本发明涉及检测相关
技术领域：
，尤其涉及一种高效检测饲料预混料中脂溶性维生素的方法。
背景技术：
：预混料(premix)全称预混合饲料，是由多种添加剂原料与载体或稀释剂搅拌均匀的混合物，常见的预混料有维生素添加剂，目的是有利于微量的原料均匀分散于大量的配合饲料中。在正常的贮存和使用条件下，预混料中微量元素、维生素等组分的物理和化学性质稳定，但当水分含量高时活温度较高时，其稳定性差，损失率大，所以在日常的储存中需要定期对预混料中的各类营养素进行成分分析以监控其稳定性。预混料中的脂溶性维生素如维生素a，d3，e的热、光稳定性均较差，gb/t17817第二法，gb/t17812第二法，gb/t17818第二法gb/t18872分别对预混料中维生素a，e，d和k3进行了提取处理和仪器分析，方法中使用的甲醇毒性较大，维生素d3采用的外标法误差较大。现有技术中，gb/t17817饲料中维生素a的测定高效液相色谱法；gb/t17812饲料中维生素e的测定高效液相色谱法；gb/t17818饲料中维生素d3的测定高效液相色谱法；gb/t18872饲料中维生素k3的测定高效液相色谱法。现有技术中，预混料维生素a，e，d3的测定原理是使用甲醇溶液提取，注入c18反相色谱柱进行分离，分别于326nm，285nm和264nm波长下，外标法与标准溶液进行对比和定量。预混料维生素k3的的测定原理是使用三氯甲烷和碳酸钠提取，并转换成游离甲萘醌，注入c18反相色谱柱进行分离，于251nm波长下，外标法与标准溶液进行对比和定量。现有技术的缺点如下所述：1、现有技术中需要进行2次前处理和2次上机提取步骤，维生素k3的提取步骤复杂，费时；2、现有技术中使用的提取试剂甲醇和三氯甲烷均具有毒性，并且三氯甲烷属于易制毒，购买流程复杂；3、维生素d3的稳定性差，甲醇提取液挥发性很强，现有技术使用的外标定量法不够准确。有鉴于上述的缺陷，本设计人积极加以研究创新，以期创设一种高效检测饲料预混料中脂溶性维生素的方法，使其更具有产业上的利用价值。技术实现要素：为解决上述技术问题，本发明的目的是提供一种高效检测饲料预混料中脂溶性维生素的方法，本方法是一种全新的对预混料中维生素a，e，d3和k3进行快速准确分析的方法，可以通过一次前处理方式和一次上机跑样，快速准确的同时分析预混料中四种维生素的含量。为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：一种高效检测饲料预混料中脂溶性维生素的方法，包括以下步骤：前处理步骤：称取2g预混料于100ml容量瓶中，记录下样品质量，加入15mldmso二甲基亚砜后漩涡震荡，加入0.6g/100ml的维生素d20.5ml,并于500c超声提取30分钟，再用无水乙醇定容至刻度；上机跑样步骤：经过前处理步骤后的溶液经0.45um滤膜过滤后上机测试；其中，上机跑样的上机条件和仪器设置：色谱柱：luna色谱柱，250mmx4.6mmx5um；流速：1.0ml/min；柱温：室温；流动相：a：水，b：甲醇100％，c：三氯甲烷100％；进样体积：50ul；波长：280nm。作为本发明的进一步改进，上机跑样步骤中的梯度洗脱条件：初始：流动相a：10％，流动相b：90％，流动相c：0％；15min：流动相a：10％，流动相b：90％，流动相c：0％；20min：流动相a：0％，流动相b：100％，流动相c：0％；30min：流动相a：0％，流动相b：100％，流动相c：0％；35min：流动相a：0％，流动相b：80％，流动相c：20％；40min：流动相a：0％，流动相b：80％，流动相c：20％；45min：流动相a：0％，流动相b：100％，流动相c：0％；50min：流动相a：0％，流动相b：100％，流动相c：0％；55min：流动相a：10％，流动相b：90％，流动相c：0％。借由上述方案，本发明至少具有以下优点：1、本发明通过整合和优化方法差异，将预混料中维生素a，d3，e，k3的测试统一，可以同时快速有效的测定出4种维生素，5种形式，通过一次前处理和一次上机能够将4种脂溶性维生素全部检测出；2、本发明提取溶液由甲醇更换为乙醇，安全无毒；3、本发明将样品前处理的时间缩短，提高工作效率；4、本发明对维生素d3内标定量，提高准确度；5、本发明可对两个常见的维生素a醋酸酯和维生素a棕榈酸酯同时检出并分离。上述说明仅是本发明技术方案的概述，为了能够更清楚了解本发明的技术手段，并可依照说明书的内容予以实施，以下以本发明的较佳实施例并配合附图详细说明如后。附图说明为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。图1是本发明一种高效检测饲料预混料中脂溶性维生素的方法的上机跑样步骤中的色谱图。具体实施方式下面结合附图和实施例，对本发明的具体实施方式作进一步详细描述。以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。为了使本
技术领域：
的人员更好地理解本发明方案，下面将结合本发明实施例中附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。通常在此处附图中描述和示出的本发明实施例的组件可以以各种不同的配置来布置和设计。因此，以下对在附图中提供的本发明的实施例的详细描述并非旨在限制要求保护的本发明的范围，而是仅仅表示本发明的选定实施例。基于本发明的实施例，本领域技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。实施例一种高效检测饲料预混料中脂溶性维生素的方法，包括以下步骤：前处理步骤：称取2g预混料于100ml容量瓶中，记录下样品质量，加入15mldmso二甲基亚砜后漩涡震荡，加入0.6g/100ml的维生素d20.5ml,并于500c超声提取30分钟，再用无水乙醇定容至刻度；上机跑样步骤：经过前处理步骤后的溶液经0.45um滤膜过滤后上机测试；其中，上机跑样的上机条件和仪器设置：色谱柱：luna色谱柱，250mmx4.6mmx5um；流速：1.0ml/min；柱温：室温；流动相：a：水，b：甲醇100％，c：三氯甲烷100％；进样体积：50ul；波长：280nm。优选的，上机跑样步骤中的梯度洗脱条件：初始：流动相a：10％，流动相b：90％，流动相c：0％；15min：流动相a：10％，流动相b：90％，流动相c：0％；20min：流动相a：0％，流动相b：100％，流动相c：0％；30min：流动相a：0％，流动相b：100％，流动相c：0％；35min：流动相a：0％，流动相b：80％，流动相c：20％；40min：流动相a：0％，流动相b：80％，流动相c：20％；45min：流动相a：0％，流动相b：100％，流动相c：0％；50min：流动相a：0％，流动相b：100％，流动相c：0％；55min：流动相a：10％，流动相b：90％，流动相c：0％。其中，本发明一种高效检测饲料预混料中脂溶性维生素的方法的上机跑样步骤中的色谱图如图1所示。本发明实施例一：前处理步骤：称取约2g预混料于100ml容量瓶中，记录下样品质量。加入约15mldmso二甲基亚砜后漩涡震荡，加入0.5ml维生素d2(0.6g/100ml),500c超声提取30分钟。再用无水乙醇定容至刻度，溶液经0.45um滤膜过滤后上机测试。上机条件和仪器设置：1、色谱柱：luna(250mmx4.6mmx5um)；2、流速：1.0ml/min；3、柱温：室温；4、流动相：a：水；b：甲醇100％；c：三氯甲烷100％。5、梯度淋洗程序：时间a％b％c％010900151090020010003001000350802040080204501000500100055109006、进样体积：50ul；7、波长：280nm。本发明一种高效检测饲料预混料中脂溶性维生素的方法，通过一次前处理的方式取代了现有技术中分次前处理的方式，通过一次前处理和一次上机能够将4种脂溶性维生素全部检测出，将样品前处理的时间缩短，提高工作效率；同时对仪器分析方法的优化和合并；内标法定量维生素d3。以上所述仅是本发明的优选实施方式，并不用于限制本发明，应当指出，对于本
技术领域：
的普通技术人员来说，在不脱离本发明技术原理的前提下，还可以做出若干改进和变型，这些改进和变型也应视为本发明的保护范围。当前第1页1 2 3
技术特征：1.一种高效检测饲料预混料中脂溶性维生素的方法，其特征在于，包括以下步骤：
前处理步骤：称取2g预混料于100ml容量瓶中，记录下样品质量，加入15mldmso二甲基亚砜后漩涡震荡，加入0.6g/100ml的维生素d20.5ml,并于500c超声提取30分钟，再用无水乙醇定容至刻度；
上机跑样步骤：经过前处理步骤后的溶液经0.45um滤膜过滤后上机测试；其中，上机跑样的上机条件和仪器设置：
色谱柱：luna色谱柱，250mmx4.6mmx5um；流速：1.0ml/min；柱温：室温；流动相：a：水，b：甲醇100％，c：三氯甲烷100％；进样体积：50ul；波长：280nm。
2.如权利要求1所述的一种高效检测饲料预混料中脂溶性维生素的方法，其特征在于，所述上机跑样步骤中的梯度洗脱条件：
初始：流动相a：10％，流动相b：90％，流动相c：0％；
15min：流动相a：10％，流动相b：90％，流动相c：0％；
20min：流动相a：0％，流动相b：100％，流动相c：0％；
30min：流动相a：0％，流动相b：100％，流动相c：0％；
35min：流动相a：0％，流动相b：80％，流动相c：20％；
40min：流动相a：0％，流动相b：80％，流动相c：20％；
45min：流动相a：0％，流动相b：100％，流动相c：0％；
50min：流动相a：0％，流动相b：100％，流动相c：0％；
55min：流动相a：10％，流动相b：90％，流动相c：0％。
技术总结本发明涉及一种高效检测饲料预混料中脂溶性维生素的方法，包括以下步骤：前处理步骤：称取2g预混料于100mL容量瓶中，记录下样品质量，加入15mLDMSO二甲基亚砜后漩涡震荡，加入0.6g/100mL的维生素D20.5mL,并于500C超声提取30分钟，再用无水乙醇定容至刻度；上机跑样步骤：经过前处理步骤后的溶液经0.45um滤膜过滤后上机测试；其中，上机跑样的上机条件和仪器设置：色谱柱：LUNA色谱柱，250mmX4.6mmX5um；流速：1.0mL/min；柱温：室温；流动相：A：水，B：甲醇100％，C：三氯甲烷100％；进样体积：50uL；波长：280nm。本发明通过整合和优化方法差异，将预混料中维生素A，D3，E，K3的测试统一，通过一次前处理和一次上机能够将4种脂溶性维生素全部检测出。
技术研发人员：谢敏
受保护的技术使用者：欧陆分析技术服务(苏州)有限公司
技术研发日：2020.02.26
技术公布日：2020.06.05
