本发明属于医学基因诊断领域，尤其是涉及shoc1基因致病性突变位点在制备检测非梗阻性无精子症诊断试剂盒中的应用。
背景技术：
1、精子发生是精原干细胞自我更新和分化、精母细胞减数分裂与精子形成的整个过程，其任一环节异常都将导致生精障碍，引起非梗阻性无精子症(non-obstructiveazoospermia,noa)。其中减数分裂障碍会导致生精阻滞型(maturation arrest,ma)noa。非梗阻性无精子症(noa)是一种男性不育症，约占无精子症的60％，是目前男性不育症中最严重的一种疾病。noa是指原发性睾丸功能衰竭或下丘脑/垂体功能异常等引起的生精功能障碍，从而导致射出精液中无精子存在的一类疾病。
2、noa可以由多种病因引起，包括遗传因素、内分泌异常、药物或环境毒素暴露以及其他未知因素。某些情况下，noa是由特定基因的遗传突变引起的。这些基因包括但不限于：sox9、dhh、ar、bmp4、bmp7、fscn1等。遗传突变可能导致影响精子发生的分子路径，从而影响睾丸发育和精子生成。
3、noa具有高度的遗传异质性，但是目前人们在其突变类型和疾病的严重程度之间尚未发现任何相关性。对于该病的发病机制和病因仍有待进一步探索，从本质上揭示noa的病因和发病机制对于noa的治疗至关重要。
4、2019年首次在人类中发现shoc1基因的异常可以导致非梗阻性无精子症中的发生，并逐步深入阐释其导致生精障碍的病理生理机制，已在人群中陆续发现10种致病突变类型，有望将其用进一步于临床的疾病筛查。
技术实现思路
1、本发明的目的在于针对现有技术存在的缺乏精准识别shoc1致病突变位点问题，提供shoc1基因致病性突变位点在制备检测非梗阻性无精子症诊断试剂盒中的应用。
2、为实现上述目的，本发明采取以下技术方案：
3、本发明提供shoc1基因致病性突变位点在制备检测非梗阻性无精子症诊断试剂盒中的应用，通过检测样本中shoc1基因是否发生突变来确定是否为非梗阻性无精子症者样本；所述诊断试剂盒包括检测shoc1基因突变位点的试剂。
4、本发明提供一种用于检测非梗阻性无精子症的诊断试剂盒，所述诊断试剂盒包括检测shoc1基因突变位点的试剂，所述shoc1基因突变位点共有2个，分别为：
5、突变位点1：nm_001080551:c.299_302del:p.s100ffs*9；
6、突变位点2：nm_001080551:c.a1652g:p.q551r。
7、所述检测基因shoc1突变位点的试剂包括检测基因shoc1位点的引物。
8、检测nm_001080551:c.299_302del:p.s100ffs*9位点的试剂包括检测nm_001080551:c.299_302del:p.s100ffs*9位点的引物对，所述nm_001080551:c.299_302del:p.s100ffs*9位点的引物对如seq id no.1和seq id no.2所示。
9、检测nm_001080551:c.a1652g:p.q551r位点的试剂包括检测nm_001080551:c.a1652g:p.q551r位点的引物对，所述nm_001080551:c.a1652g:p.q551r位点的引物对如seq id no.3和seq id no.4所示。
10、本发明提供一种用于检测非梗阻性无精子症的snp标志物的特异性引物，所述特异性引物由以下引物对组成：nm_001080551:c.299_302del:p.s100ffs*9的引物对如seqid no.1和seq id no.2所示；nm_001080551:c.a1652g:p.q551r的引物对如seq id no.3和seq id no.4所示。
11、本发明可针对临床样本扩增检测片段，进行sanger测序比对片段序列与参考序列碱基序列峰图，筛查基因突变位点。
12、临床样本包括：临床患者血液、睾丸组织；配偶血液；胎儿绒毛或羊水。
13、与现有技术相比，本发明具有以下突出的技术效果和优点：
14、目前已报道shoc1 11个位点突变与生精障碍相关，其中多数为功能缺失性突变，错义突变相关机制鲜有研究。申请人团队在1例noa家系p21226中鉴定出shoc1复合杂合突变(nm173521:c.a1769g:p.q590r；nm_173521:c.416_419del:p.s139ffs*9)，先证者表现为生精阻滞，精子发生停滞于精母细胞减数分裂前期i偶线期阶段，进一步构建纯合错义突变小鼠，其精子发生停滞于减数分裂i中期，提示shoc1错义突变可导致蛋白功能异常。本发明首次发现shoc1单碱基错义突变可引起生精障碍，为减数分裂障碍患者提供新治疗思路，对深入理解人精子发生及减数分裂过程有重要的科学价值和社会意义。
15、本发明提供shoc1基因的新的用途，从而提供一种有效的进行先天性无精子症疾病基因诊断、产前基因筛查及遗传咨询的途径，应用效果表明本发明所提供的基因的snp位点及检测引物可以有效的用于临床患者及胎儿绒毛或羊水等进行shoc1基因突变位点的快速检测。
16、本发明应用全外显子测序发现shoc1基因存在致病性突变，得到shoc1基因2个新的复合杂合突变位点nm173521:c.a1769g:p.q590r；nm_173521:c.416_419del:p.s139ffs*9，实验表明，shoc1的上述突变可能导致非梗阻性无精子症的发生，从而能够通过使用本发明提供的试剂盒检测该突变来实现对非梗阻性无精子症，尤其是ma的诊断检测。本发明对阐明非梗阻性无精子症的发病机制，丰富非梗阻性无精子症的致病基因突变谱，及建立这种遗传病基因诊断方法具有重要意义。
1.shoc1基因致病性突变位点在制备检测非梗阻性无精子症诊断试剂盒中的应用，其特征在于通过检测样本中shoc1基因是否发生突变来确定是否为非梗阻性无精子症者样本；所述诊断试剂盒包括检测shoc1基因突变位点的试剂。
2.如权利要求1所述应用，其特征在于所述检测shoc1基因突变位点的试剂具有如seqid no.1和seq id no.2所示的核苷酸序列的引物对；或具有如seq id no.3和seq id no.4所示的核苷酸序列的引物对。
3.如权利要求1所述应用，其特征在于所述样本包括：临床患者血液、睾丸组织；配偶血液；胎儿绒毛或羊水。
4.一种用于检测非梗阻性无精子症的诊断试剂盒，其特征在于所述诊断试剂盒包括检测shoc1基因突变位点的试剂，所述shoc1基因突变位点共有2个，分别为：
5.如权利要求4所述一种用于检测非梗阻性无精子症诊断试剂盒，其特征在于，所述检测基因shoc1突变位点的试剂包括检测基因shoc1 snp位点的引物。
6.如权利要求4所述一种用于检测非梗阻性无精子症诊断试剂盒，其特征在于，检测突变位点1：nm_001080551:c.299_302del:p.s100ffs*9snp位点的试剂包括检测突变位点1的引物，所述检测突变位点1的引物包括如seq id no:1所示的上游引物和如seq id no:2所示下游引物。
7.如权利要求4所述一种用于检测非梗阻性无精子症诊断试剂盒，其特征在于，检测突变位点2：nm_001080551:c.a1652g:p.q551r snp位点的试剂包括检测突变位点2的引物，所述检测突变位点2的引物包括如seq id no:3所示的上游引物和如seq id no:4所示下游引物。
8.一种用于检测非梗阻性无精子症的snp标志物的特异性引物，其特征在于，所述特异性引物由以下引物对组成：nm_001080551:c.299_302del:p.s100ffs*9的引物对如seq idno.1和seq id no.2所示；nm_001080551:c.a1652g:p.q551r的引物对如seq id no.3和seqid no.4所示。
