相关申请的交叉引用本申请要求2017年7月29日提交的标题为“扩增表达重组受体的细胞的试剂(reagentsforexpandingcellsexpressingrecombinantreceptors)”的美国临时专利申请62/538,671；2017年12月8日提交的标题为“扩增表达重组受体的细胞的试剂(reagentsforexpandingcellsexpressingrecombinantreceptors)”的美国临时专利申请62/596,742；2018年2月9日提交的标题为“扩增表达重组受体的细胞的试剂(reagentsforexpandingcellsexpressingrecombinantreceptors)”的美国临时专利申请62/628,889；以及2018年5月1日提交的标题为“扩增表达重组受体的细胞的试剂(reagentsforexpandingcellsexpressingrecombinantreceptors)”的美国临时专利申请62/665,468的优先权的权益；出于所有目的，将所述美国临时专利申请的内容通过引用以其整体特此并入。通过引用并入序列表本申请是与电子格式的序列表一起提交的。序列表以2018年7月27日创建的名为735042007340seqlist.txt的文件提供，其大小为123,336字节。将电子格式的序列表中的信息通过引用以其整体并入。本公开文本提供了用于刺激、富集、扩增和/或激活表达重组受体例如嵌合抗原受体的工程化细胞的组合物和方法。在一些实施方案中，所提供的方法包括通过与颗粒(例如珠颗粒)一起孵育来离体或在体外刺激、富集、扩增和/或激活细胞，所述颗粒具有识别或结合重组受体的附接的结合分子。在一些实施方案中，所述附接的结合分子是与重组受体结合的多肽，例如多肽抗原或抗独特型抗体。在一些实施方案中，可以将所提供的组合物用于制备用于过继免疫疗法的细胞例如基因工程化t细胞的方法中。
背景技术：
：多种策略可用于在体外或离体刺激或扩增细胞群，包括用于在体外扩增用于在过继细胞免疫疗法或癌症疗法中使用的抗原特异性t细胞。需要改进的用于刺激或扩增细胞群(包括出于研究、诊断和治疗目的)的策略。提供了满足此类需要的试剂、方法、以及制品和试剂盒。技术实现要素：本文提供了扩增细胞的方法，所述方法包括将含有表达重组抗原受体的细胞的输入组合物与多个颗粒一起孵育，所述重组抗原受体含有特异性地结合或识别抗原的细胞外抗原结合结构域，所述多个颗粒中的每一个含有特异性地结合抗原结合结构域的结合分子，其中所述结合分子与所述抗原结合结构域的结合诱导含有所述重组抗原受体的细胞的扩增，从而产生含有扩增的细胞的输出组合物。在一些实施方案中，重组抗原受体是嵌合抗原受体(car)。在一些实施方案中，抗原结合结构域含有抗体或其抗原结合片段。在一些情况下，抗原结合片段是或含有单链抗体片段。在一些实施方案中，其抗原结合片段含有通过柔性接头连接的抗体可变区。在一些任何此类实施方案中，其抗原结合片段是或含有scfv。在一些任何此类实施方案中，抗原选自αvβ6整合素(avb6整合素)、b细胞成熟抗原(bcma)、b7-h3、b7-h6、碳酸酐酶9(ca9，也称为caix或g250)、癌症-睾丸抗原、癌症/睾丸抗原1b(ctag，也称为ny-eso-1和lage-2)、癌胚抗原(cea)、细胞周期蛋白、细胞周期蛋白a2、c-c基序趋化因子配体1(ccl-1)、cd19、cd20、cd22、cd23、cd24、cd30、cd33、cd38、cd44、cd44v6、cd44v7/8、cd123、cd138、cd171、硫酸软骨素蛋白聚糖4(cspg4)、表皮生长因子蛋白(egfr)、iii型表皮生长因子受体突变(egfrviii)、上皮糖蛋白2(epg-2)、上皮糖蛋白40(epg-40)、肝配蛋白b2、肝配蛋白受体a2(epha2)、雌激素受体、fc受体样5(fcrl5；也称为fc受体同源物5或fcrh5)、胎儿乙酰胆碱受体(胎儿achr)、叶酸结合蛋白(fbp)、叶酸受体α、神经节苷脂gd2、o-乙酰化gd2(ogd2)、神经节苷脂gd3、糖蛋白100(gp100)、g蛋白偶联受体5d(gprc5d)、her2/neu(受体酪氨酸激酶erb-b2)、her3(erb-b3)、her4(erb-b4)、erbb二聚体、人高分子量黑色素瘤相关抗原(hmw-maa)、乙型肝炎表面抗原、人白细胞抗原a1(hla-a1)、人白细胞抗原a2(hla-a2)、il-22受体α(il-22ra)、il-13受体α2(il-13ra2)、激酶插入结构域受体(kdr)、κ轻链、l1细胞粘附分子(l1-cam)、l1-cam的ce7表位、含有富亮氨酸重复序列的蛋白8家族成员a(lrrc8a)、路易斯y、黑色素瘤相关抗原(mage)-a1、mage-a3、mage-a6、间皮素、c-met、鼠类巨细胞病毒(cmv)、粘蛋白1(muc1)、muc16、自然杀伤细胞2族成员d(nkg2d)配体、黑色素a(mart-1)、神经细胞粘附分子(ncam)、癌胚胎抗原、优先表达的黑色素瘤抗原(prame)、孕酮受体、前列腺特异性抗原、前列腺干细胞抗原(psca)、前列腺特异性膜抗原(psma)、受体酪氨酸激酶样孤儿受体1(ror1)、存活蛋白、滋养层糖蛋白(tpbg，也称为5t4)、肿瘤相关糖蛋白72(tag72)、血管内皮生长因子受体(vegfr)、血管内皮生长因子受体2(vegfr2)、wilms肿瘤1(wt-1)、病原体特异性或病原体表达的抗原、或与通用标签相关的抗原，和/或生物素化分子，和/或由hiv、hcv、hbv或其他病原体表达的分子。在一些任何此类实施方案中，抗原选自ror1、b细胞成熟抗原(bcma)、碳酸酐酶9(caix)、her2/neu(受体酪氨酸激酶erbb2)、ll-cam、cd19、cd20、cd22、间皮素、cea和乙型肝炎表面抗原、抗叶酸受体、cd23、cd24、cd30、cd33、cd38、cd44、egfr、上皮糖蛋白2(epg-2)、上皮糖蛋白40(epg-40)、epha2、erb-b2、erb-b3、erb-b4、erbb二聚体、egfrviii、叶酸结合蛋白(fbp)、fcrl5、fcrh5、胎儿乙酰胆碱受体、gd2、gd3、hmw-maa、il-22r-α、il-13r-α2、激酶插入结构域受体(kdr)、κ轻链、路易斯y、l1细胞粘附分子(l1-cam)、黑色素瘤相关抗原(mage)-a1、mage-a3、mage-a6、优先表达的黑色素瘤抗原(prame)、存活蛋白、tag72、b7-h6、il-13受体α2(il-13ra2)、ca9、gd3、hmw-maa、cd171、g250/caix、hla-aimageal、hla-a2ny-eso-1、psca、叶酸受体-a、cd44v6、cd44v7/8、avb6整合素、8h9、ncam、vegf受体、5t4、胎儿achr、nkg2d配体、cd44v6、双重抗原、癌症-睾丸抗原、间皮素、鼠类cmv、粘蛋白1(muc1)、muc16、psca、nkg2d、ny-eso-1、mart-1、gp100、癌胚胎抗原、ror1、tag72、vegf-r2、癌胚抗原(cea)、前列腺特异性抗原、psma、her2/neu、雌激素受体、孕酮受体、肝配蛋白b2、cd123、c-met、gd-2、o-乙酰化gd2(ogd2)、ce7、wilms肿瘤1(wt-1)、细胞周期蛋白、细胞周期蛋白a2、ccl-1、cd138、病原体特异性抗原和与通用标签相关的抗原。在一些任何此类实施方案中，结合分子不结合或识别重组抗原受体的接头或间隔区，所述接头或间隔区将抗原受体的抗原结合结构域与跨膜结构域连接。在一些任何此类实施方案中，结合分子是与抗原结合结构域特异性地结合的抗独特型抗体或其抗原结合片段。本文提供了扩增细胞的方法，所述方法包括将含有表达嵌合抗原受体(car)的细胞的输入组合物与多个颗粒一起孵育，所述嵌合抗原受体含有特异性地结合或识别抗原的抗原结合结构域，所述多个颗粒(例如珠)中的每一个含有结合分子，所述结合分子是与所述抗原结合结构域特异性地结合的抗独特型抗体或其抗原结合片段，其中所述抗独特型抗体或其抗原结合片段与所述抗原结合结构域的结合诱导含有所述嵌合抗原受体的细胞的扩增，从而产生含有扩增的细胞的输出组合物。在一些任何此类实施方案中，结合分子包含由抗原结合结构域识别的重组抗原或其部分。本文提供了扩增细胞的方法，所述方法包括将含有表达嵌合抗原受体(car)的细胞的输入组合物与多个颗粒(例如珠)一起孵育，所述嵌合抗原受体含有特异性地结合或识别抗原的抗原结合结构域，所述多个颗粒中的每一个含有结合分子，所述结合分子含有由所述抗原结合结构域识别的重组抗原或其部分，其中所述重组抗原或其部分与所述抗原结合结构域的结合诱导含有所述嵌合抗原受体的细胞的扩增，从而产生含有扩增的细胞的输出组合物。在一些任何此类实施方案中，抗原选自αvβ6整合素(avb6整合素)、b细胞成熟抗原(bcma)、b7-h3、b7-h6、碳酸酐酶9(ca9，也称为caix或g250)、癌症-睾丸抗原、癌症/睾丸抗原1b(ctag，也称为ny-eso-1和lage-2)、癌胚抗原(cea)、细胞周期蛋白、细胞周期蛋白a2、c-c基序趋化因子配体1(ccl-1)、cd19、cd20、cd22、cd23、cd24、cd30、cd33、cd38、cd44、cd44v6、cd44v7/8、cd123、cd133、cd138、cd171、硫酸软骨素蛋白聚糖4(cspg4)、表皮生长因子蛋白(egfr)、iii型表皮生长因子受体突变(egfrviii)、上皮糖蛋白2(epg-2)、上皮糖蛋白40(epg-40)、肝配蛋白b2、肝配蛋白受体a2(epha2)、雌激素受体、fc受体样蛋白5(fcrl5；也称为fc受体同源物5或fcrh5)、胎儿乙酰胆碱受体(胎儿achr)、叶酸结合蛋白(fbp)、叶酸受体α、神经节苷脂gd2、o-乙酰化gd2(ogd2)、神经节苷脂gd3、糖蛋白100(gp100)、磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(gpc3)、g蛋白偶联受体5d(gprc5d)、her2/neu(受体酪氨酸激酶erb-b2)、her3(erb-b3)、her4(erb-b4)、erbb二聚体、人高分子量黑色素瘤相关抗原(hmw-maa)、乙型肝炎表面抗原、人白细胞抗原a1(hla-a1)、人白细胞抗原a2(hla-a2)、il-22受体α(il-22rα)、il-13受体α2(il-13rα2)、激酶插入结构域受体(kdr)、κ轻链、l1细胞粘附分子(l1-cam)、l1-cam的ce7表位、含有富亮氨酸重复序列的蛋白8家族成员a(lrrc8a)、路易斯y、黑色素瘤相关抗原(mage)-a1、mage-a3、mage-a6、mage-a10、间皮素(msln)、c-met、鼠类巨细胞病毒(cmv)、粘蛋白1(muc1)、muc16、自然杀伤细胞2族成员d(nkg2d)配体、黑色素a(mart-1)、神经细胞粘附分子(ncam)、癌胚胎抗原、优先表达的黑色素瘤抗原(prame)、孕酮受体、前列腺特异性抗原、前列腺干细胞抗原(psca)、前列腺特异性膜抗原(psma)、受体酪氨酸激酶样孤儿受体1(ror1)、存活蛋白、滋养层糖蛋白(tpbg，也称为5t4)、肿瘤相关糖蛋白72(tag72)、酪氨酸酶相关蛋白1(trp1，也称为tyrp1或gp75)、酪氨酸酶相关蛋白2(trp2，也称为多巴色素互变异构酶、多巴色素δ异构酶或dct)、血管内皮生长因子受体(vegfr)、血管内皮生长因子受体2(vegfr2)、wilms肿瘤1(wt-1)、病原体特异性或病原体表达的抗原、或与通用标签相关的抗原、和/或生物素化分子、和/或由hiv、hcv、hbv或其他病原体表达的分子。在一些实施方案中，重组抗原选自由抗原结合结构域识别的ror1、b细胞成熟抗原(bcma)、碳酸酐酶9(caix)、her2/neu(受体酪氨酸激酶erbb2)、ll-cam、cd19、cd20、cd22、间皮素、cea和乙型肝炎表面抗原、抗叶酸受体、cd23、cd24、cd30、cd33、cd38、cd44、egfr、上皮糖蛋白2(epg-2)、上皮糖蛋白40(epg-40)、epha2、erb-b2、erb-b3、erb-b4、erbb二聚体、egfrviii、叶酸结合蛋白(fbp)、fcrl5、fcrh5、胎儿乙酰胆碱受体、gd2、gd3、hmw-maa、il-22r-α、il-13r-α2、激酶插入结构域受体(kdr)、κ轻链、路易斯y、l1细胞粘附分子(l1-cam)、黑色素瘤相关抗原(mage)-a1、mage-a3、mage-a6、优先表达的黑色素瘤抗原(prame)、存活蛋白、tag72、b7-h6、il-13受体α2(il-13ra2)、ca9、gd3、hmw-maa、cd171、g250/caix、hla-aimageal、hla-a2ny-eso-1、psca、叶酸受体-a、cd44v6、cd44v7/8、avb6整合素、8h9、ncam、vegf受体、5t4、胎儿achr、nkg2d配体、cd44v6、双重抗原、癌症-睾丸抗原、间皮素、鼠类cmv、粘蛋白1(muc1)、muc16、psca、nkg2d、ny-eso-1、mart-1、gp100、癌胚胎抗原、ror1、tag72、vegf-r2、癌胚抗原(cea)、前列腺特异性抗原、psma、her2/neu、雌激素受体、孕酮受体、肝配蛋白b2、cd123、c-met、gd-2、o-乙酰化gd2(ogd2)、ce7、wilms肿瘤1(wt-1)、细胞周期蛋白、细胞周期蛋白a2、ccl-1、cd138和病原体特异性抗原、或任何前述项的部分。在一些情况下，重组抗原是bcma、cd22或ror1，或者是其由抗原结合结构域识别的部分。在一些任何此类实施方案中，重组抗原的由抗原结合结构域识别的部分含有抗原的细胞外结构域或细胞外结构域的部分。在一些任何此类实施方案中，重组抗原的由抗原结合结构域识别的部分本质上含有抗原的细胞外结构域或细胞外结构域的部分。在一些实施方案中，本文提供了扩增细胞的方法，所述方法包括将输入组合物与多个颗粒一起孵育，所述输入组合物包含表达嵌合抗原受体的细胞，所述嵌合抗原受体包含特异性地结合或识别抗原的细胞外抗原结合结构域，所述多个颗粒是或包含已经附接有特异性地结合或识别抗原结合结构域的结合分子的珠，其中(i)所述多个颗粒来自组合物，所述组合物具有如下浓度的所述结合分子：在或在约0.5μg/ml与500μg/ml之间(包含端值)，并且在所述孵育期间，所述输入组合物中存在的总细胞与所述多个颗粒的比率为从或从约5:1至1:5(包含端值)；并且(ii)所述结合分子与所述抗原结合结构域的结合诱导包含所述嵌合抗原受体的细胞的扩增，从而产生包含扩增的细胞的输出组合物。本文还提供了扩增细胞的方法，所述方法包括将含有表达嵌合抗原受体(car)的细胞的输入组合物与多个颗粒(例如珠)一起孵育，所述嵌合抗原受体含有特异性地结合或识别b细胞成熟抗原(bcma)的抗原结合结构域，所述多个颗粒(例如珠)中的每一个含有结合分子，所述结合分子含有bcma的由所述抗原结合结构域识别的细胞外结构域或所述细胞外结构域的部分，其中bcma的所述细胞外结构域或其部分与所述抗原结合结构域的结合诱导含有所述嵌合抗原受体的细胞的扩增，从而产生含有扩增的细胞的输出组合物。在一些例子中，bcma的所述部分本质上由所述细胞外结构域或所述细胞外结构域的部分组成。在一些任何此类实施方案中，结合分子是融合多肽，所述融合多肽含有与一种部份(moiety)连接的重组抗原或其部分(portion)，任选地其中所述部份促进与所述颗粒的附接。在一些情况下，所述部份与重组抗原的c末端连接。在一些情形中，所述部份是疏水性的或富含疏水性氨基酸。在一些实施方案中，所述部份是或含有fc结构域。在一些例子中，fc区衍生自人igg。在一些任何此类实施方案中，抗原是cd19。本文还提供了扩增细胞的方法，所述方法包括将含有表达嵌合抗原受体(car)的细胞的输入组合物与多个颗粒(例如珠)一起孵育，所述嵌合抗原受体含有特异性地结合或识别cd19的抗原结合结构域，所述多个颗粒中的每一个含有结合分子，所述结合分子是与抗原结合结构域特异性地结合的抗独特型抗体或其抗原结合片段，其中所述抗独特型抗体或其抗原结合片段与所述抗原结合结构域的结合诱导含有嵌合抗原受体的细胞的扩增，从而产生含有扩增的细胞的输出组合物。在一些任何此类实施方案中，抗原受体的抗原结合结构域是或含有抗体sj25c1或其抗原结合片段。在一些任何此类实施方案中，抗原受体的抗原结合结构域是或含有抗体fmc63或其抗原结合片段。在一些任何此类实施方案中，抗原结合片段是或含有scfv。在一些任何此类实施方案中，抗原或重组抗原是人的。在一些任何此类实施方案中，抗独特型抗体或其抗原结合片段含有免疫球蛋白恒定区的至少一部分。在一些例子中，免疫球蛋白恒定区的所述至少一部分含有fc区或所述fc的含有ch2和ch3结构域的部分。在一些实施方案中，恒定区或fc区衍生自人igg。在一些任何此类实施方案中，抗独特型抗体或其抗原结合片段是完整抗体或全长抗体。在一些任何此类实施方案中，结合分子共价地或非共价地附接至颗粒(例如珠)。在一些任何此类实施方案中，结合分子在结合分子的c末端氨基酸残基处或附近与多个颗粒(例如珠)中的每一个附接，和/或进行结合分子与多个颗粒(例如珠)中的每一个的附接，使得由抗原受体的抗原结合结构域识别的结合分子的区域或表位取向为使其能够由抗原受体识别。在一些任何此类实施方案中，颗粒(例如珠)是合成颗粒、不溶性颗粒、固体颗粒，或者是非细胞颗粒。在本文所公开的一些任何此类实施方案中，颗粒是珠。在一些任何此类实施方案中，所述多个颗粒含有珠。在一些任何此类实施方案中，颗粒是或包含一种或多种聚合物或寡聚物和/或是聚合物的和/或寡聚物的。在一些任何此类实施方案中，所述多个颗粒含有在或在约1μm与10μm之间或者在或在约2μm与5μm之间的平均直径。在一些任何此类实施方案中，所述多个颗粒(例如珠)包括约2.8μm的平均直径。在一些任何此类实施方案中，所述多个颗粒(例如珠)包括约4.5μm的平均直径。在一些任何此类实施方案中，所述多个颗粒(例如珠)包括在约0.5g/cm3与5.0g/cm3之间或者在或在约1g/cm3与约2g/cm3之间的平均密度。在一些任何此类实施方案中，所述多个颗粒(例如珠)包括约1.3g/cm3的平均密度。在一些任何此类实施方案中，所述多个颗粒(例如珠)包括约1.5g/cm3的平均密度。在一些任何此类实施方案中，所述多个颗粒(例如珠)是单分散的。在一些任何此类实施方案中，结合分子共价地附接至颗粒。在一些任何此类实施方案中，所述颗粒含有用于附接结合分子的表面暴露的官能团和/或其中结合分子经由表面暴露的官能团共价地附接至所述颗粒。在一些任何此类实施方案中，表面暴露的官能团是氨基基团、羧基基团、硫醇基团、醛基团、氯甲基基团、环氧基基团、羟基基团、甲苯磺酰基基团或肼基团。在一些实施方案中，表面暴露的官能团是甲苯磺酰基基团。在一些任何此类实施方案中，所述多个颗粒(例如珠)对细胞而言是生物相容的或无毒的。在一些任何此类实施方案中，所述多个颗粒(例如珠)含有包括如下的颗粒：玻璃、二氧化硅、羟基羧酸的聚酯、二羧酸的聚酸酐、羟基羧酸的共聚物、二羧酸的共聚物、或金属。在一些任何此类实施方案中，所述颗粒(例如珠)含有包括如下的表面：聚合物、多糖、二氧化硅、脂肪酸、碳、或其组合。在一些例子中，所述聚合物是聚乙二醇、聚(乳酸-共-乙醇酸)、聚戊二醛、聚氨酯、聚苯乙烯、和聚乙烯醇、或其组合。在一些任何此类实施方案中，所述多个颗粒含有包括疏水性表面的颗粒。在一些任何此类实施方案中，所述多个颗粒(例如珠)含有包括聚苯乙烯表面的颗粒。在一些任何此类实施方案中，所述多个颗粒(例如珠)含有是磁的和/或包括磁芯、顺磁芯或超顺磁芯的颗粒。在一些任何此类实施方案中，所述颗粒来自组合物，所述组合物具有如下浓度的所述结合分子：在或在约0.5μg/ml与500μg/ml之间、1μg/ml与200μg/ml之间或者5μg/ml与100μg/ml之间(包含端值)。在一些任何此类实施方案中，所述颗粒来自组合物，所述组合物具有如下浓度的所述结合分子：至少或至少约1μg/ml、5μg/ml、10μg/ml、25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml或200μg/ml。在一些任何此类实施方案中，所述多个颗粒(例如珠)中的每一个含有至少或约至少10个拷贝、102个拷贝、103个拷贝、104个拷贝、105个拷贝或106个拷贝的结合分子。在一些任何此类实施方案中，所述孵育的至少一部分在药剂的存在下进行，所述药剂与细胞上另外的分子特异性地结合以提供辅助信号和/或阻断抑制信号。在一些任何此类实施方案中，所述药剂与颗粒(例如珠)一起被提供，任选地所述药剂被所述多个颗粒的每一个或所述多个颗粒的亚组包含。在一些任何此类实施方案中，所述药剂与所述多个颗粒(例如珠)分开提供。在一些任何此类实施方案中，所述颗粒(例如珠)还包括药剂，所述药剂与细胞上另外的分子特异性地结合以提供辅助信号和/或阻断抑制信号。在一些任何此类实施方案中，所述药剂是配体或者是抗体或其抗原结合片段。在一些任何此类实施方案中，所述分子是共刺激分子或者是激活性共受体。在一些任何此类实施方案中，所述共刺激分子或激活性共受体是ox-40、icos、dap10、cd28或4-1bb。在一些实施方案中，所述分子是激活性受体或共受体的配体，如ox-40l、icosl、b7-1、b7-2或4-1bbl。在一些任何此类实施方案中，所述分子是抑制性受体。在一些例子中，抑制性受体是ctla-4、pd-1、lag-3、tim-3、btla或tigit。在一些任何此类实施方案中，所述药剂共价地附接至颗粒(例如珠)。在一些实施方案中，所述分子是抑制性受体的配体，例如是pd-l1、pd-l2、cd155、cd112或light。在一些任何此类实施方案中，颗粒(例如珠)所包含的结合分子与药剂的比率(任选地摩尔比或重量比)为或为约1:1。在一些任何此类实施方案中，输入组合物中存在的总细胞与颗粒(例如珠)的比率为从或从约5:1至1:5、3:1至1:3或2:1至1:2。在一些任何此类实施方案中，输入组合物中存在的总细胞与颗粒(例如珠)的比率为从或从约1:0.1至1:5。在一些任何此类实施方案中，输入组合物中存在的总细胞与颗粒(例如珠)的比率为或为约1:1。在一些任何此类实施方案中，将孵育进行至少或大于或大于约2小时、4小时、8小时、12小时、24小时、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、或14天。在一些任何此类实施方案中，在或在约30℃与39℃之间(包含端值)的温度下进行孵育。在一些任何此类实施方案中，在37℃±2.0℃的温度下进行孵育。在一些任何此类实施方案中，所述细胞包括免疫细胞或诱导多能干细胞(ipsc)。在一些任何此类实施方案中，所述免疫细胞是t细胞或nk细胞。在一些任何此类实施方案中，所述细胞含有cd4 或cd8 t细胞。在一些任何此类实施方案中，cd4 细胞与cd8 细胞的比率为或为约1:1、1:2、2:1、1:3或3:1。在一些任何此类实施方案中，所述细胞是获得自受试者(任选地人受试者)的原代细胞。在一些任何此类实施方案中，所述细胞是人的。在一些任何此类实施方案中，通过以下方法产生输入组合物，所述方法包括使细胞组合物与编码重组抗原受体的核酸分子在将核酸分子引入组合物中的一种或多种细胞中的条件下接触。本文还提供了将细胞基因工程化的方法，所述方法包括在将核酸分子引入组合物中的一种或多种细胞中的条件下使细胞组合物与编码重组抗原受体的核酸分子接触，从而产生输入组合物；并且根据本文所述的方法孵育输入组合物的细胞。在一些实施方案中，所述接触和所述孵育的至少一部分是同时进行。在一些任何此类实施方案中，核酸分子被包括在病毒载体、附加型载体或转座子中。在一些任何此类实施方案中，通过转座子/转座酶基因转移进行所述接触。在一些任何此类实施方案中，通过用病毒载体转导来进行所述接触。在一些实施方案中，病毒载体是逆转录病毒，其任选地是γ-逆转录病毒载体或慢病毒载体。在一些情形中，所述接触包括用细胞组合物旋转接种(spinoculating)病毒载体的步骤。在一些情况下，旋转接种包括在离心室的内部腔室中旋转病毒载体粒子和细胞组合物，其中所述旋转是在腔室侧壁的内表面处的相对离心力下进行，所述相对离心力是在或在约500g与2500g之间、500g与2000g之间、500g与1600g之间、500g与1000g之间、600g与1600g之间、600g与1000g之间、1000g与2000g或1000g与1600g之间，每个都包含端值；或者至少或至少约600g、800g、1000g、1200g、1600g或2000g。在一些实施方案中，旋转接种的持续时间为大于或约5分钟、大于或约10分钟、大于或约15分钟、大于或约20分钟、大于或约30分钟、大于或约45分钟、大于或约60分钟、大于或约90分钟、或大于或约120分钟；或者在或在约5分钟与60分钟之间、10分钟与60分钟之间、15分钟与60分钟之间、15分钟与45分钟之间、30分钟与60分钟之间、或45分钟与60分钟之间，每个都包含端值。在一些任何此类实施方案中，在转导佐剂的存在下进行所述接触。在一些任何此类实施方案中，细胞组合物含有多个t细胞，并且在所述接触之前，所述方法不包括刺激或激活t细胞。在一些任何此类实施方案中，细胞组合物含有多个t细胞，并且在所述接触之前，所述方法不包括在能够通过tcr复合物诱导信号的一种或多种药剂的存在下孵育所述组合物，和/或在能够诱导t细胞、cd4 t细胞和/或cd8 t细胞增殖的一种或多种药剂；和/或cd3结合分子、cd28结合分子、重组il-2、重组il-15和重组il-7、或其组合的存在下的孵育。在一些实施方案中，在所述接触之前，所述方法不包括在抗cd3抗体和/或抗cd28抗体的存在下刺激t细胞。在一些任何此类实施方案中，细胞组合物含有多个t细胞，所述多个细胞从来自受试者的样品中获得，其中所述接触是在从受试者获得样品之后不超过24小时开始；和/或在从受试者获得样品之后，在所述接触之前，所述t细胞未经历高于或高于约15℃、约18℃、约22℃或约25℃的温度持续超过1小时、2小时、4小时、6小时、8小时、12小时或24小时的持续时间；和/或在从受试者获得样品之后，在所述接触之前，t细胞未经历为、约、大于或大于约37℃±2.0℃的温度持续超过15分钟、30分钟、1小时或2小时的持续时间。在一些任何此类实施方案中，在所述接触之前，不超过5％、10％、20％、30％或40％的t细胞是激活细胞，表达选自hla-dr、cd25、cd69、cd71、cd40l和4-1bb的表面标记；包括选自il-2、ifn-γ、tnf-α的细胞因子的细胞内表达，处于细胞周期的g1期或较后期，和/或能够增殖。在一些任何此类实施方案中，所述方法还包括在所述孵育或所述接触之前，从含有所述细胞的受试者中获得生物样品，并且任选地从所述样品中选择或富集细胞(任选地t细胞)。在一些任何此类实施方案中，在输入组合物中表达重组抗原受体的细胞的百分比为小于或小于约75％、70％、60％、50％、40％、30％、20％、15％、10％或更少。在一些任何此类实施方案中，细胞组合物或输入组合物含有至少或至少约1x102个细胞、1x103个细胞、1x104个细胞、1x105个细胞、1x106个细胞或1x107个细胞。在一些任何此类实施方案中，输出组合物中存在的细胞的激活标记或耗竭标记(exhaustionmarker)的表面表达小于在类似孵育之后但在多克隆刺激分子的存在下产生的细胞组合物中所述标记的表面表达，所述多克隆刺激分子能够激活tcr复合物的一种或多种组分的一种或多种细胞内信号传导结构域。在一些情况下，所述耗竭标记是抑制性受体。在一些情形中，所述耗竭标记是pd-1、ctla-4、tim-3、lag-3、btla或tigit。在一些例子中，所述激活标记是hla-dr、cd25、cd69、cd71、cd40l或4-1bb。在一些任何此类实施方案中，所述表面表达为至少或至少约1.2倍、1.5倍、2.0倍、3.0倍、4.0倍、5.0倍、10.0倍或更多。在一些任何此类实施方案中，输出组合物中细胞的数量基本上同于或高于通过类似孵育但在多克隆刺激分子的存在下产生的细胞组合物中细胞的数量，所述多克隆刺激分子能够激活tcr复合物的一种或多种组分的一种或多种细胞内信号传导结构域。在一些任何此类实施方案中，所述多克隆刺激分子含有抗cd3抗体或片段和/或抗cd28抗体或片段。在一些任何此类实施方案中，输出组合物中细胞的数量比输入组合物中细胞的数量高了大于或大于约1.2倍、1.5倍、2.0倍、3.0倍、4.0倍、5.0倍、10.0倍、25倍、50倍、100倍或更多。在一些任何此类实施方案中，输出组合物中含有重组抗原受体的细胞的百分比为大于或大于约50％、60％、70％、80％、90％、95％或更多。在一些任何此类实施方案中，与输入组合物中含有抗原受体的细胞的数量相比，输出组合物中含有重组抗原受体的细胞的数量增加或富集了1.2倍、2.0倍、3.0倍、4.0倍、5.0倍、6.0倍、7.0倍、8.0倍、9.0倍、10倍或更多。在一些任何此类实施方案中，所述孵育的至少一部分是在调节细胞扩增或活性的一种或多种另外的药剂的存在下进行。在一些情况下，所述一种或多种另外的药剂是来那度胺。在一些任何此类实施方案中，所述方法是在体外或离体进行。在一些任何此类实施方案中，抗原受体是car，并且car还包含含有itam的细胞内信号传导结构域。在一些情况下，细胞内信号传导结构域含有cd3-zeta(cd3ζ)链的细胞内结构域。在一些实施方案中，所述car还含有共刺激信号传导区域。在一些方面，共刺激信号传导区域含有cd28或4-1bb的信号传导结构域。在一些例子中，共刺激结构域是cd28。在一些任何此类实施方案中，所述方法还包括从输出组合物中除去所述多个颗粒(例如珠)。本文提供了通过本文所提供的任何方法产生的细胞组合物。本文还提供了表面修饰的颗粒，其含有颗粒和与所述颗粒的表面结合的结合分子，其中所述结合分子特异性地结合抗原受体的细胞外抗原结合结构域。在一些实施方案中，抗原受体是嵌合抗原受体(car)。在一些实施方案中，结合分子不结合或识别重组抗原受体的接头或间隔区，所述接头或间隔区将抗原受体的抗原结合结构域与跨膜结构域连接。在一些任何此类实施方案中，重组抗原选自αvβ6整合素(avb6整合素)、b细胞成熟抗原(bcma)、b7-h3、b7-h6、碳酸酐酶9(ca9，也称为caix或g250)、癌症-睾丸抗原、癌症/睾丸抗原1b(ctag，也称为ny-eso-1和lage-2)、癌胚抗原(cea)、细胞周期蛋白、细胞周期蛋白a2、c-c基序趋化因子配体1(ccl-1)、cd19、cd20、cd22、cd23、cd24、cd30、cd33、cd38、cd44、cd44v6、cd44v7/8、cd123、cd133、cd138、cd171、硫酸软骨素蛋白聚糖4(cspg4)、表皮生长因子蛋白(egfr)、iii型表皮生长因子受体突变(egfrviii)、上皮糖蛋白2(epg-2)、上皮糖蛋白40(epg-40)、肝配蛋白b2、肝配蛋白受体a2(epha2)、雌激素受体、fc受体样蛋白5(fcrl5；也称为fc受体同源物5或fcrh5)、胎儿乙酰胆碱受体(胎儿achr)、叶酸结合蛋白(fbp)、叶酸受体α、神经节苷脂gd2、o-乙酰化gd2(ogd2)、神经节苷脂gd3、糖蛋白100(gp100)、磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(gpc3)、g蛋白偶联受体5d(gprc5d)、her2/neu(受体酪氨酸激酶erb-b2)、her3(erb-b3)、her4(erb-b4)、erbb二聚体、人高分子量黑色素瘤相关抗原(hmw-maa)、乙型肝炎表面抗原、人白细胞抗原a1(hla-a1)、人白细胞抗原a2(hla-a2)、il-22受体α(il-22rα)、il-13受体α2(il-13rα2)、激酶插入结构域受体(kdr)、κ轻链、l1细胞粘附分子(l1-cam)、l1-cam的ce7表位、含有富亮氨酸重复序列的蛋白8家族成员a(lrrc8a)、路易斯y、黑色素瘤相关抗原(mage)-a1、mage-a3、mage-a6、mage-a10、间皮素(msln)、c-met、鼠类巨细胞病毒(cmv)、粘蛋白1(muc1)、muc16、自然杀伤细胞2族成员d(nkg2d)配体、黑色素a(mart-1)、神经细胞粘附分子(ncam)、癌胚胎抗原、优先表达的黑色素瘤抗原(prame)、孕酮受体、前列腺特异性抗原、前列腺干细胞抗原(psca)、前列腺特异性膜抗原(psma)、受体酪氨酸激酶样孤儿受体1(ror1)、存活蛋白、滋养层糖蛋白(tpbg，也称为5t4)、肿瘤相关糖蛋白72(tag72)、酪氨酸酶相关蛋白1(trp1，也称为tyrp1或gp75)、酪氨酸酶相关蛋白2(trp2，也称为多巴色素互变异构酶、多巴色素δ异构酶或dct)、血管内皮生长因子受体(vegfr)、血管内皮生长因子受体2(vegfr2)、wilms肿瘤1(wt-1)、病原体特异性或病原体表达的抗原、或与通用标签相关的抗原、和/或生物素化分子、和/或由hiv、hcv、hbv或其他病原体表达的分子。在一些任何此类实施方案中，结合分子包含由抗原结合结构域识别的重组抗原或其部分。在一些方面，重组抗原选自由抗原结合结构域识别的ror1、b细胞成熟抗原(bcma)、碳酸酐酶9(caix)、her2/neu(受体酪氨酸激酶erbb2)、ll-cam、cd19、cd20、cd22、间皮素、cea和乙型肝炎表面抗原、抗叶酸受体、cd23、cd24、cd30、cd33、cd38、cd44、egfr、上皮糖蛋白2(epg-2)、上皮糖蛋白40(epg-40)、epha2、erb-b2、erb-b3、erb-b4、erbb二聚体、egfrviii、叶酸结合蛋白(fbp)、fcrl5、fcrh5、胎儿乙酰胆碱受体、gd2、gd3、hmw-maa、il-22r-α、il-13r-α2、激酶插入结构域受体(kdr)、κ轻链、路易斯y、l1细胞粘附分子(l1-cam)、黑色素瘤相关抗原(mage)-a1、mage-a3、mage-a6、优先表达的黑色素瘤抗原(prame)、存活蛋白、tag72、b7-h6、il-13受体α2(il-13ra2)、ca9、gd3、hmw-maa、cd171、g250/caix、hla-aimageal、hla-a2ny-eso-1、psca、叶酸受体-a、cd44v6、cd44v7/8、avb6整合素、8h9、ncam、vegf受体、5t4、胎儿achr、nkg2d配体、cd44v6、双重抗原、癌症-睾丸抗原、间皮素、鼠类cmv、粘蛋白1(muc1)、muc16、psca、nkg2d、ny-eso-1、mart-1、gp100、癌胚胎抗原、ror1、tag72、vegf-r2、癌胚抗原(cea)、前列腺特异性抗原、psma、her2/neu、雌激素受体、孕酮受体、肝配蛋白b2、cd123、c-met、gd-2、o-乙酰化gd2(ogd2)、ce7、wilms肿瘤1(wt-1)、细胞周期蛋白、细胞周期蛋白a2、ccl-1、cd138和病原体特异性抗原、或任何前述项的部分。在一些实施方案中，重组抗原是cd19、bcma、cd22或ror1，或者是其由抗原结合结构域识别的部分。在一些任何此类实施方案中，重组抗原的由抗原结合结构域识别的部分含有抗原的细胞外结构域或细胞外结构域的部分。在一些任何此类实施方案中，重组抗原的由抗原结合结构域识别的部分本质上由抗原的细胞外结构域或细胞外结构域的部分组成。本文提供了表面修饰的颗粒，其含有颗粒和与所述颗粒的表面结合的结合分子，其中所述结合分子含有b细胞成熟抗原(bcma)的细胞外结构域或其部分。在一些任何此类实施方案中，结合分子是融合多肽，所述融合多肽含有与一种部份(moiety)连接的重组抗原或其部分(portion)，任选地其中所述部份促进与所述颗粒的附接。在一些情况下，所述部份与重组抗原的c末端连接。在一些实施方案中，所述部份是疏水性的或富含疏水性氨基酸。在一些任何此类实施方案中，所述部份是或含有fc结构域。在一些情形中，fc区衍生自人igg。在一些任何此类实施方案中，重组抗原是人的。在一些任何此类实施方案中，结合分子含有抗独特型抗体或其抗原结合片段。在一些任何此类实施方案中，由抗原结合结构域识别的抗原是cd19。在一些任何此类实施方案中，抗原受体的抗原结合结构域是或含有抗体sj25c1或其抗原结合片段。在一些实施方案中，抗原受体的抗原结合结构域是或含有抗体fmc63或其抗原结合片段。在一些实施方案中，抗原结合片段是或含有scfv。在一些任何此类实施方案中，抗独特型抗体或其抗原结合片段含有免疫球蛋白恒定区的至少一部分。在一些情形中，免疫球蛋白恒定区的所述至少一部分含有fc区或所述fc的含有ch2和ch3结构域的部分。在一些实施方案中，恒定区或fc区衍生自人igg。在一些任何此类实施方案中，抗独特型抗体或其抗原结合片段是完整抗体或全长抗体。在一些任何此类实施方案中，结合分子共价地或非共价地附接至颗粒(例如珠)。在一些任何此类实施方案中，结合分子在结合分子的c末端氨基酸残基处或附近与多个颗粒(例如珠)中的每一个附接，和/或进行结合分子与多个颗粒(例如珠)中的每一个的附接，使得由抗原受体的抗原结合结构域识别的结合分子的区域或表位取向为使其能够由抗原受体识别。在一些任何此类实施方案中，颗粒(例如珠)是合成颗粒、不溶性颗粒、固体颗粒，或者是非细胞颗粒。在一些任何此类实施方案中，所述多个颗粒(例如珠)含有珠。在一些任何此类实施方案中，所述颗粒具有在或在约1μm与10μm之间或在或在约2μm与5μm之间(每个都包含端值)的直径。在一些任何此类实施方案中，所述颗粒具有约2.8μm的直径。在一些任何此类实施方案中，所述颗粒具有约4.5μm的直径。在一些任何此类实施方案中，所述结合分子共价地附接至所述颗粒(例如珠)。在一些任何此类实施方案中，所述颗粒含有用于附接结合分子的表面暴露的官能团和/或其中结合分子经由表面暴露的官能团共价地附接至所述颗粒。在一些实施方案中，表面暴露的官能团是氨基基团、羧基基团、硫醇基团、醛基团、氯甲基基团、环氧基基团、羟基基团、甲苯磺酰基基团或肼基团。在一些情况下，表面暴露的官能团是甲苯磺酰基基团。在一些任何此类实施方案中，所述颗粒对细胞而言是生物相容的或无毒的。在一些任何此类实施方案中，所述多个颗粒(例如珠)包括含有如下的颗粒(例如珠)：玻璃、二氧化硅、羟基羧酸的聚酯、二羧酸的聚酸酐、羟基羧酸的共聚物、二羧酸的共聚物、或金属。在一些任何此类实施方案中，所述颗粒(例如珠)含有包括如下的表面：聚合物、多糖、二氧化硅、脂肪酸、碳、或其组合。在一些情形中，聚合物是聚乙二醇、聚(乳酸-共-乙醇酸)、聚戊二醛、聚氨酯、聚苯乙烯、和聚乙烯醇、或其组合。在一些任何此类实施方案中，所述颗粒含有疏水性表面。在一些任何此类实施方案中，所述颗粒(例如珠)包括聚苯乙烯表面。在一些任何此类实施方案中，所述颗粒是磁的和/或含有磁芯、顺磁芯或超顺磁芯。在一些任何此类实施方案中，所述颗粒含有至少或约至少10个拷贝、102个拷贝、103个拷贝、104个拷贝、105个拷贝或106个拷贝的结合分子。在一些任何此类实施方案中，所述颗粒还含有药剂，所述药剂与细胞上另外的分子特异性地结合以提供辅助信号和/或阻断抑制信号，从而调节细胞的扩增。在一些任何此类实施方案中，所述药剂是配体或者是抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，所述分子是共刺激分子或者是激活性共受体。在一些例子中，所述共刺激分子或激活性共受体是ox-40、icos、dap10、cd28或4-1bb。在一些实施方案中，所述分子是激活性受体或共受体的配体，如ox-40l、icosl、b7-1、b7-2或4-1bbl。在一些情况下，所述分子是抑制性受体。在一些例子中，抑制性受体是ctla-4、pd-1、lag-3、tim-3、btla或tigit。在一些实施方案中，所述分子是抑制性受体的配体，例如是pd-l1、pd-l2、cd155、cd112或light。在一些任何此类实施方案中，所述药剂共价地附接至颗粒(例如珠)。在一些任何此类实施方案中，所述颗粒所包含的结合分子与药剂的比率(任选地摩尔比或重量比)为或为约1:1。本文提供了含有本文所述的多个表面修饰的颗粒(例如珠)的组合物。在一些实施方案中，所述颗粒来自组合物，所述组合物具有如下浓度的结合分子：在或在约0.5μg/ml与500μg/ml之间、1μg/ml与200μg/ml之间或者5μg/ml与100μg/ml之间(每个都包含端值)。在一些实施方案中，所述颗粒来自组合物，所述组合物具有如下浓度的结合分子：至少或至少约1μg/ml、5μg/ml、10μg/ml、25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml或200μg/ml。在一些任何此类实施方案中，所述组合物是单分散的。本文还提供了试剂盒，其含有本文所述的任何颗粒(例如珠)或本文所述的任何组合物和使用说明书。在一些情况下，说明书是针对从细胞群中选择或富集表达抗原受体的细胞，所述抗原受体包含由结合分子特异性地识别的抗原结合结构域。在一些情形中，说明书是针对从细胞群中扩增表达抗原受体的细胞，所述抗原受体包含由结合分子特异性地识别的抗原结合结构域。在一些实施方案中，在细胞群中表达重组抗原受体的细胞的百分比为小于或小于约75％、70％、60％、50％、40％、30％、20％、15％、10％或更少。这里提供了用于扩增细胞的方法，所述方法包括将细胞群与本文所述的任何颗粒(例如珠)或本文所述的任何组合物一起孵育。还提供了选择或富集细胞的方法，所述方法包括使细胞群与本文所述的任何颗粒(例如珠)或本文所述的任何组合物接触。本文提供了用于评估细胞组合物的长期刺激方法，所述方法包括将输入组合物在刺激输入组合物中的细胞的car依赖性活性的条件下孵育持续至少10天的时间段从而产生输出组合物，所述输入组合物含有表达嵌合抗原受体(car)的t细胞，所述嵌合抗原受体含有特异性地结合或识别抗原的细胞外抗原结合结构域；并且评估输出组合物的一种或多种细胞的一种或多种表型或活性。在长期刺激方法的任何实施方案的一些中，刺激car依赖性活性的条件包括存在与car的抗原结合结构域特异性地结合的结合分子。在一些实施方案中，将结合分子附接至支持物。在一些实施方案中，支持物是固体支持物。在一些实施方案中，固体支持物是微板的孔的表面或珠的表面。在一些实施方案中，固体支持物是微板，所述微板具有与微板附接的结合分子，并且在微板中进行孵育。在一些实施方案中，固体支持物是已经附接有结合分子的珠，并且在多个所述珠的存在下进行孵育。在长期刺激方法的任何实施方案的一些中，结合分子是或包含由抗原结合结构域识别的重组抗原或其部分。在一些实施方案中，重组抗原或其部分是bcma，或者是其由抗原结合结构域识别的部分。在一些实施方案中，结合分子是或包括与抗原结合结构域特异性地结合的抗独特型抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，抗原受体的抗原结合结构域是或包含抗体sj25c1或其抗原结合片段。在一些实施方案中，抗原受体的抗原结合结构域是或包括抗体fmc63或其抗原结合片段。在长期刺激方法的任何实施方案的一些中，所述方法在体外或离体进行。在长期刺激方法的任何实施方案的一些中，在不包含重组细胞因子的培养基的存在下孵育输入组合物。在一些实施方案中，所述孵育连续地进行或不中断持续一段时间。在一些实施方案中，在孵育期间，不再铺板细胞、不更换培养基并且不添加结合分子。在长期刺激方法的任何实施方案的一些中，所述方法包括评估输出组合物的一种或多种细胞的激活、耗竭或分化状态中的一种或多种表型。在一些实施方案中，表型是耗竭，并且所述评估包括测量选自以下的一种或多种标记的表达(任选地表面表达)：ctla-4、foxp3、pd-1、tigit、lab-3、2b4、btla、tim3、vista、或cd96。在一些实施方案中，表型是激活，并且所述评估包括测量选自以下的一种或多种标记的表达(任选地表面表达)：cd25、cd26、cd27、cd28、cd30、cd71、cd154、cd40l、cd127、lag3、或ki67。在一些实施方案中，表型是分化状态，并且所述评估包括测量选自以下的一种或多种标记：(i)cd25、cd45ro、cd56、klrg1、cd95中的一种或多种和/或(ii)cd45ra、cd27、cd28、cd62l和ccr7中的一种或多种，任选地其中所述一种或多种标记是与幼稚样t细胞正相关或反相关的标记。在长期刺激方法的任何实施方案的一些中，所述方法包括评估输出组合物的一种或多种细胞的一种或多种活性。在一些实施方案中，所述一种或多种活性包括car依赖性活性，任选地抗原刺激活性。在长期刺激方法的任何实施方案的一些中，所述一种或多种活性包括细胞裂解活性或细胞因子产生。在任何长期刺激方法的一些实施方案中，所述时间段为至少或至少约11天、12天、13天、14天或15天。在一些实施方案中，所述时间段为或为约11天、12天、13天、14天或15天。在长期刺激方法的任何实施方案的一些中，输入组合物含有在所述孵育之前已经暴露于或接触测试药剂或化合物的细胞，任选地其中所述暴露或所述接触是在如下过程的一个或多个步骤期间进行，所述过程用于产生包含表达car的t细胞的输入组合物。在一些实施方案中，所述方法是对多种输入组合物进行，多种所述输入组合物中的每一种是通过不同的过程产生的。在长期刺激方法的任何实施方案的一些中，所述方法还包括将输出组合物的表型或活性与对照组合物的表型或活性进行比较，任选地其中所述对照组合物是t细胞组合物，所述t细胞已在刺激car依赖性活性的相同条件下被孵育持续至少10天，所述t细胞组合物尚未在测试药剂或化合物的存在下产生，或者已经通过与输入组合物相比替代性的过程产生。在一些实施方案中，所述方法还包括鉴定展现出例如与对照组合物相比耗竭减少、激活减少或分化减少的输出组合物。在一些实施方案中，减少的分化包括一种或多种幼稚样t细胞标记的增加的表达。附图说明图1示出了在与bcma缀合的珠一起孵育后，在表达抗bcmacar的cd3 t细胞(cart细胞)和不表达car的cd3 细胞(模拟物)中的celltraceviolet(ctv)染色的直方图。图2a示出了在与抗cd3/抗cd28抗体缀合的珠(左)或bcma缀合的珠(右)一起孵育后，细胞中cd25表面表达(y轴)和ctv染色强度(x轴)的点图。图2b示出了在用抗cd3/抗cd28抗体缀合的珠或bcma缀合的珠处理后的细胞的ctv染色的直方图。图2c示出了在将细胞与抗cd3/抗cd28抗体缀合的珠或bcma缀合的珠一起孵育后，在cd4 细胞(左)或cd8 细胞(右)中pd-1表达的直方图。图3a示出了在将含有表达car的t细胞的三种不同t细胞组合物中的每一种(各自从不同的供体生成)与bcma缀合的珠一起孵育持续至多14天后抗bcmacar t细胞的百分比。每种细胞组合物的结果分别用三角形、正方形和圆形绘制。图3b示出了为了检测在与bcma缀合的珠一起孵育持续至多14天中的四天、七天或十四天后，在cd8 细胞中的cd25(左边)、ccr7(中央)和cd27(右边)如通过平均荧光强度(mfi)确定的表面表达。示出了图3a中描述的含有抗bcmacar表达细胞的三种不同细胞组合物中每一种的结果，并且分别用三角形、正方形和圆形绘制。图4a示出了在与不同量的bcma缀合的珠一起孵育之后，在抗bcmacar t细胞组合物中存在的cd4 t细胞(左图)或cd8 t细胞(右图)中cd25的表面表达的图。图4b示出了在与不同量的bcma缀合的珠一起孵育之后，在抗bcmacar t细胞组合物中存在的cd4 t细胞(左图)或cd8 t细胞(右图)中pd-1的表面表达的直方图。bcma50、bcma25、bcma10、和bcma5表示通过将bcma与珠分别以每大约4x108个珠而言50μg、25μg、10μg和5μgbcma的量孵育生成的bcma缀合的珠。图5a-b示出了显示在与不同量的bcma缀合的珠一起孵育之后，在抗bcmacar t细胞组合物中存在的总cd3 t细胞数(图5a)或在cd4 t细胞上的ctv增殖标记染料的水平(图5b)的图。bcma50、bcma25、bcma10、和bcma5表示通过将bcma与珠分别以每大约4x108个珠而言50μg、25μg、10μg和5μgbcma的量孵育生成的bcma缀合的珠。图6示出了显示在与不同量的bcma缀合的珠一起孵育之后，在抗bcmacar t细胞组合物中存在的cd4 t细胞上cd25表面表达的图。bcma50、bcma25、bcma10、和bcma5表示通过将bcma与珠分别以每大约4x108个珠而言50μg、25μg、10μg和5μgbcma的量孵育生成的bcma缀合的珠。图7a-7h示出了在与bcma缀合的珠一起孵育的抗bcmacar t细胞组合物中针对各种标记或增殖水平的染色。图7a示出了在与不同量的bcma缀合的珠一起孵育之后，在抗bcmacar t细胞组合物中存在的cd4 t细胞(左图)或cd8 t细胞(右图)中cd25的表面表达的流式细胞术直方图。图7b示出了在与不同比率的t细胞:珠(200μg/mlbcma缀合的珠组合物)或与固定的抗cd3一起孵育之后，在抗bcmacar t细胞组合物中存在的cd4 t细胞(左图)或cd8 t细胞(右图)中cd25的表面表达的流式细胞术直方图。图7c示出了在与不同比率的t细胞:珠(200μg/mlbcma缀合的珠组合物)或与固定的抗cd3一起孵育之后在抗bcmacar t细胞组合物中存在的cd4 t细胞(左图)或cd8 t细胞(右图)中cd69的表面表达的流式细胞术直方图。图7d示出了在与不同比率的t细胞:珠(200μg/mlbcma缀合的珠组合物)或与固定的抗cd3一起孵育之后，在抗bcmacar t细胞组合物中存在的cd4 t细胞(左图)或cd8 t细胞(右图)中tim3的表面表达的流式细胞术直方图。图7e示出了在与不同比率的t细胞:珠(200μg/mlbcma缀合的珠组合物)或与固定的抗cd3一起孵育之后，在抗bcmacar t细胞组合物中存在的cd4 t细胞(左图)或cd8 t细胞(右图)中pd-1的表面表达的流式细胞术直方图。图7f示出了在以1:1的t细胞:珠比率并且在存在或不存在5μm来那度胺的情况下与珠(200μg/mlbcma缀合的珠组合物)一起孵育之后，在抗bcmacar t细胞组合物中总细胞的ctv染色(增殖的量度)的直方图。图7g和图7h示出了在存在或不存在来那度胺的情况下，在分别以1:1的t细胞:珠比率与珠(200μg/mlbcma缀合的珠组合物)或与固定的抗cd3一起孵育之后在抗bcmacar t细胞组合物中存在的cd4 t细胞(左图)或cd8 t细胞(右图)中cd25的流式细胞术直方图。在上述的图中，“50”、“100”和“200”表示通过将bcma与珠分别以每大约4x108个珠而言50μg、100μg和200μgbcma的量孵育生成的bcma缀合的珠。图8a-8i示出了显示在没有刺激的情况下或使用不同量的bcma缀合的珠或抗cd3和抗cd28缀合的珠的情况下并且在0μm、0.5μm、或50μm来那度胺的存在下一起孵育之后，在抗bcmacar t细胞组合物中存在的cd4 t细胞(左图)或cd8 t细胞(右图)之中或之上的转录因子和激活标记的水平的图。示出了blimp1(图8a)、cd25(图8b)、cd31(图8c)、pd-1(图8d)、tbet(图8e)、eomes(图8f)、gata3(图8g)、helios(图8h)、和ikaros(图8i)的水平。200bcma、50bcma和5bcma表示通过将bcma与珠分别以每大约4x108个珠而言200μg、50μg和5μgbcma的量孵育生成的bcma缀合的珠。图9a-9c示出了显示在存在或不存在5μm来那度胺的情况下，将抗bcmacar t细胞组合物与两种不同量的bcma缀合的珠一起孵育后来自培养物的细胞外ifn-γ(图9a)、il-2(图9b)和tnfα(图9c)的水平的图。50μgbcma和5μgbcma表示通过将bcma与珠分别以每大约4x108个珠而言50μg和5μgbcma的量孵育生成的bcma缀合的珠。图9d示出了显示在0μm、1μm、或5μm来那度胺的存在下，将来自两名不同供体(供体a和供体b)的细胞的抗bcmacar t细胞组合物与不同量的bcma缀合的珠一起孵育后来自培养物的细胞外il-2的水平的图。200bcma和5bcma表示通过将bcma与珠分别以每大约4x108个珠而言200μg和5μgbcma的量孵育生成的bcma缀合的珠。图9e示出了用50μgbcma珠进行2小时的car刺激(stim)之后磷酸化stat5(pstat5)的流式细胞术分析。用虚线示出了无刺激对照。图9f示出了在24小时的bcma珠刺激之后在代表性正常cart供体上的细胞内细胞因子水平的流式细胞术分析(在经转导的活的cd3 上门控)。图9g和图9h示出了在5μm来那度胺的存在下与不同量的bcma缀合的珠一起孵育4天(图9g)或7天(图9h)之后在培养抗bcmacar t细胞组合物后的总细胞计数。50bcma和5bcma表示通过将bcma与珠分别以每大约4x108个珠而言50μg和5μgbcma的量孵育生成的bcma缀合的珠。图9i示出了在存在5μm来那度胺(5umlen)或不存在来那度胺(运载体)的情况下，与bcma缀合的珠一起孵育4天或7天之后在抗bcmacar t细胞组合物中cd4 t细胞或cd8 t细胞的ctv染色(增殖的量度)的直方图。图9j和9k示出了显示在存在5μm来那度胺或不存在来那度胺(运载体)的情况下，将抗bcmacar t细胞组合物与不同量的bcma缀合的珠一起孵育4天(图9j)或7天(图9k)后如用抗egfr抗体确定的呈替代标记egfrt阳性的细胞的百分比的图。“50”和“5”表示通过将bcma与珠分别以每大约4x108个珠而言50μg和5μgbcma的量孵育生成的bcma缀合的珠。图9l示出了在存在5μm来那度胺或不存在来那度胺(运载体)的情况下，已经与不同量的bcma缀合的珠一起孵育的抗bcmacar t细胞效应细胞对rpmi-8226靶细胞的细胞杀伤百分比。示出了含有3:1或1:1的效应细胞:靶细胞之比并且在进一步存在或不存在来那度胺的情况下的组合物的细胞裂解活性。“50”和“5”表示通过将bcma与珠分别以每大约4x108个珠而言50μg和5μgbcma的量孵育生成的bcma缀合的珠。图9m示出了显示在含有rpmi-8226靶细胞和新鲜的抗bcmacar t细胞效应细胞或已与bcma缀合的珠(通过将bcma与珠以每大约4x108个珠而言50μgbcma的量孵育生成的50μg/ml组合物)一起孵育24小时或一起孵育七天的抗bcmacar t细胞效应细胞的培养物中进行杀伤测定期间产生的细胞外ifn-γ水平的图。示出了来自含有0.3:1或1:1的效应细胞:靶细胞比率的培养物的结果。图9n描绘了在含有rpmi-8226靶细胞和新鲜的抗bcmacar t细胞效应细胞或已与bcma缀合的珠(通过将bcma与珠以每大约4x108个珠而言50μgbcma的量孵育生成的50μg/ml组合物)一起孵育24小时或一起孵育七天的抗bcmacar t细胞效应细胞的培养物中归一化至靶细胞计数的细胞杀伤。示出了来自含有0.3:1或1:1的效应细胞:靶细胞比率的培养物的结果。图10a-10b描绘了已与bcma缀合的珠(通过将bcma与珠以每大约4x108个珠而言50μgbcma的量孵育生成的50μg/ml)一起孵育七天的抗bcmacart细胞组合物的连续再刺激测定的结果。示出了来自三名不同供体组合物的结果。图10a和图10b示出了针对两名不同供体在每个时间点的抗bcmacar t细胞的细胞裂解活性。图11示出了显示在五种不同的抗bcmacar 细胞组合物中car t细胞随时间的百分比的图，所述抗bcmacar 细胞组合物在用编码抗bcmacar的慢病毒载体转导之后立即在bcma缀合的珠(实线)的存在下孵育或与抗cd3/抗cd28抗体缀合的珠(虚线)一起孵育。图12a和图12b分别示出了在存在(实线)或不存在(虚线)细胞因子的情况下用指示比率的包被有抗独特型抗体(抗idb-1)的珠或对照抗cd3/抗cd28抗体包被的珠刺激的egfrt /cd4 t细胞或egfrt /cd4 t细胞的倍数扩增和累积细胞数。示出了用3:1的抗cd3/抗cd28抗体包被的珠与细胞(圆形)、1:1的抗idb-1包被的珠与细胞(正方形)和1:5的抗idb-1包被的珠与细胞(三角形)刺激的结果。图13示出了如在培养的第3天、第7天、第10天和第14天通过流式细胞术评估的，在存在(实线)或不存在(虚线)细胞因子的情况下用指定比率的包被有抗独特型抗体(抗idb-1)的珠或对照抗cd3/抗cd28抗体包被的珠刺激之后，呈抗egfr抗体阳性的cd4 t细胞的pd-1表达水平。示出了用3:1的抗cd3/抗cd28抗体包被的珠与细胞(圆形)、1:1的抗idb-1包被的珠与细胞(正方形)和1:5的抗idb-1包被的珠与细胞(三角形)刺激的结果。图14示出了如在培养的第3天、第7天、第10天和第14天通过流式细胞术评估的，在存在(实线)或不存在(虚线)细胞因子的情况下用指定比率的包被有抗独特型抗体(抗idb-1)的珠或对照抗cd3/抗cd28抗体包被的珠刺激后，如通过流式细胞术评估的表达fmc63衍生的car的cd4 或cd8 t细胞的活力。示出了用1:3的抗cd3/抗cd28抗体包被的珠与细胞(圆形)、1:1的抗idb-1包被的珠与细胞(正方形)和1:5的抗idb-1包被的珠与细胞(三角形)刺激的结果。图15a示出了在用fmc63衍生的scfv特异性抗独特型抗体(抗idb-1)包被的珠刺激后，表达fmc63衍生的car的t细胞的il-2、tnfα和ifnγ的细胞内细胞因子染色。示出了呈egfrt替代标记阳性或阴性(egfrt 或egfrt-)的cd8 t细胞的结果。图15b示出了在用表达抗原的k562-cd19细胞刺激后，表达fmc63衍生的car的t细胞的il-2、tnfα和ifnγ的细胞内细胞因子染色。示出了呈egfrt替代标记阳性的cd8 t细胞的结果。图16示出了在存在(实线)或不存在(虚线)细胞因子的情况下用指定比率的包被有抗独特型抗体(抗idb-1)的珠或对照抗cd3/抗cd28抗体包被的珠刺激后，表达fmc63衍生的car的t细胞在经14天培养期的连续刺激测定中群体倍增的数量。示出了呈egfrt替代标记阳性(egfrt )的cd4 t细胞或呈egfrt替代标记阳性(egfrt )的cd8 t细胞的结果。示出了用1:3的抗cd3/抗cd28抗体包被的珠与细胞(圆形)、1:1的抗idb-1包被的珠与细胞(正方形)和1:5的抗idb-1包被的珠与细胞(三角形)刺激的结果。图17a-17c示出了在用fmc63衍生的scfv特异性抗独特型抗体(抗idb-1)包被的珠刺激单独培养的(实线)或作为共培养物(虚线)的表达fmc63衍生的car的cd4 或cd8 t细胞后的结果。示出了两名不同供体(以圆圈和正方形表示)的结果。图17a描绘了在呈egfrt替代标记阳性(egfrt /cd4 或egfrt /cd8 )的培养物中cd4 t细胞或cd8 t细胞的倍数扩增。图17b示出了在呈egfrt替代标记阳性(egfrt /cd4 或egfrt /cd8 )的培养物中cd4 t细胞或cd8 t细胞的频率。图17c示出了在培养物中cd4 t细胞或cd8 t细胞的活力。图18a和18b示出了在用fmc63衍生的scfv特异性抗独特型抗体(抗idb-1)包被的珠刺激单独培养的或作为共培养物的表达fmc63衍生的car的cd4 或cd8 t细胞后，在培养的第5天、第7天和第9天t细胞表面标记的流式细胞术结果。图18a示出了在呈egfrt替代标记阳性(egfrt /cd4 或egfrt /cd8 )的培养物中pd-1在cd4 t细胞或cd8 t细胞上的表面表达。图18b示出了在呈egfrt替代标记阳性(egfrt /cd4 或egfrt /cd8 )的培养物中cd25在cd4 t细胞或cd8 t细胞上的表面表达。图19a示出了如通过在解冻的组合物中存在的cd4 或cd8 t细胞的流式细胞术评估的tnfα、ifnγ和il-2的细胞内细胞因子水平，所述组合物含有表达fmc63衍生的car的t细胞，所述t细胞已经在具有表达cd19的k562细胞或具有pma/离子霉素的培养物中扩增。示出了在解冻(d＝0)时或在抗idb-1缀合的珠的存在下进一步培养另外9天之后，单独的或作为共培养物的cd4 和cd8 t细胞中细胞因子的水平。图19b示出了如通过在解冻的组合物中存在的cd4 或cd8 t细胞的流式细胞术评估的呈cd25或ki67阳性的细胞的频率，所述组合物含有表达fmc63衍生的car的t细胞，所述t细胞已经在具有表达cd19的k562细胞或具有pma/离子霉素的培养物中扩增。示出了在解冻(d＝0)时或在抗idb-1缀合的珠的存在下进一步培养另外9天之后，单独的或作为共培养物的cd4 和cd8 t细胞中标记的水平。图20a示出了car抗原特异性细胞裂解活性的结果，并且图20b示出了在共培养物中已经用bcma珠预刺激的抗bcmacar-t细胞(与新鲜解冻的(未预刺激的)抗bcmacar-t细胞相比)的细胞因子产生的结果，比较了在存在与不存在来那度胺的情况下培养的细胞。图20c示出了针对三名抗bcmacart供体评估的总体活力和细胞计数。图20d示出了在存在或不存在1μm来那度胺的情况下，用bcma珠刺激(预处理)7天之后，针对cd4 和cd8 抗bcmacart细胞对表面cd25和pd-1表达(平均荧光强度(mfi))进行流式细胞术分析的结果。图20e示出了在cd4 car 和cd8 car 亚组(在活的cd3 细胞上门控)中的中值荧光强度(mfi；cd25和tim3)的跨cart供体的流式细胞术分析或在t细胞标记的表面上的阳性pd-1和lag3百分比。示出的值为基线(veh)mfi、活力或计数百分比。图21a示出了对于三名供体中的每一名，与基线(运载体)应答相比在1μm来那度胺的存在下在50μgbcma珠上car特异性刺激24小时后的效应子细胞因子产生的分析。图21b示出了在不存在(左条)或存在0.1μm(中间条)或1μm(右条)来那度胺的情况下在不同浓度的bcma珠(即5μg、50μg和200μg)上激活的抗bcmacart细胞对cart效应子细胞因子产生的影响。图21c示出了在存在或不存在1μm来那度胺的情况下，在珠上添加或不添加pd-l1的情况下，在bcma珠上刺激的源自代表性健康供体和多发性骨髓瘤患者的抗bcmacart细胞的细胞因子产生。图22a和22b呈现了显示在表达抗bcmacar的t细胞中的细胞因子产生的图。图22a描绘了在从与抗cd3/抗cd28抗体缀合的珠(cd3/cd28)、bcma缀合的珠(其中浓度为每大约4x108个珠而言200μg/ml、50μg/ml或5μg/ml缀合的bcma(分别为200μg、50μg或5μgbcma))一起孵育24小时后的抗bcmacar表达t细胞或从在没有珠的情况下孵育的细胞(无刺激)收集的上清液中，ifn-γ、il-2、tnf-α、il-6、gm-csf和il-4的浓度(pg/ml)。水平虚线表示定量上限(uloq)。图22b描绘了在与cd3/cd28珠、200μg、50μg或5μgbcma缀合的珠或在无刺激的情况下孵育后，对ifn-γ、il-2或tnf-α的细胞内染色呈阳性的cd4 car (上排)或cd8 car 细胞(下排)的百分比。图23a和23b呈现了显示含有抗cd19car t细胞的t细胞组合物的活性的图。将细胞与抗cd19抗体抗id缀合的珠一起孵育14天(第14天；次级)，或者在评估活性之前不孵育。示出了在暴露于表达cd19的细胞后的细胞毒性测定(图23a)和细胞内细胞因子染色(ics)测定(图23b)的结果。图24a-24c呈现了显示在与抗cd19抗体抗id缀合的珠一起孵育14天期间或之后含有抗cd19car t细胞的t细胞组合物的特征的图。示出了在不同测试化合物或运载体的存在下生成的t细胞组合物的结果。图24a和24b示出了未孵育(初级)或孵育14天(次级)的t细胞组合物响应于暴露于cd19细胞的活性。示出了在暴露于表达cd19的细胞后通过ics进行的多功能染色(polyfunctionalstaining)(图24a)和细胞裂解活性(图24b)的结果。图24c描绘了从含有与表达cd19的细胞以1:1的比率孵育20小时的抗cd19car表达细胞的细胞组合物的上清液中分泌的细胞因子的水平。测量了il2、tnf和ifn-γ的量，并且示出了所有三种细胞因子的量表得分的平均值。图25a-25d示出了显示来自生成的抗cd19car-t细胞组合物的t细胞的活性的图，所述抗cd19car-t细胞组合物是在用表面缀合有对于抗cd19car具有特异性的抗独特型抗体的珠刺激后在仅培养基、dmso运载体对照、化合物1或化合物2的存在下扩增的。图25a示出了来自生成的抗cd19car-t细胞组合物的t细胞的总活t细胞计数/孔，所述抗cd19car-t细胞组合物是与表面缀合有抗独特型抗体的珠共培养的。图25b显示了相对于仅培养基对照，针对活t细胞计数计算的曲线下面积(auc)。图25c示出了显示在与表面缀合有抗独特型抗体的珠一起孵育15天后用与经辐射的k562-cd19靶细胞的16小时共培养物刺激后，来自生成的抗cd19car-t细胞组合物的t细胞的tnf-α(tnf)、ifn-γ(ifng)和il-2产生的图。示出了与仅培养基条件相比细胞外tnf-α(tnf)、ifn-γ(ifng)和il-2的倍数变化。图25d示出了描绘在与缀合有抗独特型抗体的珠一起孵育15天后，来自生成的抗cd19car-t细胞组合物的cd8 t细胞的多功能细胞因子谱的图。具体实施方式本文提供了用于富集、扩增和/或激活表达重组受体(例如嵌合抗原受体(car))的基因工程化细胞的组合物和方法。在一些实施方案中，所提供的方法包括通过与颗粒(例如珠颗粒)一起孵育来离体或在体外富集、扩增和/或激活细胞，所述颗粒具有识别或结合重组受体的附接的结合分子。在一些实施方案中，所述附接的结合分子是与重组受体结合的多肽，例如多肽抗原或抗独特型抗体。在一些实施方案中，本文提供的组合物和方法相对于扩增、富集或激活表达重组受体(例如car)的细胞的现有手段具有一个或多个优点。用于离体或体外扩增的许多现有方案依赖于将细胞(例如t细胞)与能够激活tcr复合物的组分的一种或多种多克隆刺激分子一起孵育。例如，用于扩增细胞的常用方案是将细胞与抗cd3和抗cd28抗体一起孵育，例如通过将细胞与附接至顺磁珠的抗cd3和抗cd28抗体一起孵育。此方法的一个缺点是给定组合物的所有或大部分细胞(例如培养的t细胞)将被抗体接触和刺激。因此，在一些实施方案中，对于与抗cd3和抗cd28抗体接触的给定细胞组合物，所有或大部分细胞变得被激活，而不管它们是否表达重组受体。相比之下，在特定实施方案中，当将细胞与本文提供的颗粒(例如珠)一起孵育时，颗粒(例如珠)的结合分子直接结合重组受体，从而导致与缺乏受体的细胞相比在表达重组受体的细胞中更大的刺激、激活、增殖和/或扩增。在一些实施方案中，将包括表达重组受体的细胞在内的细胞与本文所述的颗粒(例如珠)一起孵育会增加表达重组受体的细胞的部分、级分或亚组。在特定实施方案中，与其他方法(例如，用抗cd3和抗cd28抗体刺激)相比用本文所述的颗粒(例如珠)扩增、富集和/或激活细胞的一个优点是与通过其他方法扩增、富集和/或激活的细胞相比，与本文所提供的颗粒一起孵育导致较少的激活和/或耗竭。例如，在一些实施方案中，相比于与能够激活tcr复合物的组分的多克隆刺激分子(例如，抗cd3和抗cd28抗体)一起孵育的细胞，与本文所提供的颗粒一起孵育的细胞表达较低水平的与激活(例如cd25的表面表达)或耗竭(例如pd1的表达)相关的标记。在某些实施方案中，提供了用病毒或非病毒载体转导或转染细胞以便当细胞与本文所述的颗粒(例如珠)接触、用本文所述的颗粒(例如珠)处理、或与本文所述的颗粒(例如珠)一起孵育时(至少对于转导或转染过程的部分)将编码重组受体或car的核酸递送到细胞中的方法。在一些实施方案中，在颗粒(例如珠)的存在下转导或转染细胞的一个优点允许转染或转导先前未使用多克隆刺激分子(例如抗cd3和抗cd28抗体)激活的细胞。特定的实施方案设想，与在转染或转导之前激活的细胞相比，没有用多克隆分子事先激活的情况下转导或转染的细胞将展现出增加的持久性和/或减少的耗竭。特定的实施方案设想，与如所述的颗粒(例如珠)附接的特定重组抗原或其片段可能特别适合用于特异性地刺激含有识别所述抗原的抗原结合结构域的car的用途。在一些情况下，某些重组抗原(例如bcma)可具有很少的或没有非特异性相互作用，例如非特异性蛋白质-蛋白质相互作用或与细胞的非特异性相互作用(这阻止或最小化了所述抗原非特异性地粘附于细胞或被细胞吸收)。在一些情况下，这可以提高car表达细胞的刺激质量。在一些实施方案中，与当重组抗原未结合或结合至不同的固体支持物(例如板或培养皿的表面)时相比，与珠或颗粒的附接导致细胞的刺激、激活或扩增增加、增强、一致和/或更可靠。在某些实施方案中，结合分子是或包括重组bcma或其片段。在特定实施方案中，含有附接的重组bcma(如重组bcma-fc融合物)的颗粒或珠是与所提供的方法结合使用，以激活、刺激或扩增细胞组合物的细胞。在一些实施方案中，含有重组bcma的颗粒或珠选择性地激活、刺激或扩增表达重组受体(例如抗bcmacar)的细胞，所述重组受体含有结合或识别bcma的抗原结合结构域。在某些实施方案中，如与通过其他试剂(例如抗cd3/抗cd28抗体缀合的珠试剂)的激活、刺激或扩增相比，细胞(例如抗bcmacar表达细胞)的激活、刺激或扩增更大或增加了。在某些实施方案中，如与通过其他试剂(例如抗cd3/抗cd28抗体缀合的珠试剂)的激活、刺激或扩增相比，细胞(例如抗bcmacar表达细胞)的激活、刺激或扩增更加指示在体内和/或响应于内源抗原的细胞的激活、刺激或扩增。在一些方面，可以通过改变与颗粒或珠附接的重组bcma的量或通过改变颗粒或珠与细胞的比率来调节、修饰或控制细胞被含有附接的重组bcma的颗粒或珠颗粒或珠激活、刺激或扩增的程度。在一些方面，与当重组bcma是自由漂浮或未附接的情况相比，或与当重组bcma附接至不同的表面(例如培养皿或板)上时相比，当重组bcma附接至颗粒或珠上时，细胞(例如抗bcmacar表达细胞)通过重组bcma的激活、刺激或扩增更加有效。在一些实施方案中，结合分子是结合或识别重组受体(例如car)的抗独特型抗体(抗id)。在特定实施方案中，含有附接的重组抗id的颗粒或珠是与所提供的方法结合使用，以激活、刺激或扩增细胞组合物的细胞。在各种实施方案中，含有抗id的颗粒或珠选择性地激活、刺激或扩增组合物的细胞，例如表达重组受体(例如car)的细胞。在某些实施方案中，如与通过其他试剂(例如抗cd3/抗cd28抗体缀合的珠试剂)的激活、刺激或扩增相比，细胞(例如car表达细胞)的激活、刺激或扩增更大或增加了。在某些方面，可以通过改变与颗粒或珠附接的抗id的量或通过改变颗粒或珠与细胞的比率来调节、修饰或控制细胞被含有抗id的颗粒或珠颗粒或珠激活、刺激或扩增的程度。在特定实施方案中，抗id是抗cd19抗体抗id。在特定实施方案中，如与通过其他试剂(例如抗cd3/抗cd28抗体缀合的珠试剂)的激活、刺激或扩增相比，通过含有抗cd19抗体抗id的颗粒或珠，抗cd19car表达细胞的激活、刺激或扩增更大或增加了。在一些实施方案中，所提供的组合物和方法扩增并激活表达重组受体或car的基因工程化t细胞，所述基因工程化t细胞当给予至受试者时展现出与通过其他技术扩增的基因工程化t细胞相比增加的持久性和/或减少的耗竭。在一些实施方案中，具有增加的持久性和/或减少的耗竭的基因工程化t细胞在给予它们的受试者中展现出更佳的效力。本申请中提及的所有出版物(包括专利文献、科学文章和数据库)出于所有目的通过引用以其整体并入，在程度上如同每个单独的出版物通过引用单独并入。如果本文所述的定义与通过引用并入本文的专利、申请、公开申请和其他出版物中阐述的定义相反或在其他方面不一致，则本文所述的定义优先于通过引用并入本文的定义。本文使用的章节标题只是出于组织的目的，而不应解释为限制所描述的主题。i.颗粒缀合物本文提供了与由重组受体(例如嵌合抗原受体(car))的抗原结合结构域结合或识别的结合分子缀合或以其他方式附接的颗粒(例如珠)及其使用方法。在一些实施方案中，颗粒(例如珠)是非细胞颗粒。a.颗粒在一些实施方案中，由重组受体(例如嵌合抗原受体(car))的抗原结合结构域结合或识别的结合分子与颗粒(例如珠颗粒)(例如与颗粒的表面)结合或以其他方式附接。在某些实施方案中，颗粒是非细胞颗粒。在特定实施方案中，颗粒可以包括胶体颗粒、微球体、纳米颗粒、珠(如磁珠)等。在一些实施方案中，颗粒或珠是生物相容的，即无毒的。在某些实施方案中，颗粒或珠对培养的细胞(例如培养的t细胞)而言是无毒的。在特定实施方案中，颗粒是单分散的。在某些实施方案中，“单分散的”涵盖具有如下尺寸分散的颗粒(例如珠颗粒)，所述尺寸分散具有小于5％的标准偏差，例如直径具有小于5％的标准偏差。在一些实施方案中，本文所述的颗粒(例如珠颗粒)提供了固体支持物或基质，结合分子(例如本文所述的结合分子(例如抗原或抗体))能以允许结合分子与细胞之间相互作用(特别是结合分子与细胞表面上表达的重组受体(例如car)之间的结合)的方式结合或附接至所述固体支持物或基质上。在特定实施方案中，缀合或附接的结合分子与细胞之间的相互作用可以用于如下方法中，所述方法基于在细胞表面上的一种或多种重组受体的表达或表达水平来促进细胞群中一种或多种细胞类型的富集、激活、刺激和/或扩增。在某些实施方案中，颗粒(例如珠颗粒)包含与细胞表面上表达的重组受体(例如car)的抗原结合区域结合的一种或多种结合分子(例如抗体或抗原)。在一些实施方案中，颗粒或珠是生物相容的，即由适合于生物学用途的材料构成。在一些实施方案中，颗粒(例如珠)对培养的细胞(例如培养的t细胞)而言是无毒的。在一些实施方案中，颗粒(例如珠)可以是能以允许结合分子与细胞之间相互作用的方式附接结合分子的任何颗粒。在某些实施方案中，颗粒(例如珠)可以是可以被修饰(例如表面官能化)以允许结合分子附接在颗粒表面的任何颗粒。在一些实施方案中，颗粒(例如珠)由玻璃、二氧化硅、羟基羧酸的聚酯、二羧酸的聚酸酐、或羟基羧酸和二羧酸的共聚物构成。在一些实施方案中，颗粒(例如珠)可以由以下构成或至少部分由以下构成：直链或支链的、经取代的或未经取代的、饱和的或不饱和的、线性的或交联的链烷基(alkanyl)、卤代烷基、硫代烷基、氨基烷基、芳基、芳烷基、烯基、芳烯基、杂芳基、或烷氧基羟基酸的聚酯；或者直链的或支链的、经取代的或未经取代的、饱和的或不饱和的、线性的或交联的链烷基、卤代烷基、硫代烷基、氨基烷基、芳基、芳烷基、烯基、芳烯基、杂芳基或烷氧基二羧酸的聚酸酐。此外，颗粒(例如珠)可以是量子点，或由量子点构成，例如量子点聚苯乙烯颗粒(例如珠)。也可以采用包括酯和酸酐键的混合物(例如，乙醇酸和癸二酸的共聚物)的颗粒(例如珠)。例如，颗粒(例如珠)可以包含包括聚乙醇酸聚合物(pga)、聚乳酸聚合物(pla)、聚癸二酸聚合物(psa)、聚(乳酸-共-乙醇酸)共聚物(plga)、[ρ]聚(乳酸-共-癸二酸)共聚物(plsa)、聚(乙醇酸-共-癸二酸)共聚物(pgsa)等在内的材料。可以构成颗粒(例如珠)的其他聚合物包括己内酯、碳酸酯、酰胺、氨基酸、原酸酯、缩醛、氰基丙烯酸酯和可降解氨基甲酸酯的聚合物或共聚物，以及这些与直链的或支链的、经取代的或未经取代的链烷基、卤代烷基、硫代烷基、氨基烷基、烯基或芳香族羟基酸或二羧酸的共聚物。此外，具有反应性侧链基团的在生物学上重要的氨基酸(如赖氨酸、精氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸和半胱氨酸、或它们的对映异构体可以被包括在具有任何上述材料的共聚物中，以提供用于与结合分子(如多肽抗原或抗体)缀合的反应性基团。在一些实施方案中，颗粒或珠具有大于0.001μm、大于0.01μm、大于0.05μm、大于0.1μm、大于0.2μm、大于0.3μm、大于0.4μm、大于0.5μm、大于0.6μm、大于0.7μm、大于0.8μm、大于0.9μm、大于1μm、大于2μm、大于3μm、大于4μm、大于5μm、大于6μm、大于7μm、大于8μm、大于9μm、大于10μm、大于20μm、大于30μm、大于40μm、大于50μm、大于100μm、大于500μm、和/或大于1,000μm的直径。在一些实施方案中，颗粒或珠具有在或在约0.001μm与1,000μm之间、0.01μm与100μm之间、0.1μm与10μm之间、0.1μm与100μm之间、0.1μm与10μm之间、0.001μm与0.01μm之间、0.01μm与0.1μm之间、0.1μm与1μm之间、1μm与10μm之间、1μm与2μm之间、2μm与3μm之间、3μm与4μm之间、4μm与5μm之间、1μm与5μm之间、和/或5μm与10μm之间(每个都包含端值)的直径。在某些实施方案中，颗粒或珠具有1μm和10μm(每个都包含端值)的平均直径。在某些实施方案中，颗粒(例如珠)具有为或约1μm的直径。在特定实施方案中，颗粒(例如珠)具有为或约2.8μm的平均直径。在一些实施方案中，颗粒(例如珠)具有为或约4.8μm的直径。在某些实施方案中，多个所述颗粒(例如珠)具有均匀的粒度。在一些实施方案中，均匀的粒度包括所述多个颗粒的平均直径的小于10％、小于5％或小于1％的直径标准偏差。在特定实施方案中，所述多个颗粒(例如珠)具有所述多个颗粒的平均直径的小于10％、小于5％或小于1％的直径标准偏差。在特定实施方案中，颗粒(例如，珠颗粒)是均匀成形的。在一些实施方案中，颗粒(例如珠)是球形的。在某些实施方案中，颗粒(例如珠)是非球形的。在一些实施方案中，颗粒(例如珠)具有大于0.001g/cm3、大于0.01g/cm3、大于0.05g/cm3、大于0.1g/cm3、大于0.5g/cm3、大于0.6g/cm3、大于0.7g/cm3、大于0.8g/cm3、大于0.9g/cm3、大于1g/cm3、大于1.1g/cm3、大于1.2g/cm3、大于1.3g/cm3、大于1.4g/cm3、大于1.5g/cm3、大于2g/cm3、大于3g/cm3、大于4g/cm3、或大于5g/cm3的密度。在一些实施方案中，颗粒或珠具有在或在约0.001g/cm3与100g/cm3之间、0.01g/cm3与50g/cm3之间、0.1g/cm3与10g/cm3之间、0.1g/cm3与0.5g/cm3之间、0.5g/cm3与1g/cm3之间、0.5g/cm3与1.5g/cm3之间、1g/cm3与1.5g/cm3之间、1g/cm3与2g/cm3之间、或1g/cm3与5g/cm3之间的密度。在一些实施方案中，颗粒或珠具有为、至少或约0.5g/cm3、0.5g/cm3、t0.6g/cm3、0.7g/cm3、a0.8g/cm3、0.9g/cm3、1.0g/cm3、1.1g/cm3、1.2g/cm3、1.3g/cm3、1.4g/cm3、1.5g/cm3、1.6g/cm3、1.7g/cm3、1.8g/cm3、1.9g/cm3、或2.0g/cm3(每个都包含端值)的密度。在某些实施方案中，珠或颗粒具有为或约1.6g/cm3的密度。在特定实施方案中，珠或颗粒具有为或约1.5g/cm3的密度。在某些实施方案中，颗粒(例如珠)具有为或约1.3g/cm3的密度。在某些实施方案中，所述多个颗粒或珠具有均匀的密度。在某些实施方案中，均匀的密度包括平均颗粒密度的小于10％、小于5％或小于1％的密度标准偏差。在一些实施方案中，颗粒或珠具有在或在约0.001m2/一克颗粒(例如珠)(m2/g)与1,000m2/g之间、0.010m2/g与100m2/g之间、0.1m2/g与10m2/g之间、0.1m2/g与1m2/g之间、1m2/g与10m2/g之间、10m2/g与100m2/g之间、0.5m2/g与20m2/g之间、0.5m2/g与5m2/g之间、或1m2/g与4m2/g之间(每个都包含端值)的表面积。在一些实施方案中，颗粒或珠具有为或约1m2/g至约4m2/g的表面积。在特定实施方案中，颗粒(例如，珠颗粒)具有在或在约0.01与100之间、0.1与10之间、0.5与5之间、1与10之间、1与2之间、1.1与1.8之间、或1.2与1.5之间(每个都包含端值)的比重(即颗粒(例如珠)的密度与水的密度之比)。在某些实施方案中，颗粒(例如珠)具有1.2和1.5的比重。在某些实施方案中，颗粒(例如珠)是单分散的，并且所述比重是均匀的。在特定实施方案中，具有均匀比重的颗粒(例如珠)具有小于10％、小于5％或小于1％的比重标准偏差。在各种实施方案中，颗粒是单分散的并且具有标准偏差小于10％、小于5％或小于1％的比重。在某些实施方案中，颗粒表面包含附接的生物分子，所述生物分子可以结合或附接结合分子。在特定实施方案中，生物分子是多肽。在一些实施方案中，颗粒(例如珠)包含表面暴露的蛋白质a、蛋白质g或生物素。在一些实施方案中，颗粒包含一个或多个涂层或包衣，例如在颗粒表面上的一个或多个涂层或包衣(例如，表面包衣)。在一些实施方案中，所述一个或多个涂层或包衣提供用于与结合分子缀合或偶联的材料，例如被表面官能化或能够被表面官能化的涂层。在某些实施方案中，涂层包含或能够附接表面暴露的官能团。在特定实施方案中，包衣包含或能够附接表面暴露的羧基基团、氨基基团、羟基基团、甲苯磺酰基基团、环氧基基团、氯甲基基团或其组合。在一些实施方案中，涂层或包衣是疏水性的。在特定实施方案中，涂层或包衣是非疏水性的。1.磁性颗粒在一些实施方案中，颗粒(例如，珠颗粒)在磁场中反应。在一些实施方案中，颗粒是磁性颗粒(例如，磁珠颗粒)。在一些实施方案中，磁性颗粒是顺磁性的。在特定实施方案中，磁性颗粒是超顺磁性的。在某些实施方案中，颗粒(例如珠)不显示任何磁特性，除非它们暴露于磁场。在特定实施方案中，颗粒可以是含有内芯的复合颗粒。在一些实施方案中，内芯是磁芯、顺磁芯或超顺磁芯。在一些实施方案中，内芯(例如磁芯)是或含有金属。在一些实施方案中，金属可以是但不限于铁、镍、铜、钴、钆、锰、钽、锌、锆或其任何组合。可以包括在本文所述的内芯(例如磁芯)中的合适物质包括但不限于金属氧化物(例如氧化铁)、铁氧体(例如锰铁氧体、钴铁氧体、镍铁氧体等)、赤铁矿和金属合金(例如cotazn)。在一些实施方案中，内芯包含铁氧体、金属、金属合金、氧化铁或二氧化铬中的一种或多种。在一些实施方案中，内芯包含元素铁或其化合物。在一些实施方案中，内芯包含磁铁矿(fe3o4)、磁赤铁矿(γfe2o3)或硫复铁矿(fe3s4)中的一种或多种。在一些实施方案中，内芯包含氧化铁(例如，fe3o4)。在某些实施方案中，颗粒含有被表面官能化涂层或包衣覆盖的磁、顺磁和/或超顺磁芯。在一些实施方案中，颗粒包含表面暴露的甲苯磺酰基基团。在一些实施方案中，涂层可以含有如下材料，所述材料可以包括但不限于聚合物、多糖、二氧化硅、脂肪酸、蛋白质、碳或其组合。在一些实施方案中，聚合物可以是聚乙二醇、聚(乳酸-共-乙醇酸)、聚戊二醛、聚氨酯、聚苯乙烯或聚乙烯醇。在某些实施方案中，外涂层或包衣包含聚苯乙烯。在一些实施方案中，涂层含有或包括如下材料，所述材料是或包括如下蛋白质，所述蛋白质是白蛋白(例如人血清白蛋白)、蛋白质a和蛋白质g。在一些实施方案中，所述碳是丙烯酰胺或马来酸。在一些实施方案中，所述材料与本文所述的结合分子偶联、连接或缀合。在一些实施方案中，本文所述的颗粒(例如珠颗粒)可以具有内芯和涂层(例如保护性涂层)，其中所述涂层含有本文所述的一种或多种材料。在一些实施方案中，涂层是疏水性的。在某些实施方案中，涂层是亲水性的。在一些实施方案中，本文所述的颗粒(例如珠颗粒)具有金属氧化物芯(例如氧化铁内芯)和涂层(例如保护性涂层)，其中所述涂层包含聚苯乙烯。可以生产或商业地获得在本文所述的方法中使用的颗粒(例如珠颗粒)。颗粒(例如珠)，包括生产颗粒(例如珠)的方法，在本领域中是熟知的。参见例如，美国专利号6,074,884；5,834,121；5,395,688；5,356,713；5,318,797；5,283,079；5,232,782；5,091,206；4,774,265；4,654,267；4,554,088；4,490,436；4,452,773；美国专利申请公开号20100207051；以及sharpe,paut.,methodsofcellseparation,elsevier,1988。可商购获得的颗粒(例如珠)(例如珠颗粒)包括但不限于promagtm(polysciences,inc.)；compeltm(polysciences,inc.)；(polysciences,inc.)，包括plus(polysciences,inc.)和maxi(banglaboratories,inc.)；m-pva(cehmagenbiopolymertechnologieag)；simag(chemicellgmbh)；beadmag(chemicellgmbh)；(cortexbiochem)；(invitrogen)，包括m-280绵羊抗兔igg(invitrogen)、flowcomptm(例如，flowcomptmhumancd3，invitrogen)、m-450(例如，m-450tosylactivated，invitrogen)、untouchedtm(例如，untouchedtm人cd8t细胞，invitrogen)、和结合、扩增和/或激活t细胞的(例如，用于t细胞扩增和激活的人t-激活因子cd3/cd28，invitrogen)；m(merkchimiesas)；em(merkchimiesas)；macsibeadstm颗粒(例如，抗生物素macsibead颗粒，miltenyibiotec，目录号130-091-147)；磁珠(ibabiotagnology)；磁珠(ibabiotagnology)；(micormodpartikeltechnologiegmbh)(micromodpartikeltechnologie)；magnesiltm(promegagmbh)；mgp(rocheappliedscienceinc.)；piercetm蛋白质g磁珠(thermofisherscientificinc.)；piercetm蛋白质a磁珠(thermofisherscientificinc.)；piercetm蛋白质a/g磁珠(thermofisherscientificinc.)；piercetmnhs激活的磁珠(thermofisherscientificinc.)；piercetm蛋白质l磁珠(thermofisherscientificinc.)；piercetm抗ha磁珠(thermofisherscientificinc.)；piercetm抗c-myc磁珠(thermofisherscientificinc.)；piercetm谷胱甘肽磁珠(thermofisherscientificinc.)；piercetm链霉亲和素磁珠(thermofisherscientificinc.)；magnabindtm磁珠(thermofisherscientificinc.)；sera-magtm磁珠(thermofisherscientificinc.)；抗m2磁珠(sigma-aldrich)；spherotm磁性颗粒(spherotechinc.)；和hispurtmni-nta磁珠(thermofisherscientificinc.)。在某些实施方案中，颗粒是单分散的超顺磁性珠颗粒，其包含超顺磁铁芯(例如磁铁矿(fe3o4)或磁赤铁矿(γfe2o3)芯)、聚苯乙烯涂层或包衣、以及包含暴露的甲苯磺酰基基团的官能化表面。在某些实施方案中，颗粒(例如珠)具有约1.5g/cm3的密度和约1m2/g至约4m2/g的表面积。在特定实施方案中，颗粒(例如珠)是具有约4.5μm的直径和约1.5g/cm3的密度的单分散的超顺磁性颗粒(例如珠)。在一些实施方案中，颗粒(例如珠)、颗粒是具有约2.8μm的平均直径和约1.3g/cm3的密度的单分散的超顺磁珠。2.寡聚物颗粒在一些实施方案中，颗粒是寡聚物或聚合物。在一些实施方案中，颗粒是由蛋白质(例如链霉亲和素)构成的寡聚物或聚合物。在一些实施方案中，颗粒是如下寡聚物或聚合物，所述寡聚物或聚合物可以通过将蛋白质(例如链霉亲和素或其变体)的单独分子按其天然存在的样子直接或间接地连接，或者通过将单体的单独分子或构成单独分子的亚基的复合物直接或间接地连接(例如，将蛋白质的二聚体、三聚体、四聚体等按其天然存在的样子直接或间接地连接)而生成。例如，链霉亲和素或抗生物素蛋白的四聚体同源二聚体或异源二聚体可以称为相应的寡聚物或聚合物的单独分子或最小构成要素。在一些实施方案中，寡聚物或聚合物可以含有蛋白质的至少2个单独分子的连接(例如是2聚体)，或者可以是蛋白质的单独分子(例如，单体、四聚体)的至少3聚体、4聚体、5聚体、6聚体、7聚体、8聚体、9聚体、10聚体、11聚体、12聚体、13聚体、14聚体、15聚体、16聚体、17聚体、18聚体、19聚体、20聚体、25聚体、30聚体、35聚体、40聚体、45聚体或50聚体。在一些实施方案中，所述试剂是多聚体，或所述寡聚试剂是多聚体试剂。在特定实施方案中，颗粒是包含链霉亲和素或链霉亲和素的突变蛋白(例如，或xt链霉亲和素突变蛋白)的寡聚物或聚合物。可以使用在本领域中已知的任何方法(如在公布的美国专利申请号us2004/0082012中描述的任何方法)来生成寡聚物。在一些实施方案中，所述寡聚物或聚合物包含两个或更多个单独分子，所述两个或更多个单独分子可以通过如多糖或双功能接头交联。在一些实施方案中，所述颗粒是通过在多糖的存在下将单独分子或构成单独分子的亚基复合物交联而获得的寡聚物或聚合物。在一些实施方案中，所述颗粒是可以通过将羧基残基引入多糖(例如葡聚糖)中而制备的寡聚物或聚合物。在一些方面，所述颗粒的单独分子(例如，单体、四聚体)可以使用常规碳二亚胺化学经由内部赖氨酸残基的伯氨基基团和/或游离n末端与葡聚糖骨架中的羧基基团偶联。在一些实施方案中，偶联反应以每摩尔葡聚糖约60摩尔的试剂单独分子(例如单体、四聚体)的摩尔比进行。在一些实施方案中，所述颗粒是一种或多种链霉亲和素或抗生物素蛋白、或链霉亲和素的任何类似物或突变蛋白(例如或xt)、或抗生物素蛋白的类似物或突变蛋白(例如中性抗生物素蛋白)的寡聚物或聚合物。在一些实施方案中，抗生物素蛋白或链霉亲和素包含结合位点z，所述结合位点z是抗生物素蛋白或链霉亲和素的天然生物素结合位点，其中在单独分子中可以存在至多四个结合位点(例如四聚体含有四个结合位点z)，由此同源四聚体可以含有至多4个相同的结合位点，即z1，然而异源四聚体可以含有至多4个可能不同的结合位点，例如含有z1和z2。在一些实施方案中，所述寡聚物由相同链霉亲和素、链霉亲和素突变蛋白、抗生物素蛋白或抗生物素蛋白突变蛋白的多个单独分子(例如多个同源四聚体)生成或产生，在这种情况下，所述寡聚物的每个结合位点z(例如z1)是相同的。例如，在一些情况下，寡聚物可以含有多个结合位点z1，如至少2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个、20个、21个、22个、23个、24个、25个、26个、27个、28个、29个、30个、31个、32个、33个、34个、35个、40个、45个、50个或更多个结合位点z1。在一些实施方案中，寡聚物生成或产生自多个单独分子，所述多个单独分子可以是链霉亲和素、链霉亲和素突变蛋白、抗生物素蛋白或抗生物素蛋白突变蛋白的异源四聚体，和/或生成或产生自链霉亲和素、链霉亲和素突变蛋白、抗生物素蛋白或抗生物素蛋白突变蛋白的多个两种或更多种不同的单独分子(例如不同的同源四聚体)，所述两种或更多种不同的单独分子在它们的结合位点z(例如z1和z2)方面不同，在这种情况下多个不同的结合位点z(例如z1和z2)可以存在于所述寡聚物中。例如，在一些情况下，寡聚物可以含有多个结合位点z1和多个结合位点z，其组合可以包括至少2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个、20个、21个、22个、23个、24个、25个、26个、27个、28个、29个、30个、31个、32个、33个、34个、35个、40个、45个、50个或更多个组合的结合位点z1和z2。在一些实施方案中，所述颗粒是通过使用双功能接头或其他化学接头(如抗生物素蛋白)使单独分子或构成单独分子的亚基的复合物交联或者通过本领域已知的其他方法获得的寡聚物或聚合物。在一些方面，链霉亲和素或抗生物素蛋白或者链霉亲和素或抗生物素蛋白的任何突变蛋白或类似物的交联寡聚物或聚合物可以通过经由双功能分子(用作接头)如戊二醛使单独链霉亲和素或抗生物素蛋白分子交联或通过本领域中描述的其他方法获得。例如，有可能通过将硫醇基团引入链霉亲和素突变蛋白(例如，这可以通过使链霉亲和素突变蛋白与2-亚氨基硫杂环戊烷(traut’s试剂)反应并且通过例如在单独的反应中激活在链霉亲和素突变蛋白中可用的氨基基团来进行)来生成链霉亲和素突变蛋白的寡聚物。在一些实施方案中，氨基基团的这种激活可以通过使链霉亲和素突变蛋白与可商购获得的异双功能交联剂(如磺基琥珀酰亚胺基4-(n-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-甲酸酯(磺基smcc)或琥珀酰亚胺基-6-(β-马来酰亚胺丙酰胺基)己酸酯(smph))的反应来实现。在一些此类实施方案中，将如此获得的两种反应产物混合在一起，通常导致在一批经修饰的链霉亲和素突变蛋白中包含的硫醇基团与另一批经修饰的链霉亲和素突变蛋白的激活的(如通过马来酰亚胺官能团)氨基酸反应。在一些情况下，通过这一反应，形成链霉亲和素突变蛋白的多聚体/寡聚物。这些寡聚物可以具有任何合适数量的单独分子，如至少2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个、20个、21个、22个、23个、24个、25个、26个、27个、28个、29个、30个、31个、32个、33个、34个、35个、40个、45个、50个或更多个，并且寡聚化程度可以根据反应条件而改变。在一些实施方案中，可以经由尺寸排阻色谱法分离寡聚物或聚合物试剂，并且可以使用任何所希望的级分作为颗粒。在一些实施方案中，在2-亚氨基硫杂环戊烷和异双功能交联剂(如磺基smcc)的存在下，使经修饰的链霉亲和素突变蛋白反应之后，可以经由尺寸排阻色谱法分离寡聚物或聚合物试剂，并且可以使用任何所希望的级分作为颗粒。在一些实施方案中，寡聚物不具有(并且不需要具有)单一分子量，但是它们可以观察到统计权重分布，如高斯分布。在一些情况下，可以将具有多于三个链霉亲和素或突变蛋白四聚体(例如同源四聚体或异源四聚体)的任何寡聚物用作可溶性颗粒，例如通常3个至50个四聚体(例如同源四聚体或异源四聚体)、10个至40个四聚体(例如，同源四聚体或异源四聚体)、或25个至35个四聚体(例如同源四聚体或异源四聚体)。寡聚物可以具有例如从3个至25个链霉亲和素突变蛋白四聚体，例如同源四聚体或异源四聚体。在一些方面，在链霉亲和素突变蛋白具有约50kda的分子量的情况下，可溶性寡聚物可以具有从或从约150kda至2000kda、150kda至1500kda、150kda至1250kda、150kda至1000kda、150kda至500kda或150kda至300kda、300kda至2000kda、300kda至1500kda、300kda至1250kda、300kda至1000kda、300kda至500kda、500kda至2000kda、500kda至1500kda、500kda至1250kda、500kda至1000kda、1000kda至2000kda、1000kda至1500kda、1000kda至1250kda、1250kda至2000kda、或1500kda至2000kda的分子量。通常，因为每个链霉亲和素分子/突变蛋白具有四个生物素结合位点，所以这样的试剂可以提供12个至160个结合位点z，如12个至100个结合位点z。b.结合分子本文提供了结合分子(例如多肽抗原或抗体)，其结合与颗粒(例如珠颗粒)缀合或附接的重组受体(如car)的抗原结合结构域或由所述抗原结合结构域识别。在一些实施方案中，结合分子是多肽。在某些实施方案中，结合分子包括可以将重组受体(如抗原受体，例如car)设计成结合或识别其的任何多肽。在特定实施方案中，结合分子是结合或识别重组受体(如抗原受体，例如car)的抗原结合结构域的抗独特型抗体。在特定实施方案中，结合分子是由重组受体(如抗原受体，例如car)的抗原结合结构域结合或识别的多肽。在某些实施方案中，结合分子是由car的抗原结合结构域结合或识别的多肽。在一些实施方案中，结合分子与car结合或由其识别，所述car不包含杀伤细胞免疫球蛋白样受体(kir)的跨膜结构域或细胞内信号传导结构域。在某些实施方案中，结合分子与car结合或由其识别，所述car不包含来自kir2ds2、kir2dl3、kir2dl1、kir2dl2、kir2dl4、kir2dl5a、kir2dl5b、kir2ds1、kir2ds3、kir2ds4、kir2ds5、kir3dl1、kir3ds1、kir3dl2、kir3dl3、kir2dp1和kir3dp1中任何一种的跨膜结构域或细胞内信号传导结构域。1.抗原在一些实施方案中，结合分子是抗原，例如重组抗原或其片段。在某些实施方案中，抗原是与疾病(例如癌症)相关的多肽或多肽的部分。在一些实施方案中，抗原是在与疾病相关的细胞(例如癌细胞和/或肿瘤细胞)的表面上表达的多肽或多肽的变体或片段。在一些实施方案中，抗原是或包括αvβ6整合素(avb6整合素)、b细胞成熟抗原(bcma)、b7-h3、b7-h6、碳酸酐酶9(ca9，也称为caix或g250)、癌症-睾丸抗原、癌症/睾丸抗原1b(ctag，也称为ny-eso-1和lage-2)、癌胚抗原(cea)、细胞周期蛋白、细胞周期蛋白a2、c-c基序趋化因子配体1(ccl-1)、cd19、cd20、cd22、cd23、cd24、cd30、cd33、cd38、cd44、cd44v6、cd44v7/8、cd123、cd133、cd138、cd171、硫酸软骨素蛋白聚糖4(cspg4)、表皮生长因子蛋白(egfr)、iii型表皮生长因子受体突变(egfrviii)、上皮糖蛋白2(epg-2)、上皮糖蛋白40(epg-40)、肝配蛋白b2、肝配蛋白受体a2(epha2)、雌激素受体、fc受体样蛋白5(fcrl5；也称为fc受体同源物5或fcrh5)、胎儿乙酰胆碱受体(胎儿achr)、叶酸结合蛋白(fbp)、叶酸受体α、神经节苷脂gd2、o-乙酰化gd2(ogd2)、神经节苷脂gd3、糖蛋白100(gp100)、磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(gpc3)、g蛋白偶联受体5d(gprc5d)、her2/neu(受体酪氨酸激酶erb-b2)、her3(erb-b3)、her4(erb-b4)、erbb二聚体、人高分子量黑色素瘤相关抗原(hmw-maa)、乙型肝炎表面抗原、人白细胞抗原a1(hla-a1)、人白细胞抗原a2(hla-a2)、il-22受体α(il-22rα)、il-13受体α2(il-13rα2)、激酶插入结构域受体(kdr)、κ轻链、l1细胞粘附分子(l1-cam)、l1-cam的ce7表位、含有富亮氨酸重复序列的蛋白8家族成员a(lrrc8a)、路易斯y、黑色素瘤相关抗原(mage)-a1、mage-a3、mage-a6、mage-a10、间皮素(msln)、c-met、鼠类巨细胞病毒(cmv)、粘蛋白1(muc1)、muc16、自然杀伤细胞2族成员d(nkg2d)配体、黑色素a(mart-1)、神经细胞粘附分子(ncam)、癌胚胎抗原、优先表达的黑色素瘤抗原(prame)、孕酮受体、前列腺特异性抗原、前列腺干细胞抗原(psca)、前列腺特异性膜抗原(psma)、受体酪氨酸激酶样孤儿受体1(ror1)、存活蛋白、滋养层糖蛋白(tpbg，也称为5t4)、肿瘤相关糖蛋白72(tag72)、酪氨酸酶相关蛋白1(trp1，也称为tyrp1或gp75)、酪氨酸酶相关蛋白2(trp2，也称为多巴色素互变异构酶、多巴色素δ异构酶或dct)、血管内皮生长因子受体(vegfr)、血管内皮生长因子受体2(vegfr2)、wilms肿瘤1(wt-1)、病原体特异性或病原体表达的抗原、或与通用标签相关的抗原、和/或生物素化分子、和/或由hiv、hcv、hbv或其他病原体表达的分子。在一些实施方案中，受体靶向的抗原包括与b细胞恶性肿瘤相关的抗原，如许多已知b细胞标记中的任何一种。在一些实施方案中，所述抗原是或包括cd20、cd19、cd22、ror1、cd45、cd21、cd5、cd33、igκ、igλ、cd79a、cd79b或cd30。在一些实施方案中，结合分子包含多肽抗原的由重组受体和/或car识别或结合的部分。在特定实施方案中，结合分子包含由重组受体和/或car识别或结合的表位。在某些实施方案中，所述多肽抗原的部分含有由重组受体和或car识别或结合的多肽的约或含有至少10个、15个、20个、25个、30个、35个、40个、50个、55个、60个、65个、70个、75个、80个、85个、90个、95个、100个、110个、120个、130个、140个、150个、160个、170个、180个、190个、200个、250个、300个、400个或500个氨基酸(在一些情况下连续氨基酸)。在某些实施方案中，所述多肽部分包含由重组受体和/或car识别的表位的氨基酸序列。在某些实施方案中，结合分子是多肽变体，所述多肽变体含有与由重组受体和/或car结合和/或识别的多肽为、约或至少50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或99.5％的氨基酸序列同一性。在某些实施方案中，颗粒与包含多肽抗原的部分的结合分子结合，其中所述部分是抗原的由重组受体(即car)结合和/或识别(或可潜在地由重组受体(即car)结合和/或识别)的部分。在一些实施方案中，结合分子包含抗原的含有由重组受体识别的表位的部分。在某些实施方案中，所述抗原的部分是如下的部分。在一些实施方案中，抗原是或包括αvβ6整合素(avb6整合素)、b细胞成熟抗原(bcma)、b7-h3、b7-h6、碳酸酐酶9(ca9，也称为caix或g250)、癌症-睾丸抗原、癌症/睾丸抗原1b(ctag，也称为ny-eso-1和lage-2)、癌胚抗原(cea)、细胞周期蛋白、细胞周期蛋白a2、c-c基序趋化因子配体1(ccl-1)、cd19、cd20、cd22、cd23、cd24、cd30、cd33、cd38、cd44、cd44v6、cd44v7/8、cd123、cd133、cd138、cd171、硫酸软骨素蛋白聚糖4(cspg4)、表皮生长因子蛋白(egfr)、iii型表皮生长因子受体突变(egfrviii)、上皮糖蛋白2(epg-2)、上皮糖蛋白40(epg-40)、肝配蛋白b2、肝配蛋白受体a2(epha2)、雌激素受体、fc受体样蛋白5(fcrl5；也称为fc受体同源物5或fcrh5)、胎儿乙酰胆碱受体(胎儿achr)、叶酸结合蛋白(fbp)、叶酸受体α、神经节苷脂gd2、o-乙酰化gd2(ogd2)、神经节苷脂gd3、糖蛋白100(gp100)、磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(gpc3)、g蛋白偶联受体5d(gprc5d)、her2/neu(受体酪氨酸激酶erb-b2)、her3(erb-b3)、her4(erb-b4)、erbb二聚体、人高分子量黑色素瘤相关抗原(hmw-maa)、乙型肝炎表面抗原、人白细胞抗原a1(hla-a1)、人白细胞抗原a2(hla-a2)、il-22受体α(il-22rα)、il-13受体α2(il-13rα2)、激酶插入结构域受体(kdr)、κ轻链、l1细胞粘附分子(l1-cam)、l1-cam的ce7表位、含有富亮氨酸重复序列的蛋白8家族成员a(lrrc8a)、路易斯y、黑色素瘤相关抗原(mage)-a1、mage-a3、mage-a6、mage-a10、间皮素(msln)、c-met、鼠类巨细胞病毒(cmv)、粘蛋白1(muc1)、muc16、自然杀伤细胞2族成员d(nkg2d)配体、黑色素a(mart-1)、神经细胞粘附分子(ncam)、癌胚胎抗原、优先表达的黑色素瘤抗原(prame)、孕酮受体、前列腺特异性抗原、前列腺干细胞抗原(psca)、前列腺特异性膜抗原(psma)、受体酪氨酸激酶样孤儿受体1(ror1)、存活蛋白、滋养层糖蛋白(tpbg，也称为5t4)、肿瘤相关糖蛋白72(tag72)、酪氨酸酶相关蛋白1(trp1，也称为tyrp1或gp75)、酪氨酸酶相关蛋白2(trp2，也称为多巴色素互变异构酶、多巴色素δ异构酶或dct)、血管内皮生长因子受体(vegfr)、血管内皮生长因子受体2(vegfr2)、wilms肿瘤1(wt-1)、病原体特异性或病原体表达的抗原、或与通用标签相关的抗原、和/或生物素化分子、和/或由hiv、hcv、hbv或其他病原体表达的分子。在一些实施方案中，受体靶向的抗原包括与b细胞恶性肿瘤相关的抗原，如许多已知b细胞标记中的任何一种。在一些实施方案中，所述抗原是或包括cd20、cd19、cd22、ror1、cd45、cd21、cd5、cd33、igκ、igλ、cd79a、cd79b或cd30。在某些实施方案中，颗粒与包含bcma多肽的部分的结合分子结合。在一些实施方案中，颗粒与包含cd22多肽的部分的结合分子结合。在某些实施方案中，颗粒与包含ror1多肽的部分的结合分子结合。在某些实施方案中，多肽抗原的部分是bcma多肽的部分。在某些实施方案中，多肽抗原含有与bcma多肽的至少10个、至少15个、至少20个、至少25个、至少30个、至少35个、至少40个、至少50个、至少55个、至少60个、至少65个、至少70个、至少75个、至少80个、至少85个、至少90个、至少95个、至少100个、至少110个、至少120个、至少130个、至少140个、至少150个、至少160个、至少170个、或至少180个连续氨基酸为、约或至少50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％、或99.5％的氨基酸序列同一性。在特定实施方案中，bcma多肽变体包含与由重组受体和/或car结合和/或识别的bcma表位的氨基酸序列为、约、或至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、97％或98％相同的氨基酸序列。在特定实施方案中，抗原是bcma、或其部分或变体。在一些实施方案中，bcma多肽是哺乳动物bcma多肽。在特定实施方案中，bcma多肽是人bcma多肽。在一些实施方案中，bcma抗原是或包含bcma的细胞外结构域、或其部分，所述细胞外结构域、或其部分包含由抗原受体(例如car)识别的表位。在某些实施方案中，bcma抗原是或包含具有与seqidno:1具有至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的氨基酸序列的多肽，或所述多肽的含有seqidno:1的至少50个、至少55个、至少60个、至少65个、至少70个、至少75个、至少80个、至少85个、至少90个、至少95个、至少100个、至少110个、至少120个、至少130个、至少140个、至少150个、至少160个、至少170个、或至少180个连续氨基酸的片段。在一些实施方案中，bcma抗原是或包括seqidno:1所示的序列、或其部分，所述序列或其部分是或含有由抗原受体(例如car)识别的表位。在一些实施方案中，抗原是ror1、或其部分或变体。在某些实施方案中，ror1多肽是哺乳动物的。在特定实施方案中，ror1多肽是人的。在一些实施方案中，ror1抗原是或包含ror1的细胞外结构域、或其部分，所述细胞外结构域、或其部分包含由抗原受体(例如car)识别的表位。在一些实施方案中，ror1抗原是具有与seqidno:31具有至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的氨基酸序列的多肽，或所述多肽的含有seqidno:31的至少50个、至少55个、至少60个、至少65个、至少70个、至少75个、至少80个、至少85个、至少90个、至少95个、至少100个、至少110个、至少120个、至少130个、至少140个、至少150个、至少160个、至少170个、或至少180个连续氨基酸的片段。在一些实施方案中，ror抗原包含seqidno:31所示的序列、或其部分，所述序列、或其部分包含由抗原受体(例如car)识别的表位。在一些实施方案中，抗原是cd22、或其部分或变体。在某些实施方案中，cd22多肽是哺乳动物的。在特定实施方案中，cd22多肽是人的。在一些实施方案中，抗原是cd22的细胞外结构域、或其部分，所述细胞外结构域、或其部分包含由抗原受体(例如car)识别的表位。在一些实施方案中，抗原是具有与seqidno:29具有至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的氨基酸序列的多肽，或所述多肽的含有seqidno:29的至少50个、至少55个、至少60个、至少65个、至少70个、至少75个、至少80个、至少85个、至少90个、至少95个、至少100个、至少110个、至少120个、至少130个、至少140个、至少150个、至少160个、至少170个、或至少180个连续氨基酸的片段。在一些实施方案中，cd22抗原包含seqidno:29所示的序列、或其部分，所述序列、或其部分包含由抗原受体(例如car)识别的表位。在一些实施方案中，多肽抗原的部分是bcma多肽的部分。在某些实施方案中，多肽抗原的部分是cd22多肽的部分。在特定实施方案中，多肽抗原的部分是ror1多肽的部分。在某些实施方案中，多肽的部分含有seqidno:1、29或31所示的氨基酸序列的至少10个、至少15个、至少20个、至少25个、至少30个、至少35个、至少40个、至少50个、至少55个、至少60个、至少65个、至少70个、至少75个、至少80个、至少85个、至少90个、至少95个、至少100个、至少110个、至少120个、至少130个、至少140个、至少150个、至少160个、至少170个或至少180个连续氨基酸。在一些实施方案中，细胞表达car，所述car结合或识别可以与抗体或其片段或变体融合的通用标签。在特定实施方案中，表达此类car的细胞能够特异性地识别和杀伤已经由与通用标签融合的抗体结合的靶细胞(例如肿瘤细胞)。一个例子包括但不限于，当抗fitccar表达t细胞被癌症反应性fitc标记的抗体结合时，那些细胞可以结合和/或识别各种人癌细胞。因此，在一些实施方案中，与通用标签结合的相同car可用于治疗不同的癌症，条件是存在识别包含通用标签的癌症相关抗原的可用抗体。在特定实施方案中，颗粒(例如珠颗粒)包含表面暴露的结合分子，所述结合分子包含抗原或其部分，所述抗原或其部分结合与通用标签结合的抗原受体(例如car)或由所述抗原受体识别。在某些实施方案中，结合分子是由抗原受体(例如car)结合或识别的通用标签或其部分。特定的实施方案设想可以与抗体或其抗原结合片段或变体融合的、不阻止抗体与其各自的靶标结合的任何多肽结构域均适合用作通用标签。在一些实施方案中，颗粒与包含通用标签或其部分的结合分子结合，所述通用标签或其部分选自：fitc、链霉亲和素、生物素、组氨酸、二硝基苯酚、多甲藻素叶绿素蛋白复合物、绿色荧光蛋白、pe、hrp、棕榈酰化、亚硝基化、碱性磷酸酶(alkalaninephosphatase)、葡萄糖氧化酶和麦芽糖结合蛋白。在一些实施方案中，结合分子是由重组受体(如抗原受体(例如car))识别和/或结合的、包含两个或更多个多肽抗原或其部分或变体的多聚体(例如二聚体)。在一些实施方案中，多肽抗原或其部分是相同的。在某些实施方案中，多肽抗原直接或间接地连接至区域或结构域(例如多聚化结构域)，所述区域或结构域经由结构域或区域之间的互补相互作用促进或稳定两个或更多个多肽抗原之间的相互作用。在一些实施方案中，将多肽抗原提供为多聚体(例如二聚体)提供了结合分子与抗原受体(例如car)的抗原结合结构域之间的多价相互作用，这在一些方面可以增加相互作用的亲合力。在一些实施方案中，通过与珠缀合的结合分子，增加的亲合力可能有利于抗原受体(例如car)的刺激或激动活性。在一些实施方案中，将多肽直接或间接地连接至多聚化结构域。示例性的多聚化结构域包括免疫球蛋白序列或其部分、亮氨酸拉链、疏水区、亲水区、和相容的蛋白质间相互作用结构域。例如，多聚化结构域可以是免疫球蛋白恒定区或结构域，例如来自igg(包括igg1、igg2、igg3或igg4亚型)、iga、ige、igd和igm及其修饰的形式的fc结构域或其部分。在特定实施方案中，将多肽抗原直接或间接地连接至fc结构域。在一些实施方案中，多肽是包含多肽抗原或其部分和fc结构域的融合多肽。在特定实施方案中，结合分子是包含fc结构域的融合多肽。在一些实施方案中，fc结构域由igg、iga或igd同种型的重链的第二和第三恒定结构域(即ch2和ch3结构域)(例如igg、iga和igd同种型的ch2或ch3)构成。在一些实施方案中，fc结构域由igm或ige同种型的三个重链恒定结构域(即，ch2、ch3和ch4结构域)构成。在一些实施方案中，fc结构域可还包括铰链序列或其部分。在某些方面，fc结构域含有免疫球蛋白分子的铰链结构域的部分或全部以及ch2和ch3结构域。在一些情况下，fc结构域可以形成通过一个或多个二硫键接合的两条多肽链的二聚体。在一些实施方案中，fc结构域衍生自合适的哺乳动物(例如人、小鼠、大鼠、山羊、绵羊或猴子)的免疫球蛋白(例如igg、iga、igm或ige)。在一些实施方案中，fc结构域包含igg的ch2和ch3结构域。在某些实施方案中，fc结构域与多肽抗原的c末端融合。在特定实施方案中，fc结构域与多肽抗原的n末端融合。在一些实施方案中，fc结构域是iggfc结构域或其部分或变体。在一些实施方案中，fc结构域是人iggfc结构域、或其部分或变体，其包含seqidno:2所示的氨基酸序列、或与seqidno:2所示的序列具有至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％序列同一性的氨基酸序列。在特定实施方案中，fc结构域是野生型人iggfc结构域、或其部分或变体。在特定实施方案中，fc结构域是野生型人igg1fc结构域的变体。在一些实施方案中，融合多肽包含变体fc结构域。在某些实施方案中，变体人iggfc结构域含有降低、减少和/或减损fc结构域与轻链之间配对的突变(例如取代、缺失或插入)。在一些实施方案中，变体人iggfc结构域含有降低fc结构域与fc受体之间的结合亲和力的突变。在特定实施方案中，变体人iggfc结构域含有降低、减少和/或减损fc结构域与fc受体之间的相互作用或相互作用概率或可能性的突变。在一些实施方案中，变体人iggfc结构域含有降低fc结构域与补体系统的蛋白质之间的结合亲和力的突变。在特定实施方案中，变体人iggfc结构域含有降低、减少和/或减损fc结构域与补体系统的蛋白质之间的相互作用或相互作用概率或可能性的突变。在一些实施方案中，结合分子包含变体人igg1fc结构域。在一些实施方案中，变体人iggfc结构域在fc结构域的铰链区中含有胱氨酸至丝氨酸的取代。在一些实施方案中，变体人iggfc结构域在fc结构域的铰链区中含有亮氨酸至丙氨酸的取代。在特定实施方案中，变体人iggfc结构域在铰链区中含有甘氨酸至丙氨酸的取代。在某些实施方案中，变体人iggfc结构域在fc结构域的ch2区中含有丙氨酸至丝氨酸的取代。在一些实施方案中，变体人iggfc结构域在fc结构域的ch2区中包含脯氨酸至丝氨酸的取代。在一些实施方案中，变体人iggfc结构域包含如seqidno:28所示的氨基酸序列。在一些实施方案中，结合分子包含含有fc结构域的融合多肽，其中所述fc结构域存在于融合多肽的c末端处。在一些实施方案中，结合分子是包含bcma多肽或其部分和fc结构域的融合多肽。在一些实施方案中，bcma多肽或其部分包含seqidno:1所示的氨基酸序列、或展现出与seqidno:1至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％序列同一性并且含有由抗原受体(例如car)识别的表位的氨基酸序列。在一些实施方案中，fc结构域包含seqidno:2所示的氨基酸序列、或展现出与seqidno:2至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，fc结构域包含seqidno:28所示的氨基酸序列、或展现出与seqidno:28至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，bcma抗原包括bcma或其部分或变体，以及标签或融合结构域(例如fc结构域)。在特定实施方案中，bcma抗原含有seqidno:35所示的氨基酸序列的全部或部分、或展现出与seqidno:35至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％序列同一性并且包含由抗原受体(例如car)识别的表位的氨基酸序列。在一些实施方案中，结合分子是包含ror1多肽或其部分和fc结构域的融合多肽。在一些实施方案中，ror1多肽或其部分包含seqidno:31所示的氨基酸序列、或展现出与seqidno:31至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％序列同一性并且包含由抗原受体(例如car)识别的表位的氨基酸序列，和fc结构域。在一些实施方案中，fc结构域包含seqidno:2所示的氨基酸序列、或展现出与seqidno:2至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，fc结构域包含seqidno:28所示的氨基酸序列、或展现出与seqidno:28至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％序列同一性的氨基酸序列。在某些实施方案中，结合分子是融合多肽，所述融合多肽包含seqidno:33所示的氨基酸序列、或展现出与seqidno:33至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％序列同一性并且包含由抗原受体(例如car)识别的表位的氨基酸序列。在特定实施方案中，结合分子是融合多肽，所述融合多肽包含：seqidno:29所示的cd22多肽或其部分、或展现出与seqidno:29至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％序列同一性并且包含由抗原受体(例如car)识别的表位的氨基酸序列，和fc结构域。在一些实施方案中，fc结构域包含seqidno:2所示的氨基酸序列、或展现出与seqidno:2至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，fc结构域包含seqidno:28所示的氨基酸序列、或展现出与seqidno:28至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％序列同一性的氨基酸序列。在某些实施方案中，融合多肽包含seqidno:34所示的氨基酸序列、或展现出与seqidno:34至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％序列同一性并且包含由抗原受体(例如car)识别的表位的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗原和多聚化结构域(如fc结构域)通过接头(如氨基酸接头)连接。在某些实施方案中，抗原与氨基酸接头的n末端融合，并且多聚化结构域(如fc结构域)与接头的c末端融合。尽管氨基酸接头可以是任何长度并且含有氨基酸的任何组合，但是接头长度可相对较短(例如十个或更少的氨基酸)以降低所连接结构域之间的相互作用。还可以调整接头的氨基酸组成以降低具有大侧链的氨基酸或可能引入二级结构的氨基酸的数量。合适的氨基酸接头包括但不限于长度为至多3个、4个、5个、6个、7个、10个、15个、20个或25个氨基酸的那些。代表性氨基酸接头序列包括ggggs(seqidno:27)，以及包含2个、3个、4个或5个拷贝的ggggs(seqidno:27)的接头。在一些实施方案中，结合分子是由两个fc融合多肽形成的二聚体，所述fc融合多肽含有多肽抗原或其部分和fc结构域，例如bcma-fc、ror1-fc或cd22-fc。还提供了编码任何fc融合多肽的核酸分子。还提供了编码核酸分子的载体，包括表达载体。在一些实施方案中，结合分子可以通过在合适的宿主细胞中表达而在细胞中产生。在一些实施方案中，宿主细胞是哺乳动物细胞系。用于重组表达蛋白质的哺乳动物细胞的例子包括hek293细胞或cho细胞或其衍生物。在一些方面，结合分子还包括用于从细胞中分泌的信号肽。在示例性实施方案中，信号肽是cd33(例如，seqidno:30所示)。在一些实施方案中，所得的多肽抗原-fc融合蛋白(例如，bcma-fc、ror1-fc或cd22-fc)可以在例如用表达载体进行转化的宿主细胞中表达，从而可以通过在fc部份(moieties)之间形成的链间二硫键发生fc结构域之间的组装，以产生二聚体(如二价)多肽抗原融合蛋白。在特定实施方案中，结合分子是或含有人bcma或其部分。在一些实施方案中，结合分子包含人bcma的细胞外结构域。在特定实施方案中，结合分子包含人bcma的具有seqidno:1所示多肽序列的部分。在特定实施方案中，结合分子是融合多肽，所述融合多肽包含人bcma的细胞外结构域和fc结构域。在某些实施方案中，fc结构域是人igg1fc结构域的变体。在某些实施方案中，fc结构域定位于融合多肽的c末端。在特定实施方案中，融合多肽包含含有seqidno:1所示氨基酸序列的人bcma的部分、以及包含seqidno:29所示氨基酸的变体人igg1fc结构域。在一些实施方案中，融合多肽包含将bcma多肽与fc结构域连接的接头。在特定实施方案中，接头具有seqidno:27所示的氨基酸序列。在某些实施方案中，结合分子是包含人bcma多肽(或其部分或变体)和c末端fc结构域的融合多肽，并且是表面缀合至或以其他方式附接至颗粒(例如珠颗粒)。在特定实施方案中，将融合多肽在fc结构域内的位点处附接至颗粒。在一些实施方案中，颗粒还包含结合或识别cd28的表面缀合的抗体或其片段或变体。2.抗独特型抗体在一些实施方案中，如本文所提供的与颗粒(例如珠)缀合的结合分子是与靶抗原受体(例如car)或其活性片段结合的抗独特型抗体或其抗原结合片段(“抗id”)。在某些实施方案中，结合分子是与car的抗原结合结构域结合的抗id。在特定实施方案中，car的抗原结合结构域包含scfv结构域。在一些实施方案中，结合分子是如下抗id，其在抗原结合结构域处与car结合，并且不结合car的将car的抗原结合结构域(例如scfv)与跨膜结构域连接起来的接头或间隔区。在一些实施方案中，抗id是特异性地识别与靶抗原结合的抗体的抗独特型抗体或抗原结合片段，所述靶抗原例如是与疾病或病症(例如癌症)的细胞或组织相关或在其上表达的靶抗原。在一些实施方案中，抗id是特异性地识别与靶抗原结合的靶抗体的抗独特型抗体或其抗原结合片段，所述抗原是或包括。在一些实施方案中，抗原是或包括αvβ6整合素(avb6整合素)、b细胞成熟抗原(bcma)、b7-h3、b7-h6、碳酸酐酶9(ca9，也称为caix或g250)、癌症-睾丸抗原、癌症/睾丸抗原1b(ctag，也称为ny-eso-1和lage-2)、癌胚抗原(cea)、细胞周期蛋白、细胞周期蛋白a2、c-c基序趋化因子配体1(ccl-1)、cd19、cd20、cd22、cd23、cd24、cd30、cd33、cd38、cd44、cd44v6、cd44v7/8、cd123、cd133、cd138、cd171、硫酸软骨素蛋白聚糖4(cspg4)、表皮生长因子蛋白(egfr)、iii型表皮生长因子受体突变(egfrviii)、上皮糖蛋白2(epg-2)、上皮糖蛋白40(epg-40)、肝配蛋白b2、肝配蛋白受体a2(epha2)、雌激素受体、fc受体样蛋白5(fcrl5；也称为fc受体同源物5或fcrh5)、胎儿乙酰胆碱受体(胎儿achr)、叶酸结合蛋白(fbp)、叶酸受体α、神经节苷脂gd2、o-乙酰化gd2(ogd2)、神经节苷脂gd3、糖蛋白100(gp100)、磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(gpc3)、g蛋白偶联受体5d(gprc5d)、her2/neu(受体酪氨酸激酶erb-b2)、her3(erb-b3)、her4(erb-b4)、erbb二聚体、人高分子量黑色素瘤相关抗原(hmw-maa)、乙型肝炎表面抗原、人白细胞抗原a1(hla-a1)、人白细胞抗原a2(hla-a2)、il-22受体α(il-22rα)、il-13受体α2(il-13rα2)、激酶插入结构域受体(kdr)、κ轻链、l1细胞粘附分子(l1-cam)、l1-cam的ce7表位、含有富亮氨酸重复序列的蛋白8家族成员a(lrrc8a)、路易斯y、黑色素瘤相关抗原(mage)-a1、mage-a3、mage-a6、mage-a10、间皮素(msln)、c-met、鼠类巨细胞病毒(cmv)、粘蛋白1(muc1)、muc16、自然杀伤细胞2族成员d(nkg2d)配体、黑色素a(mart-1)、神经细胞粘附分子(ncam)、癌胚胎抗原、优先表达的黑色素瘤抗原(prame)、孕酮受体、前列腺特异性抗原、前列腺干细胞抗原(psca)、前列腺特异性膜抗原(psma)、受体酪氨酸激酶样孤儿受体1(ror1)、存活蛋白、滋养层糖蛋白(tpbg，也称为5t4)、肿瘤相关糖蛋白72(tag72)、酪氨酸酶相关蛋白1(trp1，也称为tyrp1或gp75)、酪氨酸酶相关蛋白2(trp2，也称为多巴色素互变异构酶、多巴色素δ异构酶或dct)、血管内皮生长因子受体(vegfr)、血管内皮生长因子受体2(vegfr2)、wilms肿瘤1(wt-1)、病原体特异性或病原体表达的抗原、或与通用标签相关的抗原、和/或生物素化分子、和/或由hiv、hcv、hbv或其他病原体表达的分子。在一些实施方案中，受体靶向的抗原包括与b细胞恶性肿瘤相关的抗原，如许多已知b细胞标记中的任何一种。在一些实施方案中，所述抗原是或包括cd20、cd19、cd22、ror1、cd45、cd21、cd5、cd33、igκ、igλ、cd79a、cd79b或cd30。在一些实施方案中，抗id是特异性地识别靶抗体的抗独特型抗体或抗原结合片段，所述靶抗体结合ror1、b细胞成熟抗原(bcma)、碳酸酐酶9(caix)、her2/neu(受体酪氨酸激酶erbb2)、ll-cam、cd19、cd20、cd22、间皮素、cea和乙型肝炎表面抗原、抗叶酸受体、cd23、cd24、cd30、cd33、cd38、cd44、egfr、上皮糖蛋白2(epg-2)、上皮糖蛋白40(epg-40)、epha2、erb-b2、erb-b3、erb-b4、erbb二聚体、egfrviii、叶酸结合蛋白(fbp)、fcrl5、fcrh5、胎儿乙酰胆碱受体、gd2、gd3、hmw-maa、il-22r-α、il-13r-α2、激酶插入结构域受体(kdr)、κ轻链、路易斯y、l1细胞粘附分子(l1-cam)、黑色素瘤相关抗原(mage)-a1、mage-a3、mage-a6、优先表达的黑色素瘤抗原(prame)、存活蛋白、tag72、b7-h6、il-13受体α2(il-13ra2)、ca9、gd3、hmw-maa、cd171、g250/caix、hla-aimageal、hla-a2ny-eso-1、psca、叶酸受体-a、cd44v6、cd44v7/8、avb6整合素、8h9、ncam、vegf受体、5t4、胎儿achr、nkg2d配体、cd44v6、双重抗原、癌症-睾丸抗原、间皮素、鼠类cmv、粘蛋白1(muc1)、muc16、psca、nkg2d、ny-eso-1、mart-1、gp100、癌胚胎抗原、ror1、tag72、vegf-r2、癌胚抗原(cea)、前列腺特异性抗原、psma、her2/neu、雌激素受体、孕酮受体、肝配蛋白b2、cd123、c-met、gd-2、o-乙酰化gd2(ogd2)、ce7、wilms肿瘤1(wt-1)、细胞周期蛋白、细胞周期蛋白a2、ccl-1、cd138、或病原体特异性抗原。在一些实施方案中，抗id是特异性地识别靶抗cd19抗体部份的抗独特型抗体或抗原结合片段(“抗id”)。在一些实施方案中，所提供的抗体识别靶抗cd19抗体(其是sj25c1)或其抗原结合片段，或者是衍生自sj25c1的抗体或抗原结合片段。在一些实施方案中，所提供的抗体识别靶抗cd19抗体(其是fmc63)或其抗原结合片段，或者是衍生自fmc63的抗体或抗原结合片段。sj25c1是指针对表达人源cd19的nalm-1和-16细胞产生的小鼠单克隆igg1抗体(ling,n.r.,等人(1987).leucocytetypingiii.302)。sj25c1抗体包含seqidno:40-42分别所示的cdrh1、h2和h3，以及seqidno:43-45分别所示的cdrl1、l2和l3序列。所述sj25c1抗体包含含有seqidno:36的氨基酸序列的重链可变区(vh)和含有seqidno:37的氨基酸序列的轻链可变区(vl)。在一些实施方案中，靶抗体是sj25c1或衍生自sj25c1的抗体。在一些实施方案中，衍生自sj25c1”的抗体是包含以下的抗体或抗原结合片段：sj25c1的vh和/或vl、sj25c1的独特型、sj25c1的互补位、或sj25c1的一个或多个互补决定区(cdr)。在一些实施方案中，作为sj25c1或衍生自sj25c1的抗体的靶抗体是如下抗体或抗原结合片段，所述抗体或抗原结合片段包含sj25c1的由seqidno:36所示的vh或其与seqidno:36具有至少90％序列同一性的变体、和/或sj25c1的由seqidno:37所示的vl或其与seqidno:37具有至少90％序列同一性的变体。在一些实施方案中，抗体或抗原结合片段包含sj25c1的由seqidno:36所示的vh或其与seqidno:36具有至少90％序列同一性的变体、以及sj25c1的由seqidno:37所示的vl或其与seqidno:37具有至少90％序列同一性的变体。在一些实施方案中，抗体或抗原结合片段包含sj25c1的分别如seqidno:36和seqidno:37所示的vh和vl。在一些实施方案中，所述变体与seqidno:36和/或seqidno:37具有至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高的序列同一性。在一些实施方案中，作为sj25c1或衍生自sj25c1的抗体的靶抗体是如下抗体或抗原结合片段，所述抗体或抗原结合片段包含seqidno:36所示的sj25c1vh的一个或多个重链cdr(cdr-h)(如seqidno:40-42所示)和/或seqidno:37所示的sj25c1vl的一个或多个轻链cdr(cdr-l)(如seqidno:43-45所示)。在一些实施方案中，抗体或抗原结合片段包含sj25c1的cdr-h3(例如seqidno:42所示)和/或sj25c1的cdr-l3(例如seqidno:45所示)。在一些实施方案中，抗体或抗原结合片段包含sj25c1的cdr-h3和cdr-l3(例如分别如seqidno:42和seqidno:43所示)。在一些实施方案中，抗体或抗原结合片段包含sj25c1的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3(例如分别如seqidno:40、41、42所示)中的一个或多个和/或sj25c1的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3(例如分别如seqidno:43、44、45所示)中的一个或多个。在一些实施方案中，抗体或抗原结合片段包含sj25c1的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3(例如分别如seqidno:40、41、42所示)和/或sj25c1的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3(例如分别如seqidno:43、44、45所示)。在一些实施方案中，抗体或抗原结合片段包含sj25c1的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3(例如分别如seqidno:40、41、42所示)以及sj25c1的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3(例如分别如seqidno:43、44、45所示)。在一些实施方案中，抗体或抗原结合片段包含抗原结合片段，例如抗原结合的片段(fab)、f(ab’)2、fab’、可变的片段(fv)或单链fv(scfv)。参见例如bejcek,b.e.等人(1995).cancerresearch.55(11):2346-2351。fmc63是针对表达人源cd19的jvm3细胞产生的小鼠单克隆igg1抗体(nicholson.等人(1997).molecularimmunology.34(16-17):1157-1165)。fmc63抗体包含分别如seqidno:46-48所示的cdrh1、h2和h3序列，以及分别如seqidno:49-51所示的cdrl1、l2和l3序列。fmc63抗体包含含有seqidno:38的氨基酸序列的重链可变区(vh)和含有seqidno:39的氨基酸序列的轻链可变区(vl)。在一些实施方案中，靶抗体是fmc63或源自fmc63的抗体。在一些实施方案中，衍生自fmc63的抗体是包含以下的抗体或抗原结合片段：fmc63的vh和/或vl、fmc63的独特型、fmc63的互补位、或fmc63的一个或多个互补决定区(cdr)。在一些实施方案中，作为fmc63或衍生自fmc63的抗体的靶抗体是如下抗体或抗原结合片段，所述抗体或抗原结合片段包含fmc63的由seqidno:38所示的vh或其与seqidno:38具有至少90％序列同一性的变体、和/或fmc63的由seqidno:39所示的vl或其与seqidno:39具有至少90％序列同一性的变体。在一些实施方案中，抗体或抗原结合片段包含fmc63的由seqidno:38所示的vh或其与seqidno:38具有至少90％序列同一性的变体、以及fmc63的由seqidno:39所示的vl或其与seqidno:39具有至少90％序列同一性的变体。在一些实施方案中，抗体或抗原结合片段包含fmc63的分别如seqidno:38和39所示的vh和vl。在一些实施方案中，所述变体与seqidno:38和/或seqidno:39具有至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高的序列同一性在一些实施方案中，作为fmc63或衍生自fmc63的抗体的靶抗体是如下抗体或抗原结合片段，所述抗体或抗原结合片段包含seqidno:38所示的fmc63vh的一个或多个重链cdr(cdr-h)(如seqidno:46-48所示)和/或seqidno:39所示的fmc63vl的一个或多个轻链cdr(cdr-l)(如seqidno:49-51所示)。在一些实施方案中，作为fmc63或衍生自fmc63的抗体的靶抗体是如下抗体或抗原结合片段，所述抗体或抗原结合片段包含fmc63的cdr-h3(例如seqidno:48所示)和/或fmc63的cdr-l3(例如seqidno:51所示)。在一些实施方案中，抗体或抗原结合片段包含fmc63的cdr-h3(例如seqidno:48所示)和cdr-l3(例如seqidno:51所示)。在一些实施方案中，作为fmc63或衍生自fmc63的抗体的靶抗体是如下抗体或抗原结合片段，所述抗体或抗原结合片段包含fmc63的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3(例如分别如seqidno:46、47、48所示)中的一个或多个和/或fmc63的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3(例如分别如seqidno:49、50、51所示)中的一个或多个。在一些实施方案中，作为fmc63或衍生自fmc63的抗体的靶抗体是如下抗体或抗原结合片段，所述抗体或抗原结合片段包含fmc63的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3(例如分别如seqidno:46、47、48所示)和/或fmc63的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3(例如分别如seqidno:49、50、51所示)。在一些实施方案中，作为fmc63或衍生自fmc63的抗体的靶抗体是如下抗体或抗原结合片段，所述抗体或抗原结合片段包含fmc63的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3(例如分别如seqidno:46、47、48所示)以及fmc63的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3(例如分别如seqidno:49、50、51所示)。在一些实施方案中，抗体或抗原结合片段包含抗原结合片段，例如抗原结合的片段(fab)、f(ab’)2、fab’、可变的片段(fv)或单链fv(scfv)。在一些实施方案中，所提供的抗独特型抗体包括与衍生自sj25c1或fmc63的可变结构域(fv)(如单链fv(scfv))特异性地结合的抗体。在一些实施方案中，抗独特型抗体特异性地结合fv的特定表位或区域，通常是包含一个或多个互补决定区的表位或区域。在一些实施方案中，抗独特型抗体特异性地结合与fv互补位重叠的表位或区域。在一些实施方案中，所提供的抗独特型抗体包括与抗cd19部份特异性地结合的那些抗体，所述抗cd19部份衍生自sj25c1或fmc63，被包含作为靶嵌合抗原受体(car)的细胞外结构域的部分。在一些实施方案中，靶car包含抗原结合部分，所述抗原结合部分含有sj25c1或fmc63抗体分子或者sj25c1或fmc63抗体的抗原结合片段或部分。在一些实施方案中，靶car包括抗原结合结构域，所述抗原结合结构域是从抗体sj25c1或fmc63的vh和vl链衍生的scfv。在一些实施方案中，提供了抗独特型抗体，其特异性地结合含有从抗体sj25c1或fmc63衍生的scfv的抗cd19car。car的示例性特征在下面进一步描述。本文的术语“抗体”是以最广义使用，并且包括多克隆和单克隆抗体，包括完整抗体和功能性(抗原结合)抗体片段，包括抗原结合的片段(fab)片段、f(ab')2片段、fab'片段、fv片段、重组igg(rigg)片段、单链抗体片段(包括单链可变片段(scfv))和单结构域抗体(例如，sdab、sdfv、纳米抗体)片段。所述术语涵盖免疫球蛋白的基因工程化的和/或以其他方式修饰的形式，如胞内抗体、肽体(peptibody)、嵌合抗体、全人抗体、人源化抗体和异缀合抗体(heteroconjugateantibody)、多特异性(例如，双特异性)抗体、双抗体、三抗体和四抗体、串联二-scfv、串联三-scfv。除非另有说明，否则术语“抗体”应当理解为涵盖其功能性抗体片段。所述术语还涵盖完整或全长抗体，包括任何类别或亚类(包括igg及其亚类、igm、ige、iga和igd)的抗体。术语“抗独特型抗体”是指特异性地识别、特异性地靶向和/或特异性地结合抗体的独特位(如抗原结合片段)的抗体(包括其抗原结合片段)。抗体的独特位可以包括但不必限于在抗体的一个或多个互补决定区(cdr)、抗体的可变区、和/或此类可变区和/或此类cdr的局部部分或部分、和/或前述的任何组合内的残基。cdr可以是选自以下中的一个或多个：cdr-h1、cdr-h2、cdr-h3、cdr-l1、cdr-l2、和cdr-l3。抗体的可变区可以是重链可变区、轻链可变区、或重链可变区和轻链可变区的组合。抗体的重链可变区和/或轻链可变区的部分片段或部分可以是如下片段，所述片段包括在抗体的重链可变区或轻链可变区内的2个或更多个、5个或更多个、或10个或更多个连续氨基酸，例如从或从约2个至100个、5个至100个、10个至100个、2个至50个、5个至50个、或10个至50个连续氨基酸；所述独特位可以包括多个不连续的氨基酸延伸段(stretch)。抗体的重链可变区和轻链可变区的部分片段可以是如下片段，所述片段包括在可变区内的2个或更多个、5个或更多个、或10个或更多个连续氨基酸，例如从或从2个至00个、5个至100个、10个至100个、2个至50个、5个至50个、或10个至50个连续氨基酸，并且在一些实施方案中含有一个或多个cdr或cdr片段。cdr片段可以是在cdr内的连续或非连续的2个或更多个、或5个或更多个氨基酸。因此，抗体的独特位可以是在抗体的重链可变区或轻链可变区内的、含有一个或多个cdr或一个或多个cdr片段的从或从约2个至100个、5个至100个、10个至100个、2个至50个、5个至50个、或10个至50个连续氨基酸。在另一个实施方案中，独特位可以是位于抗体的可变区(例如cdr位点)的单个氨基酸。在一些实施方案中，独特位是抗体的可变部分内的任何单一抗原决定簇或表位。在一些情况下，它可以与抗体的实际抗原结合位点重叠，并且在一些情况下，它可以包含在抗体的抗原结合位点之外的可变区序列。在一些实施方案中，抗体的单独独特位的集合被称为这种抗体的“独特型”。术语“互补决定区”和“cdr”与“高变区”或“hvr”同义，在本领域中是已知的，指代抗体可变区内的氨基酸的非连续序列，其赋予抗原特异性和/或结合亲和力。通常，在每个重链可变区中有三个cdr(cdr-h1、cdr-h2、cdr-h3)，并且在每个轻链可变区中有三个cdr(cdr-l1、cdr-l2、cdr-l3)。“框架区”和“fr”在本领域中是已知的，指代重链和轻链的可变区的非cdr部分。通常，在每个全长重链可变区中有四个fr(fr-h1、fr-h2、fr-h3和fr-h4)，并且在每个全长轻链可变区中有四个fr(fr-l1、fr-l2、fr-l3和fr-l4)。给定cdr或fr的精确氨基酸序列边界可以使用许多熟知的方案中的任何一种容易地确定，所述方案包括以下文献中所描述的那些：kabat等人(1991),“sequencesofproteinsofimmunologicalinterest,”第5版publichealthservice,nationalinstitutesofhealth,贝塞斯达(bethesda),马里兰州(md)(“kabat”编号方案)；al-lazikani等人,(1997)jmb273,927-948(“chothia”编号方案)；maccallum等人,j.mol.biol.262:732-745(1996)；“antibody-antigeninteractions:contactanalysisandbindingsitetopography,”j.mol.biol.262,732-745.(“contact”编号方案)；lefrancmp等人,“imgtuniquenumberingforimmunoglobulinandtcellreceptorvariabledomainsandigsuperfamilyv-likedomains,”devcompimmunol,2003年1月；27(1):55-77(“imgt”编号方案)；以及honeggera和plückthuna,“yetanothernumberingschemeforimmunoglobulinvariabledomains:anautomaticmodelingandanalysistool,”jmolbiol,2001年6月8日；309(3):657-70(“aho”编号方案)。给定cdr或fr的边界可能取决于用于鉴定的方案而变化。例如，kabat方案是基于结构比对，而chothia方案是基于结构信息。kabat和chothia方案的编号都是基于最常见的抗体区域序列长度，其中通过插入字母提供插入(例如“30a”)并且在一些抗体中出现缺失。这两种方案将某些插入和缺失(“插入缺失(indel)”)放置在不同的位置，从而产生不同的编号。contact方案是基于对复杂晶体结构的分析，并且在许多方面与chothia编号方案相似。下表1列出了分别通过kabat、chothia和contact方案鉴定的cdr-l1、cdr-l2、cdr-l3以及cdr-h1、cdr-h2、cdr-h3的示例性位置边界。对于cdr-h1，使用kabat和chothia两种编号方案列出了残基编号。fr位于cdr之间，例如fr-l1位于cdr-l1与cdr-l2之间，依此类推。应注意，因为所示的kabat编号方案在h35a和h35b处放置插入，所以当使用所示的kabat编号惯例进行编码时chothiacdr-h1环的末端取决于环的长度而在h32与h34之间变化。表11-kabat等人(1991),“sequencesofproteinsofimmunologicalinterest,”第5版publichealthservice,nationalinstitutesofhealth,bethesda,md2-al-lazikani等人,(1997)jmb273,927-948因此，除非另有规定，否则应当理解给定抗体或其区域(如其可变区)的“cdr”或“互补决定区”或单独指定的cdr(例如，cdr-h1、cdr-h2)涵盖如由任何上述方案所定义的一个(或特定的)互补决定区。例如，在声明特定的cdr(例如，cdr-h3)含有给定vh或vl氨基酸序列中的相应cdr的氨基酸序列的情况下，应理解，这样的cdr具有在可变区内的相应cdr(例如，cdr-h3)的序列，如由任何上述方案所定义的。在一些实施方案中，规定了指定的cdr序列。同样，除非另有规定，否则应当理解给定抗体或其区域(如其可变区)的fr或单独指定的一个或多个fr(例如，fr-h1、fr-h2)涵盖如由任何已知方案所定义的一个(或特定的)框架区。在一些情形中，规定了用于鉴定特定的cdr、fr或者fr或cdr的方案，如通过kabat、chothia或contact方法定义的cdr。在其他情况下，给出了cdr或fr的特定氨基酸序列。术语“可变区”或“可变结构域”是指抗体重链或轻链的参与抗体与抗原的结合的结构域。天然抗体的重链和轻链的可变结构域(分别为vh和vl)通常具有相似的结构，每个结构域包含四个保守的框架区(fr)和三个cdr。(参见例如，kindt等人kubyimmunology,第6版,w.h.freemanandco.,第91页(2007))。单个vh或vl结构域可以足以赋予抗原结合特异性。此外，可以使用来自结合特定抗原的抗体的vh或vl结构域分离结合所述抗原的抗体，以分别筛选互补的vl或vh结构域的文库。参见例如，portolano等人,j.immunol.150:880-887(1993)；clarkson等人,nature352:624-628(1991)。所提供的抗体包括抗体片段。“抗体片段”是指不同于完整抗体的分子，其包含完整抗体的结合完整抗体所结合的抗原的一部分。抗体片段的例子包括但不限于fv、fab、fab'、fab'-sh、f(ab')2；双抗体；线性抗体；单链抗体分子(例如scfv)；和由抗体片段形成的多特异性抗体。在特定实施方案中，所述抗体是包含可变重链区和/或可变轻链区的单链抗体片段，如scfv。单结构域抗体是包含抗体的全部或部分重链可变结构域或者全部或部分轻链可变结构域的抗体片段。在某些实施方案中，单结构域抗体是人单结构域抗体。抗体片段可以通过多种技术制备，包括但不限于完整抗体的蛋白水解消化以及通过重组宿主细胞产生。在一些实施方案中，所述抗体是重组产生的片段，如包含天然不存在的排列的片段(如具有通过合成接头(例如，肽接头)连接的两个或更多个抗体区或链的那些)，和/或可以不通过酶消化天然存在的完整抗体产生的片段。在一些方面，抗体片段是scfv。“人源化”抗体是如下抗体，其中所有或基本上所有cdr氨基酸残基源自非人cdr并且所有或基本上所有fr氨基酸残基源自人fr。人源化抗体任选地可以包括源自人抗体的抗体恒定区的至少一部分。非人抗体的“人源化形式”是指所述非人抗体的变体，其经历人源化以通常降低对人的免疫原性，同时保留亲本非人抗体的特异性和亲和力。在一些实施方案中，人源化抗体中的一些fr残基被来自非人抗体(例如，衍生出cdr残基的抗体)的相应残基取代，例如以恢复或改善抗体特异性或亲和力。所提供的抗体包括人抗体。“人抗体”是具有与人或人细胞或者利用人抗体库或其他人抗体编码序列(包括人抗体文库)的非人来源产生的抗体的氨基酸序列对应的氨基酸序列的抗体。所述术语不包括包含非人抗原结合区的非人抗体的人源化形式，如所有或基本上所有cdr都是非人的那些。人抗体可以通过将免疫原给予转基因动物来制备，所述转基因动物已被修饰以响应于抗原激发产生完整人抗体或具有人可变区的完整抗体。此类动物通常含有人免疫球蛋白基因座的全部或一部分，其替代内源免疫球蛋白基因座，或者其存在于染色体外或随机整合至动物染色体中。在此类转基因动物中，通常已经使内源免疫球蛋白基因座失活。人抗体也可以衍生自含有衍生自人库的抗体编码序列的人抗体文库，包括噬菌体展示和无细胞文库。所提供的抗体包括单克隆抗体，包括单克隆抗体片段。如本文所用的术语“单克隆抗体”是指从基本上同质抗体的群体(即，构成所述群体的单独抗体是相同的，但含有天然存在的突变或在单克隆抗体制剂的产生期间产生的可能变体除外，此类变体通常以少量存在)获得或在所述群体内的抗体。与通常包括针对不同表位的不同抗体的多克隆抗体制剂相反，单克隆抗体制剂的每种单克隆抗体针对抗原上的单个表位。所述术语不应解释为需要通过任何特定方法产生抗体。单克隆抗体可以通过多种技术制备，包括但不限于从杂交瘤生成、重组dna方法、噬菌体展示和其他抗体展示方法。a.sj25c1衍生的抗体在一些实施方案中，抗独特型抗体对靶抗cd19抗体具有特异性，所述靶抗cd19抗体是或源自抗体sj25c1或其抗原结合片段。在一些实施方案中，抗独特型抗体或其抗原结合片段包括重链可变(vh)区，所述重链可变区与seqidno:52所示的vh区氨基酸序列具有至少90％的序列同一性，例如与其具有至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％的序列同一性。在一些实施方案中，抗独特型抗体或其抗原结合片段包括重链可变(vh)区，所述重链可变区包含具有seqidno:53或54所示氨基酸序列的重链互补决定区3(cdr-h3)和/或在seqidno:52所示的重链可变(vh)序列中所包含的cdr-h3。在一些任何此类实施方案中，所述vh区包括包含seqidno:55、56、57或58所示氨基酸序列的重链互补决定区1(cdr-h1)、和/或在seqidno:52所示的vh序列内所包含的cdr-h1；和/或包含seqidno:59、60、61或62所示氨基酸序列的重链互补决定区2(cdr-h2)、和/或在seqidno:52所示的vh序列中所包含的cdr-h2。在一些实施方案中，抗独特型抗体或其抗原结合片段包括包含重链互补决定区1(cdr-h1)、cdr-h2和cdr-h3的重链可变(vh)区，其中所述cdr-h1包含seqidno:55、56、57或58所示的氨基酸序列；所述cdr-h2包含seqidno:59、60、61或62所示的氨基酸序列；和/或所述cdr-h3包含seqidno:53或54所示的氨基酸序列。在一些实施方案中，提供了抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包括具有seqidno:55、56、57或58所示氨基酸序列的cdr-h1；具有seqidno:59、60、61或62所示氨基酸序列的cdr-h2；以及具有seqidno:53或54所示氨基酸序列的cdr-h3。在一些实施方案中，抗独特型抗体或其抗原结合片段包括重链互补决定区1(cdr-h1)、cdr-h2和cdr-h3，其分别包含在seqidno:52所示的vh区氨基酸序列内所包含的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3的氨基酸序列。在一些任何此类实施方案中，所述vh区含有框架区1(fr1)、fr2、fr3和/或fr4序列，其分别与seqidno:52所示氨基酸序列的fr1、fr2、fr3和/或fr4具有至少90％的序列同一性。在一些实施方案中，所述vh区含有框架区1(fr1)、fr2、fr3和/或fr4序列，其分别与seqidno:52所示氨基酸序列的fr1、fr2、fr3和/或fr4具有至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、98％、99％的序列同一性。在一些实施方案中，所述vh区含有框架区1(fr1)、fr2、fr3和fr4序列，其分别与seqidno:52所示氨基酸序列的fr1、fr2、fr3和fr4具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、98％、99％的序列同一性。在一些任何此类实施方案中，所述vh区具有seqidno:52所示的氨基酸序列。在一些任何此类实施方案中，抗独特型抗体或抗原结合片段是仅重链、仅vh和/或不包括vl或其抗原结合部分，和/或抗独特型抗体或片段的抗原结合位点包括来自仅重链的残基和/或不包括来自轻链的残基。在一些任何此类实施方案中，抗独特型抗体或片段不包含轻链可变(vl)区，不包含cdr-l1、cdr-l2和/或cdr-l3，和/或是含有仅vh区的单结构域抗体(sdab)。在一些实施方案中，抗体或片段是仅含有来自所描述的任何一种的vh区的sdab。在含有任何上述vh区序列的任何抗独特型抗体或片段的一些实施方案中，所述抗独特型抗体或片段还包含轻链可变(vl)区。在一些此类实施方案中，所述vl区与seqidno:63所示的vl区氨基酸序列具有至少90％的序列同一性，例如与seqidno:63所示的vl区氨基酸序列具有至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的序列同一性。在一些任何此类实施方案中，所述vl区包含含有seqidno:64或65所示氨基酸序列的轻链互补决定区3(cdr-l3)。在一些任何此类实施方案中，所述vl区包含具有seqidno:64或65所示氨基酸序列的轻链互补决定区3(cdr-l3)。在一些任何此类实施方案中，所述vl区包含含有seqidno:66或67所示氨基酸序列的轻链互补决定区1(cdr-l1)、和/或在seqidno:63所示的vl序列内所包含的cdr-l1；和/或包含seqidno:68或69所示氨基酸序列的轻链互补决定区2(cdr-l2)、和/或在seqidno:63所示的vl序列中所包含的cdr-l2。在一些任何此类实施方案中，所述vl区包含具有seqidno:66或67所示氨基酸序列的轻链互补决定区1(cdr-l1)、和/或在seqidno:63所示的vl序列内所包含的cdr-l1；和/或具有seqidno:68或69所示氨基酸序列的轻链互补决定区2(cdr-l2)、和/或在seqidno:63所示的vl序列中所包含的cdr-l2。在一些任何此类实施方案中，所述vl区包含含有seqidno:66或67所示氨基酸序列的cdr-l1、含有seqidno:68或69所示氨基酸序列的cdr-l2；和含有seqidno:64或65所示氨基酸序列的cdr-l3。在一些任何此类实施方案中，所述vl区包含cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3，其分别包含在seqidno:63所示的vl区氨基酸序列内所包含的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3的氨基酸序列。在一些任何此类实施方案中，所述vl区包含框架区1(fr1)、fr2、fr3和/或fr4，其分别与seqidno:63所示氨基酸序列的fr1、fr2、fr3和/或fr4具有至少90％的序列同一性。在一些实施方案中，所述vl区包含框架区1(fr1)、fr2、fr3和/或fr4序列，其分别与seqidno:63所示氨基酸序列的fr1、fr2、fr3和/或fr4具有至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、98％、99％的序列同一性。在一些实施方案中，所述vl区包含框架区1(fr1)、fr2、fr3和fr4序列，其分别与seqidno:63所示氨基酸序列的fr1、fr2、fr3和fr4具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、98％、99％的序列同一性。在一些任何此类实施方案中，所述vl区具有seqidno:63所示的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗独特型抗体或其抗原结合片段包含在seqidno:52所示的vh区氨基酸序列内所包含的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3序列的氨基酸序列；和/或包含在seqidno:63所示的轻链可变(vl)区氨基酸序列内所包含的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗独特型抗体或其抗原结合片段包括vh和vl区，所述vh和vl区具有分别与seqidno:52和63具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，提供了抗独特型抗体或其抗原结合片段，其包括分别具有seqidno:52和63所示氨基酸序列的vh和vl区。在一些任何此类实施方案中，所述vh和vl区分别包括seqidno:52和63的氨基酸序列。在一些实施方案中，对抗体sj25c1或其抗原结合片段具有特异性的抗独特型抗体是单链抗体片段，如scfv或双抗体。在一些实施方案中，单链抗体包括连接两个抗体结构域或区域(如可变重链(vh)区和可变轻链(vl)区)的一个或多个接头。接头通常是肽接头，例如柔性和/或可溶性肽接头。接头包括富含甘氨酸和丝氨酸和/或在一些情况下苏氨酸的那些接头。在一些实施方案中，接头还包括带电荷的残基(如赖氨酸和/或谷氨酸)，其可以改善溶解性。在一些实施方案中，接头还包括一个或多个脯氨酸。在一些实施方案中，抗独特型抗体是完整抗体或全长抗体。在一些实施方案中，抗id可以含有免疫球蛋白恒定区的至少一部分，如一个或多个恒定区结构域。在一些实施方案中，恒定区包括轻链恒定区(cl)和/或重链恒定区1(ch1)。在一些实施方案中，抗id包括ch2和/或ch3结构域，如fc区。在一些实施方案中，fc区是人igg(如igg1或igg4)的fc区。在一些实施方案中，抗独特型抗体含有seqidno:115所示的ch结构域或展现出与seqidno:115至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗独特型抗体含有seqidno:118所示的cl结构域或其部分、或展现出与seqidno:118至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的氨基酸序列或其部分。在一些实施方案中，对sj25c1具有特异性的抗独特型抗体包含seqidno:116所示的重链序列、或展现出与seqidno:116至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的序列，和/或包含seqidno:119所示的轻链序列、或展现出与seqidno:119至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的序列。在一些实施方案中，对sj25c1具有特异性的抗独特型抗体包含seqidno:116所示的重链序列和/或seqidno:119所示的轻链序列。在一些实施方案中，抗独特型抗体的重链和/或轻链还包含信号肽。在一些情况下，信号肽具有seqidno:117或seqidno:120所示的序列。在一些实施方案中，抗独特型抗体是抗原结合片段。在一些实施方案中，抗原结合片段选自抗原结合的片段(fab)片段、f(ab')2片段、fab’片段、fv片段、单链可变片段(scfv)或单结构域抗体。因此，提供了单链抗体片段(如scfv和双抗体)，特别是人单链片段，通常包含连接两个抗独特型抗体结构域或区域(如vh和vl结构域)的一个或多个接头。接头通常是肽接头，例如柔性和/或可溶性肽接头，例如富含甘氨酸和丝氨酸的一种肽接头。在一些方面，富含甘氨酸和丝氨酸(和/或苏氨酸)的接头包括至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的此类氨基酸。在一些实施方案中，它们包括至少为或约50％、55％、60％、70％或75％的甘氨酸、丝氨酸和/或苏氨酸。在一些实施方案中，接头基本上完全由甘氨酸、丝氨酸和/或苏氨酸组成。接头的长度通常在或在约5个与50个氨基酸之间，通常在或在约10个与为或约30个之间，例如10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个、20个、21个、22个、23个、24个、25个、26个、27个、28个、29个或30个，并且在一些例子中长度在10个与25个氨基酸之间。示例性接头包括具有序列gggs(3gs；seqidno:70)或ggggs(4gs；seqidno:27)的各种数量重复的接头，例如在这样的序列的2个、3个、4个与5个重复之间。示例性接头包括具有seqidno:71(ggggsggggsggggs)所示序列或由其组成的那些接头。示例性接头还包括具有seqidno:72(gstsgsgkpgsgegstkg)所示序列或由其组成的那些接头。在一些实施方案中，抗独特型抗体包括分离的抗体。在一些实施方案中，抗id是人源化的、重组的和/或单克隆的。在一些实施方案中，抗id是人的。b.fmc63衍生的抗体在一些实施方案中，抗独特型抗体对靶抗cd19抗体具有特异性，所述靶抗cd19抗体是或源自抗体fmc63或其抗原结合片段。在一些实施方案中，抗独特型抗体或其抗原结合片段包括重链可变(vh)区，所述重链可变区与seqidno:73或74所示的vh区氨基酸序列具有至少90％的序列同一性，例如与其具有至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％的序列同一性。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包括vh区，所述vh区具有：包含gyx3fx5x6yx8mx10(seqidno:95)的氨基酸序列的重链互补决定区1(cdr-h1)，其中x3是t或s，x5是t或s，x6是d或r，x8是y或w，并且x10是k或n；和/或包含wigx4ix6px8x9x10x11tx13x14nqx17fkx20(seqidno:96)的氨基酸序列的重链互补决定区2(cdr-h2)，其中x4是d或m，x6是n或h，x8是n或s，x9是n或d，x10是g或s，x11是g或e，x13是d或r，x14是y或l，x17是n或k，并且x20是g或d；和/或包含ax2x3x4x5x6x7x8x9x10x11x12x13x14x15(seqidno:97)的氨基酸序列的重链互补决定区3(cdr-h3)，其中x2是r或s，x3是e或i，x4是g或y，x5是n或y，x6是n或e，x7是y或空，x8是g或空，x9是s或空，x10是r或空，x11是d或空，x12是a或空，x13是m或空，x14是d或e，并且x15是y或a。在一些实施方案中，抗独特型抗体或其抗原结合片段包括重链可变(vh)区，所述重链可变区包含具有seqidno:75、76、77或78所示氨基酸序列的重链互补决定区3(cdr-h3)和/或在seqidno:73或74所示的重链可变(vh)序列内所包含的cdr-h3。在一些任何此类实施方案中，所述vh区包括包含seqidno:79、80、81、82、83、84、85或86所示氨基酸序列的重链互补决定区1(cdr-h1)、和/或在seqidno:73或74所示的vh序列内所包含的cdr-h1；和/或包含seqidno:87、88、89、90、91、92、93或94所示氨基酸序列的重链互补决定区2(cdr-h2)、和/或在seqidno:73或74所示的vh序列中所包含的cdr-h2。在一些实施方案中，抗独特型抗体或其抗原结合片段包括包含重链互补决定区1(cdr-h1)、cdr-h2和cdr-h3的重链可变(vh)区，其中所述cdr-h1包含seqidno:79、80、81、82、83、84、85或86所示的氨基酸序列；所述cdr-h2包含seqidno:87、88、89、90、91、92、93或94所示的氨基酸序列；和/或所述cdr-h3包含seqidno:75、76、77或78所示的氨基酸序列。在一些实施方案中，提供了抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包括具有seqidno:79、80、81、82、83、84、85、或86所示氨基酸序列的cdr-h1；具有seqidno:87、88、89、90、91、92、93、或94所示氨基酸序列的cdr-h2；以及具有seqidno:75、76、77、或78所示氨基酸序列的cdr-h3。在一些实施方案中，抗独特型抗体或其抗原结合片段包括重链互补决定区1(cdr-h1)、cdr-h2和cdr-h3，其分别包含在seqidno:73或74所示的vh区氨基酸序列内所包含的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗独特型抗体或其抗原结合片段包括seqidno:79、81、82、83所示的cdr-h1；seqidno:87、89、90、91所示的cdr-h2；和/或seqidno:71或77所示的cdr-h3。在一些实施方案中，抗独特型抗体或其抗原结合片段包括seqidno:80、84、85、86所示的cdr-h1；seqidno:88、92、93、94所示的cdr-h2；和/或分别如seqidno:76、78所示的cdr-h3。在一些任何此类实施方案中，所述vh区含有框架区1(fr1)、fr2、fr3和/或fr4序列，其分别与seqidno:73或74所示氨基酸序列的fr1、fr2、fr3和/或fr4具有至少90％的序列同一性。在一些实施方案中，所述vh区含有框架区1(fr1)、fr2、fr3和/或fr4序列，其分别与seqidno:73或74所示氨基酸序列的fr1、fr2、fr3和/或fr4具有至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、98％、99％的序列同一性。在一些实施方案中，所述vh区含有框架区1(fr1)、fr2、fr3和fr4序列，其分别与seqidno:73或74所示氨基酸序列的fr1、fr2、fr3和fr4具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、98％、99％的序列同一性。在一些任何此类实施方案中，所述vh区具有seqidno:73或74所示的氨基酸序列。在一些任何此类实施方案中，抗独特型抗体或抗原结合片段是仅重链、仅vh和/或不包括vl或其抗原结合部分，和/或抗独特型抗体或片段的抗原结合位点包括来自仅重链的残基和/或不包括来自轻链的残基。在一些任何此类实施方案中，抗独特型抗体或片段不包含轻链可变(vl)区，不包含cdr-l1、cdr-l2和/或cdr-l3，和/或是含有仅vh区的单结构域抗体(sdab)。在一些实施方案中，抗体或片段是仅含有来自所描述的任何一种的vh区的sdab。在含有任何上述vh区序列的任何抗独特型抗体或片段的一些实施方案中，所述抗独特型抗体或片段还包含轻链可变(vl)区。在一些此类实施方案中，所述vl区与seqidno:98或99所示的vl区氨基酸序列具有至少90％的序列同一性，例如与seqidno:98或99所示的vl区氨基酸序列具有至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的序列同一性。在一些实施方案中，提供了包括vh区的抗体或其抗原结合片段，所述vh区具有：包含x1ax3x4x5x6x7x8yx10x11wy(seqidno:112)的氨基酸序列的轻链互补决定区1(cdr-l1)，其中x1是s或r，x3是s或r，x4是s或g，x5是g或n，x6是v或i，x7是i或h，x8是n或空，x10是m或l，并且x11是y或a；和/或包含x1x2x3yx5x6x7x8lax11(seqidno:113)的氨基酸序列的轻链互补决定区2(cdr-l2)，其中x1是p或l，x2是w或l，x3是i或v，x5是l或n，x6是t或a，x7是s或k，x8是n或t，并且x11是s或d；和/或包含qx2x3x4x5x6px8t(seqidno:114)的氨基酸序列的轻链互补决定区3(cdr-l3)，其中x2是q或h，x3是w或f，x4是s或w，x5是s或w，x6是n或t，并且x8是l或y。在一些任何此类实施方案中，所述vl区包含含有seqidno:100、101、102或103所示氨基酸序列的轻链互补决定区3(cdr-l3)。在一些任何此类实施方案中，所述vl区包含具有seqidno:100、101、102或103所示氨基酸序列的轻链互补决定区3(cdr-l3)。在一些任何此类实施方案中，所述vl区包含含有seqidno:104、105、106或107所示氨基酸序列的轻链互补决定区1(cdr-l1)、和/或在seqidno:98或99所示的vl序列内所包含的cdr-l1；和/或包含seqidno:108、109、110或111所示氨基酸序列的轻链互补决定区2(cdr-l2)、和/或在seqidno:98或99所示的vl序列中所包含的cdr-l2。在一些任何此类实施方案中，所述vl区包含具有seqidno:104、105、106或107所示氨基酸序列的轻链互补决定区1(cdr-l1)、和/或在seqidno:98或99所示的vl序列内所包含的cdr-l1；和/或具有seqidno:108、109、110或111所示氨基酸序列的轻链互补决定区2(cdr-l2)、和/或在seqidno:98或99所示的vl序列中所包含的cdr-l2。在一些任何此类实施方案中，所述vl区包含含有seqidno:104、105、106或107所示氨基酸序列的cdr-l1、含有seqidno:108、109、110或111所示氨基酸序列的cdr-l2；和含有seqidno:100、101、102或103所示氨基酸序列的cdr-l3。在一些任何此类实施方案中，所述vl区包含cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3，其分别包含在seqidno:98或99所示的vl区氨基酸序列内所包含的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗独特型抗体或其抗原结合片段包括seqidno:104或106所示的cdr-l1；seqidno:108或110所示的cdr-l2；和/或seqidno:100或101所示的cdr-l3。在一些实施方案中，抗独特型抗体或其抗原结合片段包括seqidno:105或07所示的cdr-l1；seqidno:109或111所示的cdr-l2；和/或分别如seqidno:102或103所示的cdr-l3。在一些任何此类实施方案中，所述vl区包含框架区1(fr1)、fr2、fr3和/或fr4，其分别与seqidno:98或99所示氨基酸序列的fr1、fr2、fr3和/或fr4具有至少90％的序列同一性。在一些实施方案中，所述vl区包含框架区1(fr1)、fr2、fr3和/或fr4序列，其分别与seqidno:98或99所示氨基酸序列的fr1、fr2、fr3和/或fr4具有至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、98％、99％的序列同一性。在一些实施方案中，所述vl区包含框架区1(fr1)、fr2、fr3和fr4序列，其分别与seqidno:98或99所示氨基酸序列的fr1、fr2、fr3和fr4具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、98％、99％的序列同一性。在一些任何此类实施方案中，所述vl区具有seqidno:98或99所示的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗独特型抗体或其抗原结合片段包含在seqidno:73或74所示的vh区氨基酸序列内所包含的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3序列的氨基酸序列；和/或包含在seqidno:98或99所示的轻链可变(vl)区氨基酸序列内所包含的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗独特型抗体或其抗原结合片段包括：具有与seqidno:73或74具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的vh区，以及具有与seqidno:98或99具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的vl区。在一些实施方案中，提供了抗独特型抗体或其抗原结合片段，其包括具有seqidno:73或74所示氨基酸序列的vh区、以及具有seqidno:98或99所示氨基酸序列的vl区。在一些实施方案中，所提供的抗体含有seqidno:73所示的vh区、以及seqidno:98所示的vl区。在一些实施方案中，所提供的抗体含有seqidno:74所示的vh区、以及seqidno:99所示的vl区。在一些实施方案中，抗独特型抗体是单链抗体片段，如scfv或双抗体。在一些实施方案中，单链抗体包括连接两个抗体结构域或区域(如可变重链(vh)区和可变轻链(vl)区)的一个或多个接头。接头通常是肽接头，例如柔性和/或可溶性肽接头。接头包括富含甘氨酸和丝氨酸和/或在一些情况下苏氨酸的那些接头。在一些实施方案中，接头还包括带电荷的残基(如赖氨酸和/或谷氨酸)，其可以改善溶解性。在一些实施方案中，接头还包括一个或多个脯氨酸。在一些实施方案中，抗独特型抗体是完整抗体或全长抗体。在一些实施方案中，抗id可以含有免疫球蛋白恒定区的至少一部分，如一个或多个恒定区结构域。在一些实施方案中，恒定区包括轻链恒定区(cl)和/或重链恒定区1(ch1)。在一些实施方案中，抗id包括ch2和/或ch3结构域，如fc区。在一些实施方案中，fc区是人igg(如igg1或igg4)的fc区。在一些实施方案中，抗独特型抗体含有seqidno:121或127所示的ch结构域或其部分、或展现出与seqidno:121或127至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的氨基酸序列或其部分。在一些实施方案中，抗独特型抗体含有seqidno:124或130所示的cl结构域或其部分、或展现出与seqidno:124或130至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的氨基酸序列或其部分。在一些实施方案中，对sj25c1具有特异性的抗独特型抗体包含seqidno:122或128所示的重链序列、或展现出与seqidno:122或128至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的序列，和/或包含seqidno:125或131所示的轻链序列、或展现出与seqidno:125或131至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的序列。在一些实施方案中，对sj25c1具有特异性的抗独特型抗体包含seqidno:122所示的重链序列和/或seqidno:131所示的轻链序列。在一些实施方案中，对sj25c1具有特异性的抗独特型抗体包含seqidno:128所示的重链序列和/或seqidno:131所示的轻链序列。在一些实施方案中，抗独特型抗体的重链和/或轻链还包含信号肽。在一些情况下，信号肽具有seqidno:123、126、129或132所示的序列。在一些实施方案中，抗独特型抗体是抗原结合片段。在一些实施方案中，抗原结合片段选自抗原结合的片段(fab)片段、f(ab')2片段、fab’片段、fv片段、单链可变片段(scfv)或单结构域抗体。因此，提供了单链抗体片段(如scfv和双抗体)，特别是人单链片段，通常包含连接两个抗独特型抗体结构域或区域(如vh和vl结构域)的一个或多个接头。接头通常是肽接头，例如柔性和/或可溶性肽接头，例如富含甘氨酸和丝氨酸的一种肽接头。在一些方面，富含甘氨酸和丝氨酸(和/或苏氨酸)的接头包括至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的此类氨基酸。在一些实施方案中，它们包括至少为或约50％、55％、60％、70％或75％的甘氨酸、丝氨酸和/或苏氨酸。在一些实施方案中，接头基本上完全由甘氨酸、丝氨酸和/或苏氨酸组成。接头的长度通常在或在约5个与约50个氨基酸之间，通常在或在约10个与为或约30个之间，例如10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个、20个、21个、22个、23个、24个、25个、26个、27个、28个、29个或30个，并且在一些例子中长度在10个与25个氨基酸之间。示例性接头包括具有序列gggs(3gs；seqidno:70)或ggggs(4gs；seqidno:27)的各种数量重复的接头，例如在这样的序列的2个、3个、4个与5个重复之间。示例性接头包括具有seqidno:71(ggggsggggsggggs)所示序列或由其组成的那些接头。示例性接头还包括具有seqidno:72(gstsgsgkpgsgegstkg)所示序列或由其组成的那些接头。在一些实施方案中，抗独特型抗体包括分离的抗体。在一些实施方案中，抗id是人源化的、重组的和/或单克隆的。在一些实施方案中，抗id是人的。3.另外的组分在某些实施方案中，颗粒(例如珠颗粒)包含表面缀合或以其他方式附接的结合分子(所述结合分子结合重组受体(例如car)的抗原结合结构域或由其识别)，以及能够结合和/或识别细胞上的另外的分子的一种或多种另外的药剂。在一些实施方案中，所述一种或多种另外的药剂是另外的结合分子。在一些实施方案中，所述一种或多种另外的结合分子是与表达重组受体的细胞表面上存在的多肽(例如糖蛋白)结合的抗体(或其片段或变体)。在特定实施方案中，所述一种或多种另外的结合分子是与在细胞(例如表达重组受体的细胞)表面上表达的细胞表面分子(例如受体，例如激活性、共刺激或共受体)结合的多肽或其部分。在特定实施方案中，所述一种或多种另外的结合分子是与在细胞(例如表达重组受体的细胞)表面上存在的多肽结合的配体或其部分。在某些实施方案中，所述一种或多种另外的药剂暴露在颗粒表面上。在特定实施方案中，所述一种或多种另外的药剂可以通过与细胞表面上的另外的分子结合来调节细胞的功能(例如扩增)。在一些实施方案中，所述药剂结合细胞上的另外的分子并激活细胞上的辅助信号，即，另外的药剂与细胞表面上的另外的分子的结合跟辅助分子与细胞表面上的另外的分子的结合具有对一种或多种细胞功能(例如扩增)相同或相似的作用。在一些实施方案中，另外的药剂是结合或识别细胞表面上另外的分子的抗体或其片段。在特定实施方案中，所述药剂是结合或识别细胞表面上另外的分子的配体或其部分。在一些实施方案中，由所述一种或多种另外的药剂识别或结合的分子是cd2、cd3、cd4、cd5、cd8、cd25、cd27、cd28、cd29、cd31、cd44、cd45ra、cd45ro、cd54(icam-1)、cd127、mhci、mhcii、ctla-4、icos、icosl、pd-1(cd279)、pd-l1(cd274、b7-h1)、pdl2(cd273、b7-dc)、ox40(cd134、tnfrsf4)、ox-40l、dap10、cd27l(cd70)、4-1bb(cd137)、4-1bbl、cd30l、light、il-2r、il-12r、il-1r、il-15r；ifn-γr、tnf-αr、il-4r、il-10r、cd18/cdlla(lfa-1)、cd62l(l-选择素)、cd29/cd49d(vla-4)、notch配体(例如，delta样配体1/4、jagged1/2等)、ccr1、ccr2、ccr3、ccr4、ccr5、ccr7、cxcr3、ctla-4、lag-3(cd223)、tim-3、4-1bb(cd137)、gitr(tnfrsf18、aitr)、cd40、cxcr2、肿瘤相关抗原(taa)、b7-h3、b7-h4、btla、hvem、gal9、b7h3、b7h4、vista、kir、2b4(属于cd2分子家族并且在所有nk、γδ和记忆cd8 (αβ)t细胞上表达)、cd160(也称为by55)、cgen-15049、ceacam(例如，ceacam-1、ceacam-3和/或ceacam-5)、tigit、cd155、cd155、lair1、cd160、2b4、cd80、cd86、b7-h3(cd276)、b7-h4(vtcn1)、hvem(tnfrsf14或cd270)、light、kir、a2ar、mhci类、mhcii类、gal9、腺苷或转化生长因子受体(tgfr；例如tgfrβ)。在一些实施方案中，颗粒(例如珠)包含表面缀合或以其他方式附接的结合分子(所述结合分子结合重组受体(例如car)的抗原结合结构域或由其识别)，以及结合检查点分子的一种或多种另外的结合分子(如抑制性受体或激活性受体或其配体)。在一些实施方案中，结合分子含有抑制性受体或其配体或激活性受体或其配体的细胞外结构域或其结合部分。在一些实施方案中，结合分子与多聚化结构域(如fc区或结构域)融合。在特定实施方案中，颗粒(例如珠)包含表面缀合或以其他方式附接的结合分子(所述结合分子结合重组受体(例如car)的抗原结合结构域或由其识别)，以及结合ox-40、icos、dap10、cd28或4-1bb、ctla-4、pd-1、lag-3、tim-3、btla或tigit的一种或多种另外的结合分子。在一些实施方案中，颗粒(例如珠)包含表面缀合或以其他方式附接的结合分子(所述结合分子结合重组受体(例如car)的抗原结合结构域或由其识别)，以及结合ox-40l、icosl、b7-1、b7-2或4-1bbl、pd-l1、pd-l2、cd155、cd112或light的一种或多种另外的结合分子。在特定实施方案中，颗粒(例如珠)包含表面缀合或以其他方式附接的结合分子(所述结合分子结合重组受体(例如car)的抗原结合结构域或由其识别)，以及结合cd3和/或cd28的一种或多种另外的结合分子(例如抗体或其片段或变体)。在一些实施方案中，所述一种或多种另外的分子结合cd2或cd28。在特定实施方案中，颗粒(例如珠)包含表面缀合或以其他方式附接的结合分子(所述结合分子结合重组受体(例如car)的抗原结合结构域或由其识别)，以及结合cd28的一种或多种另外的结合分子。在一些实施方案中，颗粒含有表面缀合的结合分子、以及与cd2结合的另外的表面缀合的药剂。在某些实施方案中，颗粒含有表面缀合的结合分子以及表面缀合的抗cd2抗体。在特定实施方案中，颗粒含有表面缀合的结合分子、以及与cd28结合的另外的表面缀合的药剂。在各种实施方案中，颗粒含有表面缀合的结合分子以及表面缀合的抗cd28抗体。在一些实施方案中，颗粒含有表面缀合的结合分子以及与cd2和cd28结合的另外的表面缀合的药剂。在各种实施方案中，颗粒含有表面缀合的结合分子以及表面缀合的抗cd2和抗cd28抗体。在某些实施方案中，结合分子是或含有bcma、ror1或cd22抗原或含有表位的片段。在某些实施方案中，结合分子是结合或识别重组受体(例如car)的抗id。在特定实施方案中，颗粒含有表面缀合的抗id(例如结合或识别car(如抗cd19car)的抗id)、以及表面缀合的抗cd2抗体。在某些实施方案中，颗粒含有表面缀合的抗id(例如结合或识别car(例如抗cd19car)的抗id)、以及表面缀合的抗cd28抗体。在各种实施方案中，颗粒含有表面缀合的抗id(例如结合或识别car(例如抗cd19car)的抗id)、以及表面缀合的抗cd2和抗cd28抗体。在一些实施方案中，结合分子与另外的药剂或分子的比率(例如摩尔比或重量比)为从或从约1:10至10:1，例如1:5至5:1或1:2至2:1，或者为约1:1。在某些实施方案中，结合分子与两种另外的药剂的比率(例如摩尔比或重量比)为或为约1:1:1。c.缀合方法本文提供了与结合或识别重组受体(例如car)的结合分子(例如多肽抗原或抗体)缀合和/或附接的颗粒(例如珠颗粒)。可以使用本领域中熟知的多种手段来将结合分子(例如多肽抗原和抗独特型抗体)与颗粒(例如珠颗粒)缀合。这些方法包括任何标准化学，所述标准化学不会破坏或严重限制结合分子的生物学活性或结构，并且以允许结合分子(例如抗原肽或蛋白质)与重组受体相互作用的方式允许足够数量的结合分子与颗粒缀合。在一些实施方案中，选择将结合分子(例如多肽结合分子)的c末端区域与颗粒缀合的缀合方法。本领域技术人员将理解，用于缀合的确切化学可能取决于颗粒材料的性质、暴露于颗粒表面的官能团、与结合分子的c末端融合的存在或不存在、以及缀合部份(moieties)的存在或不存在。无论选择哪种化学，重要的是缀合方法不会改变结合分子的功能和/或结构确认。例如，如果结合分子是抗原，那么选择用于将抗原与颗粒缀合的方法不得阻止抗原由其缀合受体识别。在某些实施方案中，如果结合分子是抗体(例如抗id)，那么缀合方法不得阻止抗体结合其靶抗原。在一些实施方案中，将结合分子(例如多肽抗原或抗id)通过被动吸收到颗粒的平面上而附接至颗粒(例如珠颗粒)。通过这种方法的附接通常依赖于使结合分子与珠结合的疏水相互作用。尽管这种方法相对简单，但是在一些实施方案中，相对于附接结合分子的其他技术(例如本文(如在第i-c节中)所讨论的任何技术)，这种方法几乎无法控制所附接分子的最终取向。1.与颗粒表面的结合在某些实施方案中，结合分子经由共价化学键结合至载体。在特定实施方案中，结合分子是多肽，并且氨基酸的反应性基团或部份通过直接化学反应直接缀合至颗粒表面上的反应性基团或部分。在某些实施方案中，结合分子的氨基酸羧基基团(例如，c末端羧基基团)、羟基、硫醇或胺基团(例如氨基酸侧链基团)通过直接化学反应直接缀合至在颗粒表面上的pla或pga聚合物的羟基或羧基基团，树状聚合物的末端胺或羧基基团，或者磷脂的羟基、羧基或磷酸基团。在一些实施方案中，缀合部份与结合分子和颗粒两者缀合(例如共价结合)，从而将它们连接在一起。在某些实施方案中，颗粒的表面包含允许结合分子(例如多肽抗原或抗体)的附接(例如，共价、非共价)的化学部份和/或官能团。在一些实施方案中，颗粒上的化学部份和/或官能团的数量、取向、间隔等根据颗粒化学和结合分子的特性而变化。在特定实施方案中，颗粒(例如珠)已经引入了经修饰的表面。在特定实施方案中，颗粒表面含有暴露的官能团。合适的表面暴露的官能团包括但不限于羧基、氨基、羟基、硫酸基团、甲苯磺酰基、环氧基和氯甲基基团。在一些实施方案中，结合分子是多肽，并且与表面暴露的官能团缀合。在一些实施方案中，表面暴露的官能团必须被激活，即它必须经历化学反应以产生能够直接结合多肽的中间体产物。特定的实施方案设想激活颗粒上表面暴露的官能团以允许结合分子的缀合是本领域常规技术的问题，并且本领域技术人员将容易地鉴定合适的试剂和方案以进行任何必要的激活步骤来将结合分子缀合至颗粒。在一些实施方案中，为了将多肽结合分子与羧化颗粒(例如珠颗粒)结合，颗粒的表面暴露的羧基基团需要通过使官能团与如下药剂接触来激活，所述药剂将产生能够直接结合胺基团的中间体酯。可以将颗粒表面上的反应性(即激活的)羧基基团与多肽上的游离胺(例如，来自lys残基)缀合。合适的药剂包括，例如但不限于碳二亚胺(edc)、乙烯碳二亚胺(ecdi)、六亚甲基二异氰酸酯、丙二醇二缩水甘油醚(其含有2个环氧基残基)、表氯醇、n-羟基琥珀酰亚胺(nhs)或磺基-nhs或乙基(二甲基氨基丙基)。在一些实施方案中，多肽结合分子在表面暴露的羧基基团处共价附接至颗粒。在特定实施方案中，通过首先使羧基基团与药剂接触以生成中间体酯来使多肽结合分子在表面暴露的羧基基团处共价附接。在一些实施方案中，在将多肽与表面暴露的官能团缀合之前，激活多肽结合分子的官能团。例如，可以用上述药剂激活多肽分子的羧基基团，以生成能够与颗粒的表面暴露的氨基基团直接结合的中间体酯。在一些实施方案中，多肽结合分子在表面暴露的胺基团处缀合至颗粒。在特定实施方案中，在将颗粒与颗粒的表面暴露的羧基基团共价附接之前，使多肽结合分子的羧基基团与药剂接触以生成中间体酯。可替代地，可以使用磺基琥珀酰亚胺基(4-碘乙酰基)氨基苯甲酸酯(磺基-siab)化学将载体表面上的游离胺基团共价结合至抗原肽和蛋白质、或抗原肽或蛋白质融合蛋白。在特定实施方案中，多肽结合分子在形成共价附接之前不需要通过药剂激活的表面暴露的官能团处共价附接至颗粒(例如珠颗粒)。此类官能团的例子包括但不限于甲苯磺酰基、环氧基和氯甲基基团。在特定实施方案中，共价附接可以在特定ph范围下、在特定温度范围下、在特定缓冲液的存在下、并且持续特定的时间量进行，所述共价附接可以由本领域技术人员针对任何这样的官能团容易地鉴定和进行。例如，在一些实施方案中，取决于ph，颗粒表面上的甲苯磺酰基与结合分子(例如多肽抗原或抗体)的氨基或巯基基团结合。将中性ph用于将多肽的巯基基团与甲苯磺酰基基团结合，然而将更碱性的ph用于将多肽的氨基基团与甲苯磺酰基基团结合。在特定实施方案中，将多肽结合分子(例如抗原或抗体)在颗粒的表面暴露的甲苯磺酰基基团、环氧基基团或氯甲基基团处共价附接至颗粒(例如珠颗粒)。在特定实施方案中，将多肽结合分子附接至甲苯磺酰化的颗粒(即包含表面暴露的甲苯磺酰基基团的颗粒)。在一些实施方案中，结合至抗原肽或蛋白质的配体与附接至载体的抗配体之间的非共价键可以将所述抗原与所述载体缀合。在一些实施方案中，可以将生物素连接酶识别序列标签与抗原肽或蛋白质的c末端连接，并且这种标签可以通过生物素连接酶生物素化。然后，生物素可以用作配体，以将抗原肽或蛋白质与抗生物素蛋白或链霉亲和素非共价地缀合，所述抗生物素蛋白或链霉亲和素作为抗配体被吸附或以其他方式结合至载体表面。可替代地，如果如上所述将抗原肽和蛋白质与带有fc区的免疫球蛋白结构域融合，那么fc结构域可以充当配体，并且与载体表面共价或非共价地结合的蛋白质a可以用作抗配体以将抗原肽或蛋白质与载体非共价地缀合。可以用于将抗原肽和蛋白质与载体非共价地缀合的其他手段在本领域中是熟知的，包括金属离子螯合技术(例如，在抗原肽或蛋白质或者抗原肽或蛋白质融合蛋白的c末端使用聚his标签，以及ni包被的载体)，并且这些方法可以取代此处所描述的那些方法。在一些实施方案中，结合分子通过接头与颗粒缀合。在某些实施方案中，接头可以包括但不限于多种双功能蛋白偶联剂，例如n-琥珀酰亚胺基-3-(2-吡啶基二硫代)丙酸酯(spdp)、琥珀酰亚胺基-4-(n-马来酰亚胺基甲基)环己烷-l-甲酸酯、亚氨基硫杂环戊烷(it)、亚氨酸酯的双功能衍生物(如二甲基二亚胺代己二酸酯hcl)、活性酯(如双琥珀酰亚胺辛二酸酯)、醛(如戊二醛)、双叠氮化合物(如双(对叠氮基苯甲酰基)己二胺)、双重氮基衍生物(如双-(对重氮基苯甲酰基)-乙二胺)、二异氰酸酯(如甲苯2,6-二异氰酸酯)和双活性氟化合物(如l,5-二氟-2,4-二硝基苯)。具体的偶联剂包括n-琥珀酰亚胺基-3-(2-吡啶基二硫代)丙酸酯(spdp)和n-琥珀酰亚胺基-4-(2-吡啶基硫代)戊酸酯(spp)，以提供二硫键。2.可逆结合在一些实施方案中，结合分子与颗粒(例如珠颗粒)可逆地附接或以其他方式缔合。在某些实施方案中，结合分子与附接至颗粒的试剂可逆地附接或以其他方式缔合。在特定实施方案中，所述试剂暴露于颗粒表面上。在某些实施方案中，所述试剂含有能够与结合分子可逆地结合的多个结合位点。在一些实施方案中，所述试剂是多聚化试剂。在一些实施方案中，结合分子与试剂之间的结合相互作用是非共价相互作用。在一些实施方案中，结合分子与试剂之间的结合相互作用(例如非共价结合相互作用)是可逆的。在一些实施方案中，结合分子可逆地附接至颗粒，所述颗粒是由蛋白质(例如链霉亲和素)构成的寡聚物或聚合物。在一些实施方案中，可以在物质(例如竞争试剂(也称为洗脱试剂))的存在下调节结合分子与试剂之间的可逆缔合，所述物质是或含有如下结合位点，所述结合位点也能够结合试剂的由结合分子结合的一个或多个相同结合位点。通常，由于对试剂中存在的结合位点具有更高的结合亲和力和/或由于与结合分子相比以更高的浓度存在，所述物质(例如竞争试剂)可以充当竞争剂，从而使结合分子与试剂脱离和/或解离。在一些实施方案中，所述物质(例如竞争试剂)对试剂上至少一个结合位点的亲和力大于结合分子对试剂上所述至少一个结合位点的亲和力。因此，在一些实施方案中，可以通过添加物质(例如竞争试剂)来破坏试剂与结合分子的结合之间的键，从而使得药剂(例如受体结合剂或选择剂)与试剂的缔合可逆。可以用于此类可逆系统的试剂在本领域中已有描述并且是已知的，参见例如美国专利号5,168,049；5,506,121；6,103,493；7,776,562；7,981,632；8,298,782；8,735,540；9,023,604；以及国际公开的pct申请号wo2013/124474和wo2014/076277。下文描述了能够形成可逆相互作用的试剂和结合配偶体以及能够逆转这种结合的物质(例如竞争试剂)的非限制性例子。在一些实施方案中，试剂附接至并暴露于颗粒(例如珠颗粒)的表面上，并且含有能够与结合分子特异性地结合的多个结合位点，使得所述试剂能够可逆地结合多个结合分子，例如是多聚化试剂。在一些实施方案中，所述试剂是单独分子(例如单体)的寡聚物或聚合物或组成单独分子(例如四聚体)的复合物的寡聚物或聚合物，所述单独分子或所述复合物与颗粒表面附接，每个含有能够与结合分子结合的至少一个结合位点。在一些实施方案中，颗粒由试剂构成，即，颗粒是试剂的寡聚物或聚合物。在一些实施方案中，所述试剂是链霉亲和素、链霉亲和素突变蛋白或类似物、抗生物素蛋白、抗生物素蛋白突变蛋白或类似物(如中性抗生物素蛋白)或其混合物，其中这样的试剂含有能够与结合分子可逆缔合的一个或多个结合位点。在一些实施方案中，结合分子包含生物素、生物素衍生物或类似物、或链霉亲和素结合肽、或能够特异性地结合试剂的其他分子。在一些实施方案中，结合分子包含生物素、生物素衍生物或类似物、或链霉亲和素结合肽，或能够与链霉亲和素、链霉亲和素突变蛋白或类似物、抗生物素蛋白或抗生物素蛋白突变蛋白或类似物特异性地结合的其他分子。在某些实施方案中，结合分子是包含融合结构域的多肽(例如多肽抗原或抗体)，所述多肽是生物素、生物素衍生物或类似物、或链霉亲和素结合肽，或能够与链霉亲和素、链霉亲和素突变蛋白或类似物、抗生物素蛋白或抗生物素蛋白突变蛋白或类似物特异性地结合的其他分子。在一些实施方案中，结合分子是包含融合结构域的多肽，所述多肽是生物素、生物素衍生物或类似物、或链霉亲和素结合肽，或能够与链霉亲和素、链霉亲和素突变蛋白或类似物、抗生物素蛋白或抗生物素蛋白突变蛋白或类似物特异性地结合的其他分子，并且所述试剂是或包含与生物素、生物素类似物或其生物活性片段可逆地结合的链霉亲和素、抗生物素蛋白、链霉亲和素的类似物或突变蛋白、抗生物素蛋白的类似物或突变蛋白。在某些实施方案中，融合结构域位于结合分子的c末端。在一些实施方案中，所述试剂是或包含与链霉亲和素结合肽可逆地结合的链霉亲和素的类似物或突变蛋白或者抗生物素蛋白的类似物或突变蛋白。在一些实施方案中，所述物质(例如竞争试剂)可以是生物素、生物素衍生物或类似物、或链霉亲和素结合肽，其能够与结合分子竞争结合试剂的一个或多个结合位点。在一些实施方案中，结合分子的融合结构域与物质(例如竞争试剂)是不同的，并且与结合分子对试剂的亲和力相比，所述物质(例如竞争试剂)展现出对试剂更高的结合亲和力。在某些实施方案中，融合结构域与物质(例如竞争试剂)是相同的。在一些实施方案中，链霉亲和素可以是野生型链霉亲和素、链霉亲和素突变蛋白或类似物(如链霉亲和素样多肽)。同样，在一些方面，抗生物素蛋白包括野生型抗生物素蛋白、或者抗生物素蛋白的突变蛋白或类似物(如中性抗生物素蛋白，所述中性抗生物素蛋白是具有经修饰的精氨酸的去糖基化抗生物素蛋白，其通常展现更中性的等电点并且可用作天然抗生物素蛋白的替代物)。通常，去糖基化的中性形式的抗生物素蛋白包括例如那些可商购获得的形式，如可通过sigmaaldrich公司获得的“extravidin”、或可获自thermoscientific或invitrogen公司的“neutravidin”。在一些实施方案中，试剂是链霉亲和素或链霉亲和素突变蛋白或类似物。在一些实施方案中，野生型链霉亲和素(wt-链霉亲和素)具有由argarana等人,nucleicacidsres.14(1986)1871-1882所披露的氨基酸序列(seqidno:21)。通常，链霉亲和素自然地作为四个相同亚基的四聚体存在，即它是同源四聚体，其中每个亚基含有针对生物素、生物素衍生物或类似物或生物素模拟物的单一结合位点。链霉亲和素亚基的示例性序列是在seqidno:21中所示的氨基酸序列，但是这样的序列还可以包括在来自其他链霉菌属(streptomyces)物种的同源物中存在的序列。特别地，链霉亲和素的每个亚基可以展现对生物素的强结合亲和力，平衡解离常数(kd)近似于约10-14m。在一些情况下，链霉亲和素可以作为其中四个结合位点中仅有一个有功能的单价四聚体存在(howarth等人(2006)nat.methods,3:267-73；zhang等人(2015)biochem.biophys.res.commun.,463:1059-63)、作为其中四个结合位点中的两个有功能的二价四聚体存在(fairhead等人(2013)j.mol.biol.,426:199-214)，或者可以以单体或二聚体形式存在(wu等人(2005)j.biol.chem.,280:23225-31；lim等人(2010)biochemistry,50:8682-91)。在一些实施方案中，结合分子包含融合结构域，所述融合结构域是strep标签(例如，如美国专利号5,506,121中所披露的)，其是充当生物素模拟物并显示对链霉亲和素的结合亲和力的肽序列。在一些情况下，可以通过在链霉亲和素分子内进行突变来进一步改善结合亲和力，参见例如美国专利号6,103,493或国际公开的pct申请号wo2014/076277。在一些实施方案中，可以通过本领域已知的方法确定结合亲和力。在一些实施方案中，试剂(如链霉亲和素或链霉亲和素突变蛋白)展现出对结合分子的融合结构域的结合亲和力。在一些实施方案中，融合结构域包含肽序列，所述肽序列含有具有seqidno:11所示的通式的序列，例如含有seqidno:12所示的序列。在一些实施方案中，肽序列具有在seqidno:13中所示的通式，例如在seqidno:43中所示。在一个例子中，肽序列如seqidno:9所示。在一个例子中，肽序列如seqidno:10所示，也称为ii链霉亲和素多肽。在一些实施方案中，肽配体含有至少两个链霉亲和素结合模块的顺序排列，其中在所述两个模块之间的距离为至少0个且不大于50个氨基酸，其中一个结合模块具有3个至8个氨基酸并且含有至少序列his-pro-xaa(seqidno:11)，其中xaa是谷氨酰胺、天冬酰胺或甲硫氨酸，并且其中另一个结合模块具有相同或不同的链霉亲和素肽配体，如在seqidno:13中所示(参见例如国际公开的pct申请号wo02/077018；美国专利号7,981,632)。在一些实施方案中，肽配体含有具有seqidno:15或16中任一个所示的式的序列。在一些实施方案中，肽配体具有seqidno:15-22中任一个所示的氨基酸序列。在一些实施方案中，试剂是链霉亲和素或链霉亲和素突变蛋白(或其部分)，其结合或识别其他链霉亲和素配体，例如但不限于生物素、亚氨基生物素、硫辛酸、脱硫生物素、二氨基生物素、haba(羟基偶氮苯-苯甲酸)和/或二甲基-haba。在一些实施方案中，链霉亲和素突变蛋白展现出对另一种链霉亲和素配体(如生物素或脱硫生物素)的结合亲和力，所述结合亲和力大于所述链霉亲和素突变蛋白对生物素模拟肽配体(例如，如seqidno:7-19中任一个所示)的结合亲和力。因此，在一些实施方案中，生物素或生物素类似物或衍生物(例如脱硫生物素)可以用作所提供的方法中的竞争试剂。例如，作为例子，突变蛋白链霉亲和素(称为)(例如，含有seqidno:23所示的序列)的相互作用。在一些实施方案中，试剂包含能够结合过渡金属离子的至少两个螯合基团k。在一些实施方案中，试剂可能够结合寡组氨酸亲和标签、谷胱甘肽-s-转移酶、钙调蛋白或其类似物、钙调蛋白结合肽(cbp)、flag肽、ha标签、麦芽糖结合蛋白(mbp)、hsv表位、myc表位和/或生物素化载体蛋白。3.结合分子取向在一些实施方案中，结合分子以如下取向结合或附接至颗粒(例如珠颗粒)，所述取向被优化以允许结合分子与表达由结合分子结合或识别的重组受体(例如car)的细胞之间的相互作用。在一些实施方案中，经优化的取向允许结合分子与重组受体之间的结合，而受结合分子所结合的颗粒的干扰最小或没有其干扰。在一些实施方案中，颗粒相对于结合或识别car的结合分子区域(例如抗原或抗id)的相对位置不会阻止接近此区域以接触表达重组受体(例如car)的细胞。在一些实施方案中，结合分子在与结合或识别靶细胞的重组受体的区域(例如抗原或抗id)不同的区域(例如融合结构域)处附接至颗粒。在某些实施方案中，结合分子不在结合或识别重组受体的区域处附接至颗粒。在某些实施方案中，与结合分子的另一个区域相比，结合分子不太可能在结合或识别重组受体的区域处附接至颗粒。特定的实施方案设想当结合分子在结合分子的一个末端(例如c末端)处结合至颗粒(例如珠颗粒)时，这为结合分子结合重组受体提供了最佳取向。在一些实施方案中，结合分子在与结合或识别重组受体的区域相反的末端结合至颗粒。在某些实施方案中，将结合分子附接至颗粒，使得与重组受体结合的区域(例如抗原或抗id)远离颗粒而定位。在特定实施方案中，结合分子在一个末端(例如在其c末端)附接至颗粒，并且与重组受体结合的区域是在结合分子的相反末端(例如n末端)。在特定实施方案中，将结合分子附接至颗粒，使得结合分子的抗原或抗id以相对于颗粒向外的取向定位。一些实施方案设想结合重组受体的区域从颗粒的向外取向为结合分子与表达重组受体的细胞之间相互作用提供了最大可能性。在一些实施方案中，结合分子(例如多肽)包含结合或识别靶细胞的重组受体的区域(例如抗原或抗id)，并且在单独的区域(例如融合结构域)附接或结合至颗粒。在某些实施方案中，结合或识别重组受体的区域和所述单独的区域(例如融合结构域)是在结合分子的相反末端。在某些实施方案中，结合分子包含在结合分子的n末端处或附近的、结合或识别靶细胞的重组受体的区域，以及在c末端结构域处或附近的、单独的区域(例如融合结构域)。在一些实施方案中，结合分子包含在结合分子的c末端处或附近的、结合或识别靶细胞的重组受体的区域，以及在n末端结构域处或附近的、单独的区域(例如融合结构域)。在一些实施方案中，如果结合分子(例如多肽抗原或抗体)的区域位于距n末端或c末端的一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、十五个、二十个、二十五个、三十个、三十五个、四十个、四十五个、五十个、六十个、七十个、八十个、九十个或一百个氨基酸内，那么所述区域是在n末端或c末端附近。在一些实施方案中，结合分子是包含与颗粒结合的融合结构域的多肽(例如多肽抗原或抗体)。在一些实施方案中，结合分子在融合结构域内的一个或多个位点处结合至颗粒。在某些实施方案中，与结合分子的落在融合结构域之外的一个或多个位点处相比，结合分子更有可能在融合结构域内的一个或多个位点处与颗粒结合。在一些实施方案中，与结合分子的落在融合结构域之外的一个或多个位点处相比，结合分子有至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少99％、至少99.9％或至少100％更多的可能在融合结构域内的一个或多个位点处与颗粒结合。在某些实施方案中，与结合分子的落在融合结构域之外的一个或多个位点处相比，结合分子有至少1倍、至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少20倍、至少30倍、至少40倍、至少50倍、至少100倍、至少500倍或至少1,000倍更多的可能在融合结构域内的一个或多个位点处与颗粒结合。在某些实施方案中，结合分子与融合结构域或标签连接。在一些实施方案中，结合分子是或含有由重组受体(如抗原受体或car)识别和/或结合的抗原或抗id，直接或间接地与融合结构域或标签连接。在一些实施方案中，结合分子是含有抗原或其部分以及融合结构域或标签的融合多肽。在一些实施方案中，结合分子在融合结构域或标签处或之内的位点(例如氨基酸的侧链)与颗粒缀合。在某些实施方案中，结合分子在融合结构域或标签处与颗粒的附接导致结合分子的最佳取向，所述结合分子与颗粒缀合以由重组受体或car结合或识别。在一些实施方案中，包含由抗原受体(例如car)识别的抗原或抗id的结合分子在c末端处与融合结构域或标签连接，在这种情况下，经由融合结构域或标签与颗粒的缀合优先定向或暴露所结合的结合分子的n末端区域以与抗原受体(例如car)相互作用。融合结构域或标签在本领域中是熟知的，并且可以与所提供的结合分子中的抗原连接以赋予期望的特性，例如，通过亲和色谱法分离融合多肽、或与颗粒表面上的官能团共价附接。此类融合结构域的公知的例子包括但不限于多组氨酸、glu-glu、抗生物素蛋白、谷胱甘肽s转移酶(gst)、硫氧还蛋白、蛋白质a、蛋白质g、免疫球蛋白重链恒定区(fc)、麦芽糖结合蛋白(mbp)或人血清白蛋白。在一些实施方案中，融合结构域是多肽标签。多肽标签的熟知例子包括但不限于avi标签(seqidno:3)、钙调蛋白标签(seqidno:4)、聚谷氨酸标签(seqidno:5)、flag标签(seqidno:6)、ha标签(seqidno:7)、his标签(5-10个组氨酸)、myc标签(seqidno:8)和荧光蛋白标签(例如egfp)。在一些实施方案中，融合结构域或标签包含链霉亲和素结合肽序列。在一些实施方案中，所述序列是链霉亲和素结合肽序列，如seqidno:9和10所例示。在一些实施方案中，融合结构域包含链霉亲和素结合肽序列，如seqidno:11-19所示氨基酸序列所例示。在一些实施方案中，结合分子包含与颗粒的表面暴露的谷胱甘肽结合的gst融合结构域。在特定实施方案中，gst融合结构域位于结合分子的c末端处或附近。在一些实施方案中，结合分子包含与颗粒的表面暴露的生物素或链霉亲和素配体结合的strep标签融合结构域。在一些实施方案中，strep标签融合结构域是在结合分子的c末端处或附近。在特定实施方案中，结合分子包含与附接至颗粒表面的fc多肽结合的蛋白质a融合结构域。在一些实施方案中，蛋白质a融合结构域是在结合分子的c末端处或附近。在某些实施方案中，结合分子包含与附接至颗粒表面的白蛋白或fc多肽结合的蛋白质g融合结构域。在一些实施方案中，蛋白质a融合结构域是在结合分子的c末端处或附近。在特定实施方案中，结合分子含有疏水性区域或比结合分子的其余部分更具疏水性的区域。在一些实施方案中，结合分子包含比结合分子的落在疏水性区域之外的位点更具疏水性的区域。在一些实施方案中，疏水性区域是融合结构域。在特定实施方案中，疏水性区域是fc结构域。在某些实施方案中，如果颗粒表面是疏水性的，那么结合分子更有可能在疏水性区域中而不是结合分子的其他区域中的一个或多个位点处与颗粒结合或附接。在各种实施方案中，结合分子的疏水性区域结合颗粒的表面暴露的官能团。在一些实施方案中，官能团是或含有甲苯磺酰基基团。在一些实施方案中，结合分子包含fc结构域，其中所述fc结构域存在于融合多肽的c末端处。在一些实施方案中，结合分子是包含fc结构域的抗体(例如抗独特型抗体)。在特定实施方案中，fc结构域与颗粒的表面暴露的蛋白质g或蛋白质a结合或附接。在一些实施方案中，存在于fc结构域上的一个或多个氨基酸的一个或多个官能团与颗粒的官能团结合。在特定实施方案中，融合多肽或抗体的fc结构域比结合分子的抗原或抗体区域更具疏水性，并且与结合分子的在fc结构域之外的位点相比，fc结构域内的位点更有可能例如在表面暴露的官能团处(当颗粒表面呈疏水性时)与颗粒结合。在特定实施方案中，包含fc结构域的结合分子在fc区域内的一个或多个位点处与颗粒结合。可以通过本领域中的标准技术容易地进行结合分子在位于fc区域上的位点处与颗粒(例如珠颗粒)的结合。例如，fc结构域倾向于是疏水性的，并且在其中fc结构域比结合分子(例如多肽抗原)的其他结构域更具疏水性的情况下，然后如果颗粒表面是疏水性的，那么可能发生位于fc结构域内的氨基酸侧链与位于颗粒上的表面暴露的官能团(例如甲苯磺酰基基团)之间的结合。在一些实施方案中，颗粒表面是疏水性的。在一些实施方案中，颗粒表面是非亲水性的。在特定实施方案中，颗粒表面是疏水性的并且包含表面暴露的甲苯磺酰基基团。在一些实施方案中，颗粒是非疏水性的。在某些实施方案中，颗粒是亲水性的。在一些实施方案中，颗粒表面是非疏水性的。在一些实施方案中，颗粒表面是亲水性的。4.缀合的颗粒在一些实施方案中，将结合分子(例如多肽抗原或抗体)附接至颗粒(例如珠颗粒)。在某些实施方案中，将多肽共价地附接至颗粒。在一些实施方案中，将多肽非共价地附接至颗粒。在一些实施方案中，将至少1个结合分子、至少10个结合分子、至少102个结合分子、至少103个结合分子、至少104个结合分子、至少105个结合分子、至少106个结合分子、至少107个结合分子、至少108个结合分子、或至少109个结合分子附接至每个颗粒。在特定实施方案中，将在或在约102个与109个之间的结合分子、102个与107个之间的结合分子、103个与109个之间的结合分子、103个与108个之间的结合分子、或103个与106个之间的结合分子共价地附接至每个颗粒(每个都包含端值)。在特定实施方案中，将在或在约103个与106个之间的结合分子(包含端值)共价地附接至每个颗粒。在特定实施方案中，将在或在约104个与106个之间的结合分子(包含端值)共价地附接至每个颗粒。在某些实施方案中，将在或在约104个与105个之间的结合分子共价地附接至每个颗粒。在一些实施方案中，将在或在约105个与106个之间的结合分子(包含端值)共价地附接至每个颗粒。在某些实施方案中，将结合分子共价地附接至颗粒(例如珠颗粒)。在特定实施方案中，对于每107个颗粒，将至少0.001μg、至少0.01μg、至少0.1μg、至少0.5μg、至少1μg、至少1.5μg、至少2μg、至少2.5μg、至少3μg、至少3.5μg、至少4μg、至少4.5μg、至少5μg、至少6μg、至少7μg、至少8μg、至少9μg、至少10μg、或至少50μg的多肽结合分子的量共价地附接至颗粒(例如珠)。在一些实施方案中，对于每107个颗粒，将在或在约0.001μg与100μg之间、0.01μg与50μg之间、0.1μg与10μg之间、0.5μg与10μg之间、0.1μg与1μg之间、1μg与10μg之间、0.5μg与5μg之间、或1μg与5μg之间(每个都包含端值)的多肽结合分子共价地附接至颗粒(例如珠)。在特定实施方案中，对于每107个颗粒，将在或在约1μg与约10μg之间(包含端值)的多肽结合分子共价地附接至颗粒(例如珠)。在某些实施方案中，将结合分子与颗粒(例如珠颗粒)结合或附接。在特定实施方案中，将平均量为、约或至少0.0001pg、0.001pg、0.005pg、0.01pg、0.02pg、0.03pg、0.04pg、0.05pg、0.06pg、0.07pg、0.08pg、0.09pg、0.1pg、0.2pg、0.3pg、0.4pg、0.5pg、0.6pg、0.7pg、0.8pg、0.9pg、1.0pg、或5.0pg的多肽结合分子与每个颗粒结合或附接。在一些实施方案中，将在或在约0.0001pg与约10pg之间、0.001pg与1pg之间、0.001pg与1pg之间、0.001μg与0.1pg之间、0.01pg与0.1pg之间、1pg与10pg之间、0.5pg与5pg之间、或b1pg与5pg之间(每个都包含端值)的结合分子与颗粒结合或附接。在特定实施方案中，将平均量等于或小于0.0001pg、0.001pg、0.005pg、0.01pg、0.02pg、0.03pg、0.04pg、0.05pg、0.06pg、0.07pg、0.08pg、0.09pg、0.1pg、0.2pg、0.3pg、0.4pg、0.5pg、0.6pg、0.7pg、0.8pg、0.9pg、1.0pg、或5.0pg的多肽结合分子与每个颗粒结合或附接。在特定实施方案中，颗粒具有约2.8μm的直径，并且将在或在约.001与0.1pg之间(包含端值)的结合分子与颗粒结合或附接。在特定实施方案中，颗粒具有约4.5μm的直径，并且将在或在约.01与约1pg之间(包含端值)的结合分子与颗粒结合或附接。在特定实施方案中，对于每107个颗粒，以至少10-16mol、至少10-15mol、至少10-14mol、至少10-13mol、至少10-12mol、至少10-11mol、至少10-10mol、至少10-9mol、至少10-8mol、至少10-7mol、至少10-6mol、至少10-5mol、至少10-4mol、至少10-3mol、至少10-2mol、至少10-1mol、或至少1mol的量将结合分子与颗粒(例如珠颗粒)结合或附接。在一些实施方案中，对于每107个颗粒，将在或在约1x10-13mol与1x10-9mol之间、1x10-12mol与1x10-9mol之间、1x10-13mol与1x10-10mol之间、或1x10-12mol与1x10-9mol之间(每个都包含端值)与颗粒结合或附接。在一些实施方案中，对于每个颗粒，以至少10-20mol、至少10-19mol、至少10-18mol、至少10-17mol、至少10-16mol、至少10-15mol、至少10-14mol、至少10-13mol、至少10-12mol、至少10-11mol、或至少10-10mol的量将结合分子与颗粒(例如珠颗粒)结合或附接。在一些实施方案中，对于每个颗粒，将在或在约10-21mol与10-10mol之间、10-20mol与10-18mol之间、10-19mol与10-17mol之间、或10-21mol与10-19mol之间(每个都包含端值)共价地附接至颗粒(例如珠)。在一些实施方案中，颗粒(例如珠)具有约2.8μm的直径，并且以在或在约10-20mol与10-18mol之间(包含端值)的量将结合分子与颗粒结合或附接。在某些实施方案中，颗粒(例如珠)具有约4.5μm的直径，并且以在或在约10-19mol与10-17mol之间(包含端值)的量将结合分子与颗粒结合或附接。在某些实施方案中，将结合分子与颗粒(例如珠，例如甲苯磺酰基激活的珠)一起孵育，以将结合分子与颗粒(例如珠)附接和/或缀合。在特定实施方案中，以每1x108个与1x1010个之间(包含端值)的颗粒而言为或约1μg、2μg、2.5μg、5μg、10μg、20μg、25μg、30μg、40μg、50μg、60μg、70μg、75μg、100μg、125μg、150μg、175μg、或200μg结合分子的浓度将结合分子和颗粒(例如珠)一起孵育，并且以为或为约或大于50％、60％、70％、80％、90％、95％、97％、98％、99％、99.9％或为或为约100％的效率将结合分子与颗粒(例如珠)附接和/或缀合。在一些实施方案中，以每4x108个与5x108个之间(包含端值)的颗粒而言为或约1μg、2μg、2.5μg、5μg、10μg、20μg、25μg、30μg、40μg、50μg、60μg、70μg、75μg、100μg、125μg、150μg、175μg、或200μg结合分子的浓度将结合分子和颗粒(例如珠)一起孵育，并且以为或为约或大于50％、60％、70％、80％、90％、95％、97％、98％、99％、99.9％或为或为约100％的效率将结合分子与颗粒(例如珠)附接和/或缀合。在特定实施方案中，以每3.5x109个与4.5x109个之间(包含端值)的颗粒而言为或约1μg、2μg、2.5μg、5μg、10μg、20μg、25μg、30μg、40μg、50μg、60μg、70μg、75μg、100μg、125μg、150μg、175μg、或200μg结合分子的浓度将结合分子和颗粒(例如珠)一起孵育，并且以为或为约或大于50％、60％、70％、80％、90％、95％、97％、98％、99％、99.9％或为或为约100％的效率将结合分子与颗粒附接和/或缀合。在特定实施方案中，将在1μg与5μg之间、在5μg与25μg之间、在1μg与50μg之间、在10μg与50μg之间、0.1μg与10μg之间、或50μg与200μg之间(每个都包含端值)的结合分子与在或在约4x108个与5x108个之间的颗粒或在3.5x109个与4.5x109个之间的颗粒(每个都包含端值)一起孵育，并且以为或为约或大于50％、60％、70％、80％、90％、95％、97％、98％、99％、99.9％或为或为约100％的效率将结合分子与颗粒(例如珠)附接和/或缀合。在一些实施方案中，与颗粒缀合或附接的结合分子的平均量为、为约或为至少2x10-16g/颗粒、1x10-15g/颗粒、2x10-15g/颗粒、5x10-15g/颗粒、1x10-14g/颗粒、2x10-14g/颗粒、5x10-14g/颗粒、1x10-13g/颗粒、2x10-13g/颗粒、5x10-13g/颗粒、1x10-13g/颗粒、和2x10-13g/颗粒±50％、±40％、±30％、±25％、±20％、±10％、±5％、或±1％。在某些实施方案中，与颗粒缀合或附接的结合分子的平均量为或为约2x10-16g/颗粒±50％、±40％、±30％、±25％、±20％、±10％、±5％、或±1％。在特定实施方案中，与颗粒缀合或附接的结合分子的平均量为或为约1x10-15g/颗粒±50％、±40％、±30％、±25％、±20％、±10％、±5％、或±1％。在某些实施方案中，与颗粒缀合或附接的结合分子的平均量为或为约2x10-15g/颗粒±50％、±40％、±30％、±25％、±20％、±10％、±5％、或±1％。在特定实施方案中，与颗粒缀合或附接的结合分子的平均量为或为约1x10-14g/颗粒±50％、±40％、±30％、±25％、±20％、±10％、±5％、或±1％。在某些实施方案中，与颗粒缀合或附接的结合分子的平均量等于或小于5x10-13g/颗粒、2x10-13g/颗粒、1x10-13g/颗粒、5x10-14g/颗粒、2x10-14g/颗粒、1x10-14g/颗粒、5x10-15g/颗粒、2x10-15g/颗粒、1x10-15g/颗粒、或2x10-16g/颗粒。在一些实施方案中，颗粒(例如珠)包含结合分子，所述结合分子是与car的抗原结合结构域结合的抗独特型抗体或其活性片段。在某些实施方案中，抗独特型抗car抗体或其活性片段在位于抗体的fc结构域内的位点(例如，氨基酸的侧链氨基基团或巯基基团)处与颗粒的表面暴露的甲苯磺酰基基团结合。在特定实施方案中，颗粒(例如珠)是单分散的和超顺磁性的。在特定实施方案中，颗粒(例如珠)具有约2.8μm的直径，并且具有在约104个与约106个拷贝之间(包含端值)的结合分子(即抗独特型抗car抗体)/颗粒。在一些实施方案中，颗粒(例如珠)具有约4.5μm的直径，并且包含约在约5x105个与约5x106个拷贝之间(包含端值)的抗独特型抗car抗体/颗粒。在某些实施方案中，颗粒(例如珠)包含结合分子，所述结合分子为或含有bcma多肽抗原。在特定实施方案中，结合分子包含人bcma细胞外结构域和fc结构域，所述fc结构域在一些情况下是c末端fc结构域。在特定实施方案中，颗粒(例如珠)具有约280μm的直径，并且包含约105个拷贝的结合分子(例如bcma融合多肽)/颗粒。在某些实施方案中，bcma融合多肽在位于融合多肽的fc结构域内的位点(例如，氨基酸的侧链氨基基团或巯基基团)处与颗粒的表面暴露的甲苯磺酰基基团结合。在特定实施方案中，颗粒(例如珠)是单分散的和超顺磁性的。在特定实施方案中，颗粒(例如珠)具有约2.8μm的直径，并且具有在约104个与约106个拷贝之间(包含端值)的结合分子(即bcma融合多肽)/颗粒。在一些实施方案中，颗粒(例如珠)具有约4.5μm的直径，并且包含在或在约5x105个与5x106个拷贝之间(包含端值)的bcma融合多肽/颗粒。ii.细胞的离体刺激或扩增本文提供了刺激或扩增表达重组受体(例如car)的细胞的方法，所述方法包括将包含表达car的细胞的输入组合物与包含特异性地结合或识别重组受体的结合分子的颗粒(例如珠)(例如所提供的珠缀合的试剂，如抗id缀合的珠或bcma缀合的珠)一起孵育。在一些实施方案中，结合分子与重组受体(例如car)之间的结合诱导表达car的细胞的扩增，从而产生包含扩增的细胞的输出组合物。在特定实施方案中，重组受体是car。在某些实施方案中，结合分子是与重组受体的抗原结合片段结合的抗独特型抗体或其抗原结合片段。在某些实施方案中，结合分子是与car结合或由其识别的抗原。在一些实施方案中，将包含结合分子的颗粒(例如珠)与包含一种或多种细胞的输入组合物接触或一起孵育，以生成输出组合物。在某些实施方案中，输入组合物或输入细胞是指希望在如下条件下被处理、孵育或接触的组合物和/或多个细胞，所述条件将刺激、激活输入组合物的至少一部分细胞，引起、生成和/或产生输入组合物的至少一部分细胞的一个或多个变化，从而将输入组合物转换成输出组合物。在一些实施方案中，输入细胞是免疫细胞的组合物，例如含有表达重组受体(例如car)的细胞的t细胞组合物。在特定实施方案中，通过实践所提供的方法，在所生成的输出组合物中输入组合物中的至少一部分细胞得以激活、扩增和/或富集。在某些实施方案中，使包含结合分子的颗粒(例如珠)与来自输入组合物的细胞接触或一起孵育，以通过扩增、富集和/或激活输入细胞的至少一部分(例如亚组或部分)来生成输出组合物。在特定实施方案中，来自输入组合物的细胞包含至少一部分表达重组受体(例如car)的细胞、和/或至少一部分含有编码重组受体的异源核酸分子的细胞。在一些实施方案中，输入组合物包含有待用包含结合分子的颗粒处理、与包含结合分子的颗粒接触或与包含结合分子的颗粒一起孵育的细胞，其中用药剂处理、与药剂接触或与药剂一起孵育将改变输入组合物的至少一部分细胞，从而生成输出组合物。此类改变可以包括但不限于扩增和/或富集一部分细胞、激活至少一部分细胞、和/或增加或减少至少一部分细胞的至少一种基因的表达。在某些实施方案中，输出组合物包含来自输入组合物的至少一部分细胞，所述输入组合物在通过用药剂处理、与药剂接触或与药剂一起孵育而改变后经历了改变。在一些实施方案中，通过将细胞与包含结合分子的颗粒(例如珠)一起孵育实现的扩增、富集、刺激和/或激活可以通过选择具有特定数量、水平或量的结合分子(所述结合分子与每个颗粒缀合或以其他方式附接)的颗粒(例如珠)来滴定、调节和/或控制。在特定实施方案中，增加与每个颗粒缀合或以其他方式附接的结合分子的数量增加了通过将细胞与颗粒(例如珠)一起孵育实现的扩增、富集、刺激和/或激活。在某些实施方案中，减少与每个颗粒缀合或以其他方式附接的结合分子的数量减少了通过将细胞与颗粒(例如珠)一起孵育实现的扩增、富集、刺激和/或激活。在特定实施方案中，通过任何合适的已知手段来测量扩增、富集、刺激和/或激活。在特定实施方案中，扩增、富集、刺激和/或激活的增加是例如与对照和/或在不同条件下的孵育相比，在与颗粒(例如珠)一起孵育期间或之后与细胞的所取得的扩增、富集、刺激和/或激活相关的测量的统计学上显著的增加和/或至少或至少约1％、5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％、1倍、2倍、3倍、5倍、10倍、100倍增加。在某些实施方案中，扩增、富集、刺激和/或激活的减少是在与颗粒(例如珠)一起孵育期间或之后与细胞的所取得的扩增、富集、刺激和/或激活相关的测量的统计学上显著的减少和/或至少或至少约1％、5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、99％或99.9％减少。在一些实施方案中，输入组合物包含真核细胞，如哺乳动物细胞。在某些实施方案中，输入组合物包含人细胞。在一些实施方案中，输入组合物包含源自血液、骨髓、淋巴或淋巴器官的细胞。在特定实施方案中，输入组合物包含免疫系统的细胞，即先天免疫或适应性免疫的细胞，例如骨髓或淋巴样细胞(包括淋巴细胞，通常为t细胞和/或nk细胞)。在一些实施方案中，输入组合物包含干细胞，如多潜能干细胞和多能干细胞，包括诱导多能干细胞(ipsc)。在特定实施方案中，输入组合物包含cd3 细胞。在某些实施方案中，输出组合物包含cd4 细胞。在一些实施方案中，输入组合物包含cd8 细胞。在一些实施方案中，输入组合物包含还表达低水平cd28或不表达cd28的cd3 细胞。在一些实施方案中，结合分子刺激表达低水平的cd28的细胞或呈cd28阴性的细胞的激活和/或扩增。在某些实施方案中，在使细胞与结合分子接触之前，细胞不与抗cd3/抗cd28缀合试剂接触。在一些实施方案中，包含结合分子的方法和包含结合分子的颗粒(例如珠)(例如所提供的珠缀合的试剂，例如抗id缀合的珠或bcma缀合的珠)能够刺激t细胞，所述t细胞缺乏或下调了一种或多种天然信号传导分子，例如一种或多种共刺激受体或抗原受体或细胞因子受体，但表达由所提供的珠缀合试剂的结合分子识别的嵌合受体(例如car)。在一些实施方案中，输入组合物的细胞的cd28或其他共刺激分子或其他信号传导分子的表面表达低或呈阴性。因此，在一些实施方案中，与可能需要或取决于cd28或其他内源信号传导分子的表面表达以提供所需的信号和/或这种信号的全部范围(例如以提供共刺激信号和/或实现完全激活)的某些其他激活或刺激剂或方法相比，所提供的试剂和方法具有某些优点。在一些实施方案中，与抗cd3/抗cd28试剂(例如珠)相比，所提供的药剂和方法在这方面是有利的；在一些方面，所提供的包含结合分子的颗粒(例如珠)(例如所提供的珠缀合试剂，例如抗id缀合的珠或bcma缀合的珠)在能够刺激或实现所需的效果(例如对cd28或其他天然信号传导分子是低的或呈阴性的细胞的激活或增殖)方面是有利的。在一些方面，通过用抗id抗体刺激而通过car进行信号传导导致仅使用单一试剂就产生经由car的初级和次级(共刺激)信号二者。在一些实施方案中，输入组合物包含表达低水平的cd28或其他内源信号传导分子的cd3 细胞。在一些实施方案中，输入组合物包含呈cd28阴性或呈其他内源信号传导分子阴性的cd3 细胞。在一些实施方案中，包含结合分子的颗粒(例如珠)(例如所提供的珠缀合试剂，例如抗id缀合的珠或bcma缀合的珠)刺激表达低水平的cd28的细胞或呈cd28阴性的细胞的激活和/或扩增。在特定实施方案中，输入组合物是或包括原代人t细胞。在一些实施方案中，输入组合物是或包括富集的cd4 t细胞。在一些实施方案中，输入组合物是或包括富集的cd8 t细胞。在某些实施方案中，输入组合物包含cd4 细胞和cd8 细胞。在特定实施方案中，输入组合物中cd4 细胞与cd8 细胞的比率为大于约50:1，或在或在约25:1与50:1之间、10:与25:1之间、5:1与10:1之间、3:1与5:1之间、2:1与3:1之间、1:1与2:1之间、1:1与1:2之间、2:1与1:2之间、1:2与1:3之间、1:3与1:5之间、1:5与1:10之间、1:10与1:25之间、或1:25与1:50之间(每个都包含端值)。在一些实施方案中，输入组合物包含已经用编码由颗粒(例如珠)的结合分子结合或识别的重组受体(例如car)的一种或多种核酸转导或转染的细胞群，或从已经用编码由颗粒(例如珠)的结合分子结合或识别的重组受体(例如car)的一种或多种核酸转导或转染的细胞衍生的细胞。在一些实施方案中，输入组合物包含已经用编码由结合分子结合或识别的重组受体的一种或多种核酸转导或转染的细胞群，或从已经用编码由结合分子结合或识别的重组受体的一种或多种核酸转导或转染的细胞衍生的细胞。在特定实施方案中，来自输入组合物的细胞已经通过本文(例如在第iii节中)所述的任何方法转染或转导。在某些实施方案中，所述一种或多种核酸已经用如本文(例如在第iii节中)所述的病毒转染到细胞中。在一些实施方案中，所述一种或多种核酸已经用如本文(例如在第iii节中)所述的非病毒质粒(例如附加体或转座子)转染到细胞中。在特定实施方案中，输入组合物包含在细胞表面表达由颗粒(例如珠)的结合分子结合或识别的重组受体(例如car)的细胞。在特定实施方案中，输入组合物包含表达重组受体(例如car)的细胞，所述细胞例如是从本文(例如在第iii节中)所述的任何方法衍生的一种。在特定实施方案中，输入组合物最初不包含表达重组受体(例如car)的细胞。在一些实施方案中，至少在用包含表达由结合分子结合或识别的重组受体的基因的一种或多种核酸对细胞的转染或转导的一部分期间，将最初不包含表达重组受体的细胞的输入组合物的细胞与包含结合分子的颗粒(例如珠)接触、与包含结合分子的颗粒(例如珠)一起孵育或用包含结合分子的颗粒(例如珠)处理。在一些实施方案中，如本文(例如在第iii节中)所述进行转染或转导。在一些实施方案中，在与结合分子的孵育的至少一部分期间，在将核酸引入细胞中时，重组受体在其能够与结合分子相互作用的细胞表面上表达。在特定实施方案中，进行转染或转导而无需任何先前的扩增、激活和/或分离步骤。在某些实施方案中，在转染或转导之前，不将细胞与一种或多种多克隆刺激分子一起孵育、用一种或多种多克隆刺激分子处理或与一种或多种多克隆刺激分子接触，所述一种或多种多克隆刺激分子能够激活tcr复合物的一种或多种组分的一种或多种细胞内信号传导结构域。在特定实施方案中，在转导或转染之前，不将细胞与为抗cd3和抗cd28抗体的一种或多种多克隆刺激分子接触。在某些实施方案中，输入组合物包含表达由结合分子结合或识别的重组受体(例如car)的细胞和不表达由结合分子结合或识别的重组受体(例如car)的细胞。在一些实施方案中，将输入组合物的细胞用包含结合分子的颗粒(例如珠)处理、与包含结合分子的颗粒(例如珠)接触或与包含结合分子的颗粒(例如珠)一起孵育将刺激表达重组受体(例如car)的细胞的激活和/或扩增，但将不会刺激不表达重组受体的细胞的激活和/或扩增。在某些实施方案中，将输入组合物的细胞用包含结合或识别重组受体的结合分子的颗粒(例如珠)处理、与包含结合或识别重组受体的结合分子的颗粒(例如珠)接触或与包含结合或识别重组受体的结合分子的颗粒(例如珠)一起孵育将以比表达重组受体的细胞更低的程度刺激不表达重组受体的细胞的激活和/或扩增。在特定实施方案中，输入组合物的细胞的一部分表达或含有编码重组受体(例如car)的异源dna。在某些实施方案中，小于0.01％、小于0.1％、小于1％、小于5％、小于10％、小于20％、小于25％、小于30％、小于35％、小于40％、小于45％、小于50％、小于55％、小于60％、小于65％、小于70％、小于80％、或小于90％的细胞表达或包含含有编码重组受体的基因的一种或多种核酸。可以通过本领域中已知的任何手段来鉴定表达重组受体或包含编码重组受体的异源dna的细胞，所述手段是例如但不限于在细胞中检测编码重组受体的mrna，直接检测异源受体，例如，通过检测与重组受体结合的标记探针或抗体的结合，或通过检测由异源dna编码的替代标记。在一些实施方案中，通过检测替代标记来鉴定表达重组受体的细胞。在某些实施方案中，替代标志是截短的egfr多肽。在特定实施方案中，输入细胞是或包括在与颗粒(例如珠)接触之前用少量的病毒粒子(例如珠)、低的病毒载体粒子(例如珠)拷贝与细胞的比率、和/或低的感染单位(iu)转染和/或转导的细胞。在特定实施方案中，输入细胞(例如与含有结合分子的颗粒(例如珠)接触、与含有结合分子的颗粒(例如珠)一起孵育、和/或用含有结合分子的颗粒(例如珠)处理的细胞)是已经用比通过多克隆刺激(例如包被有抗cd3和/或抗cd28抗体的颗粒)扩增和/或富集的输入细胞更低量的病毒粒子、更低的病毒载体粒子(例如珠)拷贝与细胞的比率、和/或更低的iu转导的细胞。例如，在一些实施方案中，与含有结合分子的颗粒(例如珠)一起孵育的输入组合物是由用比通过多克隆刺激扩增和/或富集的输入组合物少了或少了至少0.5个、1个、2个、3个、4个、5个、10个、15个、20个、30个、40个、50个或60个iu/细胞转导的细胞生成。在一些实施方案中，与含有结合分子的颗粒(例如珠)一起孵育的输入组合物是由用比通过多克隆刺激扩增和/或富集的输入组合物小了或小了至少1x105iu/ml、5x105iu/ml、1x106iu/ml、5x106iu/ml、6x106iu/ml、7x106iu/ml、8x106iu/ml、9x106iu/ml、或1x107iu/ml的病毒载体粒子(例如珠)滴度转导的细胞生成。在特定实施方案中，用高iu/细胞来转导细胞将导致高的转导效率，但是在一些实施方案中，也可能导致具有高载体拷贝数(vcn)的转染细胞，这可能存在安全风险并且可能不符合监管标准。在特定实施方案中，降低转导细胞所用的iu/细胞将降低转导效率，但将降低vcn。在特定实施方案中，增加转导细胞所用的iu/细胞将增加转导效率，但也将增加vcn。在特定实施方案中，将来自输入组合物的细胞与包含结合分子的颗粒(例如珠)一起孵育、与包含结合分子的颗粒(例如珠)接触或用包含结合分子的颗粒(例如珠)处理是在用于刺激、扩增和/或激活细胞的条件下进行，所述条件可以包括以下中的一种或多种：特定培养基、温度、氧含量、二氧化碳含量、时间、药剂(例如营养素)、氨基酸、抗生素、离子和/或刺激因子(例如细胞因子、趋化因子)、抗原、结合配偶体、融合蛋白、重组可溶性受体和任何其他设计为激活细胞的药剂。在一些实施方案中，输入组合物的细胞不表达重组受体(例如car)，并且在输入组合物的细胞与包含编码重组受体的基因的一种或多种核酸接触时，将它们与包含结合分子的颗粒(例如珠)一起孵育、与包含结合分子的颗粒(例如珠)接触、或用包含结合分子的颗粒(例如珠)处理。在某些实施方案中，颗粒(例如珠)的结合分子结合或识别由基因编码的重组受体。在一些实施方案中，在病毒粒子中递送所述一种或多种核酸。在特定实施方案中，所述一种或多种核酸是附加型载体。在一些实施方案中，所述一种或多种核酸是转座子。在某些实施方案中，在所述一种或多种核酸接触输入组合物的细胞的至少部分时间中，将输入组合物的细胞用包含结合分子的颗粒(例如珠)处理、与包含结合分子的颗粒(例如珠)一起孵育、或与包含结合分子的颗粒(例如珠)接触。在特定实施方案中，使细胞与如本文(例如在第iii节中)所述的一种或多种核酸接触。在一些实施方案中，已经用包含编码重组受体(例如car)的基因的一种核酸转染或转导输入组合物的细胞；输入组合物包含表达重组受体(例如car)的细胞；并且将细胞与包含结合或识别重组受体的结合分子的颗粒(例如珠)接触、与包含结合或识别重组受体的结合分子的颗粒(例如珠)一起孵育或用包含结合或识别重组受体的结合分子的颗粒(例如珠)处理。在一些实施方案中，在转导或转染细胞之后，将输入组合物的细胞用包含结合分子的颗粒(例如珠)处理、与包含结合分子的颗粒(例如珠)一起孵育、或与包含结合分子的颗粒(例如珠)接触。在一些实施方案中，在用如本文(例如在第iii节中)所述的一种或多种核酸转导或转染细胞之后，将输入组合物的细胞用包含结合分子的颗粒(例如珠)处理、与包含结合分子的颗粒(例如珠)一起孵育、或与包含结合分子的颗粒(例如珠)接触。在特定实施方案中，在将输入组合物的细胞与所述一种或多种核酸接触之后的约1分钟内、约5分钟内、约30分钟内、约1小时内、约2小时内、约4小时内、约6小时内、约8小时内、约12小时内、约24小时内、约2天内、约3天内、约4天内、约5天内、约6天内、约1周内、约2周内、约3周内、约4周内、约5周内或约6周内，立即将所述细胞用包含结合分子的颗粒(例如珠)处理、与包含结合分子的颗粒(例如珠)一起孵育、或与包含结合分子的颗粒(例如珠)接触。在一些实施方案中，将输入组合物的细胞用包含编码重组受体(例如，如在第iii节中所述)的基因的一种或多种核酸进行转导或转染，并且随后将细胞低温冷冻并在解冻和扩增细胞之前储存一段时间。在一些实施方案中，已经将输入组合物的细胞低温冷冻，并且在将细胞解冻之后的或之后约1分钟、5分钟、30分钟、1小时、2小时、4小时、6小时、8小时、12小时、24小时、2天、3天、4天、5天、6天、1周、2周、3周、4周、5周、或6周内，将细胞与包含结合分子的颗粒(例如珠)接触、与包含结合分子的颗粒(例如珠)一起孵育、或用包含结合分子的颗粒(例如珠)处理。在一些实施方案中，将输入组合物的细胞与包含结合分子的颗粒(例如珠)接触、与包含结合分子的颗粒(例如珠)一起孵育、或用包含结合分子的颗粒(例如珠)处理是在容器(例如细胞培养皿、细胞培养孔或袋)中进行的。在一些实施方案中，以从在或在约100:1至1:100、50:1至1:50、25:1至1:25、10:1至1:10、5:1至1:5、3:1至1:3、或2:1至1:2的输入组合物的总细胞与颗粒(例如珠)的比率，将输入组合物的细胞与颗粒(例如珠)接触、与颗粒(例如珠)一起孵育、或用颗粒(例如珠)处理。在特定实施方案中，所述比率为从或从约1:0.1至约1:5。在一些实施方案中，输入组合物的总细胞与颗粒(例如珠)的比率为约1:1。在一些实施方案中，将来自输入组合物的在或在约102个与1012个之间、103个与1010个之间、104个与109个之间、103个与106个之间、104个与108个之间、102个与104个之间、103个与105个之间、104个与106个之间、105个与107个之间、或106个与108个之间(每个都包含端值)的细胞与包含结合分子的颗粒(例如珠)接触、与包含结合分子的颗粒(例如珠)一起孵育、或用包含结合分子的颗粒(例如珠)处理。在某些实施方案中，将来自输入组合物的少于约102个、或者在或在约102个与103个之间、103个与104个之间、104个与105个之间、105个与106个之间、106个与107个之间、107个与108个之间、108个与109,109个与1010个之间、1010个与1011个之间、或1011个与1012个之间(每个都包含端值)的细胞与包含结合分子的颗粒(例如珠)接触、与包含结合分子的颗粒(例如珠)一起孵育、或用包含结合分子的颗粒(例如珠)处理。在一些实施方案中，用足够量的包含结合分子的颗粒(例如珠)进行与输入组合物的细胞的孵育或接触，以允许结合分子与输入组合物中的一种或多种细胞结合和/或以诱导输入组合物中的一种或多种细胞的刺激、激活和/或增殖。取决于每个珠而言结合分子的特定量、特定抗原、输入组合物的细胞来源以及在熟练技术人员水平内的其他因素，可以凭经验确定颗粒(例如珠)与输入组合物的细胞的特定数量或比率。在一些实施方案中，向输入组合物的细胞中添加的颗粒(例如珠)的量是提供在孵育或接触期间输入组合物中的每个细胞而言在或在约1个与1012个之间的结合分子的量，例如提供在孵育或接触期间输入组合物中的每个细胞而言在或在约102个与1010个之间的结合分子、103个与108个之间的结合分子、104个与106个之间的结合分子、1个与102个之间的结合分子、102个与103个之间的结合分子、103个与104个之间的结合分子、104个与105个之间的结合分子、105个与106个之间的结合分子、105个与106个之间的结合分子、106个与107个之间的结合分子、107个与108个之间的结合分子、109个与1010个之间的结合分子、1010个与1011个之间的结合分子、或1011个与1012个之间的结合分子(每个都包含端值)的量。在一些实施方案中，向输入组合物的细胞中添加的颗粒(例如珠)的量是在孵育或接触期间为输入组合物中的每个细胞提供在约104个与约106个之间的结合分子的量。在一些实施方案中，在孵育或接触期间，颗粒(例如珠)的量含有对于输入组合物中的每个细胞而言约105个结合分子。在一些实施方案中，在孵育或接触期间向输入组合物中添加的包含结合分子的颗粒(例如珠)的量是对于在孵育或接触期间在输入组合物中的每个细胞而言含有在或在约0.0001pg与约10pg之间、0.001pg与1pg之间、0.001pg与1pg之间、0.001pg与0.1pg之间、0.005pg与0.05pg之间、0.005pg与0.02pg之间、或0.01pg与0.05pg之间的结合分子(每个都包含端值)的颗粒(例如珠)的量。在一些实施方案中，向输入组合物的细胞中添加的颗粒(例如珠)的总量是提供在或在约0.0001μg与10μg之间、0.001μg与1μg之间、0.001μg与1μg之间、0.001μg与0.1μg之间、0.005μg与0.05μg之间、0.005μg与0.02μg之间、或0.01μg与0.05μg之间的结合分子(每个都包含端值)的量。在一些实施方案中，在孵育或接触期间向输入组合物中添加的包含结合分子的颗粒(例如珠)的量是对于在孵育或接触期间在输入组合物中的每个细胞而言含有至少10-20mol、至少10-19mol、至少10-18mol、至少10-17mol、至少10-16mol、至少10-15mol、至少10-14mol、至少10-13mol、至少10-12mol、至少10-11mol、或至少10-10mol结合分子的颗粒(例如珠)的量。在一些实施方案中，对于在孵育或接触期间在输入组合物中的每个细胞而言，所述量含有在或在约10-21mol与10-10mol之间、10-20mol与10-18mol之间、10-19mol与10-17mol之间、或10-21mol与10-19mol之间的结合分子(每个都包含端值)。在一些实施方案中，向输入组合物的细胞中添加的颗粒(例如珠)的总量是提供至少10-16mol、至少10-15mol、至少10-14mol、至少10-13mol、至少10-12mol、至少10-11mol、至少10-10mol、至少10-9mol、至少10-8mol、至少10-7mol、至少10-6mol、至少10-5mol、至少10-4mol、至少10-3mol、至少10-2mol、至少10-1mol、或至少1mol结合分子的量。在一些实施方案中，将包含结合分子的颗粒(例如珠)与输入组合物的接触或孵育是在以下体积中进行，所述体积是在或在约0.01ml与100ml之间，例如0.01ml与50ml之间、0.01ml与25ml之间、0.01ml与10ml之间、0.01ml与5ml之间、0.01ml与1ml之间、0.01ml与0.5ml之间、0.01ml与0.1ml之间、0.01ml与0.05ml之间、0.05ml与100ml之间、0.05ml与50ml之间、0.05ml与25ml之间、0.05ml与10ml之间、0.05ml与5ml之间、0.05ml与1ml之间、0.05ml与0.5ml之间、0.05ml与0.1ml之间、0.1ml与100ml之间、0.1ml与50ml之间、0.1ml与25ml之间、0.1ml与10ml之间、0.1ml与5ml之间、0.1ml与1ml之间、0.1ml与0.5ml之间、0.5ml与100ml之间、0.5ml与50ml之间、0.5ml与25ml之间、0.5ml与10ml之间、0.5ml与5ml之间、0.5ml与1ml之间、1ml与100ml之间、1ml与50ml之间、1ml与25ml之间、1ml与10ml之间、1ml与5ml之间、5ml与100ml之间、5ml与50ml之间、5ml与25ml之间、5ml与10ml之间、10ml与100ml之间、10ml与50ml之间、10ml与25ml之间、25ml与100ml之间、25ml与50ml之间、或50ml与100ml之间，每个都包含端值。在一些实施方案中，所述体积由溶液(如培养基或药学上可接受的缓冲液)提供。在一些实施方案中，包含结合分子的颗粒(例如珠)是来自颗粒(例如珠)的组合物，所述颗粒(例如珠)具有至少0.001μg/ml、至少0.01μg/ml、至少0.1μg/ml、至少0.5μg/ml、至少1μg/ml、至少1.5μg/ml、至少2μg/ml、至少3μg/ml、至少4μg/ml、至少5μg/ml、至少6μg/ml、至少7μg/ml、至少8μg/ml、至少9μg/ml、至少10μg/ml、至少50μg/ml、至少100μg/ml、至少500μg/ml、至少1mg/ml、或至少10mg/ml的结合分子浓度。在一些实施方案中，颗粒的组合物含有在或在约5x107个与1x1010个之间的颗粒或珠/ml，包含端值。在特定实施方案中，包含结合分子的颗粒(例如珠)是来自颗粒(例如珠)的组合物，所述颗粒(例如珠)具有在或在约0.001μg/ml至10mg/ml之间、0.001μg/ml与1μg/ml之间、0.001μg/ml与1μg/ml之间、0.001μg/ml与0.1μg/ml之间、0.01μg/ml与1μg/ml之间、1μg/ml与10μg/ml之间、0.5μg/ml与5μg/ml之间、或1μg/ml与5μg/ml之间的结合分子浓度。在一些实施方案中，颗粒的组合物含有在或在约5x107个与1x1010个之间、1x108个与5x109个之间、或4x108个与4x109个之间的颗粒或珠/ml，每个都包含端值。在某些实施方案中，在孵育或接触期间向输入组合物中添加的包含结合分子的颗粒(例如珠)的量是提供10-13m、至少10-12m、至少10-11m、至少10-10m、至少10-9m、至少10-8m、至少10-7m、至少10-6m、至少10-5m、至少10-4m、至少10-3m、至少10-2m、至少0.1m、至少1m、或至少10m结合分子浓度的颗粒(例如珠)的量。在一些实施方案中，在孵育或接触期间向输入组合物中添加的包含结合分子的颗粒(例如珠)的量是提供在或在约10-10m与10-3m之间、10-9m与10-6m之间、10-10m与10-7m之间、或10-9m与约10-6m之间(包含端值)的浓度的颗粒(例如珠)的量。在特定实施方案中，将来自输入组合物的细胞与包含结合分子的颗粒(例如珠)接触、与包含结合分子的颗粒(例如珠)一起孵育、或用包含结合分子的颗粒(例如珠)处理，持续至少或至少约2小时、4小时、6小时、12小时、24小时、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、3周、或4周。在特定实施方案中，将来自输入组合物的细胞与包含结合分子的颗粒(例如珠)接触、与包含结合分子的颗粒(例如珠)一起孵育、或用包含结合分子的颗粒(例如珠)处理，持续少于或少于约30分钟、1小时、2小时、6小时、12小时、1天、2天、3天、4天、5天、6天、或少于或约12天。在一些实施方案中，将来自输入组合物的细胞与包含结合分子的颗粒(例如珠)接触、与包含结合分子的颗粒(例如珠)一起孵育、或用包含结合分子的颗粒(例如珠)处理，持续在或在约1天与约14天之间、3天与7天之间、或4天与6天之间(包含端值)。在一些实施方案中，将来自输入组合物的细胞与包含结合分子的颗粒(例如珠)接触、与包含结合分子的颗粒(例如珠)一起孵育、或用包含结合分子的颗粒(例如珠)处理，持续约5天。在某些实施方案中，将包含结合分子的颗粒(例如珠)与来自输入组合物的细胞(例如包含表达重组受体(例如car)的细胞)接触或一起孵育，持续扩增输入组合物的一种或多种细胞(例如扩增输入组合物的表达重组受体的细胞)的时间量。在特定实施方案中，将包含结合分子的颗粒(例如珠)与来自输入组合物的细胞(例如包含表达重组受体(例如car)的细胞)接触或一起孵育，持续长期输入组合物的时间量。在特定实施方案中，将来自输入组合物的细胞(例如包含表达重组受体(例如car)的细胞)在高于室温的温度下与包含结合分子的颗粒(例如珠)一起孵育、与包含结合分子的颗粒(例如珠)接触、或用包含结合分子的颗粒(例如珠)处理，以扩增输入组合物的表达重组受体的细胞。在一些实施方案中，所述处理、孵育或接触是在大于约25℃(例如通常大于或大于约32℃、35℃或37℃)的温度下进行。在一些实施方案中，所述处理、孵育或接触是在或在约37℃±2℃的温度下，例如在或在约37℃的温度下进行。在一些实施方案中，将输入组合物的细胞(例如包含表达重组受体(例如car)的细胞)与颗粒(例如珠)一起孵育、用颗粒(例如珠)处理、或与颗粒(例如珠)接触，所述颗粒(例如珠)含有结合分子以及能够激活tcr复合物的细胞内信号传导结构域的一种或多种另外的药剂(例如刺激剂和/或辅助剂)(例如配体)。在一些实施方案中，所述另外的药剂是附接至颗粒表面的。在某些实施方案中，所述一种或多种另外的药剂是与颗粒(例如珠)分开的。在一些实施方案中，所述一种或多种另外的药剂是一种或多种细胞因子。在特定实施方案中，所述一种或多种另外的药剂是或包括一种或多种重组细胞因子。在一些实施方案中，所述一种或多种细胞因子是人重组细胞因子。在某些实施方案中，所述一种或多种细胞因子结合和/或能够结合由t细胞表达的和/或对t细胞而言内源的受体。在特定实施方案中，所述一种或多种细胞因子是或包括4-α-螺旋束细胞因子家族的一种或多种成员。在一些实施方案中，所述一种或多种细胞因子可以包括但不限于白细胞介素2(il-2)、白细胞介素4(il-4)、白细胞介素7(il-7)、白细胞介素9(il-9)、白细胞介素12(il-12)、白细胞介素15(il-15)、粒细胞集落刺激因子(g-csf)和粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(gm-csf)。在一些实施方案中，所述一种或多种细胞因子是或包括il-2、il-7和il-15中的一种或多种。在一些实施方案中，输入组合物的至少一部分细胞表达car，并且将所述细胞与具有附接的结合分子的颗粒(例如珠)一起孵育、用具有附接的结合分子的颗粒(例如珠)处理、或与具有附接的结合分子的颗粒(例如珠)接触，其中所述结合分子是与car的抗原结合结构域结合的抗独特型抗体或其活性片段。在一些实施方案中，将细胞孵育持续在约3天-7天之间，包含端值。在特定实施方案中，颗粒(例如珠)具有约280μm的直径，颗粒(例如珠)包含约105个拷贝的结合分子(即抗独特型抗car抗体)/颗粒，并且将细胞以约1:1的颗粒(例如珠):细胞的比率与细胞孵育、接触和/或用其处理。在一些实施方案中，颗粒(例如珠)具有约450μm的直径，颗粒(例如珠)包含约在约1x106个与约2x106个拷贝之间的抗独特型抗car抗体/颗粒，并且将细胞以约1:1的颗粒(例如珠):细胞的比率与细胞孵育、接触和/或用其处理。特定的实施方案涉及扩增细胞的方法，所述方法包括将包含细胞的输入组合物与颗粒(例如珠)一起孵育，所述细胞表达具有特异性地结合或识别bcma的抗原结合结构域的car，所述颗粒(例如珠)包含结合或识别car的结合分子。在一些实施方案中，结合分子是包含人bcma细胞外结构域和c末端fc结构域的融合多肽。在一些实施方案中，将细胞孵育持续在约3天-7天之间。在特定实施方案中，颗粒(例如珠)具有约280μm的直径，颗粒(例如珠)包含约105个拷贝的结合分子(即bcma融合多肽)/颗粒，并且将细胞以约1:1的颗粒(例如珠):细胞的比率与细胞孵育、接触和/或用其处理。在一些实施方案中，颗粒(例如珠)具有约450μm的直径，颗粒(例如珠)包含约在约1x106个与约2x106个拷贝之间的结合分子(即bcma融合多肽)/颗粒，并且将细胞以约1:1的颗粒(例如珠):细胞的比率与细胞孵育、接触和/或用其处理。在特定实施方案中，将来自输入组合物的细胞与包含结合分子的颗粒(例如珠)接触、与包含结合分子的颗粒(例如珠)一起孵育、或用包含结合分子的颗粒(例如珠)处理，持续进行长期刺激的延长时间段，例如超过10天。在一些实施方案中，将表达重组受体的细胞与含有结合分子的颗粒或珠一起孵育(例如连续地或在没有破坏的情况下孵育)持续至少10天、11天、12天、13天、14天、15天或16天。在一些方面，为孵育选择的时间长度是在孵育终止或结束时组合物细胞的一种或多种功能或活性展现出长期刺激的细胞的特征或对抗原具有延长暴露的细胞的特征的时间。在一些实施方案中，将表达重组受体的细胞与颗粒或珠一起孵育，以进行长期刺激方法，例如以模拟长期刺激的细胞或对抗原具有延长暴露的细胞的特征。输出组合物的示例性特征在特定实施方案中，使输入组合物的细胞与包含结合分子的颗粒(例如，珠)(例如所提供的珠缀合的试剂，例如抗id缀合的珠或bcma缀合的珠)接触导致以下输出组合物，所述输出组合物包含与输入组合物的相应细胞不同的至少一种特性，例如总细胞数、表达重组受体的细胞部分或亚组、细胞增殖速率、和/或基因(例如激活标记或耗竭标记)的表达。在一些实施方案中，所述方法导致表达由结合分子识别的嵌合受体(如car)的细胞的增殖、激活、刺激、细胞因子释放或其他功能结果(例如激活标记上调或细胞因子释放或产生)。在一些方面，在此类细胞中以类似于或大于通过将细胞与刺激t细胞增殖的药剂和/或条件(例如抗cd3/cd28珠和/或交联的抗cd3)一起孵育而诱导的程度诱导这种增殖或其他功能性应答或读数。在一些实施方案中，从输出组合物中除去包含结合分子的颗粒(例如珠)。在一些实施方案中，颗粒(例如珠)是可磁化的或磁反应性的，例如顺磁性或超顺磁性颗粒(例如珠)。在一些实施方案中，颗粒(例如珠)是链霉亲和素寡聚物。从细胞中除去颗粒(例如珠)(例如珠颗粒(例如珠)或可磁化颗粒)的方法是已知的。在一些实施方案中，可以使用竞争性非标记抗体，例如，所述竞争性非标记抗体与结合分子结合并改变结合分子对细胞上的结合分子重组受体的亲和力，从而允许结合分子以及因此颗粒的温和脱离。在一些情况下，在脱离之后，竞争性抗体可以保持与颗粒的结合分子缔合，然而未反应的未标记的抗体被洗掉或可以被洗掉，并且细胞不含抗体和结合分子。这样的试剂的例子是detacabead(friedl等人1995；entschladen等人1997)。在一些实施方案中，可以在可切割接头(例如dna接头)的存在下除去颗粒(例如珠颗粒)，由此使颗粒结合的抗体缀合至接头(例如，cellection、dynal)。在一些情况下，接头区提供了可切割位点，以在分离之后例如通过添加dnase或其他释放缓冲液从细胞中除去颗粒(例如珠颗粒)。在一些实施方案中，还可以采用其他酶促方法从细胞中释放颗粒(例如珠颗粒)。在一些实施方案中，颗粒(例如珠颗粒或可磁化颗粒)是可生物降解的。在一些实施方案中，将与包含结合分子的颗粒(例如珠)一起孵育、与包含结合分子的颗粒(例如珠)接触、或用包含结合分子的颗粒(例如珠)处理的、来自输出组合物的细胞与如下输出组合物进行比较，所述输出组合物衍生自相同的输入组合物，即具有相同细胞组成的、与一种或多种多克隆刺激分子一起孵育、用一种或多种多克隆刺激分子处理、或与一种或多种多克隆刺激分子接触的输入组合物，所述一种或多种多克隆刺激分子能够激活tcr复合物的一种或多种组分的一种或多种细胞内信号传导结构域。在某些实施方案中，所述相同的输入组合物未用包含结合分子的颗粒(例如珠)处理。在一些实施方案中，在与来自输入组合物的、用包含结合分子的颗粒(例如珠)处理的细胞相同的条件下(例如，相同的培养基、相同的温度、相同的持续时间、以及与结合分子的量和/或浓度相同的一种或多种多克隆刺激分子的量和/或浓度)，将来自相同输入组合物的细胞与一种或多种多克隆刺激分子接触、与一种或多种多克隆刺激分子一起孵育、或用一种或多种多克隆刺激分子处理。在一些实施方案中，将相同输入组合物的细胞与附接至表面的一种或多种多克隆刺激分子接触。在某些实施方案中，将相同输入组合物的细胞与附接至颗粒(例如，珠颗粒)表面的一种或多种多克隆刺激分子接触。在特定实施方案中，将相同输入组合物的细胞与为抗cd3和抗cd28抗体的一种或多种多克隆刺激分子接触。在特定实施方案中，输出组合物中的细胞数量比输入组合物中的细胞数量大了至少约1％、至少约5％、至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约95％、至少约100％、至少约2倍、至少约3倍、至少约4倍、至少约5倍、至少约6倍、至少约7倍、至少约8倍、至少约9倍、至少约10倍、至少约15倍、至少约20倍、至少约25倍、至少约50倍、或至少约100倍。在某些实施方案中，与衍生自相同的输入组合物(即具有相同细胞组成的、与一种或多种多克隆刺激分子一起孵育、用一种或多种多克隆刺激分子处理、或与一种或多种多克隆刺激分子接触的输入组合物，所述一种或多种多克隆刺激分子能够激活tcr复合物的一种或多种组分的一种或多种细胞内信号传导结构域，例如为抗cd3和抗cd28抗体)的输出组合物相比，输出组合物在与包含结合分子的颗粒(例如珠)一起孵育、与包含结合分子的颗粒(例如珠)接触、或用包含结合分子的颗粒(例如珠)处理后包含更多数量的细胞。在一些实施方案中，跟与一种或多种多克隆刺激分子一起孵育、用一种或多种多克隆刺激分子处理、或与一种或多种多克隆刺激分子接触的、来自相同输入组合物的输出组合物的细胞的数量相比，用包含结合分子的颗粒(例如珠)处理的、来自输出组合物的细胞的数量大了至少或至少约1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、95％、100％、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、20倍、50倍、或100倍。在特定实施方案中，将输入组合物的细胞用包含结合分子的颗粒(例如珠)处理、与包含结合分子的颗粒(例如珠)接触、或与包含结合分子的颗粒(例如珠)一起孵育，从而产生包含比输入组合物中更大的表达重组受体的细胞亚组的输出组合物，所述结合分子与由输入组合物的细胞亚组表达的重组受体结合或由输入组合物的细胞亚组表达的重组受体识别。在某些实施方案中，表达重组受体的细胞亚组在输出组合物中比在输入组合物中大了至少或至少约1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、95％、100％、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、20倍、50倍、或100倍。在一些实施方案中，跟在与包含结合分子的颗粒(例如珠)一起孵育、与包含结合分子的颗粒(例如珠)接触、或用包含结合分子的颗粒(例如珠)处理之前的输入组合物相比，输出组合物在与包含结合分子的颗粒(例如珠)一起孵育、与包含结合分子的颗粒(例如珠)接触、或用包含结合分子的颗粒(例如珠)处理后包含更大的表达重组受体的细胞亚组。在一些实施方案中，输出组合物中至少或至少约1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、95％、98％、99％或99.9％的细胞表达重组受体。在某些实施方案中，在与一种或多种多克隆刺激分子一起孵育、用一种或多种多克隆刺激分子处理、或与一种或多种多克隆刺激分子接触的、衍生自相同输入组合物的输出组合物中表达重组受体的细胞亚组相比(所述一种或多种多克隆刺激分子能够激活tcr复合物的一种或多种组分，例如为抗cd3和抗cd28抗体)，在与包含结合分子的颗粒(例如珠)一起孵育、与包含结合分子的颗粒(例如珠)接触、或用包含结合分子的颗粒(例如珠)处理后，输出组合物包含更大的表达由结合分子结合或识别的重组受体的细胞亚组。在一些实施方案中，跟与一种或多种多克隆刺激分子一起孵育、用一种或多种多克隆刺激分子处理、或与一种或多种多克隆刺激分子接触的、衍生自相同输入组合物的输出组合物的表达重组受体的细胞亚组相比，用包含结合分子的颗粒(例如珠)处理的细胞的输出组合物中表达重组受体的细胞亚组大了至少或至少约1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、95％、100％、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、20倍、50倍、或100倍。在一些实施方案中，与接受多克隆刺激(例如，与抗cd3和/或抗cd28抗体一起孵育)的输出组合物的细胞相比，在与含有结合分子的颗粒(例如珠)一起孵育、用含有结合分子的颗粒(例如珠)处理，和/或与含有结合分子的颗粒(例如珠)接触的输出组合物中表达重组受体(例如car)的细胞含有至少或至少约1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％,50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、95％、98％、99％或99.9％更低的vcn。在一些实施方案中，输出组合物的car表达细胞的平均vcn为不大于或不大于约10、5、4、2.5、1.5或1。在一些实施方案中，跟在与包含结合分子的颗粒(例如珠)一起孵育、与包含结合分子的颗粒(例如珠)接触、或用包含结合分子的颗粒(例如珠)处理之前的输入组合物相比，输出组合物在与包含结合分子的颗粒(例如珠)一起孵育、与包含结合分子的颗粒(例如珠)接触、或用包含结合分子的颗粒(例如珠)处理后包含更大的激活细胞亚组。在一些实施方案中，所述激活细胞是表达至少一种激活标记(即与激活相关的多核苷酸或多肽)的细胞。在一些实施方案中，所述激活细胞表达至少一种、至少两种、至少三种、至少四种、至少五种、至少六种、至少七种、至少八种、至少九种、至少十种或大于十种不同的激活标记。在一些实施方案中，激活标记是人白细胞抗原-抗原d相关蛋白(hla-dr)、cd25、cd69、cd71、cd40l或4-1bb(cd137)。在特定实施方案中，激活标记是il-2、ifnγ或tnf-α。在一些实施方案中，激活标记是il-2、ifnγ或tnf-α的细胞内表达。在某些实施方案中，激活标记是分泌的il-2、ifnγ或tnf-α。在某些实施方案中，表达激活标记的细胞亚组在输出组合物中比在输入组合物中大了至少或至少约1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、95％、100％、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、20倍、50倍、或100倍。在一些实施方案中，跟在与包含结合分子的颗粒(例如珠)一起孵育、与包含结合分子的颗粒(例如珠)接触、或用包含结合分子的颗粒(例如珠)处理之前的输入组合物相比，输出组合物在与包含结合分子的颗粒(例如珠)一起孵育、与包含结合分子的颗粒(例如珠)接触、或用包含结合分子的颗粒(例如珠)处理后包含更大数量的细胞激活细胞。在一些实施方案中，输出组合物中至少或至少约1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、95％、98％、99％或99.9％的细胞被激活。在一些实施方案中，小于或小于约1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％或70％的细胞被激活。在一些实施方案中，与衍生自相同的输入组合物(即具有相同细胞组成的、与一种或多种多克隆刺激分子一起孵育、用一种或多种多克隆刺激分子处理、或与一种或多种多克隆刺激分子接触的输入组合物，所述一种或多种多克隆刺激分子能够激活tcr复合物的一种或多种组分的一种或多种细胞内信号传导结构域)的输出组合物相比，输出组合物在与包含结合分子的颗粒(例如珠)一起孵育、与包含结合分子的颗粒(例如珠)接触、或用包含结合分子的颗粒(例如珠)处理后包含更小的激活细胞亚组。在一些实施方案中，用包含结合分子的颗粒(例如珠)处理的输出组合物的激活细胞亚组是与一种或多种多克隆刺激分子一起孵育、用一种或多种多克隆刺激分子处理、或与一种或多种多克隆刺激分子接触的、来自相同输入组合物的输出组合物的激活细胞亚组的小于或小于约1％、5％、10％、15％、20％、l25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、95％、99％或99.9％。在特定实施方案中，跟在与包含结合分子的颗粒(例如珠)一起孵育、与包含结合分子的颗粒(例如珠)接触、或用包含结合分子的颗粒(例如珠)处理之前的输入组合物相比，输出组合物的细胞在与包含结合分子的颗粒(例如珠)一起孵育、与包含结合分子的颗粒(例如珠)接触、或用包含结合分子的颗粒(例如珠)处理后更多被激活。在一些实施方案中，当与较少激活的细胞或未激活的细胞相比，细胞表达更高水平的至少一种激活标记时，它们更多被激活。在一些实施方案中，较多激活的细胞以高于较少激活或未激活的细胞的水平表达至少一种、至少两种、至少三种、至少四种、至少五种、至少六种、至少七种、至少八种、至少九种、至少十种或大于十种不同的激活标记。在一些实施方案中，与来自输入组合物的细胞相比，激活细胞表达更大量的以下中的至少一种：人白细胞抗原-抗原d相关蛋白(hla-dr)、cd25、cd69、cd71、cd40l或4-1bb(cd137)。在特定实施方案中，激活细胞表达更高水平的il-2、ifnγ或tnf-α，例如mrna或多肽。在一些实施方案中，激活细胞表达更大量的细胞内il-2、ifnγ或tnf-α。在某些实施方案中，激活细胞分泌更大量的il-2、ifnγ或tnf-α。在某些实施方案中，激活细胞表达以下量的激活标记，所述量比由来自输入组合物的细胞表达的激活标记的量大了至少或至少约1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、95％、100％、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、20倍、50倍、或100倍。在一些实施方案中，与衍生自相同的输入组合物(即具有相同细胞组成的、与一种或多种多克隆刺激分子一起孵育、用一种或多种多克隆刺激分子处理、或与一种或多种多克隆刺激分子接触的输入组合物，所述一种或多种多克隆刺激分子能够激活tcr复合物的一种或多种组分的一种或多种细胞内信号传导结构域)的输出组合物相比，输出组合物在与包含结合分子的颗粒(例如珠)一起孵育、与包含结合分子的颗粒(例如珠)接触、或用包含结合分子的颗粒(例如珠)处理后包含更少被激活的细胞。在一些实施方案中，用包含结合分子的颗粒(例如珠)处理的输出组合物的细胞中至少一种激活标记的表达是与一种或多种多克隆刺激分子一起孵育、用一种或多种多克隆刺激分子处理、或与一种或多种多克隆刺激分子接触的、来自相同输入组合物的输出组合物的细胞中至少一种激活标记的表达的小于或小于约1％、5％、10％、15％、20％、l25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、95％、99％或99.9％。在一些实施方案中，跟在与包含结合分子的颗粒(例如珠)一起孵育、与包含结合分子的颗粒(例如珠)接触、或用包含结合分子的颗粒(例如珠)处理之前的输入组合物中表达重组受体的细胞相比，更大的来自输出组合物的表达重组受体(其由结合分子识别)的细胞亚组在与包含结合分子的颗粒(例如珠)一起孵育、与包含结合分子的颗粒(例如珠)接触、或用包含结合分子的颗粒(例如珠)处理后被激活。在某些实施方案中，与来自输入组合物的表达重组受体的激活细胞亚组相比，在输出组合物中的被激活的表达重组受体的细胞亚组大了至少或至少约1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、95％、100％、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、20倍、50倍、或100倍。在一些实施方案中，跟在与包含结合分子的颗粒(例如珠)一起孵育、与包含结合分子的颗粒(例如珠)接触、或用包含结合分子的颗粒(例如珠)处理之前的输入组合物相比，输出组合物的表达重组受体(其由结合分子结合或识别)的细胞在与包含结合分子的颗粒(例如珠)一起孵育、与包含结合分子的颗粒(例如珠)接触、或用包含结合分子的颗粒(例如珠)处理后包含更大的激活细胞亚组。在一些实施方案中，来自输出组合物的表达重组受体的细胞的至少或至少约1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、95％、98％、99％或99.9％被激活。在一些实施方案中，表达重组受体的细胞的小于或小于约1％、5％、10％、15％、20％、l25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％被激活。在一些实施方案中，与来自衍生自相同的输入组合物(即具有相同细胞组成的、与一种或多种多克隆刺激分子一起孵育、用一种或多种多克隆刺激分子处理、或与一种或多种多克隆刺激分子接触的输入组合物，所述一种或多种多克隆刺激分子能够激活tcr复合物的一种或多种组分的一种或多种细胞内信号传导结构域)的输出组合物的表达重组受体的细胞相比，在与包含结合分子的颗粒(例如珠)一起孵育、与包含结合分子的颗粒(例如珠)接触、或用包含结合分子的颗粒(例如珠)处理后，较小的来自输出组合物的表达重组受体(其由结合分子结合或识别)的细胞亚组被激活。在一些实施方案中，跟与一种或多种多克隆刺激分子一起孵育、用一种或多种多克隆刺激分子处理、或与一种或多种多克隆刺激分子接触的、来自衍生自相同输入组合物的输出组合物的表达重组受体的细胞亚组相比，被激活的来自输出组合物的表达重组受体的细胞亚组为小于或小于约1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、95％、99％或99.9％。在特定实施方案中，跟在与包含结合分子的颗粒(例如珠)一起孵育、与包含结合分子的颗粒(例如珠)接触、或用包含结合分子的颗粒(例如珠)处理之前来自输入组合物的表达重组受体的细胞相比，输出组合物的表达重组受体(其由结合分子结合或识别)的细胞在与包含结合分子的颗粒(例如珠)一起孵育、与包含结合分子的颗粒(例如珠)接触、或用包含结合分子的颗粒(例如珠)处理后更多被激活。在一些实施方案中，与来自输入组合物的表达重组受体的细胞相比，来自输出组合物的表达重组受体的细胞表达更大量的至少一种激活标记。在特定实施方案中，与来自输入组合物的表达重组受体的细胞相比，来自输出组合物的表达重组受体的细胞表达更大量的以下中的至少一种：人白细胞抗原-抗原d相关蛋白(hla-dr)、cd25、cd69、cd71、cd40l或4-1bb(cd137)。在特定实施方案中，表达重组受体的细胞表达更高水平的il-2、ifnγ或tnf-α。在一些实施方案中，表达重组受体的细胞表达更大量的细胞内il-2、ifnγ或tnf-α。在某些实施方案中，表达重组受体的细胞分泌更大量的il-2、ifnγ或tnf-α。在某些实施方案中，来自输出组合物的表达重组受体的细胞表达以下量的激活标记，所述量比由来自输入组合物的表达重组受体的细胞表达的激活标记的量大了至少或至少约1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、95％、100％、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、20倍、50倍、或100倍。在一些实施方案中，输出组合物包含表达重组受体(由其结合分子结合或识别)的细胞，所述细胞在与包含结合分子的颗粒(例如珠)一起孵育、与包含结合分子的颗粒(例如珠)接触、或用包含结合分子的颗粒(例如珠)处理后与来自衍生自相同的输入组合物(即具有相同细胞组成的、与一种或多种多克隆刺激分子一起孵育、用一种或多种多克隆刺激分子处理、或与一种或多种多克隆刺激分子接触的输入组合物，所述一种或多种多克隆刺激分子能够激活tcr复合物的一种或多种组分的一种或多种细胞内信号传导结构域)的输出组合物的表达重组受体的细胞相比更少被激活。在一些实施方案中，来自用包含结合分子的颗粒(例如珠)处理的输出组合物的表达重组受体的细胞中至少一种激活标记的表达是与一种或多种多克隆刺激分子一起孵育、用一种或多种多克隆刺激分子处理、或与一种或多种多克隆刺激分子接触的、来自衍生自相同输入组合物的输出组合物的表达重组受体的细胞中至少一种激活标记的表达的小于或小于约1％、5％、10％、15％、20％、l25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、95％、99％或99.9％。在一些实施方案中，跟来自衍生自相同的输入组合物(即具有相同细胞组成的、在相同条件下与一种或多种多克隆刺激分子一起孵育、用一种或多种多克隆刺激分子处理、或与一种或多种多克隆刺激分子接触的输入组合物，所述一种或多种多克隆刺激分子能够激活tcr复合物的一种或多种组分的一种或多种细胞内信号传导结构域)的输出组合物的表达重组受体的细胞相比，与包含结合分子的颗粒(例如珠)一起孵育、与包含结合分子的颗粒(例如珠)接触、或用包含结合分子的颗粒(例如珠)处理的输出组合物的细胞显示出降低的或更低水平的耗竭。在特定实施方案中，跟来自衍生自相同输入组合物的、与一种或多种多克隆刺激分子一起孵育、用一种或多种多克隆刺激分子处理、或与一种或多种多克隆刺激分子接触的输出组合物的细胞相比，与包含结合分子的颗粒(例如珠)一起孵育、与包含结合分子的颗粒(例如珠)接触、或用包含结合分子的颗粒(例如珠)处理的输出组合物的细胞显示出降低的或更低的耗竭标记表达。在一些实施方案中，耗竭标记是与耗竭相关的多肽，或者是编码与耗竭相关的多肽的多核苷酸。在一些实施方案中，耗竭标记的表达包括耗竭标记多肽的表面表达。在一些实施方案中，耗竭标记是抑制性受体，即当被其相应的配体结合时降低细胞的至少一种免疫或细胞活性的受体。在某些实施方案中，耗竭标记是pd-1、ctla-4、tim-3、lag-3、btla或tigit。在特定实施方案中，与来自与一种或多种多克隆刺激分子接触、用一种或多种多克隆刺激分子处理、或与一种或多种多克隆刺激分子一起孵育的输出组合物的细胞相比，来自与包含结合分子的颗粒(例如珠)接触、用包含结合分子的颗粒(例如珠)处理、或与包含结合分子的颗粒(例如珠)一起孵育的输出组合物的细胞的至少一种耗竭标记的表达为小于或小于约1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、95％、99％或99.9％。在特定实施方案中，跟来自衍生自相同输入组合物的、与一种或多种多克隆刺激分子一起孵育、用一种或多种多克隆刺激分子处理、或与一种或多种多克隆刺激分子接触的输出组合物的表达重组受体的细胞相比(所述一种或多种多克隆刺激分子能够激活tcr复合物的一种或多种组分的一种或多种细胞内信号传导结构域)，与包含结合分子的颗粒(例如珠)一起孵育、与包含结合分子的颗粒(例如珠)接触、或用包含结合分子的颗粒(例如珠)处理的输出组合物的表达重组受体的细胞显示出降低的或更低水平的耗竭。在特定实施方案中，跟来自衍生自相同输入组合物的、在相同条件下与一种或多种多克隆刺激分子一起孵育、用一种或多种多克隆刺激分子处理、或与一种或多种多克隆刺激分子接触的输出组合物的表达重组受体的细胞相比(所述一种或多种多克隆刺激分子能够激活tcr复合物的一种或多种组分的一种或多种细胞内信号传导结构域)，与包含结合分子的颗粒(例如珠)一起孵育、与包含结合分子的颗粒(例如珠)接触、或用包含结合分子的颗粒(例如珠)处理的输出组合物的表达重组受体的细胞显示出降低的或更低的耗竭标记表达。在特定实施方案中，与来自与一种或多种多克隆刺激分子接触、用一种或多种多克隆刺激分子处理、或与一种或多种多克隆刺激分子一起孵育的输出组合物的表达重组受体的细胞相比，来自与包含结合分子的颗粒(例如珠)接触、用包含结合分子的颗粒(例如珠)处理、或与包含结合分子的颗粒(例如珠)一起孵育的输出组合物的表达重组受体的细胞的至少一种耗竭标记的表达为小于或小于约1％、5％、10％、15％、20％、l25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、95％、99％或99.9％。iii.用于评估长期刺激的方法本文提供了长期刺激方法(本文也称为用于长期刺激的方法)，所述长期刺激方法尤其可用于评估细胞组合物(例如一种细胞组合物)的表型、特征或活性。在一些实施方案中，长期刺激方法是或包括在细胞中刺激重组受体依赖性活性(例如car依赖性活性)的条件下孵育含有表达重组受体(如car)的细胞的细胞组合物，例如输入组合物。在一些方面，细胞组合物(例如输入组合物)含有表达重组受体(例如car)的t细胞，所述重组受体包含特异性地结合或识别抗原的细胞外抗原结合结构域。在一些方面，所述孵育导致含有展现出长期刺激细胞的特征或对抗原具有延长暴露的细胞的特征的细胞的t细胞组合物(例如输出组合物)。在一些实施方案中，长期刺激方法是或包括在细胞中刺激重组受体依赖性活性(例如car依赖性活性)的条件下孵育含有表达重组受体(如car)的细胞的细胞组合物，例如输入组合物。在此类实施方案中，重组受体依赖性活性是对重组受体(例如car)的刺激具有特异性的活性，所述刺激例如是通过以下进行：由重组受体(例如car)的抗原结合结构域识别或者特异性地刺激重组受体的抗原或其他药剂的存在。在一些方面，细胞组合物(例如输入组合物)含有表达重组受体(例如car)的t细胞，所述重组受体包含特异性地结合或识别抗原的细胞外抗原结合结构域。在一些方面，所述孵育导致含有展现出长期刺激细胞的特征或对抗原具有延长暴露的细胞的特征的细胞的t细胞组合物(例如输出组合物)。在某些实施方案中，所述孵育在没有中断的情况下连续地进行。在某些实施方案中，本文提供的用于长期刺激的方法尤其可用于鉴定当在体内给予时可能具有期望的特征(例如维持或延长的持久性、活力或活性)的细胞组合物。在一些实施方案中，在两种或更多种不同的细胞组合物上进行所述方法，以鉴定例如当在体内给予细胞时可以增强或延长持久性、活性或活力、或者减少耗竭或分化的差异。在一些实施方案中，此类差异可以包括但不限于制造过程的各个方面，例如在工程化过程的不同步骤中使用的时间安排、条件或试剂；重组受体的差异(例如，用于递送重组受体的构建体或载体中的氨基酸序列差异、或不同的基因递送方法)；细胞差异(例如，细胞类型或亚型或细胞来源的差异，例如获得细胞的样品或受试者的差异)；不同的存储条件(例如，先前冻融循环的次数、存储温度、存储介质的配方、存储容器、冷冻保鲜剂或细胞密度)；或测定条件(例如在孵育期间对照或测试化合物的存在或不存在)。在一些实施方案中，结合分子是由重组受体结合或识别的抗原(例如重组抗原或其片段)。在某些实施方案中，结合分子是结合或识别重组受体的抗id。在一些实施方案中，此类特征可以包括活力、活性或持久性降低或者耗竭或分化增加的证据。在各种实施方案中，在没有促进细胞分裂、生长、扩增或激活的另外的药剂的情况下，在培养基的存在下将细胞与结合分子一起孵育。在一些实施方案中，在没有任何另外的操作(例如培养基更换、珠替换、或分割或再铺板细胞)的情况下，将细胞与颗粒一起孵育延长的时间量(例如14天)。特定的实施方案设想，本文提供的长期刺激方法尤其可用于离体模拟当在体内给予至受试者(例如人受试者)时细胞疗法的细胞经历的条件。因此，在一些方面，所提供的测定可用于鉴定当在体内给予时可能具有期望特征(例如但不限于维持或延长的持久性、活力或活性)的细胞组合物。在特定实施方案中，在两种或更多种细胞组合物(例如输入组合物)中进行所述长期刺激方法，以鉴定增加或维持活力、活性或持久性或者增加或维持指示活力、活性或持久性增加的标记(例如生物标记)表达的细胞组合物。在某些实施方案中，在两种或更多种细胞组合物中进行所述长期刺激方法，以鉴定在细胞组合物中的减少或阻止耗竭或分化(例如，分化成衰老状态)或者减少指示耗竭或分化增加的标记的表达的差异。在一些实施方案中，将结合分子附接或缀合至固体表面，例如细胞培养板或培养皿的表面。在特定实施方案中，将结合分子缀合或附接至颗粒(例如珠)。在某些实施方案中，所述方法包括在含有结合分子(例如结合或识别重组受体的结合分子)的颗粒(例如珠)的存在下孵育细胞的步骤。在一些实施方案中，含有结合分子的颗粒(例如珠)是或包括所提供的珠缀合试剂，例如抗id缀合的珠或bcma缀合的珠。在特定实施方案中，将细胞或细胞的组合物与颗粒一起孵育，所述颗粒具有本文(例如在第i节中)所描述的附接的结合分子。在某些实施方案中，颗粒是本文(例如在第i-a节中)所述的颗粒。在某些实施方案中，结合分子是本文(例如在第i-b节中)所述的结合分子。在特定实施方案中，结合分子结合或识别重组受体。在特定实施方案中，将输入组合物与结合分子一起(例如与含有结合分子的颗粒或珠一起)孵育，持续、持续约或持续至少10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天或21天。在各种实施方案中，将输入组合物与结合分子(例如含有结合分子的颗粒或珠)一起孵育，持续在或在约10天与21天之间、12天与18天之间、或14天与16天之间，包含端值。在某些实施方案中，将细胞与结合分子(例如含有结合分子的颗粒或珠)一起孵育，持续、持续约或持续至少14天。在特定实施方案中，在大于室温的温度下将细胞组合物的细胞与结合分子一起孵育。在一些实施方案中，所述孵育是在大于约25℃(例如通常大于或大于约32℃、35℃或37℃)的温度下进行。在一些实施方案中，所述孵育是在或在约37℃±2℃的温度下，例如在或在约37℃的温度下进行。在一些实施方案中，在没有促进细胞(例如t细胞)分裂、生长、扩增或激活的另外的药剂的情况下，在培养基的存在下将细胞与结合分子一起(例如与含有结合分子的颗粒或珠一起)孵育。在一些实施方案中，在不存在任何重组细胞因子的情况下，将细胞与结合分子一起孵育。在特定实施方案中，所述孵育在没有中断的情况下(例如，在没有再铺板、替换培养基、或添加新鲜结合分子等的情况下)发生。在某些实施方案中，所述孵育在静态条件下发生。在特定实施方案中，所述孵育在没有任何灌注、混合、摇摆或摇动的情况下发生。在一些方面，在整个孵育期间存在含有结合分子的颗粒(例如珠)。在某些实施方案中，在孵育期间不更换或替换结合分子。特定的实施方案设想，因为在一些方面，培养基不含有任何重组细胞因子，并且因此在孵育期间存在于培养基中的细胞因子将由细胞例如响应于细胞的重组受体与颗粒的结合分子之间的相互作用而产生。在一些实施方案中，可以将所提供的用于长期刺激的方法用于比较不同的细胞或细胞组合物。例如，在一些实施方案中，可以通过将细胞与结合或识别重组受体的相同结合分子(例如含有相同结合分子的颗粒或珠)一起孵育来比较各自含有表达相同重组受体(例如相同car)的细胞的两种或更多种细胞组合物。在某些实施方案中，所述两种或更多种细胞组合物是通过不同的工程化过程生成的，所述工程化过程例如是涉及不同条件、不同时间安排和持续时间、或不同设备或试剂的过程。在特定实施方案中，在一种或多种测试药剂或化合物(例如怀疑降低耗竭或促进持久性的药剂)的存在下，将细胞组合物与含有结合分子的颗粒(例如珠)一起孵育。在特定实施方案中，可以将细胞组合物与对照或参考细胞组合物进行比较。在一些方面，对照或参考细胞组合物可以包括但不限于不经历任何孵育的细胞组合物、未在含有结合分子的颗粒(例如珠)的存在下孵育的细胞组合物、不含有表达重组受体的细胞的细胞组合物、由不同的工程化过程生成的细胞组合物、和/或在运载体或对照化合物的存在下孵育的细胞组合物。在一些实施方案中，所述长期刺激方法是在一种或多种测试药剂或化合物的存在下进行的。在特定实施方案中，测试药剂或化合物是怀疑在孵育期间或之后改变或影响细胞组合物的细胞(例如表达重组受体的细胞)的一种或多种特征、表型或活性的药剂，或是在孵育期间或之后改变或影响细胞组合物的细胞(例如表达重组受体的细胞)的一种或多种特征、表型或活性的候选物。在一些方面，测试药剂或化合物增加或减少、或者怀疑增加或减少t细胞的一种或多种表型、特征或活性，例如生长、分裂、扩增、分裂、持久性、分化、激活、或耗竭、或活性(例如抗原刺激的活性，包括但不限于细胞裂解活性或细胞因子产生)。在某些实施方案中，测试药剂或化合物是天然的或经化学修饰的多肽、抗体；天然的或经化学修饰的小寡肽；天然的、非天然的或经化学修饰的氨基酸、多核苷酸；天然的或经化学修饰的寡核苷酸、rnai、shrna、sirna、小核苷酸；天然的或经化学修饰的单核苷酸、脂肽、抗微生物剂、小分子或药物分子。在特定实施方案中，可以通过将细胞与结合或识别不同重组受体的结合分子一起(例如与含有不同结合分子的颗粒或珠一起)孵育来比较各自含有表达不同重组受体(例如不同car)的细胞的两种或更多种细胞组合物。在一些实施方案中，输出组合物由经历了长期刺激方法(例如本文所述的长期刺激方法)的全部或部分的细胞构成。在某些实施方案中，在孵育期间的不同时间点评估经历长期刺激方法的细胞。例如，在一些方面，在一个中间时间点(例如在孵育的为、约、至少5％、10％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、75％、80％、90％完成发生的时间点)评估来自一种或多种细胞组合物的细胞的表型、特征或活性。在某些实施方案中，在孵育期间对细胞评估一次、两次、三次、四次、五次、六次、七次、八次、九次、十次或超过十次。在某些实施方案中，在孵育期间的不同间隔(例如为、约或至少6小时、12小时、18小时、24小时、36小时、48小时、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、或8天的间隔)后评估细胞。在一些实施方案中，每天对细胞进行评估。在一些实施方案中，每三天对细胞进行评估。在某些实施方案中，每7天对细胞进行评估。在某些实施方案中，评估输出组合物的细胞(例如经历长期刺激方法的细胞)的活性(例如抗原刺激活性)、表型或特征。在一些实施方案中，并且在完成方法期间或之后(例如在与结合分子一起孵育期间或之后)评估细胞中的抗原刺激活性。在特定实施方案中，将评估结果与在来自不同细胞组合物(例如对照或参考细胞组合物)的细胞中测量的相同或相似活性的评估进行比较。在一些实施方案中，活性是抗原刺激活性。特定的实施方案设想可以通过许多已知合适技术中的任何一种来评估细胞(例如表达重组受体的t细胞)的抗原刺激活性。在一些实施方案中，通过细胞内细胞因子染色来测量、检测和/或定量一种或多种细胞因子的产生。在一些方面，通过流式细胞术的细胞内细胞因子染色(ics)是非常适合于在单细胞水平上研究细胞因子产生的一种技术。在某些方面，ics可用于检测在细胞刺激(例如用表达抗原的细胞或具有缀合的抗原的颗粒(例如珠颗粒))后细胞因子在内质网内的产生和积累，从而允许鉴定对于特定细胞因子的产生呈阳性或阴性的细胞群或基于阈值将高产和低产细胞分离。ics还可以与其他流式细胞术方案结合用于使用细胞表面标记(例如cd4或cd8)进行免疫表型分析以获得特定细胞亚群中的细胞因子产生。用于测量或检测细胞因子产生的其他单细胞技术包括但不限于elispot、有限稀释和t细胞克隆。在一些实施方案中，抗原刺激活性是一种或多种细胞因子的产生。可以响应于抗原刺激而产生的细胞因子可以包括但不限于il-1、il-1β、il-2、sil-2ra、il-3、il-5、il-6、il-7、il-8、il-10、il-12、il-13、il27、il-33、il-35、tnf、tnfα、cxcl2、ccl2、ccl3、ccl5、ccl17、ccl24、pgd2、ltb4、干扰素γ(ifn-γ)、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(gm-csf)、巨噬细胞炎性蛋白(mip)-1a、mip-1b、flt-3l、分形趋化因子和/或il-5。在一些实施方案中，所述一种或多种细胞因子是或包括il-2、ifn-γ或tnf-α中的一种或多种。在一些实施方案中，在与表达抗原的细胞共培养之后或在孵育含有附接的抗原或抗原片段的颗粒(例如珠)之后，通过测量、检测或定量细胞外细胞因子的量或浓度来评估细胞因子分泌。在特定实施方案中，抗原刺激活性是细胞裂解(细胞毒性)活性。在一些实施方案中，通过使组合物的细胞(例如表达重组受体的细胞)与表达由重组受体识别的抗原或表位的靶细胞暴露、一起孵育和/或接触来评估细胞裂解活性。可以通过直接或间接测量随时间的靶细胞数量来测量细胞裂解活性。例如，可以在与重组受体表达细胞一起孵育之前将靶细胞与可检测标记(当靶细胞被裂解时可检测的这样的标记、或仅在存活的靶细胞中可检测的可检测标记)一起孵育。这些读数提供直接或间接的靶细胞数量和/或靶细胞死亡，并且可以在测定期间的不同时间点进行测量。靶细胞数量的减少和/或靶细胞死亡的增加指示细胞的细胞裂解活性。用于进行细胞裂解测定的合适的方法在本领域中是已知的，并且包括但不限于铬-51释放测定、非放射性铬测定、使用荧光染料(如羧基荧光素琥珀酰亚胺酯(cfse)、pkh-2和pkh-26)的流式细胞术测定。在某些实施方案中，在测定期间或之后(例如在与含有结合受体的颗粒(例如珠)一起孵育期间或之后)，评估组合物的细胞(例如表达重组受体的细胞)的一种或多种特征或表型。在一些实施方案中，所述一种或多种特征或表型是激活、耗竭或分化中的一种或多种，或者与激活、耗竭或分化中的一种或多种有关。在某些实施方案中，通过测量、检测或定量一种或多种标记的存在、不存在、量或水平来评估一种或多种表型或特征。在一些实施方案中，与激活、耗竭或分化正相关或负相关的标记(例如生物标记)的表达是或包括评估、测量、确定和/或定量标记在样品中的水平、量或浓度。在某些实施方案中，标记是基因产物，例如使用由基因编码的信息组装、生成和/或合成的任何生物分子，并且可以包括多核苷酸和/或多肽。在某些实施方案中，标记的水平、量或浓度可以转换(例如，归一化)或直接分析(例如，原始的)。在一些实施方案中，标记是蛋白质。在某些实施方案中，标记是由基因编码的多核苷酸(例如mrna)或蛋白质。在特定实施方案中，可以通过任何合适的已知手段来评估、测量、确定和/或定量作为多核苷酸的标记的量或水平。例如，在一些实施方案中，可以通过以下方法来评估、测量、确定和/或定量多核苷酸标记的量或水平：聚合酶链反应(pcr)，包括逆转录酶(rt)pcr、液滴数字pcr、实时和定量pcr方法(包括例如，分子信标(molecularbeacon)、lightuptm、scorpiontm、参见例如，美国专利号5,538,848；5,925,517；6,174,670；6,329,144；6,326,145和6,635,427)；rna印迹；例如逆转录产物和衍生物的dna印迹；基于阵列的方法，包括印迹阵列、微阵列或原位合成阵列；以及测序，例如通过合成测序、焦磷酸测序、双脱氧测序、或通过连接测序；或者本领域中已知的任何其他方法，例如shendure等人,nat.rev.genet.5:335-44(2004)或nowrousian,euk.cell9(9):1300-1310(2010)中所讨论的方法，包括诸如454、abi和测序等特定平台。在特定实施方案中，通过qrt-pcr测量核酸基因产物的水平。在一些实施方案中，qrt-pcr针对每个基因使用三个核酸组，其中所述三个核酸包含一个引物对连同在引物结合的靶核酸区域之间结合的探针—商业上称为测定。在特定实施方案中，同时测量或评估两种或更多种多核苷酸标记的表达。在某些实施方案中，多重pcr(例如多重rt-pcr)评估、测量、确定和/或定量两种或更多种基因产物的水平、量或浓度。在一些实施方案中，将微阵列(例如，和式阵列)用于评估、测量、确定和/或定量两种或更多种基因产物的水平、量或浓度。在一些实施方案中，将微阵列用于评估、测量、确定和/或定量衍生自rna基因产物的cdna多核苷酸的水平、量或浓度。在一些实施方案中，通过对标记mrna或衍生自标记mrna的cdna多核苷酸进行测序来确定一种或多种多核苷酸标记的表达。在一些实施方案中，通过非sanger测序方法和/或下一代测序(ngs)技术进行测序。下一代测序技术的例子包括但不限于大规模平行标记测序(mpss)、polony测序、焦磷酸测序、可逆染料终止子测序、solid测序、离子半导体测序、dna纳米球测序、helioscope单分子测序、单分子实时(smrt)测序、单分子实时(rnap)测序和纳米孔dna测序。在一些实施方案中，ngs技术是rna测序(rna-seq)。在特定实施方案中，通过rna-seq测量、确定和/或定量一种或多种多核苷酸基因产物的表达。rna-seq(也称为全转录组鸟枪测序)确定样品中rna的存在和数量。rna测序方法已经针对最常见的dna测序平台[hiseq系统(illumina)、454genomesequencerflx系统(roche)、appliedbiosystemssolid(lifetechnologies)、iontorrent(lifetechnologies)]进行改编。这些平台需要首先将rna逆转录为cdna。相反，单分子测序仪heliscope(helicosbiosciences)能够使用rna作为测序模板。还已展现了在pacbiors平台上直接进行rna测序的原理论证(pacificbioscience)。在一些实施方案中，通过rna-seq评估、测量、确定和/或定量一种或多种rna基因产物。在一些实施方案中，rna-seq是基于标签的rna-seq或鸟枪rna-seq。在特定实施方案中，标记是蛋白质或其片段。在某些实施方案中，通过本领域已知的任何合适手段来测量一种或多种蛋白质标记。评估、测量、确定和/或定量多种或多种蛋白质标记的水平、量或浓度的合适方法包括但不限于用免疫测定进行检测、基于核酸或基于蛋白质的适体技术、hplc(高精度液相色谱)、肽测序(例如edman降解测序或质谱(如ms/ms)，任选地与hplc偶联)、以及任何前述项的微阵列改编(包括核酸、抗体或蛋白质-蛋白质(即非抗体)阵列)。在一些实施方案中，免疫测定是或包括基于免疫学反应例如通过检测抗体或抗原结合抗体片段与基因产物的结合来检测蛋白质的方法或测定。免疫测定包括但不限于定量免疫细胞化学或免疫组织化学、elisa(包括直接、间接、夹心、竞争性、多重和便携式elisa(参见例如美国专利号7,510,687))、蛋白质印迹(包括一维、两维或更高维印迹或其他色谱手段，任选地包括肽测序)、酶免疫测定(eia)、ria(放射性免疫测定)和spr(表面等离子体共振)。在一些实施方案中，通过流式细胞术测量、检测或定量蛋白质标记。在一些方面，流式细胞术是通过将细胞悬浮在流体流中并使其通过电子检测设备而用于标记检测的基于激光或基于阻抗的生物物理学技术。可以将存在于细胞上的标记进行标记，例如用荧光标记的抗体标记，以通过流式细胞术进行检测。在一些方面，采用流式细胞术来测量、检测或定量细胞群中存在的标记的存在、不存在、量或水平。在一些方面，细胞群可以是细胞组合物的全部或全部活细胞，或者来自细胞组合物的细胞亚组(例如对重组受体呈阳性的细胞：cd4 t细胞或cd8 t细胞)。在特定实施方案中，标记与激活或激活样状态呈正相关或正相关性。在一些实施方案中，标记是或包括cd25、cd26、cd27、cd28、cd30、cd71、cd154、cd40l、cd127、lag3或ki67。在一些实施方案中，标记与耗竭或与耗竭有关的病症呈正相关或正相关性。在特定实施方案中，标记是或包括ctla-4、foxp3、pd-1、tigit、lab-3、2b4、btla、tim3、vista、或cd96中的一种或多种。在一些实施方案中，标记与t细胞的分化相关。在特定实施方案中，标记是或包括cd25、cd45ro、cd56、klrg1、cd95中的一种或多种，和/或cd45ra、cd27、cd28、cd62l和ccr7中的一种或多种。在一些实施方案中，对如下细胞(例如输出组合物的细胞)评估：对选自cd45ra、cd27、cd28、cd62l和ccr7的t细胞激活标记呈表面阳性的细胞；和/或对选自cd25、cd45ro、cd56、klrg1的标记呈表面阴性的细胞；和/或具有低cd95表达的细胞；和/或对选自il-2、ifn-γ、il-4、il-10的细胞因子的细胞内表达呈阴性的细胞。在一些中，对输出组合物评估呈cd45ra 、cd27 、ccr7 和/或cd45ro-的细胞。在一些实施方案中，细胞组合物(例如输出细胞组合物)的细胞显示出在长期刺激方法后(例如，在与含有结合分子的颗粒(例如珠)一起孵育后)经历了延长或长期刺激的细胞的特征。在一些实施方案中，细胞组合物(例如参考或对照细胞组合物)的表达重组受体的细胞显示出在测定后(例如在与含有结合分子的颗粒(例如珠)一起孵育后)经历了延长或长期刺激的细胞的特征。在一些实施方案中，与未经历长期刺激方法的组合物细胞相比，经历了长期刺激方法(例如，与含有结合分子的颗粒(例如珠)一起孵育)的来自输出组合物的细胞显示出降低的抗原刺激活性。在某些实施方案中，与未经历长期刺激方法的组合物细胞相比，抗原刺激活性降低了、降低了约或降低了至少10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、99％、99.9％、或者降低了或降低了约100％。在某些实施方案中，与未经历长期刺激方法的组合物细胞相比，抗原刺激活性降低了可检测的、统计学上显著的量。在一些实施方案中，与未经历长期刺激方法的组合物细胞相比，抗原刺激的细胞因子产生减少了。在特定实施方案中，与未经历长期刺激方法的组合物细胞相比，抗原刺激的细胞因子分泌减少了。在特定实施方案中，与未经历长期刺激方法的组合物细胞相比，抗原刺激的细胞裂解活性降低了。在特定实施方案中，与未经历长期刺激方法的组合物细胞相比，来自输出组合物的细胞(例如来自对照或参考组合物的细胞)显示出对与幼稚样t细胞相关的标记呈阳性的细胞的水平、表达或量降低。在某些实施方案中，与未经历长期刺激方法的组合物细胞相比，对标记(例如具有可检测的量的标记或具有超过染色的阈值水平或量的量或表达的标记)呈阳性的细胞的量减少了、减少了约、或减少了至少10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、99％、99.9％、或者减少了或减少了约100％。在某些实施方案中，与未经历长期刺激方法的组合物细胞相比，对标记呈阳性的细胞的量减少了可检测的、统计学上显著的量。在一些实施方案中，与未经历长期刺激方法的组合物细胞相比，输出组合物的细胞或细胞亚组的标记(例如与激活相关的标记或与幼稚样状态呈正相关的标记)的平均、均值或中值表达、量或水平降低了、降低了约或降低了至少10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、99％、99.9％、或者降低了或降低了约100％。在某些实施方案中，与未经历长期刺激方法的组合物细胞相比，对与激活相关的标记呈阳性的细胞的量减少了可检测的、统计学上显著的量。在某些实施方案中，与未经历长期刺激方法的组合物细胞相比，经历了长期刺激方法(例如，与含有结合分子的颗粒(例如珠)一起孵育)的来自输出组合物(例如输出组合物或对照或参考组合物)的细胞显示出对标记(与耗竭呈正相关的标记或与分化的t细胞呈正相关的标记)呈阳性的细胞的水平、表达或量增加。在某些实施方案中，与未经历长期刺激方法的组合物细胞相比，对标记呈阳性的细胞(例如，具有可检测的量的标记，或具有超过染色的阈值水平或量的量或表达)的量增加了、增加了约、或增加了至少10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、100％、150％、200％、1倍、2倍、3倍、4倍、5倍、10倍、20倍、50倍或100倍。在某些实施方案中，与未经历长期刺激方法的组合物细胞相比，对标记呈阳性的细胞的量增加了可检测的、统计学上显著的量。在各种实施方案中，与未经历长期刺激方法的组合物细胞相比，经历了长期刺激方法的细胞或细胞亚组的标记(例如与耗竭正相关的标记或与分化的t细胞正相关的标记)的平均、均值或中值表达、量或水平增加了、增加了约或增加了至少10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、100％、150％、200％、1倍、2倍、3倍、4倍、5倍、10倍、20倍、50倍或100倍。在某些实施方案中，与未经历长期刺激方法的组合物细胞相比，对与耗竭正相关的标记呈阳性的细胞的量增加了可检测的、统计学上显著的量。在某些实施方案中，将含有表达重组受体的细胞的细胞组合物在含有结合分子的颗粒的存在下孵育持续在7天与21天之间的时间。在特定实施方案中，在不存在重组细胞因子的情况下，将含有car表达细胞的细胞组合物的细胞与含有结合分子的颗粒(例如珠)一起孵育至少14天。在某些实施方案中，在长期刺激方法后，对细胞或细胞亚组(例如car 细胞)评估抗原刺激活性(例如细胞因子产生或细胞裂解活性)。在特定实施方案中，在离体测定后，对组合物的细胞或细胞亚组评估一种或多种标记的表达。在特定实施方案中，将经历长期刺激方法的两种或更多种细胞组合物进行比较，以鉴定当将它们在体内给予至受试者时改善细胞组合物持久性、活力或活性的变化或试剂。iv.基因工程化细胞和重组受体在一些实施方案中，所提供的方法(例如用于刺激或扩增表达重组受体的细胞)在包含表达重组受体的细胞的输入组合物上和/或与用重组受体对细胞进行基因工程化的方法结合进行。在一些方面，用重组受体对细胞进行基因工程化涉及在将核酸分子递送至组合物的一种或多种细胞的条件下，使细胞组合物与含有编码重组受体(例如car)的基因的核酸分子(例如病毒或非病毒质粒)接触。在一些实施方案中，细胞包括根据所提供的方法通过基因工程化引入的一种或多种核酸，从而表达此类核酸的重组或基因工程化产物。在一些实施方案中，核酸是异源的，即通常不存在于细胞或从细胞获得的样品中，如从另一种生物或细胞获得的核酸，例如，所述核酸通常不在被工程化的细胞和/或衍生这种细胞的生物中发现。在一些实施方案中，所述核酸不是天然存在的，如自然界中未发现的核酸，包括包含对来自多种不同细胞类型的各种结构域进行编码的核酸的嵌合组合的核酸。在特定实施方案中，核酸含有编码重组受体(例如car)的基因。在一些实施方案中，所提供的方法可以与用于制造或制备基因工程化细胞的一个或多个处理步骤同时、依次、或相伴随地进行。所述方法的处理步骤可包括多个细胞处理步骤中单独的或组合的任何一个或多个步骤。在特定实施方案中，所述处理步骤包括用一种或多种核酸(例如包含编码重组受体的基因的异源多核苷酸)转导或转染细胞。在某些实施方案中，用含有逆转录病毒载体(例如编码用于在细胞中表达的重组产物的载体)的病毒载体粒子转导细胞。在某些实施方案中，用一种或多种非病毒核酸(例如附加型质粒或转座子)转染细胞。所述方法可以进一步和/或可替代地包括其他处理步骤，例如细胞的分离、分开、选择、洗涤、悬浮、稀释、浓缩和/或配制的步骤。在一些情况下，所述方法还可以包括用于培育、刺激或扩增细胞(例如刺激细胞以诱导其增殖和/或激活)的离体步骤，在一些情况下，这可以按照所提供的方法进行。在一些实施方案中，所述方法包括从受试者分离细胞、制备、处理、培养和/或将它们工程化，并在冷冻保存之前或之后将它们重新引入同一受试者体内。在一些实施方案中，所述方法包括按以下顺序进行的处理步骤，其中：首先从生物样品中分离(例如选择或分开)原代细胞；将所选择细胞与病毒载体粒子一起孵育以供转导；以及将转导的细胞配制于组合物中。在一些情况下，例如按照所提供的方法，例如通过在刺激试剂的存在下刺激，将转导的细胞离体激活、扩增或增殖。在一些实施方案中，所述方法可以包括来自洗涤、悬浮、稀释和/或浓缩细胞中的一个或多个处理步骤，其可以在分离(例如分开或选择)、转导、刺激和/或配制步骤之前、期间或同时或之后进行。在特定实施方案中，在与一种或多种核酸接触之前不分离、选择或富集待转染或转导的细胞。在一些实施方案中，在使细胞与一种或多种核酸接触之前不选择细胞。在一些实施方案中，在使细胞与一种或多种核酸接触之前不富集待转染或转导的细胞。在一些实施方案中，一个或多个或所有处理步骤(例如分离、选择和/或富集、处理、与转导和工程化结合的孵育、刺激和/或激活)和配制步骤是使用集成或自含式系统中的系统、装置或设备进行和/或以自动化或可编程方式进行。在一些方面，所述系统或设备包括与所述系统或设备通信的计算机和/或计算机程序，其允许用户对处理、分离、工程化和配制步骤的各个方面进行编程、控制、评估其结果和/或调整。在一个例子中，所述系统是如国际专利申请公开号wo2009/072003或us20110003380a1中所述的系统。在一个例子中，所述系统是如国际公开号wo2016/073602中所述的系统。在一些实施方案中，与结合所提供的方法制备、处理和/或孵育细胞结合(包括与制备含有基因工程化细胞的组合物结合)的一个或多个细胞处理步骤可以在离心室的内腔中进行，所述离心室例如基本上刚性的室，其通常为圆柱形并且可围绕旋转轴旋转，这与其他可用的方法相比可以提供某些优点。在一些实施方案中，所有处理步骤都在同一个离心室中进行。在一些实施方案中，一个或多个处理步骤在不同的离心室(例如相同类型的多个离心室)中进行。所述方法包括如国际公开号wo2016/073602中所述的任何方法。示例性离心室包括由biosafesa生产和销售的那些，包括用于和2系统的那些，包括a-200/f和a-200离心室以及用于此类系统的各种试剂盒。示例性室、系统和处理仪器和机柜描述于例如以下文献中：美国专利号6,123,655、美国专利号6,733,433和公开的美国专利申请公开号us2008/0171951，以及公开的国际专利申请公开号wo00/38762，将其各自的内容通过引用以其整体并入本文。取决于具体的过程(例如稀释、洗涤、转导、配制)，选择适合于所述过程的具体试剂盒在技术人员的水平内。用于此类系统的示例性试剂盒包括但不限于由biosafesa以产品名cs-430.1、cs-490.1、cs-600.1或cs-900.2销售的一次性试剂盒。在一些实施方案中，所述系统与其他仪器一起被包括和/或被放置与其他仪器联合，所述其他仪器包括用于操作、自动化、控制和/或监控所述系统中进行的各个处理步骤的各个方面的仪器。在一些实施方案中，这种仪器容纳于机柜中。在一些实施方案中，所述仪器包括机柜，所述机柜包括外壳，所述外壳含有控制电路、离心机、罩、电机、泵、传感器、显示器和用户界面。示例性装置描述于美国专利号6,123,655、美国专利号6,733,433和us2008/0171951中。在一些实施方案中，所述系统包含一系列容器，例如袋、管路、旋塞、夹子、连接器和离心室。在一些实施方案中，容器(如袋)包括一个或多个容器(如袋)，其在同一容器或单独的容器(如同一袋或单独的袋)中含有待转导或转染的细胞和载体粒子(例如病毒载体粒子或非病毒质粒)。在一些实施方案中，所述系统还包括一个或多个容器(例如袋)，所述容器含有介质，例如稀释剂和/或洗涤溶液，在所述方法期间将所述介质抽入室和/或其他部件中以稀释、重悬和/或洗涤组分和/或组合物。所述容器可以连接在系统中的一个或多个位置，例如连接在对应于输入管线、稀释剂管线、洗涤管线、废液管线和/或输出管线的位置。在一些实施方案中，所述系统(例如封闭的系统)是无菌的。在一些实施方案中，使系统部件的所有连接(例如管路管线与容器通过连接器的连接)都处于无菌条件下。在一些实施方案中，使连接处于层流下。在一些实施方案中，在管路与容器之间使用产生无菌连接的无菌连接装置(例如无菌焊接)进行连接。在一些实施方案中，无菌连接装置在足够高以维持无菌的热学条件下，例如在至少200℃、例如至少260℃或300℃的温度下实现连接。在一些实施方案中，所述系统可以是可弃式的，例如一次性试剂盒。在一些实施方案中，一次性试剂盒可以用于一个或多个过程的多个循环中，例如至少2、3、4、5或更多次，例如，在以连续或半连续方式进行的过程中。在一些实施方案中，所述系统(例如一次性试剂盒)用于处理来自单一患者的细胞。在所述方法的各方面，所述过程不需要在同一封闭系统中(例如在同一离心室中)进行，而是可以在不同的封闭系统下(例如在不同的离心室中)进行；在一些实施方案中，此类不同的离心室位于方法中的各个点处，所述点被放置与同一系统相关联，例如被放置与同一离心机相关联。在一些实施方案中，所有处理步骤都是在封闭系统中进行，其中每一个或多个处理步骤的全部或亚组在同一或不同的离心室中进行。a.样品和细胞制备本文提供了细胞，包括含有重组受体的工程化细胞。还提供了此类细胞的群体和含有此类细胞的组合物。组合物包括含有细胞的输入组合物，其中一种或多种细胞已知或可能或将表达重组受体，所述重组受体能够由存在于与细胞一起孵育或接触的一个或多个颗粒上的结合分子识别或结合。组合物还包括通过所提供的方法产生的组合物，包括其中含有刺激或扩增的细胞的输出组合物，包括富集含有由颗粒的结合分子结合或识别的重组受体的细胞的组合物，例如其中表达重组受体(例如嵌合受体)的细胞组成组合物中的总细胞的或者某种类型的细胞(例如t细胞或cd8 或cd4 细胞)的至少50％、60％、70％、80％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高百分比。因此，提供了表达重组受体(例如car)的基因工程化细胞。组合物包括用于给予(如用于过继细胞疗法)的药物组合物和配制品。还提供了用于工程化、生产或产生此类细胞的方法，用于将所述细胞和组合物给予受试者(例如，患者)的治疗方法，以及用于检测、选择、分离或分开此类细胞的方法。所述细胞通常是真核细胞，如哺乳动物细胞，并且通常是人细胞。在一些实施方案中，所述细胞衍生自血液、骨髓、淋巴或淋巴器官，是免疫系统的细胞，如先天免疫或适应性免疫的细胞，例如骨髓或淋巴样细胞(包括淋巴细胞，通常是t细胞和/或nk细胞)。其他示例性细胞包括干细胞，如多潜能干细胞和多能干细胞，包括诱导多能干细胞(ipsc)。所述细胞通常是原代细胞，如直接从受试者分离和/或从受试者分离并冷冻的那些。在一些实施方案中，所述细胞包括t细胞或其他细胞类型的一个或多个亚组，如整个t细胞群、cd4 细胞、cd8 细胞及其亚群，如由以下各项所定义的那些亚群：功能、激活状态、成熟度、分化的可能性、扩增、再循环、定位和/或持久能力、抗原特异性、抗原受体类型、在特定器官或区室中的存在、标记或细胞因子分泌特征和/或分化程度。关于待治疗的受试者，所述细胞可以是同种异体的和/或自体的。所述方法包括现成的方法。在一些方面，如对于现成的技术，所述细胞是多能的和/或多潜能的，如干细胞，如诱导多能干细胞(ipsc)。t细胞和/或cd4 和/或cd8 t细胞的亚型和亚群包括幼稚t(tn)细胞、效应t细胞(teff)、记忆t细胞及其亚型(如干细胞记忆t(tscm)、中枢记忆t(tcm)、效应记忆t(tem)或终末分化的效应记忆t细胞)、肿瘤浸润性淋巴细胞(til)、未成熟t细胞、成熟t细胞、辅助t细胞、细胞毒性t细胞、粘膜相关恒定t(mait)细胞、天然存在和适应性调节性t(treg)细胞、辅助t细胞(如th1细胞、th2细胞、th3细胞、th17细胞、th9细胞、th22细胞、滤泡性辅助t细胞)、α/βt细胞以及δ/γt细胞。在一些实施方案中，所述细胞是天然杀伤(nk)细胞。在一些实施方案中，所述细胞是单核细胞或粒细胞，例如骨髓细胞、巨噬细胞、嗜中性粒细胞、树突细胞、肥大细胞、嗜酸性粒细胞和/或嗜碱性粒细胞。在一些实施方案中，所述细胞衍生自细胞系，例如t细胞系。在一些实施方案中，所述细胞获得自异种来源，例如获得自小鼠、大鼠、非人灵长类动物和猪。在一些实施方案中，所述细胞可以分离自样品，例如生物样品，例如从受试者获得或源自受试者的样品。在一些实施方案中，分离出所述细胞的受试者是患有疾病或病症或需要细胞疗法或将对其给予细胞疗法的受试者。在一些实施方案中，所述受试者是需要特定治疗性干预(如过继细胞疗法，其中细胞被分离、处理和/或工程化)的人。因此，在一些实施方案中，所述细胞是原代细胞，例如原代人细胞。样品包括直接取自受试者的组织、流体和其他样品，以及来自一个或多个处理步骤(如分离、离心、基因工程化(例如用病毒载体转导)、洗涤和/或孵育)的样品。生物样品可以是直接从生物来源获得的样品或经过处理的样品。生物样品包括但不限于体液(如血液、血浆、血清、脑脊液、滑液、尿液和汗液)、组织和器官样品，包括由其衍生的经处理样品。在一些例子中，例如通过单采术或白细胞分离术获得来自受试者的循环血液的细胞。在某些实施方案中，血液细胞含有淋巴细胞，包括t细胞、单核细胞、粒细胞、b细胞、其他有核白细胞、红细胞和/或血小板，并且在一些方面含有除红细胞和血小板之外的细胞。在一些实施方案中，在选择和/或富集细胞之前，在进一步处理步骤之前，可以静息或保持样品或样品中的细胞。在一些实施方案中，将样品维持在或保持在为或为约2℃至8℃的温度下长达48小时，例如长达12小时、24小时或36小时。在某些实施方案中，在使细胞与一种或多种核酸接触之前不选择和/或富集细胞。在一些实施方案中，在将细胞与一种或多种核酸接触或一起孵育之前，可以将样品或细胞静置或保持。在某些实施方案中，在将细胞与一种或多种核酸接触或一起孵育之前，将样品维持在或保持在从或从约2℃至8℃的温度下长达48小时，例如长达12小时、24小时或36小时。在一些实施方案中，制备方法包括在分离、选择和/或富集、用于转导和工程化的孵育和/或刺激、激活和/或扩增细胞之前或之后冷冻(例如冷冻保存)细胞的步骤。在一些实施方案中，例如，在洗涤步骤去除血浆和血小板之后，使所述细胞悬浮于冷冻溶液中。在一些方面，可以使用多种已知的冷冻溶液和参数中的任何一种。一个例子涉及使用含有20％dmso和8％人血清白蛋白(hsa)的pbs，或其他合适的细胞冷冻培养基。然后用培养基将其1:1稀释，使得dmso和hsa的最终浓度分别为10％和4％。然后通常将所述细胞以1°/分钟的速率冷冻至-80℃并储存在液氮储罐的气相中。在一些实施方案中，所述细胞的分离包括一个或多个制备和/或基于非亲和力的细胞分开步骤。在一些例子中，将细胞在存在一种或多种试剂的情况下洗涤、离心和/或孵育，例如以去除不需要的组分、针对所需组分进行富集、裂解或去除对特定试剂敏感的细胞。在一些例子中，基于一种或多种特性(如密度、粘附特性、尺寸、对特定组分的敏感性和/或抗性)分离细胞。在一些实施方案中，所述方法包括基于密度的细胞分离方法，如通过裂解红细胞并通过percoll或ficoll梯度进行离心来从外周血制备白细胞。在一些实施方案中，分离方法包括基于一种或多种特定分子(如表面标记(例如表面蛋白)、细胞内标记或核酸)在细胞中的表达或存在来分开不同的细胞类型。在一些实施方案中，可以使用基于此类标记的任何已知的分离方法。在一些实施方案中，所述分离是基于亲和力或免疫亲和力的分离。例如，在一些方面，所述分离包括基于一种或多种标记(通常是细胞表面标记)在细胞中的表达或表达水平来分离细胞和细胞群，例如，通过与特异性地结合至此类标记的抗体或结合配偶体一起孵育，之后通常进行洗涤步骤并将已经结合所述抗体或结合配偶体的细胞与尚未结合至所述抗体或结合配偶体的那些细胞分开。此类分离步骤可以基于阳性选择(其中保留已经结合所述试剂的细胞以供进一步使用)和/或阴性选择(其中保留尚未结合至所述抗体或结合配偶体的细胞)。在一些例子中，保留两种级分以供进一步使用。在一些方面，在无法获得专门鉴定异质性群体中的细胞类型的抗体，使得最好实施基于除了所需群体以外的细胞表达的标记来实施分离的情况下，阴性选择可以特别有用。分离不需要导致100％富集或去除特定细胞群或表达特定标记的细胞。例如，针对特定类型的细胞(如表达标记的那些)的阳性选择或富集是指增加此类细胞的数量或百分比，但不需要导致不表达所述标记的细胞的完全不存在。同样地，特定类型的细胞(如表达标记的那些)的阴性选择、去除或耗尽是指减少此类细胞的数量或百分比，但不需要导致所有此类细胞的完全去除。在一些例子中，进行多轮分离步骤，其中使来自一个步骤的阳性或阴性选择的级分经历另一分离步骤，如后续阳性或阴性选择。在一些例子中，单个分离步骤可以同时耗尽表达多种标记的细胞，如通过将细胞与多种抗体或结合配偶体(每种抗体或结合配偶体对被靶向用于阴性选择的标记具有特异性)一起孵育。同样地，可以通过将细胞与在各种细胞类型上表达的多种抗体或结合配偶体一起孵育来对多种细胞类型同时进行阳性选择。例如，在一些方面，通过阳性向或阴性选择技术来分离t细胞的特定亚群，如对高水平的一种或多种表面标记呈阳性或表达所述高水平的一种或多种表面标记的细胞，例如，cd28 、cd62l 、ccr7 、cd27 、cd127 、cd4 、cd8 、cd45ra 和/或cd45ro t细胞。例如，可以使用抗cd3/抗cd28缀合的磁珠(例如，m-450cd3/cd28tcellexpander)阳性选择cd3 ,cd28 t细胞。在特定实施方案中，在使细胞与一种或多种核酸接触之前，使细胞与抗cd3/抗cd28缀合的磁珠(例如，m-450cd3/cd28t细胞扩增剂)接触以扩增cd3 ,cd28 t细胞。在某些实施方案中，在使细胞与一种或多种核酸接触之前，细胞不与抗cd3/抗cd28缀合的磁珠接触。在一些实施方案中，通过经由阳性选择富集特定细胞群，或经由阴性选择耗尽特定细胞群来进行分离。在一些实施方案中，通过将细胞与一种或多种抗体或其他结合剂一起孵育来完成阳性或阴性选择，所述一种或多种抗体或其他结合剂与分别在阳性或阴性选择的细胞上表达(标记 )或以相对较高水平表达(标记高)的一种或多种表面标记特异性地结合。在一些实施方案中，通过阴性选择在非t细胞(如b细胞、单核细胞或其他白细胞)上表达的标记(如cd14)，将t细胞与pbmc样品分离。在一些方面，cd4 或cd8 选择步骤用于分离cd4 辅助t细胞和cd8 细胞毒性t细胞。通过对在一种或多种幼稚、记忆和/或效应t细胞亚群上表达或以相对较高程度表达的标记的阳性或阴性选择，可以将此类cd4 和cd8 群体进一步分类成亚群。在一些实施方案中，将cd8 细胞针对幼稚细胞、中枢记忆细胞、效应记忆细胞和/或中枢记忆干细胞进行进一步富集或耗尽，如通过基于与相应亚群相关的表面抗原的阳性或阴性选择。在一些实施方案中，针对中枢记忆t(tcm)细胞进行富集以增加功效，如以改善给予后的长期存活、扩增和/或移植，这在一些方面在此类亚群中特别稳健。参见terakura等人(2012)blood.1:72-82；wang等人(2012)jimmunother.35(9):689-701。在一些实施方案中，组合富含tcm的cd8 t细胞与cd4 t细胞进一步增强功效。在实施方案中，记忆t细胞存在于cd8 外周血淋巴细胞的cd62l 和cd62l-两个亚组中。可以例如使用抗cd8和抗cd62l抗体将pbmc针对cd62l-cd8 和/或cd62l cd8 级分进行富集或耗尽。在一些实施方案中，中枢记忆t(tcm)细胞的富集是基于cd45ro、cd62l、ccr7、cd28、cd3和/或cd127的阳性或高表面表达；在一些方面，它是基于对表达或高度表达cd45ra和/或颗粒酶b的细胞的阴性选择。在一些方面，通过表达cd4、cd14、cd45ra的细胞的耗尽和表达cd62l的细胞的阳性选择或富集来进行富含tcm细胞的cd8 群体的分离。在一个方面，中枢记忆t(tcm)细胞的富集从基于cd4表达所选择的阴性细胞级分开始进行，对所述阴性细胞级分基于cd14和cd45ra的表达进行阴性选择且基于cd62l进行阳性选择。此类选择在一些方面是同时进行的，而在其他方面以任何顺序依次进行。在一些方面，用于制备cd8 细胞群或亚群的相同的基于cd4表达的选择步骤也用于生成cd4 细胞群或亚群，使得来自基于cd4的分离的阳性和阴性级分被保留并用于所述方法的后续步骤中，任选地在一个或多个其他阳性或阴性选择步骤之后。在特定例子中，使pbmc样品或其他白细胞样品经历cd4 细胞的选择，其中保留了阴性和阳性两种级分。然后使阴性级分经历基于cd14和cd45ra或cd19的表达的阴性选择，以及基于中枢记忆t细胞特有的标记(如cd62l或ccr7)的阳性选择，其中阳性和阴性选择是以任一顺序来进行。通过鉴定具有细胞表面抗原的细胞群，将cd4 t辅助细胞分类为幼稚、中枢记忆和效应细胞。cd4 淋巴细胞可以通过标准方法获得。在一些实施方案中，幼稚cd4 t淋巴细胞是cd45ro-、cd45ra 、cd62l 、和cd4 t细胞。在一些实施方案中，中枢记忆cd4 细胞是cd62l 且cd45ro 。在一些实施方案中，效应cd4 细胞是cd62l-且cd45ro-。在一个例子中，为了通过阴性选择富集cd4 细胞，单克隆抗体混合剂通常包括针对cd14、cd20、cd11b、cd16、hla-dr和cd8的抗体。在一些实施方案中，所述抗体或结合配偶体结合至固体支持物或基质(如磁珠或顺磁珠)，以允许分离细胞以供阳性和/或阴性选择。例如，在一些实施方案中，使用免疫磁性(或亲和磁性)分离技术来分开或分离细胞和细胞群(综述于methodsinmolecularmedicine,第58卷:metastasisresearchprotocols,第2卷:cellbehaviorinvitroandinvivo,第17-25页s.a.brooks和u.schumacher编辑humanapressinc.,新泽西州托托瓦(totowa,nj))。在一些方面，将待分离的细胞的样品或组合物与小的可磁化或磁响应材料(如磁响应颗粒或微粒，如顺磁珠(例如像或珠))一起孵育。磁响应材料(例如，颗粒)通常直接或间接地附接至结合配偶体(例如，抗体)，所述结合配偶体特异性地结合至需要分离(例如，需要进行阴性或阳性选择)的一种细胞、多种细胞或细胞群上存在的分子(例如，表面标记)。在一些实施方案中，磁性颗粒或磁珠包含与特异性结合成员(如抗体或其他结合配偶体)结合的磁响应材料。存在许多用于磁分离方法的熟知的磁响应材料。合适的磁性颗粒包括在molday,美国专利号4,452,773和在欧洲专利说明书ep452342b(将其通过引用特此并入)中描述的那些。胶体大小的颗粒，如在owen美国专利号4,795,698以及liberti等人,美国专利号5,200,084中描述的那些是其他例子。孵育通常在这样的条件下进行，由此抗体或结合配偶体或者与附接至磁性颗粒或磁珠的此类抗体或结合配偶体特异性结合的分子(如二抗或其他试剂)与细胞表面分子(如果存在于所述样品内的细胞上的话)特异性结合。在一些方面，将所述样品置于磁场中，并且具有附接至其上的磁响应或可磁化颗粒的那些细胞将被吸引到磁体并与未标记的细胞分离。对于阳性选择，保留被吸引至磁体的细胞；对于阴性选择，保留未被吸引的细胞(未标记细胞)。在一些方面，在相同的选择步骤期间进行阳性和阴性选择的组合，其中保留阳性和阴性级分并进一步处理或进行进一步分离步骤。在某些实施方案中，所述磁响应颗粒被包被在一抗或其他结合配偶体、二抗、凝集素、酶或链霉亲和素中。在某些实施方案中，所述磁性颗粒通过对一种或多种标记具有特异性的一抗的包被而附接至细胞。在某些实施方案中，用一抗或结合配偶体标记所述细胞而不是珠，并且然后添加细胞类型特异性二抗或其他结合配偶体(例如链霉亲和素)包被的磁性颗粒。在某些实施方案中，将链霉亲和素包被的磁性颗粒与生物素化的一抗或二抗结合使用。在一些实施方案中，所述磁响应颗粒保持附接至所述细胞，所述细胞随后被孵育、培养和/或工程化；在一些方面，所述颗粒保持附接至所述细胞以用于给予患者。在一些实施方案中，从所述细胞中去除可磁化或磁响应颗粒。从细胞中去除可磁化颗粒的方法是已知的，并且包括例如使用竞争性非标记抗体和与可切割接头缀合的可磁化颗粒或抗体。在一些实施方案中，所述可磁化颗粒是可生物降解的。在一些实施方案中，基于亲和力的选择是通过磁激活细胞分选(macs)(miltenyibiotec，加利福尼亚州奥本(auburn,ca))来进行。磁激活细胞分选(macs)系统能够对附接有磁化颗粒的细胞进行高纯度选择。在某些实施方案中，macs以如下模式操作，其中在施加外部磁场之后依次洗脱非靶种类和靶种类。也就是说，使附接至磁化颗粒的细胞保持在适当的位置，而未附接的种类被洗脱。然后，在第一洗脱步骤完成后，以某种方式释放被捕获在磁场中并被阻止洗脱的种类，使得它们可以被洗脱和回收。在某些实施方案中，标记非靶细胞并将其从异质性细胞群耗尽。在某些实施方案中，使用如下系统、装置或设备进行分离或分开，所述系统、装置或设备进行所述方法的分离、细胞制备、分开、处理、孵育、培养和/或制备步骤中的一个或多个。在一些方面，使用所述系统在封闭或无菌环境中实施这些步骤中的每一个，例如，以使误差、用户操作和/或污染最小化。在一个例子中，所述系统是如国际专利申请公开号wo2009/072003或us20110003380a1中所述的系统。在一个例子中，所述系统是如国际公开号wo2016/073602中所述的系统。在一些方面，所述分离和/或其他步骤是使用例如clinimacs系统(miltenyibiotec)来进行，以用于在封闭且无菌的系统中以临床规模水平自动化分离细胞。部件可以包括集成微计算机、磁分离单元、蠕动泵和各种夹管阀。在一些方面，所述集成计算机控制仪器的所有部件并指示系统以标准化顺序执行重复程序。在一些方面，所述磁分离单元包括可移动的永磁体和用于选择柱的支架。所述蠕动泵控制整个管组的流速，并且与夹紧阀一起确保经过系统的缓冲液的受控流动和细胞的连续悬浮。在一些方面，所述clinimacs系统使用在无菌无热原溶液中提供的偶联抗体的可磁化颗粒。在一些实施方案中，在用磁性颗粒标记细胞后，洗涤所述细胞以去除多余颗粒。然后将细胞制备袋连接到管组，再将所述管组连接到含有缓冲液的袋和细胞收集袋。所述管组由预装配的无菌管(包括预柱和分离柱)组成，并且仅供一次性使用。在启动分离程序后，所述系统将细胞样品自动施加到分离柱上。标记的细胞被保留在柱内，而未标记的细胞通过一系列洗涤步骤被去除。在一些实施方案中，用于与本文描述的方法一起使用的细胞群是未标记的并且不保留在柱中。在一些实施方案中，用于与本文描述的方法一起使用的细胞群被标记并保留在柱中。在一些实施方案中，用于与本文描述的方法一起使用的细胞群在去除磁场后被从柱中洗脱，并且被收集在细胞收集袋内。在某些实施方案中，使用clinimacsprodigy系统(miltenyibiotec)进行分离和/或其他步骤。在一些方面，所述clinimacsprodigy系统配备有细胞处理联合体，其允许自动洗涤和通过离心来分级分离细胞。所述clinimacsprodigy系统还可以包括机载相机和图像识别软件，其通过辨别源细胞产品的宏观层来确定最佳细胞分级终点。例如，将外周血自动分离为红细胞、白细胞和血浆层。所述clinimacsprodigy系统还可以包括集成的细胞培育室，其实现细胞培养方案，例如细胞分化和扩增、抗原加载和长期细胞培养。输入端口可允许无菌移除和补充培养基，并且可以使用集成显微镜监测细胞。参见，例如，klebanoff等人(2012)jimmunother.35(9):651-660；terakura等人(2012)blood.1:72-82；和wang等人(2012)jimmunother.35(9):689-701。在一些实施方案中，通过流式细胞术收集并富集(或耗尽)本文描述的细胞群，在流式细胞术中针对多种细胞表面标记染色的细胞被携载于流体流中。在一些实施方案中，通过制备规模(facs)分选收集并富集(或耗尽)本文描述的细胞群。在某些实施方案中，通过使用与基于facs的检测系统组合的微机电系统(mems)芯片收集并富集(或耗尽)本文描述的细胞群(参见例如，wo2010/033140,cho等人(2010)labchip10,1567-1573；和godin等人(2008)jbiophoton.1(5):355-376)。在两种情况下，可以用多种标记来标记细胞，从而允许以高纯度分离明确限定的t细胞亚组。在一些实施方案中，用一种或多种可检测标记来标记所述抗体或结合配偶体，从而促进分离以用于阳性和/或阴性选择。例如，分离可以基于与荧光标记的抗体的结合。在一些例子中，基于对一种或多种细胞表面标记具有特异性的抗体或其他结合配偶体的结合来分离细胞是在流体流中载携，如通过荧光激活细胞分选(facs)，包括制备规模(facs)和/或微机电系统(mems)芯片，例如与流式细胞检测系统组合。此类方法允许基于多种标记同时进行阳性和阴性选择。在一些实施方案中，在用于基因工程化细胞的一个或多个步骤之前，例如通过转导或转染细胞来激活或刺激细胞。在特定实施方案中，在用于基因工程化细胞的一个或多个步骤之前，在刺激条件下培养或孵育细胞。在一些实施方案中，刺激条件或药剂包括能够激活tcr复合物的细胞内信号传导结构域的一种或多种药剂(例如配体)。在一些方面，所述药剂在t细胞中开启或启动tcr/cd3细胞内信号传导级联。此类药剂可以包括抗体，如对tcr具有特异性的那些抗体，例如抗cd3。在一些实施方案中，所述刺激条件包括能够刺激共刺激受体的一种或多种药剂(例如，配体)，例如抗cd28。在一些实施方案中，此类药剂和/或配体可以结合至固体支持物(如珠)和/或一种或多种细胞因子。任选地，激活或刺激还可以包括向培养基中添加抗cd3和/或抗cd28抗体(例如，以至少约0.5ng/ml的浓度)的步骤。在一些实施方案中，所述刺激剂包括il-2、il-15和/或il-7。在一些方面，il-2浓度为至少约10单位/ml。b.编码异源蛋白质的核酸还提供了编码重组受体的一种或多种多核苷酸(例如，核酸分子)、用于将细胞基因工程化以表达此类受体的载体以及用于产生所述工程化细胞的方法。在一些实施方案中，载体含有编码重组受体的核酸。在特定实施方案中，载体是病毒载体、非病毒载体。在一些情况下，所述载体是病毒载体，如逆转录病毒载体，例如慢病毒载体或γ逆转录病毒载体。在一些实施方案中，在没有事先激活细胞的情况下，和/或在从受试者获得细胞之后不超过24小时开始的时间段内，和/或其中在从受试者获得细胞之后细胞未经历高于15℃至25℃(例如高于或高于约超过37℃±2.0℃)的温度持续不超过24小时的时间段内，使细胞与载体接触。在某些实施方案中，在没有首先(即在基因工程化(例如转导或转染)之前)在将细胞与病毒粒子接触或一起孵育之前和/或与将细胞与病毒粒子接触或一起孵育结合用离体刺激试剂(例如抗cd3/抗cd28试剂)激活和/或刺激t细胞的情况下，使载体与细胞接触。在一些实施方案中，所述载体包括病毒载体，例如逆转录病毒或慢病毒、非病毒载体或转座子，例如睡美人(sleepingbeauty)转座子系统；源自于猿猴病毒40(sv40)、腺病毒、腺相关病毒(aav)的载体；慢病毒载体或逆转录病毒载体，如γ-逆转录病毒载体，源自于莫洛尼(moloney)鼠白血病病毒(momlv)、骨髓增生性肉瘤病毒(mpsv)、鼠胚胎干细胞病毒(mesv)、鼠干细胞病毒(mscv)、脾病灶形成病毒(sffv)或腺相关病毒(aav)的逆转录病毒载体。在一些实施方案中，病毒载体或非病毒dna含有编码异源重组蛋白的核酸。在一些实施方案中，异源重组分子是或包括重组受体(例如抗原受体)、sb转座子(例如用于基因沉默)、衣壳包封的转座子、同源双链核酸(例如用于基因组重组)或报告基因(例如荧光蛋白，如gfp)或萤光素酶)。在一些实施方案中，病毒载体或非病毒dna含有编码重组受体和/或嵌合受体(例如异源受体蛋白)的核酸。重组受体(例如异源受体)可以包括抗原受体，例如功能性非tcr抗原受体，包括嵌合抗原受体(car)和其他抗原结合受体，例如转基因t细胞受体(tcr)。受体还可以包括其他受体，如其他嵌合受体，如与特定配体结合并且具有与car中存在的那些类似的跨膜和/或细胞内信号传导结构域的受体。在一些实施方案中，将核酸插入或定位于病毒载体的区域中，例如通常在病毒基因组的非必需区域中。在一些实施方案中，将核酸插入病毒基因组的某些病毒序列的位置中以产生具有复制缺陷的病毒。在某些实施方案中，核酸定位于非病毒dna内，例如转座子内。在一些实施方案中，抗原受体(包括car和重组tcr)及其产生和引入包括例如以下文献中所述的那些：国际专利申请公开号wo200014257、wo2013126726、wo2012/129514、wo2014031687、wo2013/166321、wo2013/071154、wo2013/123061、美国专利申请公开号us2002131960、us2013287748、us20130149337、美国专利号6,451,995、7,446,190、8,252,592、8,339,645、8,398,282、7,446,179、6,410,319、7,070,995、7,265,209、7,354,762、7,446,191、8,324,353和8,479,118，以及欧洲专利申请号ep2537416，和/或以下文献中所述的那些：sadelain等人,cancerdiscov.2013年4月；3(4):388-398；davila等人(2013)plosone8(4):e61338；turtle等人,curr.opin.immunol.,2012年10月；24(5):633-39；wu等人,cancer,2012年3月18(2):160-75。1.嵌合抗原受体在一些实施方案中，提供了工程化细胞(如t细胞)，其表达对特定抗原(或标记或配体)具有特异性的car，所述特定抗原例如为在特定细胞类型的表面上表达的抗原。在一些实施方案中，所述抗原是多肽。在一些实施方案中，所述抗原是碳水化合物或其他分子。在一些实施方案中，如与正常或非靶向细胞或组织相比，所述抗原在疾病或病症的细胞(例如，肿瘤或致病细胞)上选择性表达或过表达。在其他实施方案中，所述抗原在正常细胞上表达和/或在工程化细胞上表达。在特定实施方案中，所述重组受体(如嵌合受体)含有细胞内信号传导区域，所述细胞内信号传导区域包括胞质信号传导结构域(也可互换地称为细胞内信号传导结构域)，如能够在t细胞中诱导初级激活信号的胞质(细胞内)区域，例如t细胞受体(tcr)组分的胞质信号传导结构域(例如cd3-ζ(cd3ζ)链的ζ链的胞质信号传导结构域或其功能变体或信号传导部分)；和/或所述细胞内信号传导区域包含基于免疫受体酪氨酸的激活基序(itam)。在一些实施方案中，所述嵌合受体还含有与配体(例如抗原)抗原特异性地结合的细胞外配体结合结构域。在一些实施方案中，所述嵌合受体是car，所述car含有与抗原特异性地结合的细胞外抗原识别结构域。在一些实施方案中，所述配体(如抗原)是在细胞表面上表达的蛋白质。在一些实施方案中，所述car是tcr样car，并且所述抗原是加工过的肽抗原，如细胞内蛋白的肽抗原，其与tcr一样在主要组织相容性复合物(mhc)分子的背景下在细胞表面上被识别。示例性抗原受体(包括car)以及将此类受体工程化并引入细胞中的方法包括例如国际专利申请公开号wo200014257、wo2013126726、wo2012/129514、wo2014031687、wo2013/166321、wo2013/071154、wo2013/123061；美国专利申请公开号us2002131960、us2013287748、us20130149337；美国专利号：6,451,995、7,446,190、8,252,592、8,339,645、8,398,282、7,446,179、6,410,319、7,070,995、7,265,209、7,354,762、7,446,191、8,324,353和8,479,118；以及欧洲专利申请号ep2537416中描述的那些，和/或sadelain等人,cancerdiscov.2013年4月；3(4):388-398；davila等人(2013)plosone8(4):e61338；turtle等人,curr.opin.immunol.,2012年10月；24(5):633-39；wu等人,cancer,2012年3月18(2):160-75描述的那些。在一些方面，抗原受体包括如美国专利号7,446,190中描述的car，以及国际专利申请公开号wo/2014055668a1中描述的那些。所述car的例子包括如在任何上述出版物中披露的car，所述出版物是例如wo2014031687、us8,339,645、us7,446,179、us2013/0149337、美国专利号7,446,190、美国专利号8,389,282；kochenderfer等人,2013,naturereviewsclinicaloncology,10,267-276(2013)；wang等人(2012)j.immunother.35(9):689-701；以及brentjens等人,scitranslmed.20135(177)。还参见wo2014031687、us8,339,645、us7,446,179、us2013/0149337、美国专利号7,446,190和美国专利号8,389,282。在一些实施方案中，所述car被构建为具有对特定抗原(或标记或配体)的特异性，所述特定抗原是例如在过继疗法靶向的特定细胞类型中表达的抗原(例如，癌症标记)和/或旨在诱导衰减应答的抗原(如在正常或未患病细胞类型上表达的抗原)。因此，所述car通常在其细胞外部分中包括一种或多种抗原结合分子，如一种或多种抗原结合片段、结构域或部分，或者一种或多种抗体可变结构域，和/或抗体分子。在一些实施方案中，所述car包括抗体分子的一个或多个抗原结合部分，如源自单克隆抗体(mab)的可变重链(vh)和可变轻链(vl)的单链抗体片段(scfv)。在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合部分作为重组受体(如抗原受体)的一部分在细胞上表达。所述抗原受体包括功能性非tcr抗原受体，如嵌合抗原受体(car)。通常，含有针对肽-mhc复合物展现出tcr样特异性的抗体或抗原结合片段的car也可以称为tcr样car。在一些实施方案中，在一些方面，对tcr样car的mhc-肽复合物具有特异性的细胞外抗原结合结构域通过接头和/或一个或多个跨膜结构域与一种或多种细胞内信号传导组分连接。在一些实施方案中，此类分子通常可以模拟或接近于通过天然抗原受体(如tcr)的信号，以及任选地通过这种受体与共刺激受体的组合的信号。在一些实施方案中，所述重组受体(如嵌合受体(例如car))包括与抗原(或配体)结合(如特异性地结合)的配体结合结构域。所述嵌合受体靶向的抗原包括在经由过继细胞疗法靶向的疾病、病症或细胞类型的背景下表达的抗原。所述疾病和病症包括增殖性、肿瘤性和恶性疾病和障碍，包括癌症和肿瘤，包括血液癌、免疫系统癌症，如淋巴瘤、白血病和/或骨髓瘤，如b型白血病、t型白血病和骨髓性白血病、淋巴瘤和多发性骨髓瘤。在一些实施方案中，所述抗原(或配体)是多肽。在一些实施方案中，所述抗原是碳水化合物或其他分子。在一些实施方案中，如与正常或非靶向细胞或组织相比，所述抗原(或配体)在所述疾病或病症的细胞(例如，肿瘤或致病细胞)上选择性表达或过表达。在其他实施方案中，所述抗原在正常细胞上表达和/或在工程化细胞上表达。在一些实施方案中，所述car含有抗体或抗原结合片段(例如scfv)，其特异性识别在细胞表面上表达的抗原(如完整抗原)。在一些实施方案中，抗原是或包括αvβ6整合素(avb6整合素)、b细胞成熟抗原(bcma)、b7-h3、b7-h6、碳酸酐酶9(ca9，也称为caix或g250)、癌症-睾丸抗原、癌症/睾丸抗原1b(ctag，也称为ny-eso-1和lage-2)、癌胚抗原(cea)、细胞周期蛋白、细胞周期蛋白a2、c-c基序趋化因子配体1(ccl-1)、cd19、cd20、cd22、cd23、cd24、cd30、cd33、cd38、cd44、cd44v6、cd44v7/8、cd123、cd133、cd138、cd171、硫酸软骨素蛋白聚糖4(cspg4)、表皮生长因子蛋白(egfr)、iii型表皮生长因子受体突变(egfrviii)、上皮糖蛋白2(epg-2)、上皮糖蛋白40(epg-40)、肝配蛋白b2、肝配蛋白受体a2(epha2)、雌激素受体、fc受体样蛋白5(fcrl5；也称为fc受体同源物5或fcrh5)、胎儿乙酰胆碱受体(胎儿achr)、叶酸结合蛋白(fbp)、叶酸受体α、神经节苷脂gd2、o-乙酰化gd2(ogd2)、神经节苷脂gd3、糖蛋白100(gp100)、磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(gpc3)、g蛋白偶联受体5d(gprc5d)、her2/neu(受体酪氨酸激酶erb-b2)、her3(erb-b3)、her4(erb-b4)、erbb二聚体、人高分子量黑色素瘤相关抗原(hmw-maa)、乙型肝炎表面抗原、人白细胞抗原a1(hla-a1)、人白细胞抗原a2(hla-a2)、il-22受体α(il-22rα)、il-13受体α2(il-13rα2)、激酶插入结构域受体(kdr)、κ轻链、l1细胞粘附分子(l1-cam)、l1-cam的ce7表位、含有富亮氨酸重复序列的蛋白8家族成员a(lrrc8a)、路易斯y、黑色素瘤相关抗原(mage)-a1、mage-a3、mage-a6、mage-a10、间皮素(msln)、c-met、鼠类巨细胞病毒(cmv)、粘蛋白1(muc1)、muc16、自然杀伤细胞2族成员d(nkg2d)配体、黑色素a(mart-1)、神经细胞粘附分子(ncam)、癌胚胎抗原、优先表达的黑色素瘤抗原(prame)、孕酮受体、前列腺特异性抗原、前列腺干细胞抗原(psca)、前列腺特异性膜抗原(psma)、受体酪氨酸激酶样孤儿受体1(ror1)、存活蛋白、滋养层糖蛋白(tpbg，也称为5t4)、肿瘤相关糖蛋白72(tag72)、酪氨酸酶相关蛋白1(trp1，也称为tyrp1或gp75)、酪氨酸酶相关蛋白2(trp2，也称为多巴色素互变异构酶、多巴色素δ异构酶或dct)、血管内皮生长因子受体(vegfr)、血管内皮生长因子受体2(vegfr2)、wilms肿瘤1(wt-1)、病原体特异性或病原体表达的抗原、或与通用标签相关的抗原、和/或生物素化分子、和/或由hiv、hcv、hbv或其他病原体表达的分子。在一些实施方案中，受体靶向的抗原包括与b细胞恶性肿瘤相关的抗原，如许多已知b细胞标记中的任何一种。在一些实施方案中，所述抗原是或包括cd20、cd19、cd22、ror1、cd45、cd21、cd5、cd33、igκ、igλ、cd79a、cd79b或cd30。在一些实施方案中，所述抗原是病原体特异性抗原。在一些实施方案中，所述抗原是病毒抗原(如来自hiv、hcv、hbv等的病毒抗原)、细菌抗原和/或寄生虫抗原。在一些实施方案中，所述car含有tcr样抗体，如抗体或抗原结合片段(例如scfv)，所述抗体或抗原结合片段特异性地识别作为mhc-肽复合物存在于细胞表面上的细胞内抗原(如肿瘤相关抗原)。在一些实施方案中，识别mhc-肽复合物的抗体或其抗原结合部分可以作为重组受体(如抗原受体)的一部分在细胞上表达。所述抗原受体包括功能性非tcr抗原受体，如嵌合抗原受体(car)。通常，含有针对肽-mhc复合物展现出tcr样特异性的抗体或抗原结合片段的car也可以称为tcr样car。提及“主要组织相容性复合物”(mhc)是指含有多态性肽结合位点或结合沟的蛋白质，通常是糖蛋白，在一些情况下，所述蛋白质可以与多肽的肽抗原(包括由细胞机构加工的肽抗原)复合。在一些情况下，mhc分子可以在细胞表面上展示或表达，包括作为与肽的复合物，即mhc-肽复合物，用于呈递具有可由t细胞上的抗原受体(如tcr或tcr样抗体)识别的构象的抗原。通常，mhci类分子是异二聚体，其具有跨越α链的膜，在一些情况下具有三个α结构域和非共价缔合的β2微球蛋白。通常，mhcii类分子由两种跨膜糖蛋白α和β组成，两者通常都跨越膜。mhc分子可以包括mhc的有效部分，其含有抗原结合位点或用于结合肽的位点以及由适当抗原受体识别所需的序列。在一些实施方案中，mhci类分子将源自胞质溶胶的肽递送至细胞表面，其中mhc-肽复合物由t细胞(如通常是cd8 t细胞，但是在一些情况下是cd4 t细胞)识别。在一些实施方案中，mhcii类分子将源自囊泡系统的肽递送至细胞表面，其中所述肽通常由cd4 t细胞识别。通常，mhc分子由一组连锁基因座编码，其在小鼠中统称为h-2并且在人中统称为人白细胞抗原(hla)。因此，通常人mhc也可以称为人白细胞抗原(hla)。术语“mhc-肽复合物”或“肽-mhc复合物”或其变体是指肽抗原与mhc分子的复合物或缔合物，例如通常通过所述肽在mhc分子的结合沟或裂缝中的非共价相互作用来形成。在一些实施方案中，所述mhc-肽复合物存在或展示于细胞表面上。在一些实施方案中，所述mhc-肽复合物可以由抗原受体(如tcr、tcr样car或其抗原结合部分)特异性地识别。在一些实施方案中，多肽的肽(如肽抗原或表位)可以与mhc分子缔合，例如用于由抗原受体识别。通常，所述肽源自或基于较长生物分子(如多肽或蛋白质)的片段。在一些实施方案中，所述肽的长度通常为约8至约24个氨基酸。在一些实施方案中，所述肽的长度为从或从约9至22个氨基酸，用于在mhcii类复合物中识别。在一些实施方案中，所述肽的长度为从或从约8至13个氨基酸，用于在mhci类复合物中识别。在一些实施方案中，在识别mhc分子(如mhc-肽复合物)背景中的肽后，抗原受体(如tcr或tcr样car)产生或触发激活信号至t细胞，诱导t细胞应答，如t细胞增殖、细胞因子产生、细胞毒性t细胞应答或其他应答。在一些实施方案中，tcr样抗体或抗原结合部分是已知的或者可以通过在本领域中已知的方法产生(参见例如美国公开申请号us2002/0150914；us2003/0223994；us2004/0191260；us2006/0034850；us2007/00992530；us20090226474；us20090304679；和国际pct公开号wo03/068201)。在一些实施方案中，特异性地结合至mhc-肽复合物的抗体或其抗原结合部分可以通过用有效量的含有特定mhc-肽复合物的免疫原对宿主进行免疫来产生。在一些情况下，所述mhc-肽复合物的肽是能够结合至mhc的抗原的表位，所述抗原例如为肿瘤抗原，例如通用肿瘤抗原、骨髓瘤抗原或如下文所述的其他抗原。在一些实施方案中，然后向宿主给予有效量的免疫原以用于引发免疫应答，其中所述免疫原保持其三维形式持续一段足以引发针对所述肽在所述mhc分子的结合沟中的三维呈递的免疫应答的时间。然后测定从所述宿主收集的血清以确定是否产生了识别对mhc分子结合沟中的肽的三维呈递的所需抗体。在一些实施方案中，可以评估所产生的抗体以确认所述抗体可以区分mhc-肽复合物与单独的mhc分子、单独的目标肽、以及mhc与无关肽的复合物。然后可以分离所需抗体。在一些实施方案中，与mhc-肽复合物特异性地结合的抗体或其抗原结合部分可以通过采用抗体文库展示方法(如噬菌体抗体文库)来产生。在一些实施方案中，可以生成突变型fab、scfv或其他抗体形式的噬菌体展示文库，例如其中所述文库的成员在一个或多个cdr的一个或多个残基处发生突变。参见例如美国公开申请号us20020150914、us2014/0294841；以及cohencj.等人(2003)jmol.recogn.16:324-332。本文中的术语“抗体”在最广泛的意义上使用，并且包括多克隆和单克隆抗体，包括完整抗体和功能性(抗原结合)抗体片段，包括抗原结合的片段(fab)片段、f(ab')2片段、fab'片段、fv片段、重组igg(rigg)片段、能够特异性结合抗原的可变重链(vh)区、单链抗体片段(包括单链可变片段(scfv))以及单结构域抗体(例如，sdab、sdfv、纳米抗体)片段。所述术语涵盖免疫球蛋白的基因工程化的和/或以其他方式修饰的形式，如胞内抗体、肽体、嵌合抗体、全人抗体、人源化抗体和异缀合抗体、多特异性(例如，双特异性)抗体、双抗体、三抗体和四抗体、串联二-scfv、串联三-scfv。除非另有说明，否则术语“抗体”应当理解为涵盖其功能性抗体片段。所述术语还涵盖完整或全长抗体，包括任何类别或亚类(包括igg及其亚类、igm、ige、iga和igd)的抗体。在一些实施方案中，所述抗原结合蛋白、抗体及其抗原结合片段特异性地识别全长抗体的抗原。在一些实施方案中，抗体的重链和轻链可以是全长的或者可以是抗原结合部分(fab、f(ab’)2、fv或单链fv片段(scfv))。在其他实施方案中，所述抗体重链恒定区选自例如igg1、igg2、igg3、igg4、igm、iga1、iga2、igd和ige，特别是选自例如igg1、igg2、igg3和igg4，更特别是igg1(例如，人igg1)。在另一个实施方案中，所述抗体轻链恒定区选自例如κ或λ，特别是κ。所提供的抗体包括抗体片段。“抗体片段”是指不同于完整抗体的分子，其包含完整抗体的结合完整抗体所结合的抗原的一部分。抗体片段的例子包括但不限于fv、fab、fab'、fab'-sh、f(ab')2；双抗体；线性抗体；可变重链(vh)区、单链抗体分子(如scfv)和单结构域vh单一抗体；和由抗体片段形成的多特异性抗体。在特定实施方案中，所述抗体是包含可变重链区和/或可变轻链区的单链抗体片段，如scfv。术语“可变区”或“可变结构域”是指抗体重链或轻链的参与抗体与抗原的结合的结构域。天然抗体的重链和轻链的可变结构域(分别为vh和vl)通常具有相似的结构，每个结构域包含四个保守的框架区(fr)和三个cdr。(参见例如，kindt等人kubyimmunology,第6版,w.h.freemanandco.,第91页(2007))。单个vh或vl结构域可以足以赋予抗原结合特异性。此外，可以使用来自结合抗原的抗体的vh或vl结构域分离结合所述特定抗原的抗体，以分别筛选互补的vl或vh结构域的文库。参见例如，portolano等人,j.immunol.150:880-887(1993)；clarkson等人,nature352:624-628(1991)。单结构域抗体是包含抗体的全部或部分重链可变结构域或者全部或部分轻链可变结构域的抗体片段。在某些实施方案中，单结构域抗体是人单结构域抗体。在一些实施方案中，所述car包含特异性结合抗原的抗体重链结构域，所述抗原是例如癌症标记或待靶向的细胞或疾病(如肿瘤细胞或癌细胞)的细胞表面抗原，如本文所述的或本领域已知的任何靶抗原。抗体片段可以通过多种技术制备，包括但不限于完整抗体的蛋白水解消化以及通过重组宿主细胞产生。在一些实施方案中，所述抗体是重组产生的片段，如包含天然不存在的排列的片段(如具有通过合成接头(例如，肽接头)连接的两个或更多个抗体区或链的那些)，和/或可以不通过酶消化天然存在的完整抗体产生的片段。在一些实施方案中，所述抗体片段是scfv。“人源化”抗体是如下抗体，其中所有或基本上所有cdr氨基酸残基源自非人cdr并且所有或基本上所有fr氨基酸残基源自人fr。人源化抗体任选地可以包括源自人抗体的抗体恒定区的至少一部分。非人抗体的“人源化形式”是指所述非人抗体的变体，其经历人源化以通常降低对人的免疫原性，同时保留亲本非人抗体的特异性和亲和力。在一些实施方案中，人源化抗体中的一些fr残基被来自非人抗体(例如，衍生出cdr残基的抗体)的相应残基取代，例如以恢复或改善抗体特异性或亲和力。因此，在一些实施方案中，所述嵌合抗原受体(包括tcr样car)包括含有抗体或抗体片段的细胞外部分。在一些实施方案中，所述抗体或片段包括scfv。在一些方面，所述嵌合抗原受体包括含有抗体或片段的细胞外部分和细胞内信号传导区域。在一些实施方案中，所述细胞内信号传导区域包含细胞内信号传导结构域。在一些实施方案中，所述细胞内信号传导结构域是或包含初级信号传导结构域、能够在t细胞中诱导初级激活信号的信号传导结构域、t细胞受体(tcr)组分的信号传导结构域和/或包含基于免疫受体酪氨酸的激活基序(itam)的信号传导结构域。在一些实施方案中，所述重组受体(如car，如其抗体部分)还包括间隔子，所述间隔子可以是或包括免疫球蛋白恒定区的至少一部分或其变体或经修饰形式，如铰链区(例如，igg4铰链区)和/或ch1/cl和/或fc区。在一些实施方案中，所述重组受体还包含间隔子和/或铰链区。在一些实施方案中，所述恒定区或部分是人igg(如igg4或igg1)的。在一些方面，所述恒定区的所述部分用作抗原识别组分(例如，scfv)与跨膜结构域之间的间隔区。与不存在间隔子的情况下相比，所述间隔子的长度可以提供抗原结合后增强的细胞反应性。在一些例子中，所述间隔子的长度为或约12个氨基酸或者长度不超过12个氨基酸。示例性间隔子包括具有至少约10至229个氨基酸、约10至200个氨基酸、约10至175个氨基酸、约10至150个氨基酸、约10至125个氨基酸、约10至100个氨基酸、约10至75个氨基酸、约10至50个氨基酸，约10至40个氨基酸、约10至30个氨基酸、约10至20个氨基酸或约10至15个氨基酸(并且包括任何列出的范围的端点之间的任何整数)的那些。在一些实施方案中，间隔区具有约12个或更少的氨基酸、约119个或更少的氨基酸或约229个或更少的氨基酸。示例性间隔子包括单独的igg4铰链、与ch2和ch3结构域连接的igg4铰链或与ch3结构域连接的igg4铰链。示例性间隔子包括但不限于在hudecek等人(2013)clin.cancerres.,19:3153，或国际专利申请公开号wo2014031687中描述的那些。在一些实施方案中，所述间隔子具有seqidno:133所示的序列，并且由seqidno:134所示的序列编码。在一些实施方案中，所述间隔子具有seqidno:135所示的序列。在一些实施方案中，所述间隔子具有seqidno:136所示的序列。在一些实施方案中，所述恒定区或部分是igd的。在一些实施方案中，所述间隔子具有seqidno:137所示的序列。在一些实施方案中，所述间隔子具有展现出与seqidno:133、135、136和137中的任一个至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的氨基酸序列。所述抗原识别结构域通常与一种或多种细胞内信号传导组分(如模拟通过抗原受体复合物(如tcr复合物)(在car的情况下)进行激活和/或经由另一种细胞表面受体传导信号的信号传导组分)连接。因此，在一些实施方案中，所述抗原结合组分(例如，抗体)与一个或多个跨膜和细胞内信号传导区域连接。在一些实施方案中，所述跨膜结构域与所述细胞外结构域融合。在一个实施方案中，使用天然与所述受体(例如，car)中的一个结构域缔合的跨膜结构域。在一些情形中，通过氨基酸取代选择或修饰所述跨膜结构域以避免此类结构域与相同或不同表面膜蛋白的跨膜结构域结合，以最小化与所述受体复合物的其他成员的相互作用。在一些实施方案中，所述跨膜结构域衍生自天然来源或衍生自合成来源。在所述来源是天然的情况下，所述结构域在一些方面衍生自任何膜结合蛋白或跨膜蛋白。跨膜区包括衍生自以下的那些(即至少包含以下的跨膜区)：t细胞受体的α、β或ζ链，cd28，cd3ε，cd45，cd4，cd5，cd8，cd9，cd16，cd22，cd33，cd37，cd64，cd80，cd86，cd134，cd137，cd154。可替代地，在一些实施方案中，所述跨膜结构域是合成的。在一些方面，所述合成跨膜结构域主要包含疏水性残基，如亮氨酸和缬氨酸。在一些方面，在合成跨膜结构域的每个末端会发现苯丙氨酸、色氨酸和缬氨酸的三联体。在一些实施方案中，所述连接是通过接头、间隔子和/或一种或多种跨膜结构域来实现。所述细胞内信号传导区域包括模拟或接近通过天然抗原受体的信号、模拟或接近通过这种受体与共刺激受体的组合的信号、和/或模拟或接近仅通过共刺激受体的信号的那些。在一些实施方案中，存在短的寡肽或多肽接头(例如，长度在2与10个氨基酸之间的接头，如含有甘氨酸和丝氨酸的接头，例如甘氨酸-丝氨酸双联体)，并在car的跨膜结构域与细胞质信号传导结构域之间形成连接。所述受体(例如，car)通常包括至少一种或多种细胞内信号传导组分。在一些实施方案中，所述受体包括tcr复合物的细胞内组分，如介导t细胞激活和细胞毒性的tcrcd3链，例如cd3ζ链。因此，在一些方面，car的抗原结合结构域连接至一个或多个细胞信号传导模块。在一些实施方案中，细胞信号传导模块包括cd3跨膜结构域、cd3细胞内信号传导结构域和/或其他cd跨膜结构域。在一些实施方案中，所述受体(例如car)还包括一种或多种另外的分子(如fc受体γ、cd8、cd4、cd25或cd16)的一部分。例如，在一些方面，所述car包括cd3-ζ(cd3-ζ)或fc受体γ与cd8、cd4、cd25或cd16之间的嵌合分子。在一些实施方案中，在连接所述car后，所述car的胞质结构域或细胞内信号传导区域激活免疫细胞(例如，工程化以表达所述car的t细胞)的正常效应子功能或应答中的至少一种。例如，在一些情境下，所述car诱导t细胞的功能，如细胞裂解活性或t辅助活性，如细胞因子或其他因子的分泌。在一些实施方案中，使用抗原受体组分或共刺激分子的细胞内信号传导区域的截短部分(例如如果其转导效应子功能信号的话)代替完整的免疫刺激链。在一些实施方案中，所述细胞内信号传导区域(例如，包含一种或多种细胞内信号传导结构域)包括t细胞受体(tcr)的胞质序列，并且在一些方面还包括共受体(其在天然情境下与这种受体并行起作用以在抗原受体接合后启动信号转导)和/或此类分子的任何衍生物或变体的那些，和/或具有相同功能能力的任何合成序列。在天然tcr的情境下，完全激活通常不仅需要通过tcr进行信号传导，还需要共刺激信号。因此，在一些实施方案中，为了促进完全激活，所述car中还包括用于产生次级或共刺激信号的组分。在其他实施方案中，所述car不包括用于生成共刺激信号的组分。在一些方面，另外的car在同一细胞中表达，并且提供用于产生次级或共刺激信号的组分。在一些方面，t细胞激活被描述为由两个类别的胞质信号传导序列来介导：通过tcr启动抗原依赖性初级激活的那些序列(初级胞质信号传导序列)以及以非抗原依赖性方式作用以提供刺激或共刺激信号的那些序列(次级胞质信号传导序列)。在一些方面，所述car包括此类信号传导组分中的一种或两种。在一些方面，所述car包括调节所述tcr复合物的初级激活的初级胞质信号传导序列。以刺激方式起作用的初级胞质信号传导序列可以含有信号传导基序(其被称为基于免疫受体酪氨酸的激活基序或itam)。含有初级胞质信号传导序列的itam的例子包括衍生自tcr或cd3ζ、fcrγ或fcrβ的那些。在一些实施方案中，所述car中的一种或多种胞质信号传导分子含有衍生自cd3ζ的胞质信号传导结构域、其部分或序列。在一些实施方案中，所述car包括共刺激受体(如cd28、4-1bb、ox40、dap10和icos)的信号传导区域和/或跨膜部分。在一些方面，同一car包括信号传导区域和共刺激组分。在一些实施方案中，所述信号传导区域包括于一种car内，而所述共刺激组分是由识别另一种抗原的另一种car提供。在一些实施方案中，所述car包括在同一细胞上表达的激活性或刺激性car和共刺激car(参见wo2014/055668)。在某些实施方案中，所述细胞内信号传导区域包含连接至cd3(例如，cd3-ζ)细胞内结构域的cd28跨膜和信号传导结构域。在一些实施方案中，所述细胞内信号传导区域包含连接至cd3ζ细胞内结构域的嵌合cd28和cd137(4-1bb，tnfrsf9)共刺激结构域。在一些实施方案中，所述car涵盖在细胞质部分中的一种或多种(例如，两种或更多种)共刺激结构域和激活结构域(例如，初级激活结构域)。示例性car包括cd3-ζ、cd28和4-1bb的细胞内组分。在一些情况下，car被称为第一代、第二代和/或第三代car。在一些方面，第一代car是在抗原结合后仅提供cd3链诱导的信号的car；在一些方面，第二代car是提供这种信号和共刺激信号的car，如包括来自共刺激受体(如cd28或cd137)的细胞内信号传导结构域的car；在一些方面，第三代car是在一些方面包括不同共刺激受体的多个共刺激结构域的car。在一些实施方案中，所述嵌合抗原受体包括含有本文所述的抗体或抗体片段的细胞外部分。在一些方面，所述嵌合抗原受体包括含有本文所述的抗体或片段的细胞外部分和细胞内信号传导结构域。在一些实施方案中，所述抗体或片段包括scfv或单结构域vh抗体，并且所述细胞内结构域含有itam。在一些方面，所述细胞内信号传导结构域包括cd3-zeta(cd3ζ)链的ζ链的信号传导结构域。在一些实施方案中，所述嵌合抗原受体包括设置在细胞外结构域与细胞内信号传导区域之间的跨膜结构域。在一些方面，所述跨膜结构域含有cd28的跨膜部分。所述细胞外结构域和跨膜可以直接或间接连接。在一些实施方案中，所述细胞外结构域和跨膜通过间隔子(如本文所述的任何间隔子)连接。在一些实施方案中，所述嵌合抗原受体含有t细胞共刺激分子的细胞内结构域，如在跨膜结构域与细胞内信号传导结构域之间。在一些方面，所述t细胞共刺激分子是cd28或4-1bb。在一些实施方案中，所述car含有抗体(例如，抗体片段)、跨膜结构域(其是或含有cd28的跨膜部分或其功能变体)、以及含有cd28的信号传导部分或其功能变体和cd3ζ的信号传导部分或其功能变体的细胞内信号传导结构域。在一些实施方案中，所述car含有抗体(例如，抗体片段)、跨膜结构域(其是或含有cd28的跨膜部分或其功能变体)、以及含有4-1bb的信号传导部分或其功能变体和cd3ζ的信号传导部分或其功能变体的细胞内信号传导结构域。在一些此类实施方案中，所述受体还包括含有ig分子(如人ig分子)的一部分(如ig铰链，如igg4铰链)的间隔子，如仅铰链的间隔子。在一些实施方案中，所述受体(例如，car)的跨膜结构域是人cd28的跨膜结构域或其变体，例如人cd28(登录号：p10747.1)的27个氨基酸的跨膜结构域，或者是包含seqidno:138中所示氨基酸序列或展现与seqidno:138至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的氨基酸序列的跨膜结构域；在一些实施方案中，含有所述重组受体的一部分的跨膜结构域包含seqidno:139中所示的氨基酸序列或与seqidno:139具有至少或至少约85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述嵌合抗原受体含有t细胞共刺激分子的细胞内结构域。在一些方面，所述t细胞共刺激分子是cd28或4-1bb。在一些实施方案中，所述细胞内信号传导区域包含人cd28的细胞内共刺激信号传导结构域或其功能变体或部分，如其41个氨基酸的结构域，和/或在天然cd28蛋白的位置186-187处具有ll至gg取代的这种结构域。在一些实施方案中，所述细胞内信号传导结构域可以包含seqidno:140或141中所示的氨基酸序列或展现出与seqidno:140或141至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述细胞内区域包含4-1bb的细胞内共刺激信号传导结构域或其功能变体或部分，如人4-1bb(登录号q07011.1)的42个氨基酸的胞质结构域或其功能变体或部分，如seqidno:142中所示的氨基酸序列或展现出与seqidno:142至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述细胞内信号传导区域包含人cd3链、任选地cd3ζ刺激性信号传导结构域或其功能变体，例如人cd3ζ(登录号：p20963.2)的亚型3的112个aa的细胞质结构域或如美国专利号7,446,190或美国专利号8,911,993中所述的cd3ζ信号传导结构域。在一些实施方案中，所述细胞内信号传导区域包含seqidno:143、144或145中所示的氨基酸序列或展现出与seqidno:143、144或145至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的氨基酸序列。在一些方面，所述间隔子仅含有igg的铰链区，如仅igg4或igg1的铰链，如seqidno:133中所示的仅铰链的间隔子。在其他实施方案中，所述间隔子是与ch2和/或ch3结构域连接的ig铰链，例如igg4铰链。在一些实施方案中，所述间隔子是与ch2和ch3结构域连接的ig铰链，例如igg4铰链，如seqidno:135中所示。在一些实施方案中，所述间隔子是仅与ch3结构域连接的ig铰链，例如igg4铰链，如seqidno:136中所示。在一些实施方案中，所述间隔子是或包含富甘氨酸-丝氨酸的序列或其他柔性接头，如已知的柔性接头。在一些实施方案中，重组受体(例如car)或其他抗原受体还包括标记，例如细胞表面标记，其可以用于确认细胞表达受体的转导或工程化，所述受体例如细胞表面受体的截短形式，例如截短的egfr(tegfr)。在一些方面，所述标记包括cd34、ngfr或表皮生长因子受体的全部或部分(例如截短形式)(例如tegfr)。在某些实施方案中，tegfr含有seqidno:147或148所示的氨基酸序列。在特定实施方案中，tegfr含有与seqidno:147或148所示的序列具有、具有约或具有至少75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或99％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，编码所述标记的核酸与编码接头序列(如可切割接头序列，例如，t2a)的多核苷酸可操作地连接。例如，标记和任选地接头序列可以是如公开的专利申请号wo2014031687中所披露的任一种。例如，所述标记可以是截短的egfr(tegfr)，其任选地连接至接头序列，如t2a可切割接头序列。在核酸分子编码两条或更多条不同多肽链的某些情况下，所述多肽链中的每一条可以由单独的核酸分子编码。例如，提供了两个单独的核酸，并且每一个可以单独转移到或引入细胞中以在细胞中表达。在一些实施方案中，例如在所述多核苷酸含有第一和第二核酸序列的那些实施方案中，编码每条不同多肽链的编码序列可以与启动子可操作地连接，所述启动子可以是相同的或不同的。在一些实施方案中，所述核酸分子可以含有驱动两条或更多条不同多肽链表达的启动子。在一些实施方案中，此类核酸分子可以是多顺反子的(双顺反子的或三顺反子的，参见例如，美国专利号6,060,273)。在一些实施方案中，可以将转录单位工程化为含有ires(内部核糖体进入位点)的双顺反子单元，其允许通过来自单一启动子的信息共表达基因产物(例如编码psma或其修饰形式和编码重组受体)。可替代地，在一些情况下，单一启动子可引导rna的表达，所述rna在单一开放阅读框(orf)中含有两个或三个基因(例如编码psma或其修饰形式和编码重组受体)，所述基因通过编码自切割肽(例如，2a序列)的序列或蛋白酶识别位点(例如，弗林蛋白酶)彼此分开。因此，所述orf编码单个多肽，其在翻译期间(在2a的情况下)或翻译后被加工成单独蛋白质。在一些情况下，所述肽(如t2a)可以导致核糖体跳过(核糖体跳跃)2a元件c末端处的肽键的合成，这导致2a序列末端与下游的下一个肽之间分开(参见例如，defelipe.geneticvaccinesandther.2:13(2004)和defelipe等人traffic5:616-626(2004))。多种2a元件是已知的。可以用于本文公开的方法和系统中的2a序列的例子包括但不限于来自以下病毒的2a序列：口蹄疫病毒(f2a，例如seqidno:32)、马鼻炎a病毒(e2a，例如seqidno:153)、明脉扁刺蛾(thoseaasigna)病毒(t2a，例如seqidno:146或149)和猪捷申病毒-1(p2a，例如seqidno:151或152)，如美国专利公开号20070116690中所述。2.t细胞受体(tcr)在一些实施方案中，提供了工程化细胞(如t细胞)，其表达识别靶多肽(如肿瘤、病毒或自身免疫蛋白的抗原)的肽表位或t细胞表位的t细胞受体(tcr)或其抗原结合部分。在一些实施方案中，“t细胞受体”或“tcr”是含有可变α和β链(也分别称为tcrα和tcrβ)或可变γ和δ链(也分别称为tcrα和tcrβ)的分子或其抗原结合部分，并且所述分子或其抗原结合部分能够与结合至mhc分子的肽特异性地结合。在一些实施方案中，所述tcr呈αβ形式。通常，以αβ和γδ形式存在的tcr的结构上大体上相似，但是表达它们的t细胞可以具有不同的解剖学位置或功能。tcr可以在细胞的表面上发现或以可溶形式发现。通常，在t细胞(或t淋巴细胞)的表面上发现tcr，在此处它通常负责识别与主要组织相容性复合物(mhc)分子结合的抗原。除非另有说明，否则术语“tcr”应当理解为涵盖完整的tcr以及其抗原结合部分或其抗原结合片段。在一些实施方案中，所述tcr是完整或全长tcr，包括呈αβ形式或γδ形式的tcr。在一些实施方案中，所述tcr是如下抗原结合部分，其少于全长tcr但与在mhc分子中结合的特定肽结合(如与mhc-肽复合物结合)。在一些情况下，tcr的抗原结合部分或片段可以仅含有全长或完整tcr的结构性结构域的一部分，但是仍能够结合与完整tcr结合的肽表位(如mhc-肽复合物)。在一些情况下，抗原结合部分含有tcr的可变结构域(如tcr的可变α链和可变β链)，足以形成用于与特定mhc-肽复合物结合的结合位点。通常，tcr的可变链含有参与对肽、mhc和/或mhc-肽复合物的识别的互补决定区。在一些实施方案中，tcr的可变结构域含有超变环或互补决定区(cdr)，其通常是抗原识别和结合能力和特异性的主要贡献者。在一些实施方案中，tcr的cdr或其组合形成给定tcr分子的全部或基本上全部的抗原结合位点。tcr链的可变区内的各个cdr通常由框架区(fr)隔开，与cdr相比，所述框架区通常在tcr分子之间展示较低可变性(参见例如，jores等人,proc.nat'lacad.sci.u.s.a.87:9138,1990；chothia等人,emboj.7:3745,1988；还参见lefranc等人,dev.comp.immunol.27:55,2003)。在一些实施方案中，cdr3是负责抗原结合或特异性的主要cdr，或者是在给定tcr可变区上的用于所述肽-mhc复合物的加工肽部分的抗原识别和/或用于与所述肽-mhc复合物的加工肽部分相互作用的三个cdr中最重要的cdr。在一些情境下，所述α链的cdr1可以与某些抗原肽的n末端部分相互作用。在一些情境下，所述β链的cdr1可以与所述肽的c末端部分相互作用。在一些情境下，cdr2对与mhc-肽复合物的mhc部分的相互作用或识别具有最强的作用或者是主要的负责cdr。在一些实施方案中，所述β链的可变区可以含有另外的高变区(cdr4或hvr4)，其通常参与超抗原结合而非抗原识别(kotb(1995)clinicalmicrobiologyreviews,8:411-426)。在一些实施方案中，tcr还可以含有恒定结构域、跨膜结构域和/或短细胞质尾(参见例如，janeway等人,immunobiology:theimmunesysteminhealthanddisease,第3版,currentbiologypublications,第4页:33,1997)。在一些方面，tcr的每条链可以具有一个n末端免疫球蛋白可变结构域、一个免疫球蛋白恒定结构域、跨膜区和位于c末端的短细胞质尾。在一些实施方案中，tcr与参与介导信号转导的cd3复合物的不变蛋白质缔合。在一些实施方案中，tcr链含有一个或多个恒定结构域。例如，给定tcr链(例如，α链或β链)的细胞外部分可以含有与细胞膜相邻的两个免疫球蛋白样结构域，如可变结构域(例如，vα或vβ；通常基于kabat编号的氨基酸1至116，kabat等人,“sequencesofproteinsofimmunologicalinterest”,usdept.healthandhumanservices,publichealthservicenationalinstitutesofhealth,1991,第5版)和恒定结构域(例如，α链恒定域或cα，通常基于kabat编号的位置117至259；或β链恒定结构域或cβ，通常基于kabat的链的位置117至295)。例如，在一些情况下，由两条链形成的tcr的细胞外部分含有两个膜近端恒定结构域和两个膜远端可变结构域，所述可变结构域各自含有cdr。所述tcr的恒定结构域可以含有短连接序列，其中半胱氨酸残基形成二硫键，由此连接所述tcr的两条链。在一些实施方案中，tcr可以在α链和β链中的每一个中具有另外的半胱氨酸残基，使得所述tcr在恒定结构域中含有两个二硫键。在一些实施方案中，所述tcr链含有跨膜结构域。在一些实施方案中，所述跨膜结构域带正电荷。在一些情况下，所述tcr链含有胞质尾。在一些情况下，所述结构允许tcr与其他分子(像cd3)及其亚基缔合。例如，含有恒定结构域与跨膜区的tcr可以将所述蛋白质锚定在细胞膜中并与所述cd3信号传导设备或复合物的不变亚基缔合。cd3信号传导亚基(例如，cd3γ、cd3δ、cd3ε和cd3ζ链)的细胞内尾含有tcr复合物的信号传导能力中所涉及的一个或多个基于免疫受体酪氨酸的激活基序或itam。在一些实施方案中，所述tcr可以是两条链α和β(或者任选地γ和δ)的异二聚体，或者它可以是单链tcr构建体。在一些实施方案中，所述tcr是含有两条单独链(α和β链或γ和δ链)的异二聚体，所述链是通过例如一个或多个二硫键连接。在一些实施方案中，所述tcr可以从一种或多种已知的tcr序列(如vα、vβ链的序列)生成，所述一种或多种已知的tcr序列的基本上全长的编码序列是容易获得的。用于从细胞来源获得全长tcr序列(包括v链序列)的方法是熟知的。在一些实施方案中，编码所述tcr的核酸可以从多种来源获得，如通过一种或多种给定细胞内的或从所述一种或多种给定细胞分离的编码tcr的核酸的聚合酶链式反应(pcr)扩增获得，或者通过公众可获得的tcrdna序列的合成获得。在一些实施方案中，所述tcr是从生物来源获得，如来自细胞(如来自t细胞(例如细胞毒性t细胞))、t细胞杂交瘤或其他公众可获得的来源。在一些实施方案中，所述t细胞可以从体内分离的细胞获得。在一些实施方案中，所述tcr是胸腺选择的tcr。在一些实施方案中，所述tcr是新表位限制性tcr。在一些实施方案中，所述t细胞可以是培养的t细胞杂交瘤或克隆。在一些实施方案中，所述tcr或其抗原结合部分或其抗原结合片段可以根据对tcr序列的了解以合成方式生成。在一些实施方案中，所述tcr是从通过针对靶多肽抗原或其靶t细胞表位筛选候选tcr文库而鉴定或选择的tcr生成的。tcr文库可以通过扩增来自t细胞的vα和vβ库来生成，所述t细胞是从受试者分离，包括存在于pbmc、脾或其他淋巴器官中的细胞。在一些情况下，t细胞可以从肿瘤浸润性淋巴细胞(til)扩增。在一些实施方案中，可以从cd4 或cd8 细胞生成tcr文库。在一些实施方案中，所述tcr可以从正常或健康受试者的t细胞来源扩增，即正常tcr文库。在一些实施方案中，所述tcr可以从患病受试者的t细胞来源扩增，即患病tcr文库。在一些实施方案中，使用简并引物扩增vα和vβ的基因库，如在从人获得的样品(如t细胞)中通过rt-pcr扩增。在一些实施方案中，sctv文库可以从天然vα和vβ文库组装，其中扩增的产物被克隆或组装为通过接头隔开。根据受试者和细胞的来源，所述文库可以是hla等位基因特异性的。可替代地，在一些实施方案中，tcr文库可以通过亲本或支架tcr分子的诱变或多样化生成。在一些方面，使所述tcr经历例如α或β链的定向进化，如通过诱变来进行。在一些方面，所述tcr的cdr内的特定残基被改变。在一些实施方案中，可以通过亲和力成熟来修饰选择的tcr。在一些实施方案中，可以如通过筛选以评估针对所述肽的ctl活性来选择抗原特异性t细胞。在一些方面，可以如通过结合活性(例如对所述抗原的特定亲和力或亲合力)来选择例如存在于抗原特异性t细胞上的tcr。在一些实施方案中，所述tcr或其抗原结合部分是已经被修饰或工程化的。在一些实施方案中，使用定向进化方法来生成具有改变的特性(如具有较高的对特定mhc-肽复合物的亲和力)的tcr。在一些实施方案中，通过展示方法来实现定向进化，所述展示方法包括但不限于酵母展示(holler等人，(2003)natimmunol,4,55-62；holler等人(2000)procnatlacadsciusa,97,5387-92)、噬菌体展示(li等人(2005)natbiotechnol,23,349-54)、或t细胞展示(chervin等人(2008)jimmunolmethods,339,175-84)。在一些实施方案中，展示途径涉及工程化或修饰已知的亲本或参考tcr。例如，在一些情况下，可以使用野生型tcr作为模板用于产生诱变的tcr，其中cdr的一个或多个残基发生突变，并且选择具有所需的改变特性(如对所需靶抗原具有更高的亲和力)的突变体。在一些实施方案中，用于产生或生成目标tcr的靶多肽的肽是已知的或可以由熟练技术人员容易地鉴定。在一些实施方案中，适用于产生tcr或抗原结合部分的肽可以基于目标靶多肽(如下文所述的靶多肽)中hla限制性基序的存在来确定。在一些实施方案中，使用可用的计算机预测模型来鉴定肽。在一些实施方案中，对于预测mhci类结合位点，此类模型包括但不限于propred1(singh和raghava(2001)bioinformatics17(12):1236-1237)，以及syfpeithi(参见schuler等人(2007)immunoinformaticsmethodsinmolecularbiology,409(1):75-932007)。在一些实施方案中，mhc限制性表位是hla-a0201，其在所有高加索人的大约39％-46％中表达，并且因此代表用于制备tcr或其他mhc-肽结合分子的mhc抗原的合适选择。使用计算机预测模型的hla-a0201结合基序以及蛋白酶体和免疫蛋白酶体的切割位点是本领域技术人员已知的。用于预测mhci类结合位点的此类模型包括但不限于propred1(更详细地描述于singh和raghava,propred:predictionofhla-drbindingsites.bioinformatics17(12):1236-12372001中)和syfpeithi(参见schuler等人,syfpeithi,databaseforsearchingandt-cellepitopeprediction.inimmunoinformaticsmethodsinmolecularbiology,第409(1)卷:75-932007)。在一些实施方案中，所述tcr或其抗原结合部分可以是重组产生的天然蛋白或其突变形式，其中一种或多种特性(如结合特征)已经发生改变。在一些实施方案中，tcr可以衍生自各种动物物种之一，如人、小鼠、大鼠或其他哺乳动物。tcr可以是细胞结合的或呈可溶形式。在一些实施方案中，出于所提供的方法的目的，所述tcr呈在细胞表面上表达的细胞结合形式。在一些实施方案中，tcr是全长tcr。在一些实施方案中，tcr是抗原结合部分。在一些实施方案中，tcr是二聚体tcr(dtcr)。在一些实施方案中，tcr是单链tcr(sc-tcr)。在一些实施方案中，dtcr或sctcr具有如wo03/020763、wo04/033685、wo2011/044186中所述的结构。在一些实施方案中，所述tcr含有对应于跨膜序列的序列。在一些实施方案中，所述tcr确实含有对应于细胞质序列的序列。在一些实施方案中，所述tcr能够形成与cd3的tcr复合物。在一些实施方案中，任何tcr(包括dtcr或sctcr)可以与信号传导结构域连接，从而在t细胞表面上产生活性tcr。在一些实施方案中，所述tcr是在细胞表面上表达。在一些实施方案中，dtcr含有第一多肽(其中对应于tcrα链可变区序列的序列与对应于tcrα链恒定区细胞外序列的序列的n末端融合)和第二多肽(其中对应于tcrβ链可变区序列的序列与对应于tcrβ链恒定区细胞外序列的序列的n末端融合)，所述第一和第二多肽通过二硫键连接。在一些实施方案中，所述键可以对应于天然二聚体αβtcr中存在的天然链间二硫键。在一些实施方案中，所述链间二硫键不存在于天然tcr中。例如，在一些实施方案中，可以将一个或多个半胱氨酸掺入dtcr多肽对的恒定区细胞外序列中。在一些情况下，可能需要天然和非天然二硫键。在一些实施方案中，所述tcr含有跨膜序列以锚定至膜。在一些实施方案中，dtcr含有tcrα链，所述tcrα链含有可变α结构域、恒定α结构域和附接至所述恒定α结构域c末端的第一二聚化基序；和tcrβ链，所述tcrβ链包含可变β结构域、恒定β结构域和附接至所述恒定β结构域c末端的第一二聚化基序，其中所述第一和第二二聚化基序易于相互作用以在所述第一二聚化基序的氨基酸与所述第二二聚化基序的氨基酸之间形成共价键，从而将所述tcrα链与所述tcrβ链连接在一起。在一些实施方案中，所述tcr是sctcr。通常，可以使用本领域技术人员已知的方法来生成sctcr，参见例如，soohoo,w.f.等人pnas(usa)89,4759(1992)；wülfing,c.和plückthun,a.,j.mol.biol.242,655(1994)；kurucz,i.等人pnas(usa)903830(1993)；国际公开的pct号wo96/13593、wo96/18105、wo99/60120、wo99/18129、wo03/020763、wo2011/044186；以及schlueter,c.j.等人j.mol.biol.256,859(1996)。在一些实施方案中，sctcr含有引入的非天然链间二硫键以促进tcr链的缔合(参见例如，国际公开的pct号wo03/020763)。在一些实施方案中，sctcr是非二硫键连接的截短的tcr，其中与其c末端融合的异源亮氨酸拉链促进链缔合(参见例如，国际公开的pct号wo99/60120)。在一些实施方案中，sctcr含有经由肽接头与tcrβ可变结构域共价连接的tcrα可变结构域(参见例如，国际公开的pct号wo99/18129)。在一些实施方案中，sctcr含有由对应于tcrα链可变区的氨基酸序列构成的第一区段，由对应于tcrβ链可变区序列的氨基酸序列(融合至对应于tcrβ链恒定结构域细胞外序列的氨基酸序列的n末端)构成的第二区段，和将所述第一区段的c末端连接至所述第二区段的n末端的接头序列。在一些实施方案中，sctcr含有由融合至α链细胞外恒定结构域序列n末端的α链可变区序列构成的第一区段，和由融合至序列β链细胞外恒定和跨膜序列n末端的β链可变区序列构成的第二区段，以及任选地将所述第一区段c末端连接至所述第二区段n末端的接头序列。在一些实施方案中，sctcr含有由融合至β链细胞外恒定结构域序列n末端的tcrβ链可变区序列构成的第一区段，和由融合至序列α链细胞外恒定和跨膜序列n末端的α链可变区序列构成的第二区段，以及任选地将所述第一区段c末端连接至所述第二区段n末端的接头序列。在一些实施方案中，sctcr中连接所述第一和第二tcr区段的接头可以是能够在保持tcr结合特异性的同时形成单一多肽链的任何接头。在一些实施方案中，所述接头序列可以例如具有式-p-aa-p-，其中p是脯氨酸并且aa表示氨基酸序列，其中所述氨基酸是甘氨酸和丝氨酸。在一些实施方案中，所述第一和第二区段配对，使得其可变区序列定向用于这种结合。因此，在一些情况下，所述接头具有足够的长度以跨越所述第一区段的c末端与所述第二区段的n末端之间的距离，或反之亦然，但是不会太长而阻断或减少所述sctcr与靶配体的结合。在一些实施方案中，所述接头可以含有从或从约10个至45个氨基酸，如10至30个氨基酸或26个至41个氨基酸残基，例如29个、30个、31个或32个氨基酸。在一些实施方案中，接头具有式-pggg-(sgggg)5-p-，其中p是脯氨酸，g是甘氨酸并且s是丝氨酸(seqidno:28)。在一些实施方案中，所述接头具有序列gsaddakkdaakkdgks(seqidno:29)。在一些实施方案中，所述sctcr含有共价二硫键，其将α链的恒定结构域的免疫球蛋白区域的残基连接至β链的恒定结构域的免疫球蛋白区域的残基。在一些实施方案中，天然tcr中不存在链间二硫键。例如，在一些实施方案中，可以将一个或多个半胱氨酸掺入所述sctcr多肽的第一和第二区段的恒定区细胞外序列中。在一些情况下，可能需要天然和非天然二硫键。在dtcr或sctcr含有引入的链间二硫键的一些实施方案中，不存在天然二硫键。在一些实施方案中，将形成天然链间二硫键的所述一个或多个天然半胱氨酸取代为另一种残基，如取代为丝氨酸或丙氨酸。在一些实施方案中，可以通过使第一和第二区段上的非半胱氨酸残基突变为半胱氨酸来形成引入的二硫键。tcr的示例性非天然二硫键描述于公开的国际pct号wo2006/000830中。在一些实施方案中，tcr或其抗原结合片段对靶抗原以平衡结合常数展现出亲和力，所述平衡结合常数是在或在约10-5与10-12m之间以及其中的所有单独值和范围。在一些实施方案中，靶抗原是mhc-肽复合物或配体。在一些实施方案中，编码tcr(如α和β链)的一种或多种核酸可以通过pcr、克隆或其他合适的方法扩增，并且克隆到合适的表达载体中。表达载体可以是任何合适的重组表达载体，并且可以用于转化或转染任何合适的宿主。合适的载体包括设计用于繁殖和扩增或用于表达或用于两者的那些，如质粒和病毒。在一些实施方案中，所述载体可以是以下系列的载体：puc系列(fermentaslifesciences)、pbluescript系列(stratagene，加利福尼亚州拉霍亚(lajolla,calif.))、pet系列(novagen，威斯康星州麦迪逊(madison,wis.))、pgex系列(pharmaciabiotech，瑞典乌普萨拉)或pex系列(clontech，加利福尼亚州帕罗奥图(paloalto,calif.))。在一些情况下，也可以使用噬菌体载体，如λg10、λgt11、λzapii(stratagene)、λembl4和λnm1149。在一些实施方案中，可以使用植物表达载体，并且包括pbi01、pbi101.2、pbi101.3、pbi121和pbin19(clontech)。在一些实施方案中，动物表达载体包括peuk-cl、pmam和pmamneo(clontech)。在一些实施方案中，使用病毒载体，如逆转录病毒载体。在一些实施方案中，可以使用标准重组dna技术来制备重组表达载体。在一些实施方案中，载体可以含有调节序列(如转录和翻译起始和终止密码子)，其对引入载体的宿主(例如，细菌、真菌、植物或动物)的类型具有特异性，酌情并考虑所述载体是基于dna还是基于rna。在一些实施方案中，所述载体可以含有非天然启动子，其可操作地连接至编码所述tcr或抗原结合部分(或其他mhc-肽结合分子)的核苷酸序列。在一些实施方案中，所述启动子可以是非病毒启动子或病毒启动子，如巨细胞病毒(cmv)启动子、sv40启动子、rsv启动子和在鼠干细胞病毒的长末端重复序列中发现的启动子。还设想了其他已知的启动子。在一些实施方案中，为了生成编码tcr的载体，将α和β链从表达目标tcr的t细胞克隆分离的总cdna进行pcr扩增，并且将其克隆到表达载体中。在一些实施方案中，将α和β链克隆到同一载体中。在一些实施方案中，将α和β链克隆到不同的载体中。在一些实施方案中，将所生成的α和β链掺入逆转录病毒(例如，慢病毒)载体中。c.将核酸和载体引入细胞中用于引入基因工程化组分例如重组受体(例如car或tcr)的各种方法是熟知的，并且可以与所提供的方法和组合物一起使用。示例性方法包括用于转移编码所述多肽或受体的核酸的那些方法，包括经由病毒载体，例如逆转录病毒或慢病毒、非病毒载体或转座子(例如睡美人转座子系统)。基因转移的方法可以包括转导、电穿孔或导致基因转移到细胞中的其他方法。在一些实施方案中，通过以下方式完成基因转移：首先刺激所述细胞，如通过将其与诱导应答(如增殖、存活和/或激活，例如如通过细胞因子或激活标记的表达所测量的)的刺激进行组合，然后转导激活的细胞，并且在培养物中扩增至足以用于临床应用的数量。在一些情境下，可能需要防止刺激因子(例如，淋巴因子或细胞因子)的过表达可能潜在地导致受试者中不希望的结果或较低的功效(如受试者中与毒性相关的因素)的可能性。因此，在一些情境下，所述工程化细胞包括导致细胞在体内(如在过继免疫疗法中给予时)对阴性选择易感的基因区段。例如，在一些方面，将所述细胞工程化，使得它们可以由于给予它们的患者的体内状况的改变而被消除。所述阴性选择性表型可以由赋予对所给予的药剂(例如，化合物)的敏感性的基因的插入而产生。阴性选择性基因包括单纯疱疹病毒i型胸苷激酶(hsv-itk)基因(wigler等人,cell2:223,i977)，其赋予更昔洛韦敏感性；细胞次黄嘌呤磷酸核糖基转移酶(hprt)基因；细胞腺嘌呤磷酸核糖基转移酶(aprt)基因；细菌胞嘧啶脱氨酶(mullen等人,proc.natl.acad.sci.usa.89:33(1992))。在一些实施方案中，可以将所述细胞(例如，t细胞)在扩增期间或之后例如用编码重组受体(例如，t细胞受体(tcr)或嵌合抗原受体(car))的核酸进行转染。例如，用于引入所需多肽或受体的基因的这种转染可以用任何合适的基于基因的转移系统(包括经由逆转录病毒载体)进行。在一些实施方案中，可以将基因工程化细胞群相伴随地、同时或随后地用抗原刺激，例如经由从头引入的受体，例如按照所提供的方法来刺激。在一些实施方案中，存在于所提供的颗粒(例如珠)上的结合分子提供抗原刺激，例如以同源(交联)抗原、或遗传引入的受体的配体(例如car的天然配体)、或直接结合或识别重组受体的抗独特型抗体形式提供的。另外的核酸(例如，用于引入的基因)包括用于改善治疗功效的那些，如通过促进转移细胞的活力和/或功能；用于提供选择和/或评估细胞的遗传标记的基因，如以评估体内存活或定位；改善安全性的基因，例如通过使细胞在体内对阴性选择易感，如luptons.d.等人,mol.andcellbiol.,11:6(1991)和riddell等人,humangenetherapy3:319-338(1992)所述；还参见lupton等人的pct/us91/08442和pct/us94/05601的出版物，其描述了使用由将显性阳性选择性标记与阴性选择性标记融合而得到的双功能选择性融合基因。参见例如，riddell等人,美国专利号6,040,177,第14-17栏。如上所述，在一些实施方案中，在基因工程化之前或与基因工程化结合孵育和/或培养细胞。所述孵育步骤可以包括培养、培育、刺激、激活、繁殖和/或冷冻以保存(例如冷冻保存)。1.病毒载体粒子在一些实施方案中，使用重组感染性病毒粒子(例如像源自猿猴病毒40(sv40)、腺病毒、腺相关病毒(aav)的载体)将重组核酸转移到细胞中。在一些实施方案中，使用重组慢病毒载体或逆转录病毒载体(如γ-逆转录病毒载体)将重组核酸转移到t细胞中(参见例如，koste等人(2014)genetherapy2014年4月3日.doi:10.1038/gt.2014.25；carlens等人(2000)exphematol28(10):1137-46；alonso-camino等人(2013)molthernuclacids2,e93；park等人,trendsbiotechnol.2011年11月29(11):550–557。在一些实施方案中，逆转录病毒载体具有长末端重复序列(ltr)，例如，衍生自莫洛尼鼠白血病病毒(momlv)、骨髓增生性肉瘤病毒(mpsv)、鼠胚胎干细胞病毒(mesv)、鼠干细胞病毒(mscv)、脾病灶形成病毒(sffv)或腺相关病毒(aav)的逆转录病毒载体。大多数逆转录病毒载体衍生自鼠逆转录病毒。在一些实施方案中，所述逆转录病毒包括衍生自任何禽类或哺乳动物细胞来源的那些。所述逆转录病毒通常是双嗜性的，这意味着它们能够感染包括人在内的若干个物种的宿主细胞。在一个实施方案中，要表达的基因替代逆转录病毒的gag、pol和/或env序列。已经描述了许多说明性逆转录病毒系统(例如，美国专利号5,219,740；6,207,453；5,219,740；miller和rosman(1989)biotechniques7:980-990；miller,a.d.(1990)humangenetherapy1:5-14；scarpa等人(1991)virology180:849-852；burns等人(1993)proc.natl.acad.sci.usa90:8033-8037；以及boris-lawrie和temin(1993)cur.opin.genet.develop.3:102-109。慢病毒转导的方法是已知的。示例性方法描述于例如wang等人(2012)j.immunother.35(9):689-701；cooper等人(2003)blood.101:1637-1644；verhoeyen等人(2009)methodsmolbiol.506:97-114；以及cavalieri等人(2003)blood.102(2):497-505中。在一些实施方案中，病毒载体粒子含有源自基于逆转录病毒基因组的载体(例如源自基于慢病毒基因组的载体)的基因组。在所提供的病毒载体的一些方面，编码重组受体(例如抗原受体，例如car)的异源核酸含于和/或位于载体基因组的5'ltr与3'ltr序列之间。在一些实施方案中，病毒载体基因组是慢病毒基因组，如hiv-1基因组或siv基因组。例如，已经通过多次减弱毒力基因生成慢病毒载体，例如，可以使基因env、vif、vpu和nef缺失，使得载体对于治疗目的更安全。慢病毒载体是已知的。参见naldini等人，(1996和1998)；zufferey等人,(1997)；dull等人,1998，美国专利号6,013,516和5,994,136。在一些实施方案中，这些病毒载体是基于质粒的或基于病毒的，并且被配置为携带用于掺入外来核酸的基本序列，用于选择和用于将所述核酸转移到宿主细胞中。已知的慢病毒可以容易地从保管机构或保藏中心例如美国典型培养物保藏中心(“atcc”；10801universityblvd.，manassas，va.20110-2209)获得，或使用常用技术从已知来源分离。慢病毒载体的非限制性例子包括源自慢病毒的那些，例如人免疫缺陷病毒1(hiv-1)、hiv-2、猿猴免疫缺陷病毒(siv)、人嗜t淋巴细胞病毒1(htlv-1)、htlv-2或马感染贫血病毒(e1av)。例如，已经通过多次减弱hiv毒力基因生成慢病毒载体，例如，使基因env、vif、vpr、vpu和nef缺失，使得载体对于治疗目的更安全。慢病毒载体在本领域中是已知的，参见naldini等人，(1996和1998)；zufferey等人,(1997)；dull等人,1998，美国专利号6,013,516和5,994,136。在一些实施方案中，这些病毒载体是基于质粒的或基于病毒的，并且被配置为携带用于掺入外来核酸的基本序列，用于选择和用于将所述核酸转移到宿主细胞中。已知的慢病毒可以容易地从保管机构或保藏中心例如美国典型培养物保藏中心(“atcc”；10801universityblvd.，manassas，va.20110-2209)获得，或使用常用技术从已知来源分离。在一些实施方案中，病毒基因组载体可以含有逆转录病毒(例如慢病毒)的5'和3'ltr的序列。在一些方面，病毒基因组构建体可含有来自慢病毒的5'和3'ltr的序列，并且具体而言可以含有来自慢病毒的5'ltr的r和u5序列以及来自慢病毒的失活或自失活3'ltr。ltr序列可以是来自任何物种的任何慢病毒的ltr序列。例如，它们可以是来自hiv、siv、fiv或biv的ltr序列。通常，ltr序列是hivltr序列。在一些实施方案中，病毒载体(例如hiv病毒载体)的核酸缺乏另外的转录单元。载体基因组可以含有失活或自失活的3'ltr(zufferey等人jvirol72：9873,1998；miyoshi等人,jvirol72:8150,1998)。例如，用于产生病毒载体rna的核酸的3'ltr的u3区中的缺失可用于生成自失活(sin)载体。然后可以在逆转录期间将这种缺失转移至原病毒dna的5'ltr。自失活载体通常具有从3'长末端重复序列(ltr)的增强子和启动子序列缺失，所述缺失在载体整合期间被复制到5'ltr中。在一些实施方案中，可以消除足够的序列，包括去除tata盒，以消除ltr的转录活性。这可以防止在转导的细胞中产生全长载体rna。在一些方面，3'ltr的u3元件含有其增强子序列、tata盒、sp1和nf-κb位点的缺失。由于自失活3'ltr，在进入和逆转录后生成的原病毒含有失活的5'ltr。这可以通过降低动员载体基因组的风险和ltr对附近细胞启动子的影响来提高安全性。可以通过本领域已知的任何方法来构建自失活3'ltr。在一些实施方案中，这不会影响载体滴度或载体的体外或体内特性。任选地，来自慢病毒5'ltr的u3序列可以在病毒构建体中用启动子序列(例如异源启动子序列)替代。这可以增加从包装细胞系回收的病毒的滴度。也可以包括增强子序列。可以使用增加包装细胞系中病毒rna基因组表达的任何增强子/启动子组合。在一个例子中，使用cmv增强子/启动子序列(美国专利号5,385,839和美国专利号5,168,062)。在某些实施方案中，可以通过将逆转录病毒载体基因组(例如慢病毒载体基因组)构建为整合缺陷性来使插入诱变的风险降至最低。可以采用多种途径来产生非整合的载体基因组。在一些实施方案中，可以将一种或多种突变工程化至pol基因的整合酶组分中，使得其编码具有无活性整合酶的蛋白质。在一些实施方案中，可以修饰载体基因组本身以通过例如使一个或两个附接位点突变或缺失来防止整合，或通过缺失或修饰使3'ltr近端多嘌呤束(ppt)没有功能。在一些实施方案中，可以使用非遗传途径；这些途径包括抑制整合酶的一种或多种功能的药理学药剂。这些途径并不相互排斥；也就是说，可以一次使用多于一种所述途径。例如，整合酶和附接位点二者可以都没有功能，或者整合酶和ppt位点可以没有功能，或者附接位点和ppt位点可以没有功能，或者它们全部都可以没有功能。此类方法和病毒载体基因组是已知的并且是可获得的(参见philpott和thrasher,humangenetherapy18:483,2007；engelman等人jvirol69:2729,1995；brown等人jvirol73:9011(1999)；wo2009/076524；mcwilliams等人,jvirol77:11150,2003；powell和levinjvirol70:5288,1996)。在一些实施方案中，载体含有用于在宿主细胞(例如原核宿主细胞)中繁殖的序列。在一些实施方案中，病毒载体的核酸含有用于在原核细胞(如细菌细胞)中增殖的一个或多个复制起点。在一些实施方案中，包括原核复制起点的载体也可含有一种如下基因，所述基因的表达赋予可检测或可选择的标记，例如抗药性。病毒载体基因组通常以质粒形式构建，其可以转染到包装细胞系或生产细胞系中。可以使用多种已知方法中的任何一种来产生逆转录病毒粒子，其基因组含有病毒载体基因组的rna拷贝。在一些实施方案中，至少两种组分参与制备基于病毒的基因传递系统：第一，包装质粒，包括结构蛋白以及生成病毒载体粒子所必需的酶，第二，病毒载体本身，即，要转移的遗传物质。可以在设计这些组分中的一个或两个时引入生物安全保护措施。在一些实施方案中，包装质粒可以含有除了包膜蛋白以外的所有逆转录病毒(如hiv-1)蛋白(naldini等人，1998)。在其他实施方案中，病毒载体可能缺乏另外的病毒基因(例如与毒力有关的那些，例如vpr、vif、vpu和nef)和/或tat(hiv的主要反式激活因子)。在一些实施方案中，慢病毒载体(例如基于hiv的慢病毒载体)仅包含三种亲本病毒的基因：gag、pol和rev，这减少或消除了野生型病毒通过重组而重构的可能性。在一些实施方案中，将病毒载体基因组引入包装细胞系中，所述细胞系含有将从病毒载体基因组转录的病毒基因组rna包装至病毒粒子中所需的所有组分。可替代地，除了一种或多种目标序列(例如重组核酸)以外，病毒载体基因组可包含一种或多种编码病毒组分的基因。然而，在一些方面，为了防止基因组在靶细胞中复制，将复制所需的内源病毒基因去除，并在包装细胞系中单独提供。在一些实施方案中，用一种或多种含有生成所述粒子所需组分的质粒载体转染包装细胞系。在一些实施方案中，用含有病毒载体基因组(包括ltr、顺式作用包装序列和目标序列，即编码抗原受体(例如car)的核酸)的质粒；以及编码病毒酶和/或结构组分(例如gag、pol和/或rev)的一种或多种辅助质粒转染包装细胞系。在一些实施方案中，利用多种载体分离生成逆转录病毒载体粒子的各种遗传组分。在一些此类实施方案中，向包装细胞提供单独的载体减少了重组事件的可能性，否则可能生成有复制能力的病毒。在一些实施方案中，可以使用具有所有逆转录病毒组分的单个质粒载体。在一些实施方案中，将逆转录病毒载体粒子(例如慢病毒载体粒子)假型化以增加宿主细胞的转导效率。例如，在一些实施方案中，将逆转录病毒载体粒子(例如慢病毒载体粒子)用vsv-g糖蛋白假型化，其提供宽细胞宿主范围，从而扩展可以转导的细胞类型。在一些实施方案中，用编码非天然包膜糖蛋白的质粒或多核苷酸转染包装细胞系，以例如包括嗜异性，多嗜性或双嗜性包膜，例如辛德毕斯病毒(sindbisvirus)包膜、galv或vsv-g。在一些实施方案中，包装细胞系提供将病毒基因组rna包装至慢病毒载体粒子中反式作用所需的组分，包括病毒调节蛋白和结构蛋白。在一些实施方案中，包装细胞系可以是能够表达慢病毒蛋白并产生功能性慢病毒载体粒子的任何细胞系。在一些方面，合适的包装细胞系包括293(atcccclx)、293t、hela(atccccl2)、d17(atccccl183)、mdck(atccccl34)、bhk(atccccl-10)和cf2th(atcccrl1430)细胞。在一些实施方案中，包装细胞系稳定地表达一种或多种病毒蛋白质。例如，在一些方面，可以构建含有gag、pol、rev和/或其他结构基因但不含ltr和包装组分的包装细胞系。在一些实施方案中，可以用编码一种或多种病毒蛋白的核酸分子以及含有编码异源蛋白的核酸分子的病毒载体基因组和/或编码包膜糖蛋白的核酸对包装细胞系进行瞬时转染。在一些实施方案中，将病毒载体和包装质粒和/或辅助质粒通过转染或感染引入包装细胞系中。包装细胞系产生含有病毒载体基因组的病毒载体粒子。用于转染或感染的方法是熟知的。非限制性例子包括磷酸钙、deae-葡聚糖和脂质转染方法、电穿孔和显微注射。在将重组质粒和逆转录病毒ltr和包装序列引入特殊细胞系(例如，通过磷酸钙沉淀)中时，包装序列可以允许待包装至病毒粒子中的重组质粒的rna转录，然后所述病毒粒子可能会被分泌到培养基中。在一些实施方案中，然后收集含有重组逆转录病毒的培养基，任选地将其浓缩，并用于基因转移。例如，在一些方面，在将包装质粒和转移载体共转染至包装细胞系后，从培养基回收病毒载体粒子，并通过本领域技术人员使用的标准方法进行滴定。在一些实施方案中，可以通过引入质粒以允许产生慢病毒粒子，而在包装细胞系(例如示例性hek293t细胞系)中产生逆转录病毒载体，例如慢病毒载体。在一些实施方案中，包装细胞被转染和/或含有编码gag和pol的多核苷酸，以及编码重组受体(例如抗原受体，例如car)的多核苷酸。在一些实施方案中，包装细胞系被任选地和/或另外用编码rev蛋白的多核苷酸转染和/或含有所述多核苷酸。在一些实施方案中，包装细胞系被任选地和/或另外用编码非天然包膜糖蛋白(例如vsv-g)的多核苷酸转染和/或含有所述多核苷酸。在一些此类实施方案中，在转染细胞(例如，hek293t细胞)后大约两天，细胞上清液含有可以回收并滴定的重组慢病毒载体。所回收和/或产生的逆转录病毒载体粒子可以用于使用如所述的方法转导靶细胞。一旦进入靶细胞中，病毒rna就被逆转录，进入细胞核中并稳定整合到宿主基因组中。在病毒rna整合后一天或两天，可以检测到重组蛋白(例如抗原受体，例如car)的表达。在一些实施方案中，所提供的方法涉及通过使包含多个细胞的细胞组合物与病毒粒子接触(例如孵育)来转导细胞的方法。在一些实施方案中，待转染或转导的细胞是或包含从受试者获得的原代细胞，例如从受试者富集和/或选择的细胞。在一些实施方案中，组合物中待转导的细胞的浓度为从或从约1.0x105个细胞/ml至1.0x108个细胞/ml，例如至少或约至少或约1.0x105个细胞/ml、5x105个细胞/ml、1x106个细胞/ml、5x106个细胞/ml、1x107个细胞/ml、5x107个细胞/ml或1x108个细胞/ml。在一些实施方案中，病毒粒子是以病毒载体粒子拷贝或其感染单位(iu)与待转导的细胞总数的某一比率(iu/细胞)来提供。例如，在一些实施方案中，病毒粒子在接触期间是以为或为约或至少为或为约每个细胞0.5、1、2、3、4、5、10、15、20、30、40、50或60iu的病毒载体粒子存在。在一些实施方案中，病毒载体粒子的滴度在或在约1x106iu/ml与1x108iu/ml之间，例如在或在约5x106iu/ml与5x107iu/ml之间，例如至少6x106iu/ml、7x106iu/ml、8x106iu/ml、9x106iu/ml、1x107iu/ml、2x107iu/ml、3x107iu/ml、4x107iu/ml或5x107iu/ml。在一些实施方案中，可以按小于100、例如通常小于60、50、40、30、20、10、5或更小的感染复数(moi)来实现转导。在一些实施方案中，所述方法涉及使细胞与病毒粒子接触或孵育。在一些实施方案中，接触进行30分钟至72小时，例如30分钟至48小时、30分钟至24小时或1小时至24小时，例如至少或约至少30分钟、1小时、2小时、6小时、12小时、24小时、36小时或更长时间。在一些实施方案中，接触是在溶液中进行。在一些实施方案中，使细胞和病毒粒子以为或为约0.5ml至500ml的体积接触，所述体积例如为或为约0.5ml至200ml、0.5ml至100ml、0.5ml至50ml、0.5ml至10ml、0.5ml至5ml、5ml至500ml、5ml至200ml、5ml至100ml、5ml至50ml、5ml至10ml、10ml至500ml、10ml至200ml、10ml至100ml、10ml至50ml、50ml至500ml、50ml至200ml、50ml至100ml、100ml至500ml、100ml至200ml或200ml至500ml。在一些实施方案中，接触可以通过离心、例如旋转接种(例如离心接种)来实现。在一些实施方案中，可以使含有细胞、病毒粒子和试剂的组合物旋转，通常以相对较低的力或速度旋转，例如速度低于用于沉淀细胞的速度，例如为或为约600rpm至1700rpm(例如，为或为约或至少600rpm、1000rpm或1500rpm或1700rpm)。在一些实施方案中，旋转是以为或为约100g至3200g(例如，为或为约或至少为或为约100g、200g、300g、400g、500g、1000g、1500g、2000g、2500g、3000g或3200g)的力(例如，相对离心力)来进行，如例如在室或空腔的内壁或外壁处所测量。术语“相对离心力”或rcf通常被理解为在如与旋转轴相比在空间的特定点处，相对于地球的重力，施加在物体或物质(例如细胞、样品或团粒和/或所旋转的室或其他容器中的点)上的有效力。所述值可以使用熟知的公式来确定，所述公式考虑到重力、旋转速度和旋转半径(与旋转轴的距离以及测量rcf的物体、物质或颗粒)。在某些实施方案中，将输入细胞用包含结合分子的颗粒(例如珠)处理、与包含结合分子的颗粒(例如珠)一起孵育或与包含结合分子的颗粒(例如珠)接触，所述结合分子结合或识别由病毒dna编码的重组受体。在一些实施方案中，细胞与病毒载体粒子的孵育导致或产生包含用病毒载体粒子转导的细胞的输出组合物。2.非病毒载体在一些实施方案中，经由电穿孔将重组核酸转移到t细胞中(参见例如，chicaybam等人,(2013)plosone8(3):e60298和vantedeloo等人(2000)genetherapy7(16):1431-1437)。在一些实施方案中，经由转座将重组核酸转移到t细胞中(参见例如，manuri等人(2010)humgenether21(4):427-437；sharma等人(2013)molecthernuclacids2,e74；以及huang等人(2009)methodsmolbiol506:115-126)。在免疫细胞中引入和表达遗传物质的其他方法包括磷酸钙转染(例如，如在currentprotocolsinmolecularbiology,johnwiley&sons,newyork.n.y.中所述)、原生质体融合、阳离子脂质体介导的转染；钨粒子促进的微粒轰击(johnston,nature,346:776-777(1990))；以及磷酸锶dna共沉淀(brash等人,mol.cellbiol.,7:2031-2034(1987))。用于转移编码重组产物的核酸的其他方法和载体是例如国际专利申请公开号wo2014055668和美国专利号7,446,190中描述的那些。在一些实施方案中，将重组核酸经由转座子转移到t细胞中。转座子(转座元件)是可以从基因组内的一个基因座移动到另一个基因座的dna可移动区段。这些元件经由保守的“剪切粘贴”机制移动：转座酶催化转座子从其原始位置切除，并促进其在基因组中的其他位置的重新整合。如果转座酶是由另一个转座酶基因提供，则可以移动缺乏转座酶的元件。因此，可以将转座子用于将外来dna掺入宿主基因组中而无需使用病毒转导系统。适合于与哺乳动物细胞(例如人原代白细胞)一起使用的转座子的例子包括但不限于睡美人(sleepingbeauty)和piggybac。基于转座子的转染是由转座酶和转座子组成的两组分系统。在一些实施方案中，将包含转座子的系统工程化成包含外来dna(本文也称为货物dna)(例如编码重组受体的基因)，其侧翼为由伴随的转座酶识别的反向重复/正向重复(ir/dr)序列。在一些实施方案中，非病毒质粒编码在启动子的控制下的转座酶。将质粒转染到宿主细胞中导致转座酶的瞬时表达，因此对于转染后的最初时期，转座酶以足以将转座子整合到基因组dna中的水平表达。在一些实施方案中，转座酶本身不整合到基因组dna中，并且因此转座酶的表达随时间推移降低。在一些实施方案中，转座酶表达由宿主细胞以足以使对应转座子整合持续以下时间的水平表达：少于约4小时、少于约8小时、少于约12小时、少于约24小时、少于约2天、少于约3天、少于约4天、少于约5天、少于约6天、少于约7天、少于约2周、少于约3周、少于约4周、少于约周、或少于约8周。在一些实施方案中，引入宿主基因组中的货物dna随后不会从宿主基因组中除去，至少是因为宿主不表达能够切除货物dna的内源转座酶。睡美人(sb)是转座子的tc/1-水手超家族的合成成员，是由鲑科鱼基因组中具有的休眠元件重新构建的。基于sb转座子的转染是一个由转座酶和转座子组成的两组分系统，所述转座子含有导致精确整合到ta二核苷酸中的反向重复/正向重复(ir/dr)序列。将转座子设计成具有侧翼为ir/dr的目标表达盒。sb转座酶结合位于睡美人转座子ir上的特异性结合位点。sb转座酶介导转座子的整合，所述转座子是编码货物序列的可移动元件，在所述货物序列的两侧都侧接着具有催化性酶(sb)结合位点的反向末端重复序列。当sb通过剪切粘贴机制将基因序列在ta靶二核苷酸处插入脊椎动物染色体中时，获得稳定的表达。已将此系统用于工程化各种脊椎动物细胞类型，包括人原代外周血白细胞。在一些实施方案中，将细胞与sb转座子接触、与sb转座子一起孵育和/或用sb转座子处理，所述sb转座子包含货物基因(例如编码重组受体或car的基因)，所述货物基因的侧翼为sbir序列。在特定实施方案中，将待转染的细胞与包含sb转座子的质粒接触、与包含sb转座子的质粒一起孵育、和/或用包含sb转座子的质粒处理，所述sb转座子包含货物基因(例如编码car的基因)，所述货物基因的侧翼为sbir序列。在某些实施方案中，所述质粒还包含侧翼没有sbir序列的编码sb转座酶的基因。seqidno:26提供了示例性sbir序列。编码sb转座酶的示例性多核苷酸序列和示例性sb转座酶的氨基酸序列分别由seqidno:24和25提供。piggybac(pb)是可以用于将货物dna整合到宿主(例如人)的基因组dna中的另一种转座子系统。pb转座酶识别位于转座子两个末端的pb转座子特异性反向末端重复序列(itr)，并且高效地将内容物从原始位点移出并将所述内容物高效地整合到ttaa染色体位点中。pb转座子系统使得能够将pb载体中两个itr之间的目标基因移动到靶基因组中。已将pb系统用于工程化各种脊椎动物细胞类型，包括人原代细胞。在一些实施方案中，将待转染的细胞与pb转座子接触、与pb转座子一起孵育、和/或用pb转座子处理，所述pb转座子包含货物基因(例如编码car的基因)，所述货物基因的侧翼为pbir序列。在特定实施方案中，将待转染的细胞与包含pb转座子的质粒接触、与包含pb转座子的质粒一起孵育、和/或用包含pb转座子的质粒处理，所述pb转座子包含货物基因(例如编码car的基因)，所述货物基因的侧翼为pbir序列。在某些实施方案中，所述质粒还包含侧翼没有pbir序列的编码sb转座酶的基因。seqidno:27示出了示例性pbir序列。seqidno:28示出了编码pb转座酶的示例性多核苷酸序列。seqidno:29示出了示例性pb转座酶的氨基酸序列。在一些实施方案中，可以通过限制酶切割、连接和分子克隆的标准方法来产生用于主题方法中的转座子/转座酶的各种元件，例如一种或多种sb或pb载体。用于构建主题载体的一种方案包括以下步骤。首先，用限制性核酸内切酶从初始来源(例如包含转座酶基因的载体)切割经纯化的核酸片段，所述核酸片段含有所需组分核苷酸序列以及外来序列。然后使用常规分离方法(例如通过琼脂糖凝胶电泳)将含有所需核苷酸序列的片段与不同大小的不需要片段分离。将所需片段从凝胶上切下，并以适当的构型连接在一起，从而产生含有所需序列(例如如上所述的与主题载体的各种元件对应的序列)的环状核酸或质粒。然后，在需要的情况下，在原核宿主(例如大肠杆菌)中扩增如此构建的环状分子。这些步骤中涉及的切割、质粒构建、细胞转化和质粒生产的程序对本领域技术人员而言是熟知的，并且限制性酶切和连接所需的酶可商购获得。(参见例如，r.wu编辑,methodsinenzymology,第68卷,academicpress,n.y.(1979)；t.maniatis,e.f.fritsch和j.sambrook,molecularcloning:alaboratorymanual,coldspringharborlaboratorypress,coldspringharbor,n.y.(1982)；目录号1982-83,newenglandbiolabs,inc.；目录号1982-83,bethesdaresearchlaboratories,inc.在下文实验章节提供了如何构建在主题方法中使用的载体的例子。在wo98/40510和wo99/25817中也披露了代表性的“睡美人”转座子系统的制备)。在一些实施方案中，用包含转座酶基因的质粒和包含转座子的质粒进行用转座子的转导，所述转座子含有侧翼为由转座酶识别的反向重复/正向重复(ir/dr)序列的货物dna序列。在某些实施方案中，货物dna序列编码异源蛋白质，例如重组t细胞受体或car。在一些实施方案中，质粒包含转座酶和转座子。在一些实施方案中，转座酶在遍在启动子或适合于驱动转座酶在靶细胞中表达的任何启动子的控制下。遍在启动子包括但不限于ef1a、cmb、sv40、pgk1、ubc、人β-肌动蛋白、cag、tre、uas、ac5、camkiia和u6。在一些实施方案中，货物dna包含选择盒，所述选择盒允许选择将货物dna稳定整合到基因组dna中的细胞。合适的选择盒包括但不限于编码以下的选择盒：卡那霉素抗性基因、壮观霉素抗性基因、链霉素抗性基因、氨苄青霉素抗性基因、羧苄青霉素抗性基因、潮霉素抗性基因、博来霉素抗性基因、红霉素抗性基因和多粘菌素b抗性基因。在一些实施方案中，将用于用转座子转导的组分(例如包含sb转座酶和sb转座子的质粒)引入靶细胞中。可以采用任何方便的方案，其中取决于靶细胞的位置，所述方案可以将系统组分体外或体内引入靶细胞中。例如，在靶细胞是分离的细胞的情况下，可以例如通过使用标准转化技术，在容许靶细胞活力的细胞培养条件下将所述系统直接引入所述细胞中。此类技术包括但不必限于：病毒感染、转化、缀合、原生质体融合、电穿孔、粒子枪技术、磷酸钙沉淀、直接显微注射、病毒载体递送等。方法的选择通常取决于待转化的细胞的类型和发生转化的环境(即体外、离体或体内)。这些方法的一般性讨论可以在ausubel等人,shortprotocolsinmolecularbiology,第3版,wiley&sons,1995中找到。在一些实施方案中，在足以从携带转座子的载体上切下反向重复侧翼核酸并且随后将切下的核酸整合到靶细胞的基因组中的条件下，将sb转座子和sb转座酶来源引入多细胞生物体(例如哺乳动物或人)的靶细胞中。一些实施方案还包括确保必需的转座酶活性连同引入的转座子一起存在于靶细胞中的步骤。取决于转座子载体本身的结构，即载体是否包括编码具有转座酶活性的产物的区域，所述方法还可以包括将第二载体引入编码必需转座酶活性的靶细胞中。在一些实施方案中，引入细胞中的包含转座子的载体核酸的量和编码转座酶的载体核酸的量足以提供所需的将转座子核酸切下并插入靶细胞基因组中。这样，引入的载体核酸的量应提供足够量的转座酶活性和足够拷贝数的期望插入靶细胞中的核酸。引入靶细胞中的载体核酸的量取决于所采用的特定引入方案(例如所采用的特定离体给予方案)的效率而变化。一旦载体dna与必需的转座酶组合进入了靶细胞，就经由所提供的转座酶从载体上切下侧翼为反向重复序列的载体核酸区域(即位于睡美人转座酶识别的反向重复序列之间的载体核酸)并将其插入靶细胞的基因组中。这样，载体dna被引入靶细胞中后进行随后的转座酶介导的切除，并且由载体携带的外来核酸插入靶细胞的基因组中。在特定实施方案中，载体整合到至少1％、至少2％、至少3％、至少4％、至少5％、至少6％至少7％至少8％、至少9％、至少10％、至少15％、或至少20％的用sb转座子和/或sb转座酶转染的细胞的基因组中。在一些实施方案中，核酸整合到靶细胞基因组中是稳定的，即，载体核酸保持存在于靶细胞基因组中持续超过瞬时时间段，并且一部分染色体遗传物质传递到靶细胞的后代。在某些实施方案中，转座子用于将各种大小的核酸(即多核苷酸)整合到靶细胞基因组中。在一些实施方案中，使用主题方法插入靶细胞基因组中的dna大小的范围为从约0.1kb至200kb、从约0.5kb至100kb、从约1.0kb至约8.0kb、从约1.0至约200kb、从约1.0至约10kb、从约10kb至约50kb、从约50kb至约100kb、或从约100kb至约200kb。在一些实施方案中，使用主题方法插入靶细胞基因组中的dna大小的范围为从约1.0kb至约8.0kb。在一些实施方案中，使用主题方法插入靶细胞基因组中的dna大小的范围为从约1.0kb至约200kb。在特定实施方案中，使用主题方法插入靶细胞基因组中的dna大小的范围为从约1.0kb至约8.0kb。v.检测和定量的方法本文提供了通过使含有表达car的细胞(car表达细胞)的组合物或生物样品与bcma-fc融合蛋白接触来检测包含作为抗bcma抗体的细胞外抗原结合结构域的嵌合抗原受体(car)的方法。在一些实施方案中，所述方法还包括检测在bcma-fc融合蛋白与由组合物或生物样品中的细胞表达或在其上表达的car之间是否形成复合物，例如检测这种结合的存在或不存在或水平。在一些实施方案中，所述检测包括检测与bcma-fc融合物结合的细胞。在一些实施方案中，将bcma-fc融合物直接或间接地标记以便检测。在一些实施方案中，bcma-fc融合蛋白的bcma抗原是或包含bcma的细胞外结构域、或其部分，所述细胞外结构域、或其部分包含由抗原受体(例如car)识别的表位。在某些实施方案中，重组bcma-fc融合蛋白含有bcma抗原，所述bcma抗原包含人bcma的细胞外结构域或其部分，所述细胞外结构域或其部分是或包含由car识别的表位。在一些实施方案中，bcma-fc融合物的bcma抗原不含有天然人bcma的跨膜结构域和细胞质结构域。因此，在一些实施方案中，bcma-fc融合物的bcma抗原是天然人bcma的细胞外结构域或其部分、由其组成、或本质上由其组成。在一些实施方案中，bcma-fc融合蛋白的bcma抗原是或包含如下多肽，在一些情况下由如下多肽组成或本质上由如下多肽组成，所述多肽具有与seqidno:1具有至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的氨基酸序列；或是所述多肽的由car的抗原结合结构域识别或特异性地结合的、含有seqidno:1的至少50个、至少55个、至少60个、至少65个、至少70个、至少75个、至少80个、至少85个、至少90个、至少95个、至少100个、至少110个、至少120个、至少130个、至少140个、至少150个、至少160个、至少170个、或至少180个连续氨基酸的片段。在一些实施方案中，bcma抗原是或包含seqidno:1所示的序列或其部分、在一些情况下由所述序列或其部分组成或本质上由所述序列或其部分组成，所述序列或其部分是或含有由抗原受体(例如car)识别的表位。在一些实施方案中，重组bcma抗原或其部分直接或间接地与以下融合：免疫球蛋白恒定区或结构域，例如来自igg(包括igg1、igg2、igg3或igg4亚型)、iga、ige、igd和igm及其修饰形式的fc结构域或其部分。在特定实施方案中，bcma抗原直接或间接地连接至fc结构域。在一些实施方案中，所述多肽是包含bcma抗原或其部分和fc结构域的融合多肽。在一些实施方案中，fc结构域由igg、iga或igd同种型的重链的第二和第三恒定结构域(即ch2和ch3结构域)(例如igg、iga和igd同种型的ch2或ch3)构成。在一些实施方案中，fc结构域由igm或ige同种型的三个重链恒定结构域(即，ch2、ch3和ch4结构域)构成。在一些实施方案中，fc结构域可还包括铰链序列或其部分。在某些方面，fc结构域含有免疫球蛋白分子的铰链结构域的部分或全部以及ch2和ch3结构域。在一些情况下，fc结构域可以形成通过一个或多个二硫键接合的两条多肽链的二聚体。在一些实施方案中，fc结构域衍生自合适的哺乳动物(例如人、小鼠、大鼠、山羊、绵羊或猴子)的免疫球蛋白(例如igg、iga、igm或ige)。在一些实施方案中，fc结构域包含igg的ch2和ch3结构域。在某些实施方案中，fc结构域与bcma抗原的c末端融合。在特定实施方案中，fc结构域与bcma抗原的n末端融合。在一些实施方案中，fc结构域是iggfc结构域或其部分或变体。在一些实施方案中，fc结构域是人iggfc结构域、或其部分或变体，其包含seqidno:2所示的氨基酸序列、或与seqidno:2所示的序列具有至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％序列同一性的氨基酸序列。在特定实施方案中，fc结构域是野生型人iggfc结构域、或其部分或变体。在特定实施方案中，fc结构域是野生型人igg1fc结构域的变体。在一些实施方案中，融合多肽包含变体fc结构域。在某些实施方案中，变体人iggfc结构域含有降低、减少和/或减损fc结构域与轻链之间配对的突变(例如取代、缺失或插入)。在一些实施方案中，变体人iggfc结构域含有降低fc结构域与fc受体之间的结合亲和力的突变。在特定实施方案中，变体人iggfc结构域含有降低、减少和/或减损fc结构域与fc受体之间的相互作用或相互作用概率或可能性的突变。在一些实施方案中，变体人iggfc结构域含有降低fc结构域与补体系统的蛋白质之间的结合亲和力的突变。在特定实施方案中，变体人iggfc结构域含有降低、减少和/或减损fc结构域与补体系统的蛋白质之间的相互作用或相互作用概率或可能性的突变。在一些实施方案中，bcma-fc包含变体人igg1fc结构域。在一些实施方案中，变体人iggfc结构域在fc结构域的铰链区中含有胱氨酸至丝氨酸的取代。在一些实施方案中，变体人iggfc结构域在fc结构域的铰链区中含有亮氨酸至丙氨酸的取代。在特定实施方案中，变体人iggfc结构域在铰链区中含有甘氨酸至丙氨酸的取代。在某些实施方案中，变体人iggfc结构域在fc结构域的ch2区中含有丙氨酸至丝氨酸的取代。在一些实施方案中，变体人iggfc结构域在fc结构域的ch2区中包含脯氨酸至丝氨酸的取代。在一些实施方案中，变体人iggfc结构域包含如seqidno:28所示的氨基酸序列。在一些实施方案中，bcma-fc包含含有fc结构域的融合多肽，其中所述fc结构域存在于融合多肽的c末端处。在一些实施方案中，bcma-fc是包含bcma多肽或其部分和fc结构域的融合多肽。在一些实施方案中，bcma多肽或其部分包含seqidno:1所示的氨基酸序列、或展现出与seqidno:1至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％序列同一性并且含有由抗原受体(例如car)识别的表位的氨基酸序列。在一些实施方案中，fc结构域包含seqidno:2所示的氨基酸序列、或展现出与seqidno:2至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，fc结构域包含seqidno:28所示的氨基酸序列、或展现出与seqidno:28至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，bcma抗原包括bcma或其部分或变体，以及标签或融合结构域(例如fc结构域)。在特定实施方案中，bcma抗原含有seqidno:35所示的氨基酸序列的全部或部分、或展现出与seqidno:35至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％序列同一性并且包含由抗原受体(例如car)识别的表位的氨基酸序列。在一些实施方案中，bcma-f是二聚体，其包含如上所述的每个均由car识别和/或结合的两个或更多个bcma抗原。在一些实施方案中，所述bcma抗原是相同的。在某些实施方案中，将用本文所述的bcma-fc融合物检测car表达细胞的方法用于评估受试者中的car表达细胞。在一些实施方案中，本文提供了使用bcma-fc融合物来评估、测量和/或定量治疗性细胞组合物的car表达细胞的体内药代动力学、扩增和/或持久性的方法。在一些实施方案中，可以使用bcma-fc融合蛋白来测量在本文提供的方法中细胞的体内药代动力学、扩增和/或持久性、和/或细胞表型或细胞功能活性的变化，所述细胞例如为给予用于免疫疗法(例如car-t细胞疗法)的car表达细胞。在一些实施方案中，在疗法给予期间和/或之后在给予治疗性细胞组合物后，通过检测受试者中和/或从受试者获得的生物样品中表达car的细胞的存在和/或量来测量或评估car表达细胞的药代动力学、扩增和/或持久性。在一些方面，将bcma-fc融合物与流式细胞术一起使用以评估受试者的血液或血清或器官或组织样品(例如疾病部位，例如肿瘤样品)中car表达细胞的量。在一些方面，将持久性定量为每微升(例如血液或血清)的样品中car表达细胞的数量，或者每微升的样品中外周血单核细胞(pbmc)或白细胞或t细胞的总数量。在某些方面，将扩增定量为随时间推移每微升例如血液或血清的样品中car表达细胞数量的增加，或者每微升样品中外周血单核细胞(pbmc)或白血细胞或t细胞的总数量的增加。在一些实施方案中，通过在多个时间点检测受试者和/或从受试者收集的样品中car表达细胞的量来测量或评估药代动力学、扩增和/或持久性。在某些实施方案中，在给予治疗性细胞组合物之后24小时、48小时、72小时、4天、5天、6天、7天、10天、14天、21天、3周、4周、5周、6周、7周、8周、9周、10周、11周、12周、3个月、4个月、6个月、一年或超过一年内从受试者收集、获得和/或取得一个或多个样品。在一些实施方案中，提供了评价个体中抗bcmacart细胞疗法的方法，其中所述car包含抗bcma抗体或其抗原结合片段，并且所述方法包括将来自受试者的样品与bcma-fc融合蛋白一起孵育并确定与bcma-fc融合蛋白结合的t细胞的量。在一些实施方案中，对bcma-fc融合物进行标记，并且通过流式细胞术测定结合bcma-fc融合物的t细胞。在一些实施方案中，样品是血液来源的样品，或者是或源自单采术或白细胞分离术产物。在一些方面，在开始疗法的第一剂量后进行给予。在一个实施方案中，使用bcma-fc来确定是否需要对个体的cart细胞疗法进行调整，例如其中个体中cart细胞水平低指示需要调整疗法。在一些方面，如果出现以下情况，则调整疗法：(i)如果血液或其他生物样品中可检测的t细胞疗法的细胞数量在已经可检测之后是不可检测的或减少了，任选地与在给予t细胞疗法之后的先前时间点相比减少了；(ii)与在开始给予t细胞疗法(任选地第一、第二或后续剂量)之后在受试者的血液或生物学样品中可检测的t细胞疗法的峰值或最大细胞数量相比，在血液或其他生物样品中可检测的t细胞疗法的细胞数量减少了或减少了超过1.5倍、2.0倍、3.0倍、4.0倍、5.0倍、10倍或更多倍；(iii)在受试者的血液中可检测到t细胞疗法的细胞的峰值或最大水平之后的一个时间，来自受试者的血液中可检测的t细胞的细胞或衍生自t细胞的细胞的数量为受试者血液中总外周血单核细胞(pbmc)的少于少于10％、少于5％、少于1％或少于0.1％；和/或(iv)如果血液中可检测的细胞疗法的cd3 或cd8 细胞的数量为少于20个细胞/μl、15个细胞/μl、10个细胞/μl、少于5个细胞/μl或少于1个细胞/μl。在一些实施方案中，通过给予一个或多个另外剂量的car-t细胞疗法、给予增加剂量的car-t细胞疗法、给予对相同或不同抗原具有特异性的替代性car-t细胞疗法、给予促进或增加car-t细胞的扩增或持久性的一种或多种免疫调节剂或其他药剂来调整疗法。可以使用本领域已知的各种方法来检测bcma-fc融合物与car表达细胞的结合。在一些实施方案中，所述方法包括流式细胞术或免疫测定。可以将指示剂部份或标记基团附接到bcma-fc融合物上并进行选择以满足所述方法的通常由测定设备的可用性和相容的免疫测定程序决定的各种应用的需要。在一些实施方案中，标记选自荧光部份或蛋白质(例如，荧光素、罗丹明、藻红蛋白、gfp或bfp)或发光部分(例如，由加利福尼亚州帕洛阿尔托(paloalto,calif.)的quantumdotcorporation供应的qdottm纳米颗粒)。用于进行上述各种免疫测定的各种通用技术是已知的。在一些实施方案中，不需要对bcma-fc融合物进行标记，并且可以使用与bcma-fc融合物结合的经标记的抗体来检测所述融合物存在。在一些实施方案中，经标记的抗体对分子的fc部分具有特异性。在一些实施方案中，将bcma-fc融合物固定或结合至固体支持物，其中使含有包含car-t细胞的一种或多种靶细胞的组合物或生物样品与固体支持物接触。在一些实施方案中，固体支持物是珠。在一些实施方案中，固体支持物是孔或板(例如细胞培养板)的表面。在一些实施方案中，固体支持物是例如允许car t细胞的色谱分离或选择的、存在于或包含在色谱柱中的树脂或基质。在一些实施方案中，bcma-fc融合蛋白可逆地结合至固体支持物或能够可逆地结合至固体支持物。在一些实施方案中，固体支持物是亲和色谱基质，所述亲和色谱基质包含能够与存在于bcma-fc融合蛋白中的结合配偶体结合(例如可逆地结合)的一个或多个结合位点。在一个示例性实施方案中，bcma-fc融合蛋白包含能够与存在于或固定在固体支持物上的链霉亲和素或链霉亲和素突变蛋白分子结合的链霉亲和素结合肽或其他链霉亲和素结合部份，所述结合在一些情况下可以在竞争物质(例如生物素)的存在下被解离。此类系统的例子包括在美国公开专利申请号us20150024411中描述的那些。vi.制品和试剂盒在一些实施方案中，还提供了可用于进行所提供的方法的系统、设备和试剂盒。在一些实施方案中，提供了含有本文所述的颗粒(例如珠)(即具有附接的结合分子的颗粒(例如珠))的制品，如试剂盒或装置。在一些实施方案中，结合分子包含结合或识别重组受体或car的抗原或抗体。在一些实施方案中，例如根据制备用于过继细胞疗法的基因工程化细胞，试剂盒可以用于扩增、选择和/或富集细胞的方法中。在特定实施方案中，基因工程化细胞表达由附接的结合分子结合或识别的重组受体(例如car)。在一些实施方案中，制品包括一个或多个容器，通常多个容器；包装材料；以及在一个或多个容器和/或包装上或与其相关的标签或包装说明书，通常包括用于扩增细胞(例如用一种或多种核酸(例如包含编码重组受体或car的基因的一种或多种核酸)转导或转染的来自受试者的细胞)的说明书。在某些实施方案中，试剂盒还包含使用本文所述的颗粒(例如珠)用于从细胞群中选择或富集表达重组受体的细胞的说明书。在一些实施方案中，试剂盒包含使用本文所述的颗粒(例如珠)富集表达car的细胞的说明书。在特定实施方案中，试剂盒包括用于将包含细胞的组合物与本文所述的颗粒(例如珠)一起孵育、与本文所述的颗粒(例如珠)接触、或用本文所述的颗粒(例如珠)处理的说明书，其中少于所有的细胞表达car。在一些实施方案中，试剂盒包含用于激活、扩增和或富集表达car的细胞的说明书。在某些实施方案中，试剂盒包含用于激活、扩增和或富集来自细胞群的表达car的细胞的说明书，其中少于0.01％、少于0.1％、少于1％、少于5％、少于10％、少于15％、少于20％、少于25％、少于30％、少于35％、少于40％、少于45％、少于50％、少于55％、少于60％、少于65％、少于70％、少于80％、或少于90％的细胞表达car。在一些实施方案中，试剂盒还包含±用于通过将细胞与本文所述的颗粒(例如珠)接触、与本文所述的颗粒(例如珠)一起孵育、或用本文所述的颗粒(例如珠)处理，用编码重组受体(例如car)的一种或多种核酸转染或转导细胞的说明书，所述细胞在转染或转导之前尚未扩增、激活和/或富集。vii.定义除非另有定义，否则本文使用的所有领域术语、符号和其他技术和科学术语或用辞旨在具有与所要求保护的主题所属领域的普通技术人员通常理解的含义相同的含义。在一些情况下，为了清楚和/或为了便于参考而在本文中定义具有通常理解的含义的术语，并且本文中包含的此类定义不一定应当被解释为表示与本领域通常理解的实质性差异。如本文所用，提及抗体的“对应形式”意指当比较两种抗体的特性或活性时，使用相同形式的抗体来比较特性。例如，如果声明抗体与第一抗体的对应形式的活性相比具有更高的活性，则意味着特定形式(如所述抗体的scfv)与第一抗体的scfv形式相比具有更高的活性。如本文所用，叙述核苷酸或氨基酸位置“对应于”所公开序列中的核苷酸或氨基酸位置(例如序列表中所示)是指，在使用标准比对算法(如gap算法)与所公开序列比对以使同一性最大化之后，所鉴定的核苷酸或氨基酸位置。通过比对序列，本领域技术人员可以例如使用保守和相同的氨基酸残基作为指导来鉴定相应的残基。通常，为了鉴定对应位置，比对氨基酸序列使得获得最高阶匹配(参见，例如：computationalmolecularbiology,lesk,a.m.编辑,oxforduniversitypress,newyork,1988；biocomputing:informaticsandgenomeprojects,smith,d.w.编辑,academicpress,newyork,1993；computeranalysisofsequencedata,parti,griffin,a.m.和griffin,h.g.编辑,humanapress,newjersey,1994；sequenceanalysisinmolecularbiology,vonheinje,g.,academicpress,1987；和sequenceanalysisprimer,gribskov,m.和devereux,j.编辑,mstocktonpress,newyork,1991；carrillo等人(1988)siamjappliedmath48:1073)。“效应子功能”是指可归因于抗体fc区的那些生物活性，其随抗体同种型的变化而变化。抗体效应子功能的例子包括：c1q结合和补体依赖性细胞毒性(cdc)；fc受体结合；抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(adcc)；吞噬作用；细胞表面受体(例如，b细胞受体)的下调；和b细胞激活。本文的术语“fc区”用于定义免疫球蛋白重链的含有恒定区的至少一部分的c末端区。所述术语包括天然序列fc区和变体fc区。在一个实施方案中，人igg重链fc区从cys226或从pro230延伸至重链的羧基末端。然而，fc区的c末端赖氨酸(lys447)可以存在或可以不存在。除非本文另有说明，否则fc区或恒定区中氨基酸残基的编号是根据eu编号系统，也称为eu索引，如kabat等人,sequencesofproteinsofimmunologicalinterest,第5版publichealthservice,nationalinstitutesofhealth,bethesda,md1991中所描述。术语“全长抗体”、“完整抗体”和“全抗体”在本文中可互换地使用以指代具有与天然抗体结构基本上相似的结构或具有含有如本文所定义的fc区的重链的抗体。“分离的”抗体是已经与其天然环境的组分分开的抗体。在一些实施方案中，如通过例如电泳(例如，sds-page、等电聚焦(ief)、毛细管电泳)或色谱(例如，离子交换或反相hplc)确定的，将抗体纯化至大于95％或99％的纯度。关于评估抗体纯度的方法的综述，参见例如，flatman等人,j.chromatogr.b848:79-87(2007)。“分离的”核酸是指已经与其天然环境的组分分开的核酸分子。分离的核酸包括细胞中含有的核酸分子，所述细胞通常含有所述核酸分子，但所述核酸分子存在于染色体外或存在于不同于其天然染色体位置的染色体位置。“编码抗独特型抗体的分离的核酸”是指编码抗体重链和轻链(或其片段)的一种或多种核酸分子，包括在单个载体或单独载体中这样的一种或多种核酸分子、以及在宿主细胞中的一个或多个位置存在的这样的一种或多种核酸分子。术语“宿主细胞”、“宿主细胞系”和“宿主细胞培养物”可互换使用，并且是指已引入外源核酸的细胞，包括此类细胞的后代。宿主细胞包括“转化体”和“转化细胞”，其包括原代转化细胞和由其衍生的后代，不考虑传代次数。后代的核酸含量可能与亲代细胞不完全相同，但可能含有突变。本文包括如在初始转化细胞中所筛选或选择的，具有相同功能或生物学活性的突变型后代。如本文所用，在关于氨基酸序列(参考多肽序列)使用时，“氨基酸序列同一性百分比(％)”和“同一性百分比”定义为，在比对序列并在必要时引入空位以实现最大序列同一性百分比并且不将任何保守取代视作序列同一性的一部分之后，候选序列(例如，主题抗体或片段)中与参考多肽序列中的氨基酸残基相同的氨基酸残基的百分比。用于确定氨基酸序列同一性百分比的比对可以按本领域熟知的多种方式来实现，例如使用公众可获得的计算机软件，如blast、blast-2、align或megalign(dnastar)软件。本领域技术人员可以确定用于比对序列的合适参数，包括在所比较的序列的全长上实现最大比对所需的任何算法。氨基酸取代可以包括用另一种氨基酸替代多肽中的一个氨基酸。取代可以是保守氨基酸取代或非保守氨基酸取代。可以将氨基酸取代引入感兴趣的结合分子(例如抗体)、和针对所希望的活性(例如保留/改进的抗原结合、降低的免疫原性或改进的adcc或cdc)筛选的产物中。通常可以根据以下常见的侧链特性将氨基酸进行分组：(1)疏水性的：正亮氨酸、met、ala、val、leu、ile；(2)中性亲水性的：cys、ser、thr、asn、gln；(3)酸性的：asp、glu；(4)碱性的：his、lys、arg；(5)影响链取向的残基：gly、pro；(6)芳香族的：trp、tyr、phe在一些实施方案中，保守取代可能涉及将这些类别之一的成员交换为同一类别的另一个成员。在一些实施方案中，非保守氨基酸取代可能涉及将这些类别之一的成员交换为另一个类别。非保守氨基酸取代将涉及将这些类别之一的成员与另一个类别交换。如本文所用，术语“载体”是指能够传播其所连接的另一核酸分子的核酸分子。所述术语包括作为自我复制核酸结构的载体以及掺入已引入其的宿主细胞的基因组中的载体。某些载体能够指导其可操作连接的核酸的表达。此类载体在本文中称为“表达载体”。如本文所用的，单数形式“一种/个(a/an)”和“所述(the)”包括复数种/个指示物，除非上下文另外明确说明。例如，“一种/一个”(“a”)或“一种/一个”(“an”)意指“至少一种/至少一个”或“一种/一个或多种/多个”。应理解，本文所述的方面和变化包括“由方面和变化组成”和/或“本质上由方面和变化组成”。贯穿本公开文本，要求保护的主题的各种方面以范围形式呈现。应理解，以范围形式描述仅为了方便和简洁，并且不应被视为对要求保护的主题的范围的硬性限制。因此，应将范围的描述视为已明确公开所有可能的子范围以及该范围内的单独数值。例如，在提供值的范围情况下，应理解，在所述范围的上限与下限之间的每个中间值以及在所述范围内的任何其他所述或中间值涵盖在所要求保护的主题内。这些较小范围的上限和下限可以独立地被包括在所述较小范围内，并且也涵盖在所要求保护的主题内，受制于在所陈述范围内任何确切排除的限制。在所陈述范围包括限制中的一者或两者的情况下，排除了那些包括的限制中的任一者或两者的范围也包括在所要求保护的主题内。无论范围的广度如何，这都适用。如本文所用的术语“约”是指本
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的技术人员容易知道的相应值的通常误差范围。本文对“约”某一值或参数的提及包括(并描述)涉及所述值或参数本身的实施方案。例如，涉及“约x”的描述包括“x”的描述。在一些实施方案中，“约”是指在值或参数的±20％、±15％、±10％、±5％或±1％内。术语“多肽”和“蛋白质”可互换使用，是指氨基酸残基的聚合物，并且不限于最小长度。多肽(包括所提供的抗体和抗体链以及其他肽(例如接头))可以包括含有天然和/或非天然氨基酸残基的氨基酸残基。所述术语还包括多肽的表达后修饰，例如糖基化、唾液酸化、乙酰化、磷酸化等。在一些方面，多肽可含有关于原生或天然序列的修饰，只要蛋白质保持所需活性即可。这些修饰可能是故意的(如通过定点诱变)，或者可能是偶然的(如通过产生所述蛋白质的宿主的突变或由于pcr扩增引起的错误)。如本文所用，组合物是指两种或更多种产物、物质或化合物(包括细胞)的任何混合物。它可以是溶液、悬浮液、液体、粉末、糊剂、水性的、非水性的或其任何组合。如本文所用，细胞或细胞群针对特定标记呈“阳性”的陈述是指，特定标记(通常是表面标记)在细胞上或细胞中的可检测存在。当提及表面标记时，所述术语是指如通过流式细胞术检测到的，表面表达的存在，例如通过用与所述标记特异性结合的抗体进行染色并检测所述抗体，其中所述染色通过流式细胞术以如下水平是可检测的，所述水平基本上高于在其他方面相同的条件下用同种型匹配对照进行相同程序检测到的染色，和/或所述水平基本上与已知呈所述标记阳性的细胞的水平相似，和/或所述水平基本上高于已知呈所述标记阴性的细胞的水平。如本文所用，细胞或细胞群对特定标记呈“阴性”的陈述是指，特定标记(通常是表面标记)在细胞上或细胞中不存在基本上可检测的存在。当提及表面标记时，所述术语是指如通过流式细胞术检测到的，表面表达的不存在，例如通过用与所述标记特异性结合的抗体进行染色并检测所述抗体，其中所述染色通过流式细胞术以如下水平没有检测到，所述水平基本上高于在其他方面相同的条件下用同种型匹配对照进行相同程序检测到的染色，和/或所述水平基本上低于已知呈所述标记阳性的细胞的水平，和/或所述水平与已知呈所述标记阴性的细胞的水平相比是基本上相似的。viii.示例性实施方案所提供的实施方案包括：1.一种扩增细胞的方法，所述方法包括将包含表达重组抗原受体的细胞的输入组合物与多个颗粒(例如珠)一起孵育，所述重组抗原受体包含特异性地结合或识别抗原的细胞外抗原结合结构域，所述多个颗粒(例如珠)中的每一个包含特异性地结合所述抗原结合结构域的结合分子，其中所述结合分子与所述抗原结合结构域的结合诱导包含所述重组抗原受体的细胞的扩增，从而产生包含扩增的细胞的输出组合物。2.根据实施方案1所述的方法，其中所述重组抗原受体是嵌合抗原受体(car)。3.根据实施方案1或实施方案2所述的方法，其中所述抗原结合结构域包含抗体或其抗原结合片段。4.根据实施方案3所述的方法，其中所述抗原结合片段是或包含单链抗体片段。5.根据实施方案3或实施方案4所述的方法，其中所述其抗原结合片段包含通过柔性接头连接的抗体可变区。6.根据实施方案3-5中任一项所述的方法，其中所述其抗原结合片段是或包含scfv。7.根据实施方案1-6中任一项所述的方法，其中所述抗原选自ror1、b细胞成熟抗原(bcma)、碳酸酐酶9(caix)、her2/neu(受体酪氨酸激酶erbb2)、ll-cam、cd19、cd20、cd22、间皮素、cea和乙型肝炎表面抗原、抗叶酸受体、cd23、cd24、cd30、cd33、cd38、cd44、egfr、上皮糖蛋白2(epg-2)、上皮糖蛋白40(epg-40)、epha2、erb-b2、erb-b3、erb-b4、erbb二聚体、egfrviii、叶酸结合蛋白(fbp)、fcrl5、fcrh5、胎儿乙酰胆碱受体、gd2、gd3、hmw-maa、il-22r-α、il-13r-α2、激酶插入结构域受体(kdr)、κ轻链、路易斯y、l1细胞粘附分子(l1-cam)、黑色素瘤相关抗原(mage)-a1、mage-a3、mage-a6、优先表达的黑色素瘤抗原(prame)、存活蛋白、tag72、b7-h6、il-13受体α2(il-13ra2)、ca9、gd3、hmw-maa、cd171、g250/caix、hla-aimageal、hla-a2ny-eso-1、psca、叶酸受体-a、cd44v6、cd44v7/8、avb6整合素、8h9、ncam、vegf受体、5t4、胎儿achr、nkg2d配体、cd44v6、双重抗原、癌症-睾丸抗原、间皮素、鼠类cmv、粘蛋白1(muc1)、muc16、psca、nkg2d、ny-eso-1、mart-1、gp100、癌胚胎抗原、ror1、tag72、vegf-r2、癌胚抗原(cea)、前列腺特异性抗原、psma、her2/neu、雌激素受体、孕酮受体、肝配蛋白b2、cd123、c-met、gd-2、o-乙酰化gd2(ogd2)、ce7、wilms肿瘤1(wt-1)、细胞周期蛋白、细胞周期蛋白a2、ccl-1、cd138、病原体特异性抗原和与通用标签相关的抗原；和/或所述抗原选自αvβ6整合素(avb6整合素)、b细胞成熟抗原(bcma)、b7-h3、b7-h6、碳酸酐酶9(ca9，也称为caix或g250)、癌症-睾丸抗原、癌症/睾丸抗原1b(ctag，也称为ny-eso-1和lage-2)、癌胚抗原(cea)、细胞周期蛋白、细胞周期蛋白a2、c-c基序趋化因子配体1(ccl-1)、cd19、cd20、cd22、cd23、cd24、cd30、cd33、cd38、cd44、cd44v6、cd44v7/8、cd123、cd138、cd171、硫酸软骨素蛋白聚糖4(cspg4)、表皮生长因子蛋白(egfr)、iii型表皮生长因子受体突变(egfrviii)、上皮糖蛋白2(epg-2)、上皮糖蛋白40(epg-40)、肝配蛋白b2、肝配蛋白受体a2(epha2)、雌激素受体、fc受体样5(fcrl5；也称为fc受体同源物5或fcrh5)、胎儿乙酰胆碱受体(胎儿achr)、叶酸结合蛋白(fbp)、叶酸受体α、神经节苷脂gd2、o-乙酰化gd2(ogd2)、神经节苷脂gd3、糖蛋白100(gp100)、g蛋白偶联受体5d(gprc5d)、her2/neu(受体酪氨酸激酶erb-b2)、her3(erb-b3)、her4(erb-b4)、erbb二聚体、人高分子量黑色素瘤相关抗原(hmw-maa)、乙型肝炎表面抗原、人白细胞抗原a1(hla-a1)、人白细胞抗原a2(hla-a2)、il-22受体α(il-22ra)、il-13受体α2(il-13ra2)、激酶插入结构域受体(kdr)、κ轻链、l1细胞粘附分子(l1-cam)、l1-cam的ce7表位、含有富亮氨酸重复序列的蛋白8家族成员a(lrrc8a)、路易斯y、黑色素瘤相关抗原(mage)-a1、mage-a3、mage-a6、间皮素、c-met、鼠类巨细胞病毒(cmv)、粘蛋白1(muc1)、muc16、自然杀伤细胞2族成员d(nkg2d)配体、黑色素a(mart-1)、神经细胞粘附分子(ncam)、癌胚胎抗原、优先表达的黑色素瘤抗原(prame)、孕酮受体、前列腺特异性抗原、前列腺干细胞抗原(psca)、前列腺特异性膜抗原(psma)、受体酪氨酸激酶样孤儿受体1(ror1)、存活蛋白、滋养层糖蛋白(tpbg，也称为5t4)、肿瘤相关糖蛋白72(tag72)、血管内皮生长因子受体(vegfr)、血管内皮生长因子受体2(vegfr2)、wilms肿瘤1(wt-1)、病原体特异性或病原体表达的抗原、或与通用标签相关的抗原，和/或生物素化分子，和/或由hiv、hcv、hbv或其他病原体表达的分子。8.根据实施方案1-7中任一项所述的方法，其中所述结合分子不结合或识别所述重组抗原受体的接头或间隔区，所述接头或间隔区将所述抗原受体的抗原结合结构域与跨膜结构域连接。9.根据实施方案1-8中任一项所述的方法，其中所述结合分子是与所述抗原结合结构域特异性地结合的抗独特型抗体或其抗原结合片段。10.一种扩增细胞的方法，所述方法包括将包含表达嵌合抗原受体(car)的细胞的输入组合物与多个颗粒(例如珠)一起孵育，所述嵌合抗原受体包含特异性地结合或识别抗原的抗原结合结构域，所述多个颗粒(例如珠)中的每一个包含结合分子，所述结合分子是与所述抗原结合结构域特异性地结合的抗独特型抗体或其抗原结合片段，其中所述抗独特型抗体或其抗原结合片段与所述抗原结合结构域的结合诱导包含所述嵌合抗原受体的细胞的扩增，从而产生包含扩增的细胞的输出组合物。11.根据实施方案1-8中任一项所述的方法，其中所述结合分子包含由所述抗原结合结构域识别的重组抗原或其部分。12.一种扩增细胞的方法，所述方法包括将包含表达嵌合抗原受体(car)的细胞的输入组合物与多个颗粒(例如珠)一起孵育，所述嵌合抗原受体包含特异性地结合或识别抗原的抗原结合结构域，所述多个颗粒(例如珠)中的每一个包含结合分子，所述结合分子包含由所述抗原结合结构域识别的重组抗原或其部分，其中所述重组抗原或其部分与所述抗原结合结构域的结合诱导包含所述嵌合抗原受体的细胞的扩增，从而产生包含扩增的细胞的输出组合物。13.根据实施方案11或实施方案12所述的方法，其中所述重组抗原选自由所述抗原结合结构域识别的ror1、b细胞成熟抗原(bcma)、碳酸酐酶9(caix)、her2/neu(受体酪氨酸激酶erbb2)、ll-cam、cd19、cd20、cd22、间皮素、cea和乙型肝炎表面抗原、抗叶酸受体、cd23、cd24、cd30、cd33、cd38、cd44、egfr、上皮糖蛋白2(epg-2)、上皮糖蛋白40(epg-40)、epha2、erb-b2、erb-b3、erb-b4、erbb二聚体、egfrviii、叶酸结合蛋白(fbp)、fcrl5、fcrh5、胎儿乙酰胆碱受体、gd2、gd3、hmw-maa、il-22r-α、il-13r-α2、激酶插入结构域受体(kdr)、κ轻链、路易斯y、l1细胞粘附分子(l1-cam)、黑色素瘤相关抗原(mage)-a1、mage-a3、mage-a6、优先表达的黑色素瘤抗原(prame)、存活蛋白、tag72、b7-h6、il-13受体α2(il-13ra2)、ca9、gd3、hmw-maa、cd171、g250/caix、hla-aimageal、hla-a2ny-eso-1、psca、叶酸受体-a、cd44v6、cd44v7/8、avb6整合素、8h9、ncam、vegf受体、5t4、胎儿achr、nkg2d配体、cd44v6、双重抗原、癌症-睾丸抗原、间皮素、鼠类cmv、粘蛋白1(muc1)、muc16、psca、nkg2d、ny-eso-1、mart-1、gp100、癌胚胎抗原、ror1、tag72、vegf-r2、癌胚抗原(cea)、前列腺特异性抗原、psma、her2/neu、雌激素受体、孕酮受体、肝配蛋白b2、cd123、c-met、gd-2、o-乙酰化gd2(ogd2)、ce7、wilms肿瘤1(wt-1)、细胞周期蛋白、细胞周期蛋白a2、ccl-1、cd138和病原体特异性抗原、或任何前述项的部分；和/或所述抗原选自αvβ6整合素(avb6整合素)、b细胞成熟抗原(bcma)、b7-h3、b7-h6、碳酸酐酶9(ca9，也称为caix或g250)、癌症-睾丸抗原、癌症/睾丸抗原1b(ctag，也称为ny-eso-1和lage-2)、癌胚抗原(cea)、细胞周期蛋白、细胞周期蛋白a2、c-c基序趋化因子配体1(ccl-1)、cd19、cd20、cd22、cd23、cd24、cd30、cd33、cd38、cd44、cd44v6、cd44v7/8、cd123、cd138、cd171、表皮生长因子蛋白(egfr)、iii型表皮生长因子受体突变(egfrviii)、上皮糖蛋白2(epg-2)、上皮糖蛋白40(epg-40)、肝配蛋白b2、肝配蛋白受体a2(epha2)、雌激素受体、fc受体样5(fcrl5；也称为fc受体同源物5或fcrh5)、胎儿乙酰胆碱受体(胎儿achr)、叶酸结合蛋白(fbp)、叶酸受体α、神经节苷脂gd2、o-乙酰化gd2(ogd2)、神经节苷脂gd3、糖蛋白100(gp100)、g蛋白偶联受体5d(gprc5d)、her2/neu(受体酪氨酸激酶erb-b2)、her3(erb-b3)、her4(erb-b4)、erbb二聚体、人高分子量黑色素瘤相关抗原(hmw-maa)、乙型肝炎表面抗原、人白细胞抗原a1(hla-a1)、人白细胞抗原a2(hla-a2)、il-22受体α(il-22ra)、il-13受体α2(il-13ra2)、激酶插入结构域受体(kdr)、κ轻链、l1细胞粘附分子(l1-cam)、l1-cam的ce7表位、含有富亮氨酸重复序列的蛋白8家族成员a(lrrc8a)、路易斯y、黑色素瘤相关抗原(mage)-a1、mage-a3、mage-a6、间皮素、c-met、鼠类巨细胞病毒(cmv)、粘蛋白1(muc1)、muc16、自然杀伤细胞2族成员d(nkg2d)配体、黑色素a(mart-1)、神经细胞粘附分子(ncam)、癌胚胎抗原、优先表达的黑色素瘤抗原(prame)、孕酮受体、前列腺特异性抗原、前列腺干细胞抗原(psca)、前列腺特异性膜抗原(psma)、受体酪氨酸激酶样孤儿受体1(ror1)、存活蛋白、滋养层糖蛋白(tpbg，也称为5t4)、肿瘤相关糖蛋白72(tag72)、血管内皮生长因子受体(vegfr)、血管内皮生长因子受体2(vegfr2)、wilms肿瘤1(wt-1)、病原体特异性或病原体表达的抗原、或与通用标签相关的抗原，和/或生物素化分子，和/或由hiv、hcv、hbv或其他病原体表达的分子。14.根据实施方案11-13中任一项所述的方法，其中所述重组抗原是bcma、cd22或ror1，或者是其由所述抗原结合结构域识别的部分。15.根据实施方案11-14中任一项所述的方法，其中所述重组抗原的由所述抗原结合结构域识别的部分包含所述抗原的细胞外结构域或所述细胞外结构域的部分。16.根据实施方案11-14中任一项所述的方法，其中所述重组抗原的由所述抗原结合结构域识别的部分本质上由所述抗原的细胞外结构域或所述细胞外结构域的部分组成。17.一种扩增细胞的方法，所述方法包括将包含表达嵌合抗原受体(car)的细胞的输入组合物与多个颗粒(例如珠)一起孵育，所述嵌合抗原受体包含特异性地结合或识别b细胞成熟抗原(bcma)的抗原结合结构域，所述多个颗粒(例如珠)中的每一个包含结合分子，所述结合分子包含bcma的由所述抗原结合结构域识别的细胞外结构域或所述细胞外结构域的部分，其中bcma的所述细胞外结构域或其部分与所述抗原结合结构域的结合诱导包含所述嵌合抗原受体的细胞的扩增，从而产生包含扩增的细胞的输出组合物。18.根据实施方案17所述的方法，其中bcma的所述部分本质上由所述细胞外结构域或所述细胞外结构域的部分组成。19.根据实施方案11-18中任一项所述的方法，其中所述结合分子是融合多肽，所述融合多肽包含与一种部份连接的所述重组抗原或其部分，任选地其中所述部份促进与所述颗粒的附接。20.根据实施方案19所述的方法，其中所述部份与所述重组抗原的c末端连接。21.根据实施方案19或实施方案20所述的方法，其中所述部份是疏水性的或富含疏水性氨基酸。22.根据实施方案19-21中任一项所述的方法，其中所述部份是或包含fc结构域。23.根据实施方案22所述的方法，其中所述fc区源自人igg。24.根据实施方案1-12中任一项所述的方法，其中所述抗原是cd19。25.一种扩增细胞的方法，所述方法包括将包含表达嵌合抗原受体(car)的细胞的输入组合物与多个颗粒(例如珠)一起孵育，所述嵌合抗原受体包含特异性地结合或识别cd19的抗原结合结构域，所述多个颗粒(例如珠)中的每一个包含结合分子，所述结合分子是与所述抗原结合结构域特异性地结合的抗独特型抗体或其抗原结合片段，其中所述抗独特型抗体或其抗原结合片段与所述抗原结合结构域的结合诱导包含所述嵌合抗原受体的细胞的扩增，从而产生包含扩增的细胞的输出组合物。26.根据实施方案9、实施方案24或实施方案25所述的方法，其中所述抗原受体的抗原结合结构域是或包含抗体sj25c1或其抗原结合片段。27.根据实施方案9、实施方案24或实施方案25所述的方法，其中所述抗原受体的抗原结合结构域是或包含抗体fmc63或其抗原结合片段。28.根据实施方案26或实施方案27所述的方法，其中所述抗原结合片段是或包含scfv。29.根据实施方案1-28中任一项所述的方法，其中所述抗原或重组抗原是人的。30.根据实施方案9、10和25-29中任一项所述的方法，其中所述抗独特型抗体或其抗原结合片段包含免疫球蛋白恒定区的至少一部分。31.根据实施方案30所述的方法，其中免疫球蛋白恒定区的所述至少一部分包含fc区或所述fc的包含ch2和ch3结构域的部分。32.根据实施方案30或实施方案31所述的方法，其中所述恒定区或所述fc区源自人igg。33.根据实施方案9、10和25-32中任一项所述的方法，其中所述抗独特型抗体或其抗原结合片段是完整抗体或全长抗体。34.根据实施方案1-33中任一项所述的方法，其中所述结合分子共价地或非共价地附接至所述颗粒(例如珠)。35.根据实施方案1-34中任一项所述的方法，其中所述结合分子在所述结合分子的c末端氨基酸残基处或附近与所述多个颗粒(例如珠)中的每一个附接，和/或进行所述结合分子与所述多个颗粒(例如珠)中的每一个的附接，使得由所述抗原受体的抗原结合结构域识别的结合分子的区域或表位取向为使其能够由所述抗原受体识别。36.根据实施方案1-35中任一项所述的方法，其中所述颗粒(例如珠)是合成颗粒、不溶性颗粒、固体颗粒，或者是非细胞颗粒。37.根据实施方案1-35中任一项所述的方法，其中所述多个颗粒包含珠。38.根据实施方案1-37中任一项所述的方法，其中所述多个颗粒(例如珠)包含在或在约1μm与10μm之间或在或在约2μm与5μm之间的平均直径。39.根据实施方案1-38中任一项所述的方法，其中所述多个颗粒(例如珠)包含约2.8μm的平均直径。40.根据实施方案1-38中任一项所述的方法，其中所述多个颗粒(例如珠)包含约4.5μm的平均直径。41.根据实施方案1-40中任一项所述的方法，其中所述多个颗粒(例如珠)包含在约0.5g/cm3与5.0g/cm3之间或者在或在约1g/cm3与约2g/cm3之间的平均密度。42.根据实施方案1-41中任一项所述的方法，其中所述多个颗粒(例如珠)包含约1.3g/cm3的平均密度。43.根据实施方案1-42所述的方法，其中所述多个颗粒(例如珠)包含约1.5g/cm3的平均密度。44.根据实施方案1-43中任一项所述的方法，其中所述多个颗粒(例如珠)是单分散的。45.根据实施方案1-44中任一项所述的方法，其中所述结合分子共价地附接至所述颗粒(例如珠)。46.根据实施方案1-45中任一项所述的方法，其中所述颗粒包含用于附接所述结合分子的表面暴露的官能团和/或其中所述结合分子经由表面暴露的官能团共价地附接至所述颗粒。47.根据实施方案46所述的方法，其中所述表面暴露的官能团是氨基基团、羧基基团、硫醇基团、醛基团、氯甲基基团、环氧基基团、羟基基团、甲苯磺酰基基团或肼基团。48.根据实施方案46或实施方案47所述的方法，其中所述表面暴露的官能团是甲苯磺酰基基团。49.根据实施方案1-48中任一项所述的方法，其中所述多个颗粒(例如珠)对细胞而言是生物相容的或无毒的。50.根据实施方案1-49中任一项所述的方法，其中所述多个颗粒(例如珠)包含含有如下的颗粒：玻璃、二氧化硅、羟基羧酸的聚酯、二羧酸的聚酸酐、羟基羧酸的共聚物、二羧酸的共聚物、或金属。51.根据实施方案1-50中任一项所述的方法，其中所述颗粒(例如珠)包含含有如下的表面：聚合物、多糖、二氧化硅、脂肪酸、碳、或其组合。52.根据实施方案51所述的方法，其中所述聚合物是聚乙二醇、聚(乳酸-共-乙醇酸)、聚戊二醛、聚氨酯、聚苯乙烯、和聚乙烯醇、或其组合。53.根据实施方案1-52中任一项所述的方法，其中所述多个颗粒(例如珠)包含含有疏水性表面的颗粒。54.根据实施方案1-53中任一项所述的方法，其中所述多个颗粒(例如珠)包含含有聚苯乙烯表面的颗粒。55.根据实施方案1-54中任一项所述的方法，所述多个颗粒(例如珠)包含是磁的和/或包括磁芯、顺磁芯或超顺磁芯的颗粒。56.根据实施方案1-55中任一项所述的方法，其中所述结合分子的浓度在或在约0.5μg/ml与500μg/ml之间、1μg/ml与200μg/ml之间或5μg/ml与100μg/ml之间。57.根据实施方案1-56中任一项所述的方法，其中所述结合分子的浓度为至少或至少约1μg/ml、5μg/ml、10μg/ml、25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml或200μg/ml。58.根据实施方案1-57中任一项所述的方法，其中所述多个颗粒(例如珠)中的每一个包含至少或约至少10个拷贝、102个拷贝、103个拷贝、104个拷贝、105个拷贝或106个拷贝的所述结合分子。59.根据实施方案1-58中任一项所述的方法，其中所述孵育的至少一部分在药剂的存在下进行，所述药剂与所述细胞上另外的分子特异性地结合以提供辅助信号和/或阻断抑制信号。60.根据实施方案1-59中任一项所述的方法，其中所述药剂与所述颗粒(例如珠)一起提供，任选地所述药剂被所述多个颗粒(例如珠)的每一个或所述多个颗粒的亚组包含。61.根据实施方案1-59中任一项所述的方法，其中所述药剂与所述多个颗粒(例如珠)分开提供。62.根据实施方案1-60中任一项所述的方法，其中所述颗粒(例如珠)还包含药剂，所述药剂与所述细胞上另外的分子特异性地结合以提供辅助信号和/或阻断抑制信号。63.根据实施方案59-62中任一项所述的方法，其中所述药剂是配体或者是抗体或其抗原结合片段。64.根据实施方案58-63中任一项所述的方法，其中所述分子是共刺激分子或是激活性共受体或其配体。65.根据实施方案64所述的方法，其中所述共刺激分子或激活性共受体是ox-40、icos、dap10、cd28或4-1bb，或者是其配体，任选地ox-40l、icosl、b7-1、b7-2或4-1bbl。66.根据实施方案58-63中任一项所述的方法，其中所述分子是抑制性受体或其配体。67.根据实施方案66所述的方法，其中所述抑制性受体是ctla-4、pd-1、lag-3、tim-3、btla或tigit，或者是其配体，任选地pd-l1、pd-l2、cd155、cd112或light。68.根据实施方案62-67中任一项所述的方法，其中所述药剂共价地附接至所述颗粒(例如珠)。69.根据实施方案62-68中任一项所述的方法，其中所述颗粒(例如珠)所包含的所述结合分子与所述药剂的比率(任选地摩尔比或重量比)为或为约1:1。70.根据实施方案1-69中任一项所述的方法，其中所述输入组合物中存在的总细胞与颗粒(例如珠)的比率为从或从约5:1至1:5、3:1至1:3或2:1至1:2。71.根据实施方案1-70中任一项所述的方法，其中所述输入组合物中存在的总细胞与颗粒(例如珠)的比率为从或从约1:0.1至1:5。72.根据实施方案1-71中任一项所述的方法，其中所述输入组合物中存在的总细胞与颗粒(例如珠)的比率为或为约1:1。73.根据实施方案1-72中任一项所述的方法，其中将所述孵育进行大于或大于约2小时、4小时、8小时、12小时、24小时、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天或12天。74.根据实施方案1-73中任一项所述的方法，其中所述孵育在或在约30℃与39℃之间的温度下进行。75.根据实施方案1-74中任一项所述的方法，其中所述孵育在37℃±2.0℃的温度下进行。76.根据实施方案1-75中任一项所述的方法，其中所述细胞包含免疫细胞或诱导多能干细胞(ipsc)。77.根据实施方案1-76中任一项的方法，其中所述免疫细胞是t细胞或nk细胞。78.根据实施方案1-77中任一项所述的方法，其中所述细胞包含cd4 和/或cd8 t细胞。79.根据权利要求1-78中任一项所述的方法，其中所述cd4 细胞与所述cd8 细胞的比率为或为约1:1、1:2、2:1、1:3或3:1。80.根据实施方案1-79中任一项所述的方法，其中所述细胞是从受试者、任选地人受试者获得的原代细胞。81.根据实施方案1-80中任一项所述的方法，其中所述细胞是人的。82.根据实施方案1-81中任一项所述的方法，其中通过以下方法产生所述输入组合物，所述方法包括使细胞组合物与编码所述重组抗原受体的核酸分子在将所述核酸分子引入所述组合物中的一种或多种细胞中的条件下接触。83.一种将细胞基因工程化的方法，所述方法包括：(a)使细胞组合物与编码重组抗原受体的核酸分子在将所述核酸分子引入所述组合物中的一种或多种细胞中的条件下接触，从而产生输入组合物；并且(b)根据实施方案1-74中任一项所述的方法孵育所述输入组合物的细胞。84.根据实施方案82或实施方案83所述的方法，其中所述接触和所述孵育的至少一部分是同时进行。85.根据实施方案82-84中任一项所述的方法，其中所述核酸分子被包含在病毒载体、附加型载体或转座子中。86.根据实施方案82-85中任一项所述的方法，其中所述接触通过转座子/转座酶基因转移来进行。87.根据实施方案82-85中任一项所述的方法，其中所述接触通过用病毒载体转导来进行。88.根据实施方案85或实施方案87所述的方法，其中所述病毒载体是逆转录病毒，其任选地是γ-逆转录病毒载体或慢病毒载体。89.根据实施方案87或实施方案88所述的方法，其中所述接触包括用所述细胞组合物旋转接种(spinoculating)所述病毒载体的步骤。90.根据实施方案89所述的方法，其中旋转接种包括在离心室的内腔中旋转所述病毒载体粒子和细胞组合物，其中所述旋转是在所述空腔的侧壁内表面处按以下相对离心力进行：在或在约500g与2500g之间、500g与2000g之间、500g与1600g之间、500g与1000g之间、600g与1600g之间、600g与1000g之间、1000g与2000g之间或1000g与1600g之间，每个都包含端值；或者至少或至少约600g、800g、1000g、1200g、1600g或2000g。91.根据实施方案89或实施方案90所述的方法，其中旋转接种持续以下时间：大于或约5分钟、大于或约10分钟、大于或约15分钟、大于或约20分钟、大于或约30分钟、大于或约45分钟、大于或约60分钟、大于或约90分钟或大于或约120分钟；或者在或在约5分钟与60分钟之间、10分钟与60分钟之间、15分钟与60分钟之间、15分钟与45分钟之间、30分钟与60分钟之间或45分钟与60分钟之间，每个都包含端值。92.根据实施方案87-91中任一项所述的方法，其中所述孵育是在转导佐剂的存在下进行。93.根据实施方案82-92中任一项所述的方法，其中所述细胞组合物包含多个t细胞，并且在所述接触之前，所述方法不包括刺激或激活所述t细胞。94.根据实施方案82-93中任一项所述的方法，其中所述细胞组合物包含多个t细胞，并且在所述接触之前，所述方法不包括在能够通过tcr复合物诱导信号的一种或多种药剂的存在下孵育所述组合物，和/或在能够诱导t细胞、cd4 t细胞和/或cd8 t细胞增殖的一种或多种药剂；和/或cd3结合分子、cd28结合分子、重组il-2、重组il-15和重组il-7、或其组合的存在下孵育。95.根据权利要求93或实施方案94所述的方法，其中在所述接触之前，所述方法不包括在抗cd3抗体和/或抗cd28抗体的存在下刺激所述t细胞。96.根据实施方案82-95中任一项所述的方法，其中所述细胞组合物包含多个t细胞，所述多个细胞已经从来自受试者的样品获得，其中：所述接触是在从所述受试者获得所述样品之后不超过24小时开始；和/或在从所述受试者获得所述样品之后，在所述接触之前，所述t细胞未经历高于或高于约15℃、约18℃、约22℃或约25℃的温度持续超过1小时、2小时、4小时、6小时、8小时、12小时或24小时的时间；和/或在从所述受试者获得所述样品之后，在所述接触之前，所述t细胞未经历为、为约、高于或高于约37℃±2.0℃的温度持续超过15分钟、30分钟、1小时或2小时的时间。97.根据实施方案82-96中任一项所述的方法，其中，在所述接触之前，不超过5％、10％、20％、30％或40％的所述t细胞是激活的细胞，表达选自hla-dr、cd25、cd69、cd71、cd40l和4-1bb的表面标记；包含选自il-2、ifn-γ、tnf-α的细胞因子的细胞内表达，处于细胞周期的g1期或较后期，和/或能够增殖。98.根据实施方案1-97中任一项所述的方法，其还包括在所述孵育或所述接触之前，从含有所述细胞的所述受试者中获得生物样品，并且任选地从所述样品中选择或富集所述细胞，任选地t细胞。99.根据实施方案1-98中任一项所述的方法，其中在所述输入组合物中表达所述重组抗原受体的细胞的百分比为小于或小于约75％、70％、60％、50％、40％、30％、20％、15％、10％或更少。100.根据实施方案1-99中任一项所述的方法，其中所述细胞组合物或所述输入组合物包含至少或至少约1x102个细胞、1x103个细胞、1x104个细胞、1x105个细胞、1x106个细胞或1x107个细胞。101.根据实施方案1-100中任一项所述的方法，其中所述输出组合物中存在的细胞的激活标记或耗竭标记的表面表达小于在类似孵育之后但在多克隆刺激分子的存在下产生的细胞组合物中所述标记的表面表达，所述多克隆刺激分子能够激活tcr复合物的一种或多种组分的一种或多种细胞内信号传导结构域。102.根据实施方案101所述的方法，其中所述耗竭标记是抑制性受体。103.根据实施方案101或实施方案102所述的方法，其中所述耗竭标记是pd-1、ctla-4、tim-3、lag-3、btla或tigit。104.根据实施方案103所述的方法，其中所述激活标记是hla-dr、cd25、cd69、cd71、cd40l或4-1bb。105.根据实施方案93-96中任一项所述的方法，其中所述表面表达为至少或至少约1.2倍、1.5倍、2.0倍、3.0倍、4.0倍、5.0倍、10.0倍或更多更少。106.根据实施方案1-105中任一项所述的方法，其中所述输出组合物中细胞的数量基本上同于或高于通过类似孵育但在多克隆刺激分子的存在下产生的细胞组合物中细胞的数量，所述多克隆刺激分子能够激活tcr复合物的一种或多种组分的一种或多种细胞内信号传导结构域。107.根据实施方案101-106中任一项所述的方法，其中所述多克隆刺激分子包含抗cd3抗体或片段和/或抗cd28抗体或片段。108.根据实施方案1-107中任一项所述的方法，其中所述输出组合物中所述细胞的数量比所述输入组合物中所述细胞的数量高了大于或大于约1.2倍、1.5倍、2.0倍、3.0倍、4.0倍、5.0倍、10.0倍、25倍、50倍、100倍或更多。109.根据实施方案1-108中任一项所述的方法，其中所述输出组合物中包含所述重组抗原受体的细胞的百分比为大于或大于约50％、60％、70％、80％、90％、95％或更多。110.根据实施方案1-109中任一项所述的方法，其中与所述输入组合物中包含所述抗原受体的细胞的数量相比，所述输出组合物中包含所述重组抗原受体的细胞的数量增加或富集了1.2倍、2.0倍、3.0倍、4.0倍、5.0倍、6.0倍、7.0倍、8.0倍、9.0倍、10倍或更多。111.根据实施方案1-110中任一项所述的方法，其中所述孵育的至少一部分是在调节细胞扩增或活性的一种或多种另外的药剂的存在下进行。112.根据实施方案111所述的方法，其中所述一种或多种另外的药剂是一种或多种细胞因子。113.根据实施方案1-112中任一项所述的方法，其是在体外或离体进行的。114.根据实施方案1-113中任一项所述的方法，其中所述抗原受体是car，并且所述car还包含含有itam的细胞内信号传导结构域。115.根据实施方案114所述的方法，其中所述细胞内信号传导结构域包含cd3-zeta(cd3ζ)链的细胞内结构域。116.根据实施方案114或实施方案115所述的方法，其中所述car还包含共刺激信号传导区域。117.根据实施方案116所述的方法，其中所述共刺激信号传导区域包含cd28或4-1bb的信号传导结构域。118.根据实施方案117所述的方法，其中所述共刺激结构域是cd28。119.根据实施方案1-118中任一项所述的方法，其还包括从所述输出组合物中除去所述多个颗粒(例如珠)。120.一种细胞组合物，其通过根据实施方案1-119中任一项所述的方法产生。121.一种表面修饰的颗粒，其包含颗粒和与所述颗粒的表面结合的结合分子，其中所述结合分子特异性地结合抗原受体的细胞外抗原结合结构域。122.根据实施方案121所述的表面修饰的颗粒，其中所述抗原受体是嵌合抗原受体(car)。123.根据实施方案121或实施方案122所述的表面修饰的颗粒，其中所述结合分子不结合或识别所述重组抗原受体的接头或间隔区，所述接头或间隔区将所述抗原受体的抗原结合结构域与跨膜结构域连接。124.根据实施方案121-123中任一项所述的表面修饰的颗粒，其中所述结合分子包含由所述抗原结合结构域识别的重组抗原或其部分。125.根据实施方案124所述的表面修饰的颗粒，其中所述重组抗原选自由所述抗原结合结构域识别的ror1、b细胞成熟抗原(bcma)、碳酸酐酶9(caix)、her2/neu(受体酪氨酸激酶erbb2)、ll-cam、cd19、cd20、cd22、间皮素、cea和乙型肝炎表面抗原、抗叶酸受体、cd23、cd24、cd30、cd33、cd38、cd44、egfr、上皮糖蛋白2(epg-2)、上皮糖蛋白40(epg-40)、epha2、erb-b2、erb-b3、erb-b4、erbb二聚体、egfrviii、叶酸结合蛋白(fbp)、fcrl5、fcrh5、胎儿乙酰胆碱受体、gd2、gd3、hmw-maa、il-22r-α、il-13r-α2、激酶插入结构域受体(kdr)、κ轻链、路易斯y、l1细胞粘附分子(l1-cam)、黑色素瘤相关抗原(mage)-a1、mage-a3、mage-a6、优先表达的黑色素瘤抗原(prame)、存活蛋白、tag72、b7-h6、il-13受体α2(il-13ra2)、ca9、gd3、hmw-maa、cd171、g250/caix、hla-aimageal、hla-a2ny-eso-1、psca、叶酸受体-a、cd44v6、cd44v7/8、avb6整合素、8h9、ncam、vegf受体、5t4、胎儿achr、nkg2d配体、cd44v6、双重抗原、癌症-睾丸抗原、间皮素、鼠类cmv、粘蛋白1(muc1)、muc16、psca、nkg2d、ny-eso-1、mart-1、gp100、癌胚胎抗原、ror1、tag72、vegf-r2、癌胚抗原(cea)、前列腺特异性抗原、psma、her2/neu、雌激素受体、孕酮受体、肝配蛋白b2、cd123、c-met、gd-2、o-乙酰化gd2(ogd2)、ce7、wilms肿瘤1(wt-1)、细胞周期蛋白、细胞周期蛋白a2、ccl-1、cd138和病原体特异性抗原、或任何前述项的部分；和/或所述抗原选自αvβ6整合素(avb6整合素)、b细胞成熟抗原(bcma)、b7-h3、b7-h6、碳酸酐酶9(ca9，也称为caix或g250)、癌症-睾丸抗原、癌症/睾丸抗原1b(ctag，也称为ny-eso-1和lage-2)、癌胚抗原(cea)、细胞周期蛋白、细胞周期蛋白a2、c-c基序趋化因子配体1(ccl-1)、cd19、cd20、cd22、cd23、cd24、cd30、cd33、cd38、cd44、cd44v6、cd44v7/8、cd123、cd138、cd171、表皮生长因子蛋白(egfr)、iii型表皮生长因子受体突变(egfrviii)、上皮糖蛋白2(epg-2)、上皮糖蛋白40(epg-40)、肝配蛋白b2、肝配蛋白受体a2(epha2)、雌激素受体、fc受体样5(fcrl5；也称为fc受体同源物5或fcrh5)、胎儿乙酰胆碱受体(胎儿achr)、叶酸结合蛋白(fbp)、叶酸受体α、神经节苷脂gd2、o-乙酰化gd2(ogd2)、神经节苷脂gd3、糖蛋白100(gp100)、g蛋白偶联受体5d(gprc5d)、her2/neu(受体酪氨酸激酶erb-b2)、her3(erb-b3)、her4(erb-b4)、erbb二聚体、人高分子量黑色素瘤相关抗原(hmw-maa)、乙型肝炎表面抗原、人白细胞抗原a1(hla-a1)、人白细胞抗原a2(hla-a2)、il-22受体α(il-22ra)、il-13受体α2(il-13ra2)、激酶插入结构域受体(kdr)、κ轻链、l1细胞粘附分子(l1-cam)、l1-cam的ce7表位、含有富亮氨酸重复序列的蛋白8家族成员a(lrrc8a)、路易斯y、黑色素瘤相关抗原(mage)-a1、mage-a3、mage-a6、间皮素、c-met、鼠类巨细胞病毒(cmv)、粘蛋白1(muc1)、muc16、自然杀伤细胞2族成员d(nkg2d)配体、黑色素a(mart-1)、神经细胞粘附分子(ncam)、癌胚胎抗原、优先表达的黑色素瘤抗原(prame)、孕酮受体、前列腺特异性抗原、前列腺干细胞抗原(psca)、前列腺特异性膜抗原(psma)、受体酪氨酸激酶样孤儿受体1(ror1)、存活蛋白、滋养层糖蛋白(tpbg，也称为5t4)、肿瘤相关糖蛋白72(tag72)、血管内皮生长因子受体(vegfr)、血管内皮生长因子受体2(vegfr2)、wilms肿瘤1(wt-1)、病原体特异性或病原体表达的抗原、或与通用标签相关的抗原，和/或生物素化分子，和/或由hiv、hcv、hbv或其他病原体表达的分子。126.根据实施方案124或实施方案125所述的表面修饰的颗粒，其中所述重组抗原是bcma、cd22或ror1，或者是其由所述抗原结合结构域识别的部分。127.根据实施方案124-126中任一项所述的方法，其中所述重组抗原的由所述抗原结合结构域识别的部分包含所述抗原的细胞外结构域或所述细胞外结构域的部分。128.根据实施方案124-126中任一项所述的方法，其中所述重组抗原的由所述抗原结合结构域识别的部分本质上由所述抗原的细胞外结构域或所述细胞外结构域的部分组成。129.一种表面修饰的颗粒，其包含颗粒和与所述颗粒的表面结合的结合分子，其中所述结合分子包含b细胞成熟抗原(bcma)的细胞外结构域或其部分。130.根据实施方案124-129中任一项所述的表面修饰的颗粒，其中所述结合分子是融合多肽，所述融合多肽包含与一种部份连接的所述重组抗原或其部分，任选地其中所述部份促进与所述颗粒的附接。131.根据实施方案130所述的表面修饰的颗粒，其中所述部份与所述重组抗原的c末端连接。132.根据实施方案130或实施方案131所述的表面修饰的颗粒，其中所述部份是疏水性的或富含疏水性氨基酸。133.根据实施方案130-132中任一项所述的表面修饰的颗粒，其中所述部份是或包含fc结构域。134.根据实施方案133所述的表面修饰的颗粒，其中所述fc区源自人igg。135.根据实施方案130-134中任一项所述的表面修饰的颗粒，其中所述重组抗原是人的。136.根据实施方案121-123中任一项所述的表面修饰的颗粒，其中所述结合分子包含抗独特型抗体或其抗原结合片段。137.根据实施方案121-123和136中任一项所述的表面修饰的颗粒，其中由所述抗原结合结构域识别的抗原是cd19。138.根据实施方案136或实施方案137所述的表面修饰的颗粒，其中所述抗原受体的所述抗原结合结构域是或包含抗体sj25c1或其抗原结合片段。139.根据实施方案136或实施方案137所述的表面修饰的颗粒，其中所述抗原受体的所述抗原结合结构域是或包含抗体fmc63或其抗原结合片段。140.根据实施方案138或实施方案139所述的表面修饰的颗粒，其中所述抗原结合片段是或包含scfv。141.根据实施方案136-140中任一项所述的表面修饰的颗粒，其中所述抗独特型抗体或其抗原结合片段包含免疫球蛋白恒定区的至少一部分。142.根据实施方案141所述的表面修饰的颗粒，其中免疫球蛋白恒定区的所述至少一部分包含fc区或所述fc的包含ch2和ch3结构域的部分。143.根据实施方案141或实施方案142所述的表面修饰的颗粒，其中所述恒定区或所述fc区源自人igg。144.根据实施方案136-143中任一项所述的表面修饰的颗粒，其中所述抗独特型抗体或其抗原结合片段是完整抗体或全长抗体。145.根据实施方案121-144中任一项所述的表面修饰的颗粒，其中所述结合分子共价地或非共价地附接至所述颗粒(例如珠)。146.根据实施方案121-145中任一项所述的表面修饰的颗粒，其中所述结合分子在所述结合分子的c末端氨基酸残基处或附近与所述多个颗粒(例如珠)中的每一个附接，和/或进行所述结合分子与所述多个颗粒(例如珠)中的每一个的附接，使得由所述抗原受体的所述抗原结合结构域识别的所述结合分子的区域或表位取向为使其能够由所述抗原受体识别。147.根据实施方案121-146中任一项所述的表面修饰的颗粒，其中所述颗粒(例如珠)是合成颗粒、不溶性颗粒、固体颗粒，或者是非细胞颗粒。148.根据实施方案121-147中任一项所述的表面修饰的颗粒，其中所述多个颗粒包含珠。149.根据实施方案121-148中任一项所述的表面修饰的颗粒，其中所述颗粒具有在或在约1μm与10μm之间或在或在约2μm与5μm之间的直径。150.根据实施方案121-149中任一项所述的表面修饰的颗粒，其中所述颗粒具有约2.8μm的直径。151.根据实施方案121-149中任一项所述的表面修饰的颗粒，其中所述颗粒具有约4.5μm的直径。152.根据实施方案121-151中任一项所述的表面修饰的颗粒，其中所述结合分子共价地附接至所述颗粒(例如珠)。153.根据实施方案121-152中任一项所述的表面修饰的颗粒，其中所述颗粒包含用于附接所述结合分子的表面暴露的官能团和/或其中所述结合分子经由表面暴露的官能团共价地附接至所述颗粒。154.根据实施方案153所述的表面修饰的颗粒，其中所述表面暴露的官能团是氨基基团、羧基基团、硫醇基团、醛基团、氯甲基基团、环氧基基团、羟基基团、甲苯磺酰基基团或肼基团。155.根据实施方案154所述的表面修饰的颗粒，其中所述表面暴露的官能团是甲苯磺酰基基团。156.根据实施方案121-155中任一项所述的表面修饰的颗粒，其中所述颗粒对细胞而言是生物相容的或无毒的。157.根据实施方案121-156中任一项所述的表面修饰的颗粒，其中所述多个颗粒(例如珠)包含含有如下的颗粒：玻璃、二氧化硅、羟基羧酸的聚酯、二羧酸的聚酸酐、羟基羧酸的共聚物、二羧酸的共聚物、或金属。158.根据实施方案121-157中任一项所述的表面修饰的颗粒，其中所述颗粒(例如珠)包含含有如下的表面：聚合物、多糖、二氧化硅、脂肪酸、碳、或其组合。159.根据实施方案158所述的表面修饰的颗粒，其中所述聚合物是聚乙二醇、聚(乳酸-共-乙醇酸)、聚戊二醛、聚氨酯、聚苯乙烯、和聚乙烯醇、或其组合。160.根据实施方案121-149中任一项所述的表面修饰的颗粒，其中所述颗粒包含疏水性表面。161.根据实施方案121-160中任一项所述的表面修饰的颗粒，其中所述颗粒(例如珠)包含聚苯乙烯表面。162.根据实施方案121-161中任一项所述的表面修饰的颗粒，所述颗粒是磁的和/或包含磁芯、顺磁芯或超顺磁芯。163.根据实施方案121-162中任一项所述的表面修饰的颗粒，其中所述颗粒包含至少或约至少10个拷贝、102个拷贝、103个拷贝、104个拷贝、105个拷贝或106个拷贝的所述结合分子。164.根据实施方案121-163中任一项所述的表面修饰的颗粒，其中所述颗粒还包含药剂，所述药剂与细胞上另外的分子特异性地结合以提供辅助信号和/或阻断抑制信号，从而调节细胞的扩增。165.根据实施方案165所述的表面修饰的颗粒，其中所述药剂是配体或者是抗体或其抗原结合片段。166.根据实施方案164或实施方案165所述的表面修饰的颗粒，其中所述分子是共刺激分子或是激活性共受体或其配体。167.根据实施方案166所述的表面修饰的颗粒，其中所述共刺激分子或激活性共受体是ox-40、icos、dap10、cd28或4-1bb，或者是其配体，任选地ox-40l、icosl、b7-1、b7-2或4-1bbl。168.根据实施方案164或实施方案165所述的表面修饰的颗粒，其中所述分子是抑制性受体或其配体。169.根据实施方案168所述的表面修饰的颗粒，其中所述抑制性受体是ctla-4、pd-1、lag-3、tim-3、btla或tigit，或者是其配体，任选地pd-l1、pd-l2、cd155、cd112或light。170.根据实施方案164-169中任一项所述的表面修饰的颗粒，其中所述药剂共价地附接至所述颗粒(例如珠)。171.根据实施方案164-170中任一项所述的表面修饰的颗粒，其中所述颗粒所包含的所述结合分子与所述药剂的比率(任选地摩尔比或重量比)为或为约1:1。172.一种组合物，其包含多个根据实施方案113-153中任一项所述的表面修饰的颗粒(例如珠)。173.根据实施方案172所述的组合物，其中所述结合分子的浓度在或在约0.5μg/ml与500μg/ml之间、1μg/ml与200μg/ml之间或5μg/ml与100μg/ml之间。174.根据实施方案172或实施方案173所述的组合物，其中所述结合分子的浓度为至少或至少约1μg/ml、5μg/ml、10μg/ml、25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml或200μg/ml。175.根据实施方案172-174中任一项所述的组合物，其是单分散的。176.一种试剂盒，其包含根据实施方案121-171中任一项所述的颗粒或根据实施方案154-158中任一项所述的组合物和使用说明书。177.根据实施方案176所述的试剂盒，其中说明书是针对从细胞群中选择或富集表达抗原受体的细胞，所述抗原受体包含由所述结合分子特异性地识别的抗原结合结构域。178.根据实施方案176所述的试剂盒，其中说明书是针对从细胞群中扩增表达抗原受体的细胞，所述抗原受体包含由所述结合分子特异性地识别的抗原结合结构域。179.根据实施方案177或实施方案178所述的试剂盒，其中在所述细胞群中表达重组抗原受体的细胞的百分比为小于或小于约75％、70％、60％、50％、40％、30％、20％、15％、10％或更少。180.一种用于扩增细胞的方法，所述方法包括将细胞群与根据实施方案121-171中任一项所述的颗粒或根据实施方案172-175中任一项所述的组合物一起孵育。181.一种用于选择或富集细胞的方法，所述方法包括使细胞群与根据实施方案121-171中任一项所述的颗粒或根据实施方案172-175中任一项所述的组合物接触。182.一种用于评估细胞组合物的长期刺激方法，所述方法包括：将输入组合物在刺激所述输入组合物中的细胞的car依赖性活性的条件下孵育持续至少10天的时间段从而产生输出组合物，所述输入组合物包含表达嵌合抗原受体(car)的t细胞，所述嵌合抗原受体包含特异性地结合或识别抗原的细胞外抗原结合结构域；并且评估所述输出组合物的一种或多种细胞的一种或多种表型或活性。183.根据实施方案182所述的方法，其中所述刺激car依赖性活性的条件包括与所述car的所述抗原结合结构域特异性地结合的结合分子的存在。184.根据实施方案183所述的方法，其中将所述结合分子附接至支持物。185.根据实施方案184所述的方法，其中所述支持物是固体支持物。186.根据实施方案185所述的方法，其中所述固体支持物是微板的孔的表面或珠的表面。187.根据实施方案183-186中任一项所述的方法，其中所述固体支持物是微板，所述微板具有与所述微板附接的结合分子，并且在所述微板中进行所述孵育。188.根据实施方案183-187中任一项所述的方法，其中所述固体支持物是已经附接有所述结合分子的珠，并且在多个所述珠的存在下进行所述孵育。189.根据实施方案183-187中任一项所述的方法，其中所述结合分子是或包含由所述抗原结合结构域识别的重组抗原或其部分。190.根据实施方案189所述的方法，其中所述重组抗原或其部分是bcma，或者是其由所述抗原结合结构域识别的部分。191.根据实施方案183-190中任一项所述的方法，其中所述结合分子是或包含与所述抗原结合结构域特异性地结合的抗独特型抗体或其抗原结合片段。192.根据实施方案191所述的方法，其中所述抗原受体的所述抗原结合结构域是或包含抗体sj25c1或其抗原结合片段。193.根据实施方案192所述的方法，其中所述抗原受体的所述抗原结合结构域是或包含抗体fmc63或其抗原结合片段。194.根据实施方案183-193中任一项所述的方法，其中所述方法是在体外或离体进行的。195.根据实施方案182-194中任一项所述的方法，其中将所述输入组合物在不包含重组细胞因子的培养基的存在下孵育。196.根据实施方案182-195中任一项所述的方法，其中将所述孵育连续地进行或不中断持续一段时间。197.根据实施方案182-196中任一项所述的方法，其中在所述孵育期间，不再铺板细胞、不更换培养基并且不添加结合分子。198.根据实施方案182-197中任一项所述的方法，其包括评估所述输出组合物的所述一种或多种细胞的激活、耗竭或分化状态中的一种或多种表型。199.根据实施方案198所述的方法，其中所述表型是耗竭，并且所述评估包括测量选自以下的一种或多种标记的表达、任选地表面表达：ctla-4、foxp3、pd-1、tigit、lab-3、2b4、btla、tim3、vista或cd96。200.根据实施方案198所述的方法，其中所述表型是激活，并且所述评估包括测量选自以下的一种或多种标记的表达、任选地表面表达：cd25、cd26、cd27、cd28、cd30、cd71、cd154、cd40l、cd127、lag3或ki67。201.根据实施方案198所述的方法，其中所述表型是分化状态，并且所述评估包括测量选自以下的一种或多种标记：(i)cd25、cd45ro、cd56、klrg1、cd95中的一种或多种和/或(ii)cd45ra、cd27、cd28、cd62l和ccr7中的一种或多种，任选地其中所述一种或多种标记是与幼稚样t细胞正相关或反相关的标记。202.根据实施方案182-201中任一项所述的方法，其包括评估所述输出组合物的所述一种或多种细胞的一种或多种活性。203.根据实施方案182-202中任一项所述的方法，其中所述一种或多种活性包括car依赖性活性、任选地抗原刺激活性。204.根据实施方案202或203所述的方法，其中所述一种或多种活性包括细胞裂解活性或细胞因子产生。205.根据实施方案182-204中任一项所述的方法，其中所述时间段为至少或至少约11天、12天、13天、14天或15天。206.根据实施方案182-205中任一项所述的方法，其中所述时间段为或为约11天、12天、13天、14天或15天。207.根据实施方案182-206中任一项所述的方法，其中所述输入组合物包含在所述孵育之前已经暴露于或接触测试药剂或化合物的细胞，任选地其中所述暴露或所述接触是在如下过程的一个或多个步骤期间进行，所述过程用于产生包含表达所述car的所述t细胞的所述输入组合物。208.根据实施方案182-207中任一项所述的方法，其中所述方法是对多种输入组合物进行，多种所述输入组合物中的每一种是通过不同的过程产生的。209.根据实施方案182-208中任一项所述的方法，其还包括将所述输出组合物的所述表型或活性与对照组合物的所述表型或活性进行比较，任选地其中所述对照组合物是t细胞组合物，所述t细胞已在刺激所述car依赖性活性的相同条件下被孵育持续至少10天，所述t细胞组合物尚未在所述测试药剂或化合物的存在下产生，或者已经通过与所述输入组合物相比替代性的过程产生。210.根据实施方案182-209中任一项所述的方法，其还包括鉴定展现出降低的耗竭、降低的激活或减少的分化的输出组合物，任选地其中所述减少的分化包括一种或多种幼稚样t细胞标记的表达增加。ix.实施例仅出于说明性目的包括以下实施例，并不意图限制本发明的范围。实施例1：bcma缀合珠的产生通过将bcma-fc融合多肽(含有在其c末端与igg的fc区融合的可溶性人bcma)与可商购获得的甲苯磺酰基激活的磁珠(thermofisher，马萨诸塞州沃尔瑟姆(walthamma))的表面共价偶联来将到b细胞成熟抗原(bcma)与珠缀合。所述珠是共价结合伯氨基和巯基基团的超顺磁性、无孔、单分散、甲苯磺酰基激活的珠。使用具有大约2.8μm(命名为m-280)或4.5μm(命名为m-450)直径的珠进行缀合。bcma-fc(seqidno:35)含有用接头连接的人bcma(genbank编号np_001183.2)的细胞外结构域和人igg1fc，如下所述：mlqmagqcsqneyfdsllhacipcqlrcssntppltcqrycnasvtnsvkgtna(bcma的细胞外结构域；seqidno:1)ggggs(接头；seqidno:27)pkssdkthtcppcpapeaegapsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpssiektiskakgqprepqvytlppsrdeltknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk(人igg1fc；seqidno:28)。将编码具有n末端cd33前导序列(seqidno:30)的重组人bcma-fc融合构建体的克隆插入表达载体中，并在hek293细胞中表达。在5天之后收获来自瞬时转染的hek细胞的上清液，并且通过蛋白质a亲和色谱和尺寸排阻色谱(sec)来纯化bcma-fc融合蛋白。如通过凝胶渗透色谱法评估的，确定所得的bcma-fc融合蛋白具有大于95％的纯度。为了测试结合，将bcma-fc融合蛋白与表达抗bcmacar的t细胞和表达不与bcma结合的car的t细胞一起孵育。流式细胞术的结果表明，bcma-fc融合蛋白特异性地结合表达抗bcmacar的t细胞。将从5μg至200μg范围内的各种浓度的bcma-fc融合蛋白添加到大约1ml的甲苯磺酰基激活的珠(例如，含有直径为2.8μm的约4x109个甲苯磺酰基激活的珠或直径为4.5μm的约4x108个甲苯磺酰基激活的珠)中。通过在含有0.1％人血清白蛋白(hsa)的磷酸盐缓冲溶液(pbs)中于37℃下孵育过夜进行共价偶联。将珠洗涤并重悬于具有0.1％hsa的1mlpbs中。在缀合之前和之后，使用cellometer确定珠的浓度。通过sds-page分析确定了与磁珠偶联的bcma-fc抗原的百分比。在下面的实施例中，在各种研究中使用的bcma缀合的珠是指参考每ml添加的bcma-fc抗原的量或者缀合期间的抗原浓度(μg/ml)，例如5μg或5μg/ml；50μg或50μg/ml；200μg或200μg/ml等。对于下文所述的一些研究，使用基本上如上文所述的程序将珠与bcma-fc和抗cd28抗体以1:1的比率进行双重缀合。实施例2：抗bcma抗体缀合的珠刺激cart细胞将如实施例1中所述生成的bcma缀合的珠(直径为4.5μm)与抗bcmacar表达t细胞一起孵育。通过基于免疫亲和力的富集从来自健康供体的白细胞分离术样品中分离t细胞。用编码两个抗bcmacar之一的病毒载体转导分离的t细胞，每个抗bcmacar含有对bcma特异的不同scfv抗原结合结构域、间隔子、cd28跨膜区、4-1bb共刺激信号传导区域和cd3ζ衍生的细胞内信号传导结构域(命名为抗bcmacar#1和抗bcmacar#2，仅在scfv部分不同)。病毒载体构建体还编码截短的egfr(egfrt)，其用作car表达的替代标记；通过t2a跳跃序列将egfrt编码区与car序列分隔开。在转导之后，将细胞扩增，以大约1:1的car cd4 t细胞与car cd8 t细胞的比率配制，并通过冷冻保存将所得组合物冷冻。对于所描述的研究，如使用检测egfrt替代标记的抗egfr抗体所确定的，表达抗bcmacar#1和抗bcmacar#2的t细胞组合物的转导效率分别为45％或56％。将含有抗bcma-car t细胞的t细胞组合物解冻，并且将来自100μg/mlbcma缀合的珠组合物的珠以1:1的珠:细胞比率添加到细胞中并孵育五天。作为阳性对照，将细胞与抗cd3/抗cd28珠以1:1的珠:细胞比率培养五天。在与bcma缀合的珠一起孵育之后，还评估了不表达car的t细胞(模拟物研究组)。为了评估增殖，在与bcma缀合的珠孵育之前，根据制造商的方案用增殖标记染料celltraceviolet(ctv；thermofisherscientific，马萨诸塞州沃尔瑟姆(walthamma))标记含有表达抗bcmacar的t细胞的细胞组合物。图1中所示的示例性结果表明与bcma缀合的珠一起孵育导致cd3 t细胞中ctv染色的荧光强度降低，表明代表根据细胞分裂数量的增殖程度的增殖染料的稀释。对于模拟物细胞，对于不表达抗bcmacar的模拟物细胞，观察到孵育之后极少的cd3 t细胞存活且ctv强度没有降低。这些数据表明，与bcma缀合的珠一起孵育特异性地增加了表达抗bcmacar的t细胞的细胞增殖。为了评估在与bcma缀合的珠一起孵育后是否特异性地富集car t细胞的扩增，使用抗egfr抗体针对cd4或cd8的表面表达以及针对egfrt转导标记的表达对t细胞组合物的细胞进行染色，并通过流式细胞术进行分析。将与bcma缀合的珠一起孵育后car t细胞的富集程度(如通过egfrt替代标记的表达检测的)与使用抗cd3/抗cd28珠进行多克隆刺激之后的富集进行了比较。还比较了在与bcma缀合的珠或对照抗cd3/抗cd28珠一起孵育的t细胞组合物中细胞增殖的程度(如通过ctv增殖染料的染色强度的稀释所确定)和激活的程度(如通过cd25或pd-1的表面表达所确定)。如表e1所示，将含有抗bcmacar t细胞的t细胞组合物与bcma缀合的珠一起孵育五天导致与将相同t细胞组合物与抗cd3/抗cd28抗体缀合的珠一起孵育相比，表达egfrt的cd4 细胞和cd8 细胞的百分比更高，表明bcma缀合的珠富集抗bcmacar t细胞。表e1：在与bcma缀合的珠一起孵育后egfrt 细胞的百分比如图2a所示，与用抗cd3/抗cd28抗体缀合的珠一起孵育相比，将含有表达抗bcma-car的t细胞的t细胞组合物与bcma缀合的珠一起孵育五天导致cd25的表达降低，但稍微更大的增殖能力(如ctv增殖染料的强度的更大降低所证明)。图2b提供了如下直方图，其中x轴示出了ctv染色的强度并且y轴示出了根据flowjo软件归一化以描绘按“最大值的％”计的数据的细胞数量(命名为“归一化至模式”)。最大值的％表示每个区(bin)(x轴上参数的数字范围)中的细胞数除以含有最大细胞数的区中的细胞数。flowjo使用256个区，并且每个图都按比例缩放至其最大区的百分比。如图所示，跟与抗cd3/抗cd28缀合的珠一起孵育的t细胞相比，在至少一个亚组的细胞中观察到ctv染色的强度略微降低(证明细胞增殖的稀释更大)。此外，如图2c所示，在与抗cd3/抗cd28抗体缀合的珠一起孵育的cd4 和cd8 t细胞中pd-1的表达增加，然而cd4 和cd8 t细胞与bcma缀合的珠一起孵育未导致pd-1的表达增加，特别是在cd8 t细胞中如此。为了进一步评估car t细胞的富集程度，将包含被工程化以表达抗bcmacar的、源自三名不同供体的t细胞的三种单独的t细胞组合物与bcma缀合的珠一起孵育。在孵育四天、七天或十四天后，通过流式细胞术分析细胞(在7天时将细胞再铺板)。如图3a所示，在所有三种t细胞组合物中，表达抗bcmacar的t细胞的百分比随时间推移而增加。在孵育四天、七天或十四天后，通过流式细胞术分析来自每种组合物的cd8 car 细胞的cd25、cd27或ccr7表面表达。如图3b所示，与在第4天的测量值相比，在孵育期间cd25和ccr7表面表达的水平降低了。相比之下，cd8 car 细胞中cd27的表面表达保持相对一致。实施例3：bcma缀合的珠滴定对cart细胞的影响除了所得的配制组合物含有大约74％cd8 细胞和21％cd4 细胞之外，基本上如实施例2中所述生成含有抗bcmacar cd4/cd8t细胞的t细胞组合物，其中总细胞的82％呈抗bcmacar阳性(如使用可溶性bcma-fc所检测)并且68％呈egfrt阳性(如使用抗egfr抗体所确定)。将含有抗bcmacar t细胞的组合物通过冷冻保存冷冻并在用于下面的研究中之前解冻。将如实施例1中所述制备的bcma缀合珠的各种制剂(直径4.5μm；包括来自50μg/ml、25μg/ml、10μg/ml或5μg/mlbcma缀合珠组合物的珠)按1:1的珠:细胞比率添加到含有表达抗bcmacar的t细胞的细胞组合物中，并且然后孵育4天。通过流式细胞术对已经用ctv增殖标记染料进行标记的t细胞监测作为细胞增殖指示器的ctv信号强度。还通过流式细胞术对细胞评估cd3、cd4、cd8、cd25、pd1和egfrt替代标记的表面表达。图4a描绘了cd4 和cd8 细胞中的表面cd25染色水平的条形图，并且图4b描绘了在与指定浓度的bcma缀合珠一起孵育之后在cd4 或cd8 t细胞中的pd-1表面表达的直方图(如上文所述归一化至模式)。如图4a和4b所示，与bcma缀合的珠一起孵育导致cd4 和cd8 细胞中的cd25(顶图)和pd-1(底图)的表面表达的剂量依赖性增加。如图5a和图5b所示，如通过cd3 细胞的数量所评估，总t细胞计数没有剂量依赖性差异(图5a)，然而在与bcma缀合的珠一起孵育后cd4 细胞中的ctv平均荧光强度(mfi)有略微剂量依赖性降低(图5b)。如图6所示，与bcma缀合的珠一起孵育导致cd4 细胞中的cd25表面表达的剂量依赖性增加。总之，这些数据表明，具有较低浓度的bcma的bcma缀合珠显示出较低的激活标记表达和较高的增殖。这些数据表明，可以通过滴定与珠缀合的bcma抗原的量来操纵含有抗bcmacar t细胞的t细胞组合物的某些属性。实施例4：评估用bcma缀合珠刺激的抗bcmacar t细胞上的t细胞标记将如实施例1所述的与多种量的bcma抗原缀合的bcma缀合珠(直径4.5μm)与抗bcmacar t细胞一起孵育，并评估t细胞标记的表达。在一个实验中，将基本上如实施例2所述产生并以1:1比率的cd4 和cd8 t细胞配制的低温冷冻的抗bcmacart细胞解冻，并以12孔板每个孔1.5x106个细胞进行接种。在来自50μg/ml、100μg/ml或200μg/mlbcma缀合珠组合物的珠的存在下，将细胞孵育三天。以1:1的t细胞与珠的比率进行孵育。通过流式细胞术分析在cd4 和cd8 细胞上的cd25表面表达表明，对于所有浓度的bcma缀合的珠，cd25的诱导相似(图7a)。在另一个实验中，将如上文所述制备的大约1.5x106个car t细胞添加到12孔板的孔中，并与来自200μgbcma缀合珠组合物的珠以1:0.3、1:1或1:3的car t细胞与bcma缀合珠的比率(分别为大约0.5x106个、1.5x106个、和4.5x106个珠/孔)孵育。作为对照，将5μg/ml的抗cd3抗体包被到孔中(刺激的次最佳浓度)，或在不存在任何药剂的情况下接种细胞(无刺激对照)。每种条件均在存在或不存在5μm来那度胺的情况下孵育。将细胞孵育四天，然后通过流式细胞术分析cd4、cd8、tim3、pd-1、cd25和cd69的表面表达。将抗bcmacar t细胞与bcma缀合的珠一起孵育增加了在cd4 和cd8 t细胞上的cd25(图7b)、cd69(图7c)和tim3(图7d)的表面表达。在1:3的car t细胞与珠的比率下提供的最大量的珠的存在下被刺激的细胞展现出这些标记表达的最大增加。如图7e所示，当以1:3的car t细胞与珠的比率孵育cd4 细胞时，在抗bcmacar t细胞上的pd-1表面表达也是最大的。当以较高的bcma珠浓度(在1:3的car t细胞与珠的比率下提供)下用bcma缀合的珠刺激时，在cd8 细胞上的pd-1表面表达也有略微的增加。所述结果与以下发现一致：在孵育期间存在的bcma浓度可以差异地调节car t细胞上的表面标记表达。如图7f所示，与在不存在来那度胺的情况下与珠一起孵育(运载体对照)相比，5μm来那度胺的存在增加了在与200μgbcma抗原缀合的珠以1:1的t细胞与珠之比孵育三天后t细胞的增殖能力(通过ctv染料强度的降低所观察到)。如图7g和7h所示，在孵育期间来那度胺的存在进一步增加了在将抗bcmacar t细胞与bcma缀合的珠一起孵育(图7g)或抗cd3刺激(图7h)之后诱导的cd4 和cd8 t细胞中的cd25表面表达的程度。在另外的实验中，将基本上如实施例1所述产生的抗bcmacar-t细胞组合物以5x105个细胞/孔的密度铺板在96孔板中。在铺板时，所测试的car-t细胞组合物平均含有大约45％的抗bcmacar 细胞。来自每种组合物的细胞在来自5μg/ml、50μg/ml或200μg/ml的bcma缀合的珠组合物的珠的存在下，以1:1的t细胞与珠之比孵育18小时。作为对照，将细胞与抗cd3/抗cd28抗体缀合的珠(阳性对照)或不添加药剂(阴性对照)一起孵育。在不存在来那度胺的情况下或在存在0.5μm或5μm来那度胺的情况下进行孵育。在孵育后，用试剂处理细胞，所述试剂允许通过流式细胞术对转录因子blimp1、eomes、gata-3、ikaros、helios和tbet、以及标记cd25、cd31和pd-1进行细胞外和细胞内抗体染色。示出了在将来自一名示例性供体的car t细胞组合物孵育之后针对blimp-1(图8a)、cd25(图8b)、cd31(图8c)、pd-1(图8d)、tbet(图8e)、和eomes(图8f)、gata-3(图8g)、helios(图8h)、和ikaros(图8i)的标记水平。如图所示，在用bcma缀合的珠刺激后，许多评估的t效应细胞相关的转录因子和激活标记的表达增加。对于许多评估的标记，表达增加的程度类似于通过用抗cd3/抗cd28珠刺激诱导的表达。在一些情况下，在5μg珠的存在下用bcma缀合的珠的刺激程度最大。如图8i所示，在所有条件下在来那度胺的存在下ikaros的表达水平降低。从第二名供体产生的car t细胞组合物观察到了相似的结果，不同的是当在测试条件下刺激时从来自此供体的细胞未观察到helios表达的变化。实施例5：评估用bcma缀合的珠刺激的抗bcmacart细胞的活性评估了由包括在bcma缀合的珠的存在下扩增的过程生成的抗bcmacart细胞的活性。a.效应子应答将基本上如实施例2所述产生并以1:1比率的cd4 和cd8 t细胞配制的低温冷冻的抗bcmacart细胞解冻。除非另有说明，否则将如实施例1所述生成的珠(直径为约4.5μm，来自5μg/ml或50μg/mlbcma缀合的珠组合物)以1:1的t细胞与珠之比在存在或不存在5μm来那度胺的情况下添加到孔中。将细胞孵育长达14天，并在各个时间点分析细胞因子分泌，针对egfrt替代标记通过流式细胞术分析细胞扩增，并且分析细胞裂解活性。a.细胞因子表达(i)上清液中细胞因子的存在在添加bcma缀合的珠之后二十四小时，评估培养上清液中tnf-α、ifnγ和il-2的存在。如图9a-9c所示，与bcma缀合的珠一起孵育诱导了ifnγ(图9a)、il-2(图9b)和tnf-α(图9c)分泌到培养上清液中。与5μg/mlbcma缀合珠组合物相比，当将细胞与来自50μg/mlbcma缀合珠组合物的珠一起孵育时细胞因子产生的程度较高，表明经由bcma珠的car刺激是剂量依赖性的。如图所示，来那度胺增加了在用bcma缀合的珠刺激后的bcma诱导的car t细胞细胞因子产生。在另外的示例性研究中，从不同的供体生成了两种不同的抗bcmacart细胞组合物，每一种都含有表达相同抗bcmacar的t细胞。将细胞解冻，并与来自如实施例1所述生成的5μg/ml或200μg/mlbcma缀合的珠组合物的珠(直径为约4.5μm)一起孵育。在存在或不存在1μm或5μm来那度胺的情况下，以1:1的t细胞与珠之比进行孵育。在添加bcma缀合的珠之后二十四小时，在培养上清液中评估抗bcmacar t细胞的il-2产生。如图9d所示，与较低的抗原刺激(5μg/mlbcma缀合的珠)相比，在高抗原刺激(200μg/mlbcma缀合的珠)的存在下观察到更高的il-2产生。在高和低抗原刺激的存在下，来那度胺(在1μm或5μm下)增加了细胞因子产生。(ii)细胞内细胞因子水平将抗bcmacar t细胞在1μm来那度胺或运载体和50μg/mlbcma-fc缀合的珠的存在下孵育2小时，并且通过流式细胞术评估细胞的磷酸化stat5。为了评估ifnγ和tnfα细胞因子水平，将抗bcmacar t细胞在0.1μm或1μm来那度胺或运载体和5μg/ml、50μg/ml或200μg/mlbcma-fc缀合的珠的存在下孵育24小时。在转导的活cd3 细胞上门控细胞，并通过流式细胞术评估cd4 和cd8 细胞中ifnγ和tnfα的细胞内细胞因子积累。如图9e所示，与无刺激对照(用虚线示出)相比，用抗原刺激2小时增加了呈phosphor-stat5阳性的细胞的百分比。来自从代表性正常car-t细胞供体生成的抗bcmacart细胞的ifnγ和tnfα的细胞内细胞因子水平的结果示于图9f中。在此研究中，在大范围的抗原水平和浓度内来那度胺增加了抗bcmacar-t细胞的细胞因子产生。b.细胞增殖与孵育开始时存在的细胞(虚线)相比，用来自50μg/mlbcma缀合珠组合物(而不是5μg/mlbcma缀合珠组合物)的珠刺激抗bcmacar t细胞后，在第4天(图9g)和第7天(图9h)监测的总细胞计数增加。在第7天，在来那度胺的存在下，在与50ug珠孵育的细胞中观察到小的增殖增加。为了进一步评估增殖，在与bcma缀合的珠孵育之前，根据制造商的方案用增殖标记染料celltraceviolet(ctv；thermofisherscientific，马萨诸塞州沃尔瑟姆(walthamma))标记含有表达抗bcmacar的t细胞的细胞。在用来自50μg/mlbcma缀合的珠组合物的珠刺激的细胞上使用流式细胞术通过染料稀释来评估增殖。与在不存在来那度胺的情况下的增殖相比，如在第4天而不是第7天通过在来那度胺的存在下的ctv稀释所评估的，增殖略有延迟(图9i)。c.扩增在添加bcma缀合的珠之后四天和七天，将孵育的细胞用cd4或cd8以及用抗egfr抗体染色，以确定呈egfrt阳性的细胞(作为car t细胞的替代物)的百分比。如通过用bcma-fc染色确定的，在铺板时，26％的cd4 细胞表达抗bcmacar，并且39％的cd8 细胞表达抗bcmacar。当在来自50μg/mlbcma缀合的珠组合物的珠的存在下孵育细胞时，egfrt cd4 t细胞的百分比从孵育开始时的约26％增加到第4天的大于40％(图9j)和第7天的大于60％(图9k)。如图9k所示，当在来自50μg/mlbcma缀合珠组合物的珠的存在下孵育细胞时，到第7天，egfrt cd8 t细胞的百分比从孵育开始时的约38％增加到大于60％。与来自5μg/mlbcma缀合的珠组合物的珠相比，在来自50μg/mlbcma缀合的珠组合物的珠的存在下孵育细胞时，细胞扩增的程度最大。来那度胺的存在对本研究中car t细胞扩增的程度没有实质性影响。d.细胞裂解活性通过与表达bcma的靶细胞系rpmi-8226(其为bcma 多发性骨髓瘤细胞系)孵育来评估与bcma缀合的珠孵育之后car t细胞的细胞裂解活性。在存在或不存在来那度胺的情况下，将抗bcmacar t细胞与bcma缀合的珠(5μg/ml或50μg/ml)孵育七天之后，从培养物中去除珠，并且在进一步存在或不存在5μm来那度胺的情况下，将细胞与rpmi-8226靶细胞以3:1或1:1的效应细胞:靶细胞之比铺板。为了进行细胞裂解测定，将靶标rpmi-8226细胞用nuclightred(nlr)标记，以允许通过显微镜检查追踪靶细胞。通过测量如通过红色荧光信号(使用活细胞分析系统，essenbioscience)确定的在四天的时间段内活靶细胞的损失来评估细胞裂解活性。将活细胞的数量归一化至在与rpmi-8226靶细胞孵育之前第0天的细胞。在图9l中示出了在1:1的效应细胞:靶细胞比率的示例性结果。如图所示，抗bcmacar t细胞在测定中表现出有效的杀伤作用。用来自5μg/mlbcma缀合的珠组合物的珠刺激的抗bcmacar t细胞的细胞杀伤效率比用来自5μg/mlbcma缀合的珠组合物的珠刺激的抗bcmacar t细胞稍低。对于所有条件，在杀伤测定之前的七天孵育期间与来那度胺预孵育增加了car t细胞的细胞裂解活性。在细胞杀伤测定期间来那度胺的存在基本上不影响杀伤活性。当单独地或在来那度胺的存在下培养rpmi8226细胞时未观察到细胞杀伤，表明来那度胺在此测定中不直接影响靶细胞活力。在另外的示例性研究中，未处理抗bcmacar t细胞，或将其与来自如实施例1所述生成的50μg/mlbcma缀合珠组合物的珠(直径约4.5μm)以1:1的珠:细胞比率一起孵育24小时或孵育七天。将抗bcmacar t细胞从培养物中除去，并与rpmi-8226靶细胞以0.3:1或1:1的效应细胞:靶细胞比率一起孵育。为了评估在与bcma缀合的珠一起孵育之后对靶细胞的细胞因子应答，测量了上清液中的ifnγ水平。如图9m所示，当与rpmi-8226靶细胞按任一比率培养时，与其他测试细胞相比，与bcma缀合的珠一起孵育24小时的抗bcmacar t细胞产生了更多的ifn-γ。如图9n所示，对于1:1的效应细胞:靶细胞比率，抗bcmacart细胞在与bcma缀合的珠一起孵育24小时或7天之后显示出有效的杀伤，表明细胞在用珠刺激之后仍保持功能。b.连续再刺激从三名不同的供体(每名供体都含有表达相同抗bcmacar的t细胞)生成抗bcmacart细胞组合物，将所述组合物解冻，并与来自如实施例1所述生成的50μg/mlbcma缀合珠组合物的珠(直径约4.5μm)以1:1的珠:细胞比率一起孵育七天。在存在5μm来那度胺的情况下或在不存在来那度胺的情况下(运载体对照)进行孵育。在7天之后收获细胞，并将所述细胞再铺板另外三轮直至28天，每轮涉及重新设定至初始接种密度并在相同浓度的来那度胺的存在下孵育另外7天。在预处理之后的每次重新设定中，通过在进一步存在或不存在来那度胺的情况下与表达bcma的靶细胞系rpmi-8226(标记有nuclightred(nlr))以1:1的效应细胞:靶细胞(e:t)之比孵育来评估细胞裂解活性。通过测量如通过红色荧光信号(使用活细胞分析系统，essenbioscience)确定的在至多80-150小时的时间段内活靶细胞的损失来评估细胞裂解活性。将来自每种条件的细胞一式三份铺板。确定与仅运载体对照(设定为100％)相比的细胞杀伤％。图10a示出了在预处理7天、14天或21天之后来自示例性供体的抗bcmacar t细胞的细胞裂解活性的结果。如图所示，与在来那度胺的存在下未预孵育的细胞相比，与来那度胺预孵育7天或14天的抗bcmacar t细胞展现出更大的细胞裂解活性。在此供体中，与第7天相比，通过与来那度胺预孵育14天或21天的抗bcmacar t细胞观察到杀伤效率总体下降。在所述供体中观察到用来那度胺预处理7天或14天之后对抗bcmacar t细胞的细胞裂解活性具有相似的影响；在此供体中未评估21天来那度胺预处理之后的细胞裂解活性。如图10b所示，在所有时间点在与来那度胺预孵育的细胞中在此供体中观察到抗bcmacar t细胞的杀伤效率增加。实施例6：在bcma缀合的珠的存在下转导和扩增抗bcmacar t细胞使用白细胞分离术收集系统从来自受试者的全血样品获得在单核细胞中富集的人白细胞分离术样品。在白细胞分离术的同一天，将白细胞分离术样品的细胞洗涤并重悬于缓冲液中用于基于亲和力的选择，所述缓冲液含有磷酸盐缓冲盐水(pbs)、edta和人血清白蛋白。对于基于免疫亲和力的t细胞选择，将选择缓冲液中洗涤的细胞在室温下与偶联至对cd4和cd8特异的单克隆抗体的磁珠一起孵育30分钟，并使用磁分离柱通过阳性选择进行富集。以1:1的比率将富集的cd4 和cd8 细胞重悬于冷冻保存介质中，并且将细胞冷冻保存在控制速率的冷冻机中并储存在液氮中直至进一步使用。使用来自4名不同供体的冷冻保存的细胞。将冷冻保存的cd4 和cd8 t细胞解冻、洗涤并且然后与慢病毒载体粒子接触，而没有先前用t细胞激活剂激活细胞，例如没有将细胞与抗cd3/抗cd28一起孵育。对于转导，将大约1x106个解冻的t细胞添加到96孔板的各个孔中。将已与聚阳离子转导佐剂(在此情况下，100μg/ml硫酸鱼精蛋白)预混合的慢病毒载体粒子添加到孔中。慢病毒载体粒子含有如下核酸，所述核酸包含编码抗bcmacar的转基因和用作转导标记的截短的egfr(egfrt)序列，所述截短的egfr序列通过自切割t2a序列与car序列分开。将每孔的最终体积调节至100μl。使用上文所述的程序制备了含有经工程化以表达抗bcmacar的细胞的五种不同的组合物。基本上如实施例1所述制备与bmca-fc和抗cd28缀合的珠(命名为bcma/抗cd28缀合的珠)。在转导之后立即将由每名供体生成的大约50μl细胞添加到含有bcma/抗cd28缀合的珠或抗cd3/抗cd28缀合的珠的500μl培养基中(以1:1的珠:细胞比率)，并孵育12天。每隔一天对细胞计数，并在转染后第3天、第7天、第10天和第12天使用抗egfr抗体针对egfrt(car表达的替代标记)表达进行染色。数据表明，在抗cd3/抗cd28缀合的珠的存在下孵育长达12天的t细胞组合物在培养物中扩增，其中在培养的第12天时发生了在大约95倍至140倍之间的扩增。与孵育开始相比，未转导但与抗cd3/抗cd28缀合的珠一起孵育的对照模拟物t细胞的扩增在第12天也展现出约65倍的扩增。转导之后立即与bcma/抗cd28珠一起孵育的t细胞组合物的扩增倍数到第12天时为约1.0倍至7.0倍。如图11所示，即使在用病毒粒子转导之前没有激活细胞的情况下，在抗cd3/抗cd28的存在下孵育的t细胞组合物也展现出高的egfrt转导标记表达。此结果符合立即刺激与表面car表达相关。尽管到第12天时在约60％与90％之间的细胞呈egfrt阳性，用bcma/抗cd28珠刺激的t细胞展现出更长的动力学以实现相同百分比的呈egfrt阳性的细胞。结果表明，尽管与抗cd3/抗cd28珠相比，与bcma/抗cd28珠孵育后细胞生长较慢，但是car t细胞可以在培养的12天内被富集，表明bcma/抗cd28珠扩增了car t细胞。在用慢病毒载体粒子转导之前没有激活细胞的情况下在上述条件下孵育的t细胞还在第12天针对cd4和cd8的表面表达进行染色，并通过流式细胞术进行了分析。作为对照，将由供体细胞生成的t细胞组合物(也以1:1的cd4 :cd8 细胞比率)在转导之前通过用抗cd3/抗cd28珠刺激24小时来激活，之后将激活的细胞与如上所述的表达抗bcmacar的慢病毒载体粒子接触；在这种条件下，将细胞进一步孵育12天，但在不存在任何缀合的珠的情况下孵育。表e2总结了在上述条件下孵育的同一供体细胞的结果。如图所示，与在转导之前在抗cd3/抗cd28缀合的珠的存在下首先激活24小时的细胞相比，在转导之前没有激活细胞的情况下将细胞与抗cd3/抗cd28缀合的珠或bcma/抗cd28珠一起孵育改变了cd4/cd8t细胞的比率。此外，这些结果表明，在没有先前激活t细胞的情况下，与bcma/抗cd28抗体缀合的珠或抗cd3/抗cd28抗体缀合的珠一起孵育导致了相似的car表达水平和cd4/cd8细胞表型。如表e3所示，与在转导之前在抗cd3/抗cd28缀合的珠的存在下首先激活24小时的细胞相比，在转导之前没有激活细胞的情况下当与抗cd3/抗cd28珠一起孵育时在源自4名不同供体的t细胞中观察到相似的cd4/cd8t细胞比率的逆转。表e2：在用抗原和/或抗体缀合的珠处理的t细胞培养物中cd4 和cd8 细胞的百分比。珠处理cd4 细胞％cd8 细胞％bcma/抗cd2892.27.57抗cd3/抗cd2876.723.0抗cd3/抗cd28(24小时)19.978.5表e3：在用抗体缀合的珠处理的t细胞培养物中cd4 和cd8 细胞的百分比。实施例7：ror1缀合的珠的生成通过将ror1-fc融合多肽(含有在其c末端与igg的fc区融合的人ror1的细胞外结构域)与可商购获得的甲苯磺酰基激活的磁珠(thermofisher，马萨诸塞州沃尔瑟姆(walthamma))的表面共价地偶联，将受体酪氨酸激酶样孤儿受体1(ror1)与珠缀合。所述珠是共价结合伯氨基和巯基基团的超顺磁性、无孔、单分散、甲苯磺酰基激活的珠。使用具有大约2.8μm(命名为m-280)或4.5μm(命名为m-450)直径的珠进行缀合。ror1-fc含有用如下接头连接的人ror1片段和人igg1fc：qetelsvsaelvptsswnisselnkdsyltldepmnnittslgqtaelhckvsgnppptirwfkndapvvqeprrlsfrstiygsrlrirnldttdtgyfqcvatngkevvsstgvlfvkfgppptaspgysdeyeedgfcqpyrgiacarfignrtvymeslhmqgeienqitaaftmigtsshlsdkcsqfaipslchyafpycdetssvpkprdlcrdeceilenvlcqteyifarsnpmilmrlklpncedlpqpespeaancirigipmadpinknhkcynstgvdyrgtvsvtksgrqcqpwnsqyphthtftalrfpelngghsycrnpgnqkeapwcftldenfksdlcdipacdskdskeknkmeilyggggspkssdkthtcppcpapeaegapsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpssiektiskakgqprepqvytlppsrdeltknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk(seqidno:33).将各种浓度的ror1-fc融合蛋白添加到大约1ml的甲苯磺酰基激活的珠(例如具有2.8μm的直径的4x109个甲苯磺酰基激活的珠)中。通过在含有0.1％人血清白蛋白(hsa)的磷酸盐缓冲溶液(pbs)中于37℃下孵育过夜进行共价偶联。将珠洗涤并重悬于具有0.1％hsa的1mlpbs中。缀合之后，使用cellometer确定珠的浓度。通过与ror1fc缀合的珠一起孵育来刺激表达抗ror1car的t细胞。实施例8：cd22缀合的珠的生成通过将cd22-fc融合多肽(含有在其c末端与igg的fc区融合的人cd22的细胞外结构域)与可商购获得的甲苯磺酰基激活的磁珠(thermofisher，马萨诸塞州沃尔瑟姆(walthamma))的表面共价地偶联，将cd22与珠缀合。所述珠是共价结合伯氨基和巯基基团的超顺磁性、无孔、单分散、甲苯磺酰基激活的珠。使用具有大约2.8μm(命名为m-280)或4.5μm(命名为m-450)直径的珠进行缀合。cd22-fc含有用如下接头连接的人cd22的细胞外结构域和人igg1fc：dsskwvfehpetlyawegacvwipctyraldgdlesfilfhnpeynkntskfdgtrlyestkdgkvpseqkrvqflgdknknctlsihpvhlndsgqlglrmesktekwmerihlnvserpfpphiqlppeiqesqevtltcllnfscygypiqlqwllegvpmrqaavtstsltiksvftrselkfspqwshhgkivtcqlqdadgkflsndtvqlnvkhtpkleikvtpsdaivregdsvtmtcevsssnpeyttvswlkdgtslkkqntftlnlrevtkdqsgkyccqvsndvgpgrseevflqvqyapepstvqilhspavegsqveflcmslanplptnytwyhngkemqgrteekvhipkilpwhagtyscvaenilgtgqrgpgaeldvqyppkkvttviqnpmpiregdtvtlscnynssnpsvtryewkphgaweepslgvlkiqnvgwdnttiacaacnswcswaspvalnvqyaprdvrvrkikplseihsgnsvslqcdfssshpkevqffwekngrllgkesqlnfdsispedagsyscwvnnsigqtaskawtlevlyaprrlrvsmspgdqvmegksatltcesdanppvshytwfdwnnqslpyhsqklrlepvkvqhsgaywcqgtnsvgkgrsplstltvyyspetigrrggggspkssdkthtcppcpapeaegapsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpssiektiskakgqprepqvytlppsrdeltknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk(seqidno:34).将各种浓度的cd22-fc融合蛋白添加到大约1ml的甲苯磺酰基激活的珠(例如具有2.8μm的直径的4x109个甲苯磺酰基激活的珠)中。通过在磷酸盐缓冲溶液(pbs)中于37℃下孵育过夜进行共价偶联。将珠洗涤并重悬于具有0.1％hsa的1mlpbs中。缀合之后，使用cellometer确定珠的浓度。通过与cd22fc缀合的珠一起孵育来刺激表达抗cd22car的t细胞。实施例9：抗独特型抗体与珠的缀合将两种不同的抗cd19抗体抗独特型(id)抗体之一(即fmc63衍生的scfv特异性抗id抗体(如表e4中所示的序列))与可商购获得的甲苯磺酰基激活的磁珠(thermofisher，马萨诸塞州沃尔瑟姆(walthamma))的表面共价地偶联，所述甲苯磺酰基激活的磁珠是超顺磁性的、无孔、单分散、甲苯磺酰基激活的珠。所述珠共价地结合伯氨基和巯基基团。使用具有大约2.8μm(命名为m-280)或4.5μm(命名为m-450)直径的珠进行缀合。表e4.抗idb-1和b-2序列将200μg抗id抗体添加到大约1ml的甲苯磺酰基激活的珠中(例如，大约4x109个直径为2.8μm的甲苯磺酰基激活的珠或约4x108个直径为4.5μm的甲苯磺酰基激活的珠)，并且通过在含有0.1％人血清白蛋白(hsa)的磷酸盐缓冲溶液(pbs)中于37℃下孵育过夜进行共价偶联。将珠洗涤并重悬于具有0.1％hsa的1mlpbs中。缀合之后，使用cellometer确定珠的浓度。为了评估抗id缀合的珠的稳定性，将珠沉淀，将上清液去除并加载到4％-12％bis-trissds-page凝胶上，并将凝胶用考马斯蓝染色。作为缀合到珠上的总蛋白质的对照，将沉淀的珠在约70℃下在4x(十二烷基硫酸锂)lds样品缓冲液中煮沸持续20分钟，并且将大约12.5μl或25μl煮沸的上清液在sds-page凝胶上跑胶并通过考马斯蓝进行评估。还通过sds-page和考马斯蓝染色评估未与珠缀合的大约2.5μg或5.0μg抗id抗体(阳性对照)或5μl0.1％hsa(阴性对照)。在来自未煮沸的缀合样品的上清液中未检测到抗id抗体，表明缀合是稳定的，然而在来自煮沸的缀合样品的上清液中检测到了抗id抗体。实施例10：评估与抗独特型抗体缀合的珠培养的t细胞的刺激将fmc63衍生的scfv特异性抗idb-1缀合的珠与t细胞一起孵育。通过基于免疫亲和力的富集从来自健康供体的白细胞分离术样品中分离cd3纯化的t细胞。用编码具有从fmc63衍生的scfv的抗cd19car的病毒载体转导分离的细胞。病毒载体构建体还编码截短的egfr(egfrt)，其用作car表达的替代标记；通过t2a跳跃序列将egfrt编码区与car序列分隔开。转导之后，使细胞在培养物中扩增并通过冷冻保存将其冷冻。对于t细胞刺激研究，将解冻的cd4 或cd8 car表达细胞分别以大约50,000个总细胞/孔的进行接种。在一些情况下，另外如下所述向培养基补充细胞因子：对于cd4 细胞，大约1200iu/ml重组il-7、20iu/ml重组il-15和100iu/ml重组il-2；对于cd8 细胞，大约200iu/ml重组il-2和20iu/ml重组il-15。将抗idb-1缀合的珠以1:1或1:5的细胞:珠比率添加到细胞中，并每2-3天以50％培养基更换来孵育长达14天。作为阳性对照，在存在或不存在指定细胞因子的情况下，将细胞与抗cd3/抗cd28磁珠以3:1的细胞:珠比率进行培养。在培养的不同时间，对cd4 或cd8 转导的细胞(如通过抗egfr检测的替代标记的表达)评估扩增、pd-1表达和活力。如图12a和12b所示，当将细胞以1:1或1:5的细胞:珠比率与抗id缀合的珠培养时，特别是在细胞因子的存在下，分别观察到cd4 和cd8 t细胞的扩增。扩增程度大于当细胞与对照抗cd3/抗cd28磁珠培养时的扩增程度。在培养的第3天、第7天、第10天和第14天通过流式细胞术评估在cd4 细胞亚组上的pd-1的表面表达。如图13所示，在与抗cd3/抗cd28磁珠培养的细胞上pd-1表达高，然而在与抗id缀合的珠培养的细胞中pd-1的水平明显更低或不可检测。如图14所示，当另外在细胞因子的存在下培养细胞时，在以1:1或1:5比率的抗id缀合的珠或对照抗cd3/抗cd28缀合的珠与细胞的情况下培养的cd4 和cd8 t细胞的活力百分率在培养期期间始终保持较高。然而，在所有条件下，在不存在添加的细胞因子的情况下细胞的活力下降，其中最大的细胞活力损失发生在细胞培养的后期。实施例11：评估与抗独特型抗体缀合的珠培养的t细胞的细胞因子产生基本上如实施例10所述生成用具有从fmc63衍生的scfv的抗cd19car工程化的t细胞。在高尔基体抑制剂的存在下，将解冻的cd8 t细胞与抗idb-1缀合的珠培养4小时。通过流式细胞术确定在car t细胞亚组(如通过针对替代标记用抗egfr的阳性表面染色所确定)或car-t细胞亚组(如通过用抗egfr的阴性表面染色所确定)中的tnfα、ifnγ和il-2的细胞内细胞因子水平。作为比较，还将car t细胞(egfrt )与表达cd19的靶细胞(转导以表达cd19的k562细胞，k562-cd19)以1:2的效应细胞:t细胞比率培养。如图15a所示，当在抗idb-1缀合的珠的存在下培养细胞时，在car t细胞(egfrt )中而不是在car-t细胞(egfrt-)中诱导了tnfα、ifnγ和il2细胞因子的细胞内细胞因子水平。在此研究中，在抗id缀合的珠的存在下观察到的刺激程度类似于使用表达抗原的k562-cd19细胞(其是替代的car特异性刺激试剂)对car t细胞的刺激(图15b)。这些结果表明，缀合至珠的抗id是激动剂，并且特异性地刺激表达car的t细胞，所述car具有由抗id抗体识别的抗原结合结构域。此外，与需要细胞培养并且倾向于具有批次间变异性的细胞系相比，珠试剂提供了更好的car特异性刺激试剂。实施例12：评估连续再刺激之后的扩增在重复刺激后细胞离体扩增的能力可能是car t细胞持久(例如，在初始激活后)的能力的潜在替代物和/或指示体内功能(zhao等人(2015)cancercell,28:415-28)。如上所述生成car t细胞，并将解冻的cd4 或cd8 car表达t细胞分别以50,000个car 细胞/孔进行铺板。如实施例10中所述，在存在或不存在细胞因子的情况下，将抗idb-1缀合的珠以1:1或1:5的细胞:珠比率添加到细胞中。作为对照，在存在或不存在细胞因子的情况下，将抗cd3/抗cd28磁珠以3:1的细胞:珠比率添加到细胞中。每3-4天将细胞收集并计数，并且在将每轮的细胞数重新设定为初始接种密度之后使用相同的培养条件用新的靶细胞进行再刺激。在14天培养期过程中进行总共4轮刺激。对于每轮刺激，确定倍增数。如图16所示，在用抗id缀合的珠再刺激之后观察到表达car的(egfrt )cd4 细胞的持续细胞扩增，但是当在细胞因子的存在下培养细胞时扩增程度更大。而且，扩增程度大于当将细胞与抗cd3/抗cd28珠培养时的扩增程度。对于cd8 t细胞，在抗id缀合的珠或抗cd3/抗cd28珠的存在下培养细胞时观察到相似的扩增动力学，但是当将细胞与抗id缀合的珠培养时，特别是在不存在添加的重组细胞因子的情况下，扩增稍微更大。实施例13：使用抗独特型抗体缀合的珠进一步分析car特异性细胞扩增除了使用从两名不同的患者供体生成的表达car的t细胞之外，进行与实施例11和12中所述的那些类似的研究。从两名供体患者的外周血单核细胞(pbmc)中分离出cd3纯化的t细胞，并将其用编码具有从fmc63衍生的scfv的抗cd19car的病毒载体转导，在培养物中扩增、冷冻并解冻。将解冻的cd4 、cd8 或cd4/cd8的共培养物(1:1比率)以大约5x106个总细胞/孔接种在6孔板的孔中的培养基中，所述培养基如下另外补充有细胞因子：对于cd4 细胞或cd4 /cd8 共培养物，培养基补充有大约1200iu/ml重组il-7、20iu/ml重组il-15和100iu/ml重组il-2；对于cd8 细胞，培养基补充有200iu/ml重组il-2和20iu/ml重组il-15。将抗idb-1缀合的珠以1:1的细胞:珠比率添加到细胞中，并每2-3天以50％培养基更换来孵育长达9天。在培养的不同时间，评估每种条件下培养物中存在的cd4 或cd8 转导细胞的数量(如通过抗egfr检测的egfrt替代标记的表达)，并且确定了car表达细胞的扩增倍数或作为总细胞百分比的频率。还确定了pd-1和cd25的表达以及细胞活力。如图17a所示，当将cd4 细胞与抗id缀合的珠单独培养时，观察到表达car的(egfrt )cd4 t细胞超过60倍的扩增。对于cd8 t细胞，当cd8 t细胞与cd4 细胞共培养时，在抗id缀合的珠的存在下发生的表达car的(egfrt )cd8 t细胞的扩增明显更高。如图17b所示，在抗id缀合的珠的存在下在培养的9天期间表达car的(egfrt )cd4 或cd8 的频率增加，在第9天在培养物中存在的转导细胞(egfrt )>90％。在培养期间cd4 和cd8 细胞的活力也保持接近100％，当与cd4 t细胞共培养时观察到cd8 t细胞的活力稍微更大(图17c)。对于两名供体观察到相似的结果。这些结果与在没有通过使用car特异性抗独特型抗体缀合的珠进行先前car选择的情况下对car t细胞的富集一致。在与抗id缀合的珠培养的第5天、第7天和第9天通过流式细胞术评估了pd-1和cd25在转导的(egfr )cd4 或cd8 细胞上的表面表达。如图18a所示，cd4 和cd8 t细胞上的pd-1表达随着与抗id缀合的珠培养的时间明显降低。如图18b所示，在抗id缀合的珠的存在下培养9天之后，cd25表达也降低了。对于两名供体观察到相似的结果。实施例14：与抗独特型抗体缀合的珠培养之后细胞因子水平和表型的比较从两名供体患者的外周血单核细胞(pbmc)中分离出cd3纯化的t细胞，并将其用编码具有从fmc63衍生的scfv的抗cd19car的病毒载体转导，并且在具有抗cd3和抗cd28抗体包被的珠的培养物中扩增。扩增之后，通过冷冻保存将扩增的t细胞冷冻。对于所述研究，将冷冻的t细胞融化并对cd4 和cd8 t细胞评估细胞内细胞因子水平或表面表型(d＝0)，或者在评估通过pma/离子霉素或cd19转导的k562细胞刺激后的细胞内细胞因子水平和表面标记表型之前，将解冻的cd4 、cd8 或cd4 /cd8 共培养t细胞在抗idb-1缀合的珠的存在下培养另外9天(d＝9)。为了评估细胞内细胞因子水平，添加高尔基体抑制剂持续4小时，并且然后通过流式细胞术评估tnfα、ifnγ和il-2。对于所有条件，与用cd19转导的k562细胞进行car特异性刺激相比，当用pma/离子霉素刺激细胞时，细胞内细胞因子表达的程度明显更高。如图19a所示，与在抗id缀合的珠的存在下进一步培养9天的对应的cd4 或cd8 细胞或cd4/cd8t细胞的共培养物相比，在解冻之后即刻的cd4 或cd8 细胞中tnfα和il-2细胞因子的水平相似。与在解冻之后即刻的cd4 或cd8 t细胞中ifnγ的水平相比，在抗id缀合的珠的存在下进一步培养9天的、解冻的cd4 、cd8 或cd4/cd8共培养t细胞中观察到ifnγ的水平增加。这些结果表明，在与抗id缀合的珠一起扩增9天后，与新鲜解冻的car t细胞相比t细胞功能得以维持。在来自两名供体的细胞中获得了相似的结果。还在解冻之后即刻的cd4 或cd8 细胞中(d＝0)、或在抗id缀合的珠的存在下扩增另外9天的单独的cd4 或cd8 t细胞或cd4/cd8共培养物中(d＝9)，评估了激活标记cd25的表面表达、抑制性受体pd-1和lag-3的表面表达、以及增殖标记ki-67的核表达。如图19b所示，与在解冻之后即刻的t细胞相比，在抗id缀合的珠的存在下进一步培养9天的细胞中观察到cd25表达降低，但未观察到ki-67表达降低。与在cd4 细胞中相比，在cd8 细胞中cd25表达的降低明显更大。此外，与在解冻之后即刻的细胞中的表达相比，与抗id缀合的珠一起孵育9天之后在单独培养的cd4 和cd8 细胞中或作为cd4/cd8共培养物中也观察到pd-1和lag-3的表达降低。此结果表明，在与抗id缀合的珠一起孵育之后，先前冷冻的转导细胞保留了功能能力，如通过呈标记ki-67阳性(指示细胞增殖)的细胞的高百分比所证实，但是也展现出不同的激活状态，所述激活状态的特征在于cd25激活标记和抑制性受体标记pd-1和lag-3的低表面表达。实施例15：刺激抗bcma缀合的珠或抗bcma/pd-l1缀合的珠对pd-1表达和/或信号传导的影响在1μm来那度胺的或运载体对照的存在下，将从来自代表性健康供体或多发性骨髓瘤患者来源材料的样品产生的抗bcmacar-t细胞与50μg/mlbcma-fc缀合的珠(如实施例1所述产生的)以1:1的珠:car t细胞比率培养持续7天。然后通过流式细胞术评估在不同条件下培养的cart细胞(使用抗体作为替代car标记)上cd25、pd-1、tim3和lag3的表达。然后将在存在或不存在来那度胺的情况下，用珠预刺激的此类抗bcmacar-t细胞或从可比较的供体样品生成的新鲜解冻的抗bcmacar-t细胞进行去珠、洗涤，并在1μm来那度胺或运载体对照的存在下与rpmi-8226靶细胞(用nuclightred(nlr)标记以允许通过显微镜检查对其进行追踪)一起培养。具体地，对于在来那度胺的存在下进行过预处理的预处理细胞，将细胞在来那度胺的存在下与靶细胞一起培养；同样，对于在运载体的存在下进行过预处理的预处理细胞，就细胞在运载体的存在下与靶细胞一起培养。在共培养后，通过测量由红色荧光信号确定的在七天的时间段内活靶细胞的损失来评估细胞裂解活性。将杀伤百分比归一化至在运载体的存在下在珠上预刺激的抗bcmacart细胞。在与靶细胞一起培养24小时后，通过elisa从上清液中评估细胞因子产生。在3名供体中进行了两次实验。使用线性固定效应或混合效应模型评估来那度胺治疗对细胞裂解活性和细胞因子产生的重要性，其中将处理、供体和处理的时间视为固定效应，并且将治疗的动物视为随机效应，并与当重复测量值源自同一动物时的时间嵌套在一起。通过似然比检验获得p值，所述似然比检验将具有感兴趣的效果的完整模型与没有感兴趣的效果的模型进行比较。图20a示出了car抗原特异性细胞裂解活性的结果并且图20b示出了在共培养物中已经用bcma珠预刺激的抗bcmacar-t细胞(与新鲜解冻的(未预刺激的)抗bcmacar-t细胞相比)的细胞因子产生的结果，比较了在存在与不存在来那度胺的情况下培养的细胞。与新鲜解冻的抗bcmacart细胞相比，预刺激的cart细胞显示出降低的细胞裂解活性(p＝2.1×10-4)和细胞因子产生(对于ifn-γ，p＝.03)。在预处理和随后的共培养中在不存在来那度胺的情况下，与新鲜的car-t细胞相比，所得的预刺激的car-t细胞展现出降低的细胞杀伤和细胞因子产生，表明长期的预刺激导致功能受损。这些结果与通过在bcma缀合的珠上预刺激诱导耗竭样表型一致。在预刺激期期间来那度胺的存在保留了细胞裂解功能(p＝.04)，并且与在预刺激期期间暴露于运载体的细胞相比，存在细胞因子产生增加的趋势(图24b)。在此测定中来那度胺的存在与如下观察结果一致，即来那度胺可以减少预刺激的car-t细胞中的功能性耗竭样表型。如图20c所示，评估了在bcma珠上刺激7天的抗bcmacart细胞的表型，并且来那度胺的添加显著增加了3名健康供体中的抗bcmacart材料的car 活力(p＝0.04)。来那度胺的添加并没有改变在这7天的时间段内所有供体中的总细胞计数，并且没有观察到在运载体与来那度胺处理的cart细胞之间的car 百分比的显著差异。图20d示出了在存在或不存在1μm来那度胺的情况下，用bcma珠刺激(预处理)7天之后，针对cd4 或cd8 抗bcmacart细胞对表面cd25和pd-1表达(平均荧光强度(mfi))进行流式细胞术分析的代表性结果。如图所示，结果表明，来那度胺降低了延长刺激之后的bcma-car-t细胞的pd-1表达，而增加了cd25表达。如图20e所示，在三名cart供体中的流式细胞术分析表明，来那度胺的添加增加了cd8 群体中tim3的表面表达(p＝4.0×10-4)，对cd4 car 群体具有混合作用。在所有供体中以及在cd4 和cd8 car 群体中，来那度胺增加了cd25(cd4 和cd8 ；p＝2.2×10-16)和对lag3表达呈阳性的百分比(cd8 p<0.03；cd4 p＝0.002)。值得注意的是，在cd4 群体中也观察到pd-1 细胞百分比降低(p＝0.04)，其中3名供体中有2名也显示出cd8 群体的减少。在另一项研究中，使用重组人bcma缀合的珠在各种浓度下刺激cart细胞，以滴定刺激的量级，即低刺激(5μg/ml)、中刺激(50μg/ml)和高刺激(200μg/ml)。在中刺激条件下，测量刺激之后24小时分泌的细胞因子产生，并且与运载体对照相比，观察到il-2和tnf-α浓度增加200％，其中ifn-γ具有供体依赖性增加(图21a)。在0.1μm或1.0μm来那度胺或运载体对照的存在下，将细胞用bcma缀合的珠刺激24小时。在孵育的最后几小时添加蛋白质转运抑制剂，并且针对细胞内il-2、ifn-γ和tnf-α对细胞进行染色。在bcma珠上激活的抗bcmacart细胞显示出对细胞因子产生的刺激水平依赖性影响，其中与50-μg和200-μgbcma珠相比，5-μgbcma珠导致有限的cart效应细胞的细胞因子产生(图21b)。对于cd4 和cd8 cart细胞，来那度胺增加了在所有刺激水平下的ifn-γ 和tnf-α 细胞内染色的百分比。刺激量级响应于来那度胺增加或减少了il-2，其中在50-μg和200-μg刺激下来那度胺减少了il-2 car t细胞的百分比，但在5-μg刺激条件下来那度胺增加了il-2 car t细胞的百分比。在不存在刺激的情况下，来那度胺对cart细胞因子产生没有影响，表明由来那度胺提供的细胞因子增强需要刺激。在另一项研究中，在如实施例1中所述生成的bcma珠的存在下培养细胞，所述bcma珠具有或不具有另外的人重组pd-l1-fc缀合。在1μm来那度胺的存在下，在bcma缀合的珠或bcma/pd-l1缀合的珠的存在下将源自健康供体或患者的cart细胞刺激24小时。在上清液中测量细胞因子产生。结果示于图21c中。如图25c所示，对健康供体和患者供体cart细胞的评价表明，将重组pd-l1添加至重组bcma珠降低了ifn-γ、il-2和tnf-α。结果表明，来那度胺处理增强了分泌的细胞因子水平，其超过了在pd-l1的存在下用运载体处理过的cart细胞的细胞因子水平。所述结果与以下结论一致：在pd-l1介导的抑制的存在下，来那度胺增加与bcma缀合的珠一起孵育后的抗bcmacar-t细胞因子产生。实施例16：评估用bcma缀合的珠刺激的抗bcmacart细胞的细胞因子产生大体上如实施例2中所述生成抗bcmacart细胞。将抗bcmacart细胞以1:1比率的cd4 和cd8 t细胞配制，并且解冻并以5.0x105个细胞/96孔板的孔进行培养。将抗cd3/抗cd28抗体缀合的珠或直径为4.5或2.8μm的bcma缀合的珠(来自如实施例1中所述生成的5μg/ml、50μg/ml或200μg/mlbcma缀合的珠组合物)以1:1的抗bcmacar-t细胞:珠的比率添加到培养物中。将在不存在抗cd3/抗cd28抗体或bcma缀合的珠的情况下培养的抗bcmacar-t细胞用作对照。在孵育二十四小时之后，使用多重细胞因子免疫测定评估培养上清液中ifn-γ、il-2、tnf-α、il-6、gm-csf和il-4的存在。如图22a所示，跟与bcma缀合的珠一起孵育相比，与抗cd3/抗cd28抗体缀合的珠一起孵育导致上清液中存在更高浓度的细胞因子。在此测定中，从与bcma缀合的珠一起孵育的细胞的细胞因子产生的量级是剂量依赖性的，与用于珠缀合的bcma的浓度增加(即5μg/ml、50μg/ml或200μg/ml)相关。此结果与以下发现一致：通过改变与珠缀合的bcma的量，可以控制和滴定bcma引导的car激活。与抗cd3/抗cd28抗体缀合的珠或bcma缀合的珠一起孵育后细胞因子释放的比较揭示了细胞因子产生的量级和质量的差异，其中在与bcma缀合的珠刺激后观察到更多的th1样细胞因子释放谱。如上所述培养抗bcmacar-t细胞，并通过流式细胞术评估细胞内细胞因子水平。将抗bcmacart细胞与抗cd3/抗cd28抗体缀合的珠或bcma缀合的珠以1:1的抗bcmacar-t细胞与珠的比率一起孵育二十小时，随后与蛋白质转运抑制剂一起孵育四小时。将细胞针对活力、car表达、cd4和cd8进行染色，然后固定、透化和针对ifn-γ、il-2和tnf-α的细胞内水平进行染色。如图22b所示，在表达cd4 和cd8 抗bcmacar的细胞中用bcma缀合的珠刺激导致细胞因子产生。与上文相似，细胞内细胞因子水平的量级显现与缀合至珠的bcma的量相关。实施例17：抗cd19抗体抗id和抗cd2抗体缀合的珠的生成生成了抗cd2和抗cd19抗体抗id抗体包被的珠。将小鼠抗cd2抗体(克隆rpa-2.10，edbiosciences)和实施例9中所述的抗idb-2抗独特型抗体共价地偶联至可商购获得的直径为大约4.5μm的甲苯磺酰基激活的超顺磁珠(命名为m-450；thermofisher，马萨诸塞州沃尔瑟姆(walthamma))的表面。每1ml甲苯磺酰基激活的珠(例如大约4x108个珠/ml)添加大约6.67x10-10mol的每种抗体，并且通过在含有0.1％人血清白蛋白(hsa)的磷酸盐缓冲溶液(pbs)中于37℃下孵育过夜进行共价偶联。将珠洗涤并重悬于具有0.1％hsa的1mlpbs中。缀合之后，使用cellometer确定珠的浓度。基于偶联浓度和珠计数，珠上的分子近似数量为1.58x106个抗体分子/珠。将抗体包被的珠以4.1x108个珠/ml的浓度悬浮于溶液中。通过沉淀抗体缀合的珠、将所得的上清液在4％-12％bis-tris凝胶上跑胶、并用考马斯蓝对蛋白质的凝胶进行染色来评估抗体缀合的珠的稳定性。作为缀合于珠上的总蛋白质的对照，还评估了来自沉淀的珠的10μl上清液样品，所述珠在lds样品缓冲液中经煮沸。对照还包括评估1μg抗cd2抗体、1μg未与珠缀合的抗idb-2抗体(阳性对照)和5μl0.1％hsa(阴性对照)。具有来自煮沸样品的上清液的样品中检测到与抗体对应的条带。在来自未煮沸的缀合样品的上清液中未检测到抗id抗体，这与稳定的缀合一致。实施例18：抗cd19抗体抗id和抗cd28抗体缀合的珠的生成生成了抗cd28和抗cd19抗体抗id抗体包被的珠。将小鼠抗cd28抗体(低内毒素、无叠氮化物(leaf)纯化的克隆cd28.2(biolegend))和实施例9中所述的抗idb-2独特型抗体共价地偶联至可商购获得的直径为大约4.5μm的甲苯磺酰基激活的超顺磁珠(命名为m-450；thermofisher，马萨诸塞州沃尔瑟姆(walthamma))的表面。每1ml甲苯磺酰基激活的珠(例如大约4x108个珠/ml)添加大约6.67x10-10mol的每种抗体，并且基本上如实施例17中所述进行共价偶联。基于偶联浓度和珠计数，珠上的分子近似数量为1.79x106个抗体分子/珠。将抗体包被的珠以如用cellometer所确定的3.2x108个珠/ml的浓度悬浮于溶液中。实施例19：生成含有表面缀合的抗cd19抗体抗id、抗cd2和抗cd28抗体的珠生成了顺磁珠，所述顺磁珠包被有抗cd2、抗cd28和抗cd19抗体抗id抗体包被的珠。将小鼠抗cd2抗体(克隆rpa-2.10，edbiosciences)、小鼠抗cd28(leaf纯化的克隆cd28.2，biolegend)和实施例9中所述的抗idb-2独特型抗体共价地偶联至可商购获得的直径为大约4.5μm的甲苯磺酰基激活的超顺磁珠(命名为m-450；thermofisher，马萨诸塞州沃尔瑟姆(walthamma))的表面。每1ml甲苯磺酰基激活的珠(例如大约4x108个珠/ml)添加大约4.44x10-10mol的每种抗体，并且基本上如实施例17中所述进行共价偶联。基于偶联浓度和珠计数，珠上的分子近似数量为1.56x106个抗体分子/珠。将抗体包被的珠以3.91x108个珠/ml的浓度悬浮于溶液中。通过沉淀抗体缀合的珠、将所得的上清液在4％-12％bis-tris凝胶上跑胶、并用考马斯蓝对蛋白质的凝胶进行染色来评估抗体缀合的珠的稳定性。作为缀合于珠上的总蛋白质的对照，评估了来自沉淀的珠的10μl上清液，所述珠在lds样品缓冲液中经煮沸。还评估了另外的对照：1μg抗cd2抗体、1μg未与珠缀合的抗idb-2抗体(阳性对照)和5μl0.1％hsa(阴性对照)。在来自未煮沸的缀合样品的上清液中未检测到抗id抗体，表明缀合是稳定的，然而在来自煮沸的样品的加载上清液中检测到与抗体对应的条带。实施例20：利用抗id缀合的珠长期刺激car t细胞的体外测定从人供体中分离出cd4 和cd8 细胞的单独组合物，并用编码具有从fmc63衍生的scfv的抗cd19car的病毒载体进行激活和转导。然后，单独收获、配制和低温冷冻来自每名供体的cd4 和cd8 t细胞。将低温冷冻的工程化cd4 和cd8 t细胞解冻，并以1:1的来自同一供体的cd4 和cd8 t细胞比率配制，以生成含有car t细胞的t细胞组合物。将针对抗cd19car的抗id缀合的珠与细胞以1:1的珠:细胞比率一起孵育14天。在以1:1(评估细胞因子水平)或3:1(评估细胞裂解活性)的效应细胞/靶细胞比率用表达k562-cd19抗原的靶细胞刺激之后，评估在用抗id缀合的珠进行car特异性刺激后第14天时收获的car-t细胞的次级应答(第14天；次级)。还通过用表达抗原的细胞进行类似的刺激来确定来自未与抗id缀合的珠一起孵育的t细胞组合物的t细胞的初级应答(第0天；“初级”)。为了评估细胞裂解活性，将靶细胞标记为nuclightred(nlr)，以允许通过荧光显微镜检查进行追踪。如通过动力学荧光显微镜检查(使用活细胞分析系统，essenbioscience)的随时间的荧光信号损失所确定，通过测量72小时内活靶细胞的损失来评估杀伤活性。将杀伤指数确定为靶荧光随时间的曲线下面积(auc)的倒数。在高尔基体抑制剂的存在下孵育之后，还通过流式细胞术在共培养的t细胞中评估了il-2和tnf-α的细胞内细胞因子水平。如图23a所示，与未经历先前car特异性刺激的car t细胞的细胞裂解活性相比，含有car t细胞的t细胞组合物的靶细胞杀伤减少了，所述car t细胞是在用抗id缀合的珠进行car特异性刺激14天后收集的。在已经接受了抗id缀合的珠的长期car特异性刺激的car t细胞中，il-2和tnf-α的细胞内细胞因子水平也降低了(图23b)。这些结果与以下观察结果一致：长期car特异性刺激(例如通过与抗id缀合的珠一起孵育14天)导致car的长期刺激和持续功能的丧失。将上述长期刺激测定用于评估在长期刺激之后各种化合物对改进car t细胞功能的影响。除了在不同化合物或运载体对照的存在下之外，如上文所述生成抗cd19car t细胞组合物。将来自每种生成的car-t细胞组合物的细胞与抗id缀合的顺磁珠以1:1的珠:细胞比率一起孵育14天。在用表达抗原的细胞刺激之后评估了car-t细胞组合物在解冻时的初级应答(未用抗id缀合的珠刺激)或car刺激的car-t组合物的次级应答(在用抗id缀合的珠进行14天car特异性刺激后)。在高尔基体抑制剂的存在下将car-t细胞组合物与表达k562-cd19抗原的细胞1:1培养，并在针对il-2、ifn-γ和tnf-α进行细胞内细胞因子染色后通过流式细胞术评估多功能细胞因子产生。在通过在供体群组内按比例缩放将数据归一化之后，如在cd8 细胞中所确定，从细胞因子的累积水平确定了多功能得分(图24a)。确定了在与靶细胞一起孵育20小时之后来自共培养物的细胞培养上清液的总分泌的il-2、tnf和ifn-γ细胞因子，并且计算所有三种细胞因子的量表得分的平均值，如图24b所示。如图24a和24b所示，基于car-t细胞组合物产生细胞因子的能力，某些化合物导致改进的初级或次级应答。在某些化合物的存在下产生的t细胞组合物中也观察到如上所述以3:1的效应细胞:靶细胞比率与靶细胞共培养后初级或次级细胞裂解应答的改进(图24c)。这些结果证明了长期刺激测定用以评价car-t细胞组合物(包括在不同条件下或在化合物或其他药剂的存在下产生的不同car-t细胞组合物)在长期car-t细胞刺激后展现出长期存活和/或维持功能(例如在体内对抗原延长暴露后可能发生)的能力的实用性。实施例21：在小分子化合物的存在下扩增的嵌合抗原受体(car)转导的t细胞(cart细胞)的功能评估在不同化合物或运载体对照的存在下从三名单独的供体生成含有表达抗cd19car的t细胞的工程化t细胞组合物。通过将生成的抗cd19car-t细胞组合物的细胞与表面缀合有对抗cd19car特异的抗独特型抗体的珠一起孵育，评估来自不同t细胞组合物的细胞在car刺激后扩增的能力。将抗id缀合的珠与细胞以1:1的珠:细胞比率在24孔g-rex扩增容器(argostechnologies)的孔中一起孵育15天。通过每5天对培养物中的细胞计数来确定总的活t细胞/孔(图25a)。相对于仅用培养基扩增的细胞的auc计算t细胞数量随时间变化的平均曲线下面积(auc)(图25b)。如图25a所示，用抗独特型抗体缀合的珠刺激细胞导致初始扩增，随后细胞数量下降。与先前用运载体对照扩增的t细胞相比，先前通过与化合物一起孵育而扩增的来自生成的抗cd19cart细胞组合物的t细胞具有更大的平均auc(图25b)。结果表明，长期刺激测定的存在可以用于鉴定如下化合物，所述化合物在一些情况下改进生成的t细胞组合物在单次car特异性刺激后扩增和存活的能力。对来自用抗id缀合的珠扩增后在第11天收获的t细胞组合物的car-t细胞评估用表达抗原的细胞刺激之后的次级细胞因子应答。将抗id刺激的细胞与经辐射的k562-cd19靶细胞以1:1的效应细胞:靶细胞比率一起孵育大约16小时。收集上清液，并且使用luminexmultiplex测定来测量tnf-α、ifn-γ和il-2细胞因子产生。与在仅培养基中扩增的细胞相比，从在化合物或运载体对照的存在下扩增的所生成的抗cd19car-t细胞组合物确定在共培养上清液中观察到的细胞因子产生的倍数变化。如图25c所示，此测定鉴定了展现出在随后用抗原刺激后改进的次级细胞因子产生的t细胞组合物，所述t细胞组合物是从先前已经在某些化合物的存在下扩增的抗cd19cart细胞组合物生成。此外，所述测定鉴定出来自一些供体来源的细胞的t细胞组合物，所述t细胞组合物当在化合物的存在下进行工程化和扩增时展现出在第11天的cd8 t细胞(其为cd107a ifnγ 细胞)的频率增加，如通过基本上如上所述与高尔基体抑制剂一起孵育4小时后进行细胞内细胞因子染色所确定(图25d)。这些结果表明，长期刺激测定可用于鉴定在将t细胞工程化的过程中使用的化合物改进工程化t细胞组合物功能的作用。本发明在范围上并不旨在限于具体公开的实施方案，所提供的实施方案例如是为了说明本发明的各个方面。根据本文的描述和传授，对所述组合物和方法的各种修改将变得清楚。可以在不脱离本公开文本的真实范围和精神的情况下实践此类变化，并且此类变化旨在落入本公开文本的范围内。序列序列表<110>junotherapeutics,inc.hauskins,collinhussell,scottsierra,catherineworks,melissa<120>扩增表达重组受体的细胞的试剂<130>735042007340<140>尚未分配<141>同时随同提交<150>62/538,671<151>2017-07-29<150>62/596,742<151>2017-12-08<150>62/628,889<151>2018-02-09<150>62/665,468<151>2018-05-01<160>154<170>patentin版本3.5<210>1<211>54<212>prt<213>智人<400>1metleuglnmetalaglyglncysserglnasnglutyrpheaspser151015leuleuhisalacysileprocysglnleuargcysserserasnthr202530proproleuthrcysglnargtyrcysasnalaservalthrasnser354045vallysglythrasnala50<210>2<211>232<212>prt<213>智人<400>2gluprolyssercysasplysthrhisthrcysproprocysproala151015progluleuleuglyglyproservalpheleupheproprolyspro202530lysaspthrleumetileserargthrprogluvalthrcysvalval354045valaspvalserhisgluaspprogluvallyspheasntrptyrval505560aspglyvalgluvalhisasnalalysthrlysproarggluglugln65707580tyrasnserthrtyrargvalvalservalleuthrvalleuhisgln859095asptrpleuasnglylysglutyrlyscyslysvalserasnlysala100105110leuproalaproileglulysthrileserlysalalysglyglnpro115120125arggluproglnvaltyrthrleuproproserarggluglumetthr130135140lysasnglnvalserleuthrcysleuvallysglyphetyrproser145150155160aspilealavalglutrpgluserasnglyglnprogluasnasntyr165170175lysthrthrproprovalleuaspseraspglyserphepheleutyr180185190serlysleuthrvalasplysserargtrpglnglnglyasnvalphe195200205sercysservalmethisglualaleuhisasnhistyrthrglnlys210215220serleuserleuserproglylys225230<210>3<211>15<212>prt<213>人工序列<220><223>avi标签<400>3glyleuasnaspilepheglualaglnlysileglutrphisglu151015<210>4<211>26<212>prt<213>人工序列<220><223>钙调蛋白标签<400>4lysargargtrplyslysasnpheilealavalseralaalaasnarg151015phelyslysileserserserglyalaleu2025<210>5<211>6<212>prt<213>人工序列<220><223>聚谷氨酰胺标签<400>5gluglugluglugluglu15<210>6<211>8<212>prt<213>人工序列<220><223>flag-标签<400>6asptyrlysaspaspaspasplys15<210>7<211>9<212>prt<213>人工序列<220><223>ha-标签<400>7tyrprotyraspvalproasptyrala15<210>8<211>10<212>prt<213>人工序列<220><223>myc-标签<400>8gluglnlysleuileserglugluaspleu1510<210>9<211>8<212>prt<213>人工序列<220><223>strep标签(r)i链霉亲和素结合肽序列<400>9trparghisproglnpheglygly15<210>10<211>8<212>prt<213>人工序列<220><223>strep-tag(r)ii链霉亲和素结合肽序列<400>10trpserhisproglnpheglulys15<210>11<211>4<212>prt<213>人工序列<220><223>链霉亲和素结合肽<220><221>尚未归类的特征<222>(3)..(3)<223>x选自谷氨酰胺、天冬酰胺和甲硫氨酸<220><221>尚未归类的特征<222>(4)..(4)<223>x不是氨基酸<400>11hisproxaaxaa1<210>12<211>4<212>prt<213>人工序列<220><223>链霉亲和素结合肽<400>12hisproglnphe1<210>13<211>8<212>prt<213>人工序列<220><223>链霉亲和素结合肽<220><221>尚未归类的特征<222>(1)..(1)<223>xaa=是trp、lys或arg<220><221>尚未归类的特征<222>(2)..(2)<223>xaa=任何氨基酸<220><221>尚未归类的特征<222>(7)..(7)<223>xaa=gly或glu<220><221>尚未归类的特征<222>(8)..(8)<223>xaa=gly、lys或arg<400>13xaaxaahisproglnphexaaxaa15<210>14<211>8<212>prt<213>人工序列<220><223>链霉亲和素结合肽<220><221>尚未归类的特征<222>(2)..(2)<223>xaa是任何氨基酸<220><221>尚未归类的特征<222>(7)..(7)<223>xaa是gly或glu<220><221>尚未归类的特征<222>(8)..(8)<223>xaa是gly、lys或arg<400>14trpxaahisproglnphexaaxaa15<210>15<211>17<212>prt<213>人工序列<220><223>链霉亲和素结合肽<220><221>尚未归类的特征<222>(9)..(9)<223>xaa是任何氨基酸<220><221>重复序列<222>(9)..(9)<223>n=8或12<400>15trpserhisproglnpheglulysxaatrpserhisproglnpheglu151015lys<210>16<211>21<212>prt<213>人工序列<220><223>链霉亲和素结合肽<220><221>尚未归类的特征<223>链霉亲和素结合肽<220><221>重复序列<222>(9)..(12)<223>n=2或3<400>16trpserhisproglnpheglulysglyglyglyserasntrpserhis151015proglnpheglulys20<210>17<211>30<212>prt<213>人工序列<220><223>链霉亲和素结合肽<400>17seralatrpserhisproglnpheglulysglyglyglyserglygly151015glyserglyglyglysertrpserhisproglnpheglulys202530<210>18<211>30<212>prt<213>人工序列<220><223>链霉亲和素结合肽<400>18seralatrpserhisproglnpheglulysglyglyglyserglygly151015glyserglyglyseralatrpserhisproglnpheglulys202530<210>19<211>28<212>prt<213>人工序列<220><223>链霉亲和素结合肽<400>19trpserhisproglnpheglulysglyglyglyserglyglyglyser151015glyglyglysertrpserhisproglnpheglulys2025<210>20<211>24<212>prt<213>人工序列<220><223>链霉亲和素结合肽<400>20trpserhisproglnpheglulysglyglyglyserglyglyglyser151015trpserhisproglnpheglulys20<210>21<211>28<212>prt<213>人工序列<220><223>链霉亲和素结合肽<400>21trpserhisproglnpheglulysglyglyglyserglyglyglyser151015glyglyseralatrpserhisproglnpheglulys2025<210>22<211>159<212>prt<213>亲和素链霉菌（streptomycesavidinii）<220><221>尚未归类的特征<223>野生型链霉亲和素序列(链霉亲和素-物种：亲和素链霉菌（streptomycesavidinii）–uniprot号p22629<400>22aspproserlysaspserlysalaglnvalseralaalaglualagly151015ilethrglythrtrptyrasnglnleuglyserthrpheilevalthr202530alaglyalaaspglyalaleuthrglythrtyrgluseralavalgly354045asnalagluserargtyrvalleuthrglyargtyraspseralapro505560alathraspglyserglythralaleuglytrpthrvalalatrplys65707580asnasntyrargasnalahisseralathrthrtrpserglyglntyr859095valglyglyalaglualaargileasnthrglntrpleuleuthrser100105110glythrthrglualaasnalatrplysserthrleuvalglyhisasp115120125thrphethrlysvallysproseralaalaserileaspalaalalys130135140lysalaglyvalasnasnglyasnproleuaspalavalglngln145150155<210>23<211>126<212>prt<213>人工序列<220><223>命名为strep-tactin(r)的突变蛋白链霉亲和素<400>23glualaglyilethrglythr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技术特征：1.一种扩增细胞的方法，所述方法包括将输入组合物与多个颗粒一起孵育，所述输入组合物包含表达嵌合抗原受体的细胞，所述嵌合抗原受体包含特异性地结合或识别抗原的细胞外抗原结合结构域，所述多个颗粒是或包含珠，其中所述多个颗粒包含在或在约2μm与5μm之间的平均直径并且已经附接有特异性地结合或识别所述抗原结合结构域的结合分子，其中所述结合分子与所述抗原结合结构域的结合诱导包含所述嵌合抗原受体的所述细胞的扩增，从而产生包含扩增的细胞的输出组合物。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述结合分子不结合或识别所述嵌合抗原受体的接头或间隔区，所述接头或间隔区将所述抗原受体的抗原结合结构域与跨膜结构域连接。
3.根据权利要求1或权利要求2所述的方法，其中所述结合分子是与所述抗原结合结构域特异性地结合的抗独特型抗体或其抗原结合片段。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其中所述抗原是cd19。
5.根据权利要求1或权利要求2所述的方法，其中所述结合分子包含由所述抗原结合结构域识别的重组抗原或其部分。
6.根据权利要求5所述的方法，其中所述重组抗原是bcma，或者是其由所述抗原结合结构域识别的部分。
7.一种扩增细胞的方法，所述方法包括将输入组合物与多个颗粒一起孵育，所述输入组合物包含表达嵌合抗原受体(car)的细胞，所述嵌合抗原受体包含特异性地结合或识别b细胞成熟抗原(bcma)的抗原结合结构域，所述多个颗粒已经附接有结合分子，所述结合分子包含bcma的由所述抗原结合结构域识别的细胞外结构域或所述细胞外结构域的部分，其中bcma的所述细胞外结构域或其部分与所述抗原结合结构域的结合诱导包含所述嵌合抗原受体的所述细胞的扩增，从而产生包含扩增的细胞的输出组合物。
8.根据权利要求5-7中任一项所述的方法，其中所述结合分子是融合多肽，所述融合多肽包含与一种部份连接的所述重组抗原或其部分，任选地其中所述部份促进与所述颗粒的附接。
9.根据权利要求8所述的方法，其中所述部份与所述重组抗原的c末端连接。
10.根据权利要求8或权利要求9所述的方法，其中所述部份是或包含fc结构域。
11.一种扩增细胞的方法，所述方法包括将输入组合物与多个颗粒一起孵育，所述输入组合物包含表达嵌合抗原受体(car)的细胞，所述嵌合抗原受体包含特异性地结合或识别cd19的抗原结合结构域，所述多个颗粒已经附接有结合分子，所述结合分子是与所述抗原结合结构域特异性地结合的抗独特型抗体或其抗原结合片段，其中所述抗独特型抗体或其抗原结合片段与所述抗原结合结构域的结合诱导包含所述嵌合抗原受体的所述细胞的扩增，从而产生包含扩增的细胞的输出组合物。
12.根据权利要求3、4或权利要求11所述的方法，其中所述抗原受体的抗原结合结构域是或包含抗体sj25c1或其抗原结合片段。
13.根据权利要求3、4或权利要求11所述的方法，其中所述抗原受体的抗原结合结构域是或包含抗体fmc63或其抗原结合片段。
14.根据权利要求7-13中任一项所述的方法，其中所述颗粒是合成颗粒、不溶性颗粒、固体颗粒，或者是非细胞颗粒。
15.根据权利要求7-14中任一项所述的方法，其中所述多个颗粒包含珠。
16.根据权利要求1-15中任一项所述的方法，其中所述多个颗粒来自组合物，所述组合物具有如下浓度的所述结合分子：在或在约0.5μg/ml与500μg/ml之间，包含端值。
17.根据权利要求1-16中任一项所述的方法，其中，在所述孵育期间，存在于所述输入组合物中的总细胞与所述多个颗粒的比率为从或从约5:1至1:5，包含端值。
18.一种扩增细胞的方法，所述方法包括将输入组合物与多个颗粒一起孵育，所述输入组合物包含表达嵌合抗原受体的细胞，所述嵌合抗原受体包含特异性地结合或识别抗原的细胞外抗原结合结构域，所述多个颗粒是或包含珠，所述珠已经附接有特异性地结合或识别所述抗原结合结构域的结合分子，其中：
所述多个颗粒来自组合物，所述组合物具有如下浓度的所述结合分子：在或在约0.5μg/ml与500μg/ml之间，包含端值，并且在所述孵育期间，存在于所述输入组合物中的总细胞与所述多个颗粒的比率为从或从约5:1至1:5，包含端值；并且
所述结合分子与所述抗原结合结构域的结合诱导包含所述嵌合抗原受体的所述细胞的扩增，从而产生包含扩增的细胞的输出组合物。
19.根据权利要求18所述的方法，其中所述结合分子不结合或识别所述嵌合抗原受体的接头或间隔区，所述接头或间隔区将所述抗原受体的抗原结合结构域与跨膜结构域连接。
20.根据权利要求18或19所述的方法，其中所述结合分子是与所述抗原结合结构域特异性地结合的抗独特型抗体或其抗原结合片段。
21.根据权利要求20所述的方法，其中所述抗原是cd19。
22.根据权利要求18或权利要求19所述的方法，其中所述结合分子包含由所述抗原结合结构域识别的重组抗原或其部分。
23.根据权利要求22所述的方法，其中所述重组抗原是bcma，或者是其由所述抗原结合结构域识别的部分。
24.根据权利要求1-23中任一项所述的方法，其中：
所述多个颗粒来自组合物，所述组合物具有如下浓度的所述结合分子：在或在约1μg/ml与200μg/ml之间、或5μg/ml与100μg/ml之间，每个都包含端值；或
所述多个颗粒来自组合物，所述组合物包含如下浓度的所述结合分子：至少或至少约1μg/ml、5μg/ml、10μg/ml、25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml或200μg/ml。
25.根据权利要求1-24中任一项所述的方法，其中所述多个颗粒来自组合物，所述组合物具有如下浓度或约如下浓度的所述结合分子：5μg/ml、10μg/ml、25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml或200μg/ml。
26.根据权利要求1-25中任一项所述的方法，其中，在所述孵育期间，存在于所述输入组合物中的总细胞与所述多个颗粒的比率为从或从约3:1至1:3、或2:1至1:2，每个都包含端值。
27.根据权利要求1-26中任一项所述的方法，其中，在所述孵育期间，存在于所述输入组合物中的总细胞与所述多个颗粒的比率为或为约1:1。
28.根据权利要求15-27中任一项所述的方法，其中所述多个珠包含在或在约2μm与5μm之间的平均直径，或在或在约1g/cm3与约2g/cm3之间的平均密度。
29.根据权利要求1-6和28中任一项所述的方法，其中所述平均直径为或为约2.8μm或4.5μm。
30.根据权利要求3、4、11-17、20、21和24-29中任一项所述的方法，其中所述抗原结合片段是或包含scfv。
31.根据权利要求3、4和11-30中任一项所述的方法，其中所述抗独特型抗体或其抗原结合片段包含免疫球蛋白恒定区的至少一部分，任选地fc区或所述fc的包含ch2和ch3结构域的一部分。
32.根据权利要求3、4、11-17、20、21和24-31中任一项所述的方法，其中所述抗独特型抗体或其抗原结合片段是完整抗体或全长抗体。
33.根据权利要求1-32中任一项所述的方法，其中所述结合分子在所述结合分子的c末端氨基酸残基处或附近与所述多个颗粒中的每一个附接。
34.根据权利要求1-33中任一项所述的方法，其中所述多个颗粒是单分散的。
35.根据权利要求1-34中任一项所述的方法，其中将所述结合分子经由表面暴露的官能团共价地附接至所述颗粒。
36.根据权利要求35所述的方法，其中所述表面暴露的官能团是氨基基团、羧基基团、硫醇基团、醛基团、氯甲基基团、环氧基基团、羟基基团、甲苯磺酰基基团或肼基团。
37.根据权利要求35或权利要求36所述的方法，其中所述表面暴露的官能团是甲苯磺酰基基团。
38.根据权利要求1-37中任一项所述的方法，其中所述多个颗粒包含含有如下的颗粒：玻璃、二氧化硅、羟基羧酸的聚酯、二羧酸的聚酸酐、羟基羧酸的共聚物、二羧酸的共聚物、或金属。
39.根据权利要求1-38中任一项所述的方法，其中所述颗粒包含含有如下的表面：聚合物、多糖、二氧化硅、脂肪酸、碳、或其组合。
40.根据权利要求39所述的方法，其中所述聚合物是聚乙二醇、聚(乳酸-共-乙醇酸)、聚戊二醛、聚氨酯、聚苯乙烯、和聚乙烯醇、或其组合。
41.根据权利要求1-40中任一项所述的方法，其中所述多个颗粒包含含有疏水性表面的颗粒。
42.根据权利要求1-41中任一项所述的方法，其中所述多个颗粒包含含有聚苯乙烯表面的颗粒。
43.根据权利要求1-42中任一项所述的方法，所述多个颗粒包含是磁的和/或包括磁芯、顺磁芯或超顺磁芯的颗粒。
44.根据权利要求1-43中任一项所述的方法，其中所述孵育的至少一部分在药剂的存在下进行，所述药剂与所述细胞上另外的分子特异性地结合以提供辅助信号和/或阻断抑制信号。
45.根据权利要求44所述的方法，其中所述药剂与所述颗粒一起被提供，任选地所述药剂与所述多个颗粒的每一个或所述多个颗粒的亚组附接。
46.根据权利要求44或权利要求45所述的方法，其中将所述药剂附接至所述颗粒，并且所述药剂与所述细胞上另外的分子特异性地结合以提供辅助信号和/或阻断抑制信号。
47.根据权利要求44-46中任一项所述的方法，其中所述药剂是配体或者是抗体或其抗原结合片段。
48.根据权利要求44-47中任一项所述的方法，其中所述另外的分子：
是共刺激分子或是激活性共受体，任选地ox-40、icos、dap10、b7-1、b7-2、cd28或4-1bb；或
是抑制性受体，任选地ctla-4、pd-1、lag-3、tim-3、btla或tigit；
或是t细胞表面蛋白，任选地cd2或cd3。
49.根据权利要求44-48中任一项所述的方法，其中所述另外的分子是cd2或cd28。
50.根据权利要求44-49中任一项所述的方法，其中所述颗粒包含抗cd2抗体和抗cd28抗体之一或两者。
51.根据权利要求50所述的方法，其中所述结合分子是抗cd19抗独特型抗体。
52.根据权利要求50所述的方法，其中所述结合分子是由所述嵌合抗原受体识别的重组抗原，任选地其中所述重组抗原是bcma或其由所述抗原结合结构域识别的部分。
53.根据权利要求45-52中任一项所述的方法，其中将所述药剂共价地附接至所述颗粒。
54.根据权利要求45-53中任一项所述的方法，其中与所述颗粒所附接的所述结合分子与所述药剂的比率、任选地摩尔比或重量比为或为约1:1。
55.根据权利要求1-54中任一项所述的方法，其中将所述孵育进行大于或大于约2小时、4小时、8小时、12小时、24小时、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天或12天。
56.根据权利要求1-55中任一项所述的方法，其中将所述孵育进行大于或大于约24小时、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天或12天。
57.根据权利要求1-56中任一项所述的方法，其中将所述孵育进行大于或大于10天、11天、12天、13天、14天、15天或16天。
58.根据权利要求1-57中任一项所述的方法，其中所述细胞包含免疫细胞或诱导多能干细胞(ipsc)。
59.根据权利要求1-58中任一项所述的方法，其中所述免疫细胞是t细胞或nk细胞。
60.根据权利要求1-59中任一项所述的方法，其中所述细胞包含cd4 t细胞和cd8 t细胞之一或两者。
61.根据权利要求1-60中任一项所述的方法，其中所述cd4 细胞与所述cd8 细胞的比率在或在约1:2与2:1之间、或1:3与3:1之间，或者为或为约1:1。
62.根据权利要求1-61中任一项所述的方法，其中所述细胞是从受试者、任选地人受试者获得的原代细胞。
63.根据权利要求1-62中任一项所述的方法，其中通过以下方法产生所述输入组合物，所述方法包括使细胞组合物与编码所述嵌合抗原受体的核酸分子在将所述核酸分子引入所述组合物中的一种或多种细胞中的条件下接触。
64.一种将细胞基因工程化的方法，所述方法包括：
(a)使细胞组合物与编码嵌合抗原受体的核酸分子在将所述核酸分子引入所述组合物中的一种或多种细胞中的条件下接触，从而产生输入组合物；并且
(b)根据权利要求1-63中任一项所述的方法孵育所述输入组合物的细胞。
65.根据权利要求63或权利要求64所述的方法，其中所述接触和所述孵育的至少一部分是同时进行。
66.根据权利要求63-65中任一项所述的方法，其中通过用病毒载体转导进行所述接触，任选地其中所述病毒载体是逆转录病毒载体、γ-逆转录病毒载体、或慢病毒载体。
67.根据权利要求62-66中任一项所述的方法，其中所述细胞组合物包含多个t细胞，并且在所述接触之前，所述方法不包括刺激或激活所述t细胞。
68.根据权利要求63-67中任一项所述的方法，其中所述细胞组合物包含多个t细胞，并且在所述接触之前，所述方法不包括在能够通过tcr复合物诱导信号的一种或多种药剂的存在下孵育所述组合物，和/或在能够诱导t细胞、cd4 t细胞和/或cd8 t细胞增殖的一种或多种药剂；和/或cd3结合分子、cd28结合分子、重组il-2、重组il-15和重组il-7、或其组合的存在下孵育，任选地其中所述方法不包括在抗cd3抗体和/或抗cd28抗体的存在下刺激所述t细胞。
69.根据权利要求1-68中任一项所述的方法，其中所述输出组合物中存在的细胞的激活标记或耗竭标记的表面表达小于在类似孵育之后但在多克隆刺激分子的存在下产生的细胞组合物中所述标记的表面表达，所述多克隆刺激分子能够激活tcr复合物的一种或多种组分的一种或多种细胞内信号传导结构域，任选地其中所述多克隆刺激分子包含抗cd3抗体或片段和/或抗cd28抗体或片段。
70.根据权利要求69所述的方法，其中所述耗竭标记是抑制性受体，任选地pd-1、ctla-4、tim-3、lag-3、btla或tigit。
71.根据权利要求69所述的方法，其中所述激活标记是hla-dr、cd25、cd69、cd71、cd40l或4-1bb。
72.根据权利要求1-71中任一项所述的方法，其中与所述输入组合物中包含所述抗原受体的细胞的数量相比，所述输出组合物中包含所述嵌合抗原受体的细胞的数量增加或富集了1.2倍、2.0倍、3.0倍、4.0倍、5.0倍、6.0倍、7.0倍、8.0倍、9.0倍、10倍或更多。
73.根据权利要求1-72中任一项所述的方法，其在体外或离体进行。
74.根据权利要求1-73中任一项所述的方法，其中所述car包含特异性地结合所述抗原的细胞外抗原结合结构域、跨膜区域和包含itam的细胞内信号传导区域。
75.根据权利要求74所述的方法，其中所述细胞内信号传导结构域包含cd3-zeta(cd3ζ)链的细胞内结构域。
76.根据权利要求74或权利要求75所述的方法，其中所述car还包含共刺激信号传导区域，所述共刺激信号传导区域包含cd28或4-1bb的信号传导结构域。
77.根据权利要求1-76中任一项所述的方法，其还包括从所述输出组合物中除去所述多个珠。
78.一种细胞组合物，其通过权利要求1-77中任一项所述的方法产生。
79.一种表面修饰的颗粒，其包含(i)为直径在或在约2μm与5μm之间的珠的颗粒，和(ii)与所述珠的表面附接的结合分子，其中所述结合分子特异性地结合嵌合抗原受体的细胞外抗原结合结构域。
80.根据权利要求79所述的表面修饰的颗粒，其中所述结合分子不结合或识别所述重组抗原受体的接头或间隔区，所述接头或间隔区将所述抗原受体的抗原结合结构域与跨膜结构域连接。
81.根据权利要求79或权利要求80所述的表面修饰的颗粒，其中所述结合分子包含由所述抗原结合结构域识别的重组抗原或其部分。
82.根据权利要求81所述的表面修饰的颗粒，其中所述重组抗原是bcma，或者是其由所述抗原结合结构域识别的部分。
83.一种表面修饰的颗粒，其包含颗粒和与所述颗粒的表面附接的结合分子，其中所述结合分子包含为b细胞成熟抗原(bcma)的重组抗原的细胞外结构域或其部分。
84.根据权利要求81-83中任一项所述的表面修饰的颗粒，其中所述结合分子是融合多肽，所述融合多肽包含与一种部份连接的所述重组抗原或其部分，任选地其中所述部份促进与所述颗粒的附接。
85.根据权利要求84所述的表面修饰的颗粒，其中所述部份与所述重组抗原的c末端连接。
86.根据权利要求84或权利要求85所述的表面修饰的颗粒，其中所述部份是或包含fc结构域。
87.根据权利要求79或权利要求80所述的表面修饰的颗粒，其中所述结合分子包含抗独特型抗体或其抗原结合片段。
88.根据权利要求79、80和87中任一项所述的表面修饰的颗粒，其中由所述抗原结合结构域识别的所述抗原是cd19。
89.根据权利要求87或权利要求88所述的表面修饰的颗粒，其中所述嵌合抗原受体的所述抗原结合结构域是或包含抗体sj25c1或其抗原结合片段。
90.根据权利要求87或权利要求88所述的表面修饰的颗粒，其中所述嵌合抗原受体的所述抗原结合结构域是或包含抗体fmc63或其抗原结合片段。
91.根据权利要求89或权利要求90所述的表面修饰的颗粒，其中所述抗原结合片段是或包含scfv。
92.根据权利要求87-91中任一项所述的表面修饰的颗粒，其中所述抗独特型抗体或其抗原结合片段包含免疫球蛋白恒定区的至少一部分，任选地fc区或所述fc的包含ch2和ch3结构域的一部分。
93.根据权利要求87-92中任一项所述的表面修饰的颗粒，其中所述抗独特型抗体或其抗原结合片段是完整抗体或全长抗体。
94.根据权利要求79-93中任一项所述的表面修饰的颗粒，其中所述结合分子在所述结合分子的c末端氨基酸残基处或附近附接至所述颗粒。
95.根据权利要求83-94中任一项所述的表面修饰的颗粒，其中所述颗粒是合成颗粒、不溶性颗粒、固体颗粒、或非细胞颗粒。
96.根据权利要求83-95中任一项所述的表面修饰的颗粒，其中所述颗粒是珠。
97.根据权利要求79-96中任一项所述的表面修饰的颗粒，其中所述颗粒具有在或在约2μm与5μm之间的直径。
98.根据权利要求79-97中任一项所述的表面修饰的颗粒，其中所述颗粒具有约2.8μm或4.5μm的直径。
99.根据权利要求79-98中任一项所述的表面修饰的颗粒，其中所述结合分子共价地附接至所述颗粒。
100.根据权利要求79-99中任一项所述的表面修饰的颗粒，其中将所述结合分子经由表面暴露的官能团共价地附接至所述颗粒。
101.根据权利要求100所述的表面修饰的颗粒，其中所述表面暴露的官能团是氨基基团、羧基基团、硫醇基团、醛基团、氯甲基基团、环氧基基团、羟基基团、甲苯磺酰基基团或肼基团。
102.根据权利要求101所述的表面修饰的颗粒，其中所述表面暴露的官能团是甲苯磺酰基基团。
103.根据权利要求79-102中任一项所述的表面修饰的颗粒，其中所述颗粒是或包含玻璃、二氧化硅、羟基羧酸的聚酯、二羧酸的聚酸酐、羟基羧酸的共聚物、二羧酸的共聚物、或金属。
104.根据权利要求79-103中任一项所述的表面修饰的颗粒，其中所述颗粒包含含有如下的表面：聚合物、多糖、二氧化硅、脂肪酸、碳或其组合。
105.根据权利要求104所述的表面修饰的颗粒，其中所述聚合物是聚乙二醇、聚(乳酸-共-乙醇酸)、聚戊二醛、聚氨酯、聚苯乙烯、和聚乙烯醇、或其组合。
106.根据权利要求79-105中任一项所述的表面修饰的颗粒，其中所述颗粒包含疏水性表面。
107.根据权利要求79-106中任一项所述的表面修饰的颗粒，其中所述颗粒包含聚苯乙烯表面。
108.根据权利要求79-107中任一项所述的表面修饰的颗粒，所述颗粒是磁的和/或包含磁芯、顺磁芯或超顺磁芯。
109.根据权利要求79-108中任一项所述的表面修饰的颗粒，其中所述颗粒包含至少或约至少10个拷贝、102个拷贝、103个拷贝、104个拷贝、105个拷贝或106个拷贝的所述结合分子。
110.根据权利要求79-109中任一项所述的表面修饰的颗粒，其中所述颗粒还包含与所述颗粒的表面附接的至少一种药剂，其中所述至少一种药剂与细胞上另外的分子特异性地结合以提供辅助信号和/或阻断抑制信号。
111.根据权利要求110所述的表面修饰的颗粒，其中所述至少一种药剂是配体或者是抗体或其抗原结合片段。
112.根据权利要求110或权利要求111所述的表面修饰的颗粒，其中所述另外的分子是共刺激分子或激活性共受体，任选地ox-40、icos、dap10、b7-1、b7-2、cd28或4-1bb。
113.根据权利要求110或权利要求111所述的表面修饰的颗粒，其中所述另外的分子是抑制性受体，任选地ctla-4、pd-1、lag-3、tim-3、btla或tigit。
114.根据权利要求110或权利要求111所述的表面修饰的颗粒，其中所述另外的分子是t细胞表面蛋白，任选地cd2或cd3。
115.根据权利要求110或权利要求111所述的表面修饰的颗粒，其中所述另外的分子是cd2或cd28。
116.根据权利要求115所述的表面修饰的颗粒，其中所述颗粒包含抗cd2抗体和抗cd28抗体之一或两者。
117.根据权利要求110-116中任一项所述的表面修饰的颗粒，其中所述至少一种药剂共价地附接至所述颗粒。
118.根据权利要求110-117中任一项所述的表面修饰的颗粒，其中所述颗粒所包含的所述结合分子与所述至少一种药剂的比率、任选地摩尔比或重量比为或为约1:1。
119.一种组合物，其包含多个根据权利要求79-118中任一项所述的表面修饰的颗粒。
120.根据权利要求119所述的组合物，其中：
所述组合物中所述结合分子的浓度在或在约0.5μg/ml与500μg/ml之间、1μg/ml与200μg/ml之间或5μg/ml与100μg/ml之间；或
所述组合物中所述结合分子的浓度为至少或至少约1μg/ml、5μg/ml、10μg/ml、25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml或200μg/ml。
121.根据权利要求119或权利要求120所述的组合物，其中所述多个表面修饰的颗粒是单分散的。
122.一种试剂盒，其包含根据权利要求79-118中任一项所述的表面修饰的颗粒或根据权利要求119-121中任一项所述的组合物、和使用说明书。
123.根据权利要求122所述的试剂盒，其中说明书是针对从细胞群中选择或富集表达嵌合抗原受体的细胞，所述嵌合抗原受体包含由所述结合分子特异性地识别的抗原结合结构域。
124.根据权利要求122所述的试剂盒，其中说明书是针对从细胞群中刺激或扩增表达嵌合抗原受体的细胞，所述嵌合抗原受体包含由所述结合分子特异性地识别的抗原结合结构域。
125.一种用于扩增细胞的方法，所述方法包括将细胞群与根据权利要求79-118中任一项所述的表面修饰的颗粒或根据权利要求119-121中任一项所述的组合物一起孵育。
126.一种用于选择或富集细胞的方法，所述方法包括使细胞群与根据权利要求79-118中任一项所述的表面修饰的颗粒或根据权利要求119-121中任一项所述的组合物接触。
127.一种用于评估细胞组合物的长期刺激方法，所述方法包括：
将输入组合物在刺激所述输入组合物中的细胞的car依赖性活性的条件下孵育持续至少10天的时间段从而产生输出组合物，所述输入组合物包含表达嵌合抗原受体(car)的t细胞，所述嵌合抗原受体包含特异性地结合或识别抗原的细胞外抗原结合结构域；并且
评估所述输出组合物的一种或多种细胞的一种或多种表型或活性。
128.根据权利要求127所述的方法，其中所述刺激car依赖性活性的条件包括与所述car的所述抗原结合结构域特异性地结合的结合分子的存在。
129.根据权利要求128所述的方法，其中将所述结合分子附接至支持物。
130.根据权利要求129所述的方法，其中所述支持物是固体支持物。
131.根据权利要求130所述的方法，其中所述固体支持物是微板的孔的表面或珠的表面。
132.根据权利要求130或权利要求131所述的方法，其中所述固体支持物是微板，所述微板具有与所述微板附接的结合分子，并且在所述微板中进行所述孵育。
133.根据权利要求130或权利要求131所述的方法，其中所述固体支持物是已经附接有所述结合分子的珠，并且在多个所述珠的存在下进行所述孵育。
134.根据权利要求128-133中任一项所述的方法，其中所述结合分子是或包含由所述抗原结合结构域识别的重组抗原或其部分。
135.根据权利要求134所述的方法，其中所述重组抗原或其部分是bcma，或者是其由所述抗原结合结构域识别的部分。
136.根据权利要求128-133中任一项所述的方法，其中所述结合分子是或包含与所述抗原结合结构域特异性地结合的抗独特型抗体或其抗原结合片段。
137.根据权利要求136所述的方法，其中所述抗原受体的抗原结合结构域是或包含抗体sj25c1或其抗原结合片段。
138.根据权利要求136所述的方法，其中所述抗原受体的抗原结合结构域是或包含抗体fmc63或其抗原结合片段。
139.根据权利要求127-138中任一项所述的方法，其中所述方法是在体外或离体进行的。
140.根据权利要求127-139中任一项所述的方法，其中将所述输入组合物在不包含重组细胞因子的培养基的存在下孵育。
141.根据权利要求127-140中任一项所述的方法，其中将所述孵育连续地进行或不中断持续一段时间。
142.根据权利要求127-140中任一项所述的方法，其中在所述孵育期间，不再铺板细胞、不更换培养基并且不添加结合分子。
143.根据权利要求127-142中任一项所述的方法，其包括评估所述输出组合物的所述一种或多种细胞的激活、耗竭或分化状态中的一种或多种表型。
144.根据权利要求143所述的方法，其中所述表型是耗竭，并且所述评估包括测量选自以下的一种或多种标记的表达、任选地表面表达：ctla-4、foxp3、pd-1、tigit、lab-3、2b4、btla、tim3、vista或cd96。
145.根据权利要求143所述的方法，其中所述表型是激活，并且所述评估包括测量选自以下的一种或多种标记的表达、任选地表面表达：cd25、cd26、cd27、cd28、cd30、cd71、cd154、cd40l、cd127、lag3或ki67。
146.根据权利要求143所述的方法，其中所述表型是分化状态，并且所述评估包括测量选自以下的一种或多种标记：(i)cd25、cd45ro、cd56、klrg1、cd95中的一种或多种和/或(ii)cd45ra、cd27、cd28、cd62l和ccr7中的一种或多种，任选地其中所述一种或多种标记是与幼稚样t细胞正相关或反相关的标记。
147.根据权利要求127-146中任一项所述的方法，其包括评估所述输出组合物的所述一种或多种细胞的一种或多种活性。
148.根据权利要求127-147中任一项所述的方法，其中所述一种或多种活性包括car依赖性活性、任选地抗原刺激活性。
149.根据权利要求147或148所述的方法，其中所述一种或多种活性包括细胞裂解活性或细胞因子产生。
150.根据权利要求127-149中任一项所述的方法，其中所述时间段为至少或至少约11天、12天、13天、14天或15天。
151.根据权利要求127-149中任一项所述的方法，其中所述时间段为或为约11天、12天、13天、14天或15天。
152.根据权利要求127-151中任一项所述的方法，其中所述输入组合物包含在所述孵育之前已经暴露于或接触测试药剂或化合物的细胞，任选地其中所述暴露或所述接触是在如下过程的一个或多个步骤期间进行，所述过程用于产生包含表达所述car的所述t细胞的所述输入组合物。
153.根据权利要求127-152中任一项所述的方法，其中所述方法是对多种输入组合物进行，多种所述输入组合物中的每一种是通过不同的过程产生的。
154.根据权利要求127-153中任一项所述的方法，其还包括将所述输出组合物的表型或活性与对照组合物的表型或活性进行比较，任选地其中所述对照组合物是如下的t细胞组合物，所述t细胞已在刺激所述car依赖性活性的相同条件下被孵育持续至少10天，所述t细胞组合物尚未在所述测试药剂或化合物的存在下产生，或者已经通过与所述输入组合物相比替代性的过程产生。
155.根据权利要求127-154中任一项所述的方法，其还包括鉴定展现出降低的耗竭、降低的激活或减少的分化的输出组合物，任选地其中所述减少的分化包括一种或多种幼稚样t细胞标记的表达增加。
技术总结本公开文本提供了用于刺激、富集、扩增和/或激活表达重组受体例如嵌合抗原受体的工程化细胞的组合物和方法。在一些实施方案中，所提供的方法包括通过与颗粒例如珠颗粒一起孵育来离体或在体外刺激、富集、扩增和/或激活细胞，所述颗粒例如珠颗粒附接至识别或结合所述重组受体的结合分子，所述结合分子例如多肽抗原或抗独特型抗体。本文还提供了通过在具有附接的结合分子的颗粒的存在下转导或转染细胞来转染或转导先前尚未与激活剂或刺激剂一起孵育例如尚未与抗CD3/抗CD28抗体和/或一种或多种重组细胞因子一起孵育的细胞的方法。在一些实施方案中，可以将所提供的组合物用于制备用于过继免疫疗法的细胞例如基因工程化T细胞的方法中。
技术研发人员：C·霍斯金;S·胡塞尔;C·谢拉;M·沃克斯
受保护的技术使用者：朱诺治疗学股份有限公司
技术研发日：2018.07.28
技术公布日：2020.06.05
