本发明涉及海洋微生物，特别涉及唾液联合乳杆菌及其应用。
背景技术：
1、蜢子虾常栖息于水质肥沃的河口区、港湾以及岛屿周围地势平坦、底质粉砂型的海水中下层，这一带的蜢子虾有个体均匀、颜色光亮、肥满度高、肉质紧密等特点。小虾加入盐，经发酵制成粘稠的虾酱，是沿海地区常用的调味料和民间食品之一。发酵过程中涉及一系列复杂的生化反应，形成独特的风味和提高营养价值，微生物群落与发酵基质密切相关，呈现出微生物之间复杂的关系，包括偏害共生、寄生、共生关系、互利共生和竞争。海洋产业种类繁多的发酵微生物在抑制病原微生物方面起到了非常重要的作用。
2、生物膜由微生物集合组成，主要是细菌，但也包括真菌、病毒、原生动物和其他微生物。它们附着于接触物的表面并嵌入自身产生的细胞外基质中，形成的大量细菌聚集膜样物。细菌生物被膜是细菌为适应自然环境有利于生存的一种生命现象，由微生物及其分泌物积聚而形成，对抗生素表现出高度耐药性。
3、变异链球菌是一种导致龋齿的元凶，但它通常是静止不动的，并且会受到唾液的限制，但是研究发现它们可以结合白假丝酵母菌丝进行移动同时还能繁殖，这样一个微生物团就越来越大。变异链球菌可以附着在白假丝酵母的任意位置，包括白假丝酵母本身，甚至是白假丝酵母表面的多糖。除了移动的范围广，这种错综复杂的细胞团块韧性也很强，研究也证实细菌-真菌协作产生的复合生物膜比单一物种形成的生物膜更大更多。单个细菌很容易从牙齿上冲走，而微生物团更容易附着在牙齿上，并且对牙刷和抑菌剂有更强的抵抗力。
4、韦荣球菌是牙周炎的重要病原体，是舌苔中的本土口腔细菌，而且附着在舌头上的能力很高，已被确定为硫化氢（h2s）的主要生产者，同时也是慢性上颌窦炎中最常见的厌氧性病原体。链球菌属（streptococcus）和韦荣菌属（veillonella）是口腔最早的定殖菌和典型共生菌，共同参与口腔早期生物膜形成。大量研究显示，链球菌和韦荣菌共生失调不仅与龋病、牙周病等口腔疾病密切相关，而且可突破或入侵消化屏障实现远端定殖，已经成为预测多种系统性疾病发生、发展及预后的新的潜在生物标志物。
5、海洋微生物已经发展出复杂的分子适应能力来应对这些恶劣的条件，影响它们的初级和次级代谢途径。这导致了独特的生理特征和代谢过程的进化，海洋微生物比陆地微生物更有可能合成结构独特的酶和次生代谢物。挖掘海海洋微生物的应用，在拓展海洋产业价值方面具有重要的现实意义。
技术实现思路
1、有鉴于此，本发明提供了唾液联合乳杆菌及其应用，具有调节口腔病原菌毒力基因、抑制口腔病原菌细菌-真菌复合生物膜形成、竞争结合口腔病原菌真菌菌丝、凝集口腔病原菌、抑制口腔菌群生物膜形成的功能，可用于制备药品或降低口腔病原菌致病性的产品。
2、为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
3、本发明提供了一株减少口腔病原菌致病性的唾液联合乳杆菌（ligilactobacillus salivarius），名称为nhnk-612，保藏编号为cctcc no: m 2024799。
4、本发明还提供了基于上述唾液联合乳杆菌（ligilactobacillus salivarius）制得的制品，包括所述唾液联合乳杆菌（ligilactobacillus salivarius）的发酵产物或灭活菌体；
5、所述发酵产物的制备方法为：将所述唾液联合乳杆菌（ligilactobacillussalivarius）接种于培养基，37℃培养46~50 h，获得发酵液，离心取上清，以0.22 μm的精度过滤，获得的滤液即为所述发酵产物；
6、所述灭活菌体的制备方法为：将所述唾液联合乳杆菌（ligilactobacillussalivarius）接种于培养基，37℃培养46~50 h，获得发酵液，离心取沉淀，清洗所述沉淀，100~130℃灭活10~30 min，获得所述灭活菌体。
7、本发明还提供了上述唾液联合乳杆菌（ligilactobacillus salivarius）或上述制品在制备用于减少或降低口腔病原菌致病性的产品中的应用。
8、本发明还提供了上述唾液联合乳杆菌（ligilactobacillus salivarius）或上述制品在减少或降低口腔病原菌致病性中的应用。
9、在本发明的一些具体实施方式中，上述应用所述的减少或降低口腔病原菌致病性包括如下至少一项：
10、（a1）、调节口腔病原菌毒力基因；
11、（a2）、抑制口腔病原菌生长或增殖；
12、（a3）、抑制口腔病原菌生物膜形成；
13、（a4）、竞争结合口腔病原菌中的真菌菌丝；
14、（a5）、凝集口腔病原菌；
15、（a6）、抑制口腔菌群增殖；
16、（a7）、抑制口腔菌群生物膜形成；
17、所述口腔病原菌包括人葡萄球菌（staphylococcus hominis）、金黄色葡萄球菌（staphylococcus aureus）、溶血葡萄球菌（staphylococcus haemolyticus）、变异链球菌（streptococcus mutans）、非典型韦荣球菌（veillonella atypica）或白假丝酵母（candida albicans）中的一种或多种。
18、在本发明的一些具体实施方式中，上述应用所述的口腔病原菌毒力基因包括变异链球菌毒力基因、白假丝酵母毒力基因或金黄色葡萄球菌金黄亚种毒力基因中的一种或多种；
19、所述变异链球菌毒力基因包括gtfc、gbpb、gbpc、ftf或luxs中的一种或多种；
20、所述白假丝酵母毒力基因包括als1、als3、bgl2或hwp1中的一种或多种；
21、所述金黄色葡萄球菌金黄亚种毒力基因包括icaa、agra或fnba中的一种或多种。
22、在本发明的一些具体实施方式中，上述应用所述的口腔病原菌生物膜包括口腔病原菌细菌-真菌复合生物膜；
23、所述口腔病原菌细菌-真菌复合生物膜包括：人葡萄球菌-白假丝酵母复合生物膜、金黄色葡萄球菌金黄亚种-白假丝酵母复合生物膜、溶血葡萄球菌-白假丝酵母复合生物膜、变异链球菌-白假丝酵母复合生物膜或非典型韦荣球菌-白假丝酵母复合生物膜中的一种或多种。
24、在本发明的一些具体实施方式中，上述应用所述的竞争结合口腔真菌菌丝包括结合白假丝酵母的菌丝、干扰所述菌丝与其他口腔细菌的结合作用。
25、在本发明的一些具体实施方式中，上述应用所述的凝集口腔病原菌包括凝集白假丝酵母、非典型韦荣球菌、变异链球菌、金黄色葡萄球菌金黄亚种、人葡萄球菌或溶血葡萄球菌中的一种或多种。
26、本发明还提供了用于减少或降低口腔病原菌致病性的产品，包括上述唾液联合乳杆菌（ligilactobacillus salivarius）或上述制品，以及可接受的辅料或助剂。
27、在本发明的一些具体实施方式中，上述产品包括如下一种或两种：
28、（b1）、上述唾液联合乳杆菌（ligilactobacillus salivarius）的菌株和/或灭活菌；
29、（b2）、上述唾液联合乳杆菌（ligilactobacillus salivarius）的发酵/分泌产物。
30、本发明还提供了药品，包括上述唾液联合乳杆菌（ligilactobacillussalivarius）或上述制品，以及可接受的辅料或助剂。
31、本发明还提供了上述唾液联合乳杆菌（ligilactobacillus salivarius）在制备调节口腔病原菌毒力基因产品中的应用，所述调节口腔病原菌毒力基因包括如下至少一种：
32、变异链球菌毒力基因gtfc、gbpb、gbpc、ftf、luxs；
33、白假丝酵母毒力基因als1、als3、bgl2、hwp1；
34、金黄色葡萄球菌金黄亚种毒力基因icaa、agra、fnba。
35、本发明还提供了上述唾液联合乳杆菌（ligilactobacillus salivarius）在制备抑制口腔病原菌细菌-真菌复合生物膜产品中的应用，所述抑制口腔病原菌细菌-真菌复合生物膜形成包括人葡萄球菌-白假丝酵母、金黄色葡萄球菌金黄亚种-白假丝酵母、溶血葡萄球菌-白假丝酵母、变异链球菌-白假丝酵母和非典型韦荣球菌-白假丝酵母复合生物膜中的至少一种。
36、本发明还提供了上述唾液联合乳杆菌（ligilactobacillus salivarius）灭活菌体在制备竞争结合口腔病原菌真菌菌丝产品中的应用，所述竞争结合口腔病原菌真菌菌丝为结合白假丝酵母菌丝，干扰其菌丝与其他细菌的结合作用。
37、本发明还提供了上述唾液联合乳杆菌（ligilactobacillus salivarius）灭活菌体在制备凝集口腔病原菌产品中的应用，所述凝集口腔病原菌包括白假丝酵母、非典型韦荣球菌、变异链球菌、金黄色葡萄球菌金黄亚种、人葡萄球菌、溶血葡萄球菌中的至少一种。
38、本发明还提供了上述唾液联合乳杆菌（ligilactobacillus salivarius）灭活菌体在制备减少口腔菌群生物膜产品中的应用。
39、本发明还提供了上述唾液联合乳杆菌（ligilactobacillus salivarius）在制备减少口腔病原菌致病性产品中的应用，所述减少口腔病原菌致病性状况包括具有调节口腔病原菌毒力基因、抑制口腔病原菌细菌-真菌复合生物膜、竞争结合口腔病原菌真菌菌丝、凝集口腔病原菌、减少口腔菌群生物膜中的至少一种。
40、在本发明的一些具体实施方式中，上述应用所述的产品为药品或减少口腔病原菌致病性产品。
41、在本发明的一些具体实施方式中，上述应用还包括抑制口腔致病菌生物膜形成，所述抑制口腔致病菌生物膜包括抑制人葡萄球菌、金黄色葡萄球菌、溶血葡萄球菌、变异链球菌、非典型韦荣球菌和白假丝酵母中的至少一种。
42、在本发明的一些具体实施方式中，上述应用所述抑制口腔菌群增殖为降低口腔菌群的生长率。
43、在本发明的一些具体实施方式中，上述应用所述抑制口腔菌群生物膜形成为降低口腔菌群生物膜形成率。
44、本发明还提供了减少或降低口腔病原菌致病性的方法，包括施用上述唾液联合乳杆菌（ligilactobacillus salivarius）的步骤。
45、在本发明的一些具体实施方式中，上述应用所述的减少或降低口腔病原菌致病性包括如下至少一项：
46、本发明还提供了调节口腔病原菌毒力基因的方法，包括施用上述唾液联合乳杆菌（ligilactobacillus salivarius）的步骤。
47、本发明还提供了抑制口腔病原菌生长或增殖的方法，包括施用上述唾液联合乳杆菌（ligilactobacillus salivarius）的步骤。
48、本发明还提供了抑制口腔病原菌生物膜形成的方法，包括施用上述唾液联合乳杆菌（ligilactobacillus salivarius）的步骤。
49、本发明还提供了竞争结合口腔病原菌中的真菌菌丝的方法，包括施用上述唾液联合乳杆菌（ligilactobacillus salivarius）的步骤。
50、本发明还提供了凝集口腔病原菌的方法，包括施用上述唾液联合乳杆菌（ligilactobacillus salivarius）的步骤。
51、本发明还提供了抑制口腔菌群增殖的方法，包括施用上述唾液联合乳杆菌（ligilactobacillus salivarius）的步骤。
52、本发明还提供了抑制口腔菌群生物膜形成的方法，包括施用上述唾液联合乳杆菌（ligilactobacillus salivarius）的步骤。
53、本发明的唾液联合乳杆菌及其应用有如下效果：
54、体外实验表明，本发明的唾液联合乳杆菌nhnk-612具有抑制变异链球菌相关的葡萄糖基转移酶si基因gtfc、葡萄糖结合蛋白b基因gbpb、葡萄糖结合蛋白c基因gbpc、果糖基转移酶基因ftf、自诱导物-2产生蛋白基因luxs表达的作用，基因相对表达量下调至0.01~0.83倍。
55、体外实验表明，本发明的唾液联合乳杆菌nhnk-612具有抑制白假丝酵母相关的细胞表面糖蛋白基因als1/als3、细胞壁内β-1,3-葡聚糖转移酶基因bgl2、菌丝细胞壁蛋白基因hwp1表达的作用，基因相对表达量下调至0.05~0.89倍。
56、体外实验表明，本发明的唾液联合乳杆菌nhnk-612具有抑制金黄色葡萄球菌金黄亚种相关的细胞间黏附蛋白icaa、辅助基因调节因子a agra、纤连结合蛋白前体fnba表达的作用，基因相对表达量下调至0.44~0.81倍。
57、体外实验表明，本发明的唾液联合乳杆菌nhnk-612具有抑制人葡萄球菌、金黄色葡萄球菌金黄亚种、溶血葡萄球菌、变异链球菌、非典型韦荣球菌、白假丝酵母生物膜以及人葡萄球菌-白假丝酵母、金黄色葡萄球菌金黄亚种-白假丝酵母、溶血葡萄球菌-白假丝酵母、变异链球菌-白假丝酵母、非典型韦荣球菌-白假丝酵母复合生物膜形成的作用，生物膜形成率降低至18.68%~86.85%。
58、体外实验表明，本发明的唾液联合乳杆菌nhnk-612具有凝集口腔病原菌白假丝酵母、非典型韦荣球菌、变异链球菌、金黄色葡萄球菌金黄亚种、人葡萄球菌、溶血葡萄球菌的作用，与病原菌作用30 min凝集率可达到15.79%~44.00%。
59、体外实验表明，本发明的唾液联合乳杆菌nhnk-612能够有效抑制白假丝酵母菌丝形成，菌丝形成率低至11.73%~39.87%。
60、体外实验表明，本发明的唾液联合乳杆菌nhnk-612发酵产物具有抑制口腔菌群增殖的作用，口腔菌群的生长率降低至32.01%。
61、体外实验表明，本发明的唾液联合乳杆菌nhnk-612具有抑制口腔菌群生物膜形成的作用，口腔菌群生物膜形成率降低至31.05%~63.15%。
62、综上，nhnk-612具有调节口腔病原菌毒力基因、抑制口腔病原菌细菌-真菌复合生物膜形成、竞争结合口腔病原菌真菌菌丝、凝集口腔病原菌、抑制口腔菌群生物膜形成的功能，可用于制备药品或降低口腔病原菌致病性的产品。
63、生物保藏说明
64、生物材料：nhnk-612，分类命名：唾液联合乳杆菌nhnk-612（ligilactobacillussalivarius nhnk-612），于2024年04月25日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏中心地址为：中国 武汉大学；保藏编号为cctcc no: m 2024799。
65、本发明中所述nhnk-612即为上述保藏编号为cctcc no: m 2024799的菌株。
1.一株减少口腔病原菌致病性的唾液联合乳杆菌nhnk-612，其特征在于，保藏编号为cctcc no: m 2024799。
2.基于如权利要求1所述的唾液联合乳杆菌nhnk-612制得的制品，其特征在于，为所述唾液联合乳杆菌nhnk-612的发酵产物或灭活菌体；
3.如权利要求1所述的唾液联合乳杆菌nhnk-612或如权利要求2所述的制品在制备用于减少口腔病原菌致病性的产品中的应用。
4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述减少口腔病原菌致病性包括如下至少一项：
5.如权利要求4所述的应用，其特征在于，所述口腔病原菌毒力基因包括变异链球菌毒力基因、白假丝酵母毒力基因或金黄色葡萄球菌金黄亚种毒力基因中的一种或多种；
6.如权利要求4所述的应用，其特征在于，所述口腔病原菌生物膜包括口腔病原菌细菌-真菌复合生物膜；
7.如权利要求4所述的应用，其特征在于，所述竞争结合口腔病原菌中的真菌菌丝包括结合白假丝酵母的菌丝、干扰所述菌丝与其他口腔细菌的结合作用。
8.如权利要求4所述的应用，其特征在于，所述凝集口腔病原菌包括凝集白假丝酵母、非典型韦荣球菌、变异链球菌、金黄色葡萄球菌金黄亚种、人葡萄球菌或溶血葡萄球菌中的一种或多种。
9.用于减少口腔病原菌致病性的产品，其特征在于，包括如权利要求1所述的唾液联合乳杆菌nhnk-612或如权利要求2所述的制品，以及可接受的辅料或助剂。
10.药品，其特征在于，包括如权利要求1所述的唾液联合乳杆菌nhnk-612或如权利要求2所述的制品，以及可接受的辅料或助剂。
