本发明涉及一种具有热稳定特性的新型酪氨酸酚解酶e611m及其应用，属于生物。
背景技术：
1、左旋多巴（l-dopa）是氨基酸的一种衍生物，也是从l-酪氨酸到儿茶酚或黑色素的生化代谢途径过程中的重要中间产物，又称3,4-二羟基苯基丙氨酸，是一种重要的活性物质。l-dopa是新型的生化药品，在食品、医药和保健品等领域都具有广泛应用。l-dopa的衍生物-多巴胺是一种重要的神经递质，由于多巴胺不能透过血脑屏障进入脑组织，所以不能通过补充多巴胺来治疗帕金森氏病，而l-dopa可以通过血脑屏障，并在脑组织中脱羧形成多巴胺，从而使脑组织中多巴胺含量增加而达到治疗的目的。l-dopa及复方l-dopa（如美多芭）已成为治疗常见老年病-帕金森氏病的主要药物。l-dopa还可用来治疗弱视；利用酪氨酸酶将l-酪氨酸转化，经l-dopa形成黑色素，可用于毛发染色；此外，人们还发现l-dopa有抗衰老的功效。基于l-dopa在医药卫生、保健美容等诸多领域的显著功效，l-dopa的生产很早就被人们所关注。
2、根据文献报道，l-dopa的制备方法主要有提取法、化学合成法和酶转化法。使用提取法从植物（如蚕豆和毛豆等）中提取，其限制条件是原料来源少、产量低的限制，因而生产成本高，从植物中提取l-dopa难以大规模生产，远不能满足市场需求；使用化学合成法，其化学合成过程中需要大量的铅等金属作为催化剂，并且过程繁杂，产物的转化效率和对映选择性均较低，同时具有成本高、环境污染严重等问题。
3、酪氨酸酶，对羟基苯乙酸酯3-羟化酶和酪氨酸酚解酶的酶转化法具有安全性和特异性的特点，尤其是酪氨酸酚解酶活性最高，最接近工业化应用。目前，报道的酪氨酸酚解酶活力仍较低，且热稳定性和储存稳定行较差，严重限制了其工业化应用前景。
技术实现思路
1、本发明针对现有技术的不足，提供了一种新型酪氨酸酚解酶e611m及其制备方法。本发明所述新型酪氨酸酚解酶e611m的最适反应温度为35℃，最适反应ph为6.5；其具有热稳定的特性，在20℃，40℃和60℃条件下的半衰期分别为33min，26min和18min。
2、一方面，本发明提供一种新型新型酪氨酸酚解酶e611m，其氨基酸序列如seq idno. 1所示。其氨基酸序列与已报道的酪氨酸酚解酶序列相似度仅为91.72%，是一个序列新颖的新酶。
3、seq id no.1：
4、pisiksfspplrrrivifhqtllmnqvcftshdyvhdhcywrnkmnypcivpphytnamsdkaepfriksvetvsmiprderlkkmqeagyntfllnskdiyidlltdsgtnamsdkqwagmmmgdeayagsenfyhlertvqelfgfkhivpthqgrgaenllsqlaikpgqyvagnmyftttryhqekngavfvdivrdniafkgdidlkklqklidekgaeniayiclavtveahdaglnlaggqpvsmanmravreltaahgikvfydatrcvenayfikeqeqgfenksiaeivhemfsyadgctmsgkkdclvniggflcmnddemfssakelvvvyegmpsygglagrdmeamaiglreamqyeyiehrvkqvrylgdkpivepvgghavfldarrfcehltqdefpaqlkaagvslaasiyvetgvrsmergiisagrnnvtgehhrpkletvrltiprrvytyahmdvvadgiiklyqhkedirglkfiyepkqlrfftarfdyiyiiimapsqdgaflyffsmnrkplrcplpkhnykskpklrhfyyphdvqmtaviitnslqehlswilmplsdrvvppdlaepcwls
5、另一方面，本发明还提供一种酪氨酸酚解酶e611m对应的核酸序列，如seq idno.2所示。
6、seq id no.2：
7、ccgattagcattaaaagctttagcccgccgctgcgccgccgcattgtgatttttcatcagaccctgctgatgaaccaggtgtgctttaccagccatgattatgtgcatgatcattgctattggcgcaacaaaatgaactatccgtgcattgtgccgccgcattataccaacgcgatgagcgataaagcggaaccgtttcgcattaaaagcgtggaaaccgtgagcatgattccgcgcgatgaacgcctgaaaaaaatgcaggaagcgggctataacacctttctgctgaacagcaaagatatttatattgatctgctgaccgatagcggcaccaacgcgatgagcgataaacagtgggcgggcatgatgatgggcgatgaagcgtatgcgggcagcgaaaacttttatcatctggaacgcaccgtgcaggaactgtttggctttaaacatattgtgccgacccatcagggccgcggcgcggaaaacctgctgagccagctggcgattaaaccgggccagtatgtggcgggcaacatgtattttaccaccacccgctatcatcaggaaaaaaacggcgcggtgtttgtggatattgtgcgcgataacattgcgtttaaaggcgatattgatctgaaaaaactgcagaaactgattgatgaaaaaggcgcggaaaacattgcgtatatttgcctggcggtgaccgtggaagcgcatgatgcgggcctgaacctggcgggcggccagccggtgagcatggcgaacatgcgcgcggtgcgcgaactgaccgcggcgcatggcattaaagtgttttatgatgcgacccgctgcgtggaaaacgcgtattttattaaagaacaggaacagggctttgaaaacaaaagcattgcggaaattgtgcatgaaatgtttagctatgcggatggctgcaccatgagcggcaaaaaagattgcctggtgaacattggcggctttctgtgcatgaacgatgatgaaatgtttagcagcgcgaaagaactggtggtggtgtatgaaggcatgccgagctatggcggcctggcgggccgcgatatggaagcgatggcgattggcctgcgcgaagcgatgcagtatgaatatattgaacatcgcgtgaaacaggtgcgctatctgggcgataaaccgattgtggaaccggtgggcggccatgcggtgtttctggatgcgcgccgcttttgcgaacatctgacccaggatgaatttccggcgcagctgaaagcggcgggcgtgagcctggcggcgagcatttatgtggaaaccggcgtgcgcagcatggaacgcggcattattagcgcgggccgcaacaacgtgaccggcgaacatcatcgcccgaaactggaaaccgtgcgcctgaccattccgcgccgcgtgtatacctatgcgcatatggatgtggtggcggatggcattattaaactgtatcagcataaagaagatattcgcggcctgaaatttatttatgaaccgaaacagctgcgcttttttaccgcgcgctttgattatatttatattattattatggcgccgagccaggatggcgcgtttctgtatttttttagcatgaaccgcaaaccgctgcgctgcccgctgccgaaacataactataaaagcaaaccgaaactgcgccatttttattatccgcatgatgtgcagatgaccgcggtgattattaccaacagcctgcaggaacatctgagctggattctgatgccgctgagcgatcgcgtggtgccgccggatctggcggaaccgtgctggctgagc
8、另一方面，本发明还提供一种酪氨酸酚解酶e611m的制备与纯化方法，即利用基因工程的技术方法，将e611m的基因序列异源重组表达到大肠杆菌，经发酵后，利用镍柱对其进行一步亲和纯化。
9、另一方面，本发明还提供了所述酪氨酸酚解酶e611m在制备左旋多巴中的应用。
10、另一方面，一种生产左旋多巴的方法，所选用的酶为酪氨酸酚解酶e611m。
11、优选：所述降解条件中反应温度为0~70℃。最适反应温度为35℃。
12、优选：所述降解条件中反应ph为5.0~8.0。最适反应ph为6.5。
13、有益效果：
14、1.本发明的酪氨酸酚解酶e611m为结构与功能新颖的酪氨酸酚解酶，其氨基酸序列与已有性质报道的酪氨酸酚解酶序列相似度为91.72%。
15、2.本发明提供了一种制备酪氨酸酚解酶e611m的方法，即利用基因工程的技术方法，将e611m的基因序列异源重组表达到大肠杆菌，经发酵后，利用其生产l-dopa的产量可达58.7g/l，具有工业化生产的潜质。该酶纯化方法简单，利用镍柱对其进行一步亲和纯化，回收率高达91.2%，蛋白质纯度高达93.5%。
16、3.本发明的酪氨酸酚解酶e611m具有优良的理化性质，该酶最适反应ph为6.5，其具有热稳定的特性，在20℃，40℃和60℃条件下的半衰期分别为33min，26min和18min。本发明所述的酪氨酸酚解酶e611m具有良好的工业化应用前景。
1.一种酪氨酸酚解酶，其氨基酸序列如seq id no.1所示。
2.如权利要求1所述的酪氨酸酚解酶所对应的核苷酸序列，所述核苷酸序列如seq idno.2所示。
3.如权利要求1所述的酪氨酸酚解酶的制备与纯化方法，将e611m的基因序列异源重组表达到大肠杆菌，经发酵后，利用镍柱对其进行一步亲和纯化。
4.如权利要求1所述的酪氨酸酚解酶在制备左旋多巴或含左旋多巴的产品中的应用。
5.一种生产左旋多巴的方法，其特征是，所选用的酶为权利要求1所述的酪氨酸酚解酶。
6.如权利要求5所述的方法，其特征是，降解条件中反应温度为0~70℃，最适反应温度为35℃。
7.如权利要求5所述的方法，其特征是，降解条件中反应ph为5.0~8.0，最适反应ph为6.5。
