本发明属于生物医药，具体涉及一种tls分类方法及应用和限制色氨酸摄入在促进tls成熟中的应用，更具体的涉及采用不同标志物对tls进行亚分类方法及其在癌症预后中的应用，以及色氨酸在调控不同类型tls中的应用。
背景技术：
1、针对肝癌的治疗，临床上仍然以手术为主，尽管先进的影像学检查的应用极大提高了hcc的检出率，但hcc早期转移、术后高复发率的特性依然使得影像学检查滞后于疾病进展状态，多数患者手术后无法明确肿瘤进展阶段，缺乏对预后的可靠预测，影响对治疗手段的选择与医疗决策。因此，探索与肿瘤生物学行为密切相关且可检测的生物标志物，对于评估hcc肿瘤进展阶段、预测患者预后等具有重要意义。
2、三级淋巴结构(tertiary lymphoid structures，tls)，又名第三淋巴样器官或异位淋巴样结构，是非生理条件下非淋巴组织中后天产生的有组织的免疫细胞聚集体，一般出现于自身免疫性疾病、慢性感染、癌症所致的慢性炎症组织中。不同成熟状态的tls存在于多种癌种的各个疾病阶段,成熟型tls拥有对b细胞发育和功能至关重要的生发中心。相反，不成熟型tls没有形成良好的生发中心，无法充分支持b细胞功能的完全获得。越来越多的证据强调了成熟型tls作为抗肿瘤免疫的内源性调节剂以及在增强抗原呈递、细胞因子介导的信号传导和释放肿瘤特异性抗体方面的关键作用。成熟型tls的出现概率在不同癌种和不同患者间呈现出相当大的不同，反映了它们动态发展和对局部微环境信号的复杂响应。这种tls的异质性可能影响整体的抗肿瘤免疫反应和临床预后。尽管有这些认知，由于缺乏一个适用于不同tls群体的标准化分类系统，准确确定tls的发育状态仍然是一个巨大的挑战。此外，瘤内促进tls成熟的因素仍是未知的，以及目前尚无通过促进tls成熟以改善瘤内免疫反应的策略，阐明这一点可能为促进tls成熟提供新的策略，以增强治疗的效果。
3、tls根据其病理组织结构可分为成熟和不成熟两个发育阶段，相比起仅有稀疏t、b淋巴细胞聚集的不成熟tls，以滤泡树突状细胞和生发中心出现为标志的成熟tls已被广泛报道与更佳的预后及免疫治疗疗效相关。然而，在目前常用的病理染色判断下，成熟tls占比仅9％，其余tls均被归为是不成熟tls，限制了前者作为肝癌预后分子标志物的应用。此外，由于肿瘤内tls是短暂、动态成熟演进的免疫结构，将所有不成熟tls混为一谈并不合理，并且仅用目前染色的标志物难以区分哪些不成熟tls是最终会进入成熟阶段的成熟前tls，哪些不成熟tls则由于缺少某些条件或受某些因素的限制始终停留在不成熟阶段。因此，找到进一步区分不成熟tls亚型的关键标志物，对于用来预测潜在获益的免疫治疗人群，扩大治疗获益人群的比例，具有重要意义。
技术实现思路
1、tls在癌症中的预后和预测价值，推动了人们发掘tls的抗肿瘤免疫潜力的兴趣。尽管许多癌症类型中都已鉴定出了tls，但用于定义和表征tls的标志物在不同研究中通常并不统一，这使得比较预测值和评估癌症类型之间的tls异质性的工作异常复杂。因此，开发测量tls数量和组成的标准化方法，有助于进一步揭示tls在不同疾病环境中的预测和预后评估价值。tls状态在分子水平的定义，则有助于提高tls作为预后和预测标志物的价值。最后，更好地理解tls的功能和tls对自身免疫毒性的潜在贡献，对于最大限度地发挥tls作为新的潜在治疗靶点也具有非同寻常的价值。
2、本发明通过对tls的分析，提出了如下技术方案：
3、限制色氨酸摄入产品的如下任一应用：
4、a)促进肿瘤内成熟型tls形成中的应用；
5、b)促进幼稚b细胞向gc-b细胞分化中的应用；
6、c)与免疫检查点阻断剂的组合物在制备用于治疗肝癌药物中的应用。
7、作为一些具体的实施方式，所述限制色氨酸摄入产品包括低色氨酸食物或色氨酸抑制剂。
8、进一步的，本发明还提出了一种药物组合物在肝癌治疗中的应用，所述药物组合物含色氨酸抑制剂和免疫检查点阻断剂，优选的，所述免疫检查点阻断剂为pd-1抑制剂。
9、作为一个更具体的实施方式，所述pd-1抑制剂为抗pd-1抗体。
10、进一步的，所述色氨酸抑制剂为色氨酸代谢酶抑制剂，优选的，所述代谢酶包括吲哚胺-2,3-双加氧酶、色氨酸-2,3-双加氧酶、犬尿氨酸-3-单加氧酶或色氨酸羟化酶。
11、作为一个更具体的实施方式，所述代谢酶为吲哚胺-2,3-双加氧酶和色氨酸-2,3-双加氧酶，优选的，所述色氨酸抑制剂为ido1/tdo双靶抑制剂hti-1090。
12、进一步的，本发明通过对tls(三级淋巴结构)的分析，将不成熟的tls进一步亚分类为趋向成熟型tls和偏离成熟型tls，针对本发明中提出的促进肿瘤内成熟型tls形成中的应用进一步的可以是：促进肿瘤内趋向成熟型tls分化成成熟型tls中的应用，所述趋向成熟型tls为不成熟型tls中弥漫性表达cxcl9的tls。
13、本发明基于对tls的进一步亚分类，通过研究发现，趋向成熟型tls具有如下任一应用：
14、a1)制备用于肝癌患者预后风险评估的产品；
15、a2)制备用于肝癌患者预后受试者分层的产品；
16、a3)制备用于肝癌患者预后富集人群的产品；
17、a4)制备用于预测肝癌患者生存率的产品；
18、a5)制备用于评估肝癌患者预后用药疗效的产品；
19、a6)构建肝癌预后风险评估的模型/系统/设备/计算机程序产品；
20、a7)构建预测肝癌预后生存率的模型/系统/设备/计算机程序产品；
21、所述趋向成熟型tls为弥漫性表达cxcl9的不成熟型tls。
22、作为一个具体的实施方式，本发明根据tls分类的经典表达所述不成熟型tls为cd3+、cd20+、cd23-和cd21-的tls。
23、作为一种实施方式，本发明提供一种用于预后评估或诊断肝癌的产品，所述产品含检测标志物组合的试剂，所述标志物组合为cxcl9、cd3、cd20、cd23和cd21。
24、进一步的，所述产品为体外诊断产品，优选的，所述产品包括试剂盒、试纸或基因芯片。
25、进一步的，所述试剂包含在基因水平和/或蛋白质水平上检测受试者样本中标志物组合表达信息的试剂。
26、作为一些方式，所述试剂包含通过免疫组织化学法、原位分子杂交组化、western印迹法、northern印迹法、pcr、rt-pcr或生物芯片法检测技术检测受试者样本中标志物组合表达信息的试剂。
27、作为另一种具体的实施方式，本发明提供了一种肝癌预后风险评估的计算机程序，包括计算机程序/指令，所述计算机程序/指令被处理器执行时实现以下步骤：
28、s1：采集受试者组织样本中标志物cxcl9、cd3、cd20、cd23和cd21的表达信息，将存在cd20+b细胞和cd3+t细胞聚集的区域定义为tls；将cd21-和cd23-的tls定义为不成熟tls，cd21+或cd23+的tls定义为成熟tls；
29、s2：将组织样本中存在至少1个成熟tls的受试者分类为成熟tls组，样本中不存在成熟tls的受试者分类为不成熟tls组；
30、s3：将不成熟tls组受试者组织样本所有不成熟tls的cxcl9表达量的平均值作为该受试者cxcl9的表达数值；
31、s4：进行风险评估,以不成熟tls组受试者组织样本中cxcl9表达量的最佳截断值为阙值，当不成熟tls组受试者组织样本中的cxcl9表达量高于阙值时评估为低复发风险，低于阙值时评估为高复发风险。
32、作为一种实施方式，本发明还提供了一种计算机可读存储介质，所述计算机可读存储介质用于存储所述的计算机程序。
33、作为一种实施方式，本发明提供了一种计算机系统/设备/装置，包括存储器、处理器以及存储在存储器上的计算机程序，所述计算机程序为上述的计算机程序。
34、本发明达到的技术效果：
35、本发明通过单细胞空间转录组学，在肝细胞癌(hccs)中全面描述了tls在各个成熟阶段及其微环境的概貌，根据tls的发育轨迹，将经典的不成熟型tls分为趋向成熟型tls和偏离成熟型tls，并获得区分趋向成熟型tls和偏离成熟型tls的核心标志物组合，通过在206例肝细胞癌患者中，研究显示tls中cxcl9水平较高的不成熟型tls患者比cxcl9水平较低的患者预后更好，更进一步的，研究发现，由肿瘤细胞塑造的富含色氨酸的代谢微环境可促进偏离成熟型tls的形成。限制色氨酸摄入可促进瘤内tls的成熟，并增强控制肿瘤的作用，与抗pd-1治疗起协同作用。因此，促进tls成熟是一种新的抗肿瘤策略，可以改进免疫治疗的效果。
1.限制色氨酸摄入产品的如下任一应用：
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述限制色氨酸摄入产品包括低色氨酸食物或色氨酸抑制剂。
3.一种药物组合物在肝癌治疗中的应用，其特征在于，所述药物组合物含色氨酸抑制剂和免疫检查点阻断剂，优选的，所述免疫检查点阻断剂为pd-1抑制剂。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述pd-1抑制剂为抗pd-1抗体。
5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述色氨酸抑制剂为色氨酸代谢酶抑制剂，优选的，所述代谢酶包括吲哚胺-2,3-双加氧酶、色氨酸-2,3-双加氧酶、犬尿氨酸-3-单加氧酶或色氨酸羟化酶。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述代谢酶为吲哚胺-2,3-双加氧酶和色氨酸-2,3-双加氧酶，优选的，所述色氨酸抑制剂为ido1/tdo双靶抑制剂hti-1090。
7.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述促进肿瘤内成熟型tls形成中的应用为：促进肿瘤内趋向成熟型tls分化成成熟型tls中的应用，所述趋向成熟型tls为不成熟型tls中弥漫性表达cxcl9的tls。
8.趋向成熟型tls的如下任一应用：
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述不成熟型tls为cd3+、cd20+、cd23-和cd21-的tls。
10.一种用于预后评估或诊断肝癌的产品，其特征在于，所述产品含检测标志物组合的试剂，所述标志物组合为cxcl9、cd3、cd20、cd23和cd21。
11.根据权利要求10所述的产品，其特征在于，所述产品为体外诊断产品，优选的，所述产品包括试剂盒、试纸或基因芯片。
12.根据权利要求10所述的产品，其特征在于，所述试剂包含在基因水平和/或蛋白质水平上检测受试者样本中标志物组合表达信息的试剂。
13.根据权利要求10所述的产品，其特征在于，所述试剂包含通过免疫组织化学法、原位分子杂交组化、western印迹法、northern印迹法、pcr、rt-pcr或生物芯片法检测技术检测受试者样本中标志物组合表达信息的试剂。
14.一种肝癌预后风险评估的计算机程序，包括计算机程序/指令，其特征在于，所述计算机程序/指令被处理器执行时实现以下步骤：
15.一种计算机可读存储介质，其特征在于，所述计算机可读存储介质用于存储权利要求14所述的计算机程序。
16.一种计算机系统/设备/装置，包括存储器、处理器以及存储在存储器上的计算机程序，其特征在于，所述计算机程序为权利要求14所述的计算机程序。
