发明领域提供了用于治疗半乳糖-1-磷酸尿苷酰转移酶(galt)缺乏症的病毒构建体、颗粒和组合物。
背景技术：
1、半乳糖血症是由于无法代谢半乳糖所致，而1型半乳糖血症具体是由编码酶半乳糖-1-磷酸尿苷酰转移酶(galt)的galt基因的致病性变体引起的。因此，1型半乳糖血症也可称为半乳糖-1-磷酸尿苷酰转移酶缺乏症。galt执行半乳糖代谢勒卢瓦尔途径(leloirpathway)的第二步。在该步骤中，galt以可逆的方式将二磷酸尿苷-葡萄糖和半乳糖-1-磷酸相互转化为葡萄糖-1-磷酸和二磷酸尿苷-半乳糖。
2、1型半乳糖血症可分为三种类型疾病。第一种是经典半乳糖血症，当个体的两个galt等位基因均存在致病性变体时，就会发生这种情况，导致galt表达缺失，或者galt催化活性完全或接近完全丧失(约1％残留活性)。经典半乳糖血症是一种常染色体隐性遗传病症。第二类1型半乳糖血症被描述为“临床变异型”半乳糖血症，其中患者的红细胞或其它组织中维持正常酶活性水平的1％至10％之间。第三种类型是生化变异型半乳糖血症，称为杜阿尔特半乳糖血症(duartega乳糖mia)，当个体是galt等位基因的复合杂合子时，就会发生这种情况，其组合表达的galt活性水平约为具有两个正常galt等位基因的个体中所见到的galt活性水平的25％。引起典型半乳糖血症的突变的一个实例是galt基因的外显子6中从a到g的核苷酸取代，它用精氨酸取代蛋白质中第188位的谷氨酰胺。
3、1型半乳糖血症疾病过程始于子宫内(holton 1995)。如果不去除饮食中的半乳糖(主要来自乳糖)，galt酶活性<正常水平10％的1型半乳糖血症患者将面临新生儿死亡的风险。新生儿1型半乳糖血症的症状包括喂养困难、发育迟缓、黄疸和肝损伤，有时会导致肝衰竭(berry 2021；rubio-gozalbo等人2019)。galnet登记收集了2014年12月至2018年7月15个国家509名患者的数据，显示26％的患者在新生儿期患有白内障(rubio-gozalbo等人2019)。暴露于半乳糖的时机、量和持续时间会影响患有半乳糖血症的婴儿的损害程度，早期较长时间暴露于较大量半乳糖会造成最大损害。据报告，在新生儿筛查和饮食限制开始之前，患有经典半乳糖血症的新生儿在生命前10天内的发病率高达75％，其中大多数死亡归因于大肠杆菌脓毒症。半乳糖血症-脓毒症复合体造成的损害不仅包括肝细胞坏死、含铁血黄素沉着症、脂肪再生和肝细胞腺泡形成，还包括胰岛增生、肾皮质坏死、脑室周围白质软化和脑膜炎(kotb等人2019)。从母乳或标准配方奶粉迅速转向大豆基或其它低半乳糖婴儿配方奶粉的婴儿通常会很快恢复，不会出现如脓毒症、肝功能衰竭和新生儿死亡等最严重的急性并发症(berry 2021；welling等人2017)。
4、有证据表明，经典半乳糖血症患者长期并发症的原因始于妊娠期，并在儿童早期就存在。尽管进行了饮食干预，但由于内源性半乳糖每天产生1-2克，患者仍然会出现严重的疾病长期并发症(bosch 2006；berry 2021)。1型半乳糖血症患者的临床评估显示症状较早出现。与年龄匹配的对照组相比，这些患者更有可能出现神经缺陷、运动、认知和言语/语言病状，这在48个月大的儿童中就很明显(ozgun等人2019)。galnet登记的数据还表明，在一岁到学龄前儿童中，23.8％的患者存在运动症状(震颤)。这些数据支持需要采取早期干预策略来减轻或显著减少长期疾病结果(rubio-gozalbo等人2019)，事实上许多发达国家对新生儿进行经典半乳糖血症筛查，所以这是可行的。
5、galnet登记还根据评估的509名患者提供了有关这些长期并发症总体影响的信息(rubio-gozalbo等人2019；berry 2021)。神经、认知和行为并发症在galnet登记的患者中很常见。85.0％的患者报告有脑损伤，包括多种认知和精神并发症，52.2％的患者报告有整体发育迟缓，66.4％的患者报告有语言和言语障碍。语言和言语障碍在年轻男性患者中更为常见(p＝0.034)(rubio-gozalbo等人2019)。总共有52.0％的患者具有神经并发症，如震颤(31.0％)、一般运动异常(27.0％)、共济失调(12.2％)、癫痫发作(8.1％)和肌张力障碍(7.5％)。一般运动异常在学龄前儿童中最为常见，但共济失调、癫痫发作和肌张力障碍在各个年龄段均有报告。在galnet登记中，44.4％的患者存在精神(精神病)和行为问题，包括焦虑症(22.3％)、抑郁症(12.5％)、注意力缺陷/多动症(7.3％)和自闭症谱系障碍(6.0％)(rubio-gozalbo等人2019)。儿童期和青春期早期的生长也严重延迟，大量患者的身高低于第十个百分位，体重低于第五十个百分位(waggoner等人1990)。
6、经典半乳糖血症患者最常见且令人衰弱的并发症之一是言语和声音障碍(hughes等人2009；rubio-gozalbo等人2019；waggoner等人1990)，24-63％的1型半乳糖血症儿童报告更严重的儿童言语失用症(cas)(shriberg等人2011a；waggoner等人1990；waisbren等人2012；webb等人2003)；与不明原因言语障碍儿童相比，继发于半乳糖血症的言语障碍儿童保守地认为cas风险高出6至8倍，估计高达180倍(potter等人2008；shriberg等人2011b)。cas是一种运动性言语障碍，由高级运动命令中断、神经肌肉系统损伤引起或两者兼而有之，其特点是不一致的辅音和元音错误、发音运动之间难以转换以及言语时韵律不当(duffy 2005；american speech-language-hearing association 2007)。cas可能是由于主要位于左半球布罗卡区(broca’s area)、辅助运动区或脑岛的高级运动指令中断所致，并且可能涉及小脑和基底神经节，导致难以规划和设计言语运动顺序(potter 2011)。cas不是一种可以随着时间的推移而消失的病症；相反，患有cas的儿童如果不接受治疗就不会取得进展。据报告，大约50-78％的患有经典半乳糖血症的儿童患有发育性语言障碍(dld)(potter等人2008；rubio-gozalbo等人2019；waggoner等人1990)。患有dld的儿童在使用和/或理解语言方面存在困难，并且语言能力落后于其它同龄儿童，即使智商范围相似。患有dld的儿童可能难以与同学交往、谈论自己的感受以及在学校学习，尽管dld通常在儿童时期首次发现和治疗，但它通常不会随着孩子长大而消失(norbury等人2016)。经典半乳糖血症的许多神经并发症是多因素造成的，患者常常同时表现出多种并发症(即认知障碍和言语迟缓)。这些患者需要改进的治疗方法。
技术实现思路
1、提供了用于产生编码galt的重组腺相关病毒(aav)病毒体的核酸载体构建体。所述载体构建体用于产生重组aav病毒体或颗粒，将其施用用于罹患半乳糖血症的受试者中的raav基因疗法以将编码galt的核酸递送到受试者的细胞，从而向受试者提供增加的galt活性以治疗和改善疾病。
2、提供了包含表达盒的aav载体，所述表达盒包含编码人半乳糖-1-磷酸尿苷酰转移酶(hgalt)的核苷酸序列，所述核苷酸序列可操作地连接到一个或多个促进hgalt编码序列的表达的调节元件和聚腺苷酸化(poly(a))尾信号；启动子包含巨细胞病毒(cmv)早期增强子/鸡β-肌动蛋白/兔β-球蛋白剪接受体(cag)启动子或延伸因子-1(ef-1)启动子；所述poly(a)尾信号包含牛生长激素(bgh)poly(a)尾信号或猿猴病毒40(sv40)poly(a)尾信号，两侧为反向末端重复(itr)核苷酸序列。hgalt可具有seq id no：1的氨基酸序列并且可以由包含与seq id no.：2的核苷酸序列或其反向互补序列具有至少85％同一性的核苷酸序列的核酸编码，所述核酸编码hgalt，且可包含seq id no：2的核苷酸序列。载体还可以含有wpre元件，该wpre元件可位于hgalt编码序列与polya信号序列之间。itr序列可以是野生型序列，例如aav2 itr，或可包括产生双链“自互补”aav载体的修饰的itr序列。
3、提供了特定的表达盒(亦即，具有转基因、调节序列和itr序列的重组aav基因组)并且具有seq id no.：3(pscaav-cag-hgalt)、seq id no.：4(paav2itr-cag-hgalt)或seqid no.：5(paav2itr-ef1a-hgalt)(或其反向互补序列)的核苷酸序列，或可以与seq idno.：3(pscaav-cag-hgalt)、seq id no.：4(paav2itr-cag-hgalt)或seq id no.：5(paav2itr-ef1a-hgalt)的核苷酸序列至少85％同一，并编码和表达人galt。
4、提供了特定的表达盒(不包括任何两侧的itr序列)并且具有seqid no.：19(pscaav cag-hgalt)、seq id no.：20(paav2itr-cag-hgalt)或seq id no.：21(paav2itref1a-hgalt)(或其反向互补序列)的核苷酸序列，或可以与seq id no.：19(pscaav-cag-hgalt)、seq id no.：20(paav2itr-cag-hgalt)或seq id no.：21(paav2itr-ef1a-hgalt)至少85％同一的核苷酸序列，并编码和表达人galt。
5、还提供了包含这些表达盒的质粒，包括图1中描绘的质粒paav2itr-cag-hgalt-kanr，其核苷酸序列提供于图2(以及seq id no：7的核苷酸序列和其反向互补体)；图3中描绘的质粒paav2itr-ef1a-hgalt-kanr，其核苷酸序列提供于图4(以及seq id no：8的核苷酸序列)中；和图5中描绘的pscaav-cag-hgalt-kanr，其核苷酸序列提供于图6(以及seq idno：6的核苷酸序列)中。
6、还提供了重组aav病毒体，所述重组aav病毒体包含编码hgalt的本文所述的重组aav基因组(表达盒)(例如，seq id no：3、4或5的表达盒)和aav衣壳。aav衣壳可以是aav9衣壳(氨基酸序列seq id no：18)。
7、还提供了治疗有需要的受试者，尤其是人受试者的半乳糖血症或增加半乳糖代谢的方法。还包括通过施用本文所述的raav病毒体来减少罹患半乳糖血症的受试者的疾病状况的方法，其中所述疾病状况包含黄疸、肝脾肿大、肝细胞功能不全、低血糖症、肾小管功能障碍、肌张力低下、脓毒症、白内障、共济失调、震颤、骨密度降低或原发性卵巢功能不全。提供了药物组合物，包括用于治疗有需要的受试者的半乳糖血症或增加半乳糖代谢，以及施用，包括但不限于静脉内施用或鞘内施用的方法。
8、还提供了产生如本文所述的重组aav病毒体的宿主细胞和方法。
9、还提供了降低有需要的受试者中的半乳糖水平的方法、降低有需要的受试者中的半乳糖醇水平的方法、降低有需要的受试者中的半乳糖-1-磷酸(gal-1p)水平的方法、在有需要的受试者中抑制白内障形成或促进白内障再吸收的方法、限制有需要的受试者中白内障形成的严重性的方法和预防有需要的受试者中生长受抑制的方法。
10、还提供了增加有需要的受试者中，包括肝脏、脑和骨骼肌中的galt酶活性的方法。
11、实施方案
12、1.一种重组腺相关病毒(aav)载体，所述重组aav载体包含表达盒，所述表达盒包含编码人半乳糖-1-磷酸尿苷酰转移酶(hgalt)的核苷酸序列，所述核苷酸序列可操作地连接到一个或多个促进hgalt编码序列的表达的调节元件和聚腺苷酸化(poly(a))尾信号：启动子包含巨细胞病毒(cmv)早期增强子/鸡β-肌动蛋白/兔β-球蛋白剪接受体(cag)启动子或延伸因子-1(ef-1)启动子；所述poly(a)尾信号包含牛生长激素(bgh)poly(a)尾信号或猿猴病毒40(sv40)poly(a)尾信号，两侧为反向末端重复(itr)核苷酸序列。
13、2.实施方案1的重组aav载体，所述hgalt包含seq id no.：1的氨基酸序列。
14、3.实施方案1或实施方案2的重组aav载体，编码galt的核酸包含与seq id no.：2的核苷酸序列或其反向互补序列具有至少85％同一性的核酸。
15、4.实施方案1-3中任一项的重组aav载体，编码galt的核酸包含seq id no.：2的核苷酸序列或其反向互补序列或由所述序列组成。
16、5.实施方案1-4中任一项的重组aav载体，其中所述启动子具有seq id no：9或seqid no：10的核苷酸序列或其反向互补体，并且所述polya信号序列具有seq id no：15或seqid no：16的核苷酸序列或其反向互补体。
17、6.实施方案1-5中任一项的重组aav载体，所述重组aav载体包含wpre元件。
18、7.实施方案1-6中任一项的重组aav载体，其中所述itr包含具有seq id no：11的核苷酸序列的5’aav2 itr和具有seq id no：12的核苷酸序列或其反向互补体的3’aav2itr。
19、8.实施方案1-6中任一项的重组aav载体，其中所述itr包含具有seq id no：11的核苷酸序列的5’itr和具有seq id no：13的核苷酸序列或其反向互补体的修饰的自互补3’itr。
20、9.实施方案1-8中任一项的重组aav载体，所述重组aav载体包含表达盒，所述表达盒包含与seq id no.：3、seq id no.：4或seq id no.：5的核苷酸序列或其反向互补序列具有至少85％同一性，并且编码人galt的核酸的核酸。
21、10.实施方案1-8中任一项的重组aav载体，所述重组aav载体包含表达盒，所述表达盒包含与seq id no.：19、seq id no.：20或seq d no.：21的核苷酸序列或其反向互补序列具有至少85％同一性，并且编码人galt的核酸。
22、11.实施方案1-9中任一项的重组aav载体，所述重组aav载体包含表达盒，所述表达盒包含具有seq id no.：3、seq id no.：4或seq id no.：5的核苷酸序列或其反向互补序列的核酸。
23、12.实施方案1-8或实施方案10中任一项的重组aav载体，所述重组aav载体包含表达盒，所述表达盒包含具有seq id no.：19、seq id no.：20或seq id no.：21的核苷酸序列或其反向互补序列的核酸。
24、13.一种重组自互补aav(scaav)载体，所述重组scaav载体包括包含scaav itr的实施方案1-12中任一项的重组aav载体。
25、14.一种重组aav病毒体，所述重组aav病毒体包含：1)aav衣壳；以及2)实施方案1-13中任一项的重组aav载体；并且所述aav衣壳蛋白用壳体包裹所述重组aav载体。
26、15.实施方案14的aav病毒体，其中所述aav衣壳具有与seq id no：18(aav9)至少85％同一的氨基酸序列。
27、16.实施方案15的aav病毒体，其中所述aav衣壳具有seq id no：18的氨基酸序列。
28、17.一种用于治疗有需要的受试者的半乳糖血症的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的实施方案14-16中任一项的aav病毒体。
29、18.一种增加有需要的受试者中的半乳糖代谢的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的实施方案14-16中任一项的aav病毒体。
30、19.一种减少罹患半乳糖血症的受试者的疾病状况的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的实施方案14-16中任一项的aav病毒体，所述疾病状况包含黄疸、肝脾肿大、肝细胞功能不全、低血糖症、肾小管功能障碍、肌张力低下、脓毒症、白内障、共济失调、震颤、骨密度降低或原发性卵巢功能不全。
31、20.实施方案17-19中任一项的方法，所述施用包括静脉内施用、动脉内、肌内施用、心内施用、鞘内施用、室下施用、硬膜外施用、脑内施用、脑室内施用、视网膜下施用、玻璃体内施用、关节内施用、眼内施用、腹膜内施用、子宫内施用、皮内施用、皮下施用、经皮施用、经粘膜施用或通过吸入施用。
32、21.实施方案17-19中任一项的方法，所述施用包括静脉内施用或鞘内施用。
33、22.一种aav载体质粒，所述aav载体质粒包含1)复制起点和2)实施方案1-13中任一项的重组aav载体。
34、23.实施方案22的aav载体质粒，所述aav载体质粒包含与seq id no.：6、seq idno.：7或seq id no.：8的核苷酸序列具有至少85％同一性的核酸，所述核酸编码人galt。
35、24.实施方案22的aav载体质粒，所述aav载体质粒包含与seq id no.：19、seq idno.：20或seq id no.：21的核苷酸序列具有至少85％同一性的核酸，所述核酸编码人galt。
36、25.实施方案22或23的aav载体质粒，所述aav载体质粒包含seq id no.：6、seq idno.：7或seq id no.：8的核苷酸序列。
37、26.实施方案22或24的aav载体质粒，所述aav载体质粒包含seq id no.：19、seqid no.：20或seq id no.：21的核苷酸序列。
38、27.一种细胞，所述细胞包含实施方案22-26中任一项的aav载体质粒和包含编码rep和cap的核苷酸序列的第二质粒；所述cap编码vp1、vp2和vp3；所述rep编码rep78、rep68、rep 52和rep40。
39、28.实施方案27的细胞，所述cap是aav9 cap。
40、29.一种产生aav病毒体的方法，所述方法包括在足以产生所述aav病毒体的条件下培养包含实施方案22-26中任一项的aav载体质粒、编码cap和rep的第二质粒的宿主细胞；所述cap编码vp1、vp2和vp3；所述rep编码rep78、rep68、rep 52和rep 40；并且任何另外的腺病毒辅助功能；并且分离由所述宿主细胞产生的aav病毒体。
41、30.一种降低有需要的受试者中的半乳糖水平的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的实施方案14-16中任一项的aav病毒体。
42、31.一种降低有需要的受试者中的半乳糖醇水平的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的实施方案14-16中任一项的aav病毒体。
43、32.一种降低有需要的受试者中的半乳糖-1-磷酸(gal-1p)的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的实施方案14-16中任一项的aav病毒体。
44、33.实施方案30-32中任一项的方法，其中肝脏、肌肉、脑、眼睛、卵巢、红细胞和/或血浆中的半乳糖水平、半乳糖醇水平和/或gal-1p水平降低。
45、34.实施方案33的方法，其中血浆中的半乳糖和半乳糖醇水平降低。
46、35.实施方案33的方法，其中红细胞中的半乳糖、半乳糖醇和gal-1p水平降低。
47、36.一种增加有需要的受试者中的galt蛋白表达的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的实施方案14-16中任一项的aav病毒体。
48、37.一种增加有需要的受试者中的galt酶活性的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的所述实施方案14-16中任一项的aav病毒体。
49、38.实施方案36-37中任一项的方法，其中肝脏、肌肉、脑、眼睛、红细胞和/或血浆中的galt蛋白表达和/或galt酶活性增加。
50、39.实施方案36-37中任一项的方法，其中脑中的galt蛋白表达和/或galt酶活性增加。
51、40.实施方案39的方法，其中皮层和/或脑组织中的galt蛋白表达和/或galt酶活性增加。
52、41.实施方案40的方法，其中神经细胞和/或神经胶质细胞中的galt蛋白表达和/或galt酶活性增加。
53、42.实施方案41的方法，其中浦肯野神经元(purkinje neuron)中的galt蛋白表达和/或galt酶活性增加。
54、43.一种改善运动和/或神经肌肉协调的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的实施方案14-16中任一项的aav病毒体。
55、44.一种改善运动力量的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的实施方案14-16中任一项的aav病毒体。
56、45.一种改善空间学习的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的实施方案14-16中任一项的aav病毒体。
57、46.一种减少和/或挽救卵巢衰竭的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的实施方案14-16中任一项的aav病毒体。
58、47.一种调节促卵泡激素、促黄体激素和/或抗苗勒氏管激素(anti-müllerianhormone)的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的实施方案14-16中任一项的aav病毒体。
59、48.一种在有需要的受试者中抑制白内障形成或促进白内障再吸收的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的实施方案14-16中任一项的aav病毒体。
60、49.一种限制有需要的受试者中白内障形成的严重性的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的实施方案14-16中任一项的aav病毒体。
61、50.实施方案48或实施方案49的方法，其中所述治疗有效量的所述aav病毒体在显现白内障之前施用。
62、51.一种减少有需要的受试者中的青春期前生长迟缓的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的实施方案14-16中任一项的aav病毒体。
63、52.一种改善有需要的受试者中的体重增加的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的实施方案14-16中任一项的aav病毒体。
64、53.一种降低有需要的受试者中的内脏神经肌肉缺陷的严重性的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的实施方案14-16中任一项的aav病毒体。
65、54.一种降低有需要的受试者中的神经和/或社会情感缺陷的严重性的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的实施方案14-16中任一项的aav病毒体。
66、55.实施方案54的方法，其中所述神经和/或社会情感缺陷是运动功能。
67、56.实施方案55的方法，其中所述运动功能是震颤和/或共济失调。
68、57.实施方案54的方法，其中所述神经和/或社会情感缺陷是焦虑症。
69、58.实施方案54的方法，其中所述神经和/或社会情感缺陷是抑郁症。
70、59.实施方案17-21或30-58中任一项的方法，其中所述aav病毒体在青春期开始之前施用。
71、60.实施方案59的方法，其中所述aav病毒体施用于年幼儿科受试者或儿科受试者。
72、61.实施方案17-21或30-60中任一项的方法，所述方法还包括监测半乳糖、gal-1p和/或半乳糖醇的水平的步骤。
1.一种用于治疗有需要的受试者的半乳糖血症的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的重组aav病毒体，所述重组aav病毒体包含：1)aav衣壳；以及2)包含表达盒的重组aav载体，所述表达盒包含编码人半乳糖-1-磷酸尿苷酰转移酶(hgalt)的核苷酸序列，所述核苷酸序列可操作地连接到一个或多个促进hgalt编码序列的表达的调节元件和聚腺苷酸化(poly(a))尾信号；启动子包含巨细胞病毒(cmv)早期增强子/鸡β-肌动蛋白/兔β-球蛋白剪接受体(cag)启动子或延伸因子-1(ef-1)启动子；所述poly(a)尾信号包含牛生长激素(bgh)poly(a)尾信号或猿猴病毒40(sv40)poly(a)尾信号，两侧为反向末端重复(itr)核苷酸序列；并且其中aav衣壳蛋白用壳体包裹所述重组aav载体。
2.一种增加有需要的受试者中的半乳糖代谢的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的aav病毒体，所述aav病毒体包含：1)aav衣壳；以及2)包含表达盒的重组aav载体，所述表达盒包含编码人半乳糖-1-磷酸尿苷酰转移酶(hgalt)的核苷酸序列，所述核苷酸序列可操作地连接到一个或多个促进hgalt编码序列的表达的调节元件和聚腺苷酸化(poly(a))尾信号；启动子包含巨细胞病毒(cmv)早期增强子/鸡β-肌动蛋白/兔β-球蛋白剪接受体(cag)启动子或延伸因子-1(ef-1)启动子；所述poly(a)尾信号包含牛生长激素(bgh)poly(a)尾信号或猿猴病毒40(sv40)poly(a)尾信号，两侧为反向末端重复(itr)核苷酸序列；并且其中aav衣壳蛋白用壳体包裹所述重组aav载体。
3.一种减少罹患半乳糖血症的受试者的疾病状况的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的aav病毒体，所述aav病毒体包含：1)aav衣壳；以及2)包含表达盒的重组aav载体，所述表达盒包含编码人半乳糖-1-磷酸尿苷酰转移酶(hgalt)的核苷酸序列，所述核苷酸序列可操作地连接到一个或多个促进hgalt编码序列的表达的调节元件和聚腺苷酸化(poly(a))尾信号；启动子包含巨细胞病毒(cmv)早期增强子/鸡β-肌动蛋白/兔β-球蛋白剪接受体(cag)启动子或延伸因子-1(ef-1)启动子；所述poly(a)尾信号包含牛生长激素(bgh)poly(a)尾信号或猿猴病毒40(sv40)poly(a)尾信号，两侧为反向末端重复(itr)核苷酸序列；并且其中aav衣壳蛋白用壳体包裹所述重组aav载体，
4.一种降低有需要的受试者中的半乳糖水平的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的aav病毒体，所述aav病毒体包含：1)aav衣壳；以及2)包含表达盒的重组aav载体，所述表达盒包含编码人半乳糖-1-磷酸尿苷酰转移酶(hgalt)的核苷酸序列，所述核苷酸序列可操作地连接到一个或多个促进hgalt编码序列的表达的调节元件和聚腺苷酸化(poly(a))尾信号；启动子包含巨细胞病毒(cmv)早期增强子/鸡γ-肌动蛋白/兔γ-球蛋白剪接受体(cag)启动子或延伸因子-1(ef-1)启动子；所述poly(a)尾信号包含牛生长激素(bgh)poly(a)尾信号或猿猴病毒40(sv40)poly(a)尾信号，两侧为反向末端重复(itr)核苷酸序列；并且其中aav衣壳蛋白用壳体包裹所述重组aav载体。
5.一种降低有需要的受试者中的半乳糖醇水平的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的aav病毒体，所述aav病毒体包含：1)aav衣壳；以及2)包含表达盒的重组aav载体，所述表达盒包含编码人半乳糖-1-磷酸尿苷酰转移酶(hgalt)的核苷酸序列，所述核苷酸序列可操作地连接到一个或多个促进hgalt编码序列的表达的调节元件和聚腺苷酸化(poly(a))尾信号；启动子包含巨细胞病毒(cmv)早期增强子/鸡β-肌动蛋白/兔γ-球蛋白剪接受体(cag)启动子或延伸因子-1(ef-1)启动子；所述poly(a)尾信号包含牛生长激素(bgh)poly(a)尾信号或猿猴病毒40(sv40)poly(a)尾信号，两侧为反向末端重复(itr)核苷酸序列；并且其中aav衣壳蛋白用壳体包裹所述重组aav载体。
6.一种降低有需要的受试者中的半乳糖-1-磷酸(gal-1p)的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的aav病毒体，所述aav病毒体包含：1)aav衣壳；以及2)包含表达盒的重组aav载体，所述表达盒包含编码人半乳糖-1-磷酸尿苷酰转移酶(hgalt)的核苷酸序列，所述核苷酸序列可操作地连接到一个或多个促进hgalt编码序列的表达的调节元件和聚腺苷酸化(poly(a))尾信号；启动子包含巨细胞病毒(cmv)早期增强子/鸡β-肌动蛋白/兔β-球蛋白剪接受体(cag)启动子或延伸因子-1(ef-1)启动子；所述poly(a)尾信号包含牛生长激素(bgh)poly(a)尾信号或猿猴病毒40(sv40)poly(a)尾信号，两侧为反向末端重复(itr)核苷酸序列；并且其中aav衣壳蛋白用壳体包裹所述重组aav载体。
7.一种增加有需要的受试者中的galt蛋白表达的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的aav病毒体，所述aav病毒体包含：1)aav衣壳；以及2)包含表达盒的重组aav载体，所述表达盒包含编码人半乳糖-1-磷酸尿苷酰转移酶(hgalt)的核苷酸序列，所述核苷酸序列可操作地连接到一个或多个促进hgalt编码序列的表达的调节元件和聚腺苷酸化(poly(a))尾信号；启动子包含巨细胞病毒(cmv)早期增强子/鸡β-肌动蛋白/兔β-球蛋白剪接受体(cag)启动子或延伸因子-1(ef-1)启动子；所述poly(a)尾信号包含牛生长激素(bgh)poly(a)尾信号或猿猴病毒40(sv40)poly(a)尾信号，两侧为反向末端重复(itr)核苷酸序列；并且其中aav衣壳蛋白用壳体包裹所述重组aav载体。
8.一种增加有需要的受试者中的galt酶活性的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的aav病毒体，所述aav病毒体包含：1)aav衣壳；以及2)包含表达盒的重组aav载体，所述表达盒包含编码人半乳糖-1-磷酸尿苷酰转移酶(hgalt)的核苷酸序列，所述核苷酸序列可操作地连接到一个或多个促进hgalt编码序列的表达的调节元件和聚腺苷酸化(poly(a))尾信号；启动子包含巨细胞病毒(cmv)早期增强子/鸡β-肌动蛋白/兔β-球蛋白剪接受体(cag)启动子或延伸因子-1(ef-1)启动子；所述poly(a)尾信号包含牛生长激素(bgh)poly(a)尾信号或猿猴病毒40(sv40)poly(a)尾信号，两侧为反向末端重复(itr)核苷酸序列；并且其中aav衣壳蛋白用壳体包裹所述重组aav载体。
9.一种改善运动和/或神经肌肉协调的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的aav病毒体，所述aav病毒体包含：1)aav衣壳；以及2)包含表达盒的重组aav载体，所述表达盒包含编码人半乳糖-1-磷酸尿苷酰转移酶(hgalt)的核苷酸序列，所述核苷酸序列可操作地连接到一个或多个促进hgalt编码序列的表达的调节元件和聚腺苷酸化(poly(a))尾信号；启动子包含巨细胞病毒(cmv)早期增强子/鸡β-肌动蛋白/兔β-球蛋白剪接受体(cag)启动子或延伸因子-1(ef-1)启动子；所述poly(a)尾信号包含牛生长激素(bgh)poly(a)尾信号或猿猴病毒40(sv40)poly(a)尾信号，两侧为反向末端重复(itr)核苷酸序列；并且其中aav衣壳蛋白用壳体包裹所述重组aav载体。
10.一种改善运动力量的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的aav病毒体，所述aav病毒体包含：1)aav衣壳；以及2)包含表达盒的重组aav载体，所述表达盒包含编码人半乳糖-1-磷酸尿苷酰转移酶(hgalt)的核苷酸序列，所述核苷酸序列可操作地连接到一个或多个促进hgalt编码序列的表达的调节元件和聚腺苷酸化(poly(a))尾信号；启动子包含巨细胞病毒(cmv)早期增强子/鸡β-肌动蛋白/兔β-球蛋白剪接受体(cag)启动子或延伸因子-1(ef-1)启动子；所述poly(a)尾信号包含牛生长激素(bgh)poly(a)尾信号或猿猴病毒40(sv40)poly(a)尾信号，两侧为反向末端重复(itr)核苷酸序列；并且其中aav衣壳蛋白用壳体包裹所述重组aav载体。
11.一种改善空间学习的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的aav病毒体，所述aav病毒体包含：1)aav衣壳；以及2)包含表达盒的重组aav载体，所述表达盒包含编码人半乳糖-1-磷酸尿苷酰转移酶(hgalt)的核苷酸序列，所述核苷酸序列可操作地连接到一个或多个促进hgalt编码序列的表达的调节元件和聚腺苷酸化(poly(a))尾信号；启动子包含巨细胞病毒(cmv)早期增强子/鸡β-肌动蛋白/兔β-球蛋白剪接受体(cag)启动子或延伸因子-1(ef-1)启动子；所述poly(a)尾信号包含牛生长激素(bgh)poly(a)尾信号或猿猴病毒40(sv40)poly(a)尾信号，两侧为反向末端重复(itr)核苷酸序列；并且其中aav衣壳蛋白用壳体包裹所述重组aav载体。
12.一种减少和/或挽救卵巢衰竭的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的aav病毒体，所述aav病毒体包含：1)aav衣壳；以及2)包含表达盒的重组aav载体，所述表达盒包含编码人半乳糖-1-磷酸尿苷酰转移酶(hgalt)的核苷酸序列，所述核苷酸序列可操作地连接到一个或多个促进hgalt编码序列的表达的调节元件和聚腺苷酸化(poly(a))尾信号；启动子包含巨细胞病毒(cmv)早期增强子/鸡β-肌动蛋白/兔β-球蛋白剪接受体(cag)启动子或延伸因子-1(ef-1)启动子；所述poly(a)尾信号包含牛生长激素(bgh)poly(a)尾信号或猿猴病毒40(sv40)poly(a)尾信号，两侧为反向末端重复(itr)核苷酸序列；并且其中aav衣壳蛋白用壳体包裹所述重组aav载体。
13.一种调节促卵泡激素、促黄体激素和/或抗苗勒氏管激素的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的aav病毒体，所述aav病毒体包含：1)aav衣壳；以及2)包含表达盒的重组aav载体，所述表达盒包含编码人半乳糖-1-磷酸尿苷酰转移酶(hgalt)的核苷酸序列，所述核苷酸序列可操作地连接到一个或多个促进hgalt编码序列的表达的调节元件和聚腺苷酸化(poly(a))尾信号；启动子包含巨细胞病毒(cmv)早期增强子/鸡β-肌动蛋白/兔β-球蛋白剪接受体(cag)启动子或延伸因子-1(ef-1)启动子；所述poly(a)尾信号包含牛生长激素(bgh)poly(a)尾信号或猿猴病毒40(sv40)poly(a)尾信号，两侧为反向末端重复(itr)核苷酸序列；并且其中aav衣壳蛋白用壳体包裹所述重组aav载体。
14.一种在有需要的受试者中抑制白内障形成或促进白内障再吸收的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的aav病毒体，所述aav病毒体包含：1)aav衣壳；以及2)包含表达盒的重组aav载体，所述表达盒包含编码人半乳糖-1-磷酸尿苷酰转移酶(hgalt)的核苷酸序列，所述核苷酸序列可操作地连接到一个或多个促进hgalt编码序列的表达的调节元件和聚腺苷酸化(poly(a))尾信号；启动子包含巨细胞病毒(cmv)早期增强子/鸡β-肌动蛋白/兔β-球蛋白剪接受体(cag)启动子或延伸因子-1(ef-1)启动子；所述poly(a)尾信号包含牛生长激素(bgh)poly(a)尾信号或猿猴病毒40(sv40)poly(a)尾信号，两侧为反向末端重复(itr)核苷酸序列；并且其中aav衣壳蛋白用壳体包裹所述重组aav载体。
15.一种限制有需要的受试者中白内障形成的严重性的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的aav病毒体，所述aav病毒体包含：1)aav衣壳；以及2)包含表达盒的重组aav载体，所述表达盒包含编码人半乳糖-1-磷酸尿苷酰转移酶(hgalt)的核苷酸序列，所述核苷酸序列可操作地连接到一个或多个促进hgalt编码序列的表达的调节元件和聚腺苷酸化(poly(a))尾信号；启动子包含巨细胞病毒(cmv)早期增强子/鸡β-肌动蛋白/兔β-球蛋白剪接受体(cag)启动子或延伸因子-1(ef-1)启动子；所述poly(a)尾信号包含牛生长激素(bgh)poly(a)尾信号或猿猴病毒40(sv40)poly(a)尾信号，两侧为反向末端重复(itr)核苷酸序列；并且其中aav衣壳蛋白用壳体包裹所述重组aav载体。
16.一种减少有需要的受试者中的青春期前生长迟缓的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的aav病毒体，所述aav病毒体包含：1)aav衣壳；以及2)包含表达盒的重组aav载体，所述表达盒包含编码人半乳糖-1-磷酸尿苷酰转移酶(hgalt)的核苷酸序列，所述核苷酸序列可操作地连接到一个或多个促进hgalt编码序列的表达的调节元件和聚腺苷酸化(poly(a))尾信号；启动子包含巨细胞病毒(cmv)早期增强子/鸡β-肌动蛋白/兔β-球蛋白剪接受体(cag)启动子或延伸因子-1(ef-1)启动子；所述poly(a)尾信号包含牛生长激素(bgh)poly(a)尾信号或猿猴病毒40(sv40)poly(a)尾信号，两侧为反向末端重复(itr)核苷酸序列；并且其中aav衣壳蛋白用壳体包裹所述重组aav载体。
17.一种改善有需要的受试者中的体重增加的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的aav病毒体，所述aav病毒体包含：1)aav衣壳；以及2)包含表达盒的重组aav载体，所述表达盒包含编码人半乳糖-1-磷酸尿苷酰转移酶(hgalt)的核苷酸序列，所述核苷酸序列可操作地连接到一个或多个促进hgalt编码序列的表达的调节元件和聚腺苷酸化(poly(a))尾信号；启动子包含巨细胞病毒(cmv)早期增强子/鸡β-肌动蛋白/兔β-球蛋白剪接受体(cag)启动子或延伸因子-1(ef-1)启动子；所述poly(a)尾信号包含牛生长激素(bgh)poly(a)尾信号或猿猴病毒40(sv40)poly(a)尾信号，两侧为反向末端重复(itr)核苷酸序列；并且其中aav衣壳蛋白用壳体包裹所述重组aav载体。
18.一种降低有需要的受试者中的内脏神经肌肉缺陷的严重性的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的aav病毒体，所述aav病毒体包含：1)aav衣壳；以及2)包含表达盒的重组aav载体，所述表达盒包含编码人半乳糖-1-磷酸尿苷酰转移酶(hgalt)的核苷酸序列，所述核苷酸序列可操作地连接到一个或多个促进hgalt编码序列的表达的调节元件和聚腺苷酸化(poly(a))尾信号；启动子包含巨细胞病毒(cmv)早期增强子/鸡β-肌动蛋白/兔β-球蛋白剪接受体(cag)启动子或延伸因子-1(ef-1)启动子；所述poly(a)尾信号包含牛生长激素(bgh)poly(a)尾信号或猿猴病毒40(sv40)poly(a)尾信号，两侧为反向末端重复(itr)核苷酸序列；并且其中aav衣壳蛋白用壳体包裹所述重组aav载体。
19.一种降低有需要的受试者中的神经和/或社会情感缺陷的严重性的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的aav病毒体，所述aav病毒体包含：1)aav衣壳；以及2)包含表达盒的重组aav载体，所述表达盒包含编码人半乳糖-1-磷酸尿苷酰转移酶(hgalt)的核苷酸序列，所述核苷酸序列可操作地连接到一个或多个促进hgalt编码序列的表达的调节元件和聚腺苷酸化(poly(a))尾信号；启动子包含巨细胞病毒(cmv)早期增强子/鸡β-肌动蛋白/兔β-球蛋白剪接受体(cag)启动子或延伸因子-1(ef-1)启动子；所述poly(a)尾信号包含牛生长激素(bgh)poly(a)尾信号或猿猴病毒40(sv40)poly(a)尾信号，两侧为反向末端重复(itr)核苷酸序列；并且其中aav衣壳蛋白用壳体包裹所述重组aav载体。
20.如权利要求1至19中任一项所述的方法，其中所述hgalt包含seq id no.：1的氨基酸序列
21.如权利要求1至20中任一项所述的方法，其中编码galt的核酸包含与seq id no.：2的核苷酸序列或其反向互补序列具有至少85％同一性的核酸。
22.如权利要求1至21中任一项所述的方法，其中编码galt的核酸包含seq id no.：2的核苷酸序列或其反向互补序列或由所述序列组成。
23.如权利要求1至22中任一项所述的方法，其中所述启动子具有seq id no：9或seqid no：10的核苷酸序列或其反向互补体，并且所述polya信号序列具有seq id no：15或seqid no：16的核苷酸序列或其反向互补体。
24.如权利要求1至23中任一项所述的方法，其包含wpre元件。
25.如权利要求1至24中任一项所述的方法，其中所述itr包含具有seq id no：11的核苷酸序列或其反向互补体的5’aav2 itr和具有seq id no：12的核苷酸序列或其反向互补体的3’aav 2itr。
26.如权利要求1至25中任一项所述的方法，其中所述itr包含具有seq id no：11的核苷酸序列或其反向互补体的5’itr和具有seq id no：13的核苷酸序列或其反向互补体的修饰的自互补3’itr。
27.如权利要求1至26中任一项所述的方法，其包含表达盒，所述表达盒包含与seq idno.：3、seq id no.：4或seq id no.：5的核苷酸序列或其反向互补序列具有至少85％同一性，并且编码人galt的核酸。
28.如权利要求1至27中任一项所述的方法，其包含表达盒，所述表达盒包含与seq idno.：19、seq id no.：20或seq id no.：21的核苷酸序列或其反向互补序列具有至少85％同一性，并且编码人galt的核酸。
29.如权利要求1至28中任一项所述的方法，其包含表达盒，所述表达盒包含具有seqid no.：3、seq id no.：4或seq id no.：5的核苷酸序列或其反向互补序列的核酸。
30.如权利要求1至29中任一项所述的方法，其包含表达盒，所述表达盒包含具有seqid no.：19、seq id no.：20或seq id no.：21的核苷酸序列或其反向互补序列的核酸。
31.如权利要求1至30中任一项所述的方法，其中所述重组aav载体是自互补的(scaav)。
32.如权利要求1至31中任一项所述的方法，其中所述aav衣壳具有与seq id no：18(aav9)至少85％同一的氨基酸序列。
33.如权利要求1至32中任一项所述的方法，其中所述aav衣壳具有seq id no：18的氨基酸序列。
34.如权利要求1至33中任一项所述的方法，所述施用包括静脉内施用、动脉内、肌内施用、心内施用、鞘内施用、室下施用、硬膜外施用、脑内施用、脑室内施用、视网膜下施用、玻璃体内施用、关节内施用、眼内施用、腹膜内施用、子宫内施用、皮内施用、皮下施用、经皮施用、经粘膜施用或通过吸入施用。
35.如权利要求1至34中任一项所述的方法，所述施用包括静脉内施用或鞘内施用。
36.如权利要求4-6或20-35中任一项所述的方法，其中肝脏、肌肉、脑、眼睛、卵巢、红细胞和/或血浆中的半乳糖水平、半乳糖醇水平和/或gal-1p水平降低。
37.如权利要求4-6或20至36中任一项所述的方法，其中血浆中的半乳糖和半乳糖醇水平降低。
38.如权利要求4-6或20至37中任一项所述的方法，其中红细胞中的半乳糖、半乳糖醇和gal-1p水平降低。
39.如权利要求7-8或20-35中任一项所述的方法，其中肝脏、肌肉、脑、眼睛、红细胞和/或血浆中的galt蛋白表达和/或galt酶活性增加。
40.如权利要求7-8、20-35或39中任一项所述的方法，其中脑中的galt蛋白表达和/或galt酶活性增加。
41.如权利要求7-8、20-35或39-40中任一项所述的方法，其中皮层和/或脑组织中的galt蛋白表达和/或galt酶活性增加。
42.如权利要求7-8、20-35或39-41中任一项所述的方法，其中神经细胞和/或神经胶质细胞中的galt蛋白表达和/或galt酶活性增加。
43.如权利要求7-8、20-35或39-42中任一项所述的方法，其中浦肯野神经元中的galt蛋白表达和/或galt酶活性增加。
44.如权利要求14-15或20-35中任一项所述的方法，其中所述治疗有效量的所述aav病毒体在显现白内障之前施用。
45.如权利要求19-35中任一项所述的方法，其中所述神经和/或社会情感缺陷是运动功能。
46.如权利要求45所述的方法，其中所述运动功能是震颤和/或共济失调。
47.如权利要求19-35中任一项所述的方法，其中所述神经和/或社会情感缺陷是焦虑症。
48.如权利要求19-35中任一项所述的方法，其中所述神经和/或社会情感缺陷是抑郁症。
49.如权利要求1-48中任一项所述的方法，其中所述aav病毒体在青春期开始之前施用。
50.如权利要求49所述的方法，其中所述aav病毒体施用于年幼儿科受试者或儿科受试者。
51.如权利要求1至50中任一项所述的方法，所述方法还包括监测半乳糖、gal-1p和/或半乳糖醇的水平的步骤。
