本发明涉及一种ret抑制剂、其用途及含其的药物组合物。
背景技术：
：ret基因由takahashi等(takahashim，ritzj，coopergm.activationofanovelhumantransforminggene，ret，bydnarearrangement.cell,1985,42(2)：581-588)在转化培养的小鼠nth3t3细胞中发现，并被命名为ret基因。ret基因是位于10号染色体长臂上的原癌基因(10q11.2)，编码的ret蛋白是一种酪氨酸激酶受体，由富含半胱氨酸的钙黏素样胞外区、跨膜区以及具有酪氨酸激酶活性的胞内域三部分构成，与alk激酶域有37％氨基酸相同。ret蛋白通过配体与受体的结合，刺激受体二聚化，胞内区域发生自身磷酸化和细胞内底物磷酸化，从而激活下游信号，在细胞的增殖、迁移和分化过程中起重要作用。ret在正常生理状态下与肾的发育和胃肠神经系统发育有关，但是，ret基因的突变导致不依赖配体的，组成型的ret激酶异常激活，将导致肿瘤发生。ret激酶的激活主要有两种机制：1.ret基因点突变；2.ret基因重排。ret的错义突变可能发生在胞外的cys残基上(如：c620r，c634r/w)，引起异常的激酶激活。突变也可能发生在胞内激酶活性域(如：v804l/m，m918t)，这种突变将促进不依赖配体的ret激酶激活(romeic,ciampir,eliseir.acomprehensiveoverviewoftheroleoftheretproto-oncogeneinthyroidcarcinoma.natrevendocrinol2016；12:192-202.)。甲状腺髓样癌(mtc)中ret的点突变非常常见，存在于大约50％的散发性mtc及几乎所有的家族性mtc中。ret基因通过本身断裂与其他基因接合的方式发生重组，成为一个新的融合基因，使ret酪氨酸激酶的活化逃脱配体的调控，进一步自我磷酸化，从而增强信号转导功能，促使激酶活化，引发肿瘤生成。在10-20％的甲状腺乳头状癌(ptc)中，1-2％的非小细胞肺癌(nsclc)和很多其他癌症，如结肠癌和乳腺癌中都存在ret融合。以上结果表明：ret信号通路的失调是很多肿瘤疾病的重要驱动原因。目前尚无针对ret的特异性抑制剂上市，但是一些多靶点酪氨酸激酶抑制剂已被用于ret基因突变患者的临床研究，如：凡德他尼，卡博替尼和乐伐替尼等。目前多靶点酪氨酸激酶抑制剂治疗ret融合nsclc患者，在有效率和生存数据上差于其他nsclc驱动基因。另外患者长期暴露于rettkis中，因为对vegfr激酶的抑制作用，产生3-4级毒性发生率高。因此，研发选择性更高，活性更强的ret特异性抑制剂，增加疗效并限制毒性，有望成为治疗甲状腺癌，nsclc等多种恶性肿瘤的新手段。技术实现要素：本发明所要解决的技术问题是现有的ret激酶抑制剂的结构较为单一，为此，本发明提供了一种全新结构的化合物、其用途及含其的药物组合物。该化合物对ret激酶的抑制效果较佳。本发明提供了一种如式i所示的化合物或其药学上可接受的盐：r1为不存在、c1-c4烷基，或被一个6元芳基或5元至6元杂芳基取代的c1-c3烷基，其中所述6元芳基、5元至6元杂芳基任选地被一个或多个选自以下的基团取代：卤素、c1～c4烷基或c1～c4烷氧基；r2为h、c1-c4烷基，或被一个6元芳基或5元至6元杂芳基取代的c1-c3烷基，其中所述6元芳基、5元至6元杂芳基任选地被一个或多个选自以下的基团取代：卤素、c1～c4烷基或c1～c4烷氧基；r3为不存在、h或c1-c4烷基；视需要为单键或双键，以给予每个原子其正常化合价；其中，当r1为被一个6元芳基或5元至6元杂芳基取代的c1-c3烷基时，r2为h或c1-c4烷基；当r2为被一个6元芳基或5元至6元杂芳基取代的c1-c3烷基时，r1为不存在或c1-c4烷基。在一个优选的方案中，r1为被一个苯基或吡啶基取代的c1-c3烷基，所述苯基、吡啶基任选地被一个或多个选自以下的基团取代：卤素、c1～c4烷基或c1～c4烷氧基；更优选地，r1为被一个苯基或吡啶基取代的c1-c2烷基，所述苯基、吡啶基任选地被一个或多个选自以下的基团取代：氟原子，甲氧基。在另一个优选的方案中，r2为被一个苯基或吡啶基取代的c1-c2烷基，所述苯基、吡啶基任选地被一个或多个选自以下的基团取代：卤素、c1～c4烷基或c1～c4烷氧基；更优选地，r2为被一个苯基或吡啶基取代的c1-c2烷基，所述苯基、吡啶基任选地被一个或多个选自以下的基团取代：氟原子，甲氧基。本发明所述的化合物或其药学上可接受的盐中，所述的化合物i可为如下任一化合物：本发明还提供了如式i所示的化合物或其药学上可接受的盐在制备ret抑制剂中的用途。本发明还提供了如式i所示的化合物或其药学上可接受的盐在制备药物中的用途，所述的药物用于预防或治疗由ret异常表达介导的疾病。所述的“由ret异常表达介导的疾病”例如癌症，又例如甲状腺乳头状癌(ptc)、甲状腺髓样癌(mtc)、嗜铬细胞瘤(pc)、胰腺导管腺癌、多发性内分泌瘤(men2a或men2b)、乳腺癌(还例如转移性乳腺癌)、睾丸癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、慢性骨髓单核细胞性白血病、结肠癌、直肠癌、卵巢癌或唾液腺癌。本发明还提供了一种药物组合物，其包含如式i所示的化合物或其药学上可接受的盐、以及药学上可接受的载体。除非特别说明，本发明中的术语具有以下含义：如本文所用，术语“烷基”是指直链的或支链的具有1-12个碳原子的饱和烃基。优选地，烷基是具有1-6个碳原子的烷基。更优选地，烷基是具有1-4个碳原子的烷基。烷基的实例包括，但不限于，甲基、乙基、1-丙基(正丙基)、2-丙基(异丙基)、1-丁基(正丁基)、2-甲基-1-丙基(异丁基)、2-丁基(仲丁基)、2-甲基-2-丙基(叔丁基)、1-戊基(正戊基)、2-戊基、3-戊基、2-甲基-2-丁基、3-甲基-2-丁基、3-甲基-1-丁基、2-甲基-1-丁基、1-己基、2-己基、3-己基、2-甲基-2-戊基、3-甲基-2-戊基、4-甲基-2-戊基、3-甲基-3-戊基、2-甲基-3-戊基、2,3-二甲基-2-丁基、3,3-二甲基-2-丁基、1-庚基、1-辛基、1-壬基、1-癸基等。如本文所用，术语“芳基”是指具有6至14个环碳原子的单环或多环(例如，双环或三环)的碳环芳族系统的基团(“c6–14芳基”)。在一些实施方式中，芳基具有6个环碳原子(“c6芳基”；例如，苯基)。如本文所用，术语“卤素”是指氟、氯、溴、碘。如本文所用，术语“烷氧基”是指烷基-o-基团。如本文所用，术语“杂芳基”是指含有一个或多个选自n、o和s的杂原子的芳基环系统，其中环氮和硫原子任选被氧化，且氮原子任选被季化。杂芳基可以是单环或多环的，例如稠合至一个或多个碳环芳香族基团或其他单环杂芳基的单环杂芳基。实例包括但不限于含有1至4个氮原子的5至6元杂芳基，诸如吡咯基、咪唑基、吡唑基、2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、三唑基(例如，4h-1,2,4-三唑基、1h-1,2,3-三唑基、2h-1,2,3-三唑基)；含有氧原子的5至6元杂芳基，例如，吡喃基、2-呋喃基、3-呋喃基等；含有硫原子的5至6元杂芳基，例如，2-噻吩基、3-噻吩基等；含有1至2个氧原子和1至3个氮原子的5至6元杂芳基，例如，噁唑基、异噁唑基、噁二唑基(例如，1,2,4-噁二唑基、1,3,4-噁二唑基、1,2,5-噁二唑基)；含有1至2个硫原子和1至3个氮原子的5至6元杂芳基，例如，噻唑基、噻二唑基(例如，1,2,4-噻二唑基、1,3,4-噻二唑基、1,2,5-噻二唑基)。如本文所用，术语“任选取代的”是指所给结构或基团未被取代，或所给结构或基团被一个或多个具体取代基取代。除非其它方面的说明，任选取代可以在被取代基团的任意位置进行取代。如本文所用，术语“药学上可接受的盐”是指本发明的化合物的药学上可接受的有机或无机盐。示例性的盐包括但不限于：硫酸盐、柠檬酸盐、乙酸盐、草酸盐、氯化物、溴化物、碘化物、硝酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、酸式磷酸盐、异烟酸盐、乳酸盐、水杨酸盐、酸式柠檬酸盐、酒石酸盐、油酸盐、鞣酸盐、泛酸盐、酒石酸氢盐、抗坏血酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、龙胆酸盐、富马酸盐、葡糖酸盐、葡糖醛酸盐、糖酸盐、甲酸盐、苯甲酸盐、谷氨酸盐，甲烷磺酸盐(甲磺酸盐)、乙烷磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐、和双羟萘酸盐；或者铵盐(例如伯胺盐、仲胺盐、叔胺盐、季铵盐)、金属盐(例如钠盐、钾盐、钙盐、镁盐、锰盐、铁盐、锌盐、铜盐、锂盐、铝盐)。如本文所用，术语“药学上可接受的”表示该物质或组合物与包含制剂和/或用其处理的哺乳动物的其他成分必须化学和/或毒理学上兼容。本发明中的某些化合物具有手性碳原子、双键、碳环或杂环，由此产生的各构型异构体{旋光异构体(例如对映体、非对映体等)、顺反异构体等}以及它们的混合物(例如外消旋体)均在本发明的保护范围内。当本发明中的某些化合物表明特定构型时，是指该构型异构体存在且基本上不含其他异构体的化合物。如本文所用，术语“抑制剂”是指为减少、阻断、防止、延迟活化、灭活、脱敏或下调例如基因、蛋白质、配体、受体或细胞的分子。如本文所用，术语“ret异常表达”即由通过ret的信号传导引起的ret活性增加。如本文所用，术语“预防”是指获得或发生疾病或障碍的风险降低。如本文所用，术语“治疗”任意疾病或障碍在一个实施方案中是指改善疾病或障碍(即阻止疾病、或、减少表现其临床症状的程度或严重性)。在另一个实施方案中，“治疗”是指改善至少一种身体参数，其可能不被受试者察觉。在另一个实施方案中，“治疗”是指从身体上(例如稳定可分辨的症状)、生理上(例如稳定身体参数)调节疾病或障碍或它们两者。在另一个实施方案中，“治疗”是指减缓疾病进展。具体实施方式下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。实施例1sz-9353化合物9353a1(56mg,0.17mol)、化合物9317a4(50mg,0.17mmol)和碳酸钾(77mg,0.56mmol)加入到dmso(5ml)中，110℃搅拌16小时。往体系中加入50ml的水，乙酸乙酯(20ml)萃取三次，有机相减压旋干得到粗品，快速硅胶柱色谱法(dcm/meoh5％)纯化，产物以乙腈与水溶解，冷冻干燥，得到sz-9353(39mg,38％，白色固体)。lcms:[m h ]596.11@3.71min.1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.35(d,j＝2.43hz,1h),8.20(s,1h),8.15(d,j＝2.10hz,1h),7.73(dd,j＝8.86,2.63hz,1h),7.38-7.32(m,1h),7.16(d,j＝2.10hz,1h),7.05-6.95(m,3h),6.82(d,j＝8.76hz,1h),5.40-5.34(m,1h),4.37-4.28(m,2h),3.69-3.60(m,2h),2.11-2.02(m,2h),2.00(s,3h),1.78(d,j＝7.15hz,3h),1.58-1.52(m,2h),1.40(s,6h).实施例2sz-9392第1步：反应瓶中加入9307a1(932mg,2.0mmol)和dmf(30ml)，搅拌，再加入2-甲氧基-5-(氨甲基)吡啶(410mg,3.0mmol)、diea(1.1g,8.0mmol)，最后加入hatu(912mg,2.4mmol)，20℃反应2小时。反应液加水(100ml)，ea(50ml)萃取三次；有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到粗品，用快速硅胶柱色谱法(ea/pe0-50％)纯化得到9392a1(1.0g，85％，白色固体)。第2步：反应瓶中加入9392a1(0.3g,0.51mmol)和甲醇(5ml)，搅拌，再加入乙二胺(10ml)，20℃反应2小时。反应液减压浓缩得到粗品9392a2，不纯化直接进行下一步反应。第3步：化合物9392a2(0.18g,0.51mmol)溶解在乙酸(3ml)和原甲酸三乙酯(6ml)中并在微波下100度搅拌1小时，旋去溶剂，残留物用快速硅胶柱色谱法(pe/ea50％-100％)纯化，得到化合物9317a3(100mg，50％，无色油状液体)。第4步：化合物9392a3(100mg，0.25mmol)溶解在二氯甲烷(5ml)中加入三氟乙酸(1ml)，室温搅拌2小时，旋干溶剂未做纯化直接下一步。第5步：化合物9392a4(72mg,0.25mol)、化合物9390a1(81mg,0.25mmol)和碳酸钾(138mg,1mmol)加入到dmso(5ml)中，110℃搅拌16小时。往体系中加入50ml的水，乙酸乙酯(20ml)萃取三次，有机相减压旋干得到粗品，快速硅胶柱色谱法(dcm/ea50％)纯化，产物再以乙腈/0.1％甲酸水反相柱层析，冷冻干燥，得到sz-9392(15mg,10％，白色固体)。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.35(d,j＝2.4hz,1h),8.20(s,1h),8.15(d,j＝2.1hz,1h),8.05(d,j＝2.4hz,1h),7.72(dd,j＝8.9,2.4hz,1h),7.46(dd,j＝8.6,2.5hz,1h),7.16(d,j＝2.1hz,1h),6.82(d,j＝8.9hz,1h),6.75(d,j＝8.6hz,1h),4.63(s,2h),4.35-4.28(m,2h),3.94(s,3h),3.87(s,2h),3.68-3.60(m,2h),2.20(s,3h),2.07-1.99(m,2h),1.59-1.52(m,2h),1.40(s,6h).实施例3sz-013009第1步：sz-013009a1(3g,6.43mmol)、hobt单水合物(1.3g,9.65mmol)、氯化铵(1.3g,25.75mmol)溶解在dmf(30ml)中，将n甲基吗啡(3.6g,32.18mmol)滴入后室温搅拌过夜，旋去溶剂，反应液加水(50ml)用dcm(50ml)萃取，有机相旋干并用快速硅胶柱色谱法(ea100％)纯化得到无色泡沫状固体sz-013009a2(2.6g,85％)。lcms:[m h] 464.01第2步：sz-013009a2(1.6g,3.4mmol)溶解在甲醇(10ml)中，加入4ml的二乙胺并搅拌2小时，反应完毕后用快速硅胶柱色谱法纯化得到sz-013009a3(1.2g，90％，白色泡沫状固体)。lcms:[m h] 243.19第3步：sz-013009a3(500mg,2.05mmol)、6-甲氧基吡啶-3-乙酸(343mg,2.05mmol)和hatu(1.2g,3.01mmol)溶解在dmf中，将dipea(0.7ml,4.1mmol)滴入并在室温下搅拌2小时，旋去溶剂并用快速硅胶柱色谱法纯化得到油状物sz-013009a4(370mg，45％)。lcms:[m h] 392.16第4步：sz-013009a4(370mg,0.94mmol)溶解在dcm(5ml)中加入2ml的tfa，室温搅拌30min后直接旋干既得sz-013009a5(270mg,99％).lcms:[m h] 292.12第5步：sz-013009a5(270mg,0.92mmol)，2(299mg,0.92mmol)以及碳酸钾(500mg,3.7mmol)溶解在dmso中并在115度下搅拌过夜，反应液加水(20ml)用ea(20ml)萃取，有机相旋干并用快速硅胶柱色谱法(ea100％)纯化得到无色油状物sz-013009a6(90mg,15％)。lcms:[m h] 598.49第6步：sz-013009a6(90mg,0.15mmol)溶解在甲醇(1.5ml)中，将6n氢氧化钠(120微升)加入后并在70度搅拌过夜，反应完毕后用1nhcl调节体系ph为中性并旋干，用快速硅胶柱色谱法(ea：pe＝1:1)纯化得到无色油状物sz-013009(10mg,11％)。lcms:[m h] 580.31sz-013009：hplctr＝4.87min。1hnmr(400mhz,meod)δ8.46(d,j＝2.0hz1h),8.35-8.36(m,2h),8.37(s,1h),8.13(d,j＝2.0hz,1h),7.81(dd,j1＝9.2hz,j2＝2.4hz,1h),7.68(dd,j1＝8.4hz,j2＝2.4hz,1h)7.34(d,j＝1.6hz,1h),7.03(d,j＝9.2hz,1h),6.83(d,j＝8.4hz,1h),4.30-4.34(m,2h),3.92-3.93(m,5h),3.81(s,3h),3.59-3.64(m,2h),1.92-1.99(m,2h),1.61-1.65(m,2h),1.37(s,6h).实施例4sz-9390第1步：9390a1(50mg,0.15mmol)和9382a4(50mg,0.18mmol)以及碳酸钾(100mg,0.73mmol)在2ml的dmso中加热到110度反应过夜。反应完毕后加入水(20ml)和乙酸乙酯(20ml)，有机相减压旋干用快速硅胶柱色谱法(100％ea)冲洗得9390a2(100mg，淡黄色油状物)。第2步：9390a2(100mg)、甲醇(5ml)和6n氢氧化钠(0.14ml)混合液在70度下搅拌过夜，反应完毕后减压旋去甲醇用快速硅胶柱色谱法(meoh/ea0％-10％)冲洗得sz-9390(14mg,15％)。lcms:[m h] 563.20。1hnmr(meod)δppm8.46(d,j＝3.0hz,1h),8.34-8.35(m,2h),7.80-7.82(m,1h),7.30-7.38(m,6h),7.03(d,j＝11.5hz,1h),4.24-4.31(m,2h),3.93-3.98(m,3h),3.75-3.78(m,2h),1.89-1.96(m,2h),1.61-1.63(m,5h),1.37(s,6h)。效果实施例ret活性抑制测试试验目的：以staurosporine作为阳性对照化合物。利用mobilityshiftassay的方法，检测化合物在ret激酶上ic50值。试验条件：酶浓度：2.5nmatpkm：16um预孵育：10min反应时间：60min化合物起始浓度1μm，3倍稀释，10个浓度，复孔检测。试验方法：1、化合物配制:将化合物粉末溶解在100％dmso中，配制成10mm储存液。2、激酶反应过程(1)配制1×kinasebuffer。(2)化合物浓度梯度的配制：化合物测试浓度为1μm，在384板中稀释成100倍终浓度的100％dmso溶液，之后3倍稀释化合物，10个浓度。使用分液器向目的板转移250nl100倍终浓度的化合物。(3)用1×kinasebuffer配制2.5倍终浓度的激酶溶液。(4)在化合物孔和阳性对照孔分别加10μl的2.5倍终浓度的激酶溶液；在阴性对照孔中加10μl的1×kinasebuffer。(5)1000rpm离心30秒，反应板振荡混匀后室温孵育10分钟。(6)用1×kinasebuffer配制5/3倍终浓度的atp和kinasesubstrate2的混合溶液。(7)加入15μl的5/3倍终浓度的atp和底物的混合溶液，起始反应。(8)将384孔板1000rpm离心30秒，振荡混匀后室温孵育60分钟。(9)加入30μl终止检测液停止激酶反应，1000rpm离心30秒，振荡混匀。(10)用caliperezreader读取转化率。3、数据分析计算公式：％inhibition＝(conversion％_max-conversion％_sample)/(conversion％_max-conversion％_min)×100％其中：conversion％_sample是样品的转化率读数；conversion％_min：阴性对照孔均值，代表没有酶活孔的转化率读数；conversion％_max：阳性对照孔比值均值，代表没有化合物抑制孔的转化率读数。拟合量效曲线：以浓度的log值作为x轴，百分比抑制率为y轴，采用分析软件graphpadprism5拟合量效曲线，从而得出各个化合物对酶活性的ic50值。试验结果如表1所示：表1化合物ret抑制ic50(nm)staurosporine2.8sz-935358sz-93906.2sz-939212sz-0130095.6当前第1页1 2 3
技术特征：1.一种式(i)所示的化合物或其药学上可接受的盐：
r1为不存在、c1-c4烷基，或被一个6元芳基或5元至6元杂芳基取代的c1-c3烷基，其中所述6元芳基、5元至6元杂芳基任选地被一个或多个选自以下的基团取代：卤素、c1～c4烷基或c1～c4烷氧基；
r2为h、c1-c4烷基，或被一个6元芳基或5元至6元杂芳基取代的c1-c3烷基，其中所述6元芳基、5元至6元杂芳基任选地被一个或多个选自以下的基团取代：卤素、c1～c4烷基或c1～c4烷氧基；
r3为不存在、h或c1-c4烷基；
视需要为单键或双键，以给予每个原子其正常化合价；
其中，当r1为被一个6元芳基或5元至6元杂芳基取代的c1-c3烷基时，r2为h或c1-c4烷基；当r2为被一个6元芳基或5元至6元杂芳基取代的c1-c3烷基时，r1为不存在或c1-c4烷基。
2.如权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，r1为被一个苯基或吡啶基取代的c1-c2烷基，所述苯基、吡啶基任选地被一个或多个选自以下的基团取代：卤素、c1～c4烷基或c1～c4烷氧基。
3.如权利要求2所述的化合物或其药学上可接受的盐，r1为被一个苯基或吡啶基取代的c1-c2烷基，所述苯基、吡啶基任选地被一个或多个选自以下的基团取代：氟原子，甲氧基。
4.如权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，r2为被一个苯基或吡啶基取代的c1-c2烷基，所述苯基、吡啶基任选地被一个或多个选自以下的基团取代：卤素、c1～c4烷基或c1～c4烷氧基。
5.如权利要求4所述的化合物或其药学上可接受的盐，r2为被一个苯基或吡啶基取代的c1-c2烷基，所述苯基、吡啶基任选地被一个或多个选自以下的基团取代：氟原子，甲氧基。
6.如权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其为如下任一化合物：
7.一种药物组合物，其包含如权利要求1-6中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，和药学上可接受的载体。
8.如权利要求1-6中任一项所述化合物或其药学上可接受的盐，在制备用于预防或治疗由ret异常表达介导的疾病的药物中的用途。
9.如权利要求8所述的用途，其中所述ret异常表达介导的疾病为癌症。
10.如权利要求9所述的用途，其中所述癌症包括甲状腺乳头状癌、甲状腺髓样癌、嗜铬细胞瘤、胰腺导管腺癌、多发性内分泌瘤、乳腺癌、睾丸癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、慢性骨髓单核细胞性白血病、结肠癌、直肠癌、卵巢癌或唾液腺癌。
技术总结本发明公开了一种化合物、其用途及含其的药物组合物。该化合物的结构如式I所示，其对RET激酶的抑制效果较佳。
技术研发人员：吴冬冬;卢亮;张秀春;胡永韩
受保护的技术使用者：苏州信诺维医药科技有限公司
技术研发日：2020.03.27
技术公布日：2020.06.05
