本发明属于天然药物化学技术领域，具体涉及四种名分别为表儿茶素反式香豆酸酯、表儿茶素反式咖啡酸酯、表没食子儿茶素反式香豆酸酯与表没食子儿茶素反式咖啡酸酯的羟基肉桂酰酯型儿茶素的制备方法和应用。
背景技术：
茶叶中含有丰富的茶多酚，占茶叶干物质的18％-36％。其中，大部分是儿茶素(黄烷醇类)，占茶叶干物质的12％-24％。研究表明，儿茶素是茶叶中重要的滋味物质。而且，儿茶素还具有抗炎、抗氧化、抗癌、心血管和神经保护作用等药理功能。
化学合成实验通常都需要特殊的反应条件，反应所使用的药品试剂通常危险性较大。现有技术中公开的这类儿茶素的合成方法复杂，反应条件苛刻，一般实验室的条件满足不了反应要求，无法完成制备。如何在现有制备方法和反应原料中进行筛选，设计出方法简单、条件温和的该四种羟基肉桂酰酯型儿茶素制备方法，具有重要的意义。
技术实现要素：
本发明要解决的技术问题为克服现有技术中的不足之处，提供一种一类羟基肉桂酰酯型儿茶素的制备方法。
本发明要解决的又一个技术问题为提供一种上述方法制备的一类羟基肉桂酰酯型儿茶素对α-葡萄糖苷酶的抑制作用，可应用于制备降血糖药物。
为解决本发明的技术问题，所提供的技术方案为：
一类羟基肉桂酰酯型儿茶素的制备方法，该类羟基肉桂酰酯型儿茶素包括4种儿茶素，该4种儿茶素的名称分别为表儿茶素反式香豆酸酯即(–)-epicatechin3-o-p-coumaroate、表儿茶素反式咖啡酸酯即(–)-epicatechin3-o-caffeoate、表没食子儿茶素反式香豆酸酯即(–)-epigallocatechin3-o-p-coumaroate、表没食子儿茶素反式咖啡酸酯即(–)-epigallocatechin3-o-caffeoate，其结构式分别如式ⅰ、式ⅱ、式ⅲ和式ⅳ所示，
该类羟基肉桂酰酯型儿茶素的制备方法包括如下步骤：
s1、以表儿茶素即ec为原料，通过全乙酰化、脱去酚羟基上的乙酰基、酚羟基硅烷化及脱去3位乙酰基四个反应后制得5,7,3’,4’-o-四叔丁基二甲基硅基-表儿茶素；
以表没食子儿茶素即egc为原料，通过全乙酰化、脱去酚羟基上的乙酰基、酚羟基硅烷化及脱去3位乙酰基四个反应后制得5,7,3’,4’,5’-o-五叔丁基二甲基硅基-表没食子儿茶素；
s2、制备3”,4”-o-二乙酰基-5,7,3’,4’-o-四叔丁基二甲基硅基-表儿茶素反式咖啡酸酯；
称取92.0mg步骤s1制得的5,7,3’,4’-o-四叔丁基二甲基硅基-表儿茶素于25ml圆底烧瓶中，加入0.2ml干燥的吡啶，2.0ml干燥的二氯甲烷，在冰浴条件下缓慢滴加含有0.18mmol的3,4-o-二乙酰化咖啡酰氯的干燥二氯甲烷3.0ml，室温反应过夜，加适量的水和等体积的二氯甲烷萃取三次，二氯甲烷层用无水硫酸钠干燥后浓缩，经硅胶柱层析以石油醚：乙酸乙酯＝30:1进行洗脱后得到3”,4”-o-二乙酰基-5,7,3’,4’-o-四叔丁基二甲基硅基-表儿茶素反式咖啡酸酯；
s3、制备4”-o-乙酰基-5,7,3’,4’-o-四叔丁基二甲基硅基-表儿茶素反式香豆酸酯；
称取395.0mg步骤s1制得的5,7,3’,4’-o-四叔丁基二甲基硅基-表儿茶素于25ml圆底烧瓶中，加入1.5ml干燥的吡啶，3.0ml干燥的二氯甲烷，在冰浴条件下缓慢滴加含有0.80mmol的4-o-乙酰化香豆酰氯的干燥二氯甲烷5.0ml，室温反应过夜，加适量的水和等体积的二氯甲烷萃取三次，二氯甲烷层用无水硫酸钠干燥后浓缩，经硅胶柱层析，以石油醚：乙酸乙酯＝50:1进行洗脱后得到4”-o-乙酰基-5,7,3’,4’-o-四叔丁基二甲基硅基-表儿茶素反式香豆酸酯；
s4、制备3”,4”-o-二乙酰基-5,7,3’,4’,5’-o-五叔丁基二甲基硅基-表没食子儿茶素反式咖啡酸酯；
称取500.0mg步骤s1制得的5,7,3’,4’,5’-o-五叔丁基二甲基硅基-表没食子儿茶素于100ml圆底烧瓶中，加入2.0ml干燥的吡啶，5.0ml干燥的二氯甲烷，在冰浴条件下缓慢滴加含有1.9mmol的3,4-o-二乙酰化咖啡酰氯的干燥二氯甲烷8.0ml，室温反应过夜，加适量的水和等体积的二氯甲烷萃取三次，二氯甲烷层用无水硫酸钠干燥后浓缩，经硅胶柱层析以石油醚：乙酸乙酯＝30:1进行洗脱后得到3”,4”-o-二乙酰基-5,7,3’,4’,5’-o-五叔丁基二甲基硅基-表没食子儿茶素反式咖啡酸酯；
s5、制备4”-o-乙酰基-5,7,3’,4’,5’-o-五叔丁基二甲基硅基-表没食子儿茶素反式香豆酸酯；
称取370.0mg步骤s1制得的5,7,3’,4’,5’-o-五叔丁基二甲基硅基-表没食子儿茶素于100ml圆底烧瓶中，加入2.0ml干燥的吡啶，5.0ml干燥的二氯甲烷，在冰浴条件下缓慢滴加含有1.5mmol的4-o-乙酰化香豆酰氯的干燥二氯甲烷7.0ml，室温反应过夜，加适量的水和等体积的二氯甲烷萃取三次，二氯甲烷层用无水硫酸钠干燥后浓缩，经硅胶柱层析以石油醚：乙酸乙酯＝50:1进行洗脱后得到4”-o-乙酰基-5,7,3’,4’,5’-o-五叔丁基二甲基硅基-表没食子儿茶素反式香豆酸酯；
s6、制备表儿茶素反式咖啡酸酯；
称取164.0mg步骤s2制得的3”,4”-o-二乙酰基-5,7,3’,4’-o-四叔丁基二甲基硅基-表儿茶素反式咖啡酸酯于25ml圆底烧瓶中，加入28.0mg氟氢化钾，再加入6.0ml干燥的甲醇，50℃下反应6小时，反应产物经lh-20凝胶柱层析，以甲醇洗脱后得到表儿茶素反式咖啡酸酯；
s7、制备表没食子儿茶素反式咖啡酸酯；
称取60.0mg步骤s4制得的3”,4”-o-二乙酰基-5,7,3’,4’,5’-o-五叔丁基二甲基硅基-表没食子儿茶素反式咖啡酸酯于25ml圆底烧瓶中，加入200.0mg氟氢化钾，再加入5.0ml干燥的甲醇，50℃下反应6小时，反应产物经lh-20凝胶柱层析，以甲醇洗脱后得到表没食子儿茶素反式咖啡酸酯；
s8、制备表儿茶素反式香豆酸酯；
称取163.0mg步骤s3制得的4”-o-乙酰基-5,7,3’,4’-o-四叔丁基二甲基硅基-表儿茶素反式香豆酸酯于25ml圆底烧瓶中，加入136.0mg氟氢化钾，再加入6.0ml干燥的甲醇，室温下反应3.5小时，待反应结束后加入适量的水，用等体积的乙酸乙酯萃取三次，乙酸乙酯层用无水硫酸钠干燥后浓缩，经硅胶柱层析以石油醚：乙酸乙酯＝1:1进行洗脱后得到4”-o-乙酰基-表儿茶素反式香豆酸酯；
称取50.0mg的4”-o-乙酰基-表儿茶素反式香豆酸酯于10ml圆底烧瓶中，加450.0mg醋酸铵，加入体积分数为80％甲醇水溶液2.0ml，室温反应5.5小时，反应产物经lh-20凝胶柱层析，以甲醇洗脱后得到表儿茶素反式香豆酸酯；
s9、制备表没食子儿茶素反式香豆酸酯；
称取130.0mg步骤s5制得的4”-o-乙酰基-5,7,3’,4’,5’-o-五叔丁基二甲基硅基-表没食子儿茶素反式香豆酸酯于25ml圆底烧瓶中，加入476.0mg氟氢化钾，再加入8.0ml干燥的甲醇，50℃下反应6小时，反应产物浓缩后经lh-20凝胶柱层析，以甲醇洗脱后得到4”-o-乙酰基-表没食子儿茶素反式香豆酸酯；
称取36.0mg的4”-o-乙酰基-表没食子儿茶素反式香豆酸酯于10ml圆底烧瓶中，加460.0mg醋酸铵，加入体积分数为80％甲醇水溶液2.0ml，室温反应5小时，反应产物经lh-20凝胶柱层析，以甲醇洗脱后得到表没食子儿茶素反式香豆酸酯；
其中步骤s2、s3、s4、s5不分先后顺序，步骤s6、s7、s8、s9不分先后顺序。
作为一类羟基肉桂酰酯型儿茶素的制备方法的进一步改进，
优选的，步骤s2中所述的3,4-o-二乙酰化咖啡酰氯通过以下方式制得：
称取180.1mg咖啡酸于25ml圆底烧瓶中，加入0.3ml干燥的吡啶，0.5ml醋酸酐，在干燥管保护下室温搅拌过夜。待反应结束后，加入水终止反应，经旋转蒸干后即可得到乙酰化咖啡酸即3,4-o-二乙酰化咖啡酸；将反应后的乙酰化咖啡酸转至50ml圆底烧瓶中，加入10ml亚硫酰氯，于90℃加热回流3小时即可得到粗品3,4-o-二乙酰化咖啡酰氯，保存备用。
优选的，步骤s3中所述的4-o-乙酰化香豆酰氯通过以下方式制得：
称取656.0mg香豆酸于25ml圆底烧瓶中，加入0.8ml干燥的吡啶，1.0ml醋酸酐，在干燥管保护下室温搅拌过夜。待反应结束后，加入水终止反应，经旋转蒸干后即可得到乙酰化香豆酸；将反应后的乙酰化香豆酸转至25ml圆底烧瓶中，加入3.0ml亚硫酰氯，于90℃加热回流3小时即可得到粗品4-o-乙酰化香豆酰氯，保存备用。
为解决本发明的又一个技术问题，所提供的又一个技术方案为，采用上述制备方法制得的一类羟基肉桂酰酯型儿茶素在制备降血糖药物上的用途。
作为一类羟基肉桂酰酯型儿茶素在制备降血糖药物上的用途的进一步改进，所述降血糖药物包括口服型和注射型，所述口服型包括片剂、胶囊剂、颗粒剂、滴丸剂，所述注射型包括注射液、混旋液。
本发明相比现有技术的有益效果在于：
1)本发明提供了四种羟基肉桂酰酯型儿茶素的合成方法，与现有技术的合成方法不同，本合成实验所采用的羟基保护基团、酯化反应条件以及对保护基团的水解条件等具有明显的优势，该制备方法简单，条件温和，容易实施，成本较低，具有非常好的应用前景
2)本发明制备的四种羟基肉桂酰酯型儿茶素具有医学活性，对α-葡萄糖苷酶活性有一定抑制作用，可以用于制备口服型和注射型的降血糖药物，对农业和医药领域具有重要的意义。
附图说明
图1为四种羟基肉桂酰酯型儿茶素的合成路径；
附图中标记的含义如下：
1a、3,5,7,3’,4’-o-五乙酰基-表儿茶素
1b、3,5,7,3’,4’,5’-o-六乙酰基-表没食子儿茶素
2a、3-o-乙酰基-表儿茶素
2b、3-o-乙酰基-表没食子儿茶素
3a、3-o-乙酰基-5,7,3’,4’-o-四叔丁基二甲基硅基-表儿茶素
3b、3-o-乙酰基-5,7,3’,4’,5’-o-五叔丁基二甲基硅基-表没食子儿茶素
4a、5,7,3’,4’-o-四叔丁基二甲基硅基-表儿茶素
4b、5,7,3’,4’,5’-o-五叔丁基二甲基硅基-表没食子儿茶素
5a、3,4-o-二乙酰化咖啡酰氯
5b、4-o-乙酰化香豆酰氯
6a、3”,4”-o-二乙酰基-5,7,3’,4’-o-四叔丁基二甲基硅基-表儿茶素反式咖啡酸酯
6b、4”-o-乙酰基-5,7,3’,4’-o-四叔丁基二甲基硅基-表儿茶素反式香豆酸酯
6c、3”,4”-o-二乙酰基-5,7,3’,4’,5’-o-五叔丁基二甲基硅基-表没食子儿茶素反式咖啡酸酯
6d、4”-o-乙酰基-5,7,3’,4’,5’-o-五叔丁基二甲基硅基-表没食子儿茶素反式香豆酸酯
7a、4”-o-乙酰基-表儿茶素反式香豆酸酯
7b、4”-o-乙酰基-表没食子儿茶素反式香豆酸酯
8a、表儿茶素反式咖啡酸酯
8b、表儿茶素反式香豆酸酯
8c、表没食子儿茶素反式咖啡酸酯
8d、表没食子儿茶素反式香豆酸酯
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步描述：
本部分对本发明实验中所使用到的材料以及实验方法进行一般性的描述。虽然为实现本发明目的所使用的许多材料和操作方法是本领域公知的，但是本发明在此作尽可能详细描述。本领域技术人员清楚，在下文中，如果未特别说明，本发明所用材料、设备和操作方法是本领域公知的。
实施例1
表儿茶素反式香豆酸酯、表儿茶素反式咖啡酸酯、表没食子儿茶素反式香豆酸酯与表没食子儿茶素反式咖啡酸酯的羟基肉桂酰酯型儿茶素的制备；
1.1仪器与试剂
1h核磁共振谱采用agilentdd2600mhz核磁共振仪；质谱采用agilent6465uplc-q-tof-ms。
表儿茶素(ec)和表没食子儿茶素(egc)分别购买于成都生物制药有限公司和湖北巨胜科技有限公司；咖啡酸和对香豆酸购买于安耐吉化学；其它试剂均为国产分析纯。
1.2表儿茶素反式香豆酸酯、表儿茶素反式咖啡酸酯、表没食子儿茶素反式香豆酸酯与表儿茶素反式咖啡酸酯的羟基肉桂酰酯型儿茶素的合成路线如图1所示；
1.3具体实施方法：
化合物1a的合成：
称取1.16g(4.0mmol)表儿茶素(ec)于50ml圆底烧瓶中，加入6.0ml干燥的吡啶，8.0ml醋酸酐(84.6mmol)，在干燥管保护下室温搅拌过夜。待反应结束后，加入水终止反应，经旋转蒸干后即可得到ec全乙酰化产物3,5,7,3’,4’-o-五乙酰基-表儿茶素(1a,1.9g,白色粉末，收率95％)。1hnmr(600mhz,cdcl3):7.33(1h,s),7.25(1h,d,j＝8.4hz),7.18(1h,d,j＝8.4hz),6.65(1h,brs),6.55(1h,brs),5.37(1h,brs),5.09(1h,s),2.95(1h,dd,j＝18.0,4.2hz),2.87(1h,brd,j＝18.0hz),2.27(9h,s),2.26(3h,s),1.90(3h,s)。
化合物1b的合成：
称取1.2g(3.9mmol)表没食子儿茶素(egc)于50ml圆底烧瓶中，加入6.0ml干燥的吡啶，10.0ml醋酸酐(105.7mmol)，在干燥管保护下室温搅拌过夜。待反应结束后，加入水终止反应，经旋转蒸干后即可得到egc全乙酰化产物：3,5,7,3’,4’,5’-o-六乙酰基-表没食子儿茶素(1b，2.1g,白色粉末，收率94％)。1hnmr(600mhz,cdcl3):7.20(2h,s),6.65(1h,brs),6.55(1h,brs),5.36(1h,brs),5.07(1h,s),2.94(1h,dd,j＝18.0,4.2hz),2.88(1h,brd,j＝17.4hz),2.25-2.28(15h,m),1.92(3h,s)。
化合物2a的合成：
称取500.0mg(1.0mmol)化合物1a于100ml圆底烧瓶中，加入80％甲醇水溶液50ml，7.8g(101.2mmol)醋酸铵，室温搅拌过夜。待反应结束后，加入适量的水，经旋转浓缩去除甲醇，用等体积的乙酸乙酯萃取三次，浓缩乙酸乙酯层，经硅胶柱层析，以乙酸乙酯：甲醇＝20:1进行洗脱后得到化合物3-o-乙酰基-表儿茶素(2a，259.0mg,白色粉末，收率78％)。1hnmr(600mhz,dmso-d6):9.29(1h,s),9.02(1h,s),8.92(1h,s),8.83(1h,s),6.83(1h,s),6.69(1h,d,j＝8.4hz),6.65(1h,d,j＝7.8hz),5.93(1h,s),5.76(1h,s),5.23(1h,brs),4.93(1h,s),2.87(1h,dd,j＝17.4,4.2hz),2.58(1h,brd,j＝16.8hz),1.87(3h,s)。
化合物2b的合成：
称取4.2g(1.0mol)化合物1b于500ml圆底烧瓶中，加入80％甲醇水溶液80ml，1.0g(11.9mmol)碳酸氢钠，室温搅拌过夜。待反应结束后，加入适量的水，用等体积的乙酸乙酯萃取三次，浓缩乙酸乙酯层，经硅胶柱层析，以乙酸乙酯：甲醇＝1:1进行洗脱后得到化合物3-o-乙酰基-表没食子儿茶素(2b，1.05mg,白色粉末，收率40％)。1hnmr(600mhz,dmso-d6):9.25(1h,s),8.99(1h,s),8.78(1h,s),7.99(1h,s),6.35(2h,s),5.92(1h,d,j＝1.2hz),5.75(1h,d,j＝1.8hz),5.21(1h,brs),4.85(1h,s),2.87(1h,dd,j＝17.4,4.8hz),2.57(1h,brd,j＝16.8hz),1.88(3h,s)。
化合物3a的合成：
称取200.0mg(0.6mmol)化合物2a于100ml圆底烧瓶中，加入干燥的二氯甲烷10ml，816.0mg(12.0mmol)咪唑，40mg(0.33mmol)4-二甲氨基吡啶，在冰浴条件下缓慢滴加含有723.4mg(4.8mmol)叔丁基二甲基氯硅烷的干燥的二氯甲烷溶液10ml。室温搅拌过夜。待反应结束后，加入适量的水，用等体积的二氯甲烷萃取三次，二氯甲烷层溶液用饱和氯化钠洗涤后浓缩，经硅胶柱层析，以石油醚：乙酸乙酯＝100:1进行洗脱后得到化合物3-o-乙酰基-5,7,3’,4’-o-四叔丁基二甲基硅基-表儿茶素(3a，450.0mg,透明油状，收率95％)。1hnmr(600mhz,cdcl3):6.87(1h,s),6.85(1h,d,j＝8.4hz),6.79(1h,d,j＝7.8hz),6.13(1h,brs),5.96(1h,brs),5.37(1h,brs),4.94(1h,s),2.90(1h,dd,j＝17.4,4.2hz),2.83(1h,brd,j＝18.0hz),1.87(3h,s),0.94-0.98(36h,m),0.15-0.21(24h,m)。
化合物3b的合成：
称取500.0mg(1.4mmol)化合物2b于100ml圆底烧瓶中，加入干燥的二氯甲烷10ml，2.4g(35.3mmol)咪唑，100mg(0.82mmol)4-二甲氨基吡啶，在冰浴条件下缓慢滴加含有2.4g(16.0mmol)叔丁基二甲基氯硅烷的干燥的二氯甲烷溶液10ml。室温搅拌过夜。待反应结束后，加入适量的水，用等体积的二氯甲烷萃取三次，二氯甲烷层溶液用饱和氯化钠洗涤后浓缩，经硅胶柱层析，以石油醚：乙酸乙酯＝200:1进行洗脱后得到化合物3-o-乙酰基-5,7,3’,4’,5’-o-五叔丁基二甲基硅基-表没食子儿茶素(3b，970.0mg,透明油状，收率74％)。1hnmr(600mhz,cdcl3):6.55(2h,s),6.11(1h,d,j＝2.4hz),5.95(1h,d,j＝2.4hz),5.36(1h,m),4.91(1h,brs),2.89(1h,dd,j＝17.4,4.8hz),2.81(1h,dd,j＝17.4,3.0hz),1.86(3h,s),0.90-0.97(45h,m),0.08-0.21(30h,m)。
化合物4a的合成：
称取100.0mg(0.13mmol)化合物3a于50ml圆底烧瓶中，用100ul干燥的二氯甲烷溶解，再加入干燥的甲醇10ml，50.0mg(0.36mmol)碳酸钾，室温搅拌2小时。待反应结束后，加入适量的水，用等体积的乙酸乙酯萃取三次，乙酸乙酯层溶液用无水硫酸钠干燥并浓缩，经硅胶柱层析，以石油醚：乙酸乙酯＝100:1进行洗脱后得到化合物5,7,3’,4’-o-四叔丁基二甲基硅基-表儿茶素(4a，38.0mg,透明油状，收率40％)。1hnmr(600mhz,cdcl3):6.94(1h,d,j＝1.8hz),6.92(1h,dd,j＝8.4,1.8hz),6.84(1h,d,j＝7.8hz),6.11(1h,d,j＝2.4hz),5.96(1h,d,j＝1.8hz),4.86(1h,s),4.20(1h,brs),2.86(1h,s),2.85(1h,s),0.99(9h,s),0.97(9h,s),0.96(9h,s),0.95(9h,s),0.16-0.22(24h,m)。
化合物4b的合成：
称取970.0mg(1.06mmol)化合物3b于100ml圆底烧瓶中，用100ul干燥的二氯甲烷溶解，再加入干燥的甲醇40ml，200mg(1.44mmol)碳酸钾，室温搅拌2小时。待反应结束后，加入适量的水，用等体积的乙酸乙酯萃取三次，乙酸乙酯层溶液用无水硫酸钠干燥并浓缩，经硅胶柱层析，以石油醚：乙酸乙酯＝200:1进行洗脱后得到化合物5,7,3’,4’,5’-o-五叔丁基二甲基硅基-表没食子儿茶素(4b，353.0mg,透明油状，收率38％)。1hnmr(600mhz,cdcl3):6.59(2h,s),6.09(1h,d,j＝1.8hz),5.95(1h,d,j＝2.4hz),4.82(1h,brs),4.16(1h,m),3.47(1h,s),2.85(1h,dd,j＝16.8,4.2hz),2.80(1h,dd,j＝16.8,3.0hz),0.90-0.99(45h,m),0.10-0.22(30h,m)。
化合物5a的合成：
称取180.1mg(1.0mmol)咖啡酸于25ml圆底烧瓶中，加入0.3ml干燥的吡啶，0.5ml醋酸酐(5.3mmol)，在干燥管保护下室温搅拌过夜。待反应结束后，加入水终止反应，经旋转蒸干后即可得到乙酰化咖啡酸(3,4-o-二乙酰化咖啡酸,250.8mg,收率95％)。1hnmr(600mhz,dmso-d6):12.47(1h,s)7.66(1h,s),7.63(1h,d,j＝8.4hz),7.57(1h,d,j＝16.2hz),7.31(1h,d,j＝8.4hz),6.53(1h,d,j＝16.2hz),2.29(3h,s),2.29(3h,s)。将反应后的乙酰化咖啡酸转至50ml圆底烧瓶中，加入10ml亚硫酰氯，于90℃加热回流3小时即可得到粗品化合物3,4-o-二乙酰化咖啡酰氯(5a)，直接用于下一步反应。
化合物5b的合成：
称取656.0mg(4.0mmol)咖啡酸于25ml圆底烧瓶中，加入0.8ml干燥的吡啶，1.0ml醋酸酐(10.6mmol)，在干燥管保护下室温搅拌过夜。待反应结束后，加入水终止反应，经旋转蒸干后即可得到乙酰化香豆酸(4-o-乙酰化香豆酸,774.6mg,收率94％)。1hnmr(600mhz,dmso-d6):12.36(1h,s)7.73(2h,d,j＝9.0hz),7.60(1h,d,j＝14.4hz),7.18(2h,d,j＝8.4hz),6.50(1h,d,j＝16.2hz),2.28(3h,s)。将反应后的乙酰化香豆酸(251.0mg，1.2mmol)转至25ml圆底烧瓶中，加入3.0ml亚硫酰氯，于90℃加热回流3小时即可得到粗品化合物4-o-乙酰化香豆酰氯(5b)，直接用于下一步反应。
化合物6a的合成：
称取化合物4a(92.0mg，0.12mmol)于25ml圆底烧瓶中，加入0.2ml干燥的吡啶，2.0ml干燥的二氯甲烷，在冰浴条件下缓慢滴加含有化合物5a(0.18mmol)的干燥二氯甲烷3.0ml。室温反应过夜，加适量的水和等体积的二氯甲烷萃取三次，二氯甲烷层用无水硫酸钠干燥后浓缩，经硅胶柱层析以石油醚：乙酸乙酯＝30:1进行洗脱后得到化合物3”,4”-o-二乙酰基-5,7,3’,4’-o-四叔丁基二甲基硅基-表儿茶素反式咖啡酸酯(6a，95.5mg,油状，收率78％)。1hnmr(600mhz,cdcl3):7.45(1h,d,j＝15.6hz),7.32(1h,dd,j＝8.4,1.2hz),7.26(1h,brs),7.16(1h,d,j＝8.4hz),6.89(1h,d,j＝1.8hz),6.87(1h,brd,j＝8.4hz),6.77(1h,d,j＝8.4hz),6.26(1h,d,j＝16.2hz),6.15(1h,d,j＝2.4hz),5.96(1h,d,j＝1.8hz),5.50(1h,brs),5.00(1h,s),2.96(1h,dd,j＝18,4.8hz),2.90(1h,brd,j＝17.4hz),2.27(6h,s),0.92-0.97(36h,m),0.12-0.21(24h,m)。
化合物6b的合成：
称取化合物4a(395.0mg，0.53mmol)于25ml圆底烧瓶中，加入1.5ml干燥的吡啶，3.0ml干燥的二氯甲烷，在冰浴条件下缓慢滴加含有化合物5b(0.80mmol)的干燥二氯甲烷5.0ml。室温反应过夜，加适量的水和等体积的二氯甲烷萃取三次，二氯甲烷层用无水硫酸钠干燥后浓缩，经硅胶柱层析，以石油醚：乙酸乙酯＝50:1进行洗脱后得到化合物4”-o-乙酰基-5,7,3’,4’-o-四叔丁基二甲基硅基-表儿茶素反式香豆酸酯(6b，197.8mg,油状，收率40％)。1hnmr(600mhz,cdcl3):7.49(1h,d,j＝15.6hz),7.44(2h,d,j＝9.0hz),7.07(1h,d,j＝9.0hz),6.91(1h,d,j＝1.8hz),6.86(1h,dd,j＝8.4,2.4hz),6.77(1h,d,j＝8.4hz),6.26(1h,d,j＝16.2hz),6.16(1h,d,j＝1.8hz),5.97(1h,d,j＝2.4hz),5.52(1h,brs),5.01(1h,s),2.97(1h,dd,j＝17.4,4.2hz),2.90(1h,dd,j＝16.8,3.0hz),2.28(3h,s),0.92-0.97(36h,m),0.12-0.21(24h,m)。
化合物6c的合成：
称取化合物4b(500.0mg，0.57mmol)于100ml圆底烧瓶中，加入2.0ml干燥的吡啶，5.0ml干燥的二氯甲烷，在冰浴条件下缓慢滴加含有化合物5a(1.9mmol)的干燥二氯甲烷8.0ml。室温反应过夜，加适量的水和等体积的二氯甲烷萃取三次，二氯甲烷层用无水硫酸钠干燥后浓缩，经硅胶柱层析以石油醚：乙酸乙酯＝30:1进行洗脱后得到化合物3”,4”-o-二乙酰基-5,7,3’,4’,5’-o-五叔丁基二甲基硅基-表没食子儿茶素反式咖啡酸酯(6c，172.1mg,油状，收率70％)。1hnmr(600mhz,cdcl3):7.44(1h,d,j＝16.2hz),7.29(1h,dd,j＝8.4,1.8hz),7.24(1h,s),7.16(1h,d,j＝8.4hz),6.56(2h,s),6.23(1h,d,j＝16.2hz),6.14(1h,d,j＝2.4hz),5.95(1h,d,j＝2.4hz),5.49(1h,m),4.97(1h,s),2.95(1h,dd,j＝17.4,4.8hz),2.87(1h,dd,j＝17.4,3.6hz),2.26(6h,s),0.86-0.97(45h,m),0.04-0.21(30h,m)。
化合物6d的合成：
称取化合物4b(370.0mg，0.42mmol)于100ml圆底烧瓶中，加入2.0ml干燥的吡啶，5.0ml干燥的二氯甲烷，在冰浴条件下缓慢滴加含有化合物5b(1.5mmol)的干燥二氯甲烷7.0ml。室温反应过夜，加适量的水和等体积的二氯甲烷萃取三次，二氯甲烷层用无水硫酸钠干燥后浓缩，经硅胶柱层析以石油醚：乙酸乙酯＝50:1进行洗脱后得到化合物4”-o-乙酰基-5,7,3’,4’,5’-o-五叔丁基二甲基硅基-表没食子儿茶素反式香豆酸酯(6d，280.0mg,油状，收率62％)。1hnmr(600mhz,cdcl3):7.48(1h,d,j＝16.2hz),7.43(2h,d,j＝9.0hz),7.07(2h,d,j＝8.4hz),6.57(2h,s),6.24(1h,d,j＝15.6hz),6.15(1h,d,j＝1.8hz),5.96(1h,d,j＝2.4hz),5.50(1h,m),4.97(1h,s),2.95(1h,dd,j＝17.4,4.8hz),2.88(1h,dd,j＝17.4,3.0hz),2.28(3h,s),0.86-0.97(45h,m),0.04-0.20(30h,m)。
化合物7a合成：
称取化合物6b(163.0mg，0.17mmol)于25ml圆底烧瓶中，加入氟氢化钾(136.0mg，1.7mmol)，再加入6.0ml干燥的甲醇，室温下反应3.5小时。待反应结束后加入适量的水，用等体积的乙酸乙酯萃取三次。乙酸乙酯层用无水硫酸钠干燥后浓缩，经硅胶柱层析以石油醚：乙酸乙酯＝1:1进行洗脱后得到化合物4”-o-乙酰基-表儿茶素反式香豆酸酯(7a，70.9mg，白色粉末，收率85％)。1hnmr(600mhz,dmso-d6):9.27(1h,s),9.01(1h,s),8.82(1h,s),8.77(1h,s),7.73(2h,d,j＝8.4hz),7.51(1h,dd,j＝16.2hz),7.15(2h,d,j＝8.4hz),6.89(1h,d,j＝1.8hz),6.71(1h,dd,j＝8.4,1.8hz),6.67(1h,d,j＝8.4hz),6.48(1h,d,j＝16.2hz),5.94(1h,d,j＝1.8hz),5.81(1h,d,j＝1.8hz),5.36(1h,brs),5.02(1h,s),2.95(1h,dd,j＝17.4,4.8hz),2.68(1h,brd,j＝16.8hz),2.27(3h,s)。
化合物7b合成：
称取化合物6d(130.0mg，0.12mmol)于25ml圆底烧瓶中，加入氟氢化钾(476.0mg，6.1mmol)，再加入8.0ml干燥的甲醇，50℃下反应6小时。反应产物浓缩后经lh-20凝胶柱层析，以甲醇洗脱后得到化合物4”-o-乙酰基-表没食子儿茶素反式香豆酸酯(7b，36.0mg，白色粉末，收率60％)。1hnmr(600mhz,dmso-d6):9.29(1h,s),9.03(1h,s),8.76(1h,s),8.00(1h,s),7.72(2h,d,j＝8.4hz),7.51(1h,dd,j＝16.2hz),7.15(2h,d,j＝9.0hz),6.46(1h,d,j＝16.2hz),6.40(2h,s),5.94(1h,d,j＝2.4hz),5.79(1h,d,j＝2.4hz),5.34(1h,brs),4.95(1h,s),2.94(1h,dd,j＝17.4,4.8hz),2.67(1h,brd,j＝16.2hz),2.26(3h,s)。
化合物8a合成：
称取6a(164.0mg，0.16mmol)于25ml圆底烧瓶中，加入氟氢化钾(28.0mg，1.64mmol)，再加入6.0ml干燥的甲醇，50℃下反应6小时。反应产物经lh-20凝胶柱层析，以甲醇洗脱后得到化合物表儿茶素反式咖啡酸酯(8a，52.0mg，白色粉末，收率70％)。1hnmr(600mhz,dmso-d6):7.32(1h,d,j＝16.2hz),6.98(1h,s),6.95(1h,dd,j＝6.6,1.8hz),6.88(1h,s),6.73(1h,d,j＝7.8hz),6.70(1h,dd,j＝8.4,1.2hz),6.67(1h,dd,j＝7.8hz),6.12(1h,d,j＝15.6hz),5.94(1h,d,j＝1.8hz),5.81(1h,d,j＝1.8hz),5.31(1h,brs),5.01(1h,s),2.92(1h,dd,j＝17.4,4.8hz),2.67(1h,brd,j＝16.2hz)。hr-esi-ms(负离子):m/z451.1040[m-h]-。
化合物8b的合成：
称取7a(50.0mg，0.1mmol)于10ml圆底烧瓶中，加醋酸铵(450.0mg，5.8mmol)，加入80％甲醇水溶液2.0ml，室温反应5.5小时。反应产物经lh-20凝胶柱层析，以甲醇洗脱后得到化合物表儿茶素反式香豆酸酯(8b，45.6mg，白色粉末，收率88％)。1hnmr(600mhz,dmso-d6):7.50(2h,d,j＝8.4hz),7.41(1h,d,j＝15.6hz),6.88(1h,d,j＝1.8hz),6.75(2h,d,j＝9.0hz),6.70(1h,dd,j＝8.4,1.2hz),6.67(1h,d,j＝7.8hz),6.24(1h,d,j＝15.6hz),5.93(1h,d,j＝1.8hz),5.80(1h,d,j＝1.8hz),5.32(1h,brs),5.01(1h,s),2.92(1h,dd,j＝17.4,4.8hz),2.66(1h,brd,j＝16.2hz)。hr-esi-ms(负离子):m/z435.1088[m-h]-。
化合物8c的合成：
称取6c(60.0mg，0.05mmol)于25ml圆底烧瓶中，加入氟氢化钾(200.0mg，2.56mmol)，再加入5.0ml干燥的甲醇，50℃下反应6小时。反应产物经lh-20凝胶柱层析，以甲醇洗脱后得到化合物表没食子儿茶素反式咖啡酸酯(8c，15.0mg，白色粉末，收率60％)。1hnmr(600mhz,dmso-d6):7.33(1h,d,j＝16.8hz),6.98(1h,d,j＝1.8hz),6.96(1h,dd,j＝8.4,1.8hz),6.72(1h,d,j＝8.4hz),6.39(2h,s),6.09(1h,d,j＝16.2hz),5.93(1h,d,j＝1.8hz),5.79(1h,d,j＝2.4hz),5.28(1h,brs),4.93(1h,s),2.90(1h,dd,j＝17.4,4.8hz),2.64(1h,brd,j＝16.2hz)。hr-esi-ms(负离子):m/z451.1033[m-h]-。
化合物8d的合成：
称取7b(36.0mg，0.07mmol)于10ml圆底烧瓶中，加醋酸铵(460.0mg，6.0mmol)，加入80％甲醇水溶液2.0ml，室温反应5小时。反应产物经lh-20凝胶柱层析，以甲醇洗脱后得到化合物表没食子儿茶素反式香豆酸酯(8d，18.1mg，白色粉末，收率55％)。1hnmr(600mhz,dmso-d6):7.49(2h,d,j＝8.4hz),7.41(1h,d,j＝15.6hz),6.75(2h,d,j＝8.4hz),6.39(2h,s),6.22(1h,d,j＝15.6hz),5.93(1h,d,j＝2.4hz),5.79(1h,d,j＝1.8hz),5.30(1h,brs),4.93(1h,s),2.91(1h,dd,j＝17.4,4.8hz),2.65(1h,brd,j＝16.2hz)。hr-esi-ms(负离子):m/z467.0979[m-h]-。
实施例2
将实施例1中制备的表儿茶素反式香豆酸酯、表儿茶素反式咖啡酸酯、表没食子儿茶素反式香豆酸酯与表没食子儿茶素反式咖啡酸酯四种羟基肉桂酰酯型儿茶素进行体外抑制α-葡萄糖苷酶活性实验。
2.1实验材料和试剂
阿卡波糖、磷酸钾缓冲液(ppbs，10mm,ph为6.9)、α-葡萄糖苷酶(0.1u·ml-1)、4-硝基苯基-α-d-吡喃葡萄糖苷(pnpg，2.5mm)、二甲基亚砜(dmso)
2.2实验方法及结果
在96孔板中加入60μl的α-葡萄糖苷酶溶液，分别加入不同浓度梯度的四种羟基肉桂酰酯型儿茶素60μl，在37℃预孵化10min后，分别添加60μl的pnpg溶液，继续在37℃孵化20min后置于酶标仪(25℃)，在波长405nm的可见光下，记录反应液的a值。所有样品均重复3次，记为a样品。用60μl的ppbs代替α-葡萄糖苷酶，记为a空白(重复3次)，做空白调零。用60μl的ppbs代替样品溶液，记为a测试。用120μl的ppbs代替样品溶液和α-葡萄糖苷酶，记为a对照(重复3次)。
对乙酰胆碱酯酶的酶抑制率按以下公式计算：
抑制率(％)＝(1-(a样品-a空白)/(a测试-a对照))×100％。
以酶的相对活力对抑制剂浓度作图，根据抑制曲线即可计算出四种羟基肉桂酰酯型儿茶素与α-葡萄糖苷酶作用的ic50值。所测得的结果如下表所示：
注：阳性对照药物——阿卡波糖
由表中的结果可知，本发明制备的四种羟基肉桂酰酯型儿茶素：表儿茶素反式香豆酸酯、表儿茶素反式咖啡酸酯、表没食子儿茶素反式香豆酸酯与表没食子儿茶素反式咖啡酸酯对α-葡萄糖苷酶均有强的抑制作用，可应用于制备降血糖药物，具有广阔的应用前景。
应当理解本文所述的例子和实施方式仅为了说明，并不用于限制本发明，本领域技术人员可根据它做出各种修改或变化，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
1.一类羟基肉桂酰酯型儿茶素的制备方法，该类羟基肉桂酰酯型儿茶素包括4种儿茶素，该4种儿茶素的名称分别为表儿茶素反式香豆酸酯即(–)-epicatechin3-o-p-coumaroate、表儿茶素反式咖啡酸酯即(–)-epicatechin3-o-caffeoate、表没食子儿茶素反式香豆酸酯即(–)-epigallocatechin3-o-p-coumaroate、表没食子儿茶素反式咖啡酸酯即(–)-epigallocatechin3-o-caffeoate，其结构式分别如式ⅰ、式ⅱ、式ⅲ和式ⅳ所示，
其特征在于，该类羟基肉桂酰酯型儿茶素的制备方法包括如下步骤：
s1、以表儿茶素即ec为原料，通过全乙酰化、脱去酚羟基上的乙酰基、酚羟基硅烷化及脱去3位乙酰基四个反应后制得5,7,3’,4’-o-四叔丁基二甲基硅基-表儿茶素；
以表没食子儿茶素即egc为原料，通过全乙酰化、脱去酚羟基上的乙酰基、酚羟基硅烷化及脱去3位乙酰基四个反应后制得5,7,3’,4’,5’-o-五叔丁基二甲基硅基-表没食子儿茶素；
s2、制备3”,4”-o-二乙酰基-5,7,3’,4’-o-四叔丁基二甲基硅基-表儿茶素反式咖啡酸酯；
称取92.0mg步骤s1制得的5,7,3’,4’-o-四叔丁基二甲基硅基-表儿茶素于25ml圆底烧瓶中，加入0.2ml干燥的吡啶，2.0ml干燥的二氯甲烷，在冰浴条件下缓慢滴加含有0.18mmol的3,4-o-二乙酰化咖啡酰氯的干燥二氯甲烷3.0ml，室温反应过夜，加适量的水和等体积的二氯甲烷萃取三次，二氯甲烷层用无水硫酸钠干燥后浓缩，经硅胶柱层析以石油醚：乙酸乙酯＝30:1进行洗脱后得到3”,4”-o-二乙酰基-5,7,3’,4’-o-四叔丁基二甲基硅基-表儿茶素反式咖啡酸酯；
s3、制备4”-o-乙酰基-5,7,3’,4’-o-四叔丁基二甲基硅基-表儿茶素反式香豆酸酯；
称取395.0mg步骤s1制得的5,7,3’,4’-o-四叔丁基二甲基硅基-表儿茶素于25ml圆底烧瓶中，加入1.5ml干燥的吡啶，3.0ml干燥的二氯甲烷，在冰浴条件下缓慢滴加含有0.80mmol的4-o-乙酰化香豆酰氯的干燥二氯甲烷5.0ml，室温反应过夜，加适量的水和等体积的二氯甲烷萃取三次，二氯甲烷层用无水硫酸钠干燥后浓缩，经硅胶柱层析，以石油醚：乙酸乙酯＝50:1进行洗脱后得到4”-o-乙酰基-5,7,3’,4’-o-四叔丁基二甲基硅基-表儿茶素反式香豆酸酯；
s4、制备3”,4”-o-二乙酰基-5,7,3’,4’,5’-o-五叔丁基二甲基硅基-表没食子儿茶素反式咖啡酸酯；
称取500.0mg步骤s1制得的5,7,3’,4’,5’-o-五叔丁基二甲基硅基-表没食子儿茶素于100ml圆底烧瓶中，加入2.0ml干燥的吡啶，5.0ml干燥的二氯甲烷，在冰浴条件下缓慢滴加含有1.9mmol的3,4-o-二乙酰化咖啡酰氯的干燥二氯甲烷8.0ml，室温反应过夜，加适量的水和等体积的二氯甲烷萃取三次，二氯甲烷层用无水硫酸钠干燥后浓缩，经硅胶柱层析以石油醚：乙酸乙酯＝30:1进行洗脱后得到3”,4”-o-二乙酰基-5,7,3’,4’,5’-o-五叔丁基二甲基硅基-表没食子儿茶素反式咖啡酸酯；
s5、制备4”-o-乙酰基-5,7,3’,4’,5’-o-五叔丁基二甲基硅基-表没食子儿茶素反式香豆酸酯；
称取370.0mg步骤s1制得的5,7,3’,4’,5’-o-五叔丁基二甲基硅基-表没食子儿茶素于100ml圆底烧瓶中，加入2.0ml干燥的吡啶，5.0ml干燥的二氯甲烷，在冰浴条件下缓慢滴加含有1.5mmol的4-o-乙酰化香豆酰氯的干燥二氯甲烷7.0ml，室温反应过夜，加适量的水和等体积的二氯甲烷萃取三次，二氯甲烷层用无水硫酸钠干燥后浓缩，经硅胶柱层析以石油醚：乙酸乙酯＝50:1进行洗脱后得到4”-o-乙酰基-5,7,3’,4’,5’-o-五叔丁基二甲基硅基-表没食子儿茶素反式香豆酸酯；
s6、制备表儿茶素反式咖啡酸酯；
称取164.0mg步骤s2制得的3”,4”-o-二乙酰基-5,7,3’,4’-o-四叔丁基二甲基硅基-表儿茶素反式咖啡酸酯于25ml圆底烧瓶中，加入28.0mg氟氢化钾，再加入6.0ml干燥的甲醇，50℃下反应6小时，反应产物经lh-20凝胶柱层析，以甲醇洗脱后得到表儿茶素反式咖啡酸酯；
s7、制备表没食子儿茶素反式咖啡酸酯；
称取60.0mg步骤s4制得的3”,4”-o-二乙酰基-5,7,3’,4’,5’-o-五叔丁基二甲基硅基-表没食子儿茶素反式咖啡酸酯于25ml圆底烧瓶中，加入200.0mg氟氢化钾，再加入5.0ml干燥的甲醇，50℃下反应6小时，反应产物经lh-20凝胶柱层析，以甲醇洗脱后得到表没食子儿茶素反式咖啡酸酯；
s8、制备表儿茶素反式香豆酸酯；
称取163.0mg步骤s3制得的4”-o-乙酰基-5,7,3’,4’-o-四叔丁基二甲基硅基-表儿茶素反式香豆酸酯于25ml圆底烧瓶中，加入136.0mg氟氢化钾，再加入6.0ml干燥的甲醇，室温下反应3.5小时，待反应结束后加入适量的水，用等体积的乙酸乙酯萃取三次，乙酸乙酯层用无水硫酸钠干燥后浓缩，经硅胶柱层析以石油醚：乙酸乙酯＝1:1进行洗脱后得到4”-o-乙酰基-表儿茶素反式香豆酸酯；
称取50.0mg的4”-o-乙酰基-表儿茶素反式香豆酸酯于10ml圆底烧瓶中，加450.0mg醋酸铵，加入体积分数为80％甲醇水溶液2.0ml，室温反应5.5小时，反应产物经lh-20凝胶柱层析，以甲醇洗脱后得到表儿茶素反式香豆酸酯；
s9、制备表没食子儿茶素反式香豆酸酯；
称取130.0mg步骤s5制得的4”-o-乙酰基-5,7,3’,4’,5’-o-五叔丁基二甲基硅基-表没食子儿茶素反式香豆酸酯于25ml圆底烧瓶中，加入476.0mg氟氢化钾，再加入8.0ml干燥的甲醇，50℃下反应6小时，反应产物浓缩后经lh-20凝胶柱层析，以甲醇洗脱后得到4”-o-乙酰基-表没食子儿茶素反式香豆酸酯；
称取36.0mg的4”-o-乙酰基-表没食子儿茶素反式香豆酸酯于10ml圆底烧瓶中，加460.0mg醋酸铵，加入体积分数为80％甲醇水溶液2.0ml，室温反应5小时，反应产物经lh-20凝胶柱层析，以甲醇洗脱后得到表没食子儿茶素反式香豆酸酯；
其中步骤s2、s3、s4、s5不分先后顺序，步骤s6、s7、s8、s9不分先后顺序。
2.根据权利要求1所述的一类羟基肉桂酰酯型儿茶素的制备方法，其特征在于，步骤s2中所述的3,4-o-二乙酰化咖啡酰氯通过以下方式制得：
称取180.1mg咖啡酸于25ml圆底烧瓶中，加入0.3ml干燥的吡啶，0.5ml醋酸酐，在干燥管保护下室温搅拌过夜，加入水终止反应，经旋转蒸干后即可得到乙酰化咖啡酸即3,4-o-二乙酰化咖啡酸；将反应后的乙酰化咖啡酸转至50ml圆底烧瓶中，加入10ml亚硫酰氯，于90℃加热回流3小时即可得到3,4-o-二乙酰化咖啡酰氯，保存备用。
3.根据权利要求1所述的一类羟基肉桂酰酯型儿茶素的制备方法，其特征在于，步骤s3中所述的4-o-乙酰化香豆酰氯通过以下方式制得：
称取656.0mg香豆酸于25ml圆底烧瓶中，加入0.8ml干燥的吡啶，1.0ml醋酸酐，在干燥管保护下室温搅拌过夜，加入水终止反应，经旋转蒸干后即可得到乙酰化香豆酸；将反应后的乙酰化香豆酸转至25ml圆底烧瓶中，加入3.0ml亚硫酰氯，于90℃加热回流3小时即可得到4-o-乙酰化香豆酰氯，保存备用。
4.一种采用权利要求1所述制备方法制得的一类羟基肉桂酰酯型儿茶素在制备降血糖药物上的用途。
5.根据权利要求4所述的一种采用权利要求1所述制备方法制得的一类羟基肉桂酰酯型儿茶素在制备降血糖药物上的用途，其特征在于，所述降血糖药物包括口服型和注射型，所述口服型包括片剂、胶囊剂、颗粒剂、滴丸剂，所述注射型包括注射液、混旋液。
技术总结