本发明提供了一种含有葡萄提取物、柠檬提取物和薰衣草提取物的抗微生物组合物。
背景技术：
：病毒是引起多种传染病(例如天花、流行性感冒、艾滋病等)的代表性病原体。由于其体积很小，直到20世纪才清楚地知道病毒的存在。现在，病毒的结构、功能和机制是众所周知的，并且正在开发各种疫苗和治疗剂。然而，由于不同的复制途径和基因突变等原因，很难开发出有效的治疗药物。例如，由微小核糖核酸病毒科中的病毒(例如肠道病毒71)感染引起的手足口病具有高度传染性，并且可能伴有发烧、呕吐、腹泻、头痛和脑膜炎，主要见于婴儿中。尽管手足口病已经成为一个重大的社会问题，但尚未开发出有效的疫苗和治疗剂。同时，细菌、真菌、酵母菌等多种微生物以及病毒的感染是包括人类在内的哺乳动物疾病的主要原因。已经开发并正在使用众多抗病毒药物和抗菌药物，但据报道有些合成药物有副作用。此外，微生物的持续进化有助于提高药物耐受性，从而降低药物的作用。因此，需要开发衍生自天然来源的安全且无副作用，同时具有优异的抗微生物活性的抗微生物剂。技术实现要素：因此，本发明的发明人发现，从葡萄、柠檬和熏衣草获得的天然提取物的混合物组合物具有优异的抑制多种微生物的活性，达到出乎意料的效果，从而完成了本发明。发明详述技术问题本发明的一个目的是提供一种衍生自天然产物的抗微生物组合物，更具体地说是提供一种具有抗微生物活性的药物组合物、食品组合物、化妆品组合物和洗涤剂组合物。技术方案为了实现上述目的，本发明的一个方面是提供一种抗微生物组合物，含有作为活性成分的葡萄提取物、柠檬提取物和熏衣草提取物。如本文所使用的，术语“抗微生物”是指抵抗诸如病毒、细菌、真菌(例如酵母、霉菌、丝状真菌等)之类的微生物的特性，并且更具体地，是指抑制或阻止微生物的生长或增殖、或促进或诱导微生物死亡的特性。术语“抗微生物活性”可以被其替代。术语“提取物”是指使用适当的提取溶剂提取的所得产物。应当理解，所得产物包括萃取溶液、萃取溶液的稀释剂或浓缩物，通过干燥萃取溶液获得的干燥产物，或其粗制或纯化的产物等。术语“葡萄提取物”是指获自葡萄藤的提取物，例如葡萄藤的花、叶、果实、种子、根和/或茎。葡萄藤属于鼠李目双子叶植物科，其学名可以是葡萄(vitisvinifera)。所述葡萄提取物可以优选地是从葡萄藤果实中获得的提取物，更优选的是葡萄藤的果皮(下文称为“葡萄皮”)的提取物。术语“柠檬提取物”是指从柠檬树获得的提取物，例如柠檬树的花、叶、果实、种子、根和/或茎。柠檬树属于芸香科，天竺葵目，双子叶植物科，其学名可以为柠檬(citruslimon)。优选地，所述柠檬提取物可以是从柠檬树的果实获得的提取物。术语“薰衣草提取物”可以是从薰衣草的花、叶、果实、种子、根和/或茎中获得的提取物。薰衣草属于薰衣草属，属于唇形科，属于唇形目，双子叶植物。优选地，所述薰衣草提取物可以是花和/或叶的提取物。更优选地，所述薰衣草提取物可以是从花和/或叶获得的薰衣草油。所述提取物可以使用本领域已知的任何典型提取方法来制备，例如，沸腾提取、热水提取、冷提取、回流冷却提取、蒸汽蒸馏提取、热浸提取乙醇提取和/或超声提取等。优选地，可以使用选自热水提取、冷提取、蒸汽蒸馏提取和热浸提取中的至少一种提取方法来制备提取物。更优选地，所述葡萄提取物和所述柠檬提取物可以根据热水提取方法制备，而薰衣草提取物可以根据蒸汽蒸馏方法制备。提取溶剂可以选自水、具有1-4个碳原子的低级醇(例如甲醇、乙醇、丙醇、丁醇等)、有机溶剂(己烷、丙酮、氯仿、乙酸甲酯等)及其混合物所组成的组。优选地，所述提取溶剂可以是水。根据本发明的抗微生物组合物具有抗病毒、抗细菌和抗真菌活性。更具体地，根据本发明的组合物表现出抑制、阻止或延迟病毒、细菌和真菌的生长或增殖的活性、促进或诱导其死亡的活性、抑制其感染的活性等。如本文所使用的术语“病毒”具有本领域通常理解的含义。作为非限制性示例，其包括肠道病毒、流感病毒等。作为肠道病毒(enterovirus)，迄今为止已知约70种病毒，包括脊髓灰质炎病毒、柯萨奇a病毒、柯萨奇b病毒、埃可病毒、肠道病毒(ev)71等。在韩国疾病控制和预防中心于2005年发布的“传染病实验室诊断”中，报道了肠道病毒会引起多种症状，例如隐性感染、腹泻、感冒、手足口病、疱疹性咽峡炎、出血性(hemorrhagic)结膜炎、脊髓灰质炎、脑膜炎、脑炎、肺炎、支气管炎、急性弛缓性麻痹、心肌炎等。肠道病毒71会导致无菌性脑膜炎、手足口病、疱疹性咽峡炎、急性出血性结膜炎等，并可能在脑部或肺部引起严重并发症，甚至导致死亡。如本文所使用的术语“细菌”具有本领域通常理解的含义。作为一个非限制性示例，它包括革兰氏阳性菌，如葡萄球菌(staphylococcussp.)；革兰氏阴性菌，如大肠杆菌(e.coli)、假单胞菌(pseudomonassp.)等。据报道，葡萄球菌感染引起的疾病和症状的例子包括但不限于食物中毒、化脓性关节炎、化脓性骨髓炎、毛囊炎、中耳炎、结膜炎、肺炎、术后伤口感染、菌血症、败血症、心内膜炎、蜂窝织炎等。据报道，由大肠杆菌感染引起的疾病和症状的例子包括但不限于腹泻、呕吐、发烧、胃痛、头痛、出血性肠炎、脱水、溶血性尿毒症综合征(hus)等。据报道，由假单胞菌感染引起的疾病和症状的例子包括但不限于褥疮、肺炎、菌血症、败血症、脑膜炎、角膜炎、中耳炎、心内膜炎、脓肿等。如本文所使用的术语“真菌”具有本领域通常理解的含义。作为一个非限制性的示例，它包括酵母，例如念珠菌、丝状真菌(也称为霉菌)等。据报道，念珠菌感染引起的疾病和症状的例子包括但不限于口腔炎、阴道炎、外阴炎、食管炎、心包炎等。据报道，由曲霉(aspergillussp.)感染引起的疾病和症状的例子包括但不限于足癣、皮肤癣菌病，股癣、皮肤真菌病等。本发明的抗微生物组合物含有0.01-99.98重量％的葡萄提取物、0.01-99.98重量％的柠檬提取物和0.01-99.98重量％的薰衣草提取物。相对于1重量份的所述葡萄提取物，组合物优选含有0.5至2重量份的柠檬提取物和0.5至2重量份的薰衣草提取物。相对于1重量份的所述葡萄提取物，组合物更优选含有0.5至1重量份的柠檬提取物和0.5至1重量份的薰衣草提取物。最优选地，组合物中含有的活性成分的重量比可以是葡萄提取物：柠檬提取物：薰衣草提取物＝1：1：1。测量根据本发明的组合物的抗微生物活性的结果，以各种比例混合活性成分的所有组合物均表现出显着的抗微生物作用。特别地，确定了活性成分以相同重量比(1:1:1)混合的组合物具有最优异的抗微生物活性。本发明的另一方面是提供一种含有抗微生物组合物的药物组合物。除非另有说明，在根据本发明的药物组合物中，抗微生物组合物具有与上述相同的含义。所述药物组合物可用于治疗或预防微生物感染或由微生物感染引起的疾病。术语“治疗”是指通过施用根据本发明的组合物来改善或治疗微生物感染或微生物感染引起的症状或疾病的所有行为。术语“预防”是指通过施用根据本发明的组合物来抑制或延迟微生物感染或由微生物感染引起的症状或疾病的所有行为。所述药物组合物可用于治疗或预防感染，所述感染选自病毒、革兰氏阳性细菌、革兰氏阴性细菌、酵母和丝状真菌感染中的至少一种，或由这些感染引起的症状和疾病。根据疾病的症状、症状的进展、患者的状况等，可以适当地调节包含在根据本发明的药物组合物中的抗微生物组合物的含量。例如，相对于所述药物组合物的总重量，本发明的抗微生物组合物的含量可以为0.0001至99.9重量％、0.1至90重量％、1至80重量％、1至70重量％、1至60重量％或1至50重量％。本发明的药物组合物可以进一步含有合适的通常用于制备药物组合物的载体、赋形剂和/或稀释剂。组合物中可含有的载体、赋形剂和稀释剂的实例可包括但不限于乳糖、右旋糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露醇、木糖醇、赤藓糖醇、麦芽糖醇、淀粉、阿拉伯胶、藻酸盐、明胶、磷酸钙、硅酸钙、纤维素、甲基纤维素、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、水、羟基苯甲酸甲酯、羟基苯甲酸丙酯、滑石粉、硬脂酸镁和矿物油。本发明的药物组合物可以是用于口服给药的制剂，或者可以使用本领域普通技术人员众所周知的技术配制成适合于局部给药的制剂。用于局部给药的制剂可以包括外用制剂、泡腾片、栓剂等。在一个实施方案中，本发明的药物组合物可以通过将抗微生物组合物与本领域公知和常用的基质混合而配制成外用制剂。外用制剂可包括乳剂、凝胶、软膏、乳霜、贴片、擦剂、粉剂、气雾剂、喷雾剂、乳液精华液糊剂、泡沫、滴剂、悬浮液和酊剂。将本发明的药物组合物以药学有效量施用于个体。如本文所使用的，术语“药学有效量”是指足以以适用于药物治疗的合理的利益/风险比来治疗疾病的量。有效剂量水平可根据包括个体类型和严重程度、年龄、性别、药物活性、药物敏感性、给药时间、给药途径和释放率、治疗持续时间、联合用药和其他医学领域众所周知的因素来确定。本发明的组合物可以作为单独的治疗剂或与其他治疗剂组合施用，可以与常规治疗剂顺序或同时施用，并且可以单剂量或多剂量施用。考虑到所有上述因素，重要的是能够以实现最大效果且没有副作用的最小量施用药物组合物，并且可以由本领域普通技术人员容易地确定。本发明的另一方面是提供一种含有抗微生物组合物的化妆品组合物。除非另有说明，在根据本发明的化妆品组合物中，抗微生物组合物具有与上述相同的含义。相对于所述化妆品组合物的总重量，本发明的抗微生物组合物的含量可以为0.0001至99.9重量％、0.1至90重量％、1至80重量％、1至70重量％、1至60重量％或1至50重量％的量。通过含有本发明的抗微生物组合物，所述化妆品组合物可以使抗病毒、抗细菌、抗真菌和去污剂作用最大化。因此，它可以表现出预防或改善诸如病毒、细菌、真菌等微生物感染或由微生物感染引起的疾病和症状的效果。术语“改善”是指至少减少微生物感染或与由此引起的疾病状况相关的参数(例如减轻症状的严重程度)的所有行为。化妆品成分可以使用任何已知的制备方法以典型的乳化制剂、增溶制剂等形式制备。在此，可根据所期望的目的适当地选择和调配该组合物。例如，所述成分可以以多种配方制备，例如爽肤水香精面霜、包装贴片、用于皮肤粘附的凝胶、粉底、隔离霜等，并且可以应用于任何典型的化妆品制备方法。除了抗微生物组合物之外，所述化妆品组合物还可包含各种任选的添加剂。添加剂的实例可包括但不限于从稳定剂、乳化剂、增稠剂、湿润剂、液晶膜增强剂、ph调节剂(ph)、抗菌剂、水溶性聚合物、涂料剂金属离子螯合剂、氨基酸、有机胺、聚合物乳液、ph调整剂(ph)、皮肤营养素、抗氧化剂、增效剂、防腐剂、香料等中选择的至少一种水性添加剂；以及至少一种非水性添加剂，选自脂肪和油、蜡、烃油、高级脂肪酸油、高级醇、合成酯油和硅油等。本发明的另一方面是提供一种含有所述抗微生物组合物的食品组合物。除非另有说明，否则在本发明的食品组合物中，所述抗微生物组合物具有与上述相同的含义。该食品组合物可以改善或预防诸如细菌、病毒、酵母和霉菌等微生物的感染或由微生物感染引起的疾病。术语“改善”是指至少减少微生物感染或与由此引起的疾病状况相关的参数，例如症状的严重程度的所有行动。所述食品可以是健康功能性食品。术语“健康功能性食品”是指使用具有对人体有用的功能的原料或成分以片剂、胶囊剂、粉剂、颗粒剂、液体、丸剂等形式制备和加工的食品。此处，术语“功能性”是指获得用于健康用途的有益效果，例如营养控制或对人体结构和功能的生理作用。本发明的食品组合物可以根据本领域常用的任何方法制备，并且可以在制备时添加本领域常用的原材料和成分。本发明的食品组合物含有天然植物提取物作为主要活性成分，因此对人体没有副作用或伤害。因此，该组合物也可以作为用于促进或改善微生物感染或由此引起的疾病的治疗效果的补充剂。作为本发明的食品组合物中的有效成分的抗微生物组合物的含量，可以根据预防、改善或治疗等使用目的来适当地确定。通常，当制备食物时，在原料组合物中本发明的抗微生物组合物的量可以为0.001至20重量％、0.001至15重量％或0.001至10重量％。对于保健饮料，基于100毫升的总量，所述抗微生物组合物的添加量可以为0.01至2毫克，例如0.3至1毫克。但是，对于出于健康和保健目的或出于健康控制目的的长期摄入，可以以小于上述范围的量使用所述抗微生物组合物。可以根据需要适当地调节制备食品组合物的过程中添加的抗微生物组合物的含量。食品组合物可以是选自由丸剂、片剂、颗粒剂、粉剂、胶囊剂和液体所组成的组的任何制剂。本发明的另一方面是提供一种含有所述抗微生物组合物的准药物。除非另有说明，在根据本发明的准药物中，抗微生物组合物具有与上述相同的含义。由于本发明的抗微生物组合物对病毒、细菌和真菌具有非常强的抑制活性，因此它可用作抗微生物的准药物。另外，由于其中的活性成分来自植物，因此可以安全地使用而对人体没有毒性和危害。术语“准药物”，不包括用于药物的产品，是指用于治疗、缓解、治愈或预防人类或动物疾病的目的的纤维、橡胶产品等；不是器械或者机器的产品，对人体作用弱或者不直接作用于人体的产品；或用于杀菌、杀虫剂和类似目的以防止感染的产品。它包括，例如消毒剂、杀菌清洁剂、个人护理产品等。根据本发明的准药物可用作消毒剂、清洁剂等。对于消毒剂，本发明的抗微生物组合物可以原样使用，或通过皮肤病学或药学上可接受的稀释剂或溶剂稀释至适当浓度而使用。所述消毒剂可用于活体的表面，优选用于哺乳动物的皮肤，最优选用于人的皮肤。例如，可以以软膏剂制剂、洗剂制剂喷雾剂制剂、贴剂制剂、乳霜剂制剂、粉剂制剂、悬浮剂制剂或凝胶制剂的形式制备和使用消毒剂。另外，所述消毒剂可以用于非生物对象的表面，例如木材、金属、玻璃、陶瓷、塑料、纸或布的表面。可以使用包括浸入、擦拭、喷雾和刷涂的方法将消毒剂处理到活体或非活体对象的表面。优选地，消毒剂可以在医院和房屋中使用，用于伤口表面、手术前皮肤、手术器械、导管等的消毒。对于杀菌清洁剂，除根据本发明的抗微生物组合物外，还可根据本领域已知的任何方法通过含有至少一种在清洁剂制备领域中通常使用的赋形剂或添加剂容易地制备。该清洁剂可用于厨房或食品。除了经加工的柠康酸酐外，用于厨房的清洁剂还可含有阴离子表面活性剂、非离子表面活性剂、两性表面活性剂等。食品用清洁剂可通过向抗微生物组合物中添加食品领域可接受的溶剂或稀释剂以将清洁剂稀释至适当浓度来制备，并可用于消毒和清洁，例如水果、鱼、肉等。另外，所述准药物可以是个人护理产品，例如肥皂、化妆品、湿巾、纸巾、洗发水、皮肤霜、面霜、牙膏、清洁凝胶等。发明效果含有作为活性成分的葡萄提取物、柠檬提取物和薰衣草提取物的混合组合物可以在短时间内有效地抑制病毒、细菌、酵母和丝状真菌。因此，本发明的组合物提供了优异的抗病毒、抗菌和抗真菌作用。另外，该组合物衍生自天然产物，因此可以在各种应用中安全地使用而没有毒性和副作用，例如在药品、食品、化妆品、准药物等中使用。附图说明图1表示每种活性成分和含有不同比例活性成分的混合物对肠道病毒71的抑制作用的图。图2表示在使用本发明的组合物治疗的情况下肠道病毒71的vp蛋白水平的蛋白质印迹结果。具体实施方式在下文中，将参照实施例进一步详细说明本发明构思的示例性实施方案。然而，以下实施例意在举例说明本发明，并且本发明的范围不受这些实施例的限制。实施例1：葡萄提取物的制备将30g干燥的葡萄皮浸入570g水中，然后在60℃的条件下于具有冷却冷凝器的萃取装置中进行水热处理(在回流下)1小时。在完成水热处理(在回流下)之后，使用离心机(supra22k，hanil，韩国)在8000rpm和15℃的条件下将处理过的葡萄皮离心20分钟以分离提取物。分离出的提取物用0.8μm和0.45μm的过滤器过滤以获得滤液。使用浓缩装置(rotaryevaporatorne-series，eyela，日本)在60℃和30hpa的条件下将滤液浓缩2小时。在-21℃的条件下将浓缩物预冻干，然后使用冻干机(bondiro，ilshin，韩国)在-80℃冻干48小时以获得提取物。将所得的葡萄提取物称为“样品1”，并用于以下测试实施例中。实施例2：柠檬提取物的制备将30g干柠檬浸入570g水中，然后使用与以上实施例1中所述相同的方法获得柠檬提取物。将所得柠檬提取物称为“样品2”，并用于以下测试实施例中。实施例3：薰衣草提取物的制备将30g干燥的薰衣草放入含有570g水的蒸汽蒸馏萃取装置中，然后在100℃的条件下于具有冷却冷凝器的精油萃取装置中进行蒸汽蒸馏萃取1小时。通过冷却获得的蒸汽蒸馏提取物在5℃下冷却，静置24小时，以从上层获得分离的油。将所得的薰衣草油称为“样品3”，并用于以下测试实施例中。实施例4：制备葡萄提取物、柠檬提取物和薰衣草提取物的混合物组合物将在以上实施例1、2和3中获得的葡萄提取物、柠檬提取物和薰衣草提取物分别以1∶1∶1、2∶1∶1、1∶2∶1和1∶1∶2的重量比混合。使用均化器(ikat25，ika，jpn)获得四种混合物组合物。所得混合物成分按重量比1:1:1、2:1:1、1:2:1和1:1:2的顺序分别称为“样品4”、“样品5”、“样品6”和“样品7”，并用于以下测试实施例中。测试实施例1：对肠道病毒71感染的抑制作用1-1、使用srb测定法测量抗病毒活性为了证实根据本发明的组合物对肠道病毒71感染的抑制作用，通过应用磺基罗丹明b(srb)测定法进行了该试验(choietal,antiviralactivityofraoulicacidfromraouliaaustralisagainstpicornaviruses,phytomedicine,2009)。将vero细胞以3×104细胞/孔的浓度接种到孔板中，并使用含有10％fbs的dmem培养基培养24小时。除去培养基并用pbs洗涤后，将肠道病毒71悬浮液和fbs培养基以100μg/ml的浓度添加到包含上述实施例中制备的样品的孔中，然后将细胞在5％co2条件下在co2培养箱(sanyo，jpn)中持续培养两天。此后，将它们用pbs洗涤，并向每个孔中加入100μl的70％丙酮，在室温下放置30分钟，然后除去。在使用干燥炉(hanbaek，kor)将孔干燥10分钟后，向其中加入100μl的含有1％乙酸的0.4％srb染料，并在室温下放置30分钟。除去srb，并用含有1％乙酸的助溶剂将板洗涤数次，然后使用干燥炉再次干燥。使用相差显微镜(nikkon，jpn)进行观察。将每个染色的孔用tris-碱溶液溶解并放置。然后，使用elisa测定仪(epoch2，biotek，美国)在560nm处测量光密度(od)值。测量的光密度(od)值包含在以下方程式1中，以计算样本1到7的抗病毒活性率的百分比。此处，抗病毒活性率是指样品抑制肠道病毒71的生长和增殖的活性，这也可以解释为该活性率是指针对肠道病毒71感染的细胞保护率。方程式1根据上述方程式1计算的每种组合物的抗病毒活性率(％)如图1中曲线所示。从图1可以看出，证实了，单独包含各自单一提取物的组合物(样品1、2和3)对肠道病毒71感染几乎没有细胞保护作用。相比之下，可以证实，所有混合组合物(样品4、5、6和7)对肠道病毒71感染均显示出显著的细胞保护作用，而与混合物的比例无关。特别地，观察到葡萄提取物、柠檬提取物和薰衣草提取物以1∶1∶1的比例混合的组合物(样品4)表现出最优异的抗病毒活性。1-2、通过vp蛋白的蛋白质印迹分析确认抗病毒活性为了重新验证根据本发明的组合物的抗病毒效力，对肠道病毒71的vp0衣壳蛋白进行了蛋白质印迹分析。将含有肠道病毒71的vp0衣壳蛋白的上清液在丙烯酰胺凝胶上进行电泳，然后移至iblottransferstack，常规尺寸pvdf(ib401001，invitrogen)。将膜与5％脱脂牛奶(232100，difco)在室温下作用1小时，然后用磷酸盐缓冲盐水(pbs)tween-20洗涤3次。此后，将小鼠抗肠道病毒71单克隆抗体(mab979，millipore)作为第一抗体在室温下与膜作用2小时，然后用pbstween-20洗涤多次。用小鼠igg1单克隆抗体(sc-32293，santacruz)作为α-微管蛋白的第一抗体。使用多克隆山羊抗小鼠igg(h l)hrp(sa001-500，gendepot)作为检测肠道病毒71的vp蛋白和α-微管蛋白的第二抗体。将多克隆山羊抗小鼠igg(h l)hrp在5％脱脂牛奶中稀释5000倍，在室温下与膜作用1小时，然后用pbstween-20洗涤，以进行蛋白质印迹。从图2可以看出，在未用病毒处理的所有对照组、用病毒处理的对照组和用病毒 样品处理的实验组中均检测到α-微管蛋白。肠道病毒71的vp0衣壳蛋白未在未用病毒处理的对照组中显示，而该蛋白在用病毒处理的对照组中非常明显地显示。在本发明的样品4处理的实验组中，几乎没有观察到肠道病毒71的vp0衣壳蛋白。另外，在本发明的样品5、6或7处理的实验组中，部分检测到肠道病毒71的vp0衣壳蛋白，但是与用病毒处理的对照组相比，在非常低的检测水平下观察到。据此，证明了当根据本发明的组合物针对病毒进行处理时，表现出显着水平的抗病毒活性。特别地，葡萄提取物、柠檬提取物和薰衣草提取物以1∶1∶1的比例混合的组合物表现出最优异的抗病毒活性。测试例2：对甲型流感病毒的抗病毒作用为了测试根据本发明的组合物的抗病毒作用，由韩国政府资助的研究机构韩国化学技术研究所的病毒研究和测试中心进行了关于甲型流感病毒的实验。对于该实验中的对照组，将甲型流感病毒(h3n2)和水以1：9的体积比混合并在室温(约23℃)下作用。在5分钟和60分钟后测量每种病毒的滴度，以确定病毒的减少率。对于实验组，将甲型流感病毒(h3n2)和本发明的液体形式的组合物(样品4)以1∶9的体积比混合，并在室温(约23℃)下作用。在5分钟和60分钟后测量每种病毒的滴度，以确定病毒的减少率。表1从表1可以确认，本发明的组合物在很短的时间例如5分钟内使超过99.9％的甲型流感病毒失活，从而证明了其强大的抗病毒作用。测试例3：抗细菌和抗真菌作用为了测试在以上实施例中获得的样品的抗细菌活性和抗真菌活性，进行了琼脂系列稀释法和纸盘法的实验。共使用5种菌株，其中金黄色葡萄球菌(staphylococcusaureus)(kctc6910)为革兰氏阳性菌，铜绿假单胞菌(pseudomonasaeruginosa)(kctc1637)和大肠杆菌(e.coli)(kctc1039)为革兰氏阴性菌，白色念珠菌(candidaalbicans)(kctc7965)为酵母菌，黑曲霉(aspergillusniger)(kctc6910)为丝状真菌，它们都是从韩国生物科学与生物技术研究所出售的。具体的实验方法和结果如下。3-1、按照琼脂系列稀释法进行实验通过根据琼脂系列稀释法测量最小抑制浓度来确认组合物的抗微生物活性。为了进行抗微生物测试，将细菌接种于胰蛋白酶大豆琼脂培养基中，37℃预培养24小时；将酵母菌接种于马铃薯葡萄糖琼脂培养基中，25℃预培养2天；将丝状真菌接种于马铃薯葡萄糖琼脂培养基中，25℃预培养7天，然后用涂布器收集在培养基表面形成的丝状真菌的孢子，并在无菌盐水溶液中稀释后备用。将2ml用5％二甲基亚砜(dmso)生理盐水溶液稀释的组合物加入每个灭菌的培养皿中。以5％dmso生理盐水溶液为对照组。将18ml的每种胰蛋白酶大豆琼脂培养基和已灭菌的马铃薯葡萄糖琼脂培养基添加到每个培养皿中，随后搅拌，然后静置使其凝固。此后，将每个预培养的菌株涂布在培养皿上(涂布的细胞浓度：约1×106cfu/ml细菌；约1×105cfu/ml酵母；约1×104cfu/ml丝状真菌)。细菌在37℃培养24小时，酵母菌在25℃培养3天，丝状真菌在25℃的培养箱中培养7天。此后，观察每个隔室中菌落的形成。测定未生长板的最小样品浓度(即最小抑制浓度(mic))，结果见下表2中。此处，mic值越小表示抗微生物效果越好。表2从表2可以确认，与单一提取物相比，本发明的所有混合物组合物对各种细菌、酵母和丝状真菌均表现出强的抗微生物作用。3-2、根据纸盘法进行实验为了测试组合物的抗微生物作用，根据纸盘法进行了实验。将在每种平板培养基中培养的菌株取一个铂接种环的量，并在10ml液体培养基中培养24小时以进行活化。将在10ml液体培养基中温育的0.1ml微生物溶液进一步温育6小时，然后将微生物溶液接种到每种平板培养基中，以使其约为107cfu/ml，并均匀地分散。之后，将无菌纸盘(6mm，satorius，德国)放置在固体平板培养基上，然后以0.05ml/盘吸收溶解在溶剂中的样品并培养。staphylococcusaureus、pseudomonasaeruginosa和e.coli在37℃下培养；真菌类型的念珠菌(candidaalbicans)和黑曲霉(aspergillusniger)分别在27℃培养24小时和120小时。然后，测量纸盘周围的透明区域的直径。测量结果见下表3。此处，纸盘周围的透明区域是指示相应菌株的增殖抑制程度的指标。因此，透明区的直径(mm)越大，表明对该菌株的抗微生物效果越强。表3如表3所示，作为单一提取物的样品1和样品2几乎没有抗微生物作用，而样品3部分地显示抗微生物效果。另一方面，与单一提取物相比，所有混合物组合物对各种细菌、酵母和丝状真菌均表现出显著优异的抗微生物效果。特别地，证实了以1:1:1的混合比例的样品4表现出最优异的抗细菌和抗真菌效果。在下文中，提供爽肤水和乳液作为本发明的制剂实例。但是，这些不应被解释为限制根据本发明的组合物的配方。另外，本领域普通技术人员可以在本发明的范围内进行任何修改。表4配方示例1：爽肤水成分含量(％)1净化水剩余量2丁二醇5.003本发明的组合物2.004甘油4.005乙二胺四乙酸二钠0.026卡波姆0.107甜菜碱0.508玻尿酸0.019乙醇4.0010peg-60氢化蓖麻油0.3011对羟基苯甲酸甲酯0.1012苯基三甲硅油0.0513香料成分微量14着色剂微量表5配方示例2：乳液表6配方示例3：乳霜表7配方示例4：精华成分含量(％)1净化水剩余量2对羟基苯甲酸甲酯0.203本发明的组合物5.004玻尿酸0.055丁二醇2.006卡波姆0.087黄原胶0.048鲸蜡硬脂醇0.509硬脂酸甘油酯0.5010尼泊金丙酯0.1011矿物油1.0012植物角鲨烯2.0013鲸蜡醇乙基己酸酯1.0014精氨酸0.0815乙醇4.0016peg-60氢化蓖麻油0.3017香料微量表8配方示例5：面膜当前第1页1 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技术特征：1.一种抗微生物组合物，含有作为活性成分的葡萄提取物、柠檬提取物和薰衣草提取物。
2.根据权利要求1所述的抗微生物组合物，其中，所述葡萄提取物来自葡萄皮。
3.根据权利要求1所述的抗微生物组合物，其中，所述薰衣草提取物是薰衣草油。
4.根据权利要求1所述的抗微生物组合物，其中，所述组合物含有重量比为1-2：1-2：1-2的葡萄提取物、柠檬提取物和薰衣草提取物。
5.根据权利要求1所述的抗微生物组合物，其中，所述组合物抑制微生物的活性或感染，所述微生物选自病毒、细菌和真菌所组成的组中的至少一种。
6.根据权利要求1所述的抗微生物组合物，其中，所述组合物抑制微生物的活性或感染，所述微生物选自病毒、革兰氏阳性细菌、革兰氏阴性细菌、酵母和丝状真菌所组成的组中的至少一种。
7.一种药物组合物，含有权利要求1至6中任意一项所述的抗微生物组合物，所述药物组合物用于治疗或预防微生物感染或由所述微生物感染引起的疾病，所述微生物选自病毒、细菌和真菌所组成的组中的至少一种。
8.一种用于预防或改善微生物感染或由所述微生物感染引起的症状的化妆品组合物，所述微生物选自病毒、细菌和真菌所组成的组中的至少一种，所述化妆品组合物含有权利要求1至6中任意一项所述的抗微生物组合物。
9.一种用于预防或改善微生物感染或由所述微生物感染引起的症状的食品组合物，所述微生物选自病毒、细菌和真菌所组成的组中的至少一种，所述食品组合物含有权利要求1-6中任意一项所述的抗微生物组合物。
10.一种用于预防或改善微生物感染或由所述微生物感染引起的症状的准药物，所述微生物选自病毒、细菌和真菌所组成的组中的至少一种，所述准药物含有权利要求1至6中任意一项所述的抗微生物组合物。
技术总结本发明涉及一种含有葡萄提取物、柠檬提取物和薰衣草提取物的抗微生物组合物。本发明的组合物不仅具有优异的抗病毒、抗细菌、抗真菌作用，而且来源于天然产物，使用安全，无毒副作用，并且可以在医药产品、食品、化妆品、准药物等领域有广泛的应用。
技术研发人员：朱哲奎
受保护的技术使用者：朱哲奎
技术研发日：2018.08.24
技术公布日：2020.06.05
