本发明属于病毒检测技术领域，尤其涉及一种检测新型冠状病毒2019-ncoviga抗体的重组蛋白、试纸条、制备方法和应用。
背景技术：
冠状病毒是一个大型病毒家族，已知可引起感冒、中东呼吸综合征(mers)和严重急性呼吸综合征(sars)等较严重疾病。新型冠状病毒是以前从未在人体中发现的冠状病毒新毒株，2019-ncov是人类分离的第七类冠状病毒。相关疾病监测，发现多起病毒性肺炎病例，均诊断为病毒性肺炎/肺部感染。
现有证据表明，2019新型冠状病毒主要通过飞沫、气溶胶、直接接触分泌物传播，能在人与人之间传播，传播力极强。
新型冠状病毒感染人体后有3～7天(不超过14天)的潜伏期，潜伏期内可无临床症状，不易发现。目前的证据表明，潜伏期感染者也有传染性，增大了阻断病毒传播的难度。新型冠状病毒感染临床症状主要表现为发热、咳嗽、乏力等非特异症状，与普通感冒难以区分，其确诊依赖实验室诊断技术。
目前新型冠状病毒感染诊断主要依赖基于聚合酶链式反应(pcr)或核酸测序检测病毒特异性基因序列来进行。但是核酸诊断需要有特殊的实验室(要求有4个在物理空间上完全相互独立的区域)和数十种配套设备以及专业操作人员(需认证)才能完成，且检测过程操作复杂，需要数小时才能完成；极易产生气溶胶污染，造成假阳性，也存在因为取样不合适造成漏检的情况，因此核酸检测不适合现场大规模开展。
免疫学诊断主要是通过抗原抗体免疫反应检测人体感染病毒以后产生的特异性抗体来诊断。免疫学诊断方法具有操作简单、检测速度快、无需特殊场地及(复杂)仪器设备，且敏感性高等优点，适用于现场大规模开展新型冠状病毒感染筛查及诊断工作。免疫学诊断已报道的方法学主要是胶体金法，检测血液中的病毒特异性igm和igg抗体。但是血液样本属于侵入性样本，首先需要专业的医护人员才能采血，且对病人造成不适，采样的过程可能造成不必要的交叉感染。因此市面上缺少无创、快速、准确筛查针对2019新型冠状病毒感染的检测试剂。
技术实现要素：
有鉴于此，本发明的目的在于提供一种检测新型冠状病毒2019-ncoviga抗体的重组蛋白、试纸条、制备方法和应用。
当新型冠状病毒2019-ncov入侵人体后，机体免疫系统会针对病毒的np蛋白和spike蛋白产生免疫反应，早期的iga型抗体会分泌到唾液中。本发明中所述的重组蛋白能够与新型冠状病毒2019-ncoviga抗体特异性结合；因此通过检测唾液中的抗病毒iga含量可以在早期诊断是否感染新型冠状病毒。
本发明的另一个目的是提供一种能够快速、准确的检测新型冠状病毒2019-ncoviga抗体时间分辨免疫荧光试纸条，用于唾液样本的检测，无创检测，易被患者，尤其是幼儿接受。所述试纸条的检测时间低于15min，且采用的新型冠状病毒的n蛋白，通过加入特殊氨基酸，实现抗原的定向偶联，从而更好的展示抗原结构，更准确的检测抗病毒iga抗体，有利于新型冠状病毒的防控、治疗工作。
本发明提供了一种检测新型冠状病毒2019-ncoviga抗体的重组蛋白，所述重组蛋白的氨基酸序列如seqidno.1所示。
本发明还提供了一种检测新型冠状病毒2019-ncoviga抗体的试纸条，包括底板以及依次搭接粘贴在底板上的样品吸收垫、荧光微球垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述荧光微球垫喷涂有荧光微球标记的2019新型冠状病毒特异性抗原，所述硝酸纤维素膜上固定有检测区和质控区，所述检测区喷涂有抗人iga抗体，所述质控区喷涂有羊抗鸡igy抗体；所述2019新型冠状病毒特异性抗原为所述的重组蛋白。
优选的，所述试纸条检测的样本为唾液样本。
优选的，所述试纸条还包括样本稀释液；所述样本稀释液包括pb溶液和tween-20；所述pb溶液的浓度为0.008～0.012mol/l；所述样本稀释液中tween-20的体积含量为0.4％～0.6％。
优选的，所述荧光微球为聚苯乙烯包裹稀土离子eu 的微球，所述荧光微球表面有氨基基团；所述荧光微球的直径为100～300nm。
优选的，所述荧光微球的氨基基团与重组蛋白的巯基通过交联剂偶联。
优选的，所述抗人iga抗体包括羊抗人iga多克隆抗体、鼠抗人iga单克隆抗体、兔抗人iga多克隆抗体和兔抗人iga单克隆抗体中的一种。
本发明提供了所述的试纸条的制备方法，包括以下步骤：
1)将荧光微球活化后，与所述重组蛋白混合偶联获得荧光微球标记的2019新型冠状病毒特异性抗原；
2)将所述荧光微球标记的2019新型冠状病毒特异性抗原喷涂至玻璃纤维膜上获得荧光微球垫；
3)将抗人iga抗体和羊抗鸡igy抗体分别喷涂在硝酸纤维素膜的检测区和质控区获得固定有检测区和质控区的硝酸纤维素膜；
(4)在底板上依次搭接地粘贴样品吸收垫、荧光微球垫、固定有检测区和质控区的硝酸纤维素膜、以及吸水垫获得试纸条。
优选的，步骤1)中所述荧光微球活化为将所述荧光微球、交联剂和活化缓冲液混合震荡活化20～40min。
本发明还提供了所述的重组蛋白、所述的试纸条在制备2019新型冠状病毒检测试剂中的应用。
相对于现有技术，本发明具有如下有益效果：
本发明提供的重组蛋白、试纸条采用了一种全新的方法学实现2019新型冠状病毒的检测，具有检测仪器成本低、操作简便、快速的优点。本发明提供的试纸条可常温储存运输，检测的样本为唾液样本，取样简单，可以实现无创取样(现有的免疫学方法需要侵入性血液采集；核酸检测的方法需要上皮细胞，取样要求高)。本发明提供的试纸条稳定性好(现有的核酸检测需要冷藏试剂)；本发明提供的试纸条灵敏度高，本发明在抗原序列中引入半胱氨酸，实现抗原的定向标记；由于iga先于igm和igg分泌到唾液中，本发明提供的试纸条检测唾液中的iga，能够实现早期筛查。
对比rt-pcr法，本发明提供的试纸条的优点为：检测环境要求低，检测仪器成本低，避免复杂前处理过程，检测速度快(15min)，样本采集容错率高，可实现高通量检测，单人份包装，稳定性好，重复性高，操作简单无需专业人员。
对比测序法，本发明提供的试纸条的优点为检测仪器成本低，试剂可常温储存，单人份包装，稳定性好，重复性高，操作简单无需专业人员，检测快速15min。
对比胶体金法，elisa法，本发明提供的试纸条检测方法的优点为样本采集简单(本发明为唾液，elisa法为血液)，适用于临床推广使用。本发明实现了抗原的定向偶联，特异性高，结果准确。本发明试纸条检测的是iga，而胶体金检测的为igg，igm，本发明所述试纸条检测病毒iga，更有利于早期筛查。
附图说明
图1为新型冠状病毒2019-ncoviga抗体检测试剂参考值的确定。
具体实施方式
本发明提供了一种检测新型冠状病毒2019-ncoviga抗体的重组蛋白，所述重组蛋白为在新型冠状病毒2019-ncovnp蛋白在c末端加入了一个半胱氨酸残基后获得，所述重组蛋白的氨基酸序列如seqidno.1所示，具体如下：
msdngpqnqrnapritfggpsdstgsnqngersgarskqrrpqglpnntaswftaltqhgkedlkfprgqgvpintnsspddqigyyrratrrirggdgkmkdlsprwyfyylgtgpeaglpygankdgiiwvategalntpkdhigtrnpannaaivlqlpqgttlpkgfyaegsrggsqassrsssrsrnssrnstpgssrgtsparmagnggdaalalllldrlnqleskmsgkgqqqqgqtvtkksaaeaskkprqkrtatkaynvtqafgrrgpeqtqgnfgdqelirqgtdykhwpqiaqfapsasaffgmsrigmevtpsgtwltytgaiklddkdpnfkdqvillnkhidayktfpptepkkdkkkkadetqalpqrqkkqqtvtllpaadlddfskqlqqsmssadstqagssc。在本发明具体实施过程中，所述重组蛋白委托北京德奥平生物技术有限公司生产制备，所述重组蛋白的纯度大于95％。
本发明还提供了一种检测新型冠状病毒2019-ncoviga抗体的试纸条，包括底板以及依次搭接粘贴在底板上的样品吸收垫、荧光微球垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述荧光微球垫喷涂有荧光微球标记的2019新型冠状病毒特异性抗原，所述硝酸纤维素膜上固定有检测区和质控区，所述检测区喷涂有抗人iga抗体，所述质控区喷涂有羊抗鸡igy抗体；所述2019新型冠状病毒特异性抗原为所述的重组蛋白。
在本发明中，所述荧光微球垫喷涂有荧光微球标记的2019新型冠状病毒特异性抗原，即荧光微球标记的重组蛋白。在本发明中，所述荧光微球标记的重组蛋白的喷涂浓度优选为5～20ug/ml；在本发明中，所述喷涂优选的通过金标点膜喷金仪实现。在本发明中，所述荧光微球优选为聚苯乙烯包裹稀土离子eu 的微球，所述荧光微球表面有氨基基团；所述荧光微球的直径优选为100～300nm。本发明对所述荧光微球的来源没有特殊限定，采用本领域常规的市售荧光微球即可。在本发明中，所述荧光微球的氨基基团与重组蛋白的巯基通过交联剂偶联。在本发明中，所述交联剂优选的包括smcc、mbs、emcs和pmpi中的一种。
在本发明中，所述硝酸纤维素膜上固定有检测区和质控区，所述检测区喷涂有抗人iga抗体，所述质控区喷涂有羊抗鸡igy抗体。在本发明中，所述抗人iga抗体优选的包括羊抗人iga多克隆抗体、鼠抗人iga单克隆抗体、兔抗人iga多克隆抗体和兔抗人iga单克隆抗体中的一种。本发明对所述抗人iga抗体的来源没有特殊限定，采用本领域常规市售产品或自行制备获得。本发明对所述羊抗鸡igy抗体的来源没有特殊限定，采用本领域常规的市售商品即可。在本发明中，所述抗人iga抗体的喷涂浓度优选为0.3～0.7mg/ml，更优选为0.5mg/ml；所述抗人iga抗体的喷膜量优选为1.0～1.4μl/cm，更优选为1.2μl/cm。在本发明中，所述羊抗鸡igy抗体的喷涂浓度优选为0.3～0.4mg/ml，更优选为0.3mg/ml；所羊抗鸡igy抗体的喷膜量优选为1.0～1.4μl/cm，更优选为1.2μl/cm。
本发明对所述底板、样品吸收垫和吸水垫没有特殊限定，采用本领域常规的试纸条使用的底板、样品吸收垫和吸水垫即可。
在本发明中，所述试纸条检测的样本优选为唾液样本。在本发明中，所述试纸条优选的还包括样本稀释液；所述样本稀释液优选的包括pb溶液和tween-20；所述pb溶液的浓度优选为0.008～0.012mol/l，更优选为0.01mol/l，所述pb溶液的ph值优选为7.4；所述样本稀释液中tween-20的体积含量优选为0.4％～0.6％，更优选为0.5％。
本发明提供了所述的试纸条的制备方法，包括以下步骤：
1)将荧光微球活化后，与所述重组蛋白混合偶联获得荧光微球标记的2019新型冠状病毒特异性抗原；
2)将所述荧光微球标记的2019新型冠状病毒特异性抗原喷涂至玻璃纤维膜上获得荧光微球垫；
3)将抗人iga抗体和羊抗鸡igy抗体分别喷涂在硝酸纤维素膜的检测区和质控区获得固定有检测区和质控区的硝酸纤维素膜；
(4)在底板上依次搭接地粘贴样品吸收垫、荧光微球垫、固定有检测区和质控区的硝酸纤维素膜、以及吸水垫获得试纸条。
在本发明中，将荧光微球活化后，与所述重组蛋白混合偶联获得荧光微球标记的2019新型冠状病毒特异性抗原。在本发明中，所述荧光微球的活化为将所述荧光微球、交联剂和活化缓冲液混合、震荡活化20～40min。在本发明中，所述荧光微球、交联剂和活化缓冲液的比例优选为100μl:2mg:400μl。在本发明中，震荡活化的时间优选为30min。本发明对所述荧光微球活化的温度没有特殊限定，20～25℃均可。在本发明中，所述交联剂优选的包括smcc、mbs、emcs和pmpi中的一种。在本发明中，所述活化缓冲液优选为80～120mmol/l的pb溶液，更优选为100mmol/l；所述活化缓冲液的ph值优选为7.8～8.2，更优选为8.0。本发明在所述震荡活化后，优选的进行离心，收集活化后的荧光微球；所述离心的转速优选为8000～12000rpm，更优选为10000rpm，所述离心的时间优选的为8～12min，更优选为10min，所述离心的温度优选为3～5℃，更优选为4℃。
本发明在所述荧光微球活化后，将活化后的荧光微球与所述重组蛋白混合偶联获得荧光微球标记的2019新型冠状病毒特异性抗原。在本发明中，所述偶联具体为将所述活化后的荧光微球、重组蛋白和偶联缓冲液混合，震荡偶联。在本发明中，以活化前荧光微球的体积计，所述荧光微球与重组蛋白的比例优选为80～120μl:2μg，更优选为100μl:2μg。在本发明中，所述震荡偶联的时间优选为50～70min，更优选为60min。本发明对所述震荡偶联的温度没有特殊限定，20～25℃均可。在本发明中，所述偶联缓冲液优选为pb溶液，所述pb溶液的浓度有选为80～120mmol/l，更优选为100mmol/l；所述pb溶液的ph值优选为6.6～6.8，更优选为6.7。本发明在所述震荡偶联后，优选的还包括震荡封闭步骤；所述震荡封闭优选的在所述震荡偶联体系中加入bsa溶液进行震荡封闭；所述bsa溶液的质量浓度为0.8％～1.2％，更优选为1.0％；所述bsa溶液与活化前荧光微球的体积比优选为(0.8～1.2):1，更优选为1:1。在本发明中，所述震荡封闭的时间优选为10～14h，更优选为12h。
本发明在所述震荡封闭后，优选的进行离心、重悬和保存。在本发明中，所述离心的转速优选为8000～12000rpm，更优选为10000rpm，所述离心的时间优选的为8～12min，更优选为10min，所述离心的温度优选为3～5℃，更优选为4℃。在本发明中，所述重悬的重悬液优选为包括质量分数0.01％nan3和质量分数0.1％bsa的pb溶液，所述重悬液的ph值优选为7.3～7.5，更优选为7.4。在本发明中，优选的用所述重悬液洗涤后进行保存，所述洗涤的次数优选为1～2次。在本发明中，所述保存的温度优选为3～5℃，更优选为4℃；所述保存优选的避光进行。
本发明在获得所述荧光微球标记的2019新型冠状病毒特异性抗原后，将所述荧光微球标记的2019新型冠状病毒特异性抗原喷涂至玻璃纤维膜上获得荧光微球垫。在本发明中，所述荧光微球标记的2019新型冠状病毒特异性抗原优选的稀释后进行喷涂；在本发明中，所述稀释优选的采用上述重悬液进行；所述稀释后的浓度优选为5～20μg/ml。在本发明中，优选的采用金标点膜喷金仪进行喷涂，本发明在所述喷涂后，优选的进行干燥；所述干燥的温度优选为35～40℃，更优选为37℃，所述干燥的时间优选为2～4h，更优选为3h。
在本发明中，将抗人iga抗体和羊抗鸡igy抗体分别喷涂在硝酸纤维素膜的检测区和质控区获得固定有检测区和质控区的硝酸纤维素膜。在本发明中，所述抗人iga抗体的喷涂浓度优选为0.3～0.7mg/ml，更优选为0.5mg/ml；所述抗人iga抗体的喷膜量优选为1.0～1.4μl/cm，更优选为1.2μl/cm。在本发明中，所述羊抗鸡igy抗体的喷涂浓度优选为0.3～0.4mg/ml，更优选为0.3mg/ml；所羊抗鸡igy抗体的喷膜量优选为1.0～1.4μl/cm，更优选为1.2μl/cm。在本发明中，所述喷涂优选的通过金标点膜喷金仪进行；本发明在所述喷涂后进行干燥；所述干燥的温度优选为35～40℃，更优选为37℃，所述干燥的时间优选为4～6h，更优选为5h。
在本发明中，在底板上依次搭接地粘贴样品吸收垫、荧光微球垫、固定有检测区和质控区的硝酸纤维素膜及吸水垫获得试纸条。在本发明具体实施过程中，优选的将样品吸收垫、荧光微球垫、硝酸纤维素膜、吸水垫从左至右依次搭接粘贴固定在底板上，所述样品吸收垫的末端与荧光微球垫始段相连，所述荧光微球垫的末端与硝酸纤维素膜的始端相连，所述硝酸纤维素膜的末端与吸水垫的始端相连。在本发明中，所述样品吸收垫的始端与底板的始端对齐，所述吸水垫的末端与底板的末端对齐。在本发明中，优选的采用机器进行试纸条的切割；所述试纸条的宽度优选为3.5～4.5mm，更优选为3.96mm。在本发明中，所述试纸条优选的装于塑料制卡中，形成试纸卡。
在本发明中，所述试纸条的使用方法包括以下步骤：s1)用样本稀释液对样本进行稀释获得处理后的样本；s2)将处理后的样本滴加到试纸条上进行检测；s3)将所述试纸条置于荧光监测分析仪中读取结果。在本发明中，步骤s1)中所述稀释的倍数优选为8～12倍，更优选为10倍。步骤2)中所述样本滴加体积优选为70～90μl，更优选为80μl；步骤2)所述的检测的时间优选为13～17min，更优选为15min；检测温度优选为20～25℃。
本发明还提供了所述的重组蛋白、所述的试纸条在制备2019新型冠状病毒检测试剂中的应用。
下面结合实施例对本发明提供的技术方案进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1
新型冠状病毒2019-ncoviga抗体检测试剂条的制备。
1.新型冠状病毒2019-ncov重组np蛋白的制备:
新型冠状病毒2019-ncov重组np蛋白在c末端加入了一个半胱氨酸残基，氨基酸序列如序列seqidno.1所示。委托北京德奥平生物技术有限公司生产制备，纯度大于95％。
msdngpqnqrnapritfggpsdstgsnqngersgarskqrrpqglpnntaswftaltqhgkedlkfprgqgvpintnsspddqigyyrratrrirggdgkmkdlsprwyfyylgtgpeaglpygankdgiiwvategalntpkdhigtrnpannaaivlqlpqgttlpkgfyaegsrggsqassrsssrsrnssrnstpgssrgtsparmagnggdaalalllldrlnqleskmsgkgqqqqgqtvtkksaaeaskkprqkrtatkaynvtqafgrrgpeqtqgnfgdqelirqgtdykhwpqiaqfapsasaffgmsrigmevtpsgtwltytgaiklddkdpnfkdqvillnkhidayktfpptepkkdkkkkadetqalpqrqkkqqtvtllpaadlddfskqlqqsmssadstqagssc
2.荧光微球标记新型冠状病毒2019-ncov重组np抗原的制备
(1)活化：取市售的内部包埋荧光染料、表面修饰有氨基官能团的微球悬液100μl混悬于400μl活化缓冲液中(100mmol/lpbph8.0)，加入2mgsmcc，混匀后室温震荡活化30min；
(2)偶联：将(1)所述混悬液于4℃，10000rpm离心10min后弃上清，重悬于偶联缓冲液(100mmol/lpbph6.7)中，加入2μg新型冠状病毒2019-ncov重组np抗原溶液，混匀后25℃震荡偶联60min；
(3)封闭：将(2)所述混悬液加入1％的bsa溶液100μl，混匀后室温震荡封闭过夜；
(4)贮存：将(3)所述混悬液于4℃10000rpm离心10min后弃上清，重悬于贮存缓冲液中(0.01％nan3、0.1％bsa的ph7.4的pb缓冲液)，以此法洗涤微球1次，混匀后于4℃避光保存。
3.玻璃纤维垫的制备
将贮存的荧光微球标记的新型冠状病毒2019-ncov重组np抗原以贮存缓冲液稀释到浓度为10μg/ml，用金标点膜喷金仪喷涂，喷涂速度为1μl/ml，37℃干燥3h，取出密封保存。
4.硝酸纤维素(nc)膜的制备
用0.05mol/l、ph7.2的pb缓冲液将羊抗人iga抗体稀释到0.5mg/ml，用金标点膜喷金仪将其喷涂于nc膜上的检测区(t)，喷膜量为1.2μl/cm；用0.05mol/l、ph7.2的pb缓冲液将羊抗鸡igy抗体稀释到0.3mg/ml，用金标点膜喷金仪将其喷涂于nc膜上的检测区(c)，喷膜量为1.2μl/cm；37℃干燥5h，备用。
5.试纸条的组装
将样品吸收垫、玻璃纤维垫、硝酸纤维素膜、吸水垫从左至右依次搭接粘贴固定在底板上，样品吸收垫的末端与玻璃纤维垫始段相连，玻璃纤维垫的末端与硝酸纤维素膜的始端相连，硝酸纤维素膜的末端与吸水垫的始端相连，样品吸收垫的始端与底板的始端对齐，吸水垫的末端与底板的末端对齐，然后用机器切成3.96mm宽的小条，装在特制的塑料制卡中，形成试纸卡。
实施例2
检测新型冠状病毒2019-ncoviga抗体的时间分辨荧光免疫层析试纸条的应用
1、样品前处理
吸取20μl唾液样本加入到200μl样本稀释液，充分混匀。
2、用试纸条检测
用微量移液器准确吸取80μl待检样品溶液于试纸条加样孔中，室温(20～25℃)作用15min；将试纸卡插入荧光检测仪的承载器中，通过触摸显示屏选择待检项目，按下“开始检测”按键，荧光检测仪将自动对试纸卡进行扫描测试；通过仪器的显示屏幕上读取或打印检测结果。
3、检测结果分析
定量检测
测试完成后，仪器获得试纸卡上检测区时间分辨荧光强度与质控区时间分辨荧光强度的比值，基于预先内置的试纸卡上检测区时间分辨荧光强度与质控区时间分辨荧光强度的比值与新型冠状病毒2019-ncoviga抗体的关系曲线，获得待测样品中新型冠状病毒2019-ncoviga的含量。
曲线方程采用四参数拟合:y＝(a-d)/[1 (x/c)^b] d
其中：a＝3058.2477，b＝-0.85436，c＝38284.36669，d＝0.03176
若质控区未检出荧光信号强度，表明不正确的操作过程或试纸卡已失效。
实施例3
临床样本的参考值(cutoff值)的确定
选取临床样本60例健康人(无2019新型冠状病毒感染)，结果如图1所示，本发明测定2019新型冠状病毒感染iga时间分辨免疫层析试纸条测定健康人群的cutoff值为1。
由上述实施例可知，本发明提供的重组2019新型冠状病毒抗原，即重组蛋白，通过c端的半胱氨酸上的巯基同荧光微球的氨基偶联，实现了抗原的定向偶联，有利于抗原结构的伸展，以及正确结构的展示，因此检测的特异性，灵敏度更高。同时本发明所述试纸条采用唾液样本，避免了采血过程对病人造成的不适以及交叉感染，可以早期、无创的进行2019新型冠状病毒感染的筛查，有利于医疗机构尤其是基层医疗的推广，能够有效的辅助2019新型冠状病毒的防控工作。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
序列表
<110>北京丹大生物技术有限公司
<120>一种新型冠状病毒iga抗体快速检测试纸条的制备方法
<160>1
<170>siposequencelisting1.0
<210>1
<211>423
<212>prt
<213>人工序列(artificialsequence)
<400>1
metseraspasnglyproglnasnglnargasnalaproargilethr
151015
pheglyglyproseraspserthrglyserasnglnasnglygluarg
202530
serglyalaargserlysglnargargproglnglyleuproasnasn
354045
thralasertrpphethralaleuthrglnhisglylysgluaspleu
505560
lyspheproargglyglnglyvalproileasnthrasnserserpro
65707580
aspaspglnileglytyrtyrargargalathrargargilearggly
859095
glyaspglylysmetlysaspleuserproargtrptyrphetyrtyr
100105110
leuglythrglyproglualaglyleuprotyrglyalaasnlysasp
115120125
glyileiletrpvalalathrgluglyalaleuasnthrprolysasp
130135140
hisileglythrargasnproalaasnasnalaalailevalleugln
145150155160
leuproglnglythrthrleuprolysglyphetyralagluglyser
165170175
argglyglyserglnalaserserargserserserargserargasn
180185190
serserargasnserthrproglyserserargglythrserproala
195200205
argmetalaglyasnglyglyaspalaalaleualaleuleuleuleu
210215220
aspargleuasnglnleugluserlysmetserglylysglyglngln
225230235240
glnglnglyglnthrvalthrlyslysseralaalaglualaserlys
245250255
lysproargglnlysargthralathrlysalatyrasnvalthrgln
260265270
alapheglyargargglyprogluglnthrglnglyasnpheglyasp
275280285
glngluleuileargglnglythrasptyrlyshistrpproglnile
290295300
alaglnphealaproseralaseralaphepheglymetserargile
305310315320
glymetgluvalthrproserglythrtrpleuthrtyrthrglyala
325330335
ilelysleuaspasplysaspproasnphelysaspglnvalileleu
340345350
leuasnlyshisileaspalatyrlysthrpheproprothrglupro
355360365
lyslysasplyslyslyslysalaaspgluthrglnalaleuprogln
370375380
argglnlyslysglnglnthrvalthrleuleuproalaalaaspleu
385390395400
aspasppheserlysglnleuglnglnsermetserseralaaspser
405410415
thrglnalaglysersercys
420
1.一种检测新型冠状病毒2019-ncoviga抗体的重组蛋白，其特征在于，所述重组蛋白的氨基酸序列如seqidno.1所示。
2.一种检测新型冠状病毒2019-ncoviga抗体的试纸条，包括底板以及依次搭接粘贴在底板上的样品吸收垫、荧光微球垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，其特征在于，所述荧光微球垫喷涂有荧光微球标记的2019新型冠状病毒特异性抗原，所述硝酸纤维素膜上固定有检测区和质控区，所述检测区喷涂有抗人iga抗体，所述质控区喷涂有羊抗鸡igy抗体；所述2019新型冠状病毒特异性抗原为权利要求1中所述的重组蛋白。
3.根据权利要求2所述的试纸条，其特征在于，所述试纸条检测的样本为唾液样本。
4.根据权利要求2或3所述的试纸条，其特征在于，所述试纸条还包括样本稀释液；所述样本稀释液包括pb溶液和tween-20；所述pb溶液的浓度为0.008～0.012mol/l；所述样本稀释液中tween-20的体积含量为0.4％～0.6％。
5.根据权利要求2所述的试纸条，其特征在于，所述荧光微球为聚苯乙烯包裹稀土离子eu 的微球，所述荧光微球表面有氨基基团；所述荧光微球的直径为100～300nm。
6.根据权利要求5所述的试纸条，其特征在于，所述荧光微球的氨基基团与重组蛋白的巯基通过交联剂偶联。
7.根据权利要求2所述的试纸条，其特征在于，所述抗人iga抗体包括羊抗人iga多克隆抗体、鼠抗人iga单克隆抗体、兔抗人iga多克隆抗体和兔抗人iga单克隆抗体中的一种。
8.权利要求2～7任意一项所述的试纸条的制备方法，包括以下步骤：
1)将荧光微球活化后，与所述重组蛋白混合偶联获得荧光微球标记的2019新型冠状病毒特异性抗原；
2)将所述荧光微球标记的2019新型冠状病毒特异性抗原喷涂至玻璃纤维膜上获得荧光微球垫；
3)将抗人iga抗体和羊抗鸡igy抗体分别喷涂在硝酸纤维素膜的检测区和质控区获得固定有检测区和质控区的硝酸纤维素膜；
(4)在底板上依次搭接地粘贴样品吸收垫、荧光微球垫、固定有检测区和质控区的硝酸纤维素膜、以及吸水垫获得试纸条。
9.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，步骤1)中所述荧光微球活化为将所述荧光微球、交联剂和活化缓冲液混合震荡活化20～40min。
10.权利要求1所述的重组蛋白、权利要求2～7任意一项所述的试纸条在制备2019新型冠状病毒检测试剂中的应用。
技术总结