本发明涉及一种鸡用中药组合物，更具体地说，尤其涉及一种用于降低鸡肌内脂肪的中药组合物。本发明同时还涉及上述中药组合物的制备方法及使用方法。
背景技术：
脂类是脂肪及类脂的总称。它不仅供给机体所需的能量、还能提供机体所需的必需脂肪酸。然而，鸡的快速生长常使体内脂肪尤其是腹脂和皮下脂肪易过多沉积，降低饲料转化率和胴体品质，同时也易诱发蛋鸡脂肪肝综合征，危害鸡的健康生长。因此,如何降低鸡腹脂和皮下脂肪的过量蓄积,就成为生产经营者与科研工作者共同关注的问题。
技术实现要素：
本发明的第一目的在于针对上述现有技术的不足，提供一种配伍科学且效果良好的用于降低鸡肌内脂肪的中药组合物。
本发明的第二目的在于提供一种制备上述中药组合物汤剂的方法。
本发明的第三目的在于提供一种上述中药组合物汤剂的使用方法。
本发明的第一技术方案是这样实现的：一种用于降低鸡肌内脂肪的中药组合物，该中药组合物由下述重量份的中药原料制成：白术4-12份、茯苓4-12份、薏仁4-12份、苍术2-8份、大黄0.5-6份、泽泻0.5-6份、陈皮0.5-6份、枳壳0.5-6份、佩兰0.5-6份及香附0.5-6份。
上述的一种用于降低鸡肌内脂肪的中药组合物，该中药组合物由下述重量份的中药原料制成：白术5-9份、茯苓5-9份、薏仁5-9份、苍术3-6份、大黄1-3份、泽泻1-3份、陈皮1-5份、枳壳1-5份、佩兰1-5份及香附1-5份。
上述的一种用于降低鸡肌内脂肪的中药组合物，该中药组合物由下述重量份的中药原料制成：白术7份、茯苓7份、薏仁8份、苍术4份、大黄2份、泽泻2份、陈皮3份、枳壳3份、佩兰3份及香附3份。
本发明的第二技术方案是这样实现的：一种制备上述中药组合物的方法，其该方法包括下述步骤：
(1)按重量份称取各中药原料，打碎后混合均匀形成中药混合粉末，按受体每公斤体重0.8-2克的用量，称取中药混合粉末，备用；(2)将称取的中药混合粉末置入陶瓷容器中，浸泡后熬煮成汤剂。
上述的中药组合物的制备方法中，步骤(2)具体为：将称取的中药混合粉末置入陶瓷容器中，按中药混合粉末体积加入其体积量3-5倍的清水，浸泡30分钟后，采用武火煮开，再转文火慢熬10-15分钟，过滤得一次药汁；按原始中药混合粉末体积量复水1-2倍，采用武火煮开，转文火慢熬15-20分钟，静置自然冷却至室温，过滤得二次药汁，混合一次药汁和二次药汁，得中药组合物汤剂。
本发明的第三技术方案是这样实现的：一种上述中药组合物汤剂的使用方法，该方法为：在给药前先让鸡停水两小时，然后根据每只鸡两小时的饮用量，计算待喂药鸡群所需水的总量，根据该饮水总量将汤剂兑水得药水，每天一次顿服。
各中药原料的药性如下：
白术，性温，味甘、苦。归脾经、胃经。
功效主治：健脾、益气、燥湿利水、止汗、安胎。属补虚药下属分类的补气药。
茯苓，味甘、淡，性平。归心、肺、脾、肾经。
功效主治：利水渗湿，健脾，宁心。用于水肿尿少，痰饮眩悸，脾虚食少，便溏泄泻，心神不安，惊悸失眠。
薏仁，甘、淡，微寒。归脾、胃、肺经。
功效主治：利水渗湿，健脾止泻，祛湿除痹，清热排脓。用于小便不利，水肿，脚气，脾虚泄泻，风湿痹痛，筋脉挛急，肺痈，肠痈。
苍术，味辛、苦，性温。归脾、胃、肝经。
功效主治：燥湿健脾，祛风散寒，明目。用于湿阻中焦，脘腹胀满，泄泻，水肿，脚气痿蹙，风湿痹痛，风寒感冒，夜盲，眼目昏涩。
大黄，味苦，性寒，归胃、大肠、肝、脾经，具有攻积滞、清湿热、泻火、凉血、祛瘀、解毒的功效，主治实热便秘；热结胸痞；湿热泻痢；黄疸；淋病；水肿腹满；小便不利；目赤；咽喉肿痛；口舌生疮；胃热呕吐；吐血；咯血；衄血；便血；尿血；蓄血；经闭；产后瘀滞腹痛；症瘕积聚；跌打损伤；热毒痈疡；丹毒；烫伤等证。
泽泻，味甘，性寒。归肾、膀胱经。
功效主治：利水，渗湿，泄热。用于治小便不利，水肿胀满，呕吐，泻痢，痰饮，脚气，淋病，尿血。
陈皮，性温，味辛、味苦。归肺、脾经。
功效主治：理气健脾，调中，燥湿，化痰。用于脘腹胀满，食少吐泻，咳嗽痰多。
枳壳，性温，味苦、辛、酸。归脾经、胃经。
功效主治：理气宽中、行滞消胀。属理气药，主要用于胸胁气滞，胀满疼痛，食积不化，痰饮内停，脏器下垂等症。
佩兰，味辛，性平，归脾，胃，肺经。
功效主治：解暑化湿，辟秽和中。用于暑湿，寒热头痛，湿润内蕴，脘痞不饥，恶心呕吐，口中甜腻，消洵等证。
香附，味辛、微苦，味微甘，平。归肝、脾、三焦经。
功效主治：疏肝解郁，理气宽中，调经止痛。用于肝郁气滞，胸胁胀痛，疝气疼痛，乳房胀痛，脾胃气滞，脘腹痞闷，胀满疼痛，月经不调，经闭痛经。
本发明采用上述配方后，方中以白术、茯苓、薏仁为主药，健脾利湿，辅与苍术燥湿醒脾，大黄、泽泻，泻下攻积，通调水道，陈皮、枳壳、佩兰、香附芳香化湿，理气和中为佐使药，诸药合用达到健脾化湿，理气消脂之功效。
并且，本方根据鸡的肠道较短，肌胃有鸡内金覆盖等生理特点，隧用大黄、泽泻，泻下攻积，增强药效；用陈皮、枳壳、佩兰、香附引药归经，促进水液气化，产生尿液后排出体外。
将上述配方制成汤剂并采用停水喂药的方式，保证每只鸡都可以足量地摄入中药，从而保证其降脂的效果，实验证明，其最终获得了意想不到的显著效果。
附图说明
下面结合附图中的实施例对本发明作进一步的详细说明，但并不构成对本发明的任何限制。
图1是本发明实验例中提取rna的电泳图；
图2是本发明实验例中β-actin基因、fas基因、lpl基因标准曲线图与溶解曲线图。
其中：a、c、e分别是β-actin基因、fas基因、lpl基因的标准曲线；b、d、f分别为β-actin基因、fas基因、lpl基因的溶解曲线。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步的详细说明，但并不构成对本发明的任何限制。
本发明的一种用于降低鸡肌内脂肪的中药组合物，其特征在于，该中药组合物由下述重量份的中药原料制成：白术4-12份、茯苓4-12份、薏仁4-12份、苍术2-8份、大黄0.5-6份、泽泻0.5-6份、陈皮0.5-6份、枳壳0.5-6份、佩兰0.5-6份及香附0.5-6份。
优选地，该中药组合物由下述重量份的中药原料制成：白术5-9份、茯苓5-9份、薏仁5-9份、苍术3-6份、大黄1-3份、泽泻1-3份、陈皮1-5份、枳壳1-5份、佩兰1-5份及香附1-5份。
进一步优选地，该中药组合物由下述重量份的中药原料制成：白术7份、茯苓7份、薏仁8份、苍术4份、大黄2份、泽泻2份、陈皮3份、枳壳3份、佩兰3份及香附3份。
本发明的一种制备上述中药组合物汤剂的方法，该方法包括下述步骤：
(1)按重量份称取各中药原料，打碎后混合均匀形成中药混合粉末，按受体每公斤体重0.8-2克的用量，称取中药混合粉末，备用；(2)将称取的中药混合粉末置入陶瓷容器中，按中药混合粉末体积加入其体积量3-5倍的清水，浸泡30分钟后，采用武火煮开，再转文火慢熬10-15分钟，过滤得一次药汁；按原始中药混合粉末体积量复水1-2倍，采用武火煮开，转文火慢熬15-20分钟，静置自然冷却至室温，过滤得二次药汁，混合一次药汁和二次药汁，得中药组合物汤剂。
本发明的一种上述中药组合物汤剂的使用方法，该方法为：在给药前先让鸡停水两小时，然后根据每只鸡两小时的饮用量，计算待喂药鸡群所需水的总量，根据该饮水总量将汤剂兑水得药水，每天一次顿服。
实施例1
配方：白术4份、茯苓4份、薏仁4份、苍术2份、大黄0.5份、泽泻0.5份、陈皮0.5份、枳壳0.5份、佩兰0.5份及香附0.5份。
汤剂制备方法：(1)按重量份称取各中药原料，打碎后混合均匀形成中药混合粉末，按受体每公斤体重0.8克的用量，称取中药混合粉末，备用；(2)将称取的中药混合粉末置入陶瓷容器中，按中药混合粉末体积加入其体积量3倍的清水，浸泡30分钟后，采用武火煮开，再转文火慢熬105分钟，过滤得一次药汁；按原始中药混合粉末体积量复水1倍，采用武火煮开，转文火慢熬15分钟，静置自然冷却至室温，过滤得二次药汁，混合一次药汁和二次药汁，得中药组合物汤剂。
汤剂使用方法：在给药前先让鸡停水两小时，然后根据每只鸡两小时的饮用量，计算待喂药鸡群所需水的总量，根据该饮水总量将汤剂兑水得药水，每天一次顿服。
实施例2
配方：白术5份、茯苓5份、薏仁5份、苍术3份、大黄1份、泽泻1份、陈皮1份、枳壳1份、佩兰1份及香附1份。
汤剂制备方法：(1)按重量份称取各中药原料，打碎后混合均匀形成中药混合粉末，按受体每公斤体重1.5克的用量，称取中药混合粉末，备用；(2)将称取的中药混合粉末置入陶瓷容器中，按中药混合粉末体积加入其体积量4倍的清水，浸泡30分钟后，采用武火煮开，再转文火慢熬12分钟，过滤得一次药汁；按原始中药混合粉末体积量复水1.5倍，采用武火煮开，转文火慢熬18分钟，静置自然冷却至室温，过滤得二次药汁，混合一次药汁和二次药汁，得中药组合物汤剂。
汤剂使用方法与实施例1相同。
实施例3
配方：白术7份、茯苓7份、薏仁8份、苍术4份、大黄2份、泽泻2份、陈皮3份、枳壳3份、佩兰3份及香附3份。
汤剂制备方法：(1)按重量份称取各中药原料，打碎后混合均匀形成中药混合粉末，按受体每公斤体重2克的用量，称取中药混合粉末，备用；(2)将称取的中药混合粉末置入陶瓷容器中，按中药混合粉末体积加入其体积量4倍的清水，浸泡30分钟后，采用武火煮开，再转文火慢熬15分钟，过滤得一次药汁；按原始中药混合粉末体积量复水2倍，采用武火煮开，转文火慢熬20分钟，静置自然冷却至室温，过滤得二次药汁，混合一次药汁和二次药汁，得中药组合物汤剂。
汤剂使用方法与实施例1相同。
实施例4
配方：白术9份、茯苓9份、薏仁9份、苍术6份、大黄3份、泽泻3份、陈皮5份、枳壳5份、佩兰5份及香附5份。
汤剂制备方法与实施例2相同。
汤剂使用方法与实施例1相同。
实施例5
配方：白术12份、茯苓12份、薏仁12份、苍术8份、大黄6份、泽泻6份、陈皮6份、枳壳6份、佩兰6份及香附6份。
汤剂制备方法与实施例3相同。
汤剂使用方法与实施例1相同。
实验例
1材料与方法
1.1试验动物与饲养管理选用体重均一的、健康的1日龄五华三黄鸡母鸡240只。将其随机均匀地分为6个组：对照组和五组试验处理组，每组4个重复，每个重复10只鸡。对照组喂食普通全价配合饲料，五组试验组在普通全价配合饲料基础上分别添加上述实施例1至5所制得的汤剂，试验期为120d。
所有试验鸡按免疫常规程序进行免疫，育雏期采用纸箱平养饲养方式，雏鸡自由采食、饮水，采用灯泡23h光照来保温，分为0-2周龄、3-6周龄、7-14周龄和15-17周龄4个阶段饲养。0-6周龄每天喂食6次。6周龄以后转入育成期，进入育成期后进行笼养。早、中、晚各喂料1次。试验期间每日定时观察鸡群的健康状况并作好记录。
1.2试验饲料试验鸡基础日粮组成成分及营养水平见表1。
表1各阶段基础饲粮配比(％)
1.3样品采集第30、60、90、120日龄从对照组、试验组中随机抽取体重中等、体况健康的五华三黄鸡各5只，屠宰前十二个小时禁止入食(不禁水)，称重，空腹心脏采血2ml(肝素钠抗凝)，4℃、3000r/m离心10min，取上清，移至ep管中，-20℃冰箱保存备用，用以进行血液生化指标(tg、vldl)的测定。屠宰，称肝重，切取部分肝脏组织，冰上迅速研磨成浆，采用动物组织rna提取试剂盒(福际生物，成都)提取肝脏组织中的总rna，通过荧光定量pcr来检测目的基因的实时表达量，本研究定量基因及其引物序列见表2。
表2pcr引物序列
注：上表中，基因fas和β-actin详见【高环.一种微生态制剂对芦花鸡生长性能及组织中fas与apob基因表达的影响[d].长沙:湖南农业大学,2015】；基因lpl详见【王晶.广西三黄鸡肉质性状分析及lpl、h-fabp基因表达与肌内脂肪含量的相关研究[d].南宁:广西大学,2013】
1.4检测指标及方法血清中甘油三酯(tg)、总胆固醇(tc)、高密度脂蛋白胆固醇(hdl-c)、低密度脂蛋白胆固醇(ldl-c)含量测定参照试剂盒说明书进行，试剂盒购买于南京建成生物工程公司。
1.5数据处理所有数据处理与分析采用统计软件spss22.0进行单因素方差分析和duncan氏法进行多重比较，结果用平均值±标准误表示，以p＜0.05为差异显著性标准。
2实验结果
2.1复方中草药制剂对三黄鸡血脂水平的影响
由表3所示，在整个实验期间随着日龄的增加，五华三黄鸡血清中总胆固醇和高密度脂蛋白胆固醇含量随饲养日龄的增加呈增长趋势，在相同的饲养日龄时，实验组3的总胆固醇含量显著低于对照组(p<0.05)，而高密度脂蛋白胆固醇的含量实验组较对照组更高(p<0.05)；实验期间各处理组血清中甘油三酯的含量呈下降趋势，尤其是实验组3与对照组差异显著，但低密度脂蛋白胆固醇在整个实验期间各组变化不明显，实验组略低于对照组，差异不显著(p>0.05)。
表3复方中草药制剂对五华三黄鸡血清生化指标的影响
注：上述试验组1至5分别对应喂投实施例1至5所制得的汤剂。同行肩标不同小写字母表示组内差异显著(p<0.05)，无字母或相同小写字母表示组内差异不显著(p>0.05)；同列肩标不同大写字母表示组间差异显著(p<0.05)，字母或相同大写字母表示组间差异不显著(p>0.05)；下表同。
2.2复方中草药制剂对五华三黄鸡肝脏fas、lpl基因mrna表达量的影响
2.2.1rna提取结果根据试剂盒提取总rna，应用1％的琼脂糖凝胶电泳来检测rna的完整性，检测结果如图1所示，可清楚看到图中有28s、18s和5s三条带，说明rna结构完整，并且od260/od280值大于1.8，故可以作为后续试验中rt-pcr的模板。
2.2.2荧光定量pcr结果
2.2.2.1目的基因及β-actin的标准曲线和溶解曲线如图2。
双标准曲线法被应用以分析目的基因表达量的差异。通过ct值与标准曲线比较得到样品的拷贝数，采用相对定量的方式，即目的基因copies/内参copies(f值)来表示试验数据，本试验以β-actin基因为内参。在模板相对浓度梯度为5-1-5-5范围内构建标准曲线，内参基因β-actin对应的扩增效率为104.26％，一致系数r2＝0.9991；目的基因fas对应的扩增效率为100.40％，一致系数r2＝0.9968；目的基因lpl对应的扩增效率为97.44％，一致系数r2＝0.9999。溶解曲线峰值稳定单一，无杂峰(图2)。
2.2.2.2五华鸡肝脏组织中fas、lpl基因表达量的检测
表4统计了不同饲养日龄鸡肝脏中fas、lpl基因的表达量。从表中可以看到实验各组鸡肝脏中fas基因表达量均低于对照组，尤其是实验组3(p<0.05)，但随着鸡的生长，fas基因表达量成上升的趋势；且实验组鸡肝脏中lpl基因的表达高于对照组，尤其是鸡在31-59d这段饲养期间，差异显著(p<0.05)，其中中药处理组3与对照组差异最为明显。
表4添加中草药制剂对肝脏fas、lpl基因mrna表达量的影响
3讨论
脂肪在生物体内广泛分布，对于维持生物体生命活动具有极其重要的生物功能。体内脂质代谢相关指标的高低反映着机体的脂质代谢情况，同时，家禽脂质代谢水平与脂肪代谢酶的活性和含量紧密相关。中草药富含生物碱、有机酸等生物活性物质，不同中草药复合配伍后，产生协同作用，可以调节机体内的物质代谢，有些微量元素还是酶的激活剂。
试验结果表明，该制剂可使试验组血清中tg、tc、ldl-c含量与对照组相比出现不同程度的降低，并显著提高血清中hdl-c含量(p<0.05)，与现有研究结果大致相同，说明该方剂组分能够有效调节五华三黄鸡脂质代谢，改善血脂水平。
大量研究表明fas是调控脂肪酸合成的主效基因，在肝脏、腹部等组织中大量表达，脂肪酸合成酶在肝脏中将乙酰辅酶a缩化成脂肪酸，产物结合甘油形成tg。现有研究发现降低肝脏等组织中fas表达量，能有效降低血清中tg、tc等血脂含量。本次试验中，喂食复方中草药制剂的五华三黄鸡肝脏组织中fas表达量显著低于对照组(p<0.05)，其血浆中tg含量相较对照组有显著下降的趋势(p<0.05)，血浆tg含量与fas在肝脏中的表达量呈现正相关的关系，说明本方剂可以有效抑制肝脏组织中fas基因表达，降低肝脏中脂肪酸的合成，调控动物体脂肪沉积。lpl在水解血浆脂蛋白的过程中是一个转运脂类到外围组织的限速酶,它的生理功能主要是水解极低密度脂蛋白(vldl)中的甘油三酯,负责脂肪的贮存。
本实验鸡日粮中添加中草药复合制剂后，肝脏中lpl表达量随添加时间的增加呈现先升高后降低趋势，说明中草药复合制剂可以通过增强lpl的活性来提高肝脏脂质代谢能力。
4结论
本研究表明了本发明中的复方中草药制剂可以有效调节五华三黄鸡脂质代谢，可显著下调肝脏组织中脂肪酸合成酶fas的基因表达和上调脂蛋白酯酶lpl基因在肝脏组织中的表达，提高了肝脏脂质代谢的能力，对机体内脂肪的沉积有一定的调控作用。
以上所举实施例为本发明的较佳实施方式，仅用来方便说明本发明，并非对本发明作任何形式上的限制，任何所属技术领域中具有通常知识者，若在不脱离本发明所提技术特征的范围内，利用本发明所揭示技术内容所作出局部更动或修饰的等效实施例，并且未脱离本发明的技术特征内容，均仍属于本发明技术特征的范围内。
1.一种用于降低鸡肌内脂肪的中药组合物，其特征在于，该中药组合物由下述重量份的中药原料制成：白术4-12份、茯苓4-12份、薏仁4-12份、苍术2-8份、大黄0.5-6份、泽泻0.5-6份、陈皮0.5-6份、枳壳0.5-6份、佩兰0.5-6份及香附0.5-6份。
2.根据权利要求1所述的一种用于降低鸡肌内脂肪的中药组合物，其特征在于，该中药组合物由下述重量份的中药原料制成：白术5-9份、茯苓5-9份、薏仁5-9份、苍术3-6份、大黄1-3份、泽泻1-3份、陈皮1-5份、枳壳1-5份、佩兰1-5份及香附1-5份。
3.根据权利要求1或2所述的一种用于降低鸡肌内脂肪的中药组合物，其特征在于，该中药组合物由下述重量份的中药原料制成：白术7份、茯苓7份、薏仁8份、苍术4份、大黄2份、泽泻2份、陈皮3份、枳壳3份、佩兰3份及香附3份。
4.一种制备上述任一权利要求所述中药组合物的方法，其特征在于，该方法包括下述步骤：
(1)按重量份称取各中药原料，打碎后混合均匀形成中药混合粉末，按受体每公斤体重0.8-2克的用量，称取中药混合粉末，备用；(2)将称取的中药混合粉末置入陶瓷容器中，浸泡后熬煮成汤剂。
5.根据权利要求4所述的中药组合物的制备方法，其特征在于，步骤(2)具体为：将称取的中药混合粉末置入陶瓷容器中，按中药混合粉末体积加入其体积量3-5倍的清水，浸泡30分钟后，采用武火煮开，再转文火慢熬10-15分钟，过滤得一次药汁；按原始中药混合粉末体积量复水1-2倍，采用武火煮开，转文火慢熬15-20分钟，静置自然冷却至室温，过滤得二次药汁，混合一次药汁和二次药汁，得中药组合物汤剂。
6.一种权利要求4或5所述中药组合物的使用方法，其特征在于，该方法为：在给药前先让鸡停水两小时，然后根据每只鸡两小时的饮用量，计算待喂药鸡群所需水的总量，根据该饮水总量将汤剂兑水得药水，每天一次顿服。
技术总结