本发明总体上涉及通过免疫疗法治疗膀胱癌的方法，并且涉及在需要此类治疗的受试者中监测该治疗的进展的方法
背景技术：
背景描述包括可用于理解本发明的信息。并不承认本文提供的任何信息是现有技术或与当前要求保护的发明相关，也不承认具体地或隐含地引用的任何出版物是现有技术。
膀胱癌是起源于膀胱细胞的癌症类型。超过90％的膀胱癌由产生于尿路上皮的移行细胞癌引起。该尿路上皮是膀胱内层壁膜的上皮层。发现于膀胱中的其他种类的癌症包括鳞状细胞癌、腺癌、肉瘤和小细胞癌。膀胱癌的诊断和治疗在很大程度上取决于癌症被发现时的阶段。如us9523689所概述，膀胱癌可以通过肿瘤-淋巴结-转移(tumor-node-metastases(tnm))分类(美国癌症联合委员会(americanjointcommitteeoncancer))进行分期。在该tnm系统中，膀胱癌肿瘤是根据特定的属性分类的。例如，不在肌肉中的浸润性肿瘤(如局限于上皮粘膜的乳头状肿瘤)被定义为ta肿瘤。在另一个实例中，浸润上皮下组织(即固有层)的肿瘤被定义为t1肿瘤。具有截然不同的形态和动态表型的肿瘤被认为是原位癌(tis)。基于由组织病理学检验揭示的浸润性外观的程度，将浸润性肿瘤(t2-4a和t2-4b)进一步分类。因此，t2肿瘤已经渗透到肌肉层。t3肿瘤已经渗透到膀胱周围的脂肪组织中，并且t4肿瘤已经生长到骨盆或腹壁。
膀胱镜是检测和诊断早期膀胱癌的最有效工具之一。根据samplaski和jones,2009(bjuint.[英国国际泌尿学杂志]103(2):154-8)，膀胱镜是经过至少两个世纪发展的产物。现代膀胱镜是一种内窥镜，具有硬管或软管，带灯和照相机，允许目视检查尿道和膀胱壁膜，并且任选地通过尿道进行手术干预或组织取样。尽管现在已经有了其他诊断和监测癌症的成像和检测技术，膀胱镜仍具有许多优点。例如，膀胱镜提供了膀胱壁膜的直接可视化，并允许经尿道活检取样或手术去除可见于或邻近尿路上皮的浅表肿瘤。
许多方法已经被用来协助可视化存在于膀胱中或在膀胱壁膜上的肿瘤组织。例如，如gil等人,1984,(“gil,”cancer[癌症],53:2124-2127)所述的，这些方法之一是用亚甲蓝对膀胱癌的表面进行选择性染色。
us5301688描述了染料的膀胱内电动施用，以提供癌性和正常尿路上皮的鉴别染色。该‘688专利运用了电梯度使染料(如亚甲蓝)主动转运到肿瘤细胞中。
us6083487描述了膀胱肿瘤的膀胱内染色：以亚甲蓝或甲苯胺蓝为光敏剂，随后以某波长(例如630nm或660nm)对膀胱壁进行激光照射，该波长适合于在与亚甲蓝或甲苯胺蓝染料结合的肿瘤组织中诱导荧光。
还有一种基于卟啉的商用系统，其被设计用于加强膀胱癌(特别是原位癌(cis))的检测。例如，参见us7850008.
治疗膀胱癌的方法包括经尿道膀胱肿瘤切除术(turbt)、抗癌化疗、放疗和免疫疗法。化疗包括扰乱细胞复制或细胞代谢，并且它仍然是癌症的主要治疗选择之一。化疗或与各种放疗结合的化疗可能是有效的，但可能有严重的副作用。由于毒副作用，许多接受这种化疗和/或放疗的受试者不能成功地完成全部的化疗方案。免疫疗法的进展提供了相对于旧方法的益处，并利用或激活免疫系统中对特定靶细胞展示出细胞毒活性的细胞。
免疫疗法的一种形式是利用自然杀伤(nk)细胞。nk细胞是细胞毒性淋巴细胞(其构成天然免疫系统的主要组分)。nk细胞通常占循环淋巴细胞的约10％-15％。nk细胞结合并杀死靶细胞(包括病毒感染的细胞和许多恶性细胞)，对抗原不是特异性的，并且没有既往免疫致敏。herberman等人,science[科学]214:24(1981)。nk杀伤靶细胞是通过诱导细胞裂解发生的。用于此目的的nk细胞是从受试者血液的外周血淋巴细胞(“pbl”)部分分离的，在细胞培养物中扩增以获得足够数量的细胞，并且然后重新输回受试者体内。nk细胞在体外治疗和体内治疗中都展示出一定的疗效。nk-92是溶癌细胞系，其发现于患有非霍奇金淋巴瘤的受试者的血液中，并且然后在体外永生化。nk-92细胞来源于nk细胞，但缺乏正常nk细胞展示的主要抑制性受体，同时保留了大部分活化受体。然而，nk-92细胞不会攻击正常细胞，也不会引起人类不可接受的免疫排斥反应。例如，wo1998049268、us20040052770和us20020068044披露了nk-92细胞系的特征。在某些癌症的治疗中，对作为治疗剂的nk-92细胞进行了评估，但在治疗的早期阶段，仍很难证实缩小肿瘤大小和质量的进展。
因此，在本领域中仍然长期需要用来验证或检验正在接受膀胱癌治疗的受试者个性化定制抗膀胱癌疗法的有效性的有成本效益的、有效率的和相对快速的方法。
技术实现要素：
因此，本发明提供了一种在被诊断患有膀胱癌的受试者中确认抗膀胱癌治疗的有效性的方法。在一个实施例中，该方法包括以下步骤：
(a)在能有效选择性地染色膀胱壁膜中的肿瘤组织的浓度下，向该受试者的膀胱注入一个体积的生理上可接受的肿瘤选择性染料或染色剂，该染料或染色剂在生理上可接受的溶液或载体中，
(b)通过用膀胱镜对该受试者进行膀胱镜检查程序来检测和测量由步骤(a)染色的任何膀胱肿瘤，其中该膀胱镜包括用于观察该受试者的膀胱内部的内窥镜和用于照亮该受试者的膀胱内部的系统，
(c)治疗该受试者的膀胱癌，
(d)根据需要，在步骤(c)之后重复步骤(a)和(b)，
(e)比较步骤(c)和(d)的连续测量值，以测量膀胱癌治疗过程的进展程度和有效性。用于照亮受试者膀胱内部的膀胱镜包括光源(例如白色光源、蓝色光源、激光光源和/或其组合)。例如，白光光源可以与激光照明器同时使用，以光敏化和可视化亚甲蓝和/或甲苯胺蓝染色的癌症组织。蓝色光源可用于光敏化和可视化选择性地摄取染料的肿瘤组织，该染料在肿瘤细胞内代谢为光敏化合物。
根据本发明，按照临床确定的用于治疗受试者的膀胱癌的方式重复步骤(c)，并且其中步骤(a)和(b)以技术人员确定的临床上合适的间隔重复，如每两天、每周、每两周、每月、每两个月和/或每六个月，直到受试者的膀胱癌缓解，或者直到需要改变治疗方案。
例如，该抗膀胱癌疗法包括：经尿道膀胱肿瘤切除术(turbt)、抗癌化疗、放疗和免疫疗法，分别、依次和/或以任何组合施用。优选地，该抗膀胱癌疗法包括免疫疗法。在某些实施例中，抗膀胱癌疗法可任选地通过膀胱内途径和/或通过全身途径施用。
当该抗膀胱癌疗法包括免疫疗法时，该免疫疗法是以下一种或多种模式：膀胱内卡介苗(bcg)疫苗疗法、系统性免疫检查点疗法和nk细胞疗法。
在特定的实施例中，当该免疫疗法是nk细胞疗法时，该nk细胞是同种异体的和自体的，或在体外被激活，并且任选地重新注入受试者(该细胞获得自该受试者)体内。当nk细胞对于该受试者而言是同种异体的和自体的时，
自体nk细胞通过以下获得：
(a)从该受试者的血液中分离nk细胞，
(b)在合适的细胞培养基中体外扩增分离的nk细胞，以及
(c)收集步骤(b)扩增的自体nk细胞。
例如，进一步的步骤包括，将收集的自体nk细胞输注回受试者体内。
在一个替代性实施例中，该nk细胞是经遗传修饰的nk-92细胞。例如，该经遗传修饰的nk细胞是经修饰的以在nk细胞表面表达至少一种标记物或抗原，其中该标记物提供nk细胞与受试者膀胱肿瘤的靶向结合。在进一步的实施例中，通过向受试者施用一种或多种nk活化细胞因子，自体nk细胞在体外被激活。
可以将以上描述的任何nk细胞通过输注到受试者的血流中和/或直接输注到待治疗的实体瘤或癌症中或其附近而施用到受试者。
在一个实施例中，肿瘤选择性染料或染色剂是当被肿瘤细胞选择性摄取时转化为光敏卟啉化合物的染料(如5-氨基酮戊酸己酯盐酸盐)。
在一个替代性实施例中，该肿瘤选择性染料或染色剂不包括任何肿瘤选择性染料或染色剂是当被肿瘤细胞选择性摄取时转化为光敏卟啉化合物的染料。
在进一步的实施例中，该超活性染料或染色剂选自下组，该组由以下组成：亚甲蓝(甲基硫堇氯化物(methylthioninechloride))、甲苯胺蓝(氯托洛宁(toloniumchloride))、伊文思蓝(evan’sblue)和/或龙胆紫。5-氨基酮戊酸己酯盐酸盐是另一种染料，其被食品药品管理局(fda)批准用于诊断特定类型的膀胱癌。
定义
为了理解本发明，定义了以下术语。除非另有说明，否则将使用下面列出的术语，并且这些术语将按照所述进行定义，除非另有说明。对其他术语的定义可以出现在整个说明书中。除非另有说明，所有单数的术语都包括术语的复数、主动时态和过去时态形式。
抗膀胱癌治疗的“有效量”是足以实现有益或期望结果的量，如抑制、减缓或逆转受试者膀胱肿瘤的生长。肿瘤选择性染料或染色剂的有效量是在足以选择性染色肿瘤细胞，不会在邻近的正常组织中产生假阳性染色的范围内的量或浓度。
短语“基本上由……组成”意指该组合物或方法可包括额外的成分和/或步骤，但仅当该额外的成分和/或步骤不会实质上改变所要求保护的组合物或方法的基本和新颖特征时，即额外的成分和/或步骤对所要求保护的组合物或方法没有任何作用。
如本领域所理解的，术语“肿瘤”和“癌症”是重叠的术语。“肿瘤”被广泛认为是有机体中发现的肿块或生长物。肿瘤细胞来源于这样的肿块。肿瘤可以是良性的，也可以是癌性的。癌性肿瘤或“癌”是一种组织生长物，该组织生长物可以不受控制地扩散并浸润其他组织，或者在血癌的情况下，压垮循环系统和/或在身体其他部位播种癌。癌细胞是来源于癌的细胞。出于本发明的目的，术语“肿瘤细胞”和“癌细胞”可互换使用，应理解为两者均指在肿瘤或癌中发现的或来源于肿瘤或癌并从肿瘤或癌中培养的哺乳动物细胞，并且其复制异常，没有分化的哺乳动物细胞所表现出的限制。
还应理解，为了方便起见，贯穿本申请使用单数形式如“一个/一种(a)”、“一个/一种(an)”和“该(the)”，然而，除上下文或明确的陈述指示另外的情况之外，单数形式旨在包括复数。另外，应理解，在此所提及的每一个期刊论文、专利、专利申请、公开等均通过引用以其全部内容并且出于所有的目的结合在此。
应理解，所有的数值范围均包括该数值范围内的各个和所有数值点，并且应理解为单独列举各个和所有数值点。针对相同组分或性质的所有范围的端点均是包含在内的，并且旨在是可独立地组合的。
如本文所用，术语“约”意指在报告数值的10％以内，优选在报告数值的5％以内。
根据本发明的“受试者”或“患者”是人类受试者，如患有肿瘤或癌的人类患者。在某些实施例中，本发明还可以在兽医实践中应用于任何受试者，即需要这种治疗的脊椎动物。例如，这可以包括哺乳动物，如非人灵长类动物、犬科动物、猫科动物、猪、马和/或需要本发明方法的任何其他哺乳动物。
根据以下附图的描述和本发明的详细描述，本发明主题的各种目标、特征、方面和优点将变得更清楚。
具体实施方式
因此，本发明提供了一种通过以下步骤测量被诊断患有膀胱癌的受试者中膀胱癌治疗过程的进展和有效性的方法：
(a)在能有效选择性地染色膀胱壁膜中的肿瘤组织的浓度下，向该受试者的膀胱注入一个体积的生理上可接受的肿瘤选择性染料或染色剂，该染料或染色剂在生理上可接受的溶液或载体中，
(b)通过用膀胱镜对该受试者进行膀胱镜检查程序来检测和测量由步骤(a)染色的任何膀胱肿瘤，其中该膀胱镜包括用于观察该受试者的膀胱内部的内窥镜和用于照亮该受试者的膀胱内部的系统，
(c)治疗该受试者的膀胱癌，
(d)在步骤(c)之后重复步骤(a)和(b)，
(e)比较步骤(c)和(d)的连续测量值，以测量该膀胱癌治疗过程的进展程度和有效性。
根据本发明，按照临床确定的用于治疗受试者的膀胱癌的方式重复步骤(c)，并且其中步骤(a)和(b)以技术人员确定的临床上合适的间隔重复，如每两天、每周、每两周、每月、每两个月和/或每六个月，直到受试者的膀胱癌缓解，或者直到需要改变治疗方案。
膀胱镜和膀胱镜检查是本领域熟知的，并且任何合适的本领域已知的膀胱镜检查仪器和技术都容易地适用于本发明的实践。根据本发明，柔性膀胱镜仅要求受试者接受局部麻醉，并且最适于重复测试。例如，合适的仪器可向奥林巴斯医疗公司(olympusmedical)、史赛克公司(stryker)、高级内窥镜设备公司(advancedendoscopydevices(aed))、德国狼牌公司(richardwolf)、富士能公司(fujinon)和其他公司购买。
例如，用于照亮受试者膀胱内部的系统是光源(如白光光源、蓝光光源、激光照明器和/或其组合)。光能通过合适的光导纤维传递到膀胱内部，或者直接从插入的小型化照明器(例如微型发光二极管光源)传递。此外，白光光源可以与激光照明器同时或替换使用，以光敏化和可视化用亚甲蓝和/或甲苯胺蓝或其他合适的染色剂或染料染色的癌症组织。蓝色光源可用于光敏化和可视化选择性地摄取染料的肿瘤组织，该染料是光敏化合物或在肿瘤细胞内代谢以形成光敏化合物。
例如，该抗膀胱癌疗法包括：经尿道膀胱肿瘤切除术(turbt)、抗癌化疗、放疗和免疫疗法，分别、依次或以任何组合施用。
该抗膀胱癌疗法包括：单独或与免疫疗法、放疗和/或手术去除癌性膀胱组织、或手术去除源自膀胱癌的肿瘤结合施用抗癌化疗剂。抗癌化疗剂可以是小分子药物或生物制剂(如单克隆抗体)。根据美国国立癌症研究所网页(www.cancer.gov)，美国食品药品管理局(usfda)批准的抗膀胱癌化疗剂包括但不限于：阿替唑单抗(atezolizumab)、
通常联合施用抗膀胱癌化疗剂，并且该联合包括，例如顺铂和吉西他滨的联合治疗疗程、卡铂(伯尔定)和吉西他滨的联合治疗疗程和mvac治疗疗程。mvac是用四种药物(甲氨蝶呤、长春碱、多柔比星
在一个特定的实施例中，该抗膀胱癌疗法是免疫疗法。免疫疗法可以包括膀胱内卡介苗(bcg)疫苗疗法。如us8101173所述，免疫疗法还可包括输注扩增的肿瘤反应性cd4辅助细胞和/或cd8 t淋巴细胞，其可从一个或多个引流膀胱内肿瘤或转移的膀胱内肿瘤的前哨或前哨淋巴结获得。根据本发明的其他免疫疗法包括系统性免疫检查点疗法(例如，施用纳武单抗240mgivq2wk输注60min以上直到疾病进展或不可接受的毒性，德瓦鲁单抗10mg/kgivq2wk输注60min以上直到疾病进展或不可接受的毒性，阿维鲁单抗10mg/kg输注60min以上，直至疾病进展或不可接受的毒性[17])和自然杀伤(nk)细胞疗法。
在某些具体实施例中，该免疫疗法是通过施用治疗性nk细胞。根据临床要求，该nk细胞是同种异体的和自体的，或在体外被激活并重新注入受试者体内。当nk细胞对于该受试者而言是同种异体的和自体的时，自体nk细胞通过以下获得：
(a)从该受试者的血液中分离nk细胞，
(b)在合适的细胞培养基中体外扩增分离的nk细胞，以及
(c)收集由步骤(b)扩增的自体nk细胞，并且根据需要将这些收集的自体nk细胞输注回受试者体内。
例如，参见torelli等人,1015,bloodtransfus[输血]13；464-71doi10.2450/2015.0231-14，描述了两步免疫磁性程序，该两步免疫磁性程序包括cd3 t细胞耗竭，随后cd56 细胞阳性选择以获得nk细胞。
在进一步的实施例中，通过向受试者施用一种或多种nk活化细胞因子(如il-15)，自体nk细胞在体外被激活。仍然在进一步的实施例中，该nk细胞是经遗传修饰的nk-92细胞，其包括例如经修饰以在nk细胞表面表达至少一种标记物或抗原的nk细胞，其中该标记物提供nk-92细胞与受试者膀胱肿瘤细胞的靶向结合，和/或允许在体内可视化或监测nk细胞。
在更具体的实施例中，经基因工程化的同种异体nk细胞是nk-92衍生物(即，经基因修饰的nk-92细胞)，其降低或消除了至少一种杀伤细胞免疫球蛋白样受体(kir)的表达，这将使这些细胞被组成性激活(经由缺乏抑制或降低抑制)。例如，这些由wo2017100709描述。因此，合适的经修饰的nk细胞可以具有一种或多种经修饰的杀伤细胞免疫球蛋白样受体，其经突变以减少或消除与mhci类分子的相互作用。当然，应当注意，还可以使一个或多个kir缺失或抑制其表达(例如，经由mirna、sirna等)。最典型地，多于一个kir将被突变、缺失或沉默，并且特别预期的kir包括具有两个或三个结构域、具有短或长的胞质尾区的那些。从不同的角度来看，经修饰的、沉默的或缺失的kir将包括kir2dl1、kir2dl2、kir2dl3、kir2dl4、kir2dl5a、kir2dl5b、kir2ds1、kir2ds2、kir2ds3、kir2ds4、kir2ds5、kir3dl1、kir3dl2、kir3dl3、和/或kir3ds1。此类经修饰的nk-92细胞可以例如使用本领域熟知的沉默方案、cirspr-cas基因组编辑、或者敲除或敲低方案来制备。可替代地，此类经修饰的nk-92细胞还可以作为ank细胞(‘活化的自然杀伤细胞)从南圭斯特公司(nantkwest)(参见该nantkwest.com网站)商购获得。然后可以进一步修饰此类细胞以表达针对宿主生物的nk细胞的一种或多种抑制性受体的一种或多种配体。
尽管nk-92细胞保留了几乎所有与nk细胞相关的活化受体和细胞溶解途径，但它们并不在其细胞表面表达cdi6。cd16是fc受体，该fc受体识别并结合抗体的fc部分，以激活nk细胞的抗体依赖性细胞毒性(adcc)。由于缺乏cd16受体，nk-92细胞无法通过adcc机制裂解靶细胞。因此，在本发明的另一方面中，经基因工程化的nk细胞还可以是经修饰以表达如wo2016160602所述的高亲和力fcγ受体(例如cd16、v158)的nk-92衍生物。fcγ受体的高亲和力变体的序列是本领域中熟知的，并且认为所有产生和表达的方法均适用于本文。在无意受关于这些受体的操作的任何理论或假设束缚的情况下，据信此类受体的表达允许使用对患者的肿瘤细胞(例如，新表位)、具体的肿瘤类型(例如，her2neu、psa、psma等)特异性的抗体，或与癌症相关联的抗体(例如，cea-cam)特异性靶向肿瘤细胞。
有利地，此类抗新表位抗体是可商购的并且可以与nk-92衍生的细胞连同使用(例如，与fcγ受体结合)。可替代地，此类细胞还可以作为hank细胞(‘高亲和力自然杀伤细胞)从南圭斯特(nantkwest)公司商购获得。然后可以进一步修饰此类细胞以表达针对宿主生物的nk细胞的一种或多种抑制性受体的一种或多种配体。
如wo2016160621所述，在本发明的另外的方面中，该经基因工程化的nk细胞还可基因工程化以表达嵌合抗原受体(car)。在尤其优选的方面，嵌合抗原受体将具有scfv部分或其他针对肿瘤相关抗原、肿瘤特异性抗原和癌症新表位具有结合特异性的胞外结构域。如前所述，存在许多本领域已知的基因工程化nk细胞表达这种嵌合t细胞受体的方法，并且认为所有此类本领域已知的方法均适用于本文。可替代地，此类细胞还可以作为tank细胞(‘靶标-活化的自然杀伤细胞’)从南圭斯特(nantkwest)公司商购获得。然后可以进一步修饰此类细胞以表达针对宿主生物的nk细胞的一种或多种抑制性受体的一种或多种配体。
在将nk细胞工程化以具有对癌症相关抗原或对癌症相关抗原具有特异性的抗体的亲和力的情况下，预期所有已知的癌症相关抗原被认为适合使用。例如，癌症相关抗原包括cea、muc-1、cypb1等。同样地，在将细胞工程化以具有对癌症特异性抗原的亲和力或具有对针对癌症特异性抗原具有特异性的抗体的情况下，预期所有已知的癌症特异性抗原被认为适合使用。例如，癌症特异性抗原包括psa、her-2、psa、短尾类突变型(brachyury)等。在将细胞工程化以具有对癌症新表位的亲和力或具有针对癌症新表位具有特异性的抗体情况下，预期所有已知的鉴定新表位的方法将产生适合的靶标。例如，可以通过肿瘤活组织检查(或淋巴活组织检查或转移部位的活组织检查)和匹配的正常组织(即，来自同一患者的非患病组织)的全基因组分析，经由同步比较如此获得的组学信息，在第一步中从患者肿瘤中鉴定新表位。然后可以进一步过滤所鉴定的新表位用于匹配患者的hla类型，以增加新表位抗原呈递的可能性。最优选地，这种匹配可以经由电脑模拟完成。
在本发明的进一步设想的方面中，还可以从细胞库或细胞培养物中获得同种异体nk细胞，其中该同种异体nk细胞优选(但不一定)hla匹配到至少两个，并且更典型地至少四个数字的深度。例如，如在wo2017070337或us20140186319中所述，在此类细胞不能获得或在其他方面不需要的情况下，预期同种异体nk细胞也可以从多种前体细胞中生长。
抗膀胱癌化疗和/或免疫疗法的施用途径、剂量和频率以技术人员按照适合受试者的治疗模式和临床状况选择，并且，如果合适，化疗或免疫疗法可由本领域已知的其他本领域已知的施用途径传递。可用的施用途径包括：皮下注射、肌肉注射、静脉注射、动脉内注射、口服施用、膀胱内施用或输注、通过适当的经尿道器械直接注射到膀胱肿瘤组织中以及其他肠外施用途径。
染料和染色剂
该染料或染色剂溶解在生理上可接受的溶液或载体中。这通常是等渗盐水(含0.9％的盐)水溶液和/或无毒的等渗缓冲溶液(如磷酸盐缓冲液或其他生理上可接受的缓冲系统)，其中ph控制是优化选择性组织染色所必需的。
通常，该染料或染色剂是选自亚甲蓝(甲基硫堇氯化物)、甲苯胺蓝(氯托洛宁)、伊文思蓝、5-氨基酮戊酸己酯盐酸盐和/或龙胆紫的超活染料。优选地，超活性染料为亚甲蓝。在某些实施例中，该染料是设计用于增强对比度的混合物。例如，如riaz等人，在(springerplus[斯普林格加]2013,2:95)中所述的关于胃肠道肿瘤的选择性染色的亚甲蓝、孔雀石和曙红的混合物。
例如，为了膀胱肿瘤的直接膀胱镜可视化，将亚甲蓝(生理盐水中亚甲蓝的浓度为约0.5％至约1.8％，但通常使用1％的亚甲蓝)通过福利导管注入受试者的膀胱中。如gil所述，约五分钟后，排出亚甲蓝溶液，用生理盐水清洗膀胱至少三次。可替代地，用1％的乳酸溶液清洗该膀胱(按照前文riaz等人使用的)以改善口腔癌非特异性染色的去除。然后使用标准膀胱镜观察膀胱内壁的蓝色染色组织，该蓝色染色组织突出了膀胱表面或内部的可见的肿瘤。
为了光敏化亚甲蓝的膀胱镜可视化，该亚甲蓝以约0.0075％至约0.02％浓度的生理上可接受的溶液施用于膀胱壁或膀胱肿瘤附近，并且用约660nm的光能照射染色的组织。为了光敏甲苯胺蓝可视化，该亚甲蓝以约0.0075％至约0.02％浓度的生理上可接受的溶液施用于膀胱壁或膀胱肿瘤附近，并且用约660nm的光能照射染色的组织。优选地由合适的激光照明器传递光能，例如经由光学纤维系统或直接从插入膀胱中的激光仪器传导到膀胱中。
在不同的实施例中，根据本发明也可以使用基于卟啉的系统，例如5-氨基酮戊酸己酯盐酸盐。肿瘤细胞选择性摄取5-氨基酮戊酸己酯盐酸盐，并将5-氨基酮戊酸己酯盐酸盐转化成几种光活化卟啉化合物。可替代地，5-氨基酮戊酸己酯盐酸盐和/或用卟啉化合物选择性染色肿瘤细胞的其他染料被明确排除在实践本发明之外。
当受试者被诊断患有膀胱肿瘤时，通过适当的染色剂或染料使膀胱壁可视化，并测量和记录染色的面积、强度和解剖分布。测量方法包括由技术人员对肿瘤进行视觉分级，对来自染色组织的荧光进行光度测量(即荧光强度)和/或通过记录受试者治疗前膀胱壁的摄影记录来跟踪抗膀胱癌疗法的进展，以与受试者膀胱壁随后的治疗后染色的摄影记录进行比较。
一旦开始临床上合适的抗膀胱癌治疗，受试者被周期性地重新测试以测量所选择的抗膀胱癌疗法的进展和结果。测试的频率由技术人员基于受试者的临床状态来确定，并且持续进行，直到达到治疗的最大益处。根据技术人员的判断，测试可以每两天、每周、每两周、每月、每两个月和/或每六个月进行一次，直到达到膀胱抗肿瘤治疗的目标，或者直到需要改变治疗方案。
通过引用并入
本文中所引用的所有出版物、专利和专利申请都通过引用并入，其程度如同每个单独的出版物、专利或专利申请被具体地且单独地通过引用并入一样。在所结合的出版物、专利或专利申请中的一个术语的一项定义或应用与在此提供的术语的定义不一致或相反的情况下，应用在此提供的术语的定义，并且不使用该参考文献中的术语的定义。
1.一种在被诊断患有膀胱癌的受试者中测量膀胱癌治疗过程的进展和有效性的方法，该方法包括
(a)在能有效选择性地染色膀胱壁膜中的肿瘤组织的浓度下，向该受试者的膀胱注入一个体积的生理上可接受的肿瘤选择性染料或染色剂，该染料或染色剂在生理上可接受的溶液或载体中，
(b)通过用膀胱镜对该受试者进行膀胱镜检查程序来检测和测量由步骤(a)染色的任何膀胱肿瘤，其中该膀胱镜包括用于观察该受试者的膀胱内部的内窥镜和用于照亮该受试者的膀胱内部的系统，
(c)治疗该受试者的膀胱癌，
(d)在步骤(c)之后重复步骤(a)和(b)，
(e)比较步骤(c)和(d)的连续测量值，以测量该膀胱癌治疗过程的进展程度和有效性。
2.如权利要求1所述的方法，其中该抗膀胱癌疗法选自下组，该组由以下组成：经尿道膀胱肿瘤切除术(turbt)、抗癌化疗、放疗和免疫疗法。
3.如权利要求2所述的方法，其中该抗膀胱癌疗法选自下组，该组由以下组成：抗癌化疗、放疗和免疫疗法。
4.如权利要求3所述的方法，其中该抗膀胱癌疗法是抗癌化疗和/或免疫疗法。
5.如权利要求1所述的方法，其中按照临床确定用于治疗该受试者的膀胱癌的方式重复步骤(c)，并且其中步骤(a)和(b)以选自下组的间隔重复，该组由以下组成：每两天、每周、每两周、每月、每两个月和每六个月，直到该受试者的膀胱癌缓解，或者直到需要改变治疗方案。
6.如权利要求4所述的方法，其中该抗膀胱癌疗法通过膀胱内途径或通过全身途径施用。
7.如权利要求4所述的方法，其中该抗膀胱癌疗法是免疫疗法。
8.如权利要求7所述的方法，其中该免疫疗法选自下组，该组由以下组成：膀胱内卡介苗(bcg)疫苗疗法、系统性免疫检查点疗法和自然杀伤(nk)细胞疗法。
9.如权利要求8所述的方法，其中该nk细胞是同种异体的和自体的，或在体外被激活并重新注入该受试者体内。
10.如权利要求8所述的方法，其中该nk细胞对于该受试者而言是同种异体的和自体的，
其中自体nk细胞通过以下获得：
(a)从该受试者的血液中分离nk细胞，
(b)在合适的细胞培养基中体外扩增分离的nk细胞，以及
(c)收集步骤(b)扩增的自体nk细胞。
11.如权利要求10所述的方法，该方法进一步包括将收集的自体nk细胞输注回该受试者体内的步骤。
12.如权利要求8所述的方法，其中该nk细胞是经遗传修饰的nk-92细胞。
13.如权利要求8所述的方法，其中该nk细胞是经修饰的以在该nk细胞的表面表达至少一种标记物或抗原，其中该标记物提供该nk细胞与该受试者的膀胱肿瘤的靶向结合。
14.如权利要求8所述的方法，其中该nk细胞是通过输注到该受试者的血流中施用的。
15.如权利要求8所述的方法，其中自体nk细胞是通过向该受试者施用一种或多种nk活化细胞因子在体外体外被激活的。
16.如权利要求1所述的方法，其中该肿瘤选择性染料或染色剂选自下组，该组由以下组成：亚甲蓝(甲基硫堇氯化物)、甲苯胺蓝(氯托洛宁)、伊文思蓝和/或龙胆紫。
17.如权利要求16所述的方法，其中该超活性染料是亚甲蓝。
18.如权利要求1所述的方法，其中该肿瘤选择性染料或染色剂当被肿瘤细胞摄取时转化为光敏卟啉化合物。
19.如权利要求18所述的方法，其中该肿瘤选择性染料或染色剂是5-氨基酮戊酸己酯盐酸盐。
20.如权利要求1所述的方法，其中用于照亮该受试者的膀胱内部的系统包括选自下组的光源，该组由以下组成：白光光源、蓝光光源、激光照明器及其组合。
技术总结