本发明涉及病理检测领域，具体涉及一种利于免疫组化显色的骨髓脱钙液及其使用方法。
背景技术：
骨髓活检是病理检查重要的组成部分之一，其诊断报告是血液科等临床科室疾病诊疗的重要依据。骨组织在骨髓活检组织中非常的常见，由于骨组织质地坚硬，如不能有效去除其中的钙质，病理技术室很难制作出优质切片或直接无法制作切片，故组织标本脱钙处理，亦即是组织标本的软化处理即成为此类切片制作的关键。如何在较短时间内进行标本固定、脱钙处理，同时制成的切片又能与常规处理的不含骨组织切片一样，不影响切片的染色，还能保证组织抗原不丢失，免疫组化染色效果好，从而有助于病理医师对病变组织的镜下诊断，一直是本领域的重大难题。目前，常用的硝酸类脱钙液在对活检组织进行脱钙处理时，存在以下几个问题：1、脱钙的时间长，降低了检测的效率；2、脱钙效果差，制得切片的成功率较低；3、脱钙液造成抗原丢失，影响检测的准确性。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种利于免疫组化显色的骨髓脱钙液，脱钙速度快、脱钙效果好，且保持了活检组织的完整性。
为实现上述发明目的，本发明所采用的技术方案是：一种利于免疫组化显色的骨髓脱钙液，包括体积比为0.8～1.2:1.2～0.8的甲溶液和乙溶液；
所述甲溶液由甲酸与体积百分比浓度为8％～12％的中性甲醛溶液混合构成，所述甲酸与中性甲醛溶液的体积比为6～8:16～14；
所述乙溶液由盐酸与体积百分比浓度为8％～12％的中性甲醛混合构成，所述盐酸与中性甲醛溶液的体积比为6～8:16～14。
优选的，所述甲溶液中甲酸与中性甲醛溶液的体积比为7:15。
优选的，所述乙溶液中盐酸与中性甲醛溶液的体积比为7:15。
优选的，所述脱钙液还包括渗透剂，所述渗透剂：甲溶液和乙溶液的混合液的体积比为1～2:100。
优选的，所述脱钙液还包括渗透剂，所述渗透剂：甲溶液和乙溶液的混合液的体积比为1.5:100。
优选的，所述渗透剂为15％体积百分比的氮酮-甲醛溶液。
优选的，所述脱钙液的使用方法如下：
a、将骨髓穿刺标本放入洁净的玻璃西林瓶内，然后向西林瓶内加入固定液固定处理240±30min，固定液加入量以完全淹没标本为准；
b、固定完成后将固定液倒出，然后加入脱钙液脱钙处理120±60min，脱钙液的加入量以完全淹没标本为准；
c、脱钙完成后将标本取出，用蒸馏水冲洗3-5遍。
优选的，所述固定液为8～12％体积百分比的中性甲醛溶液。
本发明的有益效果集中体现在：
1、脱钙速度快，与传统硝酸类脱钙液相比，脱钙时间缩短一半以上。
2、脱钙效果好，便于制片，经本脱钙液处理的标本切片完整率达到95％以上。
3、利于后期染色的正常进行，染色清晰率达到97％以上。
4、能够有效的防止脱钙的过程中出现抗原丢失的情况，免疫组化染色阳性部位定位精准，表达良好。
具体实施方式
以下将结合实施例对本发明进行完整的阐述。
实施例1
一种利于免疫组化显色的骨髓脱钙液，包括体积比为0.8:1.2的甲溶液和乙溶液；所述甲溶液由甲酸与10％体积百分比浓度的中性甲醛溶液混合构成，所述甲酸与中性甲醛溶液的体积比为6:16；所述乙溶液由盐酸与8％体积百分比浓度的中性甲醛混合构成，所述盐酸与中性甲醛溶液的体积比为6:16。
实施例2
一种利于免疫组化显色的骨髓脱钙液，包括体积比为1.2:0.8的甲溶液和乙溶液；所述甲溶液由甲酸与8％体积百分比浓度的中性甲醛溶液混合构成，所述甲酸与中性甲醛溶液的体积比为8:14；所述乙溶液由盐酸与10％体积百分比浓度的中性甲醛混合构成，所述盐酸与中性甲醛溶液的体积比为8:14。
实施例3
一种利于免疫组化显色的骨髓脱钙液，包括体积比为1:1的甲溶液和乙溶液；所述甲溶液由甲酸与12％体积百分比浓度的中性甲醛溶液混合构成，所述甲酸与中性甲醛溶液的体积比为8:14；所述乙溶液由盐酸与12％体积百分比浓度的中性甲醛混合构成，所述盐酸与中性甲醛溶液的体积比为8:14。
实施例4
一种利于免疫组化显色的骨髓脱钙液，包括体积比为1:1的甲溶液和乙溶液；所述甲溶液由甲酸与10％体积百分比浓度的中性甲醛溶液混合构成，所述甲酸与中性甲醛溶液的体积比为6:16；所述乙溶液由盐酸与10％体积百分比浓度的中性甲醛混合构成，所述盐酸与中性甲醛溶液的体积比为6:16。
实施例5
一种利于免疫组化显色的骨髓脱钙液，包括体积比为1:1的甲溶液和乙溶液；所述甲溶液由甲酸与10％体积百分比浓度的中性甲醛溶液混合构成，所述甲酸与中性甲醛溶液的体积比为7:15；所述乙溶液由盐酸与10％体积百分比浓度的中性甲醛混合构成，所述盐酸与中性甲醛溶液的体积比为7:15。
实施例6
一种利于免疫组化显色的骨髓脱钙液，包括体积比为1:1的甲溶液和乙溶液；所述甲溶液由甲酸与10％体积百分比浓度的中性甲醛溶液混合构成，所述甲酸与中性甲醛溶液的体积比为7:15；所述乙溶液由盐酸与10％体积百分比浓度的中性甲醛混合构成，所述盐酸与中性甲醛溶液的体积比为7:15。还包括渗透剂，所述渗透剂为15％体积百分比的氮酮-甲醛溶液(将氮酮溶解在甲醛中)。所述渗透剂：甲溶液和乙溶液的混合液的体积比为2:100。
实施例7
一种利于免疫组化显色的骨髓脱钙液，包括体积比为1:1的甲溶液和乙溶液；所述甲溶液由甲酸与10％体积百分比浓度的中性甲醛溶液混合构成，所述甲酸与中性甲醛溶液的体积比为7:15；所述乙溶液由盐酸与10％体积百分比浓度的中性甲醛混合构成，所述盐酸与中性甲醛溶液的体积比为7:15。还包括渗透剂，所述渗透剂为15％体积百分比的氮酮-甲醛溶液(将氮酮溶解在甲醛中)。所述渗透剂：甲溶液和乙溶液的混合液的体积比为1.5:100。
实施例8
一种利于免疫组化显色的骨髓脱钙液，包括体积比为1:1的甲溶液和乙溶液；所述甲溶液由甲酸与10％体积百分比浓度的中性甲醛溶液混合构成，所述甲酸与中性甲醛溶液的体积比为7:15；所述乙溶液由盐酸与10％体积百分比浓度的中性甲醛混合构成，所述盐酸与中性甲醛溶液的体积比为7:15。还包括渗透剂，所述渗透剂为15％体积百分比的氮酮-甲醛溶液(将氮酮溶解在甲醛中)。所述渗透剂：甲溶液和乙溶液的混合液的体积比为1:100。
实施例9
标本选择：
选择骨髓穿刺标本(长1cm，直径0.3-0.5cm)共815例，分为9组，1组90例、2组90例、3组90例、4组91例、5组91例、6组91例、7组91例、8组91例、9组90例；1-8组为实验组，9组为对照组。
脱钙处理：
a、将骨髓穿刺标本放入10ml洁净的玻璃西林瓶内，然后向西林瓶内加入固定液固定处理240±30min，所述固定液为8～12％体积百分比的中性甲醛溶液(甲醛溶解在蒸馏水中)，其中以10％浓度的中性甲醛溶液为佳，固定液加入量以完全淹没标本为准；
b、固定完成后将固定液倒出，加入脱钙液在室温下进行脱钙处理；脱钙完成时间以大头针刺入组织无阻力感为准。
实验组：分别向1-8组中加入实施例1-7所述的脱钙液进行脱钙处理，脱钙液的加入量以完全淹没标本为准；
对照组：加入5％体积百分比的硝酸水溶液脱钙处理，脱钙液的加入量以完全淹没标本为准；
c、脱钙完成后将标本取出，用蒸馏水冲洗3-5遍。
切片
将标本进行常规脱水、石蜡包埋、连续切片3张，厚μm。切片质量评价标准：切片外观完整，厚薄均匀，镜下组织结构完整，无刀痕，可判定为质量良好；达不到以上标准则视为质量欠佳。切片完整率＝切片质量良好的切片数量/切片总数
染色
将切片进行he染色，he染色效果判断标准为细胞核质清晰，细胞浆颜色鲜亮，对比明显，可判定为效果良好，达不到以上标准则视为效果欠佳。he染色清晰率＝染色良好的切片数量/切片总数。
疑似肿瘤病例加做免疫组织化学染色(mpo、cd3、cd20等)，免疫组织化学染色采用迈新maxvisiontm试剂盒，枸橼酸或edta修复，dab显色，苏木精复染细胞核，中性树胶封固，光镜观察。所有染色均用已知阳性片做阳性对照，pbs代替一抗做阴性对照。免疫组化标记评价标准为阳性部位定位准确，表达良好，呈棕褐色，与阳性对照表达一致，可判定为良好；阳性部位定位不准确，部分抗原丢失，判定为欠佳。免疫组化标记良好率＝免疫组化标记良好的切片数量/切片总数。
镜下观察
完成上述步骤后，将所有切片在光镜下观察。由4位病理医师共同对实验组1-8及对照组9使用的脱钙液进行满意度评价，满意度效果由4位病理医师一致满意为满意，1位或以上病理医师不满意则为不满意。
表1为实施例9中各数据的汇总表
根据上表，能够直观的看出，本发明所述的脱钙液，从脱钙时间上相较传统的硝酸类脱钙液具有巨大的缩短，几近缩短了一般的脱钙用时，尤其是在加入渗透剂后，脱钙速度更是得到大幅的提升。制片的总体效果优良，he染色和免疫组化标记情况表现良好稳定，获得了病理医师的广泛认可。
1.一种利于免疫组化显色的骨髓脱钙液，其特征在于：包括体积比为0.8～1.2:1.2～0.8的甲溶液和乙溶液；
所述甲溶液由甲酸与体积百分比浓度为8％～12％的中性甲醛溶液混合构成，所述甲酸与中性甲醛溶液的体积比为6～8:16～14；
所述乙溶液由盐酸与体积百分比浓度为8％～12％的中性甲醛混合构成，所述盐酸与中性甲醛溶液的体积比为6～8:16～14。
2.根据权利要求1所述的利于免疫组化显色的骨髓脱钙液，其特征在于：所述甲溶液中甲酸与中性甲醛溶液的体积比为7:15。
3.根据权利要求1或2所述的利于免疫组化显色的骨髓脱钙液，其特征在于：所述乙溶液中盐酸与中性甲醛溶液的体积比为7:15。
4.根据权利要求1所述的利于免疫组化显色的骨髓脱钙液，其特征在于：所述脱钙液还包括渗透剂，所述渗透剂：甲溶液和乙溶液的混合液的体积比为1～2:100。
5.根据权利要求1或4所述的利于免疫组化显色的骨髓脱钙液，其特征在于：所述脱钙液还包括渗透剂，所述渗透剂：甲溶液和乙溶液的混合液的体积比为1.5:100。
6.根据权利要求5所述的利于免疫组化显色的骨髓脱钙液，其特征在于：所述渗透剂为15％体积百分比的氮酮-甲醛溶液。
7.如权利要求1～6中任意一项所述的利于免疫组化显色的骨髓脱钙液的使用方法，其特征在于，包括以下步骤：
a、将骨髓穿刺标本放入洁净的玻璃西林瓶内，然后向西林瓶内加入固定液固定处理240min±30min，固定液加入量以完全淹没标本为准；
b、固定完成后将固定液倒出，然后加入脱钙液脱钙处理120±60min，脱钙液的加入量以完全淹没标本为准；
c、脱钙完成后将标本取出，用蒸馏水冲洗3-5遍。
8.根据权利要求7所述的利于免疫组化显色的骨髓脱钙液的使用方法，其特征在于：所述固定液为8～12％体积百分比的中性甲醛溶液。
技术总结