要另外添加夹带剂乙醇才能提高萃取效率，且对仪器和设备的要求较高；如中国专利申请cn102526257a公开了一种从苹果渣中提取苹果多酚的工业化生产方法，该方法采用乙醇加热回流的方法对苹果渣进行提取，再进行多次过柱除杂，得到苹果多酚，但是该方法采用乙醇等有机溶剂提取，仅能提取出其中的游离酚，而与蛋白质、单糖、有机酸等结合的结合酚没有被提取出来，且该方法操作繁琐，收率较低，不适于大规模工业化生产。因此，迫切需要提供一种可以充分提取游离酚和结合酚、收率较高、操作简单的从苹果渣中提取多酚的方法。技术实现要素：本发明要解决的技术问题是克服现有技术苹果多酚的提取无法提取得到结合酚，且复杂繁琐、收率较低的缺陷和不足，提供一种可以充分提取游离酚和结合酚、收率较高、操作简单的从苹果渣中提取多酚的方法。本发明的目的是提供一种从苹果渣中提取多酚的方法。本发明上述目的通过以下技术方案实现：一种从苹果渣中提取多酚的方法，包括以下步骤：将苹果渣杀青灭酶、烘干、粉碎，加入氢氧化钠溶液和保护剂水解，调整ph，萃取、浓缩、干燥，得苹果多酚；其中，所述保护剂为含有(20～25)mm乙二胺四乙酸和4～5％抗坏血酸的水溶液。苹果渣中含有大量的多酚类活性成分，在植物基质内通常有游离酚和结合酚两种形态，游离酚通常指水或极性溶剂可溶解的酚类，结合酚指水或极性溶剂不溶，主要以酯键、糖苷键、醚苷键等形式与蛋白质、单糖、有机酸等物质相结合的酚类。现有技术采用的有机溶剂提取方法主要提取得到的是游离酚，而无法同时提取得到结合酚。发明人经过大量的创造性试验发现，采用特定浓度的氢氧化钠同时配合特定的保护剂对苹果渣进行水解，可以显著增加结合酚的释放，达到同时将游离酚和结合酚提取出来，提高提取效率的效果，提取得到的总酚具有良好的抗氧化活性，并且制备方法简单，收率较高，应用范围广泛。进一步地，具体包括以下步骤：将苹果渣杀青灭酶、烘干、粉碎，在惰性气体保护下，加入质量体积比为1:(10～15)g/ml的(4～6)mol/l氢氧化钠溶液和保护剂，20～25℃振摇水解4～8h，离心，将上清液ph调整为2～3，所得水解液用乙酸乙酯进行萃取，萃取液浓缩、干燥，得苹果多酚。实践中发现，将上清液调整为酸性，有利于保护多酚类物质，提高多酚的活性。优选地，所述氢氧化钠的浓度为4mol/l。实践中发现，在此浓度条件下对苹果渣进行水解，在提高水解效率的同时，节约试剂。更进一步地，所述苹果渣与保护剂的质量体积比为1:(10～15)g/ml。进一步的地，所述杀青灭酶的方法为：将苹果渣于85～90℃中处理4～8min。更进一步地，所述粉碎后的颗粒小于80目。进一步地，所述调整ph的溶剂为浓度为6mol/l的盐酸。更进一步地，所述乙酸乙酯与水解液的体积比为1:1。本发明具有以下有益效果：本发明一种从苹果渣中提取多酚的方法，采用特定浓度的氢氧化钠同时配合特定的保护剂对苹果渣进行水解，可以显著增加结合酚的释放，达到同时将游离酚和结合酚提取出来，提高提取效率的效果，提取得到的总酚具有良好的抗氧化活性，并且制备方法简单，收率较高，应用范围广泛，对推动苹果加工副产物的利用，促进行业的可持续发展具有重要的意义。具体实施方式以下结合具体实施例来进一步说明本发明，但实施例并不对本发明做任何形式的限定。除非特别说明，本发明采用的试剂、方法和设备为本
技术领域：
常规试剂、方法和设备。除非特别说明，以下实施例所用试剂和材料均为市购。实施例1一种从苹果渣中提取多酚的方法所述从苹果渣中提取多酚的方法，包括以下步骤：将苹果渣于90℃杀青灭酶4min，烘干后粉碎成小于80目的颗粒，称取1g苹果渣颗粒，在氮气保护下，加入15ml的4mol/l氢氧化钠溶液，还有15ml保护剂(含有20mm乙二胺四乙酸和4％抗坏血酸的水溶液)，25℃条件下，200rpm振摇水解8h，离心，用浓度为6mol/l的盐酸将上清液ph调整为2.0，所得水解液用体积比为1:1的乙酸乙酯进行萃取，萃取液在45℃条件下真空浓缩，干燥，得苹果多酚，收率为1.42％。实施例2一种从苹果渣中提取多酚的方法所述从苹果渣中提取多酚的方法，包括以下步骤：将苹果渣于90℃杀青灭酶4min，烘干后粉碎成小于80目的颗粒，称取1g苹果渣颗粒，在氮气保护下，加入15ml的4mol/l氢氧化钠溶液，还有15ml保护剂(含有20mm乙二胺四乙酸和4％抗坏血酸的水溶液)，25℃条件下，200rpm振摇水解6h，离心，用浓度为6mol/l的盐酸将上清液ph调整为2.0，所得水解液用体积比为1:1的乙酸乙酯进行萃取，萃取液在45℃条件下真空浓缩，干燥，得苹果多酚，收率为1.50％。实施例3一种从苹果渣中提取多酚的方法所述从苹果渣中提取多酚的方法，包括以下步骤：将苹果渣于90℃杀青灭酶4min，烘干后粉碎成小于80目的颗粒，称取1g苹果渣颗粒，在氮气保护下，加入15ml的6mol/l氢氧化钠溶液，还有15ml保护剂(含有20mm乙二胺四乙酸和4％抗坏血酸的水溶液)，25℃条件下，200rpm振摇水解4h，离心，用浓度为6mol/l的盐酸将上清液ph调整为2.0，所得水解液用体积比为1:1的乙酸乙酯进行萃取，萃取液在45℃条件下真空浓缩，干燥，得苹果多酚，收率为1.40％。对比例1一种从苹果渣中提取多酚的方法所述从苹果渣中提取多酚的方法，包括以下步骤：将苹果渣于90℃杀青灭酶4min，烘干后粉碎成小于80目的颗粒，称取1g苹果渣颗粒，在氮气保护下，加入15ml的8mol/l氢氧化钠溶液，还有15ml保护剂(含有20mm乙二胺四乙酸和4％抗坏血酸的水溶液)，25℃条件下，200rpm振摇水解8h，离心，用浓度为6mol/l的盐酸将上清液ph调整为2.0，所得水解液用体积比为1:1的乙酸乙酯进行萃取，萃取液在45℃条件下真空浓缩，干燥，得苹果多酚，收率为1.20％。与实施例1不同之处在于，对比例1的氢氧化钠浓度为8mol/l，其余参数及操作参考实施例1。对比例2一种从苹果渣中提取多酚的方法所述从苹果渣中提取多酚的方法，包括以下步骤：将苹果渣于90℃杀青灭酶4min，烘干后粉碎成小于80目的颗粒，称取1g苹果渣颗粒，在氮气保护下，加入15ml的4mol/l氢氧化钠溶液，25℃条件下，200rpm振摇水解8h，离心，用浓度为6mol/l的盐酸将上清液ph调整为2.0，所得水解液用体积比为1:1的乙酸乙酯进行萃取，萃取液在45℃条件下真空浓缩，干燥，得苹果多酚，收率为1.15％。与实施例1不同之处在于，对比例2不添加保护剂，其余参数及操作参考实施例1。对比例3一种从苹果渣中提取多酚的方法所述从苹果渣中提取多酚的方法，包括以下步骤：将苹果渣于90℃杀青灭酶4min，烘干后粉碎成小于80目的颗粒，称取1g苹果渣颗粒，加入重量体积比为1:15g/ml体积分数80％的乙醇溶液，室温下震荡提取3h，离心，残渣用相同方法再提取一次，离心，合并两次上清液，浓缩、干燥，得苹果多酚，收率为0.52％。与实施例1不同之处在于，对比例3采用仅采用乙醇提取，其余参数及操作参考实施例1。实验例1总酚含量及氧自由基吸收能力测定将实施例1～3和对比例1～3制备的苹果多酚用甲醇溶解，并定容至10ml，作为待测样品溶液。1、总酚含量测定：各取50μl待测样品溶液，分别加入250μl福林酚试剂(2m)和3ml蒸馏水，涡旋震荡10s，加入1ml浓度为15％的碳酸钠溶液和0.7ml蒸馏水，振荡混匀，再涡旋震荡10s，室温下避光反应1h后，于765nm下测定吸光度。以没食子酸为标准品，总酚含量以每g苹果渣中所含没食子酸mg当量(gae)表示，单位为mggae/g。2、氧自由基吸收能力(oxygenradicalabsorbancecapacity,orac)测定：用75mmol/l，ph＝7.4的磷酸盐缓冲溶液溶解荧光素并配制成含有96μmol/l荧光素的荧光素储备液，4℃存放，使用前再稀释100倍。在96孔荧光板中加入样品溶液20μl，再加入200μl浓度为0.96μmol/l的fl使用液，在酶标仪内混合均匀，于37℃孵育15min，快速加入浓度为119mm的aaph溶液20μl启动反应，并迅速将荧光板置于荧光酶标仪(预置温度37℃)中开始测定，其中，激发波长485nm，发射波长530nm，反应过程中每隔2min测定一次荧光值(记为an)，直至荧光衰减为零为止。以75mmol/l，ph＝7.4的磷酸盐缓冲溶液作为空白对照，以trolox(0～100μmol/ml)为标准品。由公式(1)计算待测样品荧光强度曲线下方的面积(aucsample)及空白对照荧光强度曲线下方的面积(aucblank)，由公式(2)计算待测样品荧光强度曲线下方的净面积。以标准品trolox浓度(0～100μmol/ml)及其荧光衰减曲线下方的净面积建立回归方程，待测样品的orac值通过回归方程计算，结果s以每克多酚提取物所对应的trolox当量表示(μmolte/g)。公式(1)：auc＝(f0 f1 ... fi)/f0公式(2)：aucnet＝aucsample-aucblank式中，f0为时间为0min时的荧光强度，fi为时间为imin时的荧光强度；auc为待测样品在imin时间内荧光衰减曲线下方的面积；aucnet为待测样品在imin时间内荧光衰减曲线下方的净面积。3、测定结果：表1总酚含量及氧自由基吸收能力测定结果组别总多酚含量(mggae/gdw)orac值(μmolte/g)实施例114.97±0.59597.21±53.81实施例214.21±0.51575.38±55.45实施例314.01±0.73587.25±58.29对比例112.01±0.32*475.39±39.85*对比例211.52±0.57*459.25±39.21*对比例35.19±0.31*191.27±14.81*注：与实施例1相比，*p<0.05，**p<0.01。由表1可见，本发明实施例1～3制备的苹果总多酚含量和氧自由基吸收能力均较高，而对比例1～3改变多酚的提取方法，总多酚含量和氧自由基吸收能力显著降低。上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。当前第1页1 2 3
技术特征：1.一种从苹果渣中提取多酚的方法，其特征在于，包括以下步骤：
将苹果渣杀青灭酶、烘干、粉碎，加入氢氧化钠溶液和保护剂水解，调整ph，萃取、浓缩、干燥，得苹果多酚；
其中，所述保护剂为含有(20～25)mm乙二胺四乙酸和4～5％抗坏血酸的水溶液。
2.根据权利要求1所述方法，其特征在于，具体包括以下步骤：
将苹果渣杀青灭酶、烘干、粉碎，在惰性气体保护下，加入质量体积比为1:(10～15)g/ml的(4～6)mol/l氢氧化钠溶液和保护剂，20～25℃振摇水解4～8h，离心，将上清液ph调整为2～3，所得水解液用乙酸乙酯进行萃取，萃取液浓缩、干燥，得苹果多酚。
3.根据权利要求2所述方法，其特征在于，所述氢氧化钠的浓度为4mol/l。
4.根据权利要求2所述方法，其特征在于，所述苹果渣与保护剂的质量体积比为1:(10～15)g/ml。
5.根据权利要求2所述方法，其特征在于，所述杀青灭酶的方法为：将苹果渣于85～90℃中处理4～8min。
6.根据权利要求2所述方法，其特征在于，所述粉碎后的颗粒小于80目。
7.根据权利要求2所述方法，其特征在于，所述调整ph的溶剂为浓度为6mol/l的盐酸。
8.根据权利要求2所述方法，其特征在于，所述乙酸乙酯与水解液的体积比为1:1。
技术总结本发明属于植物活性成分提取技术领域，具体涉及一种从苹果渣中提取多酚的方法。该方法采用特定浓度的氢氧化钠同时配合特定的保护剂对苹果渣进行水解，可以显著增加结合酚的释放，达到同时将游离酚和结合酚提取出来，提高提取效率的效果，提取得到的总酚具有良好的抗氧化活性，并且制备方法简单，收率较高，应用范围广泛，对推动苹果加工废弃物的综合利用，提升产品附加值，促进行业的可持续发展具有重要的意义。
技术研发人员：杨瑞丽;余佳文;杨诗颖
受保护的技术使用者：华南农业大学
技术研发日：2020.03.04
技术公布日：2020.06.05
