本发明涉及用于粘膜下注射的两剂型局部注射溶液，以及在制造局部注射溶液中的用途。
在本说明书中，可以使用以下缩写：
ha：透明质酸钠
g-la：结冷胶
sa：海藻酸钠
agar：卡拉胶
seh：粘膜下隆起高度
ns：生理盐水
表达式“％”表示“质量百分比”。
背景技术：
近年来，用于胃肠道癌(胃癌，食道癌和结肠癌)的内镜治疗的数量逐年增加。同时，需要先进治疗技术的困难的内镜治疗病例(大的肿瘤尺寸，具有纤维化的粘膜下层，难以治疗的部位处的肿瘤)也在增加。
日本目前针对胃肠道癌进行的内镜治疗基于两种技术，即内镜粘膜切除术(emr)和内镜粘膜下剥离术(esd)。在这两种技术中，一个非常重要的步骤是“局部注射”，其中将局部注射溶液(如盐水)注射到粘膜下层中以升高粘膜。
通过局部注射获得足够高的粘膜隆起，并长时间保持粘膜隆起，是实践安全可靠的技术(肿瘤切除术)的重要因素。特别地，对于困难的内镜治疗病例，治疗本身的成功或失败取决于这些因素。更具体地，为了防止胃肠道穿孔(这是内镜治疗的严重并发症(通过不仅对肿瘤所在的粘膜层而且对肌肉层的切除/破坏而引起))，如果粘膜层可以通过局部注射被升高，肌肉层和粘膜层之间的距离增加，这可以避免破坏肌肉层。此外，如果粘膜隆起很高，则在emr期间容易进行勒除(绞窄)，或在esd期间容易进行粘膜切口/剥离；这提高了准确性，并使适当的肿瘤切除成为可能，且没有残留肿瘤。
目前，已经开发出0.4％的透明质酸钠(ha，产品名称：mucoup)，并且已在临床上使用，该0.4％的透明质酸钠是具有高粘度的局部注射溶液。
此外，作为mucoup的替代品，已经提出了局部注射溶液，例如具有假塑性粘度的多糖(专利文献(专利文献1)，高粘性物质或亲水性聚合物，例如聚乙二醇和海藻酸钠(专利文献2)，可生物降解的水凝胶(非专利文献1)，以温度依赖的方式从液体变为凝胶的聚合物(非专利文献2)和可光交联的壳聚糖(非专利文献3)。但是，在现阶段，还没有开发出可以替代ha的优异的局部注射解决方案。
现有技术文献
专利文献
专利文献1：wo2013/077357
专利文献2：jp2007-75569a
非专利文献
非专利文献1：tran,r.t.等,gastrointest.endosc.75(5):1092-1097,2012。
非专利文献2：fernandez-esparrach,g.等,gastrointest.endosc.69(6):1135-1139,2009。
非专利文献3：hayashi,t.等,j.biomed.mater.res.b.appl.biomater.71(2):367-372,2004。
技术实现要素：
技术问题
本发明的目的是提供低成本的局部注射溶液，通过该局部注射溶液获得高的粘膜隆起，该隆起长时间保持，并且组织不易被破坏。
本发明的另一个目的是提供一种即使局部注射失败也可以进行调节的局部注射液。
要解决的问题
本发明提供以下局部注射液。
项目1.一种用于粘膜下注射的两剂型局部注射溶液，包括以下(i)和(ii)：
(i)含有选自海藻酸钠、卡拉胶和结冷胶中的至少一种的多糖水溶液；和
(ii)含有选自钠离子和钙离子中的至少一种阳离子的水性盐溶液，
其中，当所述多糖是海藻酸钠时，所述阳离子包含钙离子。
项目2.根据项目1所述的用于粘膜下注射的两剂型局部注射溶液，其中，所述多糖的浓度按质量计为0.1％至2％。
项目3.根据项目1或2所述的用于粘膜下注射的两剂型局部注射溶液，其中，所述盐的浓度为0.1w/v％至4w/v％。
项目4.根据项目1至3中任一项所述的用于粘膜下注射的两剂型局部注射溶液，其中，所述多糖为海藻酸钠，且所述水性盐溶液包含钙离子。
项目5.根据项目1至3中任一项所述的用于粘膜下注射的两剂型局部注射溶液，其中，所述多糖为卡拉胶或结冷胶，所述水性盐溶液包含钠离子或钙离子。
项目6.根据项目1至3和5中任一项所述的用于粘膜下注射的两剂型局部注射溶液，其中，所述卡拉胶包括κ-卡拉胶和/或ι-卡拉胶。
项目7.根据项目1至6中任一项所述的用于粘膜下注射的两剂型局部注射溶液，其是用于内镜粘膜切除术(emr)或内镜粘膜下剥离术(esd)。
项目8.含有选自海藻酸钠、卡拉胶和结冷胶中的至少一种的多糖水溶液在制备用于粘膜下注射的两剂型局部注射溶液中的用途。
项目9.含有选自钠离子和钙离子中的至少一种阳离子的水性盐溶液在制备用于粘膜下注射的两剂型局部注射溶液中的用途。
发明的有益效果
如果通过局部注射获得较高的粘膜隆起，则可以将粘膜层升高，从而增加肌肉层和粘膜层之间的距离；因此，可以避免对肌肉层的破坏(胃肠道穿孔)。另一方面，如果粘膜隆起低，则肌肉层和粘膜层之间的距离短，并且破坏肌肉层(胃肠道穿孔)的风险或在粘膜层中剩留肿瘤的风险增加。通过开发和使用具有较高粘度的局部注射溶液，理论上可以通过局部注射增加粘膜隆起的高度。然而，局部注射溶液的粘度增加实际上使得在内镜治疗中用局部注射针进行注射变得困难。考虑到这些事实，当前使用的局部注射溶液具有调整的浓度和粘度以在实际内镜治疗中可以注射而不会出现问题的范围内实现最高性能(粘膜隆起)。(这是目前ha浓度上限为0.4％的原因之一。)
根据本发明的两剂型局部注射溶液包括用阳离子(ca2 ，na )胶凝化的多糖水溶液和包含阳离子的水性盐溶液。当注射到粘膜下组织中时，两种液体混合并形成凝胶，大大增加了粘度。以这种方式，使用粘度高于可注射粘度上限的局部注射溶液可来获得粘膜隆起。
通过使用这些两剂型的局部注射溶液，可以获得高的粘膜隆起，该隆起可以长时间保持，并且可以减少对组织的破坏。此外，这些两剂型局部注射溶液是廉价的。通过注射本发明的两剂型局部注射溶液的两种药剂，获得了高粘膜隆起，这是单一剂型注射所不能获得的。此外，当通过注射第一注射溶液(多糖水溶液或水性盐溶液)在预期的粘膜部位未获得隆起时，在不注射第二注射溶液(水性盐溶液或多糖水溶液)的情况下在数分钟后，该隆起将降低。因此，可以重新注射第一注射溶液，然后可以注射第二注射溶液以获得目标粘膜部位处的隆起。因此，当局部注射失败时可以进行调整。
在目前也使用0.4％的透明质酸钠(ha)的情况下，通常的情况是：首先局部注射盐水，并且在确认在适当部位形成粘膜隆起后，局部注射ha。根据该方法，由于在第一次局部注射中注射的盐水，ha的浓度和粘度会降低，这可使性能变差。然而，在本发明中，这不是问题。
附图说明
图1是使用本发明的局部注射溶液的两步骤系统的示意图。a)局部注射到不合适的部位，b)局部注射失败，c)隆起的自发消失，d)再次局部注射，e)局部注射到合适的部位，f)通过追加的局部注射来增强隆起(增加隆起高度并通过混合两种液体增加粘度来延长保持隆起的时间)，g)局部注射到适当的位置，h)局部注射成功，i)通过追加的局部注射来增强隆起(增加隆起并通过混合两种液体增加粘度来延长保持隆起的时间)，j)施加勒除器，k)继续治疗，x)第一剂，y)第二剂，p)粘膜层，q)粘膜下层，r)肌肉层，s)浆膜，t)数分钟之后。
图2示出了本发明的间接体内(exvivo)模型，其中消化道样品用夹子固定。用两个夹子(a)施加均匀的张力(b)。
图3是示出关于海藻酸钠的she随时间的的测量结果的图。
图4是示出关于结冷胶的she随时间的测量结果的图。
图5是示出关于卡拉胶的she随时间的测量结果的图。
具体实施方式
本发明的用于粘膜下注射的两剂型局部注射溶液用于注射至粘膜下层中，以用内镜刀或通过绞窄或用勒除器施加电流来膨胀粘膜层并去除肿瘤等。内镜治疗(其中使用本发明的局部注射溶液)的实例包括但不限于内镜粘膜切除术(emr)和内镜粘膜下层剥离术(esd)。
根据本发明的用于粘膜下注射的两剂型局部注射溶液包括：(i)含有选自海藻酸钠、卡拉胶和结冷胶中的至少一种的多糖水溶液；和(ii)含有选自钠离子和钙离子中的至少一种阳离子的水性盐溶液。将这些溶液注射到粘膜下层中。注射顺序可以是任何顺序。可以首先注射多糖水溶液(i)，然后可以注射水性盐溶液(ii)。也可以先注射水性盐溶液(ii)，然后注射多糖水溶液(i)。
在下文，首先注射到粘膜下层中的水溶液(i)或(ii)有时称为“第一液体”，而随后注射的水溶液(ii)或(i)有时称为“第二液体”。
例如，可以将本发明的局部注射溶液注射到消化道的粘膜下层中。如图1所示，消化道具有四层，即，p)粘膜层，q)粘膜下层，r)肌肉层和s)浆膜。将本发明的局部注射溶液的第一液体和第二液体两者都注射到粘膜下层q)中。
在图1中，a)当第一种液体x)局部注射到不合适的部位时，以及b)当局部注射失败时，t)该部位允许静置数分钟以c)允许隆起的自发消失。此后，d)再次进行局部注射，以e)将第一液体x)局部施加到适当的部位。接着，f)另外局部注射第二液体y)以增强隆起(增加隆起的高度，并延长保持隆起的时间)。此后，用勒除器j)或刀子切除隆起部位的肿瘤，以及k)继续治疗。
在一个优选的实施方案中，多糖水溶液，特别是结冷胶和卡拉胶的水溶液，具有稍高的粘度；因此，如果将包含多糖的第一液体注射到粘膜下层失败，则隆起的自发消失会花费稍长的时间。因此，使用水性盐溶液作为第一液体是有利的，这是因为即使当局部注射失败时，也会迅速出现隆起的自发消失。
卡拉胶优选包含ι卡拉胶。ι卡拉胶借助钙离子胶凝化。优选的卡拉胶可以是单独的ι卡拉胶；或两种或三种卡拉胶(包括κ卡拉胶和/或λ卡拉胶，以及ι卡拉胶)的混合物。卡拉胶是从红藻获得的，琼脂(agar)也是如此。因此，在本说明书和附图中，卡拉胶可以被称为“agar”。
当借助钙离子胶凝化的海藻酸钠用作多糖时，水性盐溶液包含钙离子。
结冷胶借助钠离子和钙离子无论哪一种都胶凝化。因此，当结冷胶用作多糖时，水性盐溶液包含钠离子和钙离子中的至少一种阳离子。
用于制备包含钠离子或钙离子的水性盐溶液的盐的实例包括氯化钠、氯化钙、乳酸钠、乳酸钙、柠檬酸钠、柠檬酸钙、苹果酸钠、苹果酸钙、葡萄糖酸钠、葡萄糖酸钙等。这些可以单独使用或以两种以上的组合使用。
对于氯化钠和氯化钙，水溶液中的盐浓度为约0.1w/v％至4w/v％，优选为约0.5w/v％至2w/v％。对于葡萄糖酸钠和葡萄糖酸钙，盐浓度为约1w/v％至34w/v％，优选约4.0w/v％至17w/v％。对于乳酸钠和乳酸钙，盐浓度为约0.1w/v％至10.0w/v％，优选约1.0至5.0w/v％。对于苹果酸钠和苹果酸钙，盐浓度为约0.1w/v％至15w/v％，优选约2.0w/v％至8.0w/v％。对于柠檬酸钠和柠檬酸钙，盐浓度为约0.1w/v％至25w/v％，优选为约4.0w/v％至15.0w/v％。
海藻酸钠在水溶液中的浓度为约0.01w/v％至1.0w/v％，优选为约0.1w/v％至0.6w/v％。结冷胶的浓度为约0.01w/v％至1.0w/v％，优选为约0.1w/v％至0.6w/v％。卡拉胶的浓度为约0.1w/v％至2.0w/v％，优选约0.5w/v％至1.5w/v％。
用于局部注射溶液的多糖水溶液的浓度优选在上述范围内，这是因为获得足够高的粘膜隆起，该隆起被保持足够的时间，并且在适当的局部注射压力下进行局部注射。
多糖水溶液向粘膜下层中的注射体积为约0.1ml至15ml，优选为约1.0ml至5.0ml。
水性盐溶液向粘膜下层中的注射体积为约0.1ml至10ml，优选约1.0ml至5.0ml。
在本发明中，创建用于评价局部注射溶液(用于筛选用于粘膜下注射的局部注射溶液的间接体内消化道样品)的新的间接体内模型。在常规的间接体内模型中，通过用多个销钉将消化道样品(例如猪胃切片)的周围固定在平台上，并测量当一定量的局部注射溶液被注射到粘膜下层中时获得的隆起高度来进行评价。尽管此方法看起来是合理的测量，但即使注射了相同的局部注射溶液时，隆起的高度也变化很大。相反，本发明的间接体内模型显示出数据的小的变化(小的标准偏差)，并且使得能够在局部注射溶液之间进行详细的比较。消化道样品可以是小肠、大肠、十二指肠、胃等的样品，优选胃样品，特别优选猪胃切片。在本发明的用于筛选用于粘膜下注射的局部注射溶液的间接体内消化道样品中，将猪胃切片放置在平台上并用两个或更多个固定工具固定。固定工具的数量优选为2至4个，更优选2至3个，并且特别优选2个。固定工具的位置没有特别限制，并且它们优选地布置在对称位置。例如，当使用两个固定工具时，优选将固定工具布置在相对的位置(在两侧)(图2)。固定工具的示例包括大钢夹(bulldogclip)，燕尾夹(foldbackclip)，v形夹(chevronclip)，活页夹(binderclip)等。如图2所示，优选的是，将消化道样品的端部完全夹在中间。在本发明的一个实施方式中，可以将重物附接到固定工具中的一个或多个上，以通过将重物悬挂在平台之外来施加张力。
实施例
下面结合实施例和对比例对本发明进行详细描述。
在实施例中，使用以下起始材料。
海藻酸钠：
由nacalaitesque株式会社生产的产品名称sodiumalginate
结冷胶：
三晶株式会社生产的产品名称kelcogel(cg-la)
卡拉胶：
三晶株式会社生产的产品名称genuvisco(cf02)
透明质酸钠：
生化学工业株式会社生产的产品名称mucoup
制备例1
制备以下多糖水溶液和水性盐溶液作为局部注射溶液。
-多糖水溶液：
根据常规方法制备结冷胶(g-la，0.4％)、透明质酸(ha，0.4％)、海藻酸钠(sa，0.4％)或卡拉胶(agar，1.0％)的水溶液。
-水性盐溶液：
根据常规方法制备0.9％nacl水溶液或2.0％cacl2水溶液。
这些多糖水溶液和水性盐溶液经受以下测试。
测试例1
使用图2所示的猪胃切片，将从上述制备例1中获得的局部注射溶液分别注射到新开发的间接体内模型中，以评价局部注射溶液。注射体积如下：
-当单独使用多糖水溶液(sa，g-la，agar或ha)时：2.5ml
-当多糖水溶液和水性盐溶液组合使用(sa ca，g-la ca或agar ca)时：2.0ml的多糖水溶液(sa0.4％，g-la0.4％，或agar1.0％) 0.5ml的水性盐溶液
-生理盐水(ns)：2.5ml
当将多糖水溶液与水性盐溶液组合时，首先局部注射多糖水溶液，然后局部注射水性盐溶液。
图3是示出当海藻酸钠(sa，0.4％) 氯化钙(2.0％)、海藻酸钠(sa，0.4％)、透明质酸(ha，0.4％)、以及生理盐水(ns)分别局部注射到新开发的用于评价局部注射溶液的间接体内模型中时，粘膜下隆起高度(seh)的测量结果的图。
图4是示出当结冷胶(g-la，0.4％) 氯化钙(2.0％)、结冷胶(g-la，0.4％)；透明质酸(ha，0.4％)、以及生理盐水(ns)分别局部注射到新开发的用于评价局部注射溶液的间接体内模型中时，粘膜下隆起高度(seh)的测量结果的图。
图5是示出当卡拉胶(agar，1.0％) 氯化钙(2.0％)、卡拉胶(agar，1.0％)、透明质酸(ha，0.4％)、以及生理盐水(ns)分别局部注射到新开发的用于评价局部注射溶液的间接体内模型中时，粘膜下隆起高度(seh)的测量结果的曲线图。
由图3至图5示出的结果表明：本发明的用于粘膜下注射的两剂型局部注射溶液作为用于内镜治疗的局部注射溶液是优异的，这是因为其使用使得能够保持足够长时间的高的粘膜下隆起高度(seh)。
1.一种用于粘膜下注射的两剂型局部注射溶液，包括以下(i)和(ii)：
(i)含有选自海藻酸钠、卡拉胶和结冷胶中的至少一种的多糖水溶液；和
(ii)含有选自钠离子和钙离子中的至少一种阳离子的水性盐溶液，
其中，当所述多糖是海藻酸钠时，所述阳离子包含钙离子。
2.根据权利要求1所述的用于粘膜下注射的两剂型局部注射溶液，其中，所述多糖的浓度按质量计为0.1％至2％。
3.根据权利要求1或2所述的用于粘膜下注射的两剂型局部注射溶液，其中，所述盐的浓度为0.1w/v％至4w/v％。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的用于粘膜下注射的两剂型局部注射溶液，其中，所述多糖为海藻酸钠，且所述水性盐溶液包含钙离子。
5.根据权利要求1至3中任一项所述的用于粘膜下注射的两剂型局部注射溶液，其中，所述多糖为卡拉胶或结冷胶，所述水性盐溶液包含钠离子或钙离子。
6.根据权利要求1至3和5中任一项所述的用于粘膜下注射的两剂型局部注射溶液，其中，所述卡拉胶包括κ-卡拉胶和/或ι-卡拉胶。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的用于粘膜下注射的两剂型局部注射溶液，其是用于内镜粘膜切除术(emr)或内镜粘膜下剥离术(esd)。
8.含有选自海藻酸钠、卡拉胶和结冷胶中的至少一种的多糖水溶液在制备用于粘膜下注射的两剂型局部注射溶液中的用途。
9.含有选自钠离子和钙离子中的至少一种阳离子的水性盐溶液在制备用于粘膜下注射的两剂型局部注射溶液中的用途。
技术总结