本发明涉及药物分析领域，具体涉及一种分离纯化环磺酮原药样品中未知杂质的方法。
背景技术：
：本领域公知的，药物中的杂质是影响药物纯度的主要因素，如果药物中所含杂质超过质量标准规定的限量要求，极有可能造成药物的外观性状、理化参数发生改变，甚至影响药物的稳定性和使用效果活性降低，对动植物、人、环境以及农产品安全产生重要影响。近年来，随着环保意识和农药安全意识的提高，药物中杂质的检测和分离技术愈发关键。药物中的杂质指任何影响药物纯度的物质，包括有机杂质、无机杂质和残留溶剂。无机杂质和残留溶剂的研究及检测方法相对比较成熟，方法的通用性比较强，也已得到了较好的研究与控制。与无机杂质及残留溶剂相比，有机杂质的研究与控制要复杂得多，在杂质的分离鉴定、杂质来源分析、杂质安全性研究、杂质限度确定等方面，都需要结合药物的结构特点、制备工艺、贮藏稳定性、临床应用特点等进行大量的深入细致的研究。由此，准确分离环磺酮原药样品中有机杂质并纯化其含量对于控制药物产品质量具有重要的意义。目前，还未见对环磺酮原药样品中单种有机杂质进行分离检测的相关报道。技术实现要素：为了解决上述技术问题，本发明提供了一种分离纯化环磺酮原药样品中未知杂质的方法，至少包括以下步骤：(1)称取待检测的环磺酮原药，加入溶剂溶解，得到环磺酮原药溶液；(2)将环磺酮原药溶液注入色谱仪中进行检测，并控制其进样量、紫外检测波长、色谱柱、柱温、流动相和流速，得到结果。作为本发明一种优选的技术方案，步骤(1)中所述的溶剂选自dmf、甲醇、乙腈、水中的一种或多种。作为本发明一种优选的技术方案，步骤(1)中所述的溶剂为dmf和乙腈，其中dmf和乙腈的体积比为1：(1～5)。作为本发明一种优选的技术方案，所述环磺酮原药溶液的浓度为100～300mg/ml；所述进样量为5～20ml。作为本发明一种优选的技术方案，所述紫外检测波长为210nm～280nm。作为本发明一种优选的技术方案，所述色谱柱为watersxbridgec18，长度为250mm，内径为30mm，粒径10μm。作为本发明一种优选的技术方案，所述流动相选自甲醇、乙腈、水、磷酸二氢钾水溶液、磷酸二氢钠水溶液中的一种或多种。作为本发明一种优选的技术方案，所述流动相为乙腈和磷酸二氢钾水溶液。作为本发明一种优选的技术方案，所述流动相在0～30min内为梯度洗脱，在0min时，乙腈和磷酸二氢钾水溶液的体积比为1:9；在30min时，乙腈和磷酸二氢钾水溶液的体积比为(7:3)～(9:1)。作为本发明一种优选的技术方案，所述流速为20～60ml/min。有益效果：本发明提供了一种分离纯化环磺酮原药样品中未知杂质的方法，通过制备液相色谱技术，采用一定配比的乙腈和磷酸二氢钾水溶液作为流动相进行分析，控制其他核心参数，能够快速准确地将环磺酮原药样品中的单种杂质进行有效分离，且该方法操作简便、安全，测试结果也说明分离纯度高、准确度高、重复性好，为药物后续工艺优化研究作出了很大的贡献。附图说明为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。图1为实施例1中环磺酮原药样品hplc～ms预扫描的hplc谱图。图2为实施例1中环磺酮原药样品hplc～ms预扫描的目标杂质ms谱图。图3为实施例1分离出的杂质纯品的hplc纯度谱图。图4为实施例1分离出的杂质纯品的hplc～ms谱图。图5为实施例1分离出的杂质纯品的hnmr谱图。图6为实施例1分离出的杂质纯品的cnmr谱图。具体实施方式参选以下本发明的优选实施方法的详述以及包括的实施例可更容易地理解本发明的内容。除非另有限定，本文使用的所有技术以及科学术语具有与本发明所属领域普通技术人员通常理解的相同的含义。当存在矛盾时，以本说明书中的定义为准。如本文所用术语“由…制备”与“包含”同义。本文中所用的术语“包含”、“包括”、“具有”、“含有”或其任何其它变形，意在覆盖非排它性的包括。例如，包含所列要素的组合物、步骤、方法、制品或装置不必仅限于那些要素，而是可以包括未明确列出的其它要素或此种组合物、步骤、方法、制品或装置所固有的要素。连接词“由…组成”排除任何未指出的要素、步骤或组分。如果用于权利要求中，此短语将使权利要求为封闭式，使其不包含除那些描述的材料以外的材料，但与其相关的常规杂质除外。当短语“由…组成”出现在权利要求主体的子句中而不是紧接在主题之后时，其仅限定在该子句中描述的要素；其它要素并不被排除在作为整体的所述权利要求之外。当量、浓度、或者其它值或参数以范围、优选范围、或一系列上限优选值和下限优选值限定的范围表示时，这应当被理解为具体公开了由任何范围上限或优选值与任何范围下限或优选值的任一配对所形成的所有范围，而不论该范围是否单独公开了。例如，当公开了范围“1至5”时，所描述的范围应被解释为包括范围“1至4”、“1至3”、“1至2”、“1至2和4至5”、“1至3和5”等。当数值范围在本文中被描述时，除非另外说明，否则该范围意图包括其端值和在该范围内的所有整数和分数。此外，本发明要素或组分前的不定冠词“一种”和“一个”对要素或组分的数量要求(即出现次数)无限制性。因此“一个”或“一种”应被解读为包括一个或至少一个，并且单数形式的要素或组分也包括复数形式，除非所述数量明显旨指单数形式。为了解决上述技术问题，本发明提供了一种分离纯化环磺酮原药样品中未知杂质的方法，至少包括以下步骤：(1)称取待检测的环磺酮原药，加入溶剂溶解，得到环磺酮原药溶液；(2)将环磺酮原药溶液注入色谱仪中进行检测，并控制其进样量、紫外检测波长、色谱柱、柱温、流动相和流速，得到结果。在一种优选的实施方式中，步骤(1)中所述的溶剂选自dmf、甲醇、乙腈、水中的一种或多种。本发明所述“dmf”为n,n-二甲基甲酰胺，是一种化学物品，无色透明液体，既是一种用途极广的化工原料，也是一种用途很广的优良的溶剂。除卤化烃以外能与水及多数有机溶剂任意混合。对多种有机化合物和无机化合物均有良好的溶解能力和化学稳定性。在一种更优选的实施方式中，步骤(1)中所述的溶剂为dmf和乙腈，其中dmf和乙腈的体积比为1：(1～5)。在一种更优选的实施方式中，步骤(1)中所述的溶剂为dmf和乙腈，其中dmf和乙腈的体积比为1：(2～4)。在一种最优选的实施方式中，步骤(1)中所述的溶剂为dmf和乙腈，其中dmf和乙腈的体积比为1：3。在一种优选的实施方式中，所述环磺酮原药溶液的浓度为100～300mg/ml；所述进样量为5～20ml。在一种更优选的实施方式中，所述环磺酮原药溶液的浓度为150～270mg/ml；所述进样量为8～15ml。在一种更优选的实施方式中，所述环磺酮原药溶液的浓度为200mg/ml；所述进样量为10ml。在一种优选的实施方式中，所述紫外检测波长为210nm～280nm。在一种更优选的实施方式中，所述紫外检测波长为230nm～260nm。在一种最优选的实施方式中，所述紫外检测波长为250nm。在一种优选的实施方式中，所述色谱柱为watersxbridgec18，长度为250mm，内径为30mm，粒径10μm。在一种优选的实施方式中，所述流动相选自甲醇、乙腈、水、磷酸二氢钾水溶液、磷酸二氢钠水溶液中的一种或多种。本发明所述磷酸二氢钾水溶液中磷酸二氢钾的质量分数为0.1％。在一种更优选的实施方式中，所述流动相为乙腈和磷酸二氢钾水溶液。在一种更优选的实施方式中，所述流动相在0～30min内为梯度洗脱，在0min时，乙腈和磷酸二氢钾水溶液的体积比为1:9；在30min时，乙腈和磷酸二氢钾水溶液的体积比为(7:3)～(9:1)。在一种最优选的实施方式中，所述流动相在0～30min内为梯度洗脱，在0min时，乙腈和磷酸二氢钾水溶液的体积比为1:9；在30min时，乙腈和磷酸二氢钾水溶液的体积比为8:2。在一种优选的实施方式中，所述流速为20～60ml/min。在一种更优选的实施方式中，所述流速为30-50ml/min。在一种最优选的实施方式中，所述流速为40ml/min。本发明提供了一种分离纯化环磺酮原药样品中未知杂质的方法，该方法操作简便、安全、分离纯度高、线性范围宽、精密度和准确度高、重复性好。其原因可能是由于，在测试前本发明根据环磺酮原药样品的基本特质，选择溶解度效果较好的溶剂对其进行前处理，配置一定的浓度并结合液相制备色谱技术，根据环磺酮的化学性质，控制紫外检测波长、流动相成分及其流速，进行分析，能够快速准确地将环磺酮原药样品中的单种杂质进行有效分离。有必要在此指出的是，以下实施例只用于对本发明作进一步说明，不能理解为对本发明保护范围的限制，该领域的专业技术人员根据上述本发明的内容做出的一些非本质的改进和调整，仍属于本发明的保护范围。另外，如果没有其它说明，所用原料都是市售的，购于国药化学试剂。实施例本实施例所述磷酸二氢钾水溶液中磷酸二氢钾的质量分数为0.1％。本实施例所述磷酸二氢钠水溶液中磷酸二氢钠的质量分数为0.1％。实施例1实施例1提供了一种分离纯化环磺酮原药样品中未知杂质的方法，包括以下步骤：(1)称取待检测的环磺酮原药，加入溶剂溶解，得到环磺酮原药溶液；(2)将环磺酮原药溶液注入色谱仪中进行检测，并控制其进样量、紫外检测波长、色谱柱、柱温、流动相和流速，得到结果。步骤(1)中所述的溶剂为dmf和乙腈，其中dmf和乙腈的体积比为1：3。所述环磺酮原药溶液的浓度为200mg/ml；所述进样量为10ml。所述紫外检测波长为250nm。所述色谱柱为watersxbridgec18，长度为250mm，内径为30mm，粒径10μm。所述流动相在0～30min内为梯度洗脱，在0min时，乙腈和磷酸二氢钾水溶液的体积比为1:9；在30min时，乙腈和磷酸二氢钾水溶液的体积比为8:2。所述流速为40ml/min。所述柱温为25℃。实施例2实施例2与实施例1类似，不同之处在于，所述流动相在0～30min内为梯度洗脱，在0min时，乙腈和磷酸二氢钾水溶液的体积比为1:9；在30min时，乙腈和磷酸二氢钾水溶液的体积比为7:3。实施例3实施例3与实施例1类似，不同之处在于，所述流动相在0～30min内为梯度洗脱，在0min时，乙腈和磷酸二氢钾水溶液的体积比为1:9；在30min时，乙腈和磷酸二氢钾水溶液的体积比为9:1。实施例4实施例4与实施例1类似，不同之处在于，所述流动相为乙腈和磷酸二氢钠。实施例5实施例5与实施例1类似，不同之处在于，所述流速为20ml/min。实施例6实施例6与实施例1类似，不同之处在于，所述流速为60ml/min。实施例7实施例7与实施例1类似，不同之处在于，步骤(1)中所述的溶剂为dmf和乙腈，其中dmf和乙腈的体积比为1：1。实施例8实施例8与实施例1类似，不同之处在于，步骤(1)中所述的溶剂为dmf和乙腈，其中dmf和乙腈的体积比为1：5。性能评价1.纯度测试：将实施例1至实施例8所分离的杂质进行hplc纯度测试，其结果如下表1所示。表1实施例实施例1实施例2实施例3实施例4纯度/％97.696.096.797.2实施例实施例5实施例6实施例7实施例8纯度/％96.394.794.594.8从上表可知，当本发明对环磺酮原药样品进行前处理，控制其紫外检测波长为250nm、流速为40ml/min，流动相在0～30min内采用梯度洗脱方式，在0min时，乙腈和磷酸二氢钾水溶液的体积比为1:9；在30min时，乙腈和磷酸二氢钾水溶液的体积比为8:2，样品中杂质的分离效果最佳，纯度最高可达97.6％。2.对实施例1中的环磺酮原药样品进行hplc～ms，得到hplc谱图和目标杂质ms谱图，分别为图1和图2；对实施例1所分离出的杂质纯品经过hplc、hplc～ms、hnmr、cnmr定性鉴定，其谱图结果如图3、图4、图5、图6所示。从图1中可知，目标杂质的保留时间为4.906min；此外，经过多个谱图分析可知，该未知杂质的分子量为373.78g/mol(化学式：c13h15clf3no4s)，结构式为：前述的实例仅是说明性的，用于解释本发明所述方法的一些特征。所附的权利要求旨在要求可以设想的尽可能广的范围，且本文所呈现的实施例仅是根据所有可能的实施例的组合的选择的实施方式的说明。因此，申请人的用意是所附的权利要求不被说明本发明的特征的示例的选择限制。在权利要求中所用的一些数值范围也包括了在其之内的子范围，这些范围中的变化也应在可能的情况下解释为被所附的权利要求覆盖。当前第1页1 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技术特征：1.一种分离纯化环磺酮原药样品中未知杂质的方法，其特征在于，至少包括以下步骤：
(1)称取待检测的环磺酮原药，加入溶剂溶解，得到环磺酮原药溶液；
(2)将环磺酮原药溶液注入色谱仪中进行检测，并控制其进样量、紫外检测波长、色谱柱、柱温、流动相和流速，得到结果。
2.根据权利要求1所述的一种分离纯化环磺酮原药样品中未知杂质的方法，其特征在于，步骤(1)中所述的溶剂选自dmf、甲醇、乙腈、水中的一种或多种。
3.根据权利要求1所述的一种分离纯化环磺酮原药样品中未知杂质的方法，其特征在于，步骤(1)中所述的溶剂为dmf和乙腈，其中dmf和乙腈的体积比为1：(1～5)。
4.根据权利要求1所述的一种分离纯化环磺酮原药样品中未知杂质的方法，其特征在于，所述环磺酮原药溶液的浓度为100～300mg/ml；所述进样量为5～20ml。
5.根据权利要求1所述的一种分离纯化环磺酮原药样品中未知杂质的方法，其特征在于，所述紫外检测波长为210nm～280nm。
6.根据权利要求1所述的一种分离纯化环磺酮原药样品中未知杂质的方法，其特征在于，所述色谱柱为watersxbridgec18，长度为250mm，内径为30mm，粒径10μm。
7.根据权利要求1所述的一种分离纯化环磺酮原药样品中未知杂质的方法，其特征在于，所述流动相选自甲醇、乙腈、水、磷酸二氢钾水溶液、磷酸二氢钠水溶液中的一种或多种。
8.根据权利要求7所述的一种分离纯化环磺酮原药样品中未知杂质的方法，其特征在于，所述流动相为乙腈和磷酸二氢钾水溶液。
9.根据权利要求8所述的一种分离纯化环磺酮原药样品中未知杂质的方法，其特征在于，所述流动相在0～30min内为梯度洗脱，在0min时，乙腈和磷酸二氢钾水溶液的体积比为1:9；在30min时，乙腈和磷酸二氢钾水溶液的体积比为(7:3)～(9:1)。
10.根据权利要求1所述的一种分离纯化环磺酮原药样品中未知杂质的方法，其特征在于，所述流速为20～60ml/min。
技术总结本发明涉及药物分析领域，具体公开了一种分离纯化环磺酮原药样品中未知杂质的方法，至少包括以下步骤：首先称取待检测的环磺酮原药，加入溶剂溶解，得到环磺酮原药溶液；其次，将环磺酮原药溶液注入色谱仪中进行检测，并控制其进样量、紫外检测波长、色谱柱、柱温、流动相和流速，得到结果。本发明的检测方法能够将环磺酮原药样品中未知杂质有效分离，从而实现精确纯化其杂质的含量，灵敏度高、重现性良好。
技术研发人员：周晓渭
受保护的技术使用者：上海洲锐生物科技有限公司
技术研发日：2020.01.15
技术公布日：2020.06.05
