本发明涉及包含新型脱氧核糖核酸酶(dnase)变体的洗涤剂组合物，其表现出相对于亲本脱氧核糖核酸酶在一种或多种特性上的改变，包括：洗涤性能，洗涤剂稳定性和/或贮存稳定性。本发明的组合物适用于清洁过程和洗涤剂组合物，诸如衣物洗涤组合物和盘碟洗涤组合物，包括手洗和自动盘碟洗涤组合物。本发明还涉及制备洗涤剂组合物的方法以及在表面处理，具体地讲织物处理和清洁中洗涤和使用此类脱氧核糖核酸酶变体的方法。
背景技术：
硬质表面和织物暴露于来自环境和身体污垢的污垢和微生物。沉积在此类表面上的污垢可加剧微生物的粘附，从而加剧微生物来源的污垢(例如生物膜污垢)的形成。生物膜包含胞外聚合物(eps)的基质：通常包含细胞外dna、蛋白质和多糖的聚合物聚集体。这些污垢是粘性的、难以移除并且导致其他污垢的进一步粘附。因此，与家庭护理相关的脏污是复杂的，并且可包含颗粒、蛋白质、淀粉、油脂以及eps。因此，去污也是复杂的，并且可使用多种酶，包括脱氧核糖核酸酶(dnase)。
为了可用于家庭清洁过程中，酶诸如脱氧核糖核酸酶需要在洗涤剂组合物中是稳定的并且与标准洗涤剂组分诸如表面活性剂、助洗剂、漂白剂等相容。本发明提供包含此类酶以提供良好清洁的洗涤剂组合物。本发明还可在改善衣物洗涤机和盘碟洗涤机的清洁度方面具有有益效果。
技术实现要素：
本发明涉及一种洗涤剂组合物，其包含i)具有脱氧核糖核酸酶活性的脱氧核糖核酸酶变体，所述脱氧核糖核酸酶变体选自：
a)与具有seqidno:1的脱氧核糖核酸酶相比，包含选自下列的一个或多个替换的脱氧核糖核酸酶变体：g4k、s7g、k8r、s9i、n16g、s27k、s27r、d32f、d32i、d32l、d32r、d32v、l33h、l33r、l33k、l33v、l33y、s39c、g41p、s42h、d45e、q48d、n61e、t65m、t65w、s66r、s66m、s66w、s66y、s66v、f78l、p91l、s101n、s106l、s106r、s106h、q109e、a112e、t127p、s130a、s130y、t138d、q140v、q140g、a147h、c148a、w154y、t157v、y159a、y159r、g162c、q174n、l177y、s179l和c180a，其中每个位点对应于seqidno:1的多肽的位点(根据seqidno:1进行编号)，其中所述变体具有与seqidno:1中所示的氨基酸序列至少60％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％但少于100％的序列同一性；
b)与具有seqidno:27的脱氧核糖核酸酶相比，包含选自下列的一个或多个替换的脱氧核糖核酸酶变体：g4k、s7g、k8r、s9i、n16g、s27k、s27r、d32f、d32i、d32l、d32r、d32v、l33h、l33r、l33k、l33v、l33y、s39c、g41p、s42h、d45e、q48d、n61e、t65m、t65w、s66r、s66m、s66w、s66y、s66v、f78l、p91l、s101n、s106l、s106r、s106h、q109e、a112e、t127p、s130a、s130y、t138d、q140v、q140g、a147p、c148a、w154y、t157v、y159a、y159r、g162c、q174n、l177y、s179l和c180a，其中每个位点对应于seqidno:27的位点(根据seqidno:27进行编号)，并且其中所述变体具有与seqidno:27中所示的氨基酸序列至少60％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％但少于100％的序列同一性；和
c)与具有seqidno:28的脱氧核糖核酸酶相比，包含选自下列的一个或多个替换的脱氧核糖核酸酶变体：g4k、s7g、k8r、s9i、n16g、s27k、s27r、d32f、d32i、d32l、d32r、d32v、l33h、l33r、l33k、l33v、l33y、s39c、g41p、s42h、d45e、q48d、n61e、t65m、t65w、s66r、s66m、s66w、s66y、s66v、f78l、p91l、s101n、s106l、s106r、s106h、q109e、a112e、t127p、s130a、s130y、t138d、q140v、q140g、a147p、c148a、w154y、t157v、y159a、y159r、g162c、q174n、l177y、s179l和c180a，其中每个位点对应于seqidno:28的位点(根据seqidno:28进行编号)，并且其中所述变体具有与seqidno:28中所示的氨基酸序列至少60％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％但少于100％的序列同一性；以及
ii)助剂，优选地其量为0.01重量％至99.9重量％。
本发明进一步涉及一种洗涤剂组合物，其包含脱氧核糖核酸酶变体，所述脱氧核糖核酸酶变体包含选自1、4、7、8、13、22、25、27、32、33、39、41、42、48、56、57、59、65、66、76、77、101、106、109、116、127、130、138、140、144、147、148、154、157、159、160、162、166、167、174、175、177、178、179、180和181中的至少三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、十一个、十二个、十三个、十四个、十五个、十六个、十七个、十八个、十九个、二十个或更多个位点处的替换，其中每个位点对应于seqidno:1的多肽的位点，并且其中该变体具有脱氧核糖核酸酶活性。
本发明还提供一种洗涤方法，所述方法包括：(i)使制品或表面，优选地织物，与含水洗涤液体接触，所述含水洗涤液体包含如定义的脱氧核糖核酸酶变体和助剂，优选地通过使所述制品或表面与本文所述的洗涤剂组合物接触；以及(ii)任选地漂洗以及(iii)干燥所述表面。
本发明还涉及脱氧核糖核酸酶变体和助剂用于下列的用途：清洁，包括深层清洁制品或表面，优选地织物；防止和/或减少脏污制品或表面，优选地织物的粘滞性；预处理脏污制品或表面，优选地织物上的污渍；在洗涤循环期间，防止和/或减少污垢在表面或制品，优选地织物上的再沉积；防止和/或减少污垢对制品或表面，优选地织物的粘附；保持或改善制品或表面，优选地织物的白度；和/或防止和/或减少制品或表面，优选地织物上的恶臭。
优选地，所述脱氧核糖核酸酶变体包含对应于选自下列的替换的一个或多个替换：g4k、s7g、k8r、d32i、d32l、d32r、d32v、l33r、l33k、s39c、g41p、s42h、q48d、t65m、t65w、s66m、s66w、s66y、s66v、s101n、s106l、s106r、s106h、s130a、s130y、t138d、q140v、q140g、a147h、c148a、w154y、t157v、y159a、y159r、g162c、q174n、l177y、s179l和c180a(根据seqidno:1进行编号)。
优选地，所述脱氧核糖核酸酶变体包含对应于选自下列的替换的一个或多个替换：选自下列的一个或多个替换：s27k、s27r、l33r、l33v、l33y、s39c和s66w(根据seqidno:1进行编号)。
优选地，与亲本相比和/或与具有seqidno:1、seqidno:27或seqidno:28中所示的多肽的脱氧核糖核酸酶相比，所述脱氧核糖核酸酶变体具有至少一种改善的特性，优选地其中所述改善的特性在至少一种测定法a、b或c中表征为高于1的rar(残余活性比)。优选地，所述变体包含至少两个突变，并且所述脱氧核糖核酸酶变体中的突变的组合提供加性效应，更优选地协同效应。
序列
seqidno：1从食物芽孢杆菌(bacilluscibi)获得的成熟多肽
seqidno：2从堀越氏芽孢杆菌(bacillushorikoshii)获得的成熟多肽
seqidno：3从芽孢杆菌62520获得的成熟多肽
seqidno：4从堀越氏芽孢杆菌(bacillushorikoshii)获得的成熟多肽
seqidno：5从堀越氏芽孢杆菌(bacillushorikoshii)获得的成熟多肽
seqidno：6从芽孢杆菌16840获得的成熟多肽
seqidno：7从芽孢杆菌16840获得的成熟多肽
seqidno：8从芽孢杆菌62668获得的成熟多肽
seqidno：9从芽孢杆菌13395获得的成熟多肽
seqidno：10从角质芽孢杆菌(bacillushorneckiae)获得的成熟多肽
seqidno：11从芽孢杆菌11238获得的成熟多肽
seqidno：12从芽孢杆菌62451获得的成熟多肽
seqidno：13从芽孢杆菌18318获得的成熟多肽
seqidno：14从病研所芽孢杆菌(bacillusidriensis)获得的成熟多肽
seqidno：15从居藻芽孢杆菌(bacillusalgicola)获得的成熟多肽
seqidno：16从环境样本j获得的成熟多肽
seqidno：17从越南芽孢杆菌(bacillusvietnamensis)获得的成熟多肽
seqidno：18从花津滩芽孢杆菌(bacillushwajinpoensis)获得的成熟多肽
seqidno：19从胶质类芽孢杆菌(paenibacillusmucilaginosus)获得的成熟多肽
seqidno：20从印度芽孢杆菌(bacillusindicus)获得的成熟多肽
seqidno：21从黄海芽胞杆菌(bacillusmarisflavi)获得的成熟多肽
seqidno：22从路西法芽孢杆菌(bacillusluciferensis)获得的成熟多肽
seqidno：23从黄海芽胞杆菌(bacillusmarisflavi)获得的成熟多肽
seqidno：24从芽孢杆菌sa2-6获得的成熟多肽
seqidno：25基序[d/m/l][s/t]gysr[d/n]
seqidno：26基序asxnrskg
seqidno：27seqidno：1的脱氧核糖核酸酶变体
seqidno：28seqidno：1的脱氧核糖核酸酶变体
定义
术语“助剂”是指针对所期望的洗涤剂组合物的特定类型和产品形式(例如液体、颗粒、粉末、条状物、糊剂、喷雾、单位剂量诸如片剂或小袋、凝胶或泡沫组合物)所选择的任何液体、固体或气体材料，该材料也优选地与组合物中所用的脱氧核糖核酸酶变体酶相容。在一些方面，颗粒状组合物为“致密”形式，而在其它方面，液体组合物为“浓缩”形式。
术语“等位变体”指占据相同染色体座位的基因的两个或更多个替代形式中的任何一个。等位变体天然来源于突变，并且可导致种群内的多态性。基因突变可为沉默突变(不改变编码的多肽)或者可编码具有改变的氨基酸序列的多肽。多肽的等位变体是由基因的等位变体编码的多肽。
“生物膜”是微生物来源的污垢，其可由任何种类的微生物产生，并且通常包含胞外聚合物(eps)的自生基质。生物膜eps通常是由胞外dna、蛋白质和多糖构成的聚合物聚集体。产生生物膜的细菌包括例如以下物种:不动杆菌属(acinetobactersp.)、气微菌属(aeromicrobiumsp.)、短波单胞菌属(brevundimonassp.)、微杆菌属(microbacteriumsp.)、藤黄微球菌(micrococcusluteus)、假单胞菌属(pseudomonassp.)、表皮葡萄球菌(staphylococcusepidermidis)和寡养食单胞菌属(stenotrophomonassp.)。
术语“cdna”是指可从原核细胞或真核细胞获得的成熟的、剪接的mrna分子通过反向转录来制备的dna分子。cdna不含在对应的基因组dna中可能存在的内含子序列。最初的初始rna转录物是mrna的前体，其在作为成熟的经拼接的mrna出现之前，通过一系列步骤，包括拼接，被加工。
术语“进化枝”是指基于可追溯到共同祖先的同源特征而聚类在一起的一组多肽。多肽进化枝能够可视化为系统发育树，而进化枝是由共同祖先和其所有直系后代组成的一组多肽。形成例如系统发育树中所示的一个进化枝的一组多肽通常可共享共同特性，并且与不在进化枝中的其他多肽相比更为密切相关。
术语“编码序列”指多核苷酸，其直接规定了其多肽产物的氨基酸序列。编码序列的边界一般由开放阅读框确定，它通常起始于atg起始密码子或供选择的起始密码子如gtg和ttg并终止于终止密码子如taa、tag、和tga。编码序列可为dna、cdna、合成的、或重组的多核苷酸。
术语“调控序列”是指对于编码本发明的变体的多核苷酸的表达所需的所有元件。每一调控序列可以是对编码所述变体的多核苷酸而言天然的或外源的，或对彼此而言天然的或外源的。此类调控序列包括但不限于前导序列、聚腺苷酸化序列、前肽序列、启动子、信号肽序列、和转录终止子。调控序列至少包括启动子以及转录和翻译终止信号。可以为调控序列设置接头用于引入特异性限制性位点，以便于将该调控序列与编码变体的多核苷酸的编码区连接起来。
术语“深层清洁”是指减少或移除生物膜、eps或它们的部分的组分，所述组分诸如多糖、蛋白质、dna、污垢或存在于例如生物膜或eps中的其他组分。
除非另外指明，术语“洗涤剂组合物”包括颗粒或粉末形式的多功能或“重垢型”洗涤剂，尤其是清洁洗涤剂；液体、凝胶或糊剂状的多功能洗涤剂，尤其是所谓的重垢型液体(hdl)类型；液体精细织物洗涤剂；手洗餐具洗涤剂或轻垢型餐具洗涤剂，尤其是高起泡类型的那些；机洗餐具洗涤剂，包括各种供家庭和机构使用的片剂、颗粒、液体和漂洗助剂类型；液体清洁和消毒剂，包括抗菌手洗型、洗涤条、条皂、漱口水、假牙清洁剂、汽车或地毯清洁剂、浴室清洁剂；毛发洗发剂和毛发冲洗剂；沐浴凝胶，泡沫浴；金属清洁剂；以及清洁辅助剂如漂白添加剂和“去污棒”或预处理型。洗涤剂组合物可以呈单位剂量的形式，诸如片剂或小袋，所述小袋包含任选地包封在膜中的液体、凝胶和/或固体，诸如颗粒状或粉末洗涤剂组合物，优选地水溶性小袋。术语“洗涤剂组合物”和“洗涤剂制剂”用于提及旨在用于清洁脏污物体的洗涤介质中的混合物。在一些方面，该术语用于提及洗涤织物和/或服装(例如“衣物洗涤剂”)。在可供选择的方面，该术语是指其它洗涤剂，诸如用于清洁盘碟、餐具等的那些洗涤剂(例如“盘碟洗涤剂”)。本发明不旨在限于任何具体的洗涤剂制剂或组合物。术语“洗涤剂组合物”不旨在限于包含表面活性剂的组合物。除了根据本发明的变体之外、该术语还旨在涵盖可包含下列的洗涤剂：例如，表面活性剂、助洗剂、螯合剂或螯合试剂、漂白剂体系或漂白剂组分、聚合物、织物调理剂、泡沫促进剂、抑泡剂、染料、香料、变色抑制剂、光学增白剂、杀细菌剂、杀真菌剂、垢悬浮剂、抗腐蚀剂、酶抑制剂或稳定剂、酶活化剂、一种或多种转移酶、水解酶、氧化还原酶、上蓝剂和荧光染料、抗氧化剂和增溶剂。洗涤剂组合物也可用于织物处理步骤，例如它们可提供织物清新、织物软化和/或着色焕新步骤。
术语“脱氧核糖核酸酶”，“脱氧核糖核酸酶变体”或“脱氧核糖核酸酶亲本”是指具有脱氧核糖核酸酶活性的多肽，其催化dna中的磷酸二酯键的水解裂解，从而降解dna。脱氧核糖核酸酶属于酯酶(ec编号3.1)，水解酶的子组。脱氧核糖核酸酶分类为，例如e.c.3.1.11，e.c.3.1.12，e.c.3.1.15，e.c.3.1.16，e.c.3.1.21，e.c3.1.22，e.c3.1.23，e.c3.1.24和e.c.3.1.25以及ec3.1.21.x，其中x＝1、2、3、4、5、6、7、8或9。术语“脱氧核糖核酸酶”和表述“具有脱氧核糖核酸酶活性的多肽”可在整个专利申请中互换使用。就本发明的目的而言，根据测定法i中所述的程序测定脱氧核糖核酸酶活性。在一些方面，与亲本脱氧核糖核酸酶相比，本发明的脱氧核糖核酸酶变体具有改善的脱氧核糖核酸酶活性。在一些方面，与seqidno：1所示的多肽相比，本发明的脱氧核糖核酸酶变体具有至少100％，例如至少110％、至少120％、至少130％、至少140％、至少150％、至少160％、至少170％、至少180％、至少190％，或至少200％的脱氧核糖核酸酶活性。
术语“酶的有效量”是指实现特定应用(例如在定义的洗涤剂组合物中)所需的酶活性所必需的酶的量。此类有效量容易地由本领域的普通技术人员进行探知，并且基于许多因素，诸如所用的特定酶、清洁应用、洗涤剂组合物的具体组成，以及需要液体还是干燥(例如，颗粒状、条状)的组合物等。术语脱氧核糖核酸酶变体的“有效量”是指上文所述的，例如在定义的洗涤剂组合物中达到期望的酶活性水平的脱氧核糖核酸酶变体的量。
术语“表达”包括涉及制备变体的任何步骤，包括但不限于转录、转录后修饰、翻译、翻译后修饰、和分泌。
术语“表达载体”是指线性或环状的dna分子，其包含编码变体的多核苷酸，并且所述多核苷酸可操作地连接至提供其表达的附加的核苷酸。
术语“织物”涵盖任何纺织物材料。因此，预期该术语涵盖服装，以及织物、纱线、纤维、非织造材料、天然材料、合成材料和任何其它纺织物材料。
术语“高洗涤剂浓度”体系包括在洗涤水中存在多于约2000ppm的洗涤剂组分的洗涤剂。欧洲的洗涤剂通常被认为是高洗涤剂浓度体系。
术语“宿主细胞”是指对用包含本发明的多核苷酸的核酸构建体或表达载体进行的转化、转染、转导等敏感的任何细胞类型。术语“宿主细胞”包括了由于在复制过程中发生的突变而与亲本细胞不相同的亲本细胞的任何子代。
术语“改善的特性”是指与亲本相比和/或与具有seqidno：1、seqidno:27、seqidno:28的脱氧核糖核酸酶相比、或与具有所述变体的相同氨基酸序列但不在所述特定位点中的一个或多个处具有改变的脱氧核糖核酸酶相比，与变体相关联的被改善的特性。此类改善的性质包括但不限于稳定性(诸如洗涤剂稳定性)、洗涤性能(例如深层清洁效果)，深层清洁效果可以包括但不限于脱胶效果。
术语“改善的脱氧核糖核酸酶活性”在本文中被定义为改变的脱氧核糖核酸酶活性(例如，增加了对dna中磷酸二酯键水解裂解的催化)，脱氧核糖核酸酶变体显示出相对于(或相比于)亲本脱氧核糖核酸酶(诸如相比于具有seqidno：1、seqidno:27或seqidno:28的脱氧核糖核酸酶)的活性的活性改变。
术语“低洗涤剂浓度”体系包括在洗涤水中存在少于约800ppm的洗涤剂组分的洗涤剂。亚洲的，例如日本的洗涤剂通常被认为是低洗涤剂浓度体系。
术语“改善的洗涤性能”包括但不限于术语“深层清洁效果”。根据本发明，改善的性能(例如，根据本发明的脱氧核糖核酸酶变体的深层清洁性能)与脱氧核糖核酸酶亲本(例如seqidno:1、seqidno:27或seqidno:28中所示的脱氧核糖核酸酶)相比来进行测量。改善的性能(例如，清洁或深层清洁性能)可表示为染污样本的衰减值。在洗涤及漂洗后将样本铺展平整并在常温下空气干燥过夜。所有洗涤样本在清洗的第二天进行评估。使用具有非常小的孔隙的macbethcoloreye7000反射分光光度计进行样本的光反射率评定。在入射光中没有紫外光的情况下进行测定，并且提取460nm处的衰减。阳性响应表明污垢已被去除，包括由于例如生物膜粘性层粘附到织物上的污垢。
术语“分离的多核苷酸”是指经人工改性的多核苷酸。在一些方面，分离的多核苷酸是通过琼脂糖电泳所测定的至少1％纯的，例如，至少5％纯、至少10％纯、至少20％纯、至少40％纯、至少60％纯、至少80％纯、至少90％纯、和至少95％纯的。多核苷酸可为基因组、cdna、rna、半合成的、合成来源的、或它们的任何组合。
术语“衣物洗涤”涉及家用衣物洗涤和工业衣物洗涤两者，是指使用包含本发明的清洁或洗涤剂组合物的溶液处理纺织物的过程。衣物洗涤过程可例如使用例如家用或工业洗衣机进行，或者可手工进行。
术语“成熟多肽”是指在翻译和任何翻译后修饰(诸如n-末端加工、c-末端截短、糖基化、磷酸化等)后最终形式的多肽。在一些方面，成熟多肽是seqidno:1的1至182位的氨基酸。根据edmann末端测序数据和完整的ms数据，实验证实了根据本发明使用的成熟多肽的n末端。本领域已知宿主细胞可产生由相同多核苷酸表达的两种或更多种不同的成熟多肽(即，具有不同的c末端和/或n末端的氨基酸)的混合物。
术语“成熟多肽编码序列”是指编码具有脱氧核糖核酸酶活性的成熟多肽的多核苷酸。
术语“中等洗涤剂浓度”体系包括在洗涤水中存在约800ppm至约2000ppm之间的洗涤剂组分的洗涤剂。北美的洗涤剂通常被认为是中等洗涤剂浓度体系。
术语“核酸构建体”是指单链或双链的核酸分子，它是从天然存在的基因分离的，或者是以否则将不会天然地存在的方式经过修改以包含核酸的片段的，或者它是合成的。当所述核酸构建体包含本发明的编码序列的表达所需的控制序列时，术语核酸构建体与术语“表达盒”是同义的。
术语“非织物洗涤剂组合物”包括非纺织品表面洗涤剂组合物，其包括但不限于用于硬质表面清洁的组合物，诸如盘碟洗涤剂组合物，其包括手动盘碟洗涤组合物、口腔洗涤剂组合物、义齿洗涤剂组合物和个人清洁组合物。
术语“可操作地连接”是指一种构型，控制序列在其中被置于相对于多核苷酸的编码序列的适当位点上，使得控制序列指导编码序列的表达。
术语“亲本”脱氧核糖核酸酶、脱氧核糖核酸酶亲本或前体脱氧核糖核酸酶可互换使用。在本发明的上下文中，“亲本脱氧核糖核酸酶”应被理解为脱氧核糖核酸酶，其氨基酸序列中进行至少一处改变以产生脱氧核糖核酸酶变体，其氨基酸序列与改变发生之前的脱氧核糖核酸酶序列(即亲本脱氧核糖核酸酶)少于100％相同。因此，亲本是与变体相比具有相同氨基酸序列但不具有在一个或多个特定位点处改变的脱氧核糖核酸酶。应当理解，本上下文中的表达“具有相同的氨基酸序列”涉及100％的序列同一性。在一个特定方面，脱氧核糖核酸酶亲本是具有与seqidno:1中所示的多肽至少60％、至少61％、至少62％、至少63％、至少64％、至少65％、至少66％、至少67％、至少68％、至少69％、至少70％、至少72％、至少73％、至少74％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％的同一性的脱氧核糖核酸酶。在一个特定方面，脱氧核糖核酸酶亲本是具有与seqidno:27中所示的多肽至少60％、至少61％、至少62％、至少63％、至少64％、至少65％、至少66％、至少67％、至少68％、至少69％、至少70％、至少72％、至少73％、至少74％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％的同一性的脱氧核糖核酸酶。在一个特定方面，脱氧核糖核酸酶亲本是具有与seqidno:28中所示的多肽至少60％、至少61％、至少62％、至少63％、至少64％、至少65％、至少66％、至少67％、至少68％、至少69％、至少70％、至少72％、至少73％、至少74％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、或100％的同一性的脱氧核糖核酸酶。
本文所用术语“相关洗涤条件”用于指示在洗涤剂市场细分中实际家庭使用的条件，具体地讲是洗涤温度、时间、洗涤力学、洗涤剂浓度、洗涤剂类型和水硬度。
术语“稳定性”包括贮存稳定性和在使用期间(例如在洗涤过程期间)的稳定性，并以时间函数反映根据本发明的脱氧核糖核酸酶变体的稳定性，例如当将脱氧核糖核酸酶变体保留在溶液(具体地讲洗涤剂溶液)中时保留了多少活性。稳定性受许多因素的影响，例如ph、温度、洗涤剂组成，例如助洗剂、表面活性剂的量等。可如实施例2、3、4和5中所述测量脱氧核糖核酸酶稳定性。术语“改善的稳定性”或“增加的稳定性”在本文中被定义为相对于亲本脱氧核糖核酸酶和/或相对于seqidno：1、seqidno:27或seqidno:28的稳定性，变体脱氧核糖核酸酶显示出增加的溶液稳定性。“改善的稳定性”和“增加的稳定性”包括洗涤剂稳定性。与脱氧核糖核酸酶亲本相比，术语“洗涤剂稳定性”或"改善的洗涤剂稳定性可改善脱氧核糖核酸酶活性的稳定性。如实施例2至5中所述测量脱氧核糖核酸酶稳定性。
术语“基本上纯的变体”是指按重量计包含至多10％、至多8％、至多6％、至多5％、至多4％、至多3％、至多2％、至多1％、和至多0.5％的其他多肽物质的制剂，所述多肽物质是与其天然地或重组地相关联的。优选地，所述变体按所述制剂中存在的总多肽物质的重量计是至少92％纯的，例如，至少94％纯、至少95％纯、至少96％纯、至少97％纯、至少98％纯、至少99％、至少99.5％纯、和100％纯的。本发明的变体优选地为基本上纯的形式。这能够通过例如为人们所熟知的重组方法或经典的纯化方法制备变体来实现。
术语“纺织物”是指织造织物，以及适于转化成或用作纱线、织造物、针织物和非织造织物的短纤维和长丝。该术语涵盖由天然的以及合成的(例如，制造的)纤维制成的纱。术语“纺织物材料”是纤维、纱中间体、纱、织物和由织物制成的产品(例如服装和其它制品)的通称。
术语“转录启动子”用于启动子，其是有利于特定基因的转录的dna区域。转录启动子通常位于它们所调控的基因附近，同一条链的上游(朝向有义链的5’区)。
术语“转录终止子”是指一段遗传序列，其标记了用于转录的基因组dna上的基因或操纵子的末端。
术语“变体”是指具有脱氧核糖核酸酶活性的多肽，其包含在一个或多个(例如，若干个)位点处的替换。替换是指将占据某个位点的氨基酸用不同的氨基酸进行替换，缺失是指移除占据某个位点的氨基酸，插入是指在占据某个位点的氨基酸的邻近添加氨基酸，例如1至10个氨基酸，优选1-3个氨基酸。本发明的变体具有seqidno：1中所示成熟多肽的脱氧核糖核酸酶活性的至少20％，例如，至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、或至少100％。术语“脱氧核糖核酸酶变体”是指具有脱氧核糖核酸酶活性并且与亲本脱氧核糖核酸酶相比(例如与seqidno:1、seqidno:27或seqidno:28相比)包含在一个或多个(或一个或若干个)位点处的改变(即替换、插入和/或缺失)的脱氧核糖核酸酶。
如本文所用，术语“水硬度”或“硬度”或“dh”或“°dh”是指徳氏硬度。每升水中含10毫克钙氧化物定义为1度。
术语“野生型脱氧核糖核酸酶”是指由天然存在的生物体(诸如存在于自然界中的真菌、细菌、古细菌、酵母、植物或动物)表达的脱氧核糖核酸酶。
变体设计的规则
就本发明的目的而言，除非另外指明，否则将seqidno:1中公开的多肽用于确定另一种脱氧核糖核酸酶中对应的氨基酸残基。将另一种脱氧核糖核酸酶氨基酸序列与seqidno：1所公开的多肽进行比对，并且基于比对，确定对应于seqidno：1所公开的多肽中的任何氨基酸残基的氨基酸位点数字，其使用了needleman-wunsch算法(needleman和wunsch，1970，j.mol.biol.48：443-453)确定，如在emboss程序包的needle程序中实现(emboss:theeuropeanmolecularbiologyopensoftwaresuite,rice等人，2000,trendsgenet.16:276-277)，优选地版本5.0.0或更新的。所用的参数是，为10的空位罚分，为0.5的空位延伸罚分，和eblosum62(emboss版的blosum62)替换矩阵。
另一个脱氧核糖核酸酶中对应的氨基酸残基的鉴定可通过将多个多肽序列用若干个计算机程序进行比对来确定，程序包括但不限于muscle(multiplesequencecomparisonbylog-expectation；版本3.5或更新的；edgar，2004，nucleicacidsresearch32：1792-1797)，mafft(版本6.857或更新版本；katoh和kuma，2002，nucleicacidsresearch30:3059-3066；katoh等人，2005，nucleicacidsresearch33:511-518；katoh和toh，2007，bioinformatics23:372-374；katoh等人，2009，methodsinmolecularbiology537：39-64；katoh和toh，2010，bioinformatics26：1899-1900)，和embossemmaemployingclustalw(1.83或更新的；thompson等人，1994，nucleicacidsresearch22：4673-4680)，使用它们各自的默认参数。
当另一种酶与seqidno：1的多肽存在分化由此使得传统的基于序列的比较未检测出它们的关系(lindahl和elofsson，2000,j.mol.biol.295：613-615)时，可使用其他两两序列比对算法。使用利用了多肽家族的概率表现(谱)来检索数据库的检索程序能够获得基于序列的检索中的更高灵敏度。例如，psi-blast程序通过迭代的数据库搜索过程来生成谱，并且能够检测远缘同系物(atschul等人，1997，nucleicacidsres.25：3389-3402)。如果多肽的家族或超家族在蛋白质结构数据库中具有一个或多个代表，则能够实现甚至更高的敏感性。诸如genthreader(jones，1999，j.mol.biol.287:797-815；mcguffin和jones，2003，bioinformatics19：874-881)的程序利用多种来源的信息(psi-blast、二级结构预测、结构比对谱和溶解能)作为预测查询序列的结构性折叠的神经网络的输入。类似地，gough等人，2000，j.mol.biol.313:903-919的方法能够被用于将未知结构的序列与scop数据库中存在的超家族模型比对。这些比对可以继而用于生成多肽的同源性模型，且可以使用多种为此目的开发的工具来评估这类模型的精确性。
对于已知结构的蛋白质，已经有数种用于检索和生成其结构性比对的工具和资源。例如，蛋白质的scop超家族已经过了结构性比对，并且可以获取和下载那些比对结果。可使用多种算法诸如距离比对矩阵(holm和sander，1998，proteins33:88-96)或组合延伸(shindyalov和bourne，1998，proteinengineering11:739-747)来比对两个或多个蛋白结构，这些算法的实现可以另外用于使用感兴趣的结构来检索结构数据库以发现可能的结构同系物(例如，holm和park，2000，bioinformatics16:566-567)。
因为取决于针对变体所选择的亲本，在给定位点处可存在不同的氨基酸，因此在下文定义中氨基酸位点用#1、#2等来表示。在对本发明的所述变体的描述中，使用以下命名法以便于参考。采用了公认的iupac单字母或三字母氨基酸缩写。氨基酸位点用#1，#2等来表示。
替换：对于氨基酸替换，使用下列命名法：初始氨基酸、位点、替换后的氨基酸。因此，将位点#1的缬氨酸用丙氨酸替换被命名为“val#1ala”或“v#1a”。多个突变通过添加标记(“ ”)或用逗号(，)隔开，例如“val#1ala “pro#2gly”或v#1a,p#2g，表示在位点#1和#2的缬氨酸(v)和脯氨酸(p)分别由丙氨酸(a)和甘氨酸(g)替换。如果在给定位点中可替换的氨基酸多于一种，则这些氨基酸在括号中列出，诸如[x]或{x}。因此，如果色氨酸和赖氨酸两者均可替换占据位点#1的氨基酸，则这表示为x#1{w,k}、x#1[w,k]或x#1[w/k]，其中x指示在亲本脱氧核糖核酸酶(例如seqidno：1中所示的脱氧核糖核酸酶或具有与其至少60％同一性的脱氧核糖核酸酶)的该位点处存在的氨基酸残基。在一些情况下，变体可表示为#1{w,k}或x#2p，表明待替换的氨基酸的差别取决于亲本。为方便起见，因为将seqidno：1用于替换的编号，将seqidno：1中对应位点上的氨基酸表示为例如t1a。然而，技术人员显而易见的是，包含t1a的脱氧核糖核酸酶变体不限于在对应于seqidno：1的位点1的位点上具有苏氨酸的亲本脱氧核糖核酸酶。在位点1上具有例如天冬酰胺的亲本脱氧核糖核酸酶中，技术人员将把该突变翻译详述为t1a至n1a。如果亲本脱氧核糖核酸酶在位点1中具有丙氨酸，技术人员将认识到亲本脱氧核糖核酸酶在该位点上没有改变。这同样适用于下文所述的缺失和插入。在本文中，除非另外指明，否则根据seqidno：1进行编号。
缺失：对于氨基酸缺失，使用以下命名法：初始氨基酸，位点，*。因此，位点#1处的缬氨酸的缺失被命名为“val#1*”或“v#1*”。多个缺失通过添加(“ ”)或逗号隔开，例如，“val#1* pro#2*”或“v#1*,p#2*”。
插入：插入另外的氨基酸残基，诸如例如在val#1后插入赖氨酸可表示为：val#1vallys或v#1vk。另选地，插入另外的氨基酸残基诸如在v#1后插入赖氨酸可表示为：*#1ak。当插入的氨基酸多于一个时，诸如在#1后插入lys(赖氨酸)和gly(甘氨酸)，这可表示为：val#1vallysgly或v#1vkg。在这类情况下，可通过在插入氨基酸残基之前的氨基酸残基的位点编号上添加小写字母，来对插入氨基酸残基编号，如示例：*#1ak*#1bg。
多重改变：包含多重改变的变体通过添加标记(“ ”)或逗号(，)隔开，例如，“val#1trp pro#2gly”或“v#1w,p#2g”表示用色氨酸和甘氨酸替换在位点#1和#2的缬氨酸和脯氨酸，分别如上所述。
不同的改变：在一个位点处可导入不同的改变，不同改变可用逗号分隔，例如，“val#1trp,lys”或v#1w,k，其表示用色氨酸或赖氨酸替换在位点#1的缬氨酸。因此，“val#1trp,lys pro#2asp”命名以下变体：“val#1trp pro#2asp”，“val#1lys pro#2asp”或v#1w,k p#2d。
进化枝的命名细则
就本发明的目的而言，命名[iv]或[i/v]是指这个位点处的氨基酸可以是异亮氨酸(ile，i)或缬氨酸(val，v)。同样，命名[lvi]和[l/v/i]是指这个位点处的氨基酸可以为亮氨酸(leu，l)、缬氨酸(val，v)或异亮氨酸(ile，i)以及如本文所述的其他组合等。除非另有限制，限定了氨基酸x使得其可为20种天然氨基酸的任一种。
具体实施方式
本发明提供了一种包含新型脱氧核糖核酸酶的洗涤剂组合物，制备洗涤剂组合物的方法和洗涤表面的方法，所述新型脱氧核糖核酸酶优选地得自芽孢杆菌(bacillus)，具体地讲得自食物芽孢杆菌(bacilluscibi)。适用于本发明的优选脱氧核糖核酸酶包含与具有seqidno:1的多肽至少60％的序列同一性，并且与具有seqidno：1的脱氧核糖核酸酶相比包含至少一个氨基酸位点的改变。适用于本发明的脱氧核糖核酸酶变体可包含在等同于seqidno：1中的位点的至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20个位点中的改变。所述改变优选地为替换。与亲本脱氧核糖核酸酶相比或与seqidno：1相比，适用于本发明的优选的脱氧核糖核酸酶变体具有至少一种改善的特性。特性包括但不限于稳定性，诸如：洗涤剂中的稳定性、贮存稳定性、洗涤稳定性和热稳定性、洗涤性能尤其是深层清洁性能、增加的表达水平和减少恶臭。本发明可作为二次用途，甚至可用于减少微生物诸如细菌的粘附或增加其去除。
脱氧核糖核酸酶变体
适用于本发明组合物的脱氧核糖核酸酶变体优选为seqidno：1的变体或与其具有至少60％同一性的脱氧核糖核酸酶的变体。
适用于本发明组合物的脱氧核糖核酸酶变体优选地包含脱氧核糖核酸酶，其包含在选自下列的一个或多个位点处的改变：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181和182，其中每个位点对应于seqidno：1的多肽的位点，其中该变体具有脱氧核糖核酸酶活性。在一些方面，该变体具有与亲本脱氧核糖核酸酶的氨基酸序列至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％，诸如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％，但少于100％的序列同一性。在一些方面，脱氧核糖核酸酶变体具有与seqidno:1中所示的多肽至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％，诸如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％，但少于100％的序列同一性。
优选地，可用于本发明的脱氧核糖核酸酶变体包含多于两个改变(与seqidno:1相比)，诸如至少三个改变、诸如至少四个改变、诸如至少五个改变、诸如至少六个改变、诸如至少七个改变、诸如至少八个改变、诸如至少九个改变、诸如至少十个改变、诸如至少十一个改变、诸如至少十二个改变、诸如至少十三个改变、诸如至少十四个改变、诸如至少十六个改变、诸如至少十七个改变、诸如至少十八个改变、诸如至少十九个改变、诸如至少二十个改变，其中所述脱氧核糖核酸酶变体具有与seqidno:1中所示的多肽至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％，诸如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％，但少于100％的序列同一性。
在一些优选的方面，所述改变为替换。
优选地，该脱氧核糖核酸酶变体包含在一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、十一个、十二个、十三个、十四个、十五个、十六个、十七个、十八个、十九个、二十个或更多个位点处的替换，所述位点选自：1、4、7、8、9、13、22、25、27、32、33、39、41、42、48、56、57、59、61、65、66、76、77、78、91、101、112、106、109、116、127、130、138、140、144、147、148、154、157、159、160、162、166、167、174、175、177、178、179、180和181，其中每个位点对应于seqidno:1的多肽的位点，并且其中该变体具有脱氧核糖核酸酶活性。在一些方面，该变体具有与亲本脱氧核糖核酸酶的氨基酸序列至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％，诸如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％，但少于100％的序列同一性。
在本发明的一个优选的方面，该脱氧核糖核酸酶变体包含在一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、十一个、十二个、十三个、十四个、十五个、十六个、十七个、十八个、十九个、二十个或更多个位点处的替换，所述位点选自：4、7、8、9、27、32、33、39、41、42、48、61、65、66、78、91、101、106、109、112、127、130、138、140、147、148、154、157、159、162、174、177、179和180，其中每个位点对应于seqidno:1的多肽的位点，并且其中该变体具有脱氧核糖核酸酶活性。在一些方面，该变体具有与亲本脱氧核糖核酸酶的氨基酸序列至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％，诸如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％，但少于100％的序列同一性。
优选地，该脱氧核糖核酸酶选自：
a)与具有seqidno:1的脱氧核糖核酸酶相比，包含选自下列的一个或多个替换的脱氧核糖核酸酶变体：g4k、s7g、k8r、s9i、n16g、s27k、s27r、d32f、d32i、d32l、d32r、d32v、l33h、l33r、l33k、l33v、l33y、s39c、g41p、s42h、d45e、q48d、n61e、t65m、t65w、s66r、s66m、s66w、s66y、s66v、f78l、p91l、s101n、s106l、s106r、s106h、q109e、a112e、t127p、s130a、s130y、t138d、q140v、q140g、a147p、c148a、w154y、t157v、y159a、y159r、g162c、q174n、l177y、s179l和c180a，其中每个位点对应于seqidno:1的位点(根据seqidno:1进行编号)，并且其中所述变体具有与seqidno:1中所示的氨基酸序列至少60％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％但少于100％的序列同一性；
b)与具有seqidno:27的脱氧核糖核酸酶相比，包含选自下列的一个或多个替换的脱氧核糖核酸酶变体：g4k、s7g、k8r、s9i、n16g、s27k、s27r、d32f、d32i、d32l、d32r、d32v、l33h、l33r、l33k、l33v、l33y、s39c、g41p、s42h、d45e、q48d、n61e、t65m、t65w、s66r、s66m、s66w、s66y、s66v、f78l、p91l、s101n、s106l、s106r、s106h、q109e、a112e、t127p、s130a、s130y、t138d、q140v、q140g、a147p、c148a、w154y、t157v、y159a、y159r、g162c、q174n、l177y、s179l和c180a，其中每个位点对应于seqidno:27的位点(根据seqidno:27进行编号)，并且其中所述变体具有与seqidno:27中所示的氨基酸序列至少60％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％但少于100％的序列同一性；和
c)与具有seqidno:28的脱氧核糖核酸酶相比，包含选自下列的一个或多个替换的脱氧核糖核酸酶变体：g4k、s7g、k8r、s9i、n16g、s27k、s27r、d32f、d32i、d32l、d32r、d32v、l33h、l33r、l33k、l33v、l33y、s39c、g41p、s42h、d45e、q48d、n61e、t65m、t65w、s66r、s66m、s66w、s66y、s66v、f78l、p91l、s101n、s106l、s106r、s106h、q109e、a112e、t127p、s130a、s130y、t138d、q140v、q140g、a147p、c148a、w154y、t157v、y159a、y159r、g162c、q174n、l177y、s179l和c180a，其中每个位点对应于seqidno:28的位点(根据seqidno:28进行编号)，并且其中所述变体具有与seqidno:28中所示的氨基酸序列至少60％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％但少于100％的序列同一性。
在本发明的一个优选的方面，与seqidno:1中所示的脱氧核糖核酸酶相比，该脱氧核糖核酸酶变体包含至少一个，诸如至少两个、诸如至少三个、诸如至少四个、诸如至少五个、诸如至少六个、诸如至少七个、诸如至少八个、诸如至少九个、诸如至少十个、诸如至少十一个、诸如至少十二个、诸如至少十三个、诸如至少十四个、诸如至少十六个、诸如至少十七个、诸如至少十八个、诸如至少十九个、诸如至少二十个或更多个替换，其中一个或多个替换选自：g4k、s7g、k8r、s9i、n16g、s27k、s27r、d32f、d32i、d32l、d32r、d32v、l33h、l33r、l33k、l33v、l33y、s39c、g41p、s42h、d45e、q48d、n61e、t65m、t65w、s66r、s66m、s66w、s66y、s66v、f78l、p91l、s101n、s106l、s106r、s106h、q109e、a112e、t127p、s130a、s130y、t138d、q140v、q140g、a147p、c148a、w154y、t157v、y159a、y159r、g162c、q174n、l177y、s179l和c180a，其中每个位点对应于seqidno:1的多肽的位点，并且其中该变体具有与亲本脱氧核糖核酸酶的氨基酸序列至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％，诸如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％，但少于100％的序列同一性。
在本发明的一个优选的方面，与seqidno:27中所示的脱氧核糖核酸酶相比，该脱氧核糖核酸酶变体包含至少一个，诸如至少两个、诸如至少三个、诸如至少四个、诸如至少五个、诸如至少六个、诸如至少七个、诸如至少八个、诸如至少九个、诸如至少十个、诸如至少十一个、诸如至少十二个、诸如至少十三个、诸如至少十四个、诸如至少十六个、诸如至少十七个、诸如至少十八个、诸如至少十九个、诸如至少二十个或更多个替换，其中一个或多个替换选自：g4k、s7g、k8r、s9i、n16g、s27k、s27r、d32f、d32i、d32l、d32r、d32v、l33h、l33r、l33k、l33v、l33y、s39c、g41p、s42h、d45e、q48d、n61e、t65m、t65w、s66r、s66m、s66w、s66y、s66v、f78l、p91l、s101n、s106l、s106r、s106h、q109e、a112e、t127p、s130a、s130y、t138d、q140v、q140g、a147p、c148a、w154y、t157v、y159a、y159r、g162c、q174n、l177y、s179l和c180a，其中每个位点对应于seqidno:27的多肽的位点，并且其中该变体具有与亲本脱氧核糖核酸酶的氨基酸序列至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％，诸如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％，但少于100％的序列同一性。
在本发明的一个优选的方面，与seqidno:28中所示的脱氧核糖核酸酶相比，该脱氧核糖核酸酶变体包含至少一个，诸如至少两个、诸如至少三个、诸如至少四个、诸如至少五个、诸如至少六个、诸如至少七个、诸如至少八个、诸如至少九个、诸如至少十个、诸如至少十一个、诸如至少十二个、诸如至少十三个、诸如至少十四个、诸如至少十六个、诸如至少十七个、诸如至少十八个、诸如至少十九个、诸如至少二十个或更多个替换，其中一个或多个替换选自：g4k、s7g、k8r、s9i、n16g、s27k、s27r、d32f、d32i、d32l、d32r、d32v、l33h、l33r、l33k、l33v、l33y、s39c、g41p、s42h、d45e、q48d、n61e、t65m、t65w、s66r、s66m、s66w、s66y、s66v、f78l、p91l、s101n、s106l、s106r、s106h、q109e、a112e、t127p、s130a、s130y、t138d、q140v、q140g、a147p、c148a、w154y、t157v、y159a、y159r、g162c、q174n、l177y、s179l和c180a，其中每个位点对应于seqidno:28的多肽的位点，并且其中该变体具有与亲本脱氧核糖核酸酶的氨基酸序列至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％，诸如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％，但少于100％的序列同一性。
优选地，与seqidno:1中所示的脱氧核糖核酸酶相比，该脱氧核糖核酸酶变体包含至少一个，诸如至少两个、诸如至少三个、诸如至少四个、诸如至少五个、诸如至少六个、诸如至少七个、诸如至少八个、诸如至少九个、诸如至少十个、诸如至少十一个、诸如至少十二个、诸如至少十三个、诸如至少十四个、诸如至少十六个、诸如至少十七个、诸如至少十八个、诸如至少十九个、诸如至少二十个或更多个替换，其中一个或多个替换选自：t1i、t1v、g4k、s7g、k8r、s9i、s13y、t22p、s25p、s27l、s27r、d32i、d32l、d32r、d32v、l33r、l33k、s39p、s39c、g41p、s42g、s42h、s42c、q48d、d56i、d56l、s57w、s59v、s59c、n61e、t65l、t65v、t65m、t65w、s66m、s66w、s66y、s66v、v76l、t77y、f78l、p91l、s101n、s106l、s106r、s106h、q109r、a112e、s116d、t127v、s130a、s130y、t138d、q140v、q140g、s144p、a147h、c148a、w154y、t157v、y159a、y159r、k160v、g162s、g162d、g162c、q166d、s167l、q174n、g175d、g175n、l177y、n178d、n178e、s179l、c180a、s181e和s181l，其中每个位点对应于seqidno:1的多肽的位点，并且其中该变体具有与亲本脱氧核糖核酸酶的氨基酸序列至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％，诸如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％，但少于100％的序列同一性。
在本发明的一些优选的方面，与seqidno:1中所示的脱氧核糖核酸酶相比，该脱氧核糖核酸酶变体包含至少一个，诸如至少两个、诸如至少三个、诸如至少四个、诸如至少五个、诸如至少六个、诸如至少七个、诸如至少八个、诸如至少九个、诸如至少十个、诸如至少十一个、诸如至少十二个、诸如至少十三个、诸如至少十四个、诸如至少十六个、诸如至少十七个、诸如至少十八个、诸如至少十九个、诸如至少二十个或更多个替换，其中一个或多个替换选自：t1i、t1v、g4k、s7g、k8r、s9i、s13y、t22p、s25p、s27l、s27r、d32i、d32l、d32r、d32v、l33r、l33k、s39p、s39c、g41p、s42g、s42h、s42c、q48d、d56i、d56l、s57w、s59v、s59c、n61e、t65l、t65v、t65m、t65w、s66m、s66w、s66y、s66v、v76l、t77y、f78l、p91l、s101n、s106l、s106r、s106h、q109r、a112e、s116d、t127v、s130a、s130y、t138d、q140v、q140g、s144p、a147h、c148a、w154y、t157v、y159a、y159r、k160v、g162s、g162d、g162c、q166d、s167l、q174n、g175d、g175n、l177y、n178d、n178e、s179l、c180a、s181e和s181l，其中每个位点对应于seqidno:1的多肽的位点，并且其中该变体具有与包含seqidno:1中所示的氨基酸序列的脱氧核糖核酸酶至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％，诸如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％，但少于100％的序列同一性。
在本发明的一些优选的方面，与seqidno:1中所示的脱氧核糖核酸酶相比，该脱氧核糖核酸酶变体包含至少一个，诸如至少两个、诸如至少三个、诸如至少四个、诸如至少五个、诸如至少六个、诸如至少七个、诸如至少八个、诸如至少九个、诸如至少十个、诸如至少十一个、诸如至少十二个、诸如至少十三个、诸如至少十四个、诸如至少十六个、诸如至少十七个、诸如至少十八个、诸如至少十九个、诸如至少二十个或更多个替换，其中一个或多个替换选自：g4k、s7g、k8r、s9i、n16g、s27k、s27r、d32f、d32i、d32l、d32r、d32v、l33h、l33r、l33k、l33v、l33y、s39c、g41p、s42h、d45e、q48d、n61e、t65m、t65w、s66r、s66m、s66w、s66y、s66v、f78l、p91l、s101n、s106l、s106r、s106h、q109e、a112e、t127p、s130a、s130y、t138d、q140v、q140g、a147p、c148a、w154y、t157v、y159a、y159r、g162c、q174n、l177y、s179l和c180a，其中每个位点对应于seqidno:1的多肽的位点，并且其中该变体具有与seqidno:1的氨基酸序列至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％，诸如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％，但少于100％的序列同一性。
在本发明的一些优选的方面，与seqidno:27中所示的脱氧核糖核酸酶相比，该脱氧核糖核酸酶变体包含至少一个，诸如至少两个、诸如至少三个、诸如至少四个、诸如至少五个、诸如至少六个、诸如至少七个、诸如至少八个、诸如至少九个、诸如至少十个、诸如至少十一个、诸如至少十二个、诸如至少十三个、诸如至少十四个、诸如至少十六个、诸如至少十七个、诸如至少十八个、诸如至少十九个、诸如至少二十个或更多个替换，其中一个或多个替换选自：g4k、s7g、k8r、s9i、n16g、s27k、s27r、d32f、d32i、d32l、d32r、d32v、l33h、l33r、l33k、l33v、l33y、s39c、g41p、s42h、d45e、q48d、n61e、t65m、t65w、s66r、s66m、s66w、s66y、s66v、f78l、p91l、s101n、s106l、s106r、s106h、q109e、a112e、t127p、s130a、s130y、t138d、q140v、q140g、a147p、c148a、w154y、t157v、y159a、y159r、g162c、q174n、l177y、s179l和c180a，其中每个位点对应于seqidno:27的多肽的位点，并且其中该变体具有与seqidno:27的氨基酸序列至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％，诸如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％，但少于100％的序列同一性。
在本发明的一些优选的方面，与seqidno:28中所示的脱氧核糖核酸酶相比，该脱氧核糖核酸酶变体包含至少一个，诸如至少两个、诸如至少三个、诸如至少四个、诸如至少五个、诸如至少六个、诸如至少七个、诸如至少八个、诸如至少九个、诸如至少十个、诸如至少十一个、诸如至少十二个、诸如至少十三个、诸如至少十四个、诸如至少十六个、诸如至少十七个、诸如至少十八个、诸如至少十九个、诸如至少二十个或更多个替换，其中一个或多个替换选自：g4k、s7g、k8r、s9i、n16g、s27k、s27r、d32f、d32i、d32l、d32r、d32v、l33h、l33r、l33k、l33v、l33y、s39c、g41p、s42h、d45e、q48d、n61e、t65m、t65w、s66r、s66m、s66w、s66y、s66v、f78l、p91l、s101n、s106l、s106r、s106h、q109e、a112e、t127p、s130a、s130y、t138d、q140v、q140g、a147p、c148a、w154y、t157v、y159a、y159r、g162c、q174n、l177y、s179l和c180a，其中每个位点对应于seqidno:28的多肽的位点，并且其中该变体具有与seqidno:28的氨基酸序列至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％，诸如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％，但少于100％的序列同一性。
在一些方面，本发明的变体中的替换数为2-20个，例如，2-10个和2-5个，诸如2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、或20个替换。
本发明还涉及洗涤剂组合物，其中变体包括包含seqidno:1的亲本的变体，其中与seqidno:1相比，所述变体包含选自下列的位点处的一个或多个替换：4、7、8、9、27、32、33、39、41、42、48、61、65、66、78、91、101、106、109、112、127、130、138、140、147、148、154、157、159、162、174、177、179和180，所述位点对应于seqidno:1的位点，其中所述变体具有与seqidno:1中所示的氨基酸序列至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或至少95％的序列同一性，其中所述变体具有脱氧核糖核酸酶活性，并且其中与seqidno:1的脱氧核糖核酸酶相比，所述变体具有至少一种改善的特性。
本发明还涉及洗涤剂组合物，其中变体为包含seqidno:27的亲本的变体，其中与seqidno:27相比，所述变体包含选自下列的位点处的一个或多个替换：4、7、8、9、27、32、33、39、41、42、48、61、65、66、78、91、101、106、109、112、127、130、138、140、147、148、154、157、159、162、174、177、179和180，所述位点对应于seqidno:27的位点，其中所述变体具有与seqidno:27中所示的氨基酸序列至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或至少95％的序列同一性，其中所述变体具有脱氧核糖核酸酶活性，并且其中与seqidno:27的脱氧核糖核酸酶相比，所述变体具有至少一种改善的特性。
本发明还涉及洗涤剂组合物，其包含含有seqidno:28的脱氧核糖核酸酶亲本的变体，其中与seqidno:28相比，所述变体包含选自下列的位点处的一个或多个替换：4、7、8、9、27、32、33、39、41、42、48、61、65、66、78、91、101、106、109、112、127、130、138、140、147、148、154、157、159、162、174、177、179和180，所述位点对应于seqidno:28的位点，其中所述变体具有与seqidno:28中所示的氨基酸序列至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或至少95％的序列同一性，其中所述变体具有脱氧核糖核酸酶活性，并且其中与seqidno:28的脱氧核糖核酸酶相比，所述变体具有至少一种改善的特性。
本发明还涉及组合物，其包含清洁助剂和包含seqidno:1的脱氧核糖核酸酶亲本的变体，其中与seqidno:1相比，所述变体包含在选自下列位点的至少一个位点处的替换：1、4、7、8、9、13、22、25、27、32、33、39、41、42、48、56、57、59、61、65、66、76、77、78、91、101、106、109、112、116、127、130、138、140、144、147、148、154、157、159、160、162、166、167、174、175、177、178、179、180和181，所述位点对应于seqidno:1的位点，其中所述变体具有与seqidno:1中所示的氨基酸序列至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或至少95％的序列同一性，其中所述变体具有脱氧核糖核酸酶活性，并且其中与seqidno:1的脱氧核糖核酸酶相比，所述变体具有至少一种改善的特性。本发明还涉及洗涤剂组合物，所述洗涤剂组合物包含选自下列位点处的至少2个、或至少3个、或至少4个、或至少5个、或至少6个、或至少7个、或至少8个、或至少9个、或至少10个、或至少11个、或至少12个、或至少13个、或至少14个、或至少15个、或至少16个、或至少17个、或至少18个、或至少19个替换：1、4、7、8、9、13、22、25、27、32、33、39、41、42、48、56、57、59、61、65、66、76、77、78、91、101、106、109、112、116、127、130、138、140、144、147、148、154、157、159、160、162、166、167、174、175、177、178、179、180和181，所述位点对应于seqidno:1的位点，其中所述变体具有与seqidno:1中所示的氨基酸序列至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或至少95％的序列同一性，其中所述变体具有脱氧核糖核酸酶活性，并且其中与seqidno:1的脱氧核糖核酸酶相比，所述变体具有至少一种改善的特性。
本发明还涉及洗涤剂组合物，其包含脱氧核糖核酸酶变体，其中与seqidno:1相比，所述变体包含至少一个替换，其中所述替换选自：t1i、t1v、g4k、s7g、k8r、s9i、s13y、t22p、s25p、s27l、s27r、d32i、d32l、d32r、d32v、l33r、l33k、s39p、s39c、g41p、s42g、s42h、s42c、q48d、d56i、d56l、s57w、s59v、s59c、t65l、t65v、t65m、t65w、s66m、s66w、s66y、s66v、v76l、t77y、f78l、p91l、s101n、s106l、s106r、s106h、q109r、a112e、s116d、t127v、s130a、s130y、t138d、q140v、q140g、s144p、a147h、c148a、w154y、t157v、y159a、y159r、k160v、g162s、g162d、g162c、q166d、s167l、q174n、g175d、g175n、l177y、n178d、n178e、s179l、c180a、s181e和s181l，其中所述位点对应于seqidno:1的位点，其中所述变体具有与seqidno:1中所示的氨基酸序列至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或至少95％的序列同一性，其中所述变体具有脱氧核糖核酸酶活性，并且其中与seqidno:1的脱氧核糖核酸酶相比，所述变体具有至少一种改善的特性。
本发明还涉及洗涤剂组合物，其包含脱氧核糖核酸酶变体，其中与seqidno:1相比，所述变体包含至少一个替换，其中所述替换选自：g4k、s7g、k8r、s9i、n16g、s27k、s27r、d32f、d32i、d32l、d32r、d32v、l33h、l33r、l33k、l33v、l33y、s39c、g41p、s42h、d45e、q48d、n61e、t65m、t65w、s66r、s66m、s66w、s66y、s66v、f78l、p91l、s101n、s106l、s106r、s106h、q109e、a112e、t127p、s130a、s130y、t138d、q140v、q140g、a147p、c148a、w154y、t157v、y159a、y159r、g162c、q174n、l177y、s179l和c180a，其中所述位点对应于seqidno:1的位点，其中所述变体具有与seqidno:1中所示的氨基酸序列至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或至少95％的序列同一性，其中所述变体具有脱氧核糖核酸酶活性，并且其中与seqidno:1的脱氧核糖核酸酶相比，所述变体具有至少一种改善的特性。
本发明还涉及洗涤剂组合物，其包含脱氧核糖核酸酶变体，其中与seqidno:27相比，所述变体包含至少一个替换，其中所述替换选自：g4k、s7g、k8r、s9i、n16g、s27k、s27r、d32f、d32i、d32l、d32r、d32v、l33h、l33r、l33k、l33v、l33y、s39c、g41p、s42h、d45e、q48d、n61e、t65m、t65w、s66r、s66m、s66w、s66y、s66v、f78l、p91l、s101n、s106l、s106r、s106h、q109e、a112e、t127p、s130a、s130y、t138d、q140v、q140g、a147p、c148a、w154y、t157v、y159a、y159r、g162c、q174n、l177y、s179l和c180a，其中所述位点对应于seqidno:27的位点，其中所述变体具有与seqidno:27中所示的氨基酸序列至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或至少95％的序列同一性，其中所述变体具有脱氧核糖核酸酶活性，并且其中与seqidno:27的脱氧核糖核酸酶相比，所述变体具有至少一种改善的特性。
本发明还涉及洗涤剂组合物，其包含脱氧核糖核酸酶变体，其中与seqidno:28相比，所述变体包含至少一个替换，其中所述替换选自：g4k、s7g、k8r、s9i、n16g、s27k、s27r、d32f、d32i、d32l、d32r、d32v、l33h、l33r、l33k、l33v、l33y、s39c、g41p、s42h、d45e、q48d、n61e、t65m、t65w、s66r、s66m、s66w、s66y、s66v、f78l、p91l、s101n、s106l、s106r、s106h、q109e、a112e、t127p、s130a、s130y、t138d、q140v、q140g、a147p、c148a、w154y、t157v、y159a、y159r、g162c、q174n、l177y、s179l和c180a，其中所述位点对应于seqidno:28的位点，其中所述变体具有与seqidno:28中所示的氨基酸序列至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或至少95％的序列同一性，其中所述变体具有脱氧核糖核酸酶活性，并且其中与seqidno:28的脱氧核糖核酸酶相比，所述变体具有至少一种改善的特性。
本发明还涉及洗涤剂组合物，所述洗涤剂组合物包含脱氧核糖核酸酶变体，其中与seqidno:1相比，所述变体包含至少2个、或至少3个、或至少4个、或至少5个、或至少6个、或至少7个、或至少8个、或至少9个、或至少10个、或至少11个、或至少12个、或至少13个、或至少14个、或至少15个、或至少16个、或至少17个、或至少18个、或至少19个、或至少20个替换，其中所述替换选自：t1i、t1v、g4k、s7g、k8r、s9i、s13y、t22p、s25p、s27l、l27r、d32i、d32l、d32r、d32v、l33r、l33k、s39p、s39c、g41p、s42g、s42h、s42c、q48d、d56i、d56l、s57w、s59v、s59c、n61e、t65l、t65v、t65m、t65w、s66m、s66w、s66y、s66v、v76l、t77y、f78l、p91l、s101n、s106l、s106r、s106h、q109r、a112e、s116d、t127v、s130a、s130y、t138d、q140v、q140g、s144p、a147h、c148a、w154y、t157v、y159a、y159r、k160v、g162s、g162d、g162c、q166d、s167l、q174n、g175d、g175n、l177y、n178d、n178e、s179l、c180a、s181e和s181l，其中所述位点对应于seqidno:1的位点，其中所述变体具有与seqidno:1中所示的氨基酸序列至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或至少95％的序列同一性，其中所述变体具有脱氧核糖核酸酶活性，并且其中与seqidno:1的脱氧核糖核酸酶相比，所述变体具有至少一种改善的特性。
在一些方面，改善的特性为增加的稳定性，例如改善的洗涤剂稳定性、改善的洗涤稳定性和改善的热稳定性。本发明的一些方面涉及当在相关测定法中测试脱氧核糖核酸酶变体的感兴趣的特性时，脱氧核糖核酸酶变体具有高于1的改善系数，其中基准脱氧核糖核酸酶的特性作为值1给出。在一些方面，该特性为稳定性，诸如贮存稳定性。
在一些方面，该改善的特性为改善的洗涤剂稳定性。
在一些方面，该改善的特性为改善的蛋白酶稳定性。
在一些方面，该改善的特性为在亚硫酸盐的存在下改善的稳定性。
当与基准脱氧核糖核酸酶相比，残余活性比(其被定义为
高于1时，根据本发明的变体在测量条件下得到改善，如实施例2、3和4中所示。在一些方面，在测定法a、b或c中的至少一者中，与基准脱氧核糖核酸酶相比，变体得到改善，其中测定法a测量改善的蛋白酶稳定性，测定法b测量在亚硫酸盐存在下的改善的稳定性，并且测定法c测量改善的洗涤剂稳定性，如实施例2、3和4中所示。在一些方面，在测定法a、b或c中的至少两者中，与基准脱氧核糖核酸酶相比，变体得到改善，其中测定法a测量改善的蛋白酶稳定性(实施例3)，测定法b测量在亚硫酸盐存在下的改善的稳定性(实施例4)，并且测定法c测量改善的洗涤剂稳定性(实施例2)，如实施例2、3和4中所示。在一些方面，在所有测定法a、b或c中，与基准脱氧核糖核酸酶相比，变体得到改善，其中测定法a测量改善的蛋白酶稳定性，测定法b测量在亚硫酸盐存在下的改善的稳定性，并且测定法c测量改善的洗涤剂稳定性，如实施例2、3和4中所示。
在一些方面，根据本发明的变体相对于基准脱氧核糖核酸酶具有改善的稳定性，其被测量为高于1.0的残余活性比。
根据用于本发明的优选变体的突变的生产性组合是当相对于基准脱氧核糖核酸酶测量时导致残余活性比高于1的那些，或换一种方式来讲，其中所述突变的组合导致与起始分子(即前体、基准亲本等)相比具有至少一种改善的特性的变体。在一个优选的方面，根据本发明的突变的组合导致相对于基准脱氧核糖核酸酶，脱氧核糖核酸酶变体具有的残余活性比>1.0。在一些方面，与基准脱氧核糖核酸酶相比，根据本发明的变体具有为下列的残余活性比：至少1.1；1.2；1.3；1.4；1.5；1.6；1.7；1.8；1.9；2.0；2.1；2.2；2.3；2.4；2.5；2.6；2.7、2.8；2.9；3.0、3.1；3.2；3.3；3.4；3.5、3.6、3.7、3.8、3.9；4.0、4.1；4.2；4.3；4.4；4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1；5.2；5.3；5.4；5.5、5.6、5.7、5.8、5.9；3.0、6.1；6.2；6.3；6.4；6.5、6.6、6.7、6.8、6.9；7.0、7.1；7.2；7.3；7.4；7.5、7.6、7.7、7.8、7.9；8.0、8.1；8.2；8.3；8.4；8.5、8.6、8.7、8.8、8.9；9.0、9.1；9.2；9.3；9.4；9.5、9.6、9.7、9.8、9.9；10.0、10.1；10.2；10.3；10.4；10.5、10.6、10.7、10.8、10.9；12、15、16、20、25或30。
在一些优选的方面，脱氧核糖核酸酶变体可包含在一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、十一个、十二个、十三个、十四个、十五个、十六个、十七个、十八个、十九个、二十个或更多个位点处的改变，所述位点选自：1、4、7、8、9、13、22、25、27、32、33、39、41、42、48、56、57、59、61、65、66、76、77、78、91、101、106、109、112、116、127、130、138、140、144、147、148、154、157、159、160、162、166、167、174、175、177、178、179、180和181，其中每个位点对应于seqidno:1的多肽的位点，其中所述变体具有与seqidno:1中所示的多肽至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％，诸如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％，但少于100％的序列同一性，其中每个位点对应于seqidno:1中所示的多肽的位点(根据seqidno:1进行编号)，并且其中与亲本脱氧核糖核酸酶(例如，包含具有seqidno:1中所示的氨基酸序列的多肽的脱氧核糖核酸酶)相比，所述变体具有至少一种改善的特性，优选地该改善的特性为改善的稳定性，其中稳定性如实施例2、3和4中所述测试。
在一些优选的方面，该脱氧核糖核酸酶变体包含至少一个替换，诸如至少两个替换、诸如至少三个、诸如至少四个、诸如至少五个、诸如至少六个、诸如至少七个、诸如至少八个、诸如至少九个、诸如至少十个、诸如至少十一个、诸如至少十二个、诸如至少十三个、诸如至少十四个、诸如至少十六个、诸如至少十七个、诸如至少十八个、诸如至少十九个、诸如至少二十个或更多个替换(与seqidno:1相比)，其中该替换选自：t1i、t1v、g4k、s7g、k8r、s9i、s13y、t22p、s25p、s27l、l27r、d32i、d32l、d32r、d32v、l33r、l33k、s39p、s39c、g41p、s42g、s42h、s42c、q48d、d56i、d56l、s57w、s59v、s59c、n61e、t65l、t65v、t65m、t65w、s66m、s66w、s66y、s66v、v76l、t77y、f78l、p91l、s101n、s106l、s106r、s106h、q109r、a112e、s116d、t127v、s130a、s130y、t138d、q140v、q140g、s144p、a147h、c148a、w154y、t157v、y159a、y159r、k160v、g162s、g162d、g162c、q166d、s167l、q174n、g175d、g175n、l177y、n178d、n178e、s179l、c180a、s181e和s181l，其中该变体具有与seqidno:1中所示的多肽至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％，诸如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％，但少于100％的序列同一性，其中每个位点对应于seqidno:1中所示的多肽的位点(根据seqidno:1进行编号)，并且其中与亲本脱氧核糖核酸酶(例如，包含具有seqidno:1中所示的氨基酸序列的多肽的脱氧核糖核酸酶)相比，所述变体具有至少一种改善的特性，优选地该改善的特性为改善的稳定性，其中稳定性如实施例2、3和4中所述测试。
在一些优选的方面，用于本发明的该脱氧核糖核酸酶变体包含至少一个替换，诸如至少两个替换、诸如至少三个、诸如至少四个、诸如至少五个、诸如至少六个、诸如至少七个、诸如至少八个、诸如至少九个、诸如至少十个、诸如至少十一个、诸如至少十二个、诸如至少十三个、诸如至少十四个、诸如至少十六个、诸如至少十七个、诸如至少十八个、诸如至少十九个、诸如至少二十个或更多个替换(与seqidno:27相比)，其中该替换选自：g4k、s7g、k8r、s9i、n16g、s27k、s27r、d32f、d32i、d32l、d32r、d32v、l33h、l33r、l33k、l33v、l33y、s39c、g41p、s42h、d45e、q48d、n61e、t65m、t65w、s66r、s66m、s66w、s66y、s66v、f78l、p91l、s101n、s106l、s106r、s106h、q109e、a112e、t127p、s130a、s130y、t138d、q140v、q140g、a147p、c148a、w154y、t157v、y159a、y159r、g162c、q174n、l177y、s179l和c180a，其中该变体具有与seqidno:27中所示的多肽至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％，诸如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％，但少于100％的序列同一性，其中每个位点对应于seqidno:27中所示的多肽的位点(根据seqidno:27进行编号)，并且其中与亲本脱氧核糖核酸酶(例如，包含具有seqidno:27中所示的氨基酸序列的多肽的脱氧核糖核酸酶)相比，所述变体具有至少一种改善的特性，优选地该改善的特性为改善的稳定性，其中稳定性如实施例2、3和4中所述测试。
在一些优选的方面，用于本发明的该脱氧核糖核酸酶变体包含至少一个替换，诸如至少两个替换、诸如至少三个、诸如至少四个、诸如至少五个、诸如至少六个、诸如至少七个、诸如至少八个、诸如至少九个、诸如至少十个、诸如至少十一个、诸如至少十二个、诸如至少十三个、诸如至少十四个、诸如至少十六个、诸如至少十七个、诸如至少十八个、诸如至少十九个、诸如至少二十个或更多个替换(与seqidno:28相比)，其中该替换选自：g4k、s7g、k8r、s9i、n16g、s27k、s27r、d32f、d32i、d32l、d32r、d32v、l33h、l33r、l33k、l33v、l33y、s39c、g41p、s42h、d45e、q48d、n61e、t65m、t65w、s66r、s66m、s66w、s66y、s66v、f78l、p91l、s101n、s106l、s106r、s106h、q109e、a112e、t127p、s130a、s130y、t138d、q140v、q140g、a147p、c148a、w154y、t157v、y159a、y159r、g162c、q174n、l177y、s179l和c180a，其中该变体具有与seqidno:27中所示的多肽至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％，诸如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％，但少于100％的序列同一性，其中每个位点对应于seqidno:27中所示的多肽的位点(根据seqidno:27进行编号)，并且其中与亲本脱氧核糖核酸酶(例如，包含具有seqidno:27中所示的氨基酸序列的多肽的脱氧核糖核酸酶)相比，所述变体具有至少一种改善的特性，优选地该改善的特性为改善的稳定性，其中稳定性如实施例2、3和4中所述测试。
在一些优选的方面，本发明的脱氧核糖核酸酶变体包含至少一个替换，诸如至少两个替换、诸如至少三个、诸如至少四个、诸如至少五个、诸如至少六个、诸如至少七个、诸如至少八个、诸如至少九个、诸如至少十个、诸如至少十一个、诸如至少十二个、诸如至少十三个、诸如至少十四个、诸如至少十六个、诸如至少十七个、诸如至少十八个、诸如至少十九个、诸如至少二十个或更多个替换(与seqidno:28相比)，其中该替换选自：g4k、s7g、k8r、s9i、n16g、s27k、s27r、d32f、d32i、d32l、d32r、d32v、l33h、l33r、l33k、l33v、l33y、s39c、g41p、s42h、d45e、q48d、n61e、t65m、t65w、s66r、s66m、s66w、s66y、s66v、f78l、p91l、s101n、s106l、s106r、s106h、q109e、a112e、t127p、s130a、s130y、t138d、q140v、q140g、a147p、c148a、w154y、t157v、y159a、y159r、g162c、q174n、l177y、s179l和c180a，其中该变体具有与seqidno:28中所示的多肽至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％，诸如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％，但少于100％的序列同一性，其中每个位点对应于seqidno:28中所示的多肽的位点(根据seqidno:28进行编号)，并且其中与亲本脱氧核糖核酸酶(例如，包含具有seqidno:28中所示的氨基酸序列的多肽的脱氧核糖核酸酶)相比，所述变体具有至少一种改善的特性，优选地该改善的特性为改善的稳定性，其中稳定性如实施例2、3和4中所述测试。
在一些方面，与亲本相比或与具有seqidno：1中所示的多肽的脱氧核糖核酸酶相比，该脱氧核糖核酸酶变体具有改善的稳定性，测量为残余活性比。
在一些优选的方面，该脱氧核糖核酸酶变体包含在一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、十一个、十二个、十三个、十四个、十五个、十六个、十七个、十八个、十九个、二十个或更多个位点处的改变，所述位点选自：1、4、7、8、9、13、22、25、27、32、33、39、41、42、48、56、57、59、61、65、66、76、77、78、91、101、106、109、112、116、127、130、138、140、144、147、148、154、157、159、160、162、166、167、174、175、177、178、179、180和181，其中每个位点对应于seqidno:1的多肽的位点，其中与亲本脱氧核糖核酸酶(例如，包含具有seqidno:1中所示的氨基酸序列的多肽的脱氧核糖核酸酶)相比，每个改变提供具有改善的稳定性的脱氧核糖核酸酶变体，该改善的稳定性测量为以下残余活性比：至少1.05，诸如1.08、诸如1.1、诸如1.15、诸如1.2、诸如1.25、诸如1.3、诸如1.4、诸如1.5、诸如1.6、诸如1.7、诸如1.8、诸如1.9、诸如2、诸如3、诸如4、诸如5或诸如至少10，其中该变体具有与seqidno:1中所示的多肽至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％，诸如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％，但少于100％的序列同一性，其中每个位点对应于seqidno:1中所示的多肽的位点(根据seqidno:1进行编号)。
在一些优选的方面，用于本发明的脱氧核糖核酸酶变体包含在一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、十一个、十二个、十三个、十四个、十五个、十六个、十七个、十八个、十九个、二十个或更多个位点处的改变，所述位点选自：4、7、8、9、27、32、33、39、41、42、48、61、65、66、78、91、101、106、109、112、127、130、138、140、147、148、154、157、159、162、174、177、179和180，其中每个位点对应于seqidno:1的多肽的位点，其中与亲本脱氧核糖核酸酶(例如，包含具有seqidno:1中所示的氨基酸序列的多肽的脱氧核糖核酸酶)相比，每个改变提供具有改善的稳定性的脱氧核糖核酸酶变体，该改善的稳定性测量为以下残余活性比：至少1.05，诸如1.08、诸如1.1、诸如1.15、诸如1.2、诸如1.25、诸如1.3、诸如1.4、诸如1.5、诸如1.6、诸如1.7、诸如1.8、诸如1.9、诸如2、诸如3、诸如4、诸如5或诸如至少10，其中该变体具有与seqidno:1中所示的多肽至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％，诸如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％，但少于100％的序列同一性，其中每个位点对应于seqidno:1中所示的多肽的位点(根据seqidno:1进行编号)。
在一些优选的方面，本发明的脱氧核糖核酸酶变体包含在一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、十一个、十二个、十三个、十四个、十五个、十六个、十七个、十八个、十九个、二十个或更多个位点处的改变，所述位点选自：4、7、8、9、27、32、33、39、41、42、48、61、65、66、78、91、101、106、109、112、127、130、138、140、147、148、154、157、159、162、174、177、179和180，其中每个位点对应于seqidno:27的多肽的位点，其中与亲本脱氧核糖核酸酶(例如，包含具有如seqidno:27中所示的氨基酸序列的多肽的脱氧核糖核酸酶)相比，每个改变提供具有改善的稳定性的脱氧核糖核酸酶变体，该改善的稳定性测量为以下残余活性比：至少1.05，诸如1.08、诸如1.1、诸如1.15、诸如1.2、诸如1.25、诸如1.3、诸如1.4、诸如1.5、诸如1.6、诸如1.7、诸如1.8、诸如1.9、诸如2、诸如3、诸如4、诸如5或诸如至少10，其中该变体具有与seqidno:27中所示的多肽至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％，诸如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％，但少于100％的序列同一性，其中每个位点对应于seqidno:27中所示的多肽的位点(根据seqidno:27进行编号)。
在一些优选的方面，用于本发明的脱氧核糖核酸酶变体包含在一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、十一个、十二个、十三个、十四个、十五个、十六个、十七个、十八个、十九个、二十个或更多个位点处的改变，所述位点选自：4、7、8、9、27、32、33、39、41、42、48、61、65、66、78、91、101、106、109、112、127、130、138、140、147、148、154、157、159、162、174、177、179和180，其中每个位点对应于seqidno:28的多肽的位点，其中与亲本脱氧核糖核酸酶(例如，包含具有如seqidno:28中所示的氨基酸序列的多肽的脱氧核糖核酸酶)相比，每个改变提供具有改善的稳定性的脱氧核糖核酸酶变体，该改善的稳定性测量为以下残余活性比：至少1.05，诸如1.08、诸如1.1、诸如1.15、诸如1.2、诸如1.25、诸如1.3、诸如1.4、诸如1.5、诸如1.6、诸如1.7、诸如1.8、诸如1.9、诸如2、诸如3、诸如4、诸如5或诸如至少10，其中该变体具有与seqidno:28中所示的多肽至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％，诸如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％，但少于100％的序列同一性，其中每个位点对应于seqidno:28中所示的多肽的位点(根据seqidno:28进行编号)。
在一些优选的方面，该脱氧核糖核酸酶变体包含至少一个替换，诸如至少两个替换、诸如至少三个替换、诸如至少四个替换、诸如至少五个替换、诸如至少六个替换、诸如至少七个替换、诸如至少八个替换、诸如至少九个替换、诸如至少十个替换、诸如至少十一个替换、诸如至少十二个替换、诸如至少十三个替换、诸如至少十四个替换、诸如至少十六个替换、诸如至少十七个、诸如至少十八个、诸如至少十九个、诸如至少二十个或更多个替换(与seqidno:1相比)，其中该替换选自：t1i、t1v、g4k、s7g、k8r、s9i、s13y、t22p、s25p、s27l、l27r、d32i、d32l、d32r、d32v、l33r、l33k、s39p、s39c、g41p、s42g、s42h、s42c、q48d、d56i、d56l、s57w、s59v、s59c、n61e、t65l、t65v、t65m、t65w、s66m、s66w、s66y、s66v、v76l、t77y、f78l、p91l、s101n、s106l、s106r、s106h、q109r、a112e、s116d、t127v、s130a、s130y、t138d、q140v、q140g、s144p、a147h、c148a、w154y、t157v、y159a、y159r、k160v、g162s、g162d、g162c、q166d、s167l、q174n、g175d、g175n、l177y、n178d、n178e、s179l、c180a、s181e和s181l，其中与亲本脱氧核糖核酸酶(例如，包含具有seqidno:1中所示的氨基酸序列的多肽的脱氧核糖核酸酶)相比，每个替换提供具有稳定性的增加的脱氧核糖核酸酶变体，该稳定性的增加测量为以下残余活性比：至少1.05，诸如1.08、诸如1.1、诸如1.15、诸如1.2、诸如1.25、诸如1.3、诸如1.4、诸如1.5、诸如1.6、诸如1.7、诸如1.8、诸如1.9、诸如2、诸如3、诸如4、诸如5或诸如至少10，其中该变体具有与seqidno:1中所示的多肽至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％，诸如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％，但少于100％的序列同一性，其中每个位点对应于seqidno:1中所示的多肽的位点(根据seqidno:1进行编号)。
在一些优选的方面，用于本发明的脱氧核糖核酸酶变体包含至少一个替换，诸如至少两个替换、诸如至少三个替换、诸如至少四个替换、诸如至少五个替换、诸如至少六个替换、诸如至少七个替换、诸如至少八个替换、诸如至少九个替换、诸如至少十个替换、诸如至少十一个替换、诸如至少十二个替换、诸如至少十三个替换、诸如至少十四个替换、诸如至少十六个替换、诸如至少十七个、诸如至少十八个、诸如至少十九个、诸如至少二十个或更多个替换(与seqidno:1相比)，其中该替换选自：g4k、s7g、k8r、s9i、n16g、s27k、s27r、d32f、d32i、d32l、d32r、d32v、l33h、l33r、l33k、l33v、l33y、s39c、g41p、s42h、d45e、q48d、n61e、t65m、t65w、s66r、s66m、s66w、s66y、s66v、f78l、p91l、s101n、s106l、s106r、s106h、q109e、a112e、t127p、s130a、s130y、t138d、q140v、q140g、a147p、c148a、w154y、t157v、y159a、y159r、g162c、q174n、l177y、s179l和c180a，其中与亲本脱氧核糖核酸酶(例如，包含具有seqidno:1中所示的氨基酸序列的多肽的脱氧核糖核酸酶)相比，每个替换提供具有稳定性的增加的脱氧核糖核酸酶变体，该稳定性的增加测量为以下残余活性比：至少1.05，诸如1.08、诸如1.1、诸如1.15、诸如1.2、诸如1.25、诸如1.3、诸如1.4、诸如1.5、诸如1.6、诸如1.7、诸如1.8、诸如1.9、诸如2、诸如3、诸如4、诸如5或诸如至少10，其中该变体具有与seqidno:1中所示的多肽至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％，诸如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％，但少于100％的序列同一性，其中每个位点对应于seqidno:1中所示的多肽的位点(根据seqidno:1进行编号)。
在一些优选的方面，该脱氧核糖核酸酶变体包含至少一个替换，诸如至少两个替换、诸如至少三个替换、诸如至少四个替换、诸如至少五个替换、诸如至少六个替换、诸如至少七个替换、诸如至少八个替换、诸如至少九个替换、诸如至少十个替换、诸如至少十一个替换、诸如至少十二个替换、诸如至少十三个替换、诸如至少十四个替换、诸如至少十六个替换、诸如至少十七个、诸如至少十八个、诸如至少十九个、诸如至少二十个或更多个替换(与seqidno:27相比)，其中该替换选自：g4k、s7g、k8r、s9i、n16g、s27k、s27r、d32f、d32i、d32l、d32r、d32v、l33h、l33r、l33k、l33v、l33y、s39c、g41p、s42h、d45e、q48d、n61e、t65m、t65w、s66r、s66m、s66w、s66y、s66v、f78l、p91l、s101n、s106l、s106r、s106h、q109e、a112e、t127p、s130a、s130y、t138d、q140v、q140g、a147p、c148a、w154y、t157v、y159a、y159r、g162c、q174n、l177y、s179l和c180a，其中与亲本脱氧核糖核酸酶(例如，包含具有seqidno:1中所示的氨基酸序列的多肽的脱氧核糖核酸酶)相比，每个替换提供具有稳定性的增加的脱氧核糖核酸酶变体，该稳定性的增加测量为以下残余活性比：至少1.05，诸如1.08、诸如1.1、诸如1.15、诸如1.2、诸如1.25、诸如1.3、诸如1.4、诸如1.5、诸如1.6、诸如1.7、诸如1.8、诸如1.9、诸如2、诸如3、诸如4、诸如5或诸如至少10，其中该变体具有与seqidno:27中所示的多肽至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％，诸如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％，但少于100％的序列同一性，其中每个位点对应于seqidno:27中所示的多肽的位点(根据seqidno:27进行编号)。
在一些优选的方面，该脱氧核糖核酸酶变体包含至少一个替换，诸如至少两个替换、诸如至少三个替换、诸如至少四个替换、诸如至少五个替换、诸如至少六个替换、诸如至少七个替换、诸如至少八个替换、诸如至少九个替换、诸如至少十个替换、诸如至少十一个替换、诸如至少十二个替换、诸如至少十三个替换、诸如至少十四个替换、诸如至少十六个替换、诸如至少十七个、诸如至少十八个、诸如至少十九个、诸如至少二十个或更多个替换(与seqidno:28相比)，其中该替换选自：g4k、s7g、k8r、s9i、n16g、s27k、s27r、d32f、d32i、d32l、d32r、d32v、l33h、l33r、l33k、l33v、l33y、s39c、g41p、s42h、d45e、q48d、n61e、t65m、t65w、s66r、s66m、s66w、s66y、s66v、f78l、p91l、s101n、s106l、s106r、s106h、q109e、a112e、t127p、s130a、s130y、t138d、q140v、q140g、a147p、c148a、w154y、t157v、y159a、y159r、g162c、q174n、l177y、s179l和c180a，其中与亲本脱氧核糖核酸酶(例如，包含具有如seqidno:28中所示的氨基酸序列的多肽的脱氧核糖核酸酶)相比，每个替换提供具有稳定性的增加的脱氧核糖核酸酶变体，该稳定性的增加测量为以下残余活性比：至少1.05，诸如1.08、诸如1.1、诸如1.15、诸如1.2、诸如1.25、诸如1.3、诸如1.4、诸如1.5、诸如1.6、诸如1.7、诸如1.8、诸如1.9、诸如2、诸如3、诸如4、诸如5或诸如至少10，并且其中该变体具有与seqidno:28中所示的多肽至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％，诸如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％，但少于100％的序列同一性，其中每个位点对应于seqidno:28中所示的多肽的位点(根据seqidno:28进行编号)。
变体优选地包含保守基序[d/m/l][s/t]gysr[d/n](seqidno:25)或asxnrskg(seqidno:26)，这些保守基序是如下文描述的gys进化枝的脱氧核糖核酸酶间所共有的。如“定义”中所解释的，进化枝包括一组多肽，其基于追踪到共同祖先的同源特征而聚类在一起。形成例如系统发育树中所示的一个进化枝的一组多肽通常共享共同特性，并且与不在进化枝中的其他多肽相比更为密切相关。
因此，本发明的一个优选的方面涉及包含脱氧核糖核酸酶亲本的变体的洗涤剂组合物，其中所述变体包含基序[d/m/l][s/t]gysr[d/n](seqidno:25)或asxnrskg(seqidno:26)中的一者或两者，并且其中所述变体包含在选自1、4、7、8、9、13、22、25、27、32、33、39、41、42、48、56、57、59、61、65、66、76、77、78、91、101、112、106、109、116、127、130、138、140、144、147、148、154、157、159、160、162、166、167、174、175、177、178、179、180和181中的一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、十一个、十二个、十三个、十四个、十五个、十六个、十七个、十八个、十九个、二十个或更多个位点处的改变，其中每个位点对应于seqidno:1的多肽的位点，其中与seqidno:1中所示的多肽相比，每个改变提供具有至少一种改善的特性的脱氧核糖核酸酶变体，其中该变体具有与seqidno:1中所示的多肽至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％，诸如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％，但少于100％的序列同一性，并且其中每个位点对应于seqidno:1中所示的多肽的位点(根据seqidno:1进行编号)。
本发明的一个优选的方面涉及包含脱氧核糖核酸酶亲本的变体的洗涤剂组合物，其中所述变体包含基序[d/m/l][s/t]gysr[d/n](seqidno:25)或asxnrskg(seqidno:26)中的一者或两者，并且其中所述变体包含在选自4、7、8、9、27、32、33、39、41、42、48、61、65、66、78、91、101、106、109、112、127、130、138、140、147、148、154、157、159、162、174、177、179和180中的一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、十一个、十二个、十三个、十四个、十五个、十六个、十七个、十八个、十九个、二十个或更多个位点处的改变，其中每个位点对应于seqidno:1的多肽的位点，其中与seqidno:1中所示的多肽相比，每个改变提供具有至少一种改善的特性的脱氧核糖核酸酶变体，其中该变体具有与seqidno:1中所示的多肽至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％，诸如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％，但少于100％的序列同一性，并且其中每个位点对应于seqidno:1中所示的多肽的位点(根据seqidno:1进行编号)。
本发明的一个优选的方面涉及包含脱氧核糖核酸酶亲本的变体的洗涤剂组合物，其中所述变体包含基序[d/m/l][s/t]gysr[d/n](seqidno:25)或asxnrskg(seqidno:26)中的一者或两者，并且其中所述变体包含在选自4、7、8、9、27、32、33、39、41、42、48、61、65、66、78、91、101、106、109、112、127、130、138、140、147、148、154、157、159、162、174、177、179和180中的一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、十一个、十二个、十三个、十四个、十五个、十六个、十七个、十八个、十九个、二十个或更多个位点处的改变，其中每个位点对应于seqidno:27的多肽的位点，其中与seqidno:27中所示的多肽相比，每个改变提供具有至少一种改善的特性的脱氧核糖核酸酶变体，其中该变体具有与seqidno:27中所示的多肽至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％，诸如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％，但少于100％的序列同一性，并且其中每个位点对应于seqidno:27中所示的多肽的位点(根据seqidno:27进行编号)。
本发明的一个优选的方面涉及包含脱氧核糖核酸酶亲本的变体的洗涤剂组合物，其中所述变体包含基序[d/m/l][s/t]gysr[d/n](seqidno:25)或asxnrskg(seqidno:26)中的一者或两者，并且其中所述变体包含在选自4、7、8、9、27、32、33、39、41、42、48、61、65、66、78、91、101、106、109、112、127、130、138、140、147、148、154、157、159、162、174、177、179和180中的一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、十一个、十二个、十三个、十四个、十五个、十六个、十七个、十八个、十九个、二十个或更多个位点处的改变，其中每个位点对应于seqidno:28的多肽的位点，其中与seqidno:28中所示的多肽相比，每个改变提供具有至少一种改善的特性的脱氧核糖核酸酶变体，其中该变体具有与seqidno:28中所示的多肽至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％，诸如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％，但少于100％的序列同一性，并且其中每个位点对应于seqidno:28中所示的多肽的位点(根据seqidno:28进行编号)。
本发明的一个优选的方面涉及包含脱氧核糖核酸酶亲本的变体的洗涤剂组合物，其中所述变体包含基序[d/m/l][s/t]gysr[d/n](seqidno:25)或asxnrskg(seqidno:26)中的一者或两者，其中所述变体包含至少一个替换，诸如至少两个替换、诸如至少三个、诸如至少四个、诸如至少五个、诸如至少六个、诸如至少七个、诸如至少八个、诸如至少九个、诸如至少十个、诸如至少十一个、诸如至少十二个、诸如至少十三个、诸如至少十四个、诸如至少十六个、诸如至少十七个、诸如至少十八个、诸如至少十九个、诸如至少二十个或更多个替换(与seqidno:1相比)，其中该替换选自：t1i、t1v、g4k、s7g、k8r、s9i、s13y、t22p、s25p、s27l、s27r、d32i、d32l、d32r、d32v、l33r、l33k、s39p、s39c、g41p、s42g、s42h、s42c、q48d、d56i、d56l、s57w、s59v、s59c、n61e、t65l、t65v、t65m、t65w、s66m、s66w、s66y、s66v、v76l、t77y、f78l、p91l、s101n、s106l、s106r、s106h、q109r、a112e、s116d、t127v、s130a、s130y、t138d、q140v、q140g、s144p、a147h、c148a、w154y、t157v、y159a、y159r、k160v、g162s、g162d、g162c、q166d、s167l、q174n、g175d、g175n、l177y、n178d、n178e、s179l、c180a、s181e和s181l，其中与seqidno:1中所示的多肽相比，每个替换提供具有至少一种改善的特性的脱氧核糖核酸酶变体，其中该变体具有与seqidno:1中所示的多肽至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％，诸如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％，但少于100％的序列同一性，并且其中每个位点对应于seqidno:1中所示的多肽的位点(根据seqidno:1进行编号)。
本发明的一个优选的方面涉及包含脱氧核糖核酸酶亲本的变体的洗涤剂组合物，其中所述变体包含基序[d/m/l][s/t]gysr[d/n](seqidno:25)或asxnrskg(seqidno:26)中的一者或两者，其中所述变体包含至少一个替换，诸如至少两个替换、诸如至少三个、诸如至少四个、诸如至少五个、诸如至少六个、诸如至少七个、诸如至少八个、诸如至少九个、诸如至少十个、诸如至少十一个、诸如至少十二个、诸如至少十三个、诸如至少十四个、诸如至少十六个、诸如至少十七个、诸如至少十八个、诸如至少十九个、诸如至少二十个或更多个替换(与seqidno:1相比)，其中该替换选自：g4k、s7g、k8r、s9i、n16g、s27k、s27r、d32f、d32i、d32l、d32r、d32v、l33h、l33r、l33k、l33v、l33y、s39c、g41p、s42h、d45e、q48d、n61e、t65m、t65w、s66r、s66m、s66w、s66y、s66v、f78l、p91l、s101n、s106l、s106r、s106h、q109e、a112e、t127p、s130a、s130y、t138d、q140v、q140g、a147p、c148a、w154y、t157v、y159a、y159r、g162c、q174n、l177y、s179l和c180a，其中与seqidno:1中所示的多肽相比，每个替换提供具有至少一种改善的特性的脱氧核糖核酸酶变体，其中该变体具有与seqidno:1中所示的多肽至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％，诸如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％，但少于100％的序列同一性，并且其中每个位点对应于seqidno:1中所示的多肽的位点(根据seqidno:1进行编号)。
本发明的一个优选的方面涉及包含脱氧核糖核酸酶亲本的变体的洗涤剂组合物，其中所述变体包含基序[d/m/l][s/t]gysr[d/n](seqidno:25)或asxnrskg(seqidno:26)中的一者或两者，其中所述变体包含至少一个替换，诸如至少两个替换、诸如至少三个、诸如至少四个、诸如至少五个、诸如至少六个、诸如至少七个、诸如至少八个、诸如至少九个、诸如至少十个、诸如至少十一个、诸如至少十二个、诸如至少十三个、诸如至少十四个、诸如至少十六个、诸如至少十七个、诸如至少十八个、诸如至少十九个、诸如至少二十个或更多个替换(与seqidno:27相比)，其中该替换选自：g4k、s7g、k8r、s9i、n16g、s27k、s27r、d32f、d32i、d32l、d32r、d32v、l33h、l33r、l33k、l33v、l33y、s39c、g41p、s42h、d45e、q48d、n61e、t65m、t65w、s66r、s66m、s66w、s66y、s66v、f78l、p91l、s101n、s106l、s106r、s106h、q109e、a112e、t127p、s130a、s130y、t138d、q140v、q140g、a147p、c148a、w154y、t157v、y159a、y159r、g162c、q174n、l177y、s179l和c180a，其中与seqidno:27中所示的多肽相比，每个替换提供具有至少一种改善的特性的脱氧核糖核酸酶变体，其中该变体具有与seqidno:27中所示的多肽至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％，诸如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％，但少于100％的序列同一性，并且其中每个位点对应于seqidno:27中所示的多肽的位点(根据seqidno:27进行编号)。
本发明的一个优选的方面涉及包含脱氧核糖核酸酶亲本的变体的洗涤剂组合物，其中所述变体包含基序[d/m/l][s/t]gysr[d/n](seqidno:25)或asxnrskg(seqidno:26)中的一者或两者，其中所述变体包含至少一个替换，诸如至少两个替换、诸如至少三个、诸如至少四个、诸如至少五个、诸如至少六个、诸如至少七个、诸如至少八个、诸如至少九个、诸如至少十个、诸如至少十一个、诸如至少十二个、诸如至少十三个、诸如至少十四个、诸如至少十六个、诸如至少十七个、诸如至少十八个、诸如至少十九个、诸如至少二十个或更多个替换(与seqidno:28相比)，其中该替换选自：g4k、s7g、k8r、s9i、n16g、s27k、s27r、d32f、d32i、d32l、d32r、d32v、l33h、l33r、l33k、l33v、l33y、s39c、g41p、s42h、d45e、q48d、n61e、t65m、t65w、s66r、s66m、s66w、s66y、s66v、f78l、p91l、s101n、s106l、s106r、s106h、q109e、a112e、t127p、s130a、s130y、t138d、q140v、q140g、a147p、c148a、w154y、t157v、y159a、y159r、g162c、q174n、l177y、s179l和c180a，其中与seqidno:28中所示的多肽相比，每个替换提供具有至少一种改善的特性的脱氧核糖核酸酶变体，其中该变体具有与seqidno:28中所示的多肽至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％，诸如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％，但少于100％的序列同一性，并且其中每个位点对应于seqidno:28中所示的多肽的位点(根据seqidno:28进行编号)。
本发明的一个优选的方面涉及包含脱氧核糖核酸酶亲本的变体的洗涤剂组合物，其中所述变体包含基序[d/m/l][s/t]gysr[d/n](seqidno:25)或asxnrskg(seqidno:26)中的一者或两者，并且其中该变体包含在选自1、4、7、8、9、13、22、25、27、32、33、39、41、42、48、56、57、59、61、65、66、76、77、78、91、101、112、106、109、116、127、130、138、140、144、147、148、154、157、159、160、162、166、167、174、175、177、178、179、180和181中的一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、十一个、十二个、十三个、十四个、十五个、十六个、十七个、十八个、十九个、二十个或更多个位点处的改变，其中每个位点对应于seqidno:1的多肽的位点，其中与亲本脱氧核糖核酸酶(例如，包含具有seqidno:1中所示的氨基酸序列的多肽的脱氧核糖核酸酶)相比，每个替换提供具有稳定性增加的脱氧核糖核酸酶变体，该稳定性增加测量为以下残余活性比：至少1.05，诸如1.08、诸如1.1、诸如1.15、诸如1.2、诸如1.25、诸如1.3、诸如1.4、诸如1.5、诸如1.6、诸如1.7、诸如1.8、诸如1.9、诸如2、诸如3、诸如4、诸如5或诸如至少10，其中该变体具有与seqidno:1中所示的多肽至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％，诸如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％，但少于100％的序列同一性，其中每个位点对应于seqidno:1中所示的多肽的位点(根据seqidno:1进行编号)。
本发明的一个优选的方面涉及包含脱氧核糖核酸酶亲本的变体的洗涤剂组合物，其中所述变体包含基序[d/m/l][s/t]gysr[d/n](seqidno:25)或asxnrskg(seqidno:26)中的一者或两者，并且其中该变体包含在选自4、7、8、9、27、32、33、39、41、42、48、61、65、66、78、91、101、106、109、112、127、130、138、140、147、148、154、157、159、162、174、177、179和180中的一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、十一个、十二个、十三个、十四个、十五个、十六个、十七个、十八个、十九个、二十个或更多个位点处的改变，其中每个位点对应于seqidno:1的多肽的位点，其中与亲本脱氧核糖核酸酶(例如，包含具有seqidno:1中所示的氨基酸序列的多肽的脱氧核糖核酸酶)相比，每个替换提供具有稳定性增加的脱氧核糖核酸酶变体，该稳定性增加测量为以下残余活性比：至少1.05，诸如1.08、诸如1.1、诸如1.15、诸如1.2、诸如1.25、诸如1.3、诸如1.4、诸如1.5、诸如1.6、诸如1.7、诸如1.8、诸如1.9、诸如2、诸如3、诸如4、诸如5或诸如至少10，其中该变体具有与seqidno:1中所示的多肽至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％，诸如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％，但少于100％的序列同一性，其中每个位点对应于seqidno:1中所示的多肽的位点(根据seqidno:1进行编号)。
本发明的一个优选的方面涉及包含脱氧核糖核酸酶亲本的变体的洗涤剂组合物，其中所述变体包含基序[d/m/l][s/t]gysr[d/n](seqidno:25)或asxnrskg(seqidno:26)中的一者或两者，并且其中该变体包含在选自4、7、8、9、27、32、33、39、41、42、48、61、65、66、78、91、101、106、109、112、127、130、138、140、147、148、154、157、159、162、174、177、179和180中的一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、十一个、十二个、十三个、十四个、十五个、十六个、十七个、十八个、十九个、二十个或更多个位点处的改变，其中每个位点对应于seqidno:27的多肽的位点，其中与亲本脱氧核糖核酸酶(例如，包含具有seqidno:27中所示的氨基酸序列的多肽的脱氧核糖核酸酶)相比，每个替换提供具有稳定性增加的脱氧核糖核酸酶变体，该稳定性增加测量为以下残余活性比：至少1.05，诸如1.08、诸如1.1、诸如1.15、诸如1.2、诸如1.25、诸如1.3、诸如1.4、诸如1.5、诸如1.6、诸如1.7、诸如1.8、诸如1.9、诸如2、诸如3、诸如4、诸如5或诸如至少10，其中该变体具有与seqidno:27中所示的多肽至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％，诸如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％，但少于100％的序列同一性，其中每个位点对应于seqidno:27中所示的多肽的位点(根据seqidno:27进行编号)。
本发明的一个优选的方面涉及包含脱氧核糖核酸酶亲本的变体的洗涤剂组合物，其中所述变体包含基序[d/m/l][s/t]gysr[d/n](seqidno:25)或asxnrskg(seqidno:26)中的一者或两者，并且其中该变体包含在选自4、7、8、9、27、32、33、39、41、42、48、61、65、66、78、91、101、106、109、112、127、130、138、140、147、148、154、157、159、162、174、177、179和180中的一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、十一个、十二个、十三个、十四个、十五个、十六个、十七个、十八个、十九个、二十个或更多个位点处的改变，其中每个位点对应于seqidno:28的多肽的位点，其中与亲本脱氧核糖核酸酶(例如，包含具有seqidno:28中所示的氨基酸序列的多肽的脱氧核糖核酸酶)相比，每个替换提供具有稳定性增加的脱氧核糖核酸酶变体，该稳定性增加测量为以下残余活性比：至少1.05，诸如1.08、诸如1.1、诸如1.15、诸如1.2、诸如1.25、诸如1.3、诸如1.4、诸如1.5、诸如1.6、诸如1.7、诸如1.8、诸如1.9、诸如2、诸如3、诸如4、诸如5或诸如至少10，其中该变体具有与seqidno:28中所示的多肽至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％，诸如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％，但少于100％的序列同一性，其中每个位点对应于seqidno:28中所示的多肽的位点(根据seqidno:28进行编号)。
本发明的一个优选的方面涉及包含脱氧核糖核酸酶亲本的变体的洗涤剂组合物，其中所述变体包含至少一个替换，诸如至少两个替换、诸如至少三个、诸如至少四个、诸如至少五个、诸如至少六个、诸如至少七个、诸如至少八个、诸如至少九个、诸如至少十个、诸如至少十一个、诸如至少十二个、诸如至少十三个、诸如至少十四个、诸如至少十六个、诸如至少十七个、诸如至少十八个、诸如至少十九个、诸如至少二十个或更多个替换(与seqidno:1相比)，其中该替换选自：t1i、t1v、g4k、s7g、k8r、s9i、s13y、t22p、s25p、s27l、s27r、d32i、d32l、d32r、d32v、l33r、l33k、s39p、s39c、g41p、s42g、s42h、s42c、q48d、d56i、d56l、s57w、s59v、s59c、n61e、t65l、t65v、t65m、t65w、s66m、s66w、s66y、s66v、v76l、t77y、f78l、p91l、s101n、s106l、s106r、s106h、q109r、a112e、s116d、t127v、s130a、s130y、t138d、q140v、q140g、s144p、a147h、c148a、w154y、t157v、y159a、y159r、k160v、g162s、g162d、g162c、q166d、s167l、q174n、g175d、g175n、l177y、n178d、n178e、s179l、c180a、s181e和s181l，其中与亲本脱氧核糖核酸酶(例如，包含具有seqidno:1中所示的氨基酸序列的多肽的脱氧核糖核酸酶)相比，每个替换提供具有稳定性的增加的脱氧核糖核酸酶变体，该稳定性的增加测量为以下残余活性比：至少1.05，诸如1.08、诸如1.1、诸如1.15、诸如1.2、诸如1.25、诸如1.3、诸如1.4、诸如1.5、诸如1.6、诸如1.7、诸如1.8、诸如1.9、诸如2、诸如3、诸如4、诸如5或诸如至少10，其中该变体具有与seqidno:1中所示的多肽至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％，诸如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％，但少于100％的序列同一性，其中每个位点对应于seqidno:1中所示的多肽的位点(根据seqidno:1进行编号)。
本发明的一个优选的方面涉及包含脱氧核糖核酸酶亲本的变体的洗涤剂组合物，其中所述变体包含至少一个替换，诸如至少两个替换、诸如至少三个、诸如至少四个、诸如至少五个、诸如至少六个、诸如至少七个、诸如至少八个、诸如至少九个、诸如至少十个、诸如至少十一个、诸如至少十二个、诸如至少十三个、诸如至少十四个、诸如至少十六个、诸如至少十七个、诸如至少十八个、诸如至少十九个、诸如至少二十个或更多个替换(与seqidno:1相比)，其中该替换选自：g4k、s7g、k8r、s9i、n16g、s27k、s27r、d32f、d32i、d32l、d32r、d32v、l33h、l33r、l33k、l33v、l33y、s39c、g41p、s42h、d45e、q48d、n61e、t65m、t65w、s66r、s66m、s66w、s66y、s66v、f78l、p91l、s101n、s106l、s106r、s106h、q109e、a112e、t127p、s130a、s130y、t138d、q140v、q140g、a147p、c148a、w154y、t157v、y159a、y159r、g162c、q174n、l177y、s179l和c180a，其中与亲本脱氧核糖核酸酶(例如，包含具有seqidno:1中所示的氨基酸序列的多肽的脱氧核糖核酸酶)相比，每个替换提供具有稳定性的增加的脱氧核糖核酸酶变体，该稳定性的增加测量为以下残余活性比：至少1.05，诸如1.08、诸如1.1、诸如1.15、诸如1.2、诸如1.25、诸如1.3、诸如1.4、诸如1.5、诸如1.6、诸如1.7、诸如1.8、诸如1.9、诸如2、诸如3、诸如4、诸如5或诸如至少10，其中该变体具有与seqidno:1中所示的多肽至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％，诸如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％，但少于100％的序列同一性，其中每个位点对应于seqidno:1中所示的多肽的位点(根据seqidno:1进行编号)。
本发明的一个优选的方面涉及包含脱氧核糖核酸酶亲本的变体的洗涤剂组合物，其中所述变体包含至少一个替换，诸如至少两个替换、诸如至少三个、诸如至少四个、诸如至少五个、诸如至少六个、诸如至少七个、诸如至少八个、诸如至少九个、诸如至少十个、诸如至少十一个、诸如至少十二个、诸如至少十三个、诸如至少十四个、诸如至少十六个、诸如至少十七个、诸如至少十八个、诸如至少十九个、诸如至少二十个或更多个替换(与seqidno:27相比)，其中该替换选自：g4k、s7g、k8r、s9i、n16g、s27k、s27r、d32f、d32i、d32l、d32r、d32v、l33h、l33r、l33k、l33v、l33y、s39c、g41p、s42h、d45e、q48d、n61e、t65m、t65w、s66r、s66m、s66w、s66y、s66v、f78l、p91l、s101n、s106l、s106r、s106h、q109e、a112e、t127p、s130a、s130y、t138d、q140v、q140g、a147p、c148a、w154y、t157v、y159a、y159r、g162c、q174n、l177y、s179l和c180a，其中与亲本脱氧核糖核酸酶(例如，包含具有seqidno:27中所示的氨基酸序列的多肽的脱氧核糖核酸酶)相比，每个替换提供具有稳定性的增加的脱氧核糖核酸酶变体，该稳定性的增加测量为以下残余活性比：至少1.05，诸如1.08、诸如1.1、诸如1.15、诸如1.2、诸如1.25、诸如1.3、诸如1.4、诸如1.5、诸如1.6、诸如1.7、诸如1.8、诸如1.9、诸如2、诸如3、诸如4、诸如5或诸如至少10，其中该变体具有与seqidno:27中所示的多肽至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％，诸如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％，但少于100％的序列同一性，其中每个位点对应于seqidno:27中所示的多肽的位点(根据seqidno:27进行编号)。
本发明的一个优选的方面涉及包含脱氧核糖核酸酶亲本的变体的洗涤剂组合物，其中该变体包含至少一个替换，诸如至少两个替换、诸如至少三个、诸如至少四个、诸如至少五个、诸如至少六个、诸如至少七个、诸如至少八个、诸如至少九个、诸如至少十个、诸如至少十一个、诸如至少十二个、诸如至少十三个、诸如至少十四个、诸如至少十六个、诸如至少十七个、诸如至少十八个、诸如至少十九个、诸如至少二十个或更多个替换(与seqidno:28相比)，其中该替换选自：g4k、s7g、k8r、s9i、n16g、s27k、s27r、d32f、d32i、d32l、d32r、d32v、l33h、l33r、l33k、l33v、l33y、s39c、g41p、s42h、d45e、q48d、n61e、t65m、t65w、s66r、s66m、s66w、s66y、s66v、f78l、p91l、s101n、s106l、s106r、s106h、q109e、a112e、t127p、s130a、s130y、t138d、q140v、q140g、a147p、c148a、w154y、t157v、y159a、y159r、g162c、q174n、l177y、s179l和c180a，其中与亲本脱氧核糖核酸酶(例如，包含具有seqidno:28中所示的氨基酸序列的多肽的脱氧核糖核酸酶)相比，每个替换提供具有稳定性的增加的脱氧核糖核酸酶变体，该稳定性的增加测量为以下残余活性比：至少1.05，诸如1.08、诸如1.1、诸如1.15、诸如1.2、诸如1.25、诸如1.3、诸如1.4、诸如1.5、诸如1.6、诸如1.7、诸如1.8、诸如1.9、诸如2、诸如3、诸如4、诸如5或诸如至少10，其中该变体具有与seqidno:28中所示的多肽至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％，诸如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％，但少于100％的序列同一性，其中每个位点对应于seqidno:28中所示的多肽的位点(根据seqidno:28进行编号)。
各种成分如表面活性剂和助洗剂可降低酶在洗涤剂组合物，具体地讲液体组合物中的稳定性，因此用于本文的优选的酶变体在洗涤剂组合物中是基本上稳定的。本发明提供包含脱氧核糖核酸酶变体的组合物，所述脱氧核糖核酸酶变体具有在选自下列的一个或多个位点处的改变，优选地替换：1、4、7、8、9、13、22、25、27、32、33、39、41、42、48、56、57、59、61、65、66、76、77、78、91、101、106、109、112、116、127、130、138、140、144、147、148、154、157、159、160、162、166、167、174、175、177、178、179、180和181。优选地改变为选自下列的替换：t1i、t1v、g4k、s7g、k8r、s9i、s13y、t22p、s25p、s27l、l27r、d32i、d32l、d32r、d32v、l33r、l33k、s39p、s39c、g41p、s42g、s42h、s42c、q48d、d56i、d56l、s57w、s59v、s59c、n61e、t65l、t65v、t65m、t65w、s66m、s66w、s66y、s66v、v76l、t77y、f78l、p91l、s101n、s106l、s106r、s106h、q109r、a112e、s116d、t127v、s130a、s130y、t138d、q140v、q140g、s144p、a147h、c148a、w154y、t157v、y159a、y159r、k160v、g162s、g162d、g162c、q166d、s167l、q174n、g175d、g175n、l177y、n178d、n178e、s179l、c180a、s181e和s181l。
在与seqidno:1具有至少80％序列同一性的脱氧核糖核酸酶亲本中导入替换，与导入这些替换的亲本脱氧核糖核酸酶相比(如包含seqidno:1的亲本脱氧核糖核酸酶所示)，在选自位点1、4、7、8、9、13、22、25、27、32、33、39、41、42、48、56、57、59、61、65、66、76、77、78、91、101、106、109、112、116、127、130、138、140、144、147、148、154、157、159、160、162、166、167、174、175、177、178、179、180和181的一个或多个位点中(其中该位点对应于seqidno:1的位点)的替换提供具有至少一种改善的特性的酶变体和洗涤剂组合物。所述替换改善了液体溶液诸如清洁组合物中的稳定性，但不损害清洁过程(例如衣物洗涤)中的洗涤性能。由酶的一级序列预测哪些位点可改变以获得改善的效果需要创造性的技能，必须从结构以及功能方面仔细评估该分子。本发明涉及包含脱氧核糖核酸酶的变体的洗涤剂组合物，与起始脱氧核糖核酸酶(即亲本脱氧核糖核酸酶)相比，其具有至少一种改善的特性。本发明人已鉴定出其中单个替换提供稳定效果的位点，并且进一步鉴定出在选自下列的多于一个位点中添加替换：1、4、7、8、9、13、22、25、27、32、33、39、41、42、48、56、57、59、61、65、66、76、77、78、91、101、106、109、112、116、127、130、138、140、144、147、148、154、157、159、160、162、166、167、174、175、177、178、179、180和181，提供重要的改善的稳定性但不损害脱氧核糖核酸酶的清洁性能(从纺织品去除dna污渍的能力)本发明的一个方面涉及包含变体的洗涤组合物，其中在选自下列的多于一个位点中导入替换：1、4、7、8、9、13、22、25、27、32、33、39、41、42、48、56、57、59、61、65、66、76、77、78、91、101、106、109、112、116、127、130、138、140、144、147、148、154、157、159、160、162、166、167、174、175、177、178、179、180和181，以用于甚至进一步改善稳定效果。洗涤剂组合物优选包含脱氧核糖核酸酶变体，该脱氧核糖核酸酶变体包含在一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、十一个、十二个、十三个、十四个、十五个、十六个、十七个、十八个、十九个、二十个或更多个位点处的替换，所述位点选自：1、4、7、8、9、13、22、25、27、32、33、39、41、42、48、56、57、59、61、65、66、76、77、78、91、101、106、109、112、116、127、130、138、140、144、147、148、154、157、159、160、162、166、167、174、175、177、178、179、180和181，其中每个位点对应于seqidno:1的多肽的位点，其中该变体具有脱氧核糖核酸酶活性，并且其中该变体具有与seqidno:1的至少80％，诸如至少85％、诸如至少90％、诸如至少95％、诸如至少98％但少于100％的序列同一性。多于一个位点处的替换可导致如本发明所示的加性效应或甚至协同效应并不是微不足道的。加性效应不能预测，因为与仅具有一个替换的酶相比，向酶添加替换也可不利地影响稳定性，因为替换的特定组合可导致不同的结果。本发明的一个优选实施方案涉及包含脱氧核糖核酸酶变体的组合物，该变体包含在选自下列的至少三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、十一个、十二个、十三个、十四个、十五个、十六个、十七个、十八个、十九个、二十个或更多个位点中的氨基酸的替换，所述位点选自：1、4、7、8、9、13、22、25、27、32、33、39、41、42、48、56、57、59、61、65、66、76、77、78、91、101、106、109、112、116、127、130、138、140、144、147、148、154、157、159、160、162、166、167、174、175、177、178、179、180和181，其中每个位点对应于seqidno:1的多肽的位点，其中该变体具有脱氧核糖核酸酶活性，并且其中该变体具有与seqidno:1的至少80％，诸如至少85％、诸如至少90％、诸如至少95％、诸如至少98％但少于100％的序列同一性。替换优选选自：t1i、t1v、g4k、s7g、k8r、s9i、s13y、t22p、s25p、s27l、l27r、d32i、d32l、d32r、d32v、l33r、l33k、s39p、s39c、g41p、s42g、s42h、s42c、q48d、d56i、d56l、s57w、s59v、s59c、n61e、t65l、t65v、t65m、t65w、s66m、s66w、s66y、s66v、v76l、t77y、f78l、p91l、s101n、s106l、s106r、s106h、q109r、a112e、s116d、t127v、s130a、s130y、t138d、q140v、q140g、s144p、a147h、c148a、w154y、t157v、y159a、y159r、k160v、g162s、g162d、g162c、q166d、s167l、q174n、g175d、g175n、l177y、n178d、n178e、s179l、c180a、s181e和s181l。
本发明人已构建并测试了酶变体和包含脱氧核糖核酸酶的变体的洗涤剂组合物，并且示出添加若干突变增加稳定性但不损害性能。因此，与seqidno：1相比，优选地，总替换数为1-20个或3-20个，例如至少5至20个、至少10至20个，或诸如与包含seqidno：1中所示的氨基酸序列的脱氧核糖核酸酶相比至少15至20个替换。优选地，本发明的变体具有至少十个，诸如至少十一个，诸如至少十二个，诸如至少十三个，诸如至少十四个，诸如至少十五个，诸如至少十六个，诸如至少十七个，诸如至少十九个或甚至至少二十个选自下列的替换：t1i、t1v、g4k、s7g、k8r、s9i、s13y、t22p、s25p、s27l、l27r、d32i、d32l、d32r、d32v、l33r、l33k、s39p、s39c、g41p、s42g、s42h、s42c、q48d、d56i、d56l、s57w、s59v、s59c、n61e、t65l、t65v、t65m、t65w、s66m、s66w、s66y、s66v、v76l、t77y、f78l、p91l、s101n、s106l、s106r、s106h、q109r、a112e、s116d、t127v、s130a、s130y、t138d、q140v、q140g、s144p、a147h、c148a、w154y、t157v、y159a、y159r、k160v、g162s、g162d、g162c、q166d、s167l、q174n、g175d、g175n、l177y、n178d、n178e、s179l、c180a、s181e和s181l。
因此，在一个优选的实施方案中，洗涤剂组合物包含亲本脱氧核糖核酸酶的变体，其中所述变体包含一组选自下列的替换：
t1i g4k s13y t22p s27l s39p s42g d56i s57w s59v v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175dt1i k8r s13y t22p s27l s39p s42g d56i s57w s59v v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175dt1i s13y s27l s39p s42g d56i s57w s59v v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175dt1i s13y t22p e23g s27l s42g s57w s59v v76l q109r s116d t127v d133n s144p a147h s167l g175dt1i s13y t22p s25p s27l l33k s39p s42g d56i s57w s59v s66y v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175dt1i s13y t22p s25p s27l l33k s39p s42g d56l s57w s59v t65v s66y v76l t77y q109r s116d t127v s144p a147h g162e s167l g175dt1i s13y t22p s25p s27l l33k s39p s42g d56l s57w s59v t65v s66y v76l t77y q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175dt1i s13y t22p s25p s27l l33k s39p s42g s57w s59v s66w v76l t77y q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175dt1i s13y t22p s25p s27l l33k s39p s42g s57w s59v s66y v76l t77y q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175dt1i s13y t22p s25p s27l l33k s39p s42g s57w s59v t65l v76l t77y q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175dt1i s13y t22p s25p s27l l33k s39p s42g s57w s59v t65v s66y v76l t77y q109r s116d t127v s144p a147h g162d s167l g175dt1i s13y t22p s25p s27l l33k s39p s42g s57w s59v t65v s66y v76l t77y q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175d s181et1i s13y t22p s25p s27l l33k s39p s42g s57w s59v t65v v76l t77y q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175dt1i s13y t22p s25p s27l s30p s39p s42g s57w s59v s68v v76l t77y q109r t127v s144p a147h s167l g175dt1i s13y t22p s25p s27l s39p d56i s57w s59v v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175dt1i s13y t22p s25p s27l s39p s42c s57w s59v s68v v76l t77y q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175dt1i s13y t22p s25p s27l s39p s42g d56i s57w s59v s68v v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175dt1i s13y t22p s25p s27l s39p s42g d56i s57w s59v t65l v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175dt1i s13y t22p s25p s27l s39p s42g d56i s57w s59v t65v v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175dt1i s13y t22p s25p s27l s39p s42g d56i s57w s59v v76l q109r s116d t127v s144p a147h q166d s167l g175dt1i s13y t22p s25p s27l s39p s42g d56i s57w s59v v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175dt1i s13y t22p s25p s27l s39p s42g d56i s57w s59v v76l q109r t127v s144p a147h s167l g175dt1i s13y t22p s25p s27l s39p s42g d56i s57w s59v v76l t77y q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175dt1i s13y t22p s25p s27l s39p s42g d56l s57w s59v t65v s66y v76l t77y q109r s116d t127v s144p a147h g162d s167l g175dt1i s13y t22p s25p s27l s39p s42g d56l s57w s59v t65v s66y v76l t77y q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175d s181et1i s13y t22p s25p s27l s39p s42g d56l s57w s59v t65v s66y v76l t77y s106l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175dt1i s13y t22p s25p s27l s39p s42g s57w s59v s68v v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167lt1i s13y t22p s25p s27l s39p s42g s57w s59v s68v v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175dt1i s13y t22p s25p s27l s39p s42g s57w s59v s68v v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175d n178dt1i s13y t22p s25p s27l s39p s42g s57w s59v s68v v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175d n178et1i s13y t22p s25p s27l s39p s42g s57w s59v s68v v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l n178dt1i s13y t22p s25p s27l s39p s42g s57w s59v s68v v76l q109r t127v s144p a147h s167l g175dt1i s13y t22p s25p s27l s39p s42g s57w s59v s68v v76l t77y q109r s116d t127v s144p a147h q166d s167l g175dt1i s13y t22p s25p s27l s39p s42g s57w s59v s68v v76l t77y q109r s116d t127v s144p a147h s167lt1i s13y t22p s25p s27l s39p s42g s57w s59v s68v v76l t77y q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175d n178et1i s13y t22p s25p s27l s39p s42g s57w s59v s68v v76l t77y q109r s116d t127v s144p a147h s167l n178dt1i s13y t22p s25p s27l s39p s42g s57w s59v t65l s66w v76l t77y q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175dt1i s13y t22p s25p s27l s39p s42g s57w s59v t65l s66y v76l t77y q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175dt1i s13y t22p s25p s27l s39p s42g s57w s59v t65v s66w v76l t77y q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175dt1i s13y t22p s25p s27l s39p s42g s57w s59v t65v s66y v76l t77y q109r s116d t127v s144p a147h g162d s167l g175dt1i s13y t22p s25p s27l s39p s42g s57w s59v t65v s66y v76l t77y q109r s116d t127v s144p a147h g162d s167l g175d s181et1i s13y t22p s25p s27l s39p s42g s57w s59v t65v s66y v76l t77y q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175dt1i s13y t22p s25p s27l s39p s42g s57w s59v t65v s66y v76l t77y q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175d s181et1i s13y t22p s25p s27l s39p s42g s57w s59v t65v s66y v76l t77y s106l q109r s116d t127v s144p a147h g162d s167l g175dt1i s13y t22p s25p s27l s39p s42g s57w s59v t65v s66y v76l t77y s106l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175dt1i s13y t22p s25p s27l s39p s42g s57w s59v t65v s66y v76l t77y s106l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175d s181et1i s13y t22p s25p s27l s39p s42g s57w s59v v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175dt1i s13y t22p s25p s27l s39p s42g s57w s59v v76l t77y q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175dt1i s13y t22p s25p s27l s39p s57w s59v s68v v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175dt1i s13y t22p s25p s27r l33r s39p s42g s57w s59v s66y v76l t77y q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175dt1i s13y t22p s25p s27r s39p s42g d56i s57w s59v v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175dt1i s13y t22p s25p s27r s39p s42g s57w s59v s66w v76l t77y q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175dt1i s13y t22p s27k l33k s39p s42g d56i s57w s59v t65v s66y v76l q109r s116d t127v s144p a147h g162d s167l g175dt1i s13y t22p s27k l33k s39p s42g d56l s57w s59v t65l s66y v76l q109r s116d t127v s144p a147h g162d s167l g175dt1i s13y t22p s27k l33k s39p s42g d56l s57w s59v t65v s66y v76l q109r s116d t127v s144p a147h g162d s167l g175dt1i s13y t22p s27k l33k s39p s42g s57w s59v t65v s66y v76l t77y q109r s116d t127v s144p a147h g162d s167l g175d s181et1i s13y t22p s27k l33k s39p s42g s57w s59v t65v s66y v76l t77y q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175dt1i s13y t22p s27k s39p s42g d56i s57w s59v t65l v76l q109r s116d t127v s130a s144p a147h s167l g175dt1i s13y t22p s27k s39p s42g d56i s57w s59v t65v v76l q109r s116d t127v s130a s144p a147h s167l g175dt1i s13y t22p s27k s39p s42g d56i s57w s59v t65v v76l s106l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175dt1i s13y t22p s27k s39p s42g d56i s57w s59v v76l q109r s116d t127v s130a s144p a147h g162d s167l g175dt1i s13y t22p s27k s39p s42g d56i s57w s59v v76l q109r s116d t127v s144p a147h g162d s167l g175dt1i s13y t22p s27k s39p s42g d56i s57w s59v v76l s106l q109r s116d t127v s130a s144p a147h s167l g175dt1i s13y t22p s27k s39p s42g d56i s57w s59v v76l s106l q109r s116d t127v s144p a147h g162d s167l g175dt1i s13y t22p s27k s39p s42g d56i s57w s59v v76l s106l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175dt1i s13y t22p s27k s39p s42g d56l s57w s59v t65l v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175dt1i s13y t22p s27k s39p s42g d56l s57w s59v t65v v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175dt1i s13y t22p s27k s39p s42g d56l s57w s59v v76l q109r s116d t127v s130a s144p a147h s167l g175dt1i s13y t22p s27k s39p s42g d56l s57w s59v v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175dt1i s13y t22p s27k s39p s42g s57w s59v t65v s66y v76l t77y q109r s116d t127v s144p a147h g162d s167l g175dt1i s13y t22p s27k s39p s42g s57w s59v t65v s66y v76l t77y q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175d s181et1i s13y t22p s27k s42g s57w s59v v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175dt1i s13y t22p s27l d32l s42g s57w s59v v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175dt1i s13y t22p s27l d32r s42g s57w s59v v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175dt1i s13y t22p s27l d32v s42g s57w s59v v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175dt1i s13y t22p s27l l33h s42g s57w s59v v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175dt1i s13y t22p s27l l33k s39p s42g d56i s57w s59v s66w v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175dt1i s13y t22p s27l l33k s39p s42g d56i s57w s59v s66y v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175dt1i s13y t22p s27l l33k s39p s42g d56i s57w s59v t65l s66y v76l q109r s116d t127v s144p a147h g162d s167l g175dt1i s13y t22p s27l l33k s39p s42g d56i s57w s59v t65l v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175dt1i s13y t22p s27l l33k s39p s42g d56i s57w s59v t65v s66y v76l q109r s116d t127v s144p a147h g162d s167l g175dt1i s13y t22p s27l l33k s39p s42g d56i s57w s59v t65v v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175dt1i s13y t22p s27l l33k s39p s42g d56i s57w s59v v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175dt1i s13y t22p s27l l33k s39p s42g d56l s57w s59v t65l s66y v76l q109r s116d t127v s144p a147h g162d s167l g175dt1i s13y t22p s27l l33k s39p s42g d56l s57w s59v t65v s66y v76l q109r s116d t127v s144p a147h g162d s167l g175dt1i s13y t22p s27l l33r s42g s57w s59v v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175dt1i s13y t22p s27l l33v s42g s57w s59v v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175dt1i s13y t22p s27l l33y s42g s57w s59v v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175dt1i s13y t22p s27l s39c s42g s57w s59v v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175dt1i s13y t22p s27l s39p d56i s57w s59v v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175dt1i s13y t22p s27l s39p s42g d56i s57w s59d v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175dt1i s13y t22p s27l s39p s42g d56i s57w s59e v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175dt1i s13y t22p s27l s39p s42g d56i s57w s59g v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175dt1i s13y t22p s27l s39p s42g d56i s57w s59v q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175dt1i s13y t22p s27l s39p s42g d56i s57w s59v s66y v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175dt1i s13y t22p s27l s39p s42g d56i s57w s59v s68v v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175dt1i s13y t22p s27l s39p s42g d56i s57w s59v t65l s66w v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175dt1i s13y t22p s27l s39p s42g d56i s57w s59v t65l v76l q109r s116d t127v s130a s144p a147h g162d s167l g175dt1i s13y t22p s27l s39p s42g d56i s57w s59v t65l v76l q109r s116d t127v s144p a147h g162d s167l g175dt1i s13y t22p s27l s39p s42g d56i s57w s59v t65l v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175dt1i s13y t22p s27l s39p s42g d56i s57w s59v t65l v76l s106l q109r s116d t127v s130a s144p a147h s167l g175dt1i s13y t22p s27l s39p s42g d56i s57w s59v t65l v76l s106l q109r s116d t127v s144p a147h g162d s167l g175dt1i s13y t22p s27l s39p s42g d56i s57w s59v t65l v76l s106l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175dt1i s13y t22p s27l s39p s42g d56i s57w s59v t65v v76l q109r s116d t127v s130a s144p a147h g162d s167l g175dt1i s13y t22p s27l s39p s42g d56i s57w s59v t65v v76l q109r s116d t127v s130a s144p a147h s167l g175dt1i s13y t22p s27l s39p s42g d56i s57w s59v t65v v76l q109r s116d t127v s144p a147h g162d s167l g175dt1i s13y t22p s27l s39p s42g d56i s57w s59v t65v v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175dt1i s13y t22p s27l s39p s42g d56i s57w s59v t65v v76l s106l q109r s116d t127v s144p a147h g162d s167l g175dt1i s13y t22p s27l s39p s42g d56i s57w s59v v76l q109r s116d s144p a147h s167l g175dt1i s13y t22p s27l s39p s42g d56i s57w s59v v76l q109r s116d t127v a147h s167l g175dt1i s13y t22p s27l s39p s42g d56i s57w s59v v76l q109r s116d t127v s144p a147h g162d s167l g175dt1i s13y t22p s27l s39p s42g d56i s57w s59v v76l q109r s116d t127v s144p a147h g162e s167l g175dt1i s13y t22p s27l s39p s42g d56i s57w s59v v76l q109r s116d t127v s144p a147h g175dt1i s13y t22p s27l s39p s42g d56i s57w s59v v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167lt1i s13y t22p s27l s39p s42g d56i s57w s59v v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175dt1i s13y t22p s27l s39p s42g d56i s57w s59v v76l q109r s116d t127v s144p a147k s167l g175dt1i s13y t22p s27l s39p s42g d56i s57w s59v v76l q109r s116d t127v s144p a147r s167l g175dt1i s13y t22p s27l s39p s42g d56i s57w s59v v76l q109r s116d t127v s144p s167l g175dt1i s13y t22p s27l s39p s42g d56i s57w s59v v76l q109r s116d t127v t138d s144p a147h s167l g175dt1i s13y t22p s27l s39p s42g d56i s57w s59v v76l q109r t127v s144p a147h s167l g175dt1i s13y t22p s27l s39p s42g d56i s57w s59v v76l s106l q109r s116d t127v s130a s144p a147h g162d s167l g175dt1i s13y t22p s27l s39p s42g d56i s57w s59v v76l s106l q109r s116d t127v s144p a147h g162d s167l g175dt1i s13y t22p s27l s39p s42g d56i s57w s59v v76l s106l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175dt1i s13y t22p s27l s39p s42g d56i s57w s59v v76l s106r q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175dt1i s13y t22p s27l s39p s42g d56i s57w s59v v76l t77y q109r s116d t127v s144p a147h q166d s167l g175dt1i s13y t22p s27l s39p s42g d56i s57w s59v v76l t77y q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175dt1i s13y t22p s27l s39p s42g d56i s57w v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175dt1i s13y t22p s27l s39p s42g d56i s57y s59v v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175dt1i s13y t22p s27l s39p s42g d56i s59v v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175dt1i s13y t22p s27l s39p s42g d56l s57w s59v t65l v76l q109r s116d t127v s130a s144p a147h s167l g175dt1i s13y t22p s27l s39p s42g d56l s57w s59v t65l v76l q109r s116d t127v s144p a147h g162d s167l g175dt1i s13y t22p s27l s39p s42g d56l s57w s59v t65l v76l s106l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175dt1i s13y t22p s27l s39p s42g d56l s57w s59v t65v v76l q109r s116d t127v s130a s144p a147h s167l g175dt1i s13y t22p s27l s39p s42g d56l s57w s59v t65v v76l q109r s116d t127v s144p a147h g162d s167l g175dt1i s13y t22p s27l s39p s42g d56l s57w s59v t65v v76l s106l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175dt1i s13y t22p s27l s39p s42g d56l s57w s59v v76l q109r s116d t127v s130a s144p a147h g162d s167l g175dt1i s13y t22p s27l s39p s42g d56l s57w s59v v76l q109r s116d t127v s144p a147h g162d s167l g175dt1i s13y t22p s27l s39p s42g d56l s57w s59v v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175dt1i s13y t22p s27l s39p s42g d56l s57w s59v v76l s106l q109r s116d t127v s130a s144p a147h g162d s167l g175dt1i s13y t22p s27l s39p s42g d56l s57w s59v v76l s106l q109r s116d t127v s130a s144p a147h s167l g175dt1i s13y t22p s27l s39p s42g d56l s57w s59v v76l s106l q109r s116d t127v s144p a147h g162d s167l g175dt1i s13y t22p s27l s39p s42h d56i s57w s59v v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175dt1i s13y t22p s27l s42g d56l s57w s59v v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175dt1i s13y t22p s27l s42g s57w s59v s66r v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175dt1i s13y t22p s27l s42g s57w s59v s66w v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175dt1i s13y t22p s27l s42g s57w s59v s66y v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175dt1i s13y t22p s27l s42g s57w s59v t65l v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175dt1i s13y t22p s27l s42g s57w s59v t65m v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175dt1i s13y t22p s27l s42g s57w s59v t65r v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175dt1i s13y t22p s27l s42g s57w s59v v76l q109r s116d t127v q140g s144p a147h s167l g175dt1i s13y t22p s27l s42g s57w s59v v76l q109r s116d t127v q140v s144p a147h s167l g175dt1i s13y t22p s27l s42g s57w s59v v76l q109r s116d t127v s130y s144p a147h s167l g175dt1i s13y t22p s27l s42g s57w s59v v76l q109r s116d t127v s144p a147h c148a s167l g175d s179l c180at1i s13y t22p s27l s42g s57w s59v v76l q109r s116d t127v s144p a147h g162c s167l g175dt1i s13y t22p s27l s42g s57w s59v v76l q109r s116d t127v s144p a147h g162d s167l g175dt1i s13y t22p s27l s42g s57w s59v v76l q109r s116d t127v s144p a147h g162e s167l g175dt1i s13y t22p s27l s42g s57w s59v v76l q109r s116d t127v s144p a147h k160v s167l g175dt1i s13y t22p s27l s42g s57w s59v v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175d s179lt1i s13y t22p s27l s42g s57w s59v v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175d s181et1i s13y t22p s27l s42g s57w s59v v76l q109r s116d t127v s144p a147h w154y s167l g175dt1i s13y t22p s27l s42g s57w s59v v76l s101n q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175dt1i s13y t22p s27l s42g s57w s59v v76l s106l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175dt1i s13y t22p s27r s39p s42g d56i s57w s59v t65v v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175dt1i s13y t22p s27r s39p s42g d56i s57w s59v v76l q109r s116d t127v s130a s144p a147h g162d s167l g175dt1i s13y t22p s27r s39p s42g d56i s57w s59v v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175dt1i s13y t22p s27r s39p s42g d56i s57w s59v v76l s106l q109r s116d t127v s130a s144p a147h s167l g175dt1i s13y t22p s27r s39p s42g d56i s57w s59v v76l s106l q109r s116d t127v s144p a147h g162d s167l g175dt1i s13y t22p s27r s39p s42g d56l s57w s59v s66y v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175dt1i s13y t22p s27r s39p s42g d56l s57w s59v t65l v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175dt1i s13y t22p s27r s39p s42g d56l s57w s59v t65v v76l q109r s116d t127v s144p a147h g162d s167l g175dt1i s13y t22p s27r s39p s42g d56l s57w s59v t65v v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175dt1i s13y t22p s27r s39p s42g d56l s57w s59v v76l s106l q109r s116d t127v s130a s144p a147h g162d s167l g175dt1i s13y t22p s27r s42g s57w s59v v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175dt1i s13y t22p s27v s39p s42g d56i s57w s59v v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175dt1i s13y t22p s39p s42g d56i s57w s59v v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175dt1i s7g s13y t22p s27l s39p s42g d56i s57w s59v v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175dt1i s9i s13y t22p s27l s42g s57w s59v v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175dt1i t22p s27l s39p s42g d56i s57w s59v v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175dort1v s13y t22p s27l s39p s42g d56i s57w s59v v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175d。
可用于本发明的变体可包括上文列出的那些的附加突变。这些附加的修饰应当优选不显著改变变体脱氧核糖核酸酶的改善的特性，例如保守替换。
保守替换的例子在碱性氨基酸(精氨酸、赖氨酸和组氨酸)、酸性氨基酸(谷氨酸和天冬氨酸)、极性氨基酸(谷氨酰胺和天冬酰胺)，疏水氨基酸(亮氨酸、异亮氨酸和缬氨酸)、芳族氨基酸(苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸)，和小氨基酸(甘氨酸、丙氨酸、苏氨酸、丝氨酸和甲硫氨酸)的组内。通常不改变比活性的氨基酸替换是本领域已知的，并且由例如h.neurath和r.l.hill，1979，in，theproteins，academicpress，newyork进行了描述。常见的替换有ala/ser、val/ile、asp/glu、thr/ser、ala/gly、ala/thr、ser/asn、ala/val、ser/gly、tyr/phe、ala/pro、lys/arg、asp/asn、leu/ile、leu/val、ala/glu、和asp/gly。
多肽中的必需氨基酸可根据本领域已知的方法进行鉴定，例如定点诱变或丙氨酸扫描诱变(cunningham和wells，1989，science244:1081-1085)。在后一种技术中，在分子中的每个残基处导入单个丙氨酸突变，并且针对脱氧核糖核酸酶活性测试所得的突变型分子，以鉴定对该分子的活性至关重要的氨基酸残基。还可参见，hilton等人，1996，j.biol.chem.271:4699-4708。所述酶的活性位点或其它生物学相互作用还可通过结构的物理分析进行测定，如通过诸如核磁共振、晶体学、电子衍射或光亲和标记，与推定接触位点氨基酸突变的技术一起所测定的。参见，例如，devos等人，1992，science255:306-312；smith等人，1992，j.mol.biol.224:899-904；wlodaver等人，(1992)febslett.309:59-64。
亲本脱氧核糖核酸酶
优选地，亲本脱氧核糖核酸酶选自酶类e.c.3.1.11，e.c.3.1.12，e.c.3.1.15，e.c.3.1.16，e.c.3.1.21，e.c3.1.22，e.c3.1.23，e.c3.1.24和e.c.3.1.25的任一个。
优选地，亲本脱氧核糖核酸酶得自微生物，并且脱氧核糖核酸酶是微生物酶。脱氧核糖核酸酶优选地为真菌或细菌来源。
脱氧核糖核酸酶亲本优选地得自芽孢杆菌(bacillus)，例如芽孢杆菌属(bacillus)，诸如食物芽孢杆菌(bacilluscibi)、芽孢杆菌属62451、堀越氏芽孢杆菌(bacillushorikoshii)、芽孢杆菌属16840、芽孢杆菌属62668、芽孢杆菌属13395、角质芽孢杆菌(bacillushorneckiae)、芽孢杆菌属11238、病研所芽孢杆菌(bacillusidriensis)、芽孢杆菌属62520、居藻芽孢杆菌(bacillusalgicola)、越南芽孢杆菌(bacillusvietnamensis)、花津滩芽孢杆菌(bacillushwajmpoensis)、印度芽孢杆菌(bacillusindicus)、黄海芽胞杆菌(bacillusmarisflavi)、路西法芽孢杆菌(bacillusluciferensis)、芽孢杆菌属sa2-6。
亲本脱氧核糖核酸酶优选地属于包含在gys进化枝中的脱氧核糖核酸酶的组，所述包含在gys进化枝中的脱氧核糖核酸酶是包含保守基序[d/m/l][s/t]gysr[d/n](seqidno：25)或asxnrskg(seqidno：26)的脱氧核糖核酸酶，并且其共享相似的结构和功能特性，参见例如wo2017/060475的图1中的比对和实施例11中的系统发育树的生成。gys进化枝的脱氧核糖核酸酶优选得自芽孢杆菌属。
用于本文的优选的变体包括具有脱氧核糖核酸酶活性的gys进化枝的脱氧核糖核酸酶亲本的变体，任选地其中亲本包含基序[d/m/l][s/t]gysr[d/n](seqidno：25)、asxnrskg(seqidno：26)中的一者或两者，并且其中所述多肽选自多肽组：
a)具有与seqidno:1中所示的多肽至少60％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
b)具有与seqidno:2中所示的多肽至少60％、至少70％、至少80％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
c)具有与seqidno:3中所示的多肽至少60％、至少70％、至少80％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
d)具有与seqidno:4中所示的多肽至少60％、至少70％、至少80％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
e)具有与seqidno:5中所示的多肽至少60％、至少70％、至少80％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
f)具有与seqidno:6中所示的多肽至少60％、至少70％、至少80％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
g)具有与seqidno:7中所示的多肽至少60％、至少70％、至少80％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
h)具有与seqidno:8中所示的多肽至少60％、至少70％、至少80％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
i)具有与seqidno:9中所示的多肽至少60％、至少70％、至少80％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
j)具有与seqidno:10中所示的多肽至少60％、至少70％、至少80％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
k)具有与seqidno:11中所示的多肽至少60％、至少70％、至少80％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
l)具有与seqidno:12中所示的多肽至少60％、至少70％、至少80％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
m)具有与seqidno:13中所示的多肽至少60％、至少70％、至少80％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
n)具有与seqidno:14中所示的多肽至少60％、至少70％、至少80％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
o)具有与seqidno:15中所示的多肽至少60％、至少70％、至少80％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
p)具有与seqidno:16中所示的多肽至少60％、至少70％、至少80％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
q)具有与seqidno:17中所示的多肽至少60％、至少70％、至少80％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
r)具有与seqidno:18中所示的多肽至少60％、至少70％、至少80％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
s)具有与seqidno:19中所示的多肽至少60％、至少70％、至少80％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
t)具有与seqidno:20中所示的多肽至少60％、至少70％、至少80％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
u)具有与seqidno:21中所示的多肽至少60％、至少70％、至少80％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
v)具有与seqidno:22中所示的多肽至少60％、至少70％、至少80％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
w)具有与seqidno:23中所示的多肽至少60％、至少70％、至少80％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，和
x)具有与seqidno:24中所示的多肽至少60％、至少70％、至少80％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽。
具有脱氧核糖核酸酶活性并且包含gys进化枝基序的多肽表现出特别好的深层清洁特性，例如该脱氧核糖核酸酶在从物品(诸如纺织物或硬质表面)去除或减少有机物质组分(诸如生物膜组分)方面特别有效。
优选地，该变体包括脱氧核糖核酸酶亲本的变体，其中所述脱氧核糖核酸酶亲本属于gys进化枝并且其中亲本脱氧核糖核酸酶包含基序[d/m/l][s/t]gysr[d/n](seqidno：25)或asxnrskg(seqidno：26)中的一者或两者。
亲本脱氧核糖核酸酶可以是(a)具有与seqidno：1的成熟多肽至少60％的序列同一性的多肽，(b)由在高严谨条件下与成熟多肽编码序列或前者的全长互补序列杂交的多核苷酸编码的多肽；或(c)由具有与成熟多肽编码序列至少60％的序列同一性的多核苷酸编码的多肽。
该亲本优选地具有与seqidno:1中所示的多肽至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％的序列同一性，诸如与seqidno:1中所示的多肽(其具有脱氧核糖核酸酶活性)至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性。甚至可优选该亲本包含seqidno:1的氨基酸序列或由其组成。
可优选该亲本选自芽孢杆菌(bacillus)脱氧核糖核酸酶，例如食物芽孢杆菌(bacilluscibi)脱氧核糖核酸酶，例如本文公开为seqidno：1的脱氧核糖核酸酶。
清洁方法
根据本发明，还提供了一种处理或清洁脏污制品或表面(诸如脏污硬质表面或优选地织物)的方法。所述方法包括(i)使所述制品或表面，优选地织物与含水洗涤液体接触，所述含水洗涤液体包含如本文所述的脱氧核糖核酸酶变体，并且另外，优选地还包含洗涤剂组合物助剂；以及(ii)任选地漂洗以及(iii)干燥所述表面。可将变体和洗涤剂组合物助剂分别加入水中，或优选地，含水洗涤液体通过添加本文洗涤剂组合物与水以形成含水洗涤液体来形成。
可在手洗或机洗过程中使制品或表面与含水洗涤液体接触。优选地，与含水洗涤液体的接触处于洗涤循环中，最优选地处于洗衣机的洗涤循环中，然而对于处理步骤而言，接触可处于洗涤过程的漂洗步骤中。
该含水洗涤液体的ph优选地在1或2至11的范围内，诸如在5.5至11的范围内、诸如在6至10的范围内、在7至9的范围内或在7至8.5的范围内。
该含水洗涤液体优选地处于在5℃至95℃的范围内，或在10℃至80℃、10℃至70℃、10℃至60℃、10℃至50℃的范围内、或在15℃至40℃的范围内或在20℃至30℃的范围内的温度。
在含水洗涤液体中的脱氧核糖核酸酶变体酶的浓度通常在0.00004-100ppm酶蛋白的范围内，诸如在0.00008-100的范围内、在0.0001-100的范围内、在0.0002-100的范围内、在0.0004-100的范围内、在0.0008-100的范围内、在0.001-100ppm酶蛋白的范围内、在0.01-100ppm酶蛋白的范围内、优选地在0.05-50ppm酶蛋白的范围内、更优选地在0.1-50ppm酶蛋白的范围内、更优选地在0.1-30ppm酶蛋白的范围内、更优选地在0.5-20ppm酶蛋白的范围内、和最优选地在0.5-10ppm酶蛋白的范围内。
任选的漂洗可以为手动漂洗或机器漂洗步骤，例如作为自动洗衣机中的标准洗涤或衣物洗涤过程的一部分。任选地，可存在多于一个漂洗步骤。可将任选的附加清洁或处理组合物(任选地包含例如如本文所述的脱氧核糖核酸酶)加入预洗涤步骤和/或漂洗步骤中，例如预处理和/或织物调理组合物。干燥步骤可以为任何标准的干燥步骤，例如用于洗衣房干燥、晾干或机器干燥。
除了清洁之外，作为第二有益效果，本发明的洗涤剂组合物和方法还可防止和/或减少恶臭。本发明可实现污垢再沉积，具体地讲来自含水洗涤液体的污垢再沉积的减少，其中随着洗涤进行，污垢从被清洁表面移除并开始悬浮于含水洗涤液体中。在此类粘性污垢保留在被清洁表面上时，再沉积可以为可通过根据本发明的洗涤剂组合物和清洁方法克服的问题。与亲本脱氧核糖核酸酶相比，包含脱氧核糖核酸酶变体的本发明的洗涤剂组合物和方法可提供改善的深层清洁特性，并且在一些方面，本发明减少粘滞性和/或再沉积。在一些方面，本发明涉及根据本发明的脱氧核糖核酸酶变体或包含该脱氧核糖核酸酶变体的组合物用于深层清洁物品的用途，其中所述物品为织物或硬质表面。
此外，本发明还涉及根据本发明的脱氧核糖核酸酶变体或包含该脱氧核糖核酸酶变体的组合物用于防止和/或减少污垢对物品的粘附的用途。在一些方面，所述物品为纺织物。当污垢不粘附到物品上时，该物品看起来更干净。因此，本发明还涉及根据本发明的脱氧核糖核酸酶变体用于保持或改善物品的白度的用途。
本发明还涉及洗涤剂组合物，所述洗涤剂组合物包含根据本发明的脱氧核糖核酸酶变体，优选地具有洗涤剂助剂成分。根据本发明的包含脱氧核糖核酸酶变体的洗涤剂组合物可用于物品的深层清洁、用于防止和/或减少物品粘滞性、用于物品上污渍的预处理、用于防止和/或减少污垢在洗涤循环中的再沉积、用于防止和/或减少污垢对物品的粘附、用于保持或改善物品的白度、和/或用于防止和/或减少物品的恶臭。
变体的制备
用于本文的脱氧核糖核酸酶变体可通过一种方法制备，该方法包括：
(a)将一个或多个选自下列的替换导入亲本脱氧核糖核酸酶中：t1i、t1v、g4k、s7g、k8r、s9i、s13y、t22p、s25p、s27l、s27r、d32i、d32l、d32r、d32v、l33r、l33k、s39p、s39c、g41p、s42g、s42h、s42c、q48d、d56i、d56l、s57w、s59v、s59c、n61e、t65l、t65v、t65m、t65w、s66m、s66w、s66y、s66v、v76l、t77y、f78l、p91l、s101n、s106l、s106r、s106h、q109r、a112e、s116d、t127v、s130a、s130y、t138d、q140v、q140g、s144p、a147h、c148a、w154y、t157v、y159a、y159r、k160v、g162s、g162d、g162c、q166d、s167l、q174n、g175d、g175n、l177y、n178d、n178e、s179l、c180a、s181e和s181l；
(b)以及回收所述变体，其中所述变体具有脱氧核糖核酸酶活性。
优选的变体通过以下步骤制备：
a)将一个或多个选自下列的替换导入亲本脱氧核糖核酸酶中：g4k、s7g、k8r、s9i、n16g、s27k、s27r、d32f、d32i、d32l、d32r、d32v、l33h、l33r、l33k、l33v、l33y、s39c、g41p、s42h、d45e、q48d、n61e、t65m、t65w、s66r、s66m、s66w、s66y、s66v、f78l、p91l、s101n、s106l、s106r、s106h、q109e、a112e、t127p、s130a、s130y、t138d、q140v、q140g、a147p、c148a、w154y、t157v、y159a、y159r、g162c、q174n、l177y、s179l和c180a；
b)以及回收所述变体，其中所述变体具有脱氧核糖核酸酶活性。
与亲本脱氧核糖核酸酶相比，例如与seqidno：1中所示的多肽相比,该变体优选地具有至少一种改善的特性。与seqidno:1中所示的多肽相比，该方法优选包括导入2-20个，例如2-10个和1-5个，诸如2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个改变。
本发明的一些方面涉及一种用于获得脱氧核糖核酸酶变体的方法，所述方法包括在一个或多个位点处将改变导入亲本脱氧核糖核酸酶中，其中所述脱氧核糖核酸酶亲本属于gys进化枝，并且其中所述亲本脱氧核糖核酸酶包含基序[d/m/l][s/t]gysr[d/n](seqidno：25)或asxnrskg(seqidno：26)中的一者或两者。
本发明的一些方面涉及一种用于获得脱氧核糖核酸酶变体的方法，所述方法包括在一个或多个位点处将改变导入亲本脱氧核糖核酸酶中，其中该亲本脱氧核糖核酸酶选自下列多肽：
a)具有与seqidno:1中所示的多肽至少60％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
b)具有与seqidno:2中所示的多肽至少60％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
c)具有与seqidno:3中所示的多肽至少60％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
d)具有与seqidno:4中所示的多肽至少60％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
e)具有与seqidno:5中所示的多肽至少60％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
f)具有与seqidno:6中所示的多肽至少60％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
g)具有与seqidno:7中所示的多肽至少60％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
h)具有与seqidno:8中所示的多肽至少60％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
i)具有与seqidno:9中所示的多肽至少60％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
j)具有与seqidno:10中所示的多肽至少60％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
k)具有与seqidno:11中所示的多肽至少60％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
l)具有与seqidno:12中所示的多肽至少60％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
m)具有与seqidno:13中所示的多肽至少60％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
n)具有与seqidno:14中所示的多肽至少60％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
o)具有与seqidno:15中所示的多肽至少60％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
p)具有与seqidno:16中所示的多肽至少60％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
q)具有与seqidno:17中所示的多肽至少60％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
r)具有与seqidno:18中所示的多肽至少60％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
s)具有与seqidno:19中所示的多肽至少60％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
t)具有与seqidno:20中所示的多肽至少60％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
u)具有与seqidno:21中所示的多肽至少60％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
v)具有与seqidno:22中所示的多肽至少60％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
w)具有与seqidno:23中所示的多肽至少60％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，和
x)具有与seqidno:24中所示的多肽至少60％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽。
一些方面涉及一种获得脱氧核糖核酸酶变体的方法，其中亲本脱氧核糖核酸酶得自芽孢杆菌(bacillus)属。
该脱氧核糖核酸酶变体优选为其中脱氧核糖核酸酶亲本具有与seqidno:1中所示的多肽至少80％，诸如至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％，但少于100％的序列同一性的变体。
本发明的变体可通过诸如下面提及的那些程序进行制备。
定点诱变是其中在编码亲本的多核苷酸中的一个或多个限定位点导入一个或多个(例如，若干个)突变的技术。
定点诱变能在体外通过pcr完成，所述pcr涉及包含期望突变的寡核苷酸引物的使用。定点诱变也能在体外通过盒诱变进行，所述盒诱变涉及限制性酶在包含编码亲本的多核苷酸的质粒中的一个位点上裂解以及随后将包含突变的寡核苷酸连入多核苷酸中。通常消化质粒和寡核苷酸的限制性酶是相同的，使得质粒的粘性末端和插入序列彼此连接。参见，例如，scherer和davis，1979，proc.natl.acad.sci.usa76:4949-4955；和barton等人，1990，nucleicacidsres.18:7349-4966。
定点诱变也可通过本领域已知的方法在体内完成。参见，例如，美国专利申请公布no.2004/0171154；storici等人，2001，naturebiotechnol.19:773-776；kren等人，1998，nat.med.4:285-290；以及calissano和macino，1996，fungalgenet.newslett.43:15-16。
合成基因构建需要体外合成设计的多核苷酸分子以编码受关注的多肽。基因合成能够利用若干技术进行，诸如tian等人(2004，nature432:1050-1054)描述的基于多元微芯片的技术，以及在光-可编程的微流体芯片上合成和装配寡核苷酸的类似技术。
能使用已知的诱变、重组、和/或重排方法生成并测试单个或多个氨基酸替换、缺失、和/或插入，随后进行有关的筛选程序，诸如那些由以下文献公开的程序：reidhaar-olson和sauer，1988，science241:53-57；bowie和sauer，1989，proc.natl.acad.sci.usa86:2152-2156；wo95/17413；或wo95/22625。能够使用的其它方法包括易错pcr、噬菌体展示(例如，lowman等人，1991，biochemistry30:10832-10837us5,223,409；wo92/06204)和区域定点诱变(derbyshire等人，1986，gene46:145；ner等人，1988，dna7:127)。
诱变/重排方法可以和高通量的、自动的筛选方法相结合，以检测宿主细胞表达的克隆的、诱变处理的多肽的活性(ness等人，1999，naturebiotechnology17:893-896)。编码活性多肽的诱变dna分子可从宿主细胞中回收并使用本领域的标准方法快速测序。这些方法允许多肽中单个氨基酸残基重要性的快速确定。
半合成基因构建通过组合使用合成基因构建、和/或定点诱变、和/或随机诱变、和/或改组来完成。半合成构建的典型是通过利用合成的多核苷酸片段与pcr技术相结合的方法。因此可从头合成限定的基因区域，而其它区域可使用位点特异性诱变引物进行扩增，而其它区域可经过易错pcr或非易错pcr进行扩增。然后多核苷酸亚序列可以被重排。
核酸构建体
包含编码用于本发明的脱氧核糖核酸酶变体的多核苷酸的核酸构建体可以可操作地连接至一个或多个控制序列，该控制序列指导所述编码序列在合适的宿主细胞中、在与控制序列相容的条件下表达。
可以多种方式操作所述多核苷酸以提供多肽的表达。根据表达载体在其插入载体之前对所述多核苷酸的操作可为可取的和必需的。利用重组dna方法修饰多核苷酸的技术为本领域所熟知。
控制序列可为启动子，被宿主细胞识别用于表达编码本发明的多肽的多核苷酸的多核苷酸。所述启动子包含转录控制序列，其介导所述多肽的表达。所述启动子可为在宿主细胞中显示转录活性的任何多核苷酸，其包括突变型、截短的和杂交体启动子，可得自对宿主细胞同源的或异源的、编码细胞外或细胞内多肽的基因。
用于在细菌宿主细胞中指导本发明的核酸构建体的转录的适宜启动子的示例为得自下列的启动子：解淀粉芽孢杆菌α-淀粉酶基因(amyq)、地衣芽孢杆菌(bacilluslicheniformis)α-淀粉酶基因(amyl)、地衣芽孢杆菌(bacilluslicheniformis)青霉素酶基因(penp)、嗜热脂肪芽胞杆菌(bacillusstearothermophilus)麦芽糖淀粉酶基因(amym)、枯草芽孢杆菌(bacillussubtilis)果聚糖蔗糖酶基因(sacb)、枯草芽孢杆菌(bacillussubtilis)xyla和xylb基因、苏云金芽孢杆菌(bacillusthuringiensis)cryiiia基因(agaisse和lereclus，1994，molecularmicrobiology13：97-107)、大肠杆菌(e.coli)乳糖操纵子、大肠杆菌(e.coli)trc启动子(egon等人，1988，gene69：301-315)、天蓝色链霉菌(streptomycescoelicolor)琼脂糖酶基因(daga)、以及原核β-内酰胺酶基因(villa-kamaroff等人，1978，proc.natl.acad.sci.usa75:3727-3731)、以及tac启动子(deboer等人，1983，proc.natl.acad.sci.usa80，21-25)。另外的启动子在gilbert等人，1980，scientificamerican242:74-94的“来自重组细菌的有用的蛋白质(usefulproteinsfromrecombinantbacteria)”和sambrook等人，1989，同上中有所描述。wo99/43835中公开了串联启动子的例子。
用于在丝状真菌宿主细胞中指导本发明的核酸构建体的转录的适宜启动子的示例是得自芽孢杆菌nidulans(bacillusnidulans)乙酰胺酶、芽孢杆菌niger(bacillusniger)中性α-淀粉酶、芽孢杆菌niger(bacillusniger)酸性稳定α-淀粉酶、芽孢杆菌niger(bacillusniger)或芽孢杆菌awamori(bacillusawamori)葡糖淀粉酶(glaa)、食物芽孢杆菌(bacilluscibi)taka淀粉酶、食物芽孢杆菌(bacilluscibi)碱性蛋白酶、食物芽孢杆菌(bacilluscibi)磷酸丙糖异构酶、尖孢镰孢菌(fusariumoxysporum)胰蛋白酶样蛋白酶(wo96/00787)、毒性镰孢菌(fusariumvenenatum)淀粉葡糖苷酶(wo00/56900)、毒性镰孢菌(fusariumvenenatum)daria(wo00/56900)、毒性镰孢菌(fusariumvenenatum)quinn(wo00/56900)、米黑根毛霉(rhizomucormiehei)脂肪酶、米黑根毛霉天冬氨酸蛋白酶、里氏木霉(trichodermareesei)β-葡糖苷酶、里氏木霉纤维二糖水解酶i、里氏木霉纤维二糖水解酶ii、里氏木霉内切葡聚糖酶i、里氏木霉内切葡聚糖酶ii、里氏木霉内切葡聚糖酶iii、里氏木霉内切葡聚糖酶v、里氏木霉木聚糖酶i、里氏木霉木聚糖酶ii、里氏木霉木聚糖酶iii、里氏木霉β-木糖苷酶和里氏木霉翻译延伸因子的基因的启动子、以及na2-tpi启动子(来自芽孢杆菌(bacillus)中性α-淀粉酶基因的经修饰的启动子，其中未翻译前导序列被来自芽孢杆菌(bacillus)磷酸丙糖异构酶基因的未翻译前导序列所替换；非限制性示例包括来自bacillusniger中性α-淀粉酶基因的改性的启动子，其中未翻译前导序列被来自bacillusnidulans或食物芽孢杆菌(bacilluscibi)磷酸丙糖异构酶基因的未翻译前导序列所替换)；以及它们的突变的、截短的和杂交体启动子。其它启动子在美国专利6,011,147中有所描述。
在酵母宿主中，有用的启动子得自酿酒酵母烯醇酶(eno:1)、酿酒酵母半乳糖激酶(gal1)、酿酒酵母醇脱氢酶/甘油醛-3-磷酸脱氢酶(adh1，adh2/gap)、酿酒酵母磷酸丙糖异构酶(tpi)、酿酒酵母金属硫蛋白(cup1)、和酿酒酵母3-磷酸甘油酸激酶的基因。其它对于酵母宿主细胞有用的启动子在romanos等人，1992，yeast8:423-488中有所描述。
所述对照序列还可为转录终止子，其被宿主细胞识别以终止转录。所述终止子可操作地连接至编码所述多肽的多核苷酸的3’-末端。本发明中可使用在宿主细胞中有功能的任何终止子。
对于细菌宿主细胞优选的终止子得自克劳氏芽孢杆菌(bacillusclausii)碱性蛋白酶(aprh)、地衣芽孢杆菌(bacilluslicheniformis)α-淀粉酶(amyl)、和大肠杆菌(escherichiacoli)核糖体rna(rrnb)的基因。
对于丝状真菌宿主细胞优选的终止子得自芽孢杆菌nidulans(bacillusnidulans)乙酰胺酶、芽孢杆菌nidulans(bacillusnidulans)邻氨基苯甲酸合成酶、芽孢杆菌niger(bacillusniger)葡糖淀粉酶、芽孢杆菌niger(bacillusniger)α-葡萄糖苷酶、食物芽孢杆菌(bacilluscibi)taka淀粉酶、尖孢镰孢菌(fusariumoxysporum)胰蛋白酶样蛋白酶、里氏木霉(trichodermareesei)β-葡糖苷酶、里氏木霉(trichodermareesei)纤维二糖水解酶i、里氏木霉(trichodermareesei)纤维二糖水解酶ii、里氏木霉(trichodermareesei)内切葡聚糖酶i、里氏木霉(trichodermareesei)内切葡聚糖酶ii、里氏木霉(trichodermareesei)内切葡聚糖酶iii、里氏木霉(trichodermareesei)内切葡聚糖酶v、里氏木霉(trichodermareesei)木聚糖酶i、里氏木霉(trichodermareesei)木聚糖酶ii、里氏木霉(trichodermareesei)木聚糖酶iii、里氏木霉(trichodermareesei)β-木糖苷酶、和里氏木霉(trichodermareesei)翻译延伸因子的基因。
对于酵母宿主细胞优选的终止子得自酿酒酵母(saccharomycescerevisiae)烯醇酶、酿酒酵母(saccharomycescerevisiae)细胞色素c(cyc1)、和酿酒酵母(saccharomycescerevisiae)甘油醛-3-磷酸脱氢酶的基因。romanos等人，1992，同上描述了对于酵母宿主细胞有用的其它终止子。
所述对照序列还可为启动子的下游mrna稳定子区和增加所述基因表达的基因编码序列的上游(序列)。
合适的mrna稳定子区的示例得自苏云金芽孢杆菌(bacillusthuringiensis)cryiiia基因(wo94/25612)和枯草芽孢杆菌(bacillussubtilis)sp82基因(hue等人，1995，journalofbacteriology177：3465-3471)
所述对照序列还可为前导序列，对通过宿主细胞翻译重要的mrna的非翻译区。所述前导序列可操作地连接至编码所述多肽的多核苷酸的5’-末端。可使用在宿主细胞中有功能性的任何前导序列。
对于丝状真菌宿主细胞优选的前导序列是得自食物芽孢杆菌(bacilluscibi)taka淀粉酶和bacillusnidulans磷酸丙糖异构酶的基因。
适用于酵母宿主细胞的前导序列得自酿酒酵母(saccharomycescerevisiae)烯醇酶(eno:1)、酿酒酵母(saccharomycescerevisiae)3-磷酸甘油酸激酶、酿酒酵母(saccharomycescerevisiae)α-因子、和酿酒酵母(saccharomycescerevisiae)醇脱氢酶/甘油醛-3-磷酸脱氢酶(adh2/gap)的基因。
控制序列还可为聚腺苷酸化序列，该序列可操作地连接至多核苷酸的3’-末端，并且当被转录时被宿主细胞识别为将聚腺苷酸残基添加至被转录的mrna的信号。可使用在宿主细胞中有功能性的任何聚腺苷酸化序列。
对于丝状真菌宿主细胞优选的聚腺苷酸化序列是得自bacillusnidulans邻氨基苯甲酸合酶、bacillusniger葡糖淀粉酶、bacillusnigerα-葡糖苷酶、食物芽孢杆菌(bacilluscibi)taka淀粉酶、和尖孢镰孢菌(fusariumoxysporum)胰蛋白酶样蛋白酶的基因。
对于酵母宿主细胞有用的聚腺苷酸化序列在guo和sherman，1995，mol.cellularbiol.15:5983-5990中有所描述。
控制序列还可为信号肽编码区，其编码连接至多肽的n-末端的信号肽并指导该多肽进入细胞的分泌途径。多核苷酸的编码序列的5’-末端可固有地包含信号肽编码序列，其与编码多肽的编码序列的片段天然地连接在翻译阅读框中。另选地，编码序列的5’-末端可包含信号肽编码序列，其对该编码序列是外源的。在所述编码序列天然不包含信号肽编码序列的情况下，需要外源信号肽编码序列。另选地，外源信号肽编码序列可简单地替换天然信号肽编码序列以增强多肽的分泌。然而，可使用指导被表达的多肽进入宿主细胞的分泌途径的任何信号肽编码序列。
对于细菌宿主细胞，有效的信号肽编码序列是得自芽孢杆菌属ncib11837麦芽淀粉酶、地衣芽孢杆菌(bacilluslicheniformis)枯草杆菌蛋白酶、地衣芽孢杆菌(bacilluslicheniformis)β-内酰胺酶、嗜热脂肪芽胞杆菌(bacillusstearothermophilus)α-淀粉酶、嗜热脂肪芽胞杆菌中性蛋白酶(nprt，nprs，nprm)、和枯草芽孢杆菌(bacillussubtilis)prsa的基因的信号肽编码序列。另外的信号肽在simonen和palva，1993，microbiologicalreviews57:109-137中有所描述。
对于丝状真菌宿主细胞有效的信号肽编码序列是得自芽孢杆菌niger(bacillusniger)中性淀粉酶、芽孢杆菌niger(bacillusniger)葡糖淀粉酶、食物芽孢杆菌(bacilluscibi)taka淀粉酶、特异腐质霉(humicolainsolens)纤维素酶、特异腐质霉(humicolainsolens)内切葡聚糖酶v、柔毛腐质霉(humicolalanuginosa)脂肪酶、和米黑根毛霉(rhizomucormiehei)天冬氨酸蛋白酶的基因的信号肽编码序列。
对于酵母宿主细胞有用的信号肽是得自酿酒酵母α-因子和酿酒酵母反转酶的基因。romanos等人，1992，同上描述了其它有用的信号肽编码序列。
控制序列还可为前肽编码序列，其编码定位在多肽的n-末端的前肽。所得的多肽被称为酶原或多肽原(或有时候为酶原)。多肽原是大体失活的，并且能够通过来自多肽原的多肽的催化或自催化裂解转变为活性多肽。前肽编码序列可得自枯草芽孢杆菌(bacillussubtilis)碱性蛋白酶(apre)、枯草芽孢杆菌(bacillussubtilis)中性蛋白酶(nprt)、嗜热毁丝霉(myceliophthorathermophila)漆酶(wo95/33836)、米黑根毛霉天冬氨酸蛋白酶和酿酒酵母α-因子的基因。
在信号肽和前肽序列同时存在的情况下，所述前肽序列定位成邻接多肽的n-末端，并且所述信号肽序列定位成邻接前肽序列的n-末端。
添加调控序列也是可取的，其调控与宿主细胞的生长相关的多肽的表达。调控序列的示例是导致基因响应于化学或物理刺激(包括调控化合物的存在)而开启或关闭表达的那些(序列)。原核系统中的调控序列包括lac、tac和trp操纵子系统。在酵母中，也可使用adh2系统或gal1系统。在丝状真菌中，可使用bacillusniger葡糖淀粉酶启动子、食物芽孢杆菌(bacilluscibi)takaα-淀粉酶启动子和食物芽孢杆菌(bacilluscibi)葡糖淀粉酶启动子、里氏木霉(trichodermareesei)纤维二糖水解酶i启动子和里氏木霉(trichodermareesei)纤维二糖水解酶ii启动子。调控序列的其它例子是允许基因扩增的那些。在真核系统中，这些调控序列包括在甲氨蝶呤的存在下扩增的二氢叶酸还原酶基因，以及与重金属扩增的金属硫蛋白基因。在这些情况下，编码多肽的多核苷酸将可操作地连接至调控序列。
表达载体
本公开还涉及重组表达载体，其包含编码脱氧核糖核酸酶变体的多核苷酸、启动子、以及转录和翻译停止信号。可将各种核苷酸和控制序列结合在一起以制备重组表达载体，其可包括一个或多个方便的限制性位点以允许在此类位点插入或替换编码多肽的多核苷酸。作为另外一种选择，可通过将所述多核苷酸或包含所述多核苷酸的核酸构建体插入合适的用于表达的载体来表达所述多核苷酸。在创建表达载体中，所述编码序列位于载体中使得所述编码序列与合适的用于表达的对照序列可操作地连接。在另外的方面，通过核苷酸置换修饰多核苷酸序列密码子，以对应于旨在用于制备本发明的多肽的宿主生物体的密码子使用。所述重组表达载体可为任何载体(例如，质粒或病毒)，其可方便的经过重组dna步骤并可形成所述多核苷酸的表达。载体的选择通常取决于载体与被导入所述载体的宿主细胞的相容性。载体可为线性或封闭的环形质粒。
所述载体可为自主复制载体，即，作为染色体外实体存在的载体，其复制独立于染色体复制，例如，质粒、染色体外元件、微型染色体、或人工染色体。所述载体可包含任何形式以确保自我复制。作为另外一种选择，所述载体可为一种载体，当其被导入宿主细胞时被整合进基因组并连同被整合进的染色体一起复制。此外，可使用单个载体或质粒、或同时包含被导入宿主细胞的基因组的总dna的两个或更多个载体或质粒、或转座子。
所述载体优选地包含一个或多个选择性标记，其允许简单选择转化的，转染的，转导等的细胞。选择性标记是一个基因，其产物提供了生物灭杀剂或病毒抗性、重金属抗性、原养型到营养缺陷型等等。
细菌选择性标记的示例是地衣芽孢杆菌(bacilluslicheniformis)或枯草芽孢杆菌(bacillussubtilis)dal基因，或赋予抗生素抗性(诸如氨苄青霉素、氯霉素、卡那霉素、新霉素、奇放线菌素或四环素抗性)的标记。对于酵母宿主细胞合适的标记包括但不限于ade2、his3、leu2、lys2、met3、trp1和ura3。用于丝状真菌宿主细胞的选择性标记包括但不限于adea(磷酸核糖酰氨咪唑琥珀酸甲酰胺合酶)、adeb(磷酸核糖酰氨基咪唑合酶)、amds(乙酰胺酶)、argb(鸟氨酸氨甲酰转移酶)、bar(草胺膦乙酰转移酶)、hph(潮霉素磷酸转移酶)、niad(硝酸还原酶)、pyrg(乳清酸核苷-5’磷酸脱羧酶)、sc(硫酸腺苷酰基转移酶)、和trpc(邻氨基苯甲酸合酶)，以及其等同物。优选的用于芽孢杆菌属(bacillus)细胞中的是bacillusnidulans或食物芽孢杆菌(bacilluscibi)amds和pyrg基因以及吸水链霉菌(streptomyceshygroscopicus)bar基因。优选用于木霉属(trichoderma)细胞的是adea、adeb、amds、hph和pyrg基因。
选择性标记可以是双选择性标记系统，如在wo2010/039889中所述的。在一些方面中，双选择性标记是hph-tk双选择性标记系统。
所述载体优选地包含元件，其允许载体整合至宿主细胞基因组或在细胞中独立于基因组自主复制载体。
对于整合进入宿主细胞基因组，所述载体可依赖于编码所述多肽的多核苷酸的序列或载体的任何其他元件，通过同源或非同源重组整合进基因组。作为另外一种选择，所述载体可包含另外的多核苷酸，用于指导通过同源重组在染色体的精确位置整合进入宿主细胞的基因组。为了增加在精确位置整合的可能性，整合元件应包含足够数量的核酸，诸如100至10,000个碱基对、400至10,000个碱基对、以及800至10,000个碱基对，其与对应的靶序列具有高度的序列同一性以提高同源重组的概率。所述整合元件可为与宿主细胞基因组中靶序列同源的任何序列。此外，所述整合元件可为非编码或可编码多核苷酸。另一方面，所述载体可通过非同源重组整合进宿主细胞的基因组。
对于自主复制，所述载体还包含复制起点，使得所述载体在所考虑的宿主细胞中自主复制。所述复制起点可为在细胞中起作用的介导自主复制的任何质粒复制因子。术语“复制起点”或“质粒复制因子”是指使得质粒或载体在体内复制的多核苷酸。
细菌复制起点的例子是质粒pbr322、puc19、pacyc177和pacyc184的复制起点，其允许在大肠杆菌(e.coli)中复制，以及pub110、pe194、pta1060、和pamβ1的复制起点，其允许在芽孢杆菌属中复制。
可用于酵母宿主细胞的复制起点的例子是2微米复制起点、ars1、ars4、ars1和cen3的组合、以及ars4和cen6的组合。
可用于丝状真菌细胞的复制起点的示例是ama1和ans1(gems等人，1991，gene98:61-67；cullen等人，1987，nucleicacidsres.15:9163-9175；wo00/24883)。可按照在wo00/24883中公开的方法完成ama1基因的分离和包含所述基因的质粒或载体的构建。
可将多于一个拷贝的本发明的多核苷酸插入宿主细胞以增加多肽的制备。可通过将至少一个附加的拷贝的所述序列整合进宿主细胞基因组、或在细胞包含扩增拷贝的选择性标记基因的情况下通过包含所述多核苷酸的可扩增的选择性标记来获得所述多核苷酸拷贝数的增加，从而能通过在合适的选择性试剂的存在下培养所述细胞而选择所述多核苷酸的附加的拷贝。
用于连接上述元件以构建本发明的所述重组表达载体的步骤是本领域技术人员所熟知的(参见，例如，sambrook等人，1989，同上)。
宿主细胞
重组宿主细胞包含可操作地连接至一个或多个控制序列的多核苷酸，该控制序列指导可用于本发明的多肽的制备。如前面所述，将包含多核苷酸的构建体或载体导入宿主细胞使得构建体或载体保持为染色体整合体或作为自主复制的染色体外载体。术语“宿主细胞”涵盖了由于在复制过程中发生的突变而与亲本细胞不相同的亲本细胞的任何子代。宿主细胞的选择将在很大程度上取决于编码多肽的基因和它的来源。
宿主细胞可为在本发明的多肽的重组制备中有用的任何细胞，例如，原核细胞或真核细胞。
所述原核宿主细胞可为任何革兰氏阳性或革兰氏阴性细菌。革兰氏阳性细菌包括但不限于芽孢杆菌属、梭菌属(clostridium)、肠球菌属(enterococcus)、地芽孢杆菌属(geobacillus)、乳杆菌属(lactobacillus)、乳球菌属(lactococcus)、海洋芽胞杆菌属(oceanobacillus)、葡萄球菌属(staphylococcus)、链球菌属(streptococcus)、和链霉菌属(streptomyces)。革兰氏阴性细菌包括但不限于弯曲杆菌(campylobacter)、大肠杆菌(e.coli)、黄杆菌属(flavobacterium)、梭杆菌属(fusobacterium)、螺杆菌属(helicobacter)、泥杆菌属(ilyobacter)、奈瑟氏球菌属(neisseria)、假单胞菌属(pseudomonas)、沙门氏菌属(salmonella)和脲原体属。
所述细菌宿主细胞可为任何芽孢杆菌属细胞，包括但不限于嗜碱芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、短芽孢杆菌、环状芽胞杆菌(bacilluscirculans)、克劳氏芽孢杆菌(bacillusclausii)、凝结芽孢杆菌(bacilluscoagulans)、坚强芽孢杆菌(bacillusfirmus)、灿烂芽孢杆菌(bacilluslautus)、迟缓芽孢杆菌(bacilluslentus)、地衣芽孢杆菌(bacilluslicheniformis)、巨大芽胞杆菌(bacillusmegaterium)、短小芽孢杆菌、嗜热脂肪芽胞杆菌(bacillusstearothermophilus)、枯草芽孢杆菌(bacillussubtilis)和苏云金芽孢杆菌(bacillusthuringiensis)细胞。
细菌宿主细胞还可为任何链球菌属(streptococcus)细胞，包括但不限于似马链球菌(streptococcusequisimilis)、酿脓链球菌(streptococcuspyogenes)、乳房链球菌(streptococcusuberis)和马链球菌兽瘟亚种(streptococcusequisubsp.zooepidemicus)细胞。
细菌宿主细胞还可为任何链霉菌属(streptomyces)细胞，包括但不限于不产色链霉菌(streptomycesachromogenes)、除虫链霉菌(streptomycesavermitilis)、天蓝色链霉菌(streptomycescoelicolor)、灰色链霉菌(streptomycesgriseus)、和浅青紫链霉菌(streptomyceslividans)细胞。
将dna导入芽孢杆菌属细胞可通过原生质体转化(参见，例如，chang和cohen，1979，mol.gen.genet.168:111-115)、感受态细胞转化(参见，例如young和spizizen，1961，j.bacteriol.81:823-829、或dubnau和davidoff-abelson，1971，j.mol.biol.56：209-221)，电穿孔(参见，例如shigekawa和dower，1988，biotechniques6：742-751)，或结合(参见，例如koehler和thorne，1987，j.bacteriol.169:5271-5278)而实现。将dna导入大肠杆菌(e.coli)细胞可通过原生质体转化(参见，例如hanahan，1983，j.mol.biol.166:557-580)或电穿孔(参见，例如dower等人，1988，nucleicacidsres.16:6127-6145)而实现。将dna导入链霉菌属(streptomyces)细胞可通过原生质体转化、电穿孔(参见，例如gong等人，2004，foliamicrobiol.(praha)49:399-405)、结合(参见，例如mazodier等人，1989，j.bacteriol.171:3583-3585)、或转导(参见，例如burke等人，2001，proc.natl.acad.sci.usa98:6289-6294)而实现。将dna导入假单胞菌属(pseudomonas)细胞可通过电穿孔(参见，例如choi等人，2006，j.microbiol.methods64:391-397)、或结合(参见，例如pinedo和smets，2005，appl.environ.microbiol.71:51-57)而实现。将dna导入链球菌属(streptococcus)细胞可通过自然感受态(参见，例如perry和kuramitsu，1981，infect.immun.32：1295-1297)、原生质体转化(参见，例如catt和jollick，1991，microbios68：189-207)、电穿孔(参见，例如buckley等人，1999，appl.environ.microbiol.65:3800-3804)或结合(参见，例如clewell，1981，microbiol.rev.45:409-436)而实现。然而，可使用本领域已知的将dna导入宿主细胞的任何方法。
所述宿主细胞还可为真核细胞，诸如哺乳动物、昆虫、植物或真菌细胞。
所述宿主细胞还可为真菌细胞。如本文所用，“真菌”包括子囊菌门(ascomycota)、担子菌门(basidiomycota)、壶菌门(chytridiomycota)和缀合菌门(zygomycota)以及卵菌门(oomycota)和所有分生孢子真菌(如hawksworth等人，在ainsworthandbisby’sdictionaryofthefungi，第8版，1995，cabinternational，universitypress，cambridge，uk中定义的)。
所述真菌宿主细胞可为酵母细胞。如本文所用，“yeast”包括产子囊孢子酵母(ascosporogenousyeast)(内孢霉目(endomycetales))、产担子酵母(basidiosporogenousyeast)和属于不完全菌纲(fungiimperfecti)(芽生菌目(blastomycetes))的酵母。由于未来酵母的分类可发生变化，就本发明的目的而言，应如biologyandactivitiesofyeast(skinner，passmore和davenport，editors，soc.app.bacteriol.symposiumseriesno.9,1980)中所述定义酵母。
酵母宿主细胞可为假丝酵母属(candida)、汉逊酵母属(hansenula)、克鲁维酵母属(kluyveromyces)、毕赤酵母属(pichia)、酵母属(saccharomyces)、裂殖酵母属(schizosaccharomyces)、或耶氏酵母属(yarrowia)细胞，诸如乳酸克鲁维酵母(kluyveromyceslactis)、卡尔斯伯酵母(saccharomycescarlsbergensis)、酿酒酵母、糖化酵母、道格拉氏酵母(saccharomycesdouglasii)、克鲁费酵母(saccharomyceskluyveri)、诺地酵母(saccharomycesnorbensis)、卵形酵母(saccharomycesoviformis)、或解脂耶氏酵母(yarrowialipolytica)细胞。
所述真菌宿主细胞可为丝状真菌细胞。“丝状真菌”包括所有丝状形式的真菌门亚门和卵菌门(如hawksworth等人，1995，同上所定义的)。所述丝状真菌是特征大致在于由甲壳质、纤维素、葡聚糖、脱乙酰壳多糖、甘露聚糖和其它复合多糖构成的菌丝壁。营养生长是通过菌丝延长，并且碳分解代谢是专性需氧的。相比之下，酵母诸如酿酒酵母的营养生长是通过单细胞菌体的出芽，并且碳分解代谢可为发酵的。
所述丝状真菌宿主细胞可为支顶孢属(acremonium)、芽孢杆菌属(bacillus)、出芽短梗霉(aureobasidium)、烟管菌属(bjerkandera)、拟蜡菌属(ceriporiopsis)、金黄孢子菌属(chrysosporium)、鬼伞属(coprinus)、革盖菌(coriolus)、隐球菌属(cryptococcus)、丝梗霉属(filibasidium)、镰孢菌属(fusarium)、腐质霉属(humicola)、稻温病菌(magnaporthe)、毛霉属(mucor)、毁丝霉属(myceliophthora)、新考玛脂霉属(neocallimastix)、脉孢菌属(neurospora)、拟青霉属(paecilomyces)、青霉属(penicillium)、显革菌属(phanerochaete)、射脉菌属(phlebia)、梨囊鞭菌属(piromyces)、侧耳菌属(pleurotus)、裂褶菌属(schizophyllum)、篮状菌属(talaromyces)、嗜热子囊菌(thermoascus)、草根霉属(thielavia)、弯颈霉属(tolypocladium)、栓菌属(trametes)、或木霉属(trichoderma)细胞。
例如，所述丝状真菌宿主细胞可为芽孢杆菌awamori(bacillusawamori)、臭芽孢杆菌(bacillusfoetidus)、烟芽孢杆菌(bacillusfumigatus)、日本芽孢杆菌(bacillusjaponicus)、芽孢杆菌nidulans(bacillusnidulans)、芽孢杆菌niger(bacillusniger)、食物芽孢杆菌(bacilluscibi)、烟管菌(bjerkanderaadusta)、干拟蜡菌(ceriporiopsisaneirina)、卡内基拟蜡菌(ceriporiopsiscaregiea)、浅黄拟蜡孔菌(ceriporiopsisgilvescens)、潘诺希塔拟蜡菌(ceriporiopsispannocinta)、环带拟蜡菌(ceriporiopsisrivulosa)、微红拟蜡菌(ceriporiopsissubrufa)、虫拟蜡菌(ceriporiopsissubvermispora)、狭边金孢子菌(chrysosporiuminops)、嗜毛金孢菌(chrysosporiumkeratinophilum)、卢克诺文思金孢子菌(chrysosporiumlucknowense)、粪状金孢菌(chrysosporiummerdarium)、租金孢菌(chrysosporiumpannicola)、昆士兰金孢菌(chrysosporiumqueenslandicum)、热带金孢菌(chrysosporiumtropicum)、环纹金孢菌(chrysosporiumzonatum)、灰盖鬼伞(coprinuscinereus)、毛云芝菌(coriolushirsutus)、镰孢属(fusariumbactridioides)、谷类镰孢菌(fusariumcerealis)、库威镰孢菌(fusariumcrookwellense)、黄色镰孢菌(fusariumculmorum)、禾谷镰孢菌(fusariumgraminearum)、禾镰孢菌(fusariumgraminum)、异孢镰孢菌(fusariumheterosporum)、合欢木镰孢菌(fusariumnegundi)、尖孢镰孢菌(fusariumoxysporum)、网状镰孢菌(fusariumreticulatum)、粉红镰孢菌(fusariumroseum)、接骨木镰孢菌(fusariumsambucinum)、肤色镰孢菌(fusariumsarcochroum)、拟枝镰孢菌(fusariumsporotrichioides)、硫色镰孢菌(fusariumsulphureum)、圆镰孢菌(fusariumtorulosum)、拟丝镰孢菌(fusariumtrichothecioides)、镶片镰孢菌(fusariumvenenatum)、孤独腐质霉(humicolainsolens)、柔毛腐质霉(humicolalanuginosa)、米赫毛霉(mucormiehei)、嗜热毁丝霉(myceliophthorathermophila)、粗糙脉孢菌(neurosporacrassa)、产紫青霉(penicilliumpurpurogenum)、黄孢原毛平革菌(phanerochaetechrysosporium)、射纹革菌(phlebiaradiata)、刺芹侧耳(pleurotuseryngii)、太瑞斯梭孢壳霉(thielaviaterrestris)、长绒毛栓菌(trametesvillosa)、变色栓菌(trametesversicolor)、哈茨木霉(trichodermaharzianum)、康氏木霉(trichodermakoningii)、长梗木霉(trichodermalongibrachiatum)、里氏木霉(trichodermareesei)、或绿色木霉(trichodermaviride)细胞。
可以通过涉及原生质体形成、原生质体转化和细胞壁再生的方法，以本身已知的方式转化真菌细胞。用于转化芽孢杆菌属(bacillus)和木霉属(trichoderma)宿主细胞的合适的步骤在ep238023，yelton等人，1984，proc.natl.acad.sci.usa81：1470-1474以及christensen等人，1988，bio/technology6:1419-1422中有所描述。用于转化镰孢属(fusarium)菌种的合适的方法在malardier等人，1989，gene78:147-156和wo96/00787中有所描述。可使用becker和guarente，inabelson，j.n.和simon，m.i.，editors，guidetoyeastgeneticsandmolecularbiology，methodsinenzymology，第194卷，第182-187页，academicpress，inc.，newyork；ito等人，1983，j.bacteriol.153:153-163；和hinnen等人，1978，proc.natl.acad.sci.usa75:1920的规程转化酵母。
制备方法
制备用于本发明的脱氧核糖核酸酶变体的方法，可包括(a)在有利于制备该脱氧核糖核酸酶变体的条件下培养细胞；以及任选地，(b)回收脱氧核糖核酸酶变体。在一些方面中，细胞是芽孢杆菌属(bacillus)细胞。在另一方面，细胞是食物芽孢杆菌(bacilluscibi)细胞。
制备可用于本发明的脱氧核糖核酸酶变体的方法，可包括(a)在有利于制备该脱氧核糖核酸酶变体的条件下培养本发明的重组宿主细胞；以及任选地，(b)回收脱氧核糖核酸酶变体。
用于制备脱氧核糖核酸酶变体的方法，可包括：
a)将三个或更多个选自下列的替换导入亲本脱氧核糖核酸酶中：t1i、t1v、g4k、s7g、k8r、s9i、s13y、t22p、s25p、s27l、l27r、d32i、d32l、d32r、d32v、l33r、l33k、s39p、s39c、g41p、s42g、s42h、s42c、q48d、d56i、d56l、s57w、s59v、s59c、n61e、t65l、t65v、t65m、t65w、s66m、s66w、s66y、s66v、v76l、t77y、f78l、p91l、s101n、s106l、s106r、s106h、q109r、a112e、s116d、t127v、s130a、s130y、t138d、q140v、q140g、s144p、a147h、c148a、w154y、t157v、y159a、y159r、k160v、g162s、g162d、g162c、q166d、s167l、q174n、g175d、g175n、l177y、n178d、n178e、s179l、c180a、s181e和s181l(根据seqidno:1进行编号)，以制备变体脱氧核糖核酸酶，
b)并且回收制备的脱氧核糖核酸酶变体。
优选的变体可通过以下方法制备：
a)将三个或更多个选自下列的替换导入亲本脱氧核糖核酸酶中：g4k、s7g、k8r、s9i、n16g、s27k、s27r、d32f、d32i、d32l、d32r、d32v、l33h、l33r、l33k、l33v、l33y、s39c、g41p、s42h、d45e、q48d、n61e、t65m、t65w、s66r,s66m、s66w、s66y、s66v、f78l、p91l、s101n、s106l、s106r、s106h、q109e、a112e、t127p、s130a、s130y、t138d、q140v、q140g、a147p、c148a、w154y、t157v、y159a、y159r、g162c、q174n、l177y、s179l和c180a(根据seqidno:1进行编号)，以制备变体脱氧核糖核酸酶，
b)并且回收制备的脱氧核糖核酸酶变体。
一个方面涉及用于制备脱氧核糖核酸酶变体的方法，所述方法包括：
a)将三个诸如至少3-20个，例如至少5至20个、至少10至20个或诸如至少15至20个的下列替换导入亲本脱氧核糖核酸酶中：t1i、t1v、g4k、s7g、k8r、t1i、t1v、g4k、s7g、k8r、s13y、t22p、s25p、s27l、s27r、d32i、d32l、d32r、d32v、l33r、l33k、s39p、s39c、g41p、s42g、s42h、s42c、q48d、d56i、d56l、s57w、s59v、s59c、t65l、t65v、t65m、t65w、s66m、s66w、s66y、s66v、v76l、t77y、s101n、s106l、s106r、s106h、q109r、s116d、t127v、s130a、s130y、t138d、q140v、q140g、s144p、a147h、c148a、w154y、t157v、y159a、y159r、k160v、g162s、g162d、g162c、q166d、s167l、q174n、g175d、g175n、l177y、n178d、n178e、s179l、c180a、s181e或s181l(根据seqidno:1进行编号)，以制备变体脱氧核糖核酸酶，
b)并且回收制备的脱氧核糖核酸酶变体。
优选的变体可通过以下方法制备：
a)将三个诸如至少3-20个，例如至少5至20个、至少10至20个或诸如至少15至20个的下列替换导入亲本脱氧核糖核酸酶中：g4k、s7g、k8r、s9i、n16g、s27k、s27r、d32f、d32i、d32l、d32r、d32v、l33h,l33r、l33k、l33v、l33y、s39c、g41p、s42h、d45e、q48d、n61e、t65m、t65w、s66r,s66m、s66w、s66y、s66v、f78l、p91l、s101n、s106l、s106r、s106h、q109e、a112e、t127p、s130a、s130y、t138d、q140v、q140g、a147p、c148a、w154y、t157v、y159a、y159r、g162c、q174n、l177y、s179l和c180a(根据seqidno:1进行编号)，以制备变体脱氧核糖核酸酶，
b)并且回收制备的脱氧核糖核酸酶变体。
该脱氧核糖核酸酶亲本优选地属于gys进化枝，并且其中亲本脱氧核糖核酸酶包含基序[[d/m/l][s/t]gysr[d/n](seqidno：25)或asxnrskg(seqidno：26)中的一者或两者。
在本发明的一个方面，亲本脱氧核糖核酸酶选自下列多肽：
a)具有与seqidno:1中所示的多肽至少60％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
b)具有与seqidno:2中所示的多肽至少60％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
c)具有与seqidno:3中所示的多肽至少60％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
d)具有与seqidno:4中所示的多肽至少60％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
e)具有与seqidno:5中所示的多肽至少60％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
f)具有与seqidno:6中所示的多肽至少60％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
g)具有与seqidno:7中所示的多肽至少60％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
h)具有与seqidno:8中所示的多肽至少60％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
i)具有与seqidno:9中所示的多肽至少60％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
j)具有与seqidno:10中所示的多肽至少60％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
k)具有与seqidno:11中所示的多肽至少60％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
l)具有与seqidno:12中所示的多肽至少60％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
m)具有与seqidno:13中所示的多肽至少60％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
n)具有与seqidno:14中所示的多肽至少60％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
o)具有与seqidno:15中所示的多肽至少60％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
p)具有与seqidno:16中所示的多肽至少60％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
q)具有与seqidno:17中所示的多肽至少60％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
r)具有与seqidno:18中所示的多肽至少60％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
s)具有与seqidno:19中所示的多肽至少60％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
t)具有与seqidno:20中所示的多肽至少60％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
u)具有与seqidno:21中所示的多肽至少60％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
v)具有与seqidno:22中所示的多肽至少60％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
w)具有与seqidno:23中所示的多肽至少60％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，和
x)具有与seqidno:24中所示的多肽至少60％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽。
亲本脱氧核糖核酸酶可得自芽孢杆菌(bacillu)属。
在一些方面，亲本脱氧核糖核酸酶得自以下芽孢杆菌(bacillus)中的任一种，例如芽孢杆菌属(bacillus)，诸如食物芽孢杆菌(bacilluscibi)、芽孢杆菌属62451、堀越氏芽孢杆菌(bacillushorikoshii)、芽孢杆菌属16840、芽孢杆菌属62668、芽孢杆菌属13395、角质芽孢杆菌(bacillushorneckiae)、芽孢杆菌属11238、病研所芽孢杆菌(bacillusidriensis)、芽孢杆菌属62520、居藻芽孢杆菌(bacillusalgicola)、越南芽孢杆菌(bacillusvietnamensis)、花津滩芽孢杆菌(bacillushwajmpoensis)、印度芽孢杆菌(bacillusindicus)、黄海芽胞杆菌(bacillusmarisflavi)、路西法芽孢杆菌(bacillusluciferensis)或芽孢杆菌属sa2-6。
使用本领域已知的方法在适于制备该多肽的营养培养基中培养所述宿主细胞。例如，所述细胞可以在实验室或工业发酵罐中，在合适的培养基中和在允许所述多肽被表达和/或分离的条件下，通过摇瓶培养、或小规模或大规模发酵(包括连续、分批、补料分批或固态发酵)来培养。在包含碳源和氮源和无机盐的合适的营养培养基中，使用本领域已知的步骤进行培养。合适的培养基可购自商业供应商或可根据公布的组合物(例如，在美国典型培养物保藏中心(americantypeculturecollection)的目录中)制备。如果多肽被分泌在营养培养基中，可直接从培养基中回收该多肽。如果多肽不是分泌的，可从细胞裂解液中回收它。
可使用本领域已知的对脱氧核糖核酸酶变体多肽为特异性的方法来检测该脱氧核糖核酸酶变体。这些检测方法包括但不限于使用特异性抗体、形成酶产物或酶底物的消失。例如，可使用酶反应分析法以测定多肽的活性。
可使用本领域中已知的方法回收脱氧核糖核酸酶变体多肽。例如，可通过常规步骤，包括但不限于采集、离心、过滤、提取、喷雾干燥、蒸发或沉淀，从营养培养基回收脱氧核糖核酸酶变体多肽。在一些方面，回收包含脱氧核糖核酸酶变体的发酵液。
可通过本领域中已知的多种方法，包括但不限于色谱法(例如，离子交换、亲和、疏水、色谱聚焦和体积排阻)、电泳方法(例如，制备性等电聚焦)、溶解度差异(例如，硫酸铵沉淀)，sds-page、或提取(参见，例如，proteinpurification，janson和ryden，editors，vchpublishers，newyork，1989)纯化多肽以获得基本上纯的多肽。
在一个可供选择的方面，不回收所述多肽，而是使用表达所述多肽的本发明的宿主细胞作为变体源。
洗涤剂组合物
优选的洗涤剂组合物用于清洁和/或处理织物和/或硬质表面。
助剂优选地包括选自下列的一种或多种助剂：表面活性剂、助洗剂、絮凝助剂、螯合剂、染料转移抑制剂、酶、酶稳定剂(包括例如硼酸、硼酸盐、cmc和/或多元醇诸如丙二醇)、酶抑制剂、催化材料、漂白活化剂、过氧化氢、过氧化氢源、预成形的过酸、聚合物(具体地讲诸如聚合物分散剂)、粘土污垢去除/抗再沉积剂和染料转移抑制剂、增白剂、抑泡剂、染料、香料、结构增弹剂、织物软化剂、载体、水溶助长剂、助洗剂和共助洗剂、织物调色剂、抗发泡剂、分散剂、加工助剂、颜料、抗收缩剂、抗皱剂、杀细菌剂、粘合剂、缓蚀剂、崩解剂/崩解试剂、织物调理剂(包括粘土)、填料/加工助剂、荧光增白剂/光学增白剂、泡沫促进剂、泡沫(泡)调节剂、香料、垢悬浮剂、抑泡剂、防锈剂和芯吸剂、以及它们的混合物。
所述洗涤剂助剂成分优选包含表面活性剂。具体地讲，对于清洁组合物而言，表面活性剂优选包含阴离子和/或非离子表面活性剂。当两者均存在时，阴离子表面活性剂与非离子表面活性剂的重量比优选为25:1至1:2或20:1至2:3。在一些方面，洗涤剂助剂成分包括助洗剂或粘土污垢去除/抗再沉积剂。
优选的助剂成分优选包含附加的酶。洗涤剂组合物可包含一种或多种附加的酶，所述附加的酶优选选自蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、角质酶、纤维素酶、内切葡聚糖酶、木葡聚糖酶、果胶酶、果胶裂解酶、黄原胶酶、过氧化物酶、卤代加过氧酶(haloperoxygenases)、过氧化氢酶、甘露聚糖酶以及它们的混合物。适用于本发明洗涤剂组合物的具体的优选的酶描述如下。
洗涤剂组合物可被配制成条状、均一化片剂、具有两层或更多层的片剂、具有一个或多个隔室(优选地三个或更多个隔室)的小袋、常规或致密型粉末、颗粒、糊剂、凝胶或常规的、致密或浓缩的液体。洗涤剂组合物可为液体洗涤剂、粉末洗涤剂或颗粒洗涤剂。
本发明的一些方面涉及包含脱氧核糖核酸酶的衣物洗涤或清洁组合物，优选地，脱氧核糖核酸酶含量按所述组合物的重量计(重量％)，为约0.000001重量％至约20重量％、约0.0001重量％至约10重量％、约0.0002重量％至约10重量％、约0.0005重量％至约10重量％、约0.001重量％至约5重量％、约0.002重量％至约1重量％、约0.005重量％至约1重量％，优选地约0.01重量％至约0.5重量％，优选地约0.0002重量％至约1重量％。该量为重量％/单位活性酶，例如按所述组合物的重量计，约0.00001重量％至约10重量％、0.00001重量％至约20重量％的脱氧核糖核酸酶。
具有脱氧核糖核酸酶活性的活性酶的最优选的浓度优选为总洗涤剂浓度的至少0.00001％、优选地至少0.00002％、优选地至少0.0001重量％、优选地至少0.0002重量％、优选地至少0.001重量％、优选地至少0.002重量％、优选地至少0.005重量％、优选地至少0.01重量％、优选地至少0.02重量％、优选地至少0.05重量％、优选地至少0.1重量％、优选地至少1重量％、优选地至少2重量％、优选地至少5重量％、优选地至少15重量％或优选地至少10重量％。
酶量也可为ppm(mg/l)活性酶蛋白质。因此，洗涤剂组合物中脱氧核糖核酸酶的量可以为至少0.00001ppm、0.00002ppm、0.00005ppm、0.0001ppm、0.0002ppm、0.0005ppm、0.001ppm、0.002ppm、0.005ppm、0.01ppm、0.02ppm、0.05ppm、0.1ppm、0.2ppm、0.5ppm、1ppm、2ppm、5ppm、10ppm或至少20ppm、至少50ppm、80ppm或至少100ppm的脱氧核糖核酸酶。在一个方面，组合物中脱氧核糖核酸酶的量在约0.00001ppm至约100ppm的范围内，或在约0.0001ppm至约100ppm的范围内，在约0.001ppm至约1000ppm脱氧核糖核酸酶的范围内，或在约0.001ppm至约100ppm脱氧核糖核酸酶的范围内。
在一些方面，该洗涤剂组合物是适用于例如在高的温度和/或ph条件下，诸如在或高于40℃和/或在或高于ph8下洗涤的液体或粉末衣物洗涤剂。在一些方面，该洗涤剂组合物是适用于例如在低的温度和/或ph条件(诸如在或低于20℃和/或ph6)下洗涤的液体或粉末衣物洗涤剂。洗涤剂还可被配制为单位剂量洗涤剂和/或压缩洗涤剂，可选的为具有最低水量或无水。洗涤剂组合物还可为盘碟洗涤洗涤剂。该衣物洗涤剂和盘碟洗涤剂可不含磷酸盐。
本发明还涉及一种洗涤剂组合物，其为织物处理组合物诸如织物软化剂组合物。优选的织物软化剂组合物包括织物软化剂化合物，其具有季铵酯软化活性(织物软化活性物质，fabricsofteningactive“fsa”)，优选的量为按所述组合物的重量计从2至50。在优选的织物软化剂组合物中，季铵酯软化活性物质按所述组合物的重量计以从3.0％至30％，更优选的从3.0％至18％或20％，甚至更优选的从7.0％至15％的含量存在。季铵酯软化活性物质的含量可取决于组合物(稀释的或浓缩的组合物)中全部软化活性物质的期望浓度以及其它软化活性物质的存在与否。更高含量会增加在从洗衣机中递送时产生分配器残余或随时间推移粘度不稳定的风险。
适宜的季铵软化化合物(季型)包括但不限于选自下列的物质：单酯季铵软化化合物、二酯季铵软化化合物、三酯季铵软化化合物以及它们的混合物。优选地，按全部季铵酯软化活性物质的重量计，单酯季铵软化化合物的含量为从2.0％至40.0％，二酯季铵软化化合物的含量为从40.0％至98.0％，三酯季铵软化化合物的含量为从0.0％至25.0％。
季铵酯软化活性物质可包含下式的化合物：
{r2(4-m)-n -[x-y-r1]m}a-
其中：
m为1、2或3，条件是每个m的值是相同的；
每个r1是独立地烃基、或支链烃基基团，优选地r1是直链的，更优选地r1为部分不饱和的直链烷基链；
每个r2是独立地c1-c3烷基或羟烷基基团，优选地r2选自甲基、乙基、丙基、羟乙基、2-羟丙基、1-甲基-2-羟乙基、聚(c2-3烷氧基)、聚乙氧基、苄基；
每个x为独立地(ch2)n、ch2-ch(ch3)-或ch-(ch3)-ch2-并且
每个n是独立地1、2、3或4，优选地每个n是2；
每个y为独立地-o-(o)c-或-c(o)-o-；
a-独立地选自氯离子、甲基硫酸根、和乙基硫酸根，优选地a-选自氯离子和甲基硫酸根；
前提条件是当y为-o-(o)c-时，每个r1中的碳的总和为13至21，优选为13至19。
在优选的液体织物软化剂组合物中，从其形成季铵织物软化活性物质的母体脂肪酸的碘值是从0至100，更优选地从10至60，甚至更优选从15至45。
合适的季铵酯软化活性物质的示例可从kaochemicals以商品名tetranylat-1和tetranylat-7590，从evonik以商品名rewoquatwe16dpg、rewoquatwe18、rewoquatwe20、rewoquatwe28、和rewoquat38dpg，从stepan以商品名stepantexga90、stepantexvr90、stepantexvk90、stepantexva90、stepantexdc90、stepantexvl90a商购获得。
表面活性剂
适宜的表面活性剂可选自如上所述的非离子、阴离子和/或两性表面活性剂，优选地阴离子或非离子表面活性剂，但也可使用两性表面活性剂。优选的阴离子表面活性剂为磺酸盐和硫酸盐表面活性剂，例如烷基苯磺酸盐和(任选地烷氧基化的)烷基硫酸盐。特别优选的阴离子表面活性剂包括直链烷基苯磺酸盐(las)。优选的烷基硫酸盐包括烷基醚硫酸盐，尤其是c-9-15醇醚硫酸盐、c8-c16酯硫酸盐和c10-c14酯硫酸盐，诸如单十二烷基酯硫酸盐。可使用las的异构体、支链烷基苯磺酸盐(babs)、苯基烷烃磺酸盐、α-烯烃磺酸盐(aos)、烯烃磺酸盐、烯基磺酸盐、烷烃-2,3-二基双(硫酸盐)、羟基烷烃磺酸盐和二磺酸盐、烷基硫酸盐(as)诸如十二烷基硫酸钠(sds)、脂肪醇硫酸盐(fas)、伯醇硫酸盐(pas)、醇醚硫酸盐(aes或aeos或fes，也称为醇乙氧基硫酸盐或脂肪醇醚硫酸盐)、仲烷烃磺酸盐(sas)、链烷磺酸盐(ps)、酯磺酸盐、磺酸化脂肪酸甘油酯、包括甲酯磺酸盐(mes)在内的α-磺基脂肪酸甲酯(α-sfme或ses)、烷基或烯基琥珀酸、十二烯基/十四烯基琥珀酸(dtsa)、氨基酸的脂肪酸衍生物、磺基琥珀酸的二酯和单酯、或脂肪酸的盐(皂)、以及它们的组合。
阴离子表面活性剂可优选地以盐形式加入到洗涤剂中。优选的阳离子为碱金属离子，诸如钠和钾。非离子表面活性剂的非限制性示例包括醇乙氧基化物(ae或aeo)、醇丙氧基化物、丙氧基化脂肪醇(pfa)、烷氧基化脂肪酸烷基酯，诸如乙氧基化和/或丙氧基化脂肪酸烷基酯、烷基酚乙氧基化物(ape)、壬基酚乙氧基化物(npe)、烷基多苷(apg)、烷氧基化胺、脂肪酸单乙醇酰胺(fam)、脂肪酸二乙醇酰胺(fada)、乙氧基化脂肪酸单乙醇酰胺(efam)、丙氧基化脂肪酸单乙醇酰胺(pfam)、多羟基烷基脂肪酸酰胺、或葡糖胺的n-酰基n-烷基衍生物(葡糖酰胺，ga或脂肪酸葡糖酰胺，faga)、以及可以商品名span和tween购得的产品、以及它们的组合。可商购获得的非离子表面活性剂包括得自basf的plurafactm、lutensoltm和pluronictm，得自cognis的dehypontm系列，和得自clariant的cognis和genapoltm系列。
助洗剂
适宜的助洗剂可选自碱金属或铵磷酸盐、多磷酸盐、膦酸盐、多膦酸盐、碳酸盐、碳酸氢盐、硼酸盐、柠檬酸盐和聚羧酸盐以及它们的混合物。优选的助洗剂包括多元羧酸(诸如柠檬酸)及其盐(例如柠檬酸钠)、碳酸钠、硅酸钠、硅铝酸钠(沸石)。柠檬酸盐能够与沸石，硅酸盐如britesil类型和/或层状硅酸盐助洗剂组合使用。助洗剂的添加量优选为按重量计约5-65％，诸如按重量计约5％至约50％。在衣物洗涤剂中，助洗剂的含量通常为按重量计约40-65％，具体地讲按重量计约50-65％，具体地讲按重量计20％至50％。助洗剂可与螯合剂组合使用或由螯合剂替代，所述螯合剂诸如氨基羧酸盐、氨基聚羧酸盐和膦酸盐、以及烷基琥珀酸或烯基琥珀酸。附加的具体示例包括2,2’,2”-次氨基三乙酸(nta)、乙二胺四乙酸(edta)、二亚乙基三胺五乙酸(dtpa)、亚氨基二琥珀酸(ids)、乙二胺-n,n’-二琥珀酸(edds)、甲基甘氨酸-n,n-二乙酸(mgda)、谷氨酸-n,n-二乙酸(glda)、1-羟乙烷-1,1-二膦酸、n-(2-羟乙基)亚氨基二乙酸(edg)、天冬氨酸-n-单乙酸(asma)、天冬氨酸-n,n-二乙酸(asda)、天冬氨酸-n-单丙酸(asmp)、亚氨基二琥珀酸(ida)、n-(磺甲基)天冬氨酸(smas)、n-(2-磺乙基)-天冬氨酸(seas)、n-(磺甲基谷氨酸)(smgl)、n-(2-磺乙基)-谷氨酸(segl)、n-甲基亚氨基二乙酸(mida)、丝氨酸-n,n-二乙酸(seda)、异丝氨酸-n,n-二乙酸(isda)、苯丙氨酸-n,n-二乙酸(phda)、邻氨基苯甲酸-n,n-二乙酸(anda)、对氨基苯磺酸-n,n-二乙酸(slda)、牛磺酸-n,n-二乙酸(tuda)和n′-(2-羟乙基)乙二胺-n,n,n’-三乙酸(hedta)、二乙醇甘氨酸(deg)、以及它们的组合和盐。适用于本文的膦酸盐包括1-羟乙烷-1,1-二膦酸(hedp)、乙二胺四(亚甲基膦酸)(edtmpa)、二亚乙基三胺五(亚甲基膦酸)(dtmpa或dtpmpa或dtpmp)、次氨基三(亚甲基膦酸)(atmp或ntmp)、2-膦酰基丁烷-1,2,4-三羧酸(pbtc)、六亚甲基二胺四(亚甲基膦酸)(hdtmp)。该组合物还可包含按重量计0.1-50％(诸如约5％至约30％)的洗涤剂共助洗剂。洗涤剂组合物可包括单独的共助洗剂，或与一种助洗剂结合，例如沸石助洗剂。优选的共助洗剂包括聚丙烯酸酯的均聚物或其共聚物，诸如聚(丙烯酸)(paa)或共聚(丙烯酸/马来酸)(paa/pma)或聚天冬氨酸。另外的示例性助洗剂和/或共助洗剂例如描述于wo09/102854、us5977053中。在一些方面，助洗剂为基于非磷的助洗剂，诸如柠檬酸和/或甲基甘氨酸-n,n-二乙酸(mgda)和/或谷氨酸-n,n-二乙酸(glda)和/或它们的盐。优选的助洗剂包括柠檬酸盐和/或甲基甘氨酸-n,n-二乙酸(mgda)和/或谷氨酸-n,n-二乙酸(glda)和/或它们的盐。
漂白剂组分
洗涤剂组合物可包含按重量计0-30％(诸如约1％至约20％)的漂白体系。可使用包含本领域已知用于清洁洗涤剂中的组分的任何漂白体系。合适的漂白体系组分包括过氧化氢源；过酸源；以及漂白催化剂或增效剂。
过氧化氢源：合适的过氧化氢源是无机过酸盐，其包括碱金属盐诸如过碳酸钠和过硼酸钠(通常是一水或四水合物)，和过氧化氢-脲(1/1)。
过酸源：过酸可(a)以预成形的过酸形式直接掺入或(b)由过氧化氢和漂白活化剂在洗涤液体中原位形成(过水解)，或(c)由过氧化氢和过水解酶和后者的适宜底物(例如酯)在洗涤液体中原位形成。
a)适宜的预成形的过酸包括但不限于，过氧羧酸诸如过氧苯甲酸及其环取代的衍生物、过氧-α-萘甲酸、过氧邻苯二酸、过氧月桂酸、过氧硬脂酸、ε-邻苯二甲酰亚氨基过氧己酸[邻苯二甲酰亚氨基过氧己酸(pap)]、以及o-羧基苯甲酰氨基过氧己酸；脂族和芳族二过氧二羧酸诸如二过氧十二烷二酸、二过氧壬二酸、二过氧癸二酸、二过氧十三烷二酸、2-癸基二过氧丁二酸以及二过氧邻苯二甲酸、-间苯二甲酸和-对苯二甲酸；过亚氨酸；过氧单硫酸；过氧二硫酸；过氧磷酸；过氧硅酸；以及上述化合物的混合物。应当理解，所提及的过酸在一些情况下最好以合适的盐(的形式)添加，诸如碱金属盐(例如，
b)适宜的漂白活化剂包括属于酯、酰胺、酰亚胺、腈或酸酐类的那些，并且在适用的情况下，包括它们的盐。合适的示例为四乙酰基乙二胺(taed)、4-[(3,5,5-三甲基己酰基)氧基]苯-1-磺酸钠(isonobs)、4-(十二烷酰基氧基)苯-1-磺酸钠(lobs)、4-(癸酰基氧基)苯1-磺酸钠、4-(癸酰基氧基)苯甲酸钠(doba)、4-(壬酰基氧基)苯-1-磺酸钠(nobs)，和/或wo98/17767中所公开的那些。感兴趣的漂白活化剂的一个具体家族公开于ep624154中，并且该家族中特别优选的是柠檬酸乙酰基三乙酯(atc)。atc或类似甘油三乙酸酯的短链甘油三酯具有对环境友好的优点。此外，柠檬酸乙酰基三乙酯和甘油三乙酸酯在储存期间，在产品中具有良好的水解稳定性，并且是有效的漂白活化剂。最后，atc是多功能的，如在过水解反应中释放的柠檬酸盐可用作助洗剂。
漂白催化剂和增效剂：漂白体系还可包括漂白催化剂或增效剂。可用于本发明的组合物中的漂白催化剂的一些非限制性示例包括草酸锰、乙酸锰，锰-胶原、钴胺催化剂和三氮杂环壬烷(mntacn)锰催化剂；特别优选的是锰与1,4,7-三甲基-1,4,7-三氮杂环壬烷(me3-tacn)或1,2,4,7-四甲基-1,4,7-三氮杂环壬烷(me4-tacn)的络合物，具体的讲，me3-tacn，诸如二核锰络合物[(me3-tacn)mn(o)3mn(me3-tacn)](pf6)2和[2,2’,2”-次氨基三(乙烷-1,2-二基亚氮烷基-κn-甲基亚乙基)三苯酚-κ3o]锰(iii)([2,2’,2”-nitrilotris(ethane-1,2-diylazanylylidene-κn-methanylylidene)triphenolato-κ3o]manganese(iii))。漂白催化剂也可为其它金属化合物，例如铁或钴络合物。
在一些方面，在包括过酸的源时，可使用具有以下化学式中的一个的有机漂白催化剂或漂白增效剂：
(iii)以及它们的混合物；其中每个r1独立地为包含9至24个碳的支链烷基基团或包含11至24个碳的直链烷基基团，优选地每个r1独立地为包含9至18个碳的支链烷基基团或包含11至18个碳的直链烷基基团，更优选地每个r1独立地选自2-丙基庚基、2-丁基辛基、2-戊基壬基、2-己基癸基、十二烷基、十四烷基、十六烷基、十八烷基、异壬基、异癸基、异十三烷基和异十五烷基。
其它示例性漂白体系在，例如wo2007/087258、wo2007/087244、wo2007/087259、ep1867708(维生素k)和wo2007/087242中有所描述。合适的光漂白剂可为例如磺化锌或酞菁铝。
水溶助长剂
洗涤剂组合物可包含按重量计0.1-10％(例如按重量计0.1-5％，诸如约0.5％至约5％或约3％至约5％)的水溶助长剂。可使用本领域已知用于衣物洗涤剂中的任何水溶助长剂。水溶助长剂的非限制性示例包括苯磺酸钠、对甲苯磺酸钠(sts)、二甲苯磺酸钠(sxs)、异丙基苯磺酸钠(scs)、甲基异丙基苯磺酸钠、氧化胺、醇类和聚甘醇醚、羟萘甲酸钠、羟基萘磺酸钠、乙基己基硫酸钠、以及它们的组合。
聚合物
洗涤剂组合物优选包含按重量计0.1％至10％(诸如0.5-5％、2-5％、0.5-2％或0.2-1％)的聚合物。聚合物可用作如上文所提及的共助洗剂，或可提供抗再沉积、纤维保护、污垢释放、染料转移抑制、油脂清洁和/或抗发泡特性。一些聚合物可以具有多于一种的上文提及的特性和/或多于一种的下文提及的基序。优选的聚合物包括(羧甲基)纤维素(cmc)、聚(乙烯醇)(pva)、聚(乙烯基吡咯烷酮)(pvp)、聚(乙二醇)或聚(环氧乙烷)(peg)、乙氧基化的聚(乙烯亚胺)、羧甲基菊粉(cmi)、以及聚羧酸酯诸如paa、paa/pma、聚天冬氨酸、和甲基丙烯酸月桂酯/丙烯酸月桂酯共聚物、疏水改性的cmc(hm-cmc)和硅酮、对苯二甲酸和低聚二醇类的共聚物、聚(对苯二甲酸乙二醇酯)和聚(氧乙烯对苯二甲酸)的共聚物(pet-poet)、pvp、聚(乙烯基咪唑)(pvi)、聚(乙烯基吡啶-n-氧化物)(pvpo或pvpno)以及聚乙烯吡咯烷酮-乙烯基咪唑(pvpvi)。另外的示例性聚合物包括磺化聚羧酸酯、聚环氧乙烷和聚环氧丙烷(peo-ppo)以及二季铵乙氧基硫酸盐。其它示例性聚合物公开于例如wo2006/130575中。还可以想到上述聚合物的盐。
织物调色剂
本发明的洗涤剂组合物还可包括织物调色剂，诸如染料或颜料，当被配制到洗涤剂组合物中时，当所述织物与包含所述洗涤组合物的含水洗涤液体接触时，它们可沉积到织物上，从而通过吸收/反射可见光改变所述织物的色调。荧光增白剂发出至少一些可见光。与之相反，织物调色剂改变表面色调是因为它们吸收至少一部分可见光谱。合适的织物调色剂包括染料和染料-粘土缀合物，并且也可包括颜料。合适的染料包括小分子染料和聚合物染料。适宜的小分子染料包括选自属于以下颜色索引(c.i.)分类的染料的小分子染料：直接蓝、直接红、直接紫、酸性蓝、酸性红、酸性紫、碱性蓝、碱性紫和碱性红、或它们的混合物，例如如wo2005/03274、wo2005/03275、wo2005/03276和ep1876226(以引用方式并入本文)中描述的。适宜的染料包括偶氮染料，具体地讲单偶氮染料或双偶氮染料、蒽醌染料、三芳基甲烷染料和吖嗪染料。优选的聚合物染料包含聚合物组分，所述聚合物组分选自聚烷氧基化物、纤维素诸如cmc和聚乙烯醇。优选的聚合物染料为烷氧基化(优选地乙氧基化)染料，具体地讲偶氮噻吩染料。优选的聚合物染料每染料分子具有平均2至50个单体，更优选地3至25个单体。洗涤剂组合物优选地包含约0.00003wt％至约0.2wt％，约0.00008wt％至约0.05wt％，或甚至约0.0001wt％至约0.04wt％的织物调色剂。组合物可包含0.0001wt％至0.2wt％的织物调色剂，当该组合物是单位剂量小袋形式时这可为尤其优选的。适宜的调色剂还公开于例如wo2007/087257和wo2007/087243中。
酶
洗涤剂组合物可包含一种或多种另外的酶，诸如蛋白酶、脂肪酶、角质酶、淀粉酶、糖酶、纤维素酶、果胶酶、甘露聚糖酶、阿拉伯糖酶、半乳聚糖酶、木聚糖酶、氧化酶，例如漆酶和/或过氧化物酶。
一般来讲，所选择酶的特性通常将与所选择的洗涤剂相容(即最适ph、与其它酶或非酶成分相容等)，并且该酶应当以有效量存在。
纤维素酶
合适的纤维素酶包括源自细菌或真菌的那些。包括经化学修饰或蛋白质工程化的突变体。合适的纤维素酶包括来自芽孢杆菌属(bacillus)、假单胞菌属(pseudomonas)、腐质霉属(humicola)、镰孢霉属(fusarium)、草根霉属(thielavia)、支顶孢属(acremonium)的纤维素酶，例如，在us4,435,307、us5,648,263、us5,691,178、us5,776,757和wo89/09259中所公开的由孤独腐质霉(humicolainsolens)、嗜热毁丝菌(myceliophthorathermophila)和尖芽孢镰孢菌(fusariumoxysporum)制得的真菌纤维素酶。
特别合适的纤维素酶是具有颜色护理有益效果的碱性或中性纤维素酶。此类纤维素酶的示例为在ep0495257，ep0531372，wo96/11262，wo96/29397，wo98/08940中描述的纤维素酶。其它示例是纤维素酶变体，诸如在wo94/07998、ep0531315、us5,457,046、us5,686,593、us5,763,254、wo95/24471、wo98/12307和wo99/001544中描述的那些。
其它的纤维素酶是内切-β-1,4-葡聚糖酶(其序列与wo2002/099091的seqidno：2的位点1至位点773的氨基酸序列具有至少97％的同一性)，或家族44木葡聚糖酶(其为一种木葡聚糖酶，其序列与wo2001/062903的seqidno：2的位点40-559具有至少60％的同一性)。
可商购获得的纤维素酶包括celluzymetm和carezymetm(novozymesa/s)、carezymepremiumtm(novozymesa/s)、cellucleantm(novozymesa/s)、cellucleanclassictm(novozymesa/s)、cellusofttm(novozymesa/s)、whitezymetm(novozymesa/s)、clazinasetm和puradaxhatm(genencorinternationalinc.)以及kac-500(b)tm(kaocorporation)。
蛋白酶
合适的蛋白酶包括细菌、真菌、植物、病毒或动物来源的那些，例如植物或微生物来源的。优选微生物来源的。包括经化学修饰或蛋白质工程化的突变体。其可为碱性蛋白酶，例如丝氨酸蛋白酶或金属蛋白酶。丝氨酸蛋白酶可例如为s1家族(诸如胰蛋白酶)或s8家族(诸如枯草杆菌蛋白酶)。金属蛋白酶蛋白酶可例如为来自例如家族m4的嗜热菌蛋白酶或其它金属蛋白酶，诸如来自m5、m7或m8家族的那些。
术语“枯草杆菌蛋白酶”是指丝氨酸蛋白酶的子组，该定义根据siezen等人，proteinengng.4(1991):719-737，和siezen等人proteinscience6(1997)501-523。丝氨酸蛋白酶是蛋白酶的子组，其特征在于在活性位点具有丝氨酸，其与底物形成共价加合物。枯草杆菌蛋白酶可分成6个子分类，即枯草杆菌蛋白酶(subtilisin)家族、嗜热蛋白酶(thermitase)家族、蛋白酶k家族、羊毛硫细菌素肽酶(lantibioticpeptidase)家族、kexin家族和pyrolysin家族。
枯草杆菌蛋白酶的示例为来源于芽孢杆菌属(bacillus)的那些，诸如在us7262042和wo09/021867中描述的诸如迟缓芽孢杆菌(bacilluslentus)、嗜碱芽孢杆菌(b.alkalophilus)、枯草芽孢杆菌(b.subtilis)、解淀粉芽孢杆菌(b.amyloliquefaciens)、短小芽孢杆菌(bacilluspumilus)和吉氏芽孢杆菌(bacillusgibsonii)，和在wo89/06279中描述的枯草杆菌蛋白酶lentus、枯草杆菌蛋白酶novo、枯草杆菌蛋白酶carlsberg、地衣芽孢杆菌(bacilluslicheniformis)、枯草杆菌蛋白酶bpn′、枯草杆菌蛋白酶309、枯草杆菌蛋白酶147和枯草杆菌蛋白酶168，以及在(wo93/18140)中描述的蛋白酶pd138。其它可用的蛋白酶可以是在wo92/175177、wo01/016285、wo02/026024和wo02/016547中描述的那些。胰蛋白酶样蛋白酶的示例为胰蛋白酶(例如猪或牛来源的)和镰孢属(fusarium)蛋白酶(描述于wo89/06270、wo94/25583和wo05/040372中)以及在wo05/052161和wo05/052146中所述的来源于纤维单胞菌属(cellumonas)的胰凝乳蛋白酶。
另外的优选蛋白酶是(如例如wo95/23221中所述)得自迟缓芽孢杆菌(bacilluslentus)dsm5483的碱性蛋白酶，以及在wo92/21760、wo95/23221、ep1921147和ep1921148中所述的它们的变体。
金属蛋白酶的示例是在wo07/044993(genencorint.)中描述的中性金属蛋白酶，诸如来源于解淀粉芽孢杆菌(bacillusamyloliquefaciens)的那些。
有用的蛋白酶的示例是在wo92/19729、wo96/034946、wo98/20115、wo98/20116、wo99/011768、wo01/44452、wo03/006602、wo04/03186、wo04/041979、wo07/006305、wo11/036263、wo11/036264中描述的变体，特别是在下列位点中的一者或多者具有替换的变体：3、4、9、15、24、27、42、55、59、60、66、74、85、96、97、98、99、100、101、102、104、116、118、121、126、127、128、154、156、157、158、161、164、176、179、182、185、188、189、193、198、199、200、203、206、211、212、216、218、226、229、230、239、246、255、256、268和269，其中所述位点对应于wo2016/001449的seqidno:1中所示的迟缓芽孢杆菌(bacilluslentus)蛋白酶的位点。更优选的蛋白酶变体可包含下列突变中的一者或多者：s3t、v4i、s9r、s9e、a15t、s24g、s24r、k27r、n42r、s55p、g59e、g59d、n60d、n60e、v66a、n74d、n85s、n85r、g96s、g96a、s97g、s97d、s97a、s97sd、s99e、s99d、s99g、s99m、s99n、s99r、s99h、s101a、v102i、v102y、v102n、s104a、g116v、g116r、h118d、h118n、n120s、s126l、p127q、s128a、s154d、a156e、g157d、g157p、s158e、y161a、r164s、q176e、n179e、s182e、q185n、a188p、g189e、v193m、n198d、v199i、y203w、s206g、l211q、l211d、n212d、n212s、m216s、a226v、k229l、q230h、q239r、n246k、n255w、n255d、n255e、l256e、l256dt268a或r269h。蛋白酶变体优选地为wo2016/001449的seqidno：1中所示的迟缓芽孢杆菌(bacilluslentus)蛋白酶
一种蛋白酶变体，其包含在对应于wo2004/067737的seqidno：1的位点171、173、175、179或180的一个或多个位点的替换，其中所述蛋白酶变体与wo2004/067737的seqidno：1具有至少75％但少于100％的序列同一性。
适宜的可商购获得的蛋白酶包括以商品名
脂肪酶和角质酶
合适的脂肪酶和角质酶包括细菌来源或真菌来源的那些。包括了化学改性的或蛋白质工程化的突变酶。示例包括来自嗜热丝孢菌属(thermomyces)例如来自ep258068和ep305216中所描述的疏绵状嗜热丝孢菌(t.lanuginosus)(先前命名为柔毛腐质霉(humicolalanuginosa))的脂肪酶，来自腐质霉属(humicola)例如特异腐质霉(h.insolens)(wo96/13580)的角质酶，来自假单胞菌属(pseudomonas)菌株(这些中的一部分现在重命名为伯克霍尔德菌属(burkholderia))例如产碱假单胞菌(p.alcaligenes)或类产碱假单胞菌(p.pseudoalcaligenes)(ep218272)、洋葱假单胞菌(p.cepacia)(ep331376)、假单胞菌属菌株(p.sp.strain)sd705(wo95/06720&wo96/27002)、威斯康辛假单胞菌(p.wisconsinensis)(wo96/12012)的脂肪酶、gdsl型链霉菌属(streptomyces)脂肪酶(wo10/065455)、来自稻瘟病菌(magnaporthegrisea)(wo10/107560)的角质酶、来自门多萨假单胞菌(pseudomonasmendocina)(us5,389,536)的角质酶、来自嗜热裂孢菌(thermobifidafusca)(wo11/084412)的脂肪酶、嗜热脂肪芽孢杆菌(geobacillusstearothermophilus)脂肪酶(wo11/084417)、来自枯草芽孢杆菌(bacillussubtilis)(wo11/084599)的脂肪酶，以及来自灰色链霉菌(streptomycesgriseus)(wo11/150157)和始旋链霉菌(s.pristinaespiralis)(wo12/137147)的脂肪酶。
其它示例是脂肪酶变体，诸如在ep407225、wo92/05249、wo94/01541、wo94/25578、wo95/14783、wo95/30744、wo95/35381、wo95/22615、wo96/00292、wo97/04079、wo97/07202、wo00/34450、wo00/60063、wo01/92502、wo07/87508和wo09/109500中描述的那些(脂肪酶变体)。
优选的商业脂肪酶产品包括lipolasetm，lipextm；lipolextm和lipocleantm(novozymesa/s)，lumafast(最初来自genencor)和lipomax(最初来自gist-brocades)。
其他示例是有时被称为酰基转移酶或过水解酶的脂肪酶，例如与南极假丝酵母菌(candidaantarctica)脂肪酶a(wo10/111143)同源的酰基转移酶、来自耻垢分枝杆菌(mycobacteriumsmegmatis)(wo05/56782)的酰基转移酶、来自ce7家族(wo09/67279)的过水解酶，以及耻垢分枝杆菌(mycobacteriumsmegmatis)过水解酶的变体尤其是在来自huntsmantextileeffectspteltd的商业产品gentlepowerbleach中使用的s54v变体(wo10/100028)。
淀粉酶
可与本发明的脱氧核糖核酸酶一起使用的合适淀粉酶可以是α-淀粉酶或葡糖淀粉酶，并且可以是细菌或真菌来源。包括经化学修饰或蛋白质工程化的突变体。淀粉酶包括例如得自芽孢杆菌属(bacillus)，例如地衣芽孢杆菌(bacilluslicheniformis)的特殊菌株的α-淀粉酶，更详细的描述于gb1,296,839中。
合适的淀粉酶包括具有wo95/10603中的seqidno:2的淀粉酶或与其seqidno:1具有90％的序列同一性的变体。优选的变体在wo94/02597、wo94/18314、wo97/43424以及wo99/019467的seqidno:4中有所描述，诸如在下述位点中的一者或多者具有替换的变体：15、23、105、106、124、128、133、154、156、178、179、181、188、190、197、201、202、207、208、209、211、243、264、304、305、391、408和444。
不同的合适的淀粉酶包括具有wo02/010355中的seqidno：6的淀粉酶或其与seqidno：6具有90％的序列同一性的变体。seqidno：6的优选变体是在位点181和182中具有缺失并且在位点193中具有替换的那些。
其他适宜的淀粉酶是包含得自wo2006/066594的seqidno:6中所示的解淀粉芽孢杆菌(b.amyloliquefaciens)的α-淀粉酶的残基1-33，和得自wo2006/066594的seqidno:4中所示的地衣芽孢杆菌(b.licheniformis)α-淀粉酶的残基36-483的杂交型α-淀粉酶，或具有其90％序列同一性的变体。该杂交型α-淀粉酶的优选变体是在以下位点中的一者或多者中具有替换、缺失或插入的那些：g48、t49、g107、h156、a181、n190、m197、i201、a209和q264。包含得自wo2006/066594的seqidno:6中所示的解淀粉芽孢杆菌(b.amyloliquefaciens)的α-淀粉酶的残基1-33，和seqidno:4的残基36-483的杂交型α-淀粉酶的最优选的变体为具有以下替换的那些：
m197t；
h156y a181t n190f a209v q264s；或者
g48a t49i g107a h156y a181t n190f i201f a209v q264s。
另外的合适的淀粉酶是具有wo99/019467中seqidno：6的淀粉酶或其与seqidno：6具有90％的序列同一性的变体。seqidno：6的优选变体是在以下位点中的一者或多者具有替换、缺失或插入的那些：r181、g182、h183、g184、n195、i206、e212、e216和k269。特别优选的淀粉酶是在位点r181和g182，或位点h183和g184中具有缺失的那些。
可使用的另外的淀粉酶是具有wo96/023873的seqidno:1、seqidno:3、seqidno:2或seqidno:7的那些或其与seqidno:1、seqidno:3、seqidno:2或seqidno:7具有90％的序列同一性的变体。seqidno:1、seqidno:3、seqidno:2或seqidno:7的优选变体是在下列位点中的一者或多者具有替换、缺失或插入的那些：140、181、182、183、184、195、206、212、243、260、269、304和476，使用wo96/023873的seqidno:2进行编号。更优选的变体是在选自181、182、183和184的两个位点处(诸如181和182、182和183、或位点183和184)具有缺失的那些。seqidno：1、seqidno：2或seqidno：7的最优选的淀粉酶变体是在位点183和184中具有缺失并且在位点140、195、206、243、260、304和476中的一个或多个中具有替换的那些。
可以使用的其它淀粉酶是具有wo08/153815中的seqidno:2、wo01/66712中的seqidno:10的淀粉酶，或其与wo08/153815中的seqidno:2具有90％的序列同一性或与wo01/66712中的seqidno:10具有90％的序列同一性的变体。wo01/66712中的seqidno:10的优选变体是在下列位点中的一者或多者具有替换、缺失或插入的那些：176、177、178、179、190、201、207、211和264。
另外合适的淀粉酶是具有wo09/061380的seqidno：2的淀粉酶，或与其seqidno:2具有90％的序列同一性的变体。seqidno：2的优选变体是具有c末端截短和/或在下列位点中的一者或多者具有替换、缺失或插入的那些：q87、q98、s125、n128、t131、t165、k178、r180、s181、t182、g183、m201、f202、n225、s243、n272、n282、y305、r309、d319、q320、q359、k444和g475。seqidno：2的更优选的变体是在下列位点中的一者或多者具有替换：q87e,r、q98r、s125a、n128c、t131i、t165i、k178l、t182g、m201l、f202y、n225e,r、n272e,r、s243q,a,e,d、y305r、r309a、q320r、q359e、k444e和g475k和/或在位点r180和/或s181或在t182和/或g183具有缺失的那些。seqidno:2的最优选的淀粉酶变体是具有下列替换的那些：
n128c k178l t182g y305r g475k；
n128c k178l t182g f202y y305r d319t g475k；
s125a n128c k178l t182g y305r g475k；或者
s125a n128c t131i t165i k178l t182g y305r g475k，其中该变体为c末端截短的并且任选地还包含在位点243的替换和/或位点180和/或位点181的缺失。
其它合适的淀粉酶是具有wo01/66712中的seqidno：12的α-淀粉酶或与seqidno：12具有至少90％的序列同一性的变体。优选的淀粉酶变体是在wo01/66712中的seqidno:12的下列位点中的一者或多者中具有替换、缺失或插入的那些：r28、r118、n174；r181、g182、d183、g184、g186、w189、n195、m202、y298、n299、k302、s303、n306、r310、n314、r320、h324、e345、y396、r400、w439、r444、n445、k446、q449、r458、n471、n484。特别优选的淀粉酶包括具有缺失d183和g184并且具有替换r118k、n195f、r320k和r458k的变体，以及另外在选自m9、g149、g182、g186、m202、t257、y295、n299、m323、e345和a339的一个或多个位点具有替换的变体，最优选的变体在所有这些位点上另外具有替换。
其它示例为淀粉酶变体，诸如在wo2011/098531、wo2013/001078和wo2013/001087中所述的那些。
可商购获得的淀粉酶是duramyltm、termamyltm、fungamyltm、stainzymetm、stainzymeplustm、natalasetm、liquozymex和bantm(来自novozymesa/s)，以及rapidasetm、purastartm/effectenztm、powerase和preferenzs100(来自genencorinternationalinc./杜邦dupont)。
过氧化物酶/氧化酶
适用于本文的过氧化物酶是由酶分类ec1.11.1.7(由国际生物化学与分子生物学联合会命名委员会(iubmb)提出)所包含的过氧化物酶，或由其获得的表现出过氧化物酶活性的任何片段。
合适的过氧化物酶包括植物源、细菌源或真菌源的那些。包括经化学修饰或蛋白质工程化的突变体。可用的过氧化物酶示例包括来自鬼伞属(coprinopsis)的过氧化物酶，例如来自灰盖鬼伞(c.cinerea)(ep179,486)的，以及在wo93/24618、wo95/10602和wo98/15257中所述的那些它们的变体。
适宜的过氧化物酶还包括卤代过氧化物酶，诸如氯过氧化物酶、溴过氧化物酶，以及表现出氯过氧化物酶或溴过氧化物酶活性的化合物。卤代过氧化物酶根据其对卤离子的特异性进行分类。氯过氧化物酶(e.c.1.11.1.10)催化由氯离子形成次氯酸盐。
卤代过氧化物酶可以为氯过氧化物酶。优选地，该卤代过氧化物酶为钒卤过氧化物酶，即包含钒酸盐的卤代过氧化物酶，在使用时，优选与氯离子源组合。
已从许多不同的真菌分离出卤代过氧化物酶，具体地讲，得自真菌组暗色丝孢菌(hyphomycetes)，诸如卡尔里霉菌属(caldariomyces)例如卡尔里黑霉(c.fumago)、链格孢属(alternaria)、弯孢属(curvularia)，例如疣状弯孢霉(c.verruculosa)和不等弯孢霉(c.inaequalis)、内脐蠕孢属(drechslera)、单格孢属(ulocladium)和葡萄孢霉属(botrytis)。
另外也从细菌诸如假单胞菌属(pseudomonas)(例如吡咯菌素假单胞菌(p.pyrrocinia))和链霉菌属(streptomyces)(例如金霉素链霉菌(streptomycesaureofaciens))中分离出卤代过氧化物酶。
在一个优选的方面，卤代过氧化物酶来源于弯孢属(curvularia)，具体地讲疣状弯孢霉(curvulariaverruculosa)或不等弯孢霉(curvulariainaequalis)，诸如在wo95/27046中所述的不等弯孢霉(c.inaequalis)cbs102.42；或wo97/04102中所述的疣状弯孢霉(c.verruculosa)cbs147.63或疣状弯孢霉(c.verruculosa)cbs444.70；或来自如wo01/79459中所述的内脐蠕孢属(drechslerahartlebii)，wo01/79458中所述的盐水小树状霉(dendryphiellasalina)、wo01/79461中所述的phaeotrichoconiscrotalarie、或wo01/79460中所述的geniculosporium属。
根据本发明，氧化酶具体地包括为酶分类ec1.10.3.2所包含的任何漆酶，或从其获得的表现出漆酶活性的任何片段，或表现出类似活性的化合物，诸如儿茶酚氧化酶(ec1.10.3.1)，邻氨基苯酚氧化酶(ec1.10.3.4)，或胆红素氧化酶(ec1.3.3.5)。
优选的漆酶是微生物来源的酶。所述酶可得自植物、细菌或真菌(包括丝状真菌和酵母)。
来自真菌的适宜示例包括来源于芽孢杆菌属(bacillus)、脉孢菌属(neurospora)例如粗糙脉孢菌(n.crassa)、足孢子菌属(podospora)、葡萄孢菌属(botrytis)、金钱菌属(collybia)、层孔菌属(fomes)、香菇属(lentinus)、侧耳属(pleurotus)、栓菌属(trametes)例如绒毛栓菌(t.villosa)和变色栓菌(t.versicolor)、丝核菌属(rhizoctonia)例如立枯丝核菌(r.solani)、鬼伞属(coprinopsis)例如灰盖鬼伞(c.cinerea)、毛头鬼伞(c.comatus)、弗瑞氏拟鬼伞(c.friesii)以及褶纹鬼伞(c.plicatilis)、小脆柄菇属(psathyrella)例如黄盖小脆柄菇(p.condelleana)、斑褶菇属(panaeolus)例如大孢花褶伞(p.papilionaceus)、毁丝霉属(myceliophthora)例如嗜热毁丝霉(m.thermophila)、schytalidium属例如s.thermophilum、多孔菌属(polyporus)例如筛孔多孔菌(p.pinsitus)、射脉菌属(phlebia)例如射脉齿菌(p.radiata)(wo92/01046)、或革盖菌属(coriolus)例如毛革盖菌(c.hirsutus)(jp2238885)的菌株的漆酶。
来自细菌的合适示例包括来源于一株芽孢杆菌(bacillus)的漆酶。
优选的是得自鬼伞属(coprinopsis)或毁丝霉属(myceliophthora)的漆酶；具体的讲如wo97/08325中所公开的得自灰盖鬼伞(coprinopsiscinerea)的漆酶；或如wo95/33836中所公开的来自嗜热毁丝霉(myceliophthorathermophila)的。
可通过加入包含一种或多种酶的单个添加剂或通过加入包含所有这些酶的混合添加剂将洗涤剂酶加入洗涤剂组合物中。可将本发明的洗涤剂添加剂，即，单个添加剂或混合添加剂，配制成例如颗粒、液体、浆液等。优选的洗涤剂添加剂制剂是颗粒，具体地讲无粉尘颗粒，液体，具体地讲稳定液体，或混悬液。
可如例如us4,106,991和4,661,452所公开的那样制备无粉尘颗粒，并且可任选地通过本领域已知的方法进行涂覆。蜡质涂层材料的示例为聚(环氧乙烷)产品(聚乙二醇，peg)，其具有1000至20000平均摩尔量；乙氧基化的壬基酚，其具有16至50个环氧乙烷单元；乙氧基化的脂肪醇，其中所述醇包含12至20个碳原子并且其中有15至80个环氧乙烷单元；脂肪醇、脂肪酸；和脂肪酸甘油一酯和甘油二酯和甘油三酯。在gb1483591中给出了适用于流化床技术的成膜涂层材料的示例。例如液体酶制备可根据已建立的方法，通过加入多元醇如丙二醇、糖或糖醇、乳酸或硼酸来稳定。可根据ep238,216中公开的方法制备保护的酶。
分散剂
本发明的洗涤剂组合物也可包含分散剂。具体地讲，粉末洗涤剂可包含分散剂。适宜的水溶性有机材料包含均聚酸或共聚酸或它们的盐，其中多元羧酸包含至少两个彼此相隔不超过两个碳原子的羧基基团。合适的分散剂在例如powdereddetergents，surfactantscience系列第71卷(marceldekker，inc)中有所描述。
染料转移抑制剂
本发明的清洁组合物也可包含一种或多种染料转移抑制剂。适宜的聚合物染料转移抑制剂包括但不限于聚乙烯吡咯烷酮聚合物、聚胺n-氧化物聚合物、n-乙烯基吡咯烷酮和n-乙烯基咪唑的共聚物、聚乙烯基噁唑烷酮和聚乙烯基咪唑或它们的混合物。当存在于受试组合物中时，染料转移抑制剂可以按所述组合物的重量计约0.0001％至约10％，约0.01％至约5％或甚至约0.1％至约3％的含量存在。
荧光增白剂
洗涤剂组合物还可优选地包含可着色正被清洁制品的附加组分，诸如荧光增白剂或光学增白剂。其中存在增白剂的含量优选为约0.01％至约0.5％。适用于衣物洗涤剂组合物中的任何荧光增白剂可用于本发明的组合物中。最常用的荧光增白剂是属于以下类别中的那些：二氨基芪磺酸衍生物、二芳基吡唑啉衍生物、和联苯基二苯乙烯基衍生物。荧光增白剂的二氨基芪磺酸衍生物类型的示例包括下列的钠盐：4,4′-双-(2-二乙醇氨基-4-苯氨基-s-三嗪-6-基氨基)均二苯乙烯-2,2′-二磺酸盐、4,4′-双-(2,4-二苯胺-s-三嗪-6-基氨基)均二苯乙烯-2.2′-二磺酸盐、4,4′-双-(2-苯胺-4-(n-甲基-n-2-羟基-乙基氨基)-s-三嗪-6-基氨基)均二苯乙烯-2,2′-二磺酸盐、4,4′-双-(4-苯基-1,2,3-三唑-2-基)均二苯乙烯-2,2′-二磺酸盐以及5-(2h-萘并[1,2-d][1,2,3]三唑-2-基)-2-[(e)-2-苯基乙烯基]苯磺酸钠。优选的荧光增白剂是购自ciba-geigyag(basel，switzerland)的tinopaldms和tinopalcbs。tinopaldms为4,4′-双-(2-吗啉代-4-苯氨基-s-三嗪-6-基氨基)均二苯乙烯-2,2′-二磺酸二钠盐。tinopalcbs为2,2′-双-(苯基-苯乙烯基)二磺酸二钠盐。还优选的荧光增白剂是可商购获得的parawhitekx，由paramountmineralsandchemicals(mumbai，india)提供。tinopalcbs-x为4.4′-双-(磺基苯乙烯基)-联苯基二钠盐，也称为二苯乙烯基联苯基二磺酸二钠。其它适用于本发明的荧光剂包括1-3-二芳基吡唑啉和7-烷基氨基香豆素。
合适的荧光增白剂含量包括从约0.01、从0.05、从约0.1或甚至从约0.2wt％的较低含量至0.5或甚至0.75wt％的较高含量。
去垢性聚合物
洗涤剂组合物优选包含一种或多种去垢性聚合物，其有助于将污垢从织物(诸如棉和基于聚酯的织物)移除。优选的去垢性聚合物有助于从基于聚酯的织物移除污垢。去垢性聚合物可例如为基于非离子或阴离子对苯二甲酸盐的聚合物、聚乙烯基己内酰胺和相关共聚物、乙烯基接枝共聚物、聚酯聚酰胺，参见例如marceldekker，inc.的powdereddetergents，surfactantscienceseries第71卷中的第7章。去垢性聚合物的另一种优选类型为两亲性烷氧基化油脂清洁聚合物，其例如包含核心结构和附接到该核心结构的多个烷氧基化物基团。该核心结构可包含聚亚烷基亚胺结构或聚链烷醇胺结构，如在wo2009/087523中所详细描述的(据此以引用方式并入本文)。此外，无规接枝共聚物为合适的去垢性聚合物。合适的接枝共聚物在wo2007/138054、wo2006/108856和wo2006/113314中有更详细的描述(以引用方式并入本文)。其他去垢性聚合物为取代的多糖结构，尤其是取代的纤维素结构，诸如改性的纤维素衍生物诸如在ep1867808或wo2003/040279中描述的那些(两者均以引用方式并入本文)。适宜的纤维质聚合物包括纤维素、纤维素醚、纤维素酯、纤维素酰胺、以及它们的混合物。适宜的纤维质聚合物包括阴离子改性的纤维素、非离子改性的纤维素、阳离子改性的纤维素、两性离子改性的纤维素、以及它们的混合物。适宜的纤维质聚合物包括甲基纤维素、羧甲基纤维素、乙基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、酯型羧甲基纤维素、以及它们的混合物。
抗再沉积剂
本发明的洗涤剂组合物也可包含一种或多种抗再沉积剂，诸如羧甲基纤维素(cmc)、聚乙烯醇(pva)、聚乙烯吡咯烷酮(pvp)、聚氧乙烯和/或聚乙二醇(peg)、丙烯酸的均聚物、丙烯酸和马来酸的共聚物以及乙氧基化聚乙烯亚胺。上文所述在“去垢性聚合物”下的基于纤维素的聚合物也可用作抗再沉积剂。
流变改性剂
本发明的洗涤剂组合物也可包含一种或多种流变改性剂、结构剂或增稠剂，与降粘剂不同。流变改性剂选自：非聚合结晶的、羟基功能性材料、聚合流变改性剂，所述聚合流变改性剂向液体洗涤剂组合物的含水液体基质赋予剪切致稀特性。可通过本领域已知的方法修改和调节洗涤剂的流变特性和粘度，例如如ep2169040中所示。
其他适宜的助剂包括但不限于抗收缩剂、抗皱剂、杀菌剂、粘合剂、载体、染料、酶稳定剂、织物软化剂、填料、泡沫调节剂、水溶助长剂、香料、颜料、抑泡剂、溶剂以及用于液体洗涤剂的结构剂和/或结构增弹剂。
洗涤剂产品的制剂
洗涤剂组合物可为任何便利的形式，例如，条状、均质片剂、具有两个或更多个层的片剂、常规或致密粉末、颗粒、糊剂、凝胶、或常规，致密或浓缩的液体。优选的洗涤剂组合物为液体，任选地为单位剂型，例如呈小袋形式。
洗涤剂制剂形式：层(相同或不同的相)、小袋、用于机器投配单元的相对形式。
小袋可以被设置为单个或多个隔室的。它可为适于容纳该组合物的任何形式，形状和材料，例如不允许在与水接触之前从小袋中释放组合物。小袋由包封内部体积的水溶性膜制成。所述内部体积能够分成小袋的隔室。优选的膜为聚合物材料，优选地被成形为膜或片材的聚合物。优选的聚合物、共聚物或其衍生物选自聚丙烯酸酯、和水溶性丙烯酸酯共聚物、甲基纤维素、羧甲基纤维素、钠糊精、乙基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、麦芽糖糊精、聚甲基丙烯酸酯、最优选聚乙烯醇共聚物和羟丙基甲基纤维素(hpmc)。膜中的聚合物例如pva的含量优选为至少约60％。优选的平均分子量通常为约20,000至约150,000。膜也可为共混组合物，所述组合物包含可水解降解的和水溶性聚合物共混物，诸如聚交酯和聚乙烯醇(以贸易参考m8630而闻名，由chriscraftin.prod.ofgary出售，印第安纳，美国)加上增塑剂如甘油、乙二醇、丙二醇、山梨醇，以及它们的混合物。小袋可以包含固体衣物洗涤组合物或部分组分和/或液体清洁组合物或由水溶性膜分隔的部分组分。液体组分的隔室在组成上可与包含固体的隔室不同。参见(us2009/0011970a1)
洗涤剂成分可通过在水溶性小袋中或不同的片剂层中的隔室彼此物理地分离。因此可避免组分之间的负面存储交互作用。每个隔室的不同溶解特征也可导致洗涤溶液中所选组分的延迟溶解。
形式的定义/特性：
液体或凝胶洗涤剂，它不是单位剂量的，可以是含水的，通常含有按重量计至少20％和高达95％的水，诸如高达约70％的水，高达约65％的水，高达约55％的水，高达约45％的水，高达约35％的水。其它类型的液体，包括但不限于链烷醇、胺、二醇、醚和多元醇，可包括在含水液体或凝胶中。含水液体或凝胶洗涤剂可包含0-30％的有机溶剂。
液体或凝胶洗涤剂可以是非水性的。
液体洗涤剂组合物
优选地，所述洗涤剂组合物为液体洗涤剂组合物，优选地为衣物洗涤剂，例如包含：
a)脱氧核糖核酸酶变体，其量任选地为0.00001mg、或0.005mg至10g或50g活性蛋白/升洗涤剂；
b)0.1重量％至60重量％的至少一种表面活性剂，以及
c)0.1重量％至50重量％的至少一种助洗剂，优选地包含选自下列的助洗剂：柠檬酸盐和/或甲基甘氨酸-n,n-二乙酸(mgda)和/或谷氨酸-n,n-二乙酸(glda)、hedp、dtmpa或dtpmpa和/或它们的盐。
液体洗涤剂组合物可包含5重量％或10重量％或20重量％至70重量％的水，或高达50％的水、高达40％的水、或高达30％的水、高达20％的水。其他类型的液体(包括但不限于链烷醇、胺、二醇、醚和多元醇)可包括在含水液体洗涤剂中。含水液体洗涤剂可包含0-30％的有机溶剂。液体洗涤剂甚至可以为基本上非水性的，其中水含量低于10％，优选地低于5％。
粉末组合物
所述洗涤剂组合物优选可以为用于衣物洗涤或盘碟洗涤，优选地用于衣物洗涤的颗粒状洗涤剂组合物，例如其包含：
a)每克组合物0.00001mg或0.005mg的脱氧核糖核酸酶变体，任选地
b)0重量％，优选地1重量％至40重量％的阴离子表面活性剂，任选地
c)0重量％，优选地1重量％至20重量％的非离子表面活性剂，和/或任选地
d)5重量％至40重量％的助洗剂，诸如碳酸盐、沸石、磷酸盐、硅酸盐、钙多价螯合助洗剂或络合剂/螯合剂或它们的混合物。
优选的助洗剂包括助洗剂，其包括柠檬酸盐和/或甲基甘氨酸-n,n-二乙酸(mgda)和/或谷氨酸-n,n-二乙酸(glda)和/或它们的盐。
洗涤剂优选包含按重量计高达30％(诸如约1％至约20％)的漂白体系。合适的漂白体系组分包括过氧化氢源；过酸源；如上所述的漂白活化剂、漂白催化剂和/或增效剂。
共颗粒中酶的配方
脱氧核糖核酸酶可被配制成颗粒，例如配制成将一种或多种酶(优选地，淀粉酶、纤维素酶、甘露聚糖和/或半乳聚糖酶)组合的共颗粒。
下列段落进一步描述了本发明。
1.一种洗涤剂组合物，其包含脱氧核糖核酸酶变体，所述脱氧核糖核酸酶变体包含在至少三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、十一个、十二个、十三个、十四个、十五个、十六个、十七个、十八个、十九个、二十个或更多个位点处的替换，所述位点选自：1、4、7、8、13、22、25、27、32、33、39、41、42、48、56、57、59、65、66、76、77、101、106、109、116、127、130、138、140、144、147、148、154、157、159、160、162、166、167、174、175、177、178、179、180和181，其中每个位点对应于seqidno:1的多肽的位点，并且其中该变体具有脱氧核糖核酸酶活性；和助剂。
2.根据段落1所述的洗涤剂组合物，其中在脱氧核糖核酸酶变体中，一个或多个替换选自：t1i、t1v、g4k、s7g、k8r、s13y、t22p、s25p、s27l、s27r、d32i、d32l、d32r、d32v、l33r、l33k、s39p、s39c、g41p、s42g、s42h、s42c、q48d、d56i、d56l、s57w、s59v、s59c、t65l、t65v、t65m、t65w、s66m、s66w、s66y、s66v、v76l、t77y、s101n、s106l、s106r、s106h、q109r、s116d、t127v、s130a、s130y、t138d、q140v、q140g、s144p、a147h、c148a、w154y、t157v、y159a、y159r、k160v、g162s、g162d、g162c、q166d、s167l、q174n、g175d、g175n、l177y、n178d、n178e、s179l、c180a、s181e和s181l。
3.根据段落1或2所述的洗涤剂组合物，其中与seqidno:1相比，所述脱氧核糖核酸酶变体包含在选自下列位点的至少三个位点处的替换：1、4、7、8、13、22、25、27、32、33、39、41、42、48、56、57、59、65、66、76、77、101、106、109、116、127、130、138、140、144、147、148、154、157、159、160、162、166、167、174、175、177、178、179、180和181，所述位点对应于seqidno:1的位点，其中所述变体具有与seqidno:1中所示的氨基酸序列至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或至少95％的序列同一性，其中所述变体具有脱氧核糖核酸酶活性，并且其中与seqidno:1的脱氧核糖核酸酶相比，所述变体具有至少一种改善的特性。
4.根据段落3所述的洗涤剂组合物，其中与seqidno:1相比，所述变体包含至少三个替换，其中所述替换选自：t1i、t1v、g4k、s7g、k8r、s13y、t22p、s25p、s27l、s27r、d32i、d32l、d32r、d32v、l33r、l33k、s39p、s39c、g41p、s42g、s42h、s42c、q48d、d56i、d56l、s57w、s59v、s59c、t65l、t65v、t65m、t65w、s66m、s66w、s66y、s66v、v76l、t77y、s101n、s106l、s106r、s106h、q109r、s116d、t127v、s130a、s130y、t138d、q140v、q140g、s144p、a147h、c148a、w154y、t157v、y159a、y159r、k160v、g162s、g162d、g162c、q166d、s167l、q174n、g175d、g175n、l177y、n178d、n178e、s179l、c180a、s181e和s181l，其中所述位点对应于seqidno:1的位点，其中所述变体具有与seqidno:1中所示的氨基酸序列至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或至少95％的序列同一性，其中所述变体具有脱氧核糖核酸酶活性，并且其中与seqidno:1的脱氧核糖核酸酶相比，所述变体具有至少一种改善的特性。
5.根据前述段落中任一个所述的洗涤剂组合物，其中所述脱氧核糖核酸酶变体选自下列中的任一种：
i)t1i g4k s13y t22p s27l s39p s42g d56i s57w s59v v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175d
ii)t1i k8r s13y t22p s27l s39p s42g d56i s57w s59v v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175d
iii)t1i s13y s27l s39p s42g d56i s57w s59v v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175d
iv)t1i s13y t22p e23g s27l s42g s57w s59v v76l q109r s116d t127v d133n s144p a147h s167l g175d
v)t1i s13y t22p s25p s27l l33k s39p s42g d56i s57w s59v s66y v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175d
vi)t1i s13y t22p s25p s27l l33k s39p s42g d56l s57w s59v t65v s66y v76l t77y q109r s116d t127v s144p a147h g162e s167l g175d
vii)t1i s13y t22p s25p s27l l33k s39p s42g d56l s57w s59v t65v s66y v76l t77y q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175d
viii)t1i s13y t22p s25p s27l l33k s39p s42g s57w s59v s66w v76l t77y q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175d
ix)t1i s13y t22p s25p s27l l33k s39p s42g s57w s59v s66y v76l t77y q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175d
x)t1i s13y t22p s25p s27l l33k s39p s42g s57w s59v t65l v76l t77y q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175d
xi)t1i s13y t22p s25p s27l l33k s39p s42g s57w s59v t65v s66y v76l t77y q109r s116d t127v s144p a147h g162d s167l g175d
xii)tii s13y t22p s25p s27l l33k s39p s42g s57w s59v t65v s66y v76l t77y q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175d s181e
xiii)t1i s13y t22p s25p s27l l33k s39p s42g s57w s59v t65v v76l t77y q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175d
xiv)t1i s13y t22p s25p s27l s30p s39p s42g s57w s59v s68v v76l t77y q109r t127v s144p a147h s167l g175d
xv)t1i s13y t22p s25p s27l s39p d56i s57w s59v v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175d
xvi)t1i s13y t22p s25p s27l s39p s42c s57w s59v s68v v76l t77y q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175d
xvii)t1i s13y t22p s25p s27l s39p s42g d56i s57w s59v s68v v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175d
xviii)t1i s13y t22p s25p s27l s39p s42g d56i s57w s59v t65l v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175d
xix)t1i s13y t22p s25p s27l s39p s42g d56i s57w s59v t65v v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175d
xx)t1i s13y t22p s25p s27l s39p s42g d56i s57w s59v v76l q109r s116d t127v s144p a147h q166d s167l g175d
xxi)t1i s13y t22p s25p s27l s39p s42g d56i s57w s59v v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175d
xxii)t1i s13y t22p s25p s27l s39p s42g d56i s57w s59v v76l q109r t127v s144p a147h s167l g175d
xxiii)t1i s13y t22p s25p s27l s39p s42g d56i s57w s59v v76l t77y q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175d
xxiv)t1i s13y t22p s25p s27l s39p s42g d56l s57w s59v t65v s66y v76l t77y q109r s116d t127v s144p a147h g162d s167l g175d
xxv)t1i s13y t22p s25p s27l s39p s42g d56l s57w s59v t65v s66y v76l t77y q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175d s181e
xxvi)t1i s13y t22p s25p s27l s39p s42g d56l s57w s59v t65v s66y v76l t77y s106l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175d
xxvii)t11 s13y t22p s25p s27l s39p s42g s57w s59v s68v v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l
xxviii)t1i s13y t22p s25p s27l s39p s42g s57w s59v s68v v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175d
xxix)t1i s13y t22p s25p s27l s39p s42g s57w s59v s68v v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175d n178d
xxx)t1i s13y t22p s25p s27l s39p s42g s57w s59v s68v v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175d n178e
xxxi)t1i s13y t22p s25p s27l s39p s42g s57w s59v s68v v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l n178d
xxxii)t1i s13y t22p s25p s27l s39p s42g s57w s59v s68v v76l q109r t127v s144p a147h s167l g175d
xxxiii)t1i s13y t22p s25p s27l s39p s42g s57w s59v s68v v76l t77y q109r s116d t127v s144p a147h q166d s167l g175d
xxxiv)t1i s13y t22p s25p s27l s39p s42g s57w s59v s68v v76l t77y q109r s116d t127v s144p a147h s167l
xxxv)t1i s13y t22p s25p s27l s39p s42g s57w s59v s68v v76l t77y q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175d n178e
xxxvi)t1i s13y t22p s25p s27l s39p s42g s57w s59v s68v v76l t77y q109r s116d t127v s144p a147h s167l n178d
xxxvii)t1i s13y t22p s25p s27l s39p s42g s57w s59v t65l s66w v76l t77y q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175d
xxxviii)t1i s13y t22p s25p s27l s39p s42g s57w s59v t65l s66y v76l t77y q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175d
xxxix)t1i s13y t22p s25p s27l s39p s42g s57w s59v t65v s66w v76l t77y q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175d
x1)t1i s13y t22p s25p s27l s39p s42g s57w s59v t65v s66y v76l t77y q109r s116d t127v s144p a147h g162d s167l g175d
xli)t1i s13y t22p s25p s27l s39p s42g s57w s59v t65v s66y v76l t77y q109r s116d t127v s144p a147h g162d s167l g175d s181e
xlii)t1i s13y t22p s25p s27l s39p s42g s57w s59v t65v s66y v76l t77y q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175d
xliii)t1i s13y t22p s25p s27l s39p s42g s57w s59v t65v s66y v76l t77y q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175d s181e
xliv)t1i s13y t22p s25p s27l s39p s42g s57w s59v t65v s66y v76l t77y s106l q109r s116d t127v s144p a147h g162d s167l g175d
xlv)t1i s13y t22p s25p s27l s39p s42g s57w s59v t65v s66y v76l t77y s106l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175d
xlvi)t1i s13y t22p s25p s27l s39p s42g s57w s59v t65v s66y v76l t77y s106l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175d s181e
xlvii)t1i s13y t22p s25p s27l s39p s42g s57w s59v v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175d
xlviii)t1i s13y t22p s25p s27l s39p s42g s57w s59v v76l t77y q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175d
xlix)t1i s13y t22p s25p s27l s39p s57w s59v s68v v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175d
1)t1i s13y t22p s25p s27r l33r s39p s42g s57w s59v s66y v76l t77y q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175d
li)t1i s13y t22p s25p s27r s39p s42g d56i s57w s59v v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175d
lii)t1i s13y t22p s25p s27r s39p s42g s57w s59v s66w v76l t77y q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175d
liii)t1i s13y t22p s27k l33k s39p s42g d56i s57w s59v t65v s66y v76l q109r s116d t127v s144p a147h g162d s167l g175d
liv)t1i s13y t22p s27k l33k s39p s42g d56l s57w s59v t65l s66y v76l qi09r s116d t127v s144p a147h g162d s167l g175d
1v)t1i s13y t22p s27k l33k s39p s42g d56l s57w s59v t65v s66y v76l q109r s116d t127v s144p a147h g162d s167l g175d
lvi)t1i s13y t22p s27k l33k s39p s42g s57w s59v t65v s66y v76l t77y q109r s116d t127v s144p a147h g162d s167l g175d s181e
lvii)t1i s13y t22p s27k l33k s39p s42g s57w s59v t65v s66y v76l t77y q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175d
lviii)t1i s13y t22p s27k s39p s42g d56i s57w s59v t65l v76l q109r s116d t127v s130a s144p a147h s167l g175d
lix)t1i s13y t22p s27k s39p s42g d56i s57w s59v t65v v76l q109r s116d t127v s130a s144p a147h s167l g175d
1x)t1i s13y t22p s27k s39p s42g d56i s57w s59v t65v v76l s106l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175d
lxi)t1i s13y t22p s27k s39p s42g d56i s57w s59v v76l q109r s116d t127v s130a s144p a147h g162d s167l g175d
lxii)t1i s13y t22p s27k s39p s42g d56i s57w s59v v76l q109r s116d t127v s144p a147h g162d s167l g175d
lxiii)t1i s13y t22p s27k s39p s42g d56i s57w s59v v76l s106l q109r s116d t127v s130a s144p a147h s167l g175d
1xiv)t1i s13y t22p s27k s39p s42g d56i s57w s59v v76l s106l q109r s116d t127v s144p a147h g162d s167l g175d
1xv)t1i s13y t22p s27k s39p s42g d56i s57w s59v v76l s106l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175d
lxvi)t1i s13y t22p s27k s39p s42g d56l s57w s59v t65l v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175d
lxvii)t11 s13y t22p s27k s39p s42g d56l s57w s59v t65v v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175d
1xviii)t1i s13y t22p s27k s39p s42g d56l s57w s59v v76l q109r s116d t127v s130a s144p a147h s167l g175d
lxix)t1i s13y t22p s27k s39p s42g d56l s57w s59v v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175d
1xx)t1i s13y t22p s27k s39p s42g s57w s59v t65v s66y v76l t77y q109r s116d t127v s144p a147h g162d s167l g175d
lxxi)t1i s13y t22p s27k s39p s42g s57w s59v t65v s66y v76l t77y q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175d s181e
1xxii)t1i s13y t22p s27k s42g s57w s59v v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175d
lxxiii)t1i s13y t22p s27l d32l s42g s57w s59v v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175d
lxxiv)t1i s13y t22p s27l d32r s42g s57w s59v v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175d
1xxv)t1i s13y t22p s27l d32v s42g s57w s59v v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175d
lxxvi)t1i s13y t22p s27l l33h s42g s57w s59v v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175d
1xxvii)t1i s13y t22p s27l l33k s39p s42g d56i s57w s59v s66w v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175d
1xxviii)t1i s13y t22p s27l l33k s39p s42g d56i s57w s59v s66y v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175d
lxxix)t1i s13y t22p s27l l33k s39p s42g d56i s57w s59v t65l s66y v76l q109r s116d t127v s144p a147h g162d s167l g175d
lxxx)t1i s13y t22p s27l l33k s39p s42g d56i s57w s59v t65l v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175d
lxxxi)t1i s13y t22p s27l l33k s39p s42g d56i s57w s59v t65v s66y v76l q109r s116d t127v s144p a147h g162d s167l g175d
1xxxii)t1i s13y t22p s27l l33k s39p s42g d56i s57w s59v t65v v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175d
1xxxiii)t1i s13y t22p s27l l33k s39p s42g d56i s57w s59v v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175d
1xxxiv)t1i s13y t22p s27l l33k s39p s42g d56l s57w s59v t65l s66y v76l q109r s116d t127v s144p a147h g162d s167l g175d
1xxxv)t1i s13y t22p s27l l33k s39p s42g d56l s57w s59v t65v s66y v76l q109r s116d t127v s144p a147h g162d s167l g175d
1xxxvi)t1i s13y t22p s27l l33r s42g s57w s59v v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175d
1xxxvii)t1i s13y t22p s27l l33v s42g s57w s59v v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175d
1xxxviii)t1i s13y t22p s27l l33y s42g s57w s59v v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175d
1xxxix)t1i s13y t22p s27l s39c s42g s57w s59v v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175d
xc)t1i s13y t22p s27l s39p d56i s57w s59v v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175d
xci)t1i s13y t22p s27l s39p s42g d56i s57w s59d v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175d
xcii)t1i s13y t22p s27l s39p s42g d56i s57w s59e v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175d
xciii)t1i s13y t22p s27l s39p s42g d56i s57w s59g v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175d
xciv)t1i s13y t22p s27l s39p s42g d56i s57w s59v q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175d
xcv)t1i s13y t22p s27l s39p s42g d56i s57w s59v s66y v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175d
xcvi)t1i s13y t22p s27l s39p s42g d56i s57w s59v s68v v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175d
xcvii)t1i s13y t22p s27l s39p s42g d56i s57w s59v t65l s66w v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175d
xcviii)t1i s13y t22p s27l s39p s42g d56i s57w s59v t65l v76l q109r s116d t127v s130a s144p a147h g162d s167l g175d
xcix)t1i s13y t22p s27l s39p s42g d56i s57w s59v t65l v76l q109r s116d t127v s144p a147h g162d s167l g175d
c)t1i s13y t22p s27l s39p s42g d561 s57w s59v t65l v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175d
ci)t1i s13y t22p s27l s39p s42g d56i s57w s59v t65l v76l s106l q109r s116d t127v s130a s144p a147h s167l g175d
cii)t1i s13y t22p s27l s39p s42g d56i s57w s59v t65l v76l s106l q109r s116d t127v s144p a147h g162d s167l g175d
ciii)t1i s13y t22p s27l s39p s42g d56i s57w s59v t65l v76l s106l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175d
civ)t1i s13y t22p s27l s39p s42g d56i s57w s59v t65v v76l q109r s116d t127v s130a s144p a147h g162d s167l g175d
cv)t1i s13y t22p s27l s39p s42g d56i s57w s59v t65v v76l q109r s116d t127v s130a s144p a147h s167l g175d
cvi)t1i s13y t22p s27l s39p s42g d56i s57w s59v t65v v76l q109r s116d t127v s144p a147h g162d s167l g175d
cvii)t1i s13y t22p s27l s39p s42g d56i s57w s59v t65v v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175d
cviii)t1i s13y t22p s27l s39p s42g d56i s57w s59v t65v v76l s106l q109r s116d t127v s144p a147h g162d s167l g175d
cix)t1i s13y t22p s27l s39p s42g d56i s57w s59v v76l q109r s116d s144p a147h s167l g175d
cx)t1i s13y t22p s27l s39p s42g d56i s57w s59v v76l q109r s116d t127v a147h s167l g175d
cxi)t1i si3y t22p s27l s39p s42g d561 s57w s59v v76l q109r s116d t127v s144p a147h g162d s167l g175d
cxii)t1i s13y t22p s27l s39p s42g d56i s57w s59v v76l q109r s116d t127v s144p a147h g162e s167l g175d
cxiii)t1i s13y t22p s27l s39p s42g d56i s57w s59v v76l q109r s116d t127v s144p a147h g175d
cxiv)t1i s13y t22p s27l s39p s42g d561 s57w s59v v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l
cxv)t1i s13y t22p s27l s39p s42g d56i s57w s59v v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175d
cxvi)tii s13y t22p s27l s39p s42g d56i s57w s59v v76l q109r s116d t127v s144p a147k s167l g175d
cxvii)t1i s13y t22p s27l s39p s42g d56i s57w s59v v76l q109r s116d t127v s144p a147r s167l g175d
cxviii)t1i s13y t22p s27l s39p s42g d56i s57w s59v v76l q109r s116d t127v s144p s167l g175d
cxix)t1i s13y t22p s27l s39p s42g d56i s57w s59v v76l q109r s116d t127v t138d s144p a147h s167l g175d
cxx)t1i s13y t22p s27l s39p s42g d56i s57w s59v v76l q109r t127v s144p a147h s167l g175d
cxxi)t1i s13y t22p s27l s39p s42g d56i s57w s59v v76l s106l q109r s116d t127v s130a s144p a147h g162d s167l g175d
cxxii)t1i s13y t22p s27l s39p s42g d56i s57w s59v v76l s106l q109r s116d t127v s144p a147h g162d s167l g175d
cxxiii)t1i s13y t22p s27l s39p s42g d56i s57w s59v v76l s106l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175d
cxxiv)t1i s13y t22p s27l s39p s42g d56i s57w s59v v76l s106r q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175d
cxxv)t1i s13y t22p s27l s39p s42g d561 s57w s59v v76l t77y q109r s116d t127v s144p a147h q166d s167l g175d
cxxvi)t1i s13y t22p s27l s39p s42g d56i s57w s59v v76l t77y q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175d
cxxviit1i s13y t22p s27l s39p s42g d56i s57w v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175d
cxxviii)t1i s13y t22p s27l s39p s42g d56i s57y s59v v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175d
cxxix)t1i s13y t22p s27l s39p s42g d56i s59v v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175d
cxxx)t1i s13y t22p s27l s39p s42g d56l s57w s59v t65l v76l q109r s116d t127v s130a s144p a147h s167l g175d
cxxxi)t1i s13y t22p s27l s39p s42g d56l s57w s59v t65l v76l q109r s116d t127v s144p a147h g162d s167l g175d
cxxxii)t1i s13y t22p s27l s39p s42g d56l s57w s59v t65l v76l s106l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175d
cxxxiii)t1i s13y t22p s27l s39p s42g d56l s57w s59v t65v v76l q109r s116d t127v s130a s144p a147h s167l g175d
cxxxiv)t1i s13y t22p s27l s39p s42g d56l s57w s59v t65v v76l q109r s116d t127v s144p a147h g162d s167l g175d
cxxxv)t1i s13y t22p s27l s39p s42g d56l s57w s59v t65v v76l s106l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175d
cxxxvi)t1i s13y t22p s27l s39p s42g d56l s57w s59v v76l q109r s116d t127v s130a s144p a147h g162d s167l g175d
cxxxvii)t1i s13y t22p s27l s39p s42g d56l s57w s59v v76l q109r s116d t127v s144p a147h g162d s167l g175d
cxxxviii)t1i s13y t22p s27l s39p s42g d56l s57w s59v v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175d
cxxxix)t1i s13y t22p s27l s39p s42g d56l s57w s59v v76l s106l q109r s116d t127v s130a s144p a147h g162d s167l g175d
cxl)t1i s13y t22p s27l s39p s42g d56l s57w s59v v76l s106l q109r s116d t127v s130a s144p a147h s167l g175d
cxli)t1i s13y t22p s27l s39p s42g d56l s57w s59v v76l s106l q109r s116d t127v s144p a147h g162d s167l g175d
cxlii)t1i s13y t22p s27l s39p s42h d56i s57w s59v v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175d
cxliii)t1i s13y t22p s27l s42g d56l s57w s59v v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175d
cxliv)t1i s13y t22p s27l s42g s57w s59v s66r v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175d
cxlv)t1i s13y t22p s27l s42g s57w s59v s66w v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175d
cxlvi)t1i s13y t22p s27l s42g s57w s59v s66y v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175d
cxlvii)t1i s13y t22p s27l s42g s57w s59v t65l v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175d
cxlviii)t1i s13y t22p s27l s42g s57w s59v t65m v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175d
cxlix)t1i s13y t22p s27l s42g s57w s59v t65r v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175d
cl)t1i s13y t22p s27l s42g s57w s59v v76l qi09r s116d t127v q140g s144p a147h s167l g175d
cli)t1i s13y t22p s27l s42g s57w s59v v76l q109r s116d t127v q140v s144p a147h s167l g175d
clii)t1i s13y t22p s27l s42g s57w s59v v76l q109r s116d t127v s130y s144p a147h s167l g175d
cliii)t1i s13y t22p s27l s42g s57w s59v v76l q109r s116d t127v s144p a147h c148a s167l g175d s179l c180a
cliv)t1i s13y t22p s27l s42g s57w s59v v76l q109r s116d t127v s144p a147h g162c s167l g175d
clv)t1i s13y t22p s27l s42g s57w s59v v76l q109r s116d t127v s144p a147h g162d s167l g175d
clvi)t1i s13y t22p s27l s42g s57w s59v v76l q109r s116d t127v s144p a147h g162e s167l g175d
clvii)t1i s13y t22p s27l s42g s57w s59v v76l q109r s116d t127v s144p a147h k160v s167l g175d
clviii)t1i s13y t22p s27l s42g s57w s59v v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175d s179l
clix)t1i s13y t22p s27l s42g s57w s59v v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175d s181e
clx)t1i s13y t22p s27l s42g s57w s59v v76l q109r s116d t127v s144p a147h w154y s167l g175d
clxi)t1i s13y t22p s27l s42g s57w s59v v76l s101n q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175d
clxii)t1i s13y t22p s27l s42g s57w s59v v76l s106l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175d
clxiii)t1i s13y t22p s27r s39p s42g d56i s57w s59v t65v v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175d
clxiv)t1i s13y t22p s27r s39p s42g d56i s57w s59v v76l q109r s116d t127v s130a s144p a147h g162d s167l g175d
clxv)t1i s13y t22p s27r s39p s42g d56i s57w s59v v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175d
clxvi)t1i s13y t22p s27r s39p s42g d56i s57w s59v v76l s106l q109r s116d t127v s130a s144p a147h s167l g175d
clxvii)t1i s13y t22p s27r s39p s42g d56i s57w s59v v76l s106l q109r s116d t127v s144p a147h g162d s167l g175d
clxviii)t1i s13y t22p s27r s39p s42g d56l s57w s59v s66y v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175d
clxix)t1i s13y t22p s27r s39p s42g d56l s57w s59v t65l v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175d
clxx)t1i s13y t22p s27r s39p s42g d56l s57w s59v t65v v76l q109r s116d t127v s144p a147h g162d s167l g175d
clxxi)t1i s13y t22p s27r s39p s42g d56l s57w s59v t65v v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175d
clxxii)t1i s13y t22p s27r s39p s42g d56l s57w s59v v76l s106l q109r s116d t127v s130a s144p a147h g162d s167l g175d
clxxiii)t1i s13y t22p s27r s42g s57w s59v v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175d
clxxiv)t1i s13y t22p s27v s39p s42g d56i s57w s59v v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175d
clxxv)t1i s13y t22p s39p s42g d56i s57w s59v v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175d
clxxvi)t1i s7g s13y t22p s27l s39p s42g d56i s57w s59v v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175d
clxxvii)t1i s9i s13y t22p s27l s42g s57w s59v v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175d
clxxviii)t1i t22p s27l s39p s42g d56i s57w s59v v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175dand
clxxix)t1v s13y t22p s27l s39p s42g d56i s57w s59v v76l q109r s116d t127v s144p a147h s167l g175d.
6.根据前述段落中任一个所述的洗涤剂组合物，其中所述脱氧核糖核酸酶变体包含基序[[d/m/l][s/t]gysr[d/n](seqidno：25)或asxnrskg(seqidno：26)中的一者或两者。
7.根据前述段落中任一个所述的洗涤剂组合物，其中与亲本相比或与具有seqidno：1中所示的多肽的脱氧核糖核酸酶相比，其具有至少一种改善的特性，其中所述改善的特性在至少一种测定法a、b或c中表征为高于1的残余活性比(残余活性比)。
8.根据前述段落中任一个所述的洗涤剂组合物，其中所述突变的组合提供加性效应或协同效应。
9.根据前述段落中任一个所述的洗涤剂组合物，其中所述脱氧核糖核酸酶变体具有与包含seqidno：1中所示的氨基酸序列的脱氧核糖核酸酶至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％，诸如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％，但少于100％的序列同一性。
10.根据前述段落中任一个所述的洗涤剂组合物，其中所述脱氧核糖核酸酶变体包含与seqidno：1相比的3-20个，例如至少5至20个、至少10至20个替换总数，或诸如与包含seqidno：1中所示的氨基酸序列的脱氧核糖核酸酶相比的至少15至20个替换。
11.一种用于制备脱氧核糖核酸酶变体的方法，所述方法包括：
a)将三个或更多个选自下列的替换导入亲本脱氧核糖核酸酶中：t1i、t1v、g4k、s7g、k8r、s13y、t22p、s25p、s27l、s27r、d32i、d32l、d32r、d32v、l33r、l33k、s39p、s39c、g41p、s42g、s42h、s42c、q48d、d56i、d56l、s57w、s59v、s59c、t65l、t65v、t65m、t65w、s66m、s66w、s66y、s66v、v76l、t77y、s101n、s106l、s106r、s106h、q109r、s116d、t127v、s130a、s130y、t138d、q140v、q140g、s144p、a147h、c148a、w154y、t157v、y159a、y159r、k160v、g162s、g162d、g162c、q166d、s167l、q174n、g175d、g175n、l177y、n178d、n178e、s179l、c180a、s181e和s181l(根据seqidno:1进行编号)，以制备变体脱氧核糖核酸酶，
b)并且回收制备的脱氧核糖核酸酶变体。
12.根据段落11所述的方法，其中将3-20个，例如至少5至20个，至少10至20个或诸如至少15至20个替换导入亲本脱氧核糖核酸酶中。
13.根据前述段落中任一个所述的洗涤剂组合物，其中所述脱氧核糖核酸酶亲本属于gys进化枝，并且其中所述亲本脱氧核糖核酸酶包含基序[d/m/l][s/t]gysr[d/n](seqidno:25)或asxnrskg(seqidno:26)中的一者或两者。
14.根据前述段落中任一个所述的洗涤剂组合物，其中所述亲本脱氧核糖核酸酶选自下列多肽：
a)具有与seqidno:1中所示的多肽至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
b)具有与seqidno:2中所示的多肽至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
c)具有与seqidno:3中所示的多肽至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
d)具有与seqidno:4中所示的多肽至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
e)具有与seqidno:5中所示的多肽至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
f)具有与seqidno:6中所示的多肽至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
g)具有与seqidno:7中所示的多肽至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
h)具有与seqidno:8中所示的多肽至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
i)具有与seqidno:9中所示的多肽至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
j)具有与seqidno:10中所示的多肽至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
k)具有与seqidno:11中所示的多肽至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
l)具有与seqidno:12中所示的多肽至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
m)具有与seqidno:13中所示的多肽至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
n)具有与seqidno:14中所示的多肽至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
o)具有与seqidno:15中所示的多肽至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
p)具有与seqidno:16中所示的多肽至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
q)具有与seqidno:17中所示的多肽至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
r)具有与seqidno:18中所示的多肽至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
s)具有与seqidno:19中所示的多肽至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
t)具有与seqidno:20中所示的多肽至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
u)具有与seqidno:21中所示的多肽至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
v)具有与seqidno:22中所示的多肽至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
w)具有与seqidno:23中所示的多肽至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，和
x)具有与seqidno:24中所示的多肽至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽。
15.根据前述段落中任一个所述的洗涤剂组合物，其中所述亲本脱氧核糖核酸酶得自芽孢杆菌(bacillus)属。
16.根据前述段落中任一个所述的洗涤剂组合物，其中所述亲本脱氧核糖核酸酶得自以下芽孢杆菌(bacillus)中的任一种：例如芽孢杆菌属(bacillus)，诸如食物芽孢杆菌(bacilluscibi)、芽孢杆菌属62451、堀越氏芽孢杆菌(bacillushorikoshii)、芽孢杆菌属16840、芽孢杆菌属62668、芽孢杆菌属13395、角质芽孢杆菌(bacillushorneckiae)、芽孢杆菌属11238、病研所芽孢杆菌(bacillusidriensis)、芽孢杆菌属62520、居藻芽孢杆菌(bacillusalgicola)、越南芽孢杆菌(bacillusvietnamensis)、花津滩芽孢杆菌(bacillushwajmpoensis)、印度芽孢杆菌(bacillusindicus)、黄海芽胞杆菌(bacillusmarisflavi)、路西法芽孢杆菌(bacillusluciferensis)或芽孢杆菌属sa2-6。
测定法和洗涤剂组合物
模型洗涤剂a(液体)的组成：
成分：12％las、11％aeobiosoftn25-7(ni)、7％aeos(sles)、6％mpg(单丙烯乙二醇)、3％乙醇、3％tea、2.75％可可皂、2.75％大豆皂、2％甘油、2％氢氧化钠、2％柠檬酸钠、1％甲酸钠、0.2％dtmpa和0.2％pca(所有百分比均为重量/重量(重量百分比))。
测定法a-c
纯化样品的活性
在测定法a、b或c中测试脱氧核糖核酸酶样品的稳定性之前，根据以下程序分析它们的活性。在hamiltonnimbus4通道液体处理器上，使用稀释缓冲液(50mmtris-hcl，ph7 0,1％tritonx-100)在96孔板中将纯化的脱氧核糖核酸酶样品稀释至7.5ppm。相应地制备2.5ppm、5ppm和7.5ppm的脱氧核糖核酸酶(例如seqidno：1或seqidno：28)的标准曲线。
将12μl标称化脱氧核糖核酸酶样品加入228μl模型a中，并且将溶液在2000rpm下(2mm轨道)振摇90秒。将10μl样品添加到190μldna底物(3.3mg/ml鲑精dna 50mmtris-hcl，ph7 5mmmgcl2 5mmcacl2)，并将包含样品和dna底物的96孔板在1500rpm下混合90秒(轨道2mm)。将板在室温下温育1小时，并根据以下程序测量脱氧核糖核酸酶活性：hamiltonstar使用如(wo2011/107472a1)中所述的vipr测定技术，通过以50μi/s的速度用标准透明core300μl尖端抽吸100μi测定溶液来测量样品的粘度，从而测量脱氧核糖核酸酶的活性。将溶液以10μl/s分配回到初始孔，并且重复测量5次。从所有96孔收集抽吸步骤期间的压力数据，并且获取在开始抽吸后1000ms时的压力值用于以相对单位(ru)计算脱氧核糖核酸酶活性。相对单位通过缓冲值(空白；1000ms)除以给定样品的压力值(1000ms)减去1来计算。将示出与标准曲线相比低于2.5mm的活性的样品调节到至少>10ppm且低于<20ppm的水平。将所有样品一式三份转移到96孔板，其中用5ppm脱氧核糖核酸酶(seqidno:1或seqidno:28)样品作为基准。
测定法a
将具有标称化脱氧核糖核酸酶样品的96孔板和脱氧核糖核酸酶(seqidno：28)的稀释液加载在hamiltonstar机器人上，所述机器人配备有96通道tadm头部，这允许同时测量每个单个移液管通道的顶部空间中的压力。将12μl标称化脱氧核糖核酸酶样品添加到具有蛋白酶(136ppm)的228μl模型a中。将溶液在2000rpm下(2mm轨道)振摇90秒，并且将80μl溶液添加到两个pcr板中。将板a(胁迫)在40℃下温育并且将板b(基准)在4℃下温育24小时。将板a和b转移至室温。将190μldna底物(3.3mg/ml鲑精dna 50mmtris-hcl，ph7 5mmmgcl2 5mmcacl2)添加到2x96孔板中。将10μl得自板a和板b的样品分别添加到相应的包含dna底物的板中。将样品和dna在1500rpm下混合90秒(轨道2mm)并在室温下温育1小时。hamiltonstar使用如(wo2011/107472a1)中所述的vipr测定技术，通过以50μl/s的速度用标准的透明core300μl尖端抽吸100μi来测量粘度。将溶液以10μl/s分配回到初始孔，并且重复测量5次。从所有96孔收集抽吸步骤期间的压力数据，并且获取在开始抽吸后1000ms时的压力值用于以相对单位(ru)计算脱氧核糖核酸酶活性。相对单位通过缓冲值(空白；1000ms)除以给定样品的压力值(1000ms)减去1来计算。相对活性(ra)通过以下公式计算：
测定法b
脱氧核糖核酸酶变体的条件和活性测定如测定法a中所述，不同的是将脱氧核糖核酸酶样品在60℃下暴露于模型a洗涤剂 0.4％k2so31小时。通过在剧烈搅拌下将模型a(50g)与0.2gk2so3混合1小时来制备洗涤剂溶液。
测定法c
脱氧核糖核酸酶变体的条件和活性测定如测定法a中所述，不同的是将脱氧核糖核酸酶样品在62℃下仅暴露于模型a洗涤剂2小时。
残余活性比(rar)
通过使用稳定化变体作为基准来计算每个条件的残余活性比。在上述3个条件下测试变体，并且使用下式计算rar：
方法
pcr、克隆、连接核苷酸等的一般方法是本领域技术人员所熟知的，并且可在例如“molecularcloning:alaboratorymanual”，sambrook等人，(1989)，coldspringharborlab.，coldspringharbor，ny；ausubelf.m.等人(eds.)；“currentprotocolsinmolecularbiology”，johnwileyandsons，(1995)；harwood,c.r.和cutting,s.m.(eds.)；“dna克隆：实用方法(dnacloning:apracticalapproach)，卷一和卷二”，d.n.glover编辑(1985)；“寡核苷酸合成(oligonucleotidesynthesis)”，m.j.gait编辑(1984)；“核酸杂交(nucleicacidhybridization)”，b.d.hames&s.j.higginseds(1985)；“分子克隆实践指南(apracticalguidetomolecularcloning)”，b.perbal，(1984)中找到。
实施例
实施例1：通过定点诱变构建变体
位点定向变体由食物芽孢杆菌(bacilluscibi)脱氧核糖核酸酶(seqidno：1)构建，其包含根据本发明的特定替换。所述变体通过dna片段的传统克隆制备(sambrook等人，molecularcloning：alaboratorymanual，第2版，coldspringharbor，1989)，其使用与适当设计的诱变寡核苷酸一起使用的pcr，所述诱变寡核苷酸在所得序列中引入所需的突变。
诱变寡核苷酸被设计成与侧接一个或多个期望的突变位点的dna序列对应，该突变由限定插入/缺失/替换的dna碱基对分离，并且购自寡核苷酸供应商诸如lifetechnologies。为了测试本发明的脱氧核糖核酸酶变体，包含本发明变体的突变dna通过同源重组整合到感受态枯草芽孢杆菌(b.subtilis)菌株中，使用标准规程发酵(基于酵母提取物的培养基，3-4天，30℃)，并通过活性测定进行筛选。
将构建的变体接种至补充了6ug/ml氯霉素的lb琼脂上，在37℃生长一天。生长结束后，挑取菌落至标准96孔微量滴定板的单个孔中，所述板包含200ultbgly肉汤，其补充有6ug/ml氯霉素和痕量金属(50mmfecl3、20mmcacl2、10mmmncl2、10mmznso4、2mmcucl2和2mmnicl2(f.williamstudier，“proteinproductionbyauto-inductioninhigh-densityshakingcultures”，proteinexpressionandpurification，41(2005)207-234))。
在每个微量滴定板的四个孔中接种野生型食物芽孢杆菌(bacilluscibi)脱氧核糖核酸酶作为基准。将微量滴定板在30℃下以220rpm振摇生长三天。生长之后，在96％(体积/体积)模型a的存在下，在48.5℃下胁迫处理20分钟后对上清液筛选残余活性。
实施例2：脱氧核糖核酸酶变体相对于洗涤剂中的基准样品的相对活性比(测定法c)
测试条件：在模型洗涤剂中在62℃下胁迫脱氧核糖核酸酶变体2小时，并将其与由星号(*)指示的基准样品进行比较。
实施例3在蛋白酶存在下脱氧核糖核酸酶变体相对于基准样品的相对活性比(测定法a)
测试条件：在40℃下在存在5％蛋白酶的模型洗涤剂(模型洗涤剂a)中，胁迫脱氧核糖核酸酶变体24小时。将变体与基准样品seqidno：28进行比较。
实施例4在亚硫酸盐的存在下脱氧核糖核酸酶变体相对于基准样品的相对活性比(测定法b)
测试条件：在60℃下在包含0.4％亚硫酸盐(k2so4)的模型洗涤剂中，胁迫脱氧核糖核酸酶变体1小时。将变体与基准样品seqidno：28进行比较。
实施例5三种测定法中的相对改善
测试条件：
测定法a：在40℃下在存在5％蛋白酶的模型洗涤剂(模型洗涤剂a)中，胁迫脱氧核糖核酸酶变体24小时。将变体与基准样品基准样品seqidno：28进行比较。
测定法b：在60℃下在包含0.4％亚硫酸盐(k2so4)的模型洗涤剂中，胁迫脱氧核糖核酸酶变体1小时。将变体与基准样品基准样品seqidno：28进行比较。
测定法c：在62℃下在模型洗涤剂中，胁迫脱氧核糖核酸酶变体2小时，并将其与基准样品seqidno:28进行比较。
洗涤剂实施例
实施例1-6：设计用于手洗或顶部加载式洗衣机的颗粒状衣物洗涤剂组合物。
实施例7-12：设计用于前加载式自动洗衣机的颗粒状衣物洗涤剂组合物。
*脱氧核糖核酸酶显示为每100g洗涤剂的活性酶毫克数。
实施例13-18：重垢型液体衣物洗涤剂组合物
实施例19-23：单位剂量衣物洗涤剂组合物。此类单位剂量制剂可包括一个或多个隔室。
实施例24：多隔室单位剂量组合物
下文中提供了本发明的多隔室的单位剂量衣物洗涤剂配方。在这些实例中，单位剂量具有三个隔室，但类似的组合物能够以两个、四个或五个隔室被制得。用于包封所述隔室的膜是聚乙烯醇。
多隔室配方
实施例25：本发明的织物软化剂组合物
针对组合物实施例1-24的原材料和说明
具有c11-c18平均脂族碳链链长的直链烷基苯磺酸盐，
c12-18二甲基羟乙基氯化胺
ae3s是c12-15烷基乙氧基(3)硫酸盐
ae7是c12-15醇乙氧基化物，具有7的平均乙氧基化度
ae9是c12-16醇乙氧基化物，具有9的平均乙氧基化度
hsas是如us6,020,303和us6,060,443所公开的具有约16-17的碳链长度的中间支化伯烷基硫酸盐
聚丙烯酸酯mw4500是由basf提供的
羧甲基纤维素为由cpkelco(arnhem,netherlands)供应的
chec是阳离子改性的羟乙基纤维素聚合物。
膦酸盐螯合剂是，例如，二亚乙基四胺五乙酸(dtpa)羟乙烷二磷酸盐(hedp)
荧光增白剂1是
taed是四乙酰基乙二胺
s-acmc为与c.i.活性蓝19(产品名azo-cm-cellulose)缀合的羧甲基纤维素
去垢剂为
丙烯酸/马来酸共聚物的分子量为70,000，丙烯酸根与马来酸根的比率为70∶30
edds是乙二胺-n,n′-二琥珀酸的钠盐，(s,s)异构体抑泡剂附聚物是由dowcorning，midland，michigan，usa提供的hsas是中间支化的烷基硫酸盐
聚乙氧基化偶氮噻吩染料为紫ddtm聚合物调色染料，由milliken，spartanburg，southcarolina，usa提供
1无规接枝共聚物为聚乙酸乙烯酯接枝的聚环氧乙烷共聚物，其具有聚环氧乙烷主链和多个聚乙酸乙烯酯侧链。聚环氧乙烷主链的分子量为约6000，并且聚环氧乙烷与聚乙酸乙烯酯的重量比为约40至60，并且每50个环氧乙烷单元具有不超过1个接枝点。
2聚乙烯亚胺(mw＝600)，每个-nh具有20个乙氧基化基团。
3两亲性烷氧基化聚合物是聚乙烯亚胺(分子量＝600)，制备自被衍生为每个-nh包含24个乙氧基化物基团且每个-nh包含16个丙氧基化物基团的聚合物。
4淀粉酶以每100g洗涤剂的活性酶的毫克数表示。
5在所有这些实施例中脱氧核糖核酸酶以每100g洗涤剂的活性酶的毫克数表示。
aproxelgxl，1,2-苯并异噻唑啉-3-酮的20％双丙二醇水溶液，由lonza提供。
bn,n-双(羟乙基)-n,n-二甲基氯化铵脂肪酸酯。该材料的母体脂肪酸的碘值介于18和22之间。得自evonik的材料包含有游离脂肪酸形式的杂质、n,n-双(羟乙基)-n,n-二甲基氯化铵脂肪酸酯的单酯形式的杂质、和n,n-双(羟乙基)-n-甲胺的脂肪酸酯形式的杂质。
c
d如us8,765,659中所述，表达为100％包封的香料油
e
fn,n-二甲基辛酰胺和n,n-二甲基癸酰胺，重量比为约55：45，商品名
本文所公开的量纲和值不应理解为严格限于所引用的精确数值。相反，除非另外指明，否则每个此类量纲旨在表示所述值以及围绕该值功能上等同的范围。例如，公开为“40mm”的量纲旨在表示“约40mm”。
1.一种洗涤剂组合物，其包含i)具有脱氧核糖核酸酶活性的脱氧核糖核酸酶变体，所述脱氧核糖核酸酶变体选自：
a)脱氧核糖核酸酶变体，所述脱氧核糖核酸酶变体与具有seqidno:1的脱氧核糖核酸酶相比包含选自下列的一个或多个替换：g4k、s7g、k8r、s9i、n16g、s27k、s27r、d32f、d32i、d32l、d32r、d32v、l33h、l33r、l33k、l33v、l33y、s39c、g41p、s42h、d45e、q48d、n61e、t65m、t65w、s66r、s66m、s66w、s66y、s66v、f78l、p91l、s101n、s106l、s106r、s106h、q109e、a112e、t127p、s130a、s130y、t138d、q140v、q140g、a147h、c148a、w154y、t157v、y159a、y159r、g162c、q174n、l177y、s179l和c180a，其中每个位点对应于seqidno:1的位点(根据seqidno:1进行编号)，并且其中所述变体具有与seqidno:1中所示的氨基酸序列至少60％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％但少于100％的序列同一性；
b)脱氧核糖核酸酶变体，所述脱氧核糖核酸酶变体与具有seqidno:27的脱氧核糖核酸酶相比包含选自下列的一个或多个替换：g4k、s7g、k8r、s9i、n16g、s27k、s27r、d32f、d32i、d32l、d32r、d32v、l33h、l33r、l33k、l33v、l33y、s39c、g41p、s42h、d45e、q48d、n61e、t65m、t65w、s66r、s66m、s66w、s66y、s66v、f78l、p91l、s101n、s106l、s106r、s106h、q109e、a112e、t127p、s130a、s130y、t138d、q140v、q140g、a147p、c148a、w154y、t157v、y159a、y159r、g162c、q174n、l177y、s179l和c180a，其中每个位点对应于seqidno:27的位点(根据seqidno:27进行编号)，并且其中所述变体具有与seqidno:27中所示的氨基酸序列至少60％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％但少于100％的序列同一性；和
c)脱氧核糖核酸酶变体，所述脱氧核糖核酸酶变体与具有seqidno:28的脱氧核糖核酸酶相比包含选自下列的一个或多个替换：g4k、s7g、k8r、s9i、n16g、s27k、s27r、d32f、d32i、d32l、d32r、d32v、l33h、l33r、l33k、l33v、l33y、s39c、g41p、s42h、d45e、q48d、n61e、t65m、t65w、s66r、s66m、s66w、s66y、s66v、f78l、p91l、s101n、s106l、s106r、s106h、q109e、a112e、t127p、s130a、s130y、t138d、q140v、q140g、a147p、c148a、w154y、t157v、y159a、y159r、g162c、q174n、l177y、s179l和c180a，其中每个位点对应于seqidno:28的位点(根据seqidno:28进行编号)，并且其中所述变体具有与seqidno:28中所示的氨基酸序列至少60％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％但少于100％的序列同一性；以及
ii)助剂，优选地其量为0.01重量％至99.9重量％。
2.根据权利要求1所述的洗涤剂组合物，其中所述脱氧核糖核酸酶变体包含对应于来自下列的替换的一个或多个替换：s27k、s27r、l33r、l33v、l33y、s39c和s66w(根据seqidno：1进行编号)。
3.根据权利要求1或权利要求2所述的洗涤剂组合物，其中所述脱氧核糖核酸酶变体包含基序[d/m/l][s/t]gysr[d/n](seqidno:25)和/或asxnrskg(seqidno:26)中的一者或两者。
4.根据前述权利要求中任一项所述的洗涤剂组合物，其中所述脱氧核糖核酸酶变体与亲本相比和/或与具有seqidno:1、seqidno:27或seqidno:28中所示的多肽的脱氧核糖核酸酶相比具有至少一种改善的特性，优选地其中所述改善的特性在至少一种测定法a、b或c中表征为高于1的rar(残余活性比)。
5.根据前述权利要求中任一项所述的洗涤剂组合物，其中所述脱氧核糖核酸酶变体中的突变的组合提供加性效应或协同效应。
6.根据前述权利要求中任一项所述的洗涤剂组合物，其中所述脱氧核糖核酸酶变体具有与包含seqidno:1中所示的氨基酸序列的脱氧核糖核酸酶至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％，诸如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％，但少于100％的序列同一性。
7.根据前述权利要求中任一项所述的洗涤剂组合物，其中在所述脱氧核糖核酸酶变体中，与seqidno：1相比的总替换数为3至20个，优选地至少5至20个，至少10至20个，或诸如与包含seqidno：1中所示的氨基酸序列的脱氧核糖核酸酶相比至少15至20个替换。
8.根据前述权利要求中任一项所述的洗涤剂组合物，其中所述脱氧核糖核酸酶变体是亲本脱氧核糖核酸酶的变体，所述亲本脱氧核糖核酸酶选自下列多肽：
a)具有与seqidno:1中所示的多肽至少60％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
b)具有与seqidno:2中所示的多肽至少60％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
c)具有与seqidno:3中所示的多肽至少60％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
d)具有与seqidno:4中所示的多肽至少60％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
e)具有与seqidno:5中所示的多肽至少60％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
f)具有与seqidno:6中所示的多肽至少60％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
g)具有与seqidno:7中所示的多肽至少60％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
h)具有与seqidno:8中所示的多肽至少60％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
i)具有与seqidno:9中所示的多肽至少60％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
j)具有与seqidno:10中所示的多肽至少60％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
k)具有与seqidno:11中所示的多肽至少60％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
l)具有与seqidno:12中所示的多肽至少60％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
m)具有与seqidno:13中所示的多肽至少60％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
n)具有与seqidno:14中所示的多肽至少60％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
o)具有与seqidno:15中所示的多肽至少60％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
p)具有与seqidno:16中所示的多肽至少60％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
q)具有与seqidno:17中所示的多肽至少60％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
r)具有与seqidno:18中所示的多肽至少60％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
s)具有与seqidno:19中所示的多肽至少60％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
t)具有与seqidno:20中所示的多肽至少60％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
u)具有与seqidno:21中所示的多肽至少60％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
v)具有与seqidno:22中所示的多肽至少60％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，
w)具有与seqidno:23中所示的多肽至少60％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，和
x)具有与seqidno:24中所示的多肽至少60％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽。
9.根据前述权利要求中任一项所述的洗涤剂组合物，其中所述脱氧核糖核酸酶变体为亲本脱氧核糖核酸酶的变体，所述亲本脱氧核糖核酸酶得自芽孢杆菌(bacillus)属，优选地得自下列芽孢杆菌中的任一种：食物芽孢杆菌(bacilluscibi)、堀越氏芽孢杆菌(bacillushorikoshii)、角质芽孢杆菌(bacillushorneckiae)、病研所芽孢杆菌(bacillusidriensis)、居藻芽孢杆菌(bacillusalgicola)、越南芽孢杆菌(bacillusvietnamensis)、花津滩芽孢杆菌(bacillushwajinpoensis)、印度芽孢杆菌(bacillusindicus)、黄海芽胞杆菌(bacillusmarisflavi)或路西法芽孢杆菌(bacillusluciferensis)。
10.根据前述权利要求中任一项所述的洗涤剂组合物，其中所述脱氧核糖核酸酶变体包含对应于来自下列的替换的一个或多个替换：g4k、s7g、k8r、d32i、d32l、d32r、d32v、l33r、l33k、s39c、g41p、s42h、q48d、t65m、t65w、s66m、s66w、s66y、s66v、s101n、s106l、s106r、s106h、s130a、s130y、t138d、q140v、q140g、a147h、c148a、w154y、t157v、y159a、y159r、g162c、q174n、l177y、s179l和c180a(根据seqidno:1进行编号)。
11.根据前述权利要求中任一项所述的洗涤剂组合物，其中所述助剂包含5重量％至70重量％的表面活性剂，优选地包含阴离子表面活性剂和非离子表面活性剂，优选地阴离子表面活性剂与非离子表面活性剂的重量比为25:1至2:3。
12.根据前述权利要求中任一项所述的洗涤剂组合物，其中所述助剂包含选自下列的附加酶：淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶、角质酶、甘露聚糖酶、半乳聚糖酶、纤维素酶、木葡聚糖酶以及它们的混合物。
13.一种洗涤方法，包括：(i)使制品或表面优选地织物与含水洗涤液体接触，所述含水洗涤液体包含如前述权利要求中任一项定义的脱氧核糖核酸酶变体和助剂，优选地通过使所述制品或表面与根据前述权利要求中任一项所述的洗涤剂组合物接触；以及(ii)任选地漂洗以及(iii)干燥所述表面。
14.如前述权利要求中任一项定义的脱氧核糖核酸酶变体和助剂的用途，优选地根据前述权利要求中任一项所述的洗涤剂组合物和/或根据权利要求1至14中任一项所述的清洁方法的用途：用于清洁或深层清洁制品或表面，优选地织物；用于防止和/或减少脏污的制品或表面，优选地织物的粘滞性；用于预处理脏污的制品或表面，优选地织物上的污渍；用于在洗涤循环期间防止和/或减少污垢在表面或制品，优选地织物上的再沉积；用于防止和/或减少污垢对制品或表面，优选地织物的粘附；用于保持或改善制品或表面，优选地织物的白度；以及/或者用于防止和/或减少制品或表面，优选地织物上的恶臭。
技术总结