本发明涉及生物检测，尤其涉及一种检测甜玉米中三种泛菌致病菌的多重pcr试剂盒及检测方法。
背景技术：
1、玉米以其用途广、产量高、对种植条件要求低等优点在世界上多个国家广泛种植。除作为粮食用途外，现代玉米产业还发展出能源、饲料、果蔬等多种用途。玉米产业健康发展对改善农业产业结构，保障粮食安全，扩大国民经济总量具有十分积极的重要作用。
2、近年来，分子生物学技术发展迅速，随着分子生物学技术在植物病理学科不断发展和应用，一些分子标记技术为植物病原菌的诊断检测提供了新的途径。目前对植物病原菌的检测方法主要有国标法、酶联荧光免疫检测法、聚合酶链式反应(pcr)、金标试纸法、dna探针技术、lamp恒温扩增法，这些方法都有存在不足之处，即检测通量不高。多重pcr方法是提高检测通量的基本方法。许多高通量技术，如基因芯片法、高效液相色谱法都基于多重pcr方法。但多重pcr技术引物设计困难，常常出现扩增效率不均衡问题，造成假阴性结果。同时还容易出现引物二聚体，给检测带来了难题。
3、目前尚未见到有效的甜玉米中泛菌致病菌的多重pcr检测方案。
技术实现思路
1、本发明的目的在于提供一种检测甜玉米中三种泛菌致病菌的多重pcr试剂盒及检测方法，以填补现有技术的空白。
2、为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
3、本发明提供了一种检测甜玉米中三种泛菌致病菌的多重pcr试剂盒，所述试剂盒包括用于检测菠萝泛菌、成团泛菌和斯式泛菌的试剂。
4、优选的，所述试剂包括菠萝泛菌特异引物对panf/panr、成团泛菌特异引物对pagf/pagr和斯式泛菌特异引物对pstf/pstr。
5、优选的，所述菠萝泛菌特异引物对的核苷酸序列如seq id no.1和seq id no.2所示；
6、所述成团泛菌特异引物对的核苷酸序列如seq id no.3和seq id no.4所示；
7、所述斯式泛菌特异引物对的核苷酸序列如seq id no.5和seq id no.6所示。
8、优选的，所述试剂盒还包括反应混合液、阳性对照和阴性对照。
9、本发明还提供了一种同时检测菠萝泛菌、成团泛菌和斯式泛菌的方法，包括以下步骤：
10、获取样本细菌总dna；
11、以所述样本细菌总dna为模板，采用上述试剂盒进行检测；
12、对检测数据进行读取，得到检测结果。
13、优选的，所述进行检测的步骤包括：
14、利用多重pcr扩增反应得到扩增产物，将扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳。
15、优选的，所述对检测数据进行读取，得到检测结果的步骤包括：
16、对琼脂糖凝胶电泳的结果进行分析，若扩增产物含有895bp、627bp和409bp中的一种或几种，则表示待测样品中含有菠萝泛菌、成团泛菌和斯式泛菌中的一种或几种。
17、优选的，所述获取样本细菌总dna采用水煮法；
18、和/或，所述试剂盒中各引物的工作浓度为5～20μm；。
19、优选的，所述多重pcr扩增反应的反应条件为：95℃预变性5min，95℃变性30s，60℃退火30s，72℃延伸30s，运行35个循环，72℃延伸10min。
20、本发明还提供了上述方法在甜玉米致病菌检测中的应用。
21、本发明的有益效果：
22、本研究建立的多重pcr的检测方法准确度高、灵敏度高、重复性号，可准确、快速、高效的对甜玉米泛菌性病害进行鉴定。
1.一种检测甜玉米中三种泛菌致病菌的多重pcr试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括用于检测菠萝泛菌、成团泛菌和斯式泛菌的试剂。
2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂包括菠萝泛菌特异引物对panf/panr、成团泛菌特异引物对pagf/pagr和斯式泛菌特异引物对pstf/pstr。
3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述菠萝泛菌特异引物对的核苷酸序列如seq id no.1和seq id no.2所示；
4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括反应混合液、阳性对照和阴性对照。
5.一种同时检测菠萝泛菌、成团泛菌和斯式泛菌的方法，其特征在于，包括以下步骤：
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述进行检测的步骤包括：
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述对检测数据进行读取，得到检测结果的步骤包括：
8.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述获取样本细菌总dna采用水煮法；
9.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述多重pcr扩增反应的反应条件为：95℃预变性5min，95℃变性30s，60℃退火30s，72℃延伸30s，运行35个循环，72℃延伸10min。
10.权利要求5～9任一项所述的方法在甜玉米致病菌检测中的应用。
