本发明涉及心肌肌钙蛋白检测,具体涉及一种心肌肌钙蛋白i-c复合物核酸适配体及其应用。
背景技术:
1、心肌肌钙蛋白对心肌具有较高的敏感性和特异性,是诊断心肌梗死的首选生物标志物。心肌肌钙蛋白(ctn)是由心肌肌钙蛋白t(ctnt)、心肌肌钙蛋白i(ctni)、心肌肌钙蛋白c(ctnc)这三种不同基因的亚基组成的调节肌肉收缩的蛋白,也是一种多肽。由钙介导的肌动蛋白和肌球蛋白之间的相互反应受之调节。由于骨骼肌和心肌中的tnc具有很高的同源性,因此心肌tnc不具有心肌组织特异性,而心肌组织中只有ctni和ctnt具有心肌组织特异性,所以,目前用于临床实验室诊断的是ctni和ctnt。
2、ctn以ctni-c-t复合物和游离ctni形式存在于心肌细胞中,心肌损伤时释放到血循环中后,ctni-c-t进一步分解为ctni-c复合物和游离ctni。故血循环中除ctni-c-t、游离ctni外还有ctni-c,而且ctni-c是其在血液中的主要形式,占90%以上。目前大部分文献中检测ami使用的生物标志物为ctni,但是据研究表明游离形式的ctni极不稳定,而i-c复合物中的ctni则稳定很多。因此,将血液中i-c复合物作为检测靶标,开发能够结合ctni-c蛋白的高亲和力核酸适配体具有重要意义。
技术实现思路
1、针对现有技术所存在的技术问题,本发明提供了一种核酸适配体,该核酸适配体作为生物识别元件可以特异性识别ctni-c蛋白,并且对ctni-c蛋白具有良好的亲和力及特异性。
2、本发明的目的之一在于保护这些核酸适配体,所述核酸适配体选自下述a~e任一项所述的核苷酸序列:
3、a、如seq id no.1~8任一项所示的核苷酸序列;
4、b、与seq id no.1~8任一所示的核苷酸序列具有60%以上同源性并且能够特异性结合心肌肌钙蛋白i-c复合物的核苷酸序列;
5、c、由seq id no.1~8任一所示的核苷酸序列衍生的能够特异性结合心肌肌钙蛋白i-c复合物的核苷酸序列;
6、d、能够与seq id no.1~8任一项所示的核苷酸序列在严格条件下杂交的核苷酸序列;
7、e、由seq id no.1~8任一所示的核苷酸序列转录的rna序列。
8、上述核酸适配体对ctni-c蛋白具有良好的亲和力,其解离系数kd值范围为nm级别,分析量小、易于修饰和保存且与抗体相比,适配体对温度、ph和离子强度等具有更高的稳定性,更容易合成和修饰,生命周期更长,成本更低。
9、进一步,所述核酸适配体的核苷酸序列被修饰。所述修饰选自磷酸化、甲基化、氨基化、巯基化、用硫取代氧、用硒取代氧或同位素化中的任一种或多种。
10、进一步,所述修饰选自下述(1)~(3)中的任一种:
11、(1)对核糖的修饰:氟代(2’-fluoro)、氨基化(2’-amino)以及甲基化(2’-omethyl);
12、(2)对磷酸骨架的修饰:包括硫代磷酸酯修饰与采用具有特殊核糖骨架的异种核酸(xeno nucleic acids,xna),如锁核酸(lna)、己糖醇核酸(hna)、解锁的核酸(una)、2’-脱氧2’-氟-β-d-阿拉伯糖(fana)核酸库;
13、(3)对碱基的修饰:对碱基进行替换或者添加非天然碱基。
14、进一步,所述核酸适配体的核苷酸序列上连接荧光标记物、放射性物质、治疗性物质、生物素、地高辛、纳米发光材料、小肽、sirna、氧化还原标记和酶标记中的一种或多种。
15、本发明的目的之二在于保护上述心肌肌钙蛋白i-c复合物核酸适配体在制备纯化心肌肌钙蛋白i-c复合物或制备检测心肌肌钙蛋白i-c复合物的试剂盒中的应用。
16、本发明的目的之三在于保护一种试剂盒,所述试剂盒包括上述的核酸适配体。
17、进一步,所述试剂盒用于检测受试者血清、血浆中的心肌肌钙蛋白i-c复合物水平或用于诊断受试者是否具有心肌细胞损伤。
1.一种心肌肌钙蛋白i-c复合物核酸适配体,其特征在于,所述核酸适配体选自下述a~e任一项所述的核苷酸序列:
2.根据权利要求1所述的心肌肌钙蛋白i-c复合物核酸适配体,其特征在于,所述核酸适配体的核苷酸序列被修饰。
3.根据权利要求2所述的心肌肌钙蛋白i-c复合物核酸适配体,其特征在于,所述修饰选自磷酸化、甲基化、氨基化、巯基化、用硫取代氧、用硒取代氧或同位素化中的任一种或多种。
4.根据权利要求权利要求2所述的心肌肌钙蛋白i-c复合物核酸适配体,其特征在于,所述修饰选自下述(1)~(3)中的任一种:
5.根据权利要求权利要求1所述的心肌肌钙蛋白i-c复合物核酸适配体,其特征在于,所述核酸适配体的核苷酸序列上连接荧光标记物、放射性物质、治疗性物质、生物素、地高辛、纳米发光材料、小肽、sirna、氧化还原标记和酶标记中的一种或多种。
6.权利要求1~5任一项所述的心肌肌钙蛋白i-c复合物核酸适配体在制备纯化心肌肌钙蛋白i-c复合物或制备检测心肌肌钙蛋白i-c复合物的试剂盒中的应用。
7.一种试剂盒,其特征在于,所述试剂盒包括权利要求1~5任一项所述的核酸适配体。
8.根据权利要求7所述的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒用于检测受试者血清、血浆中的心肌肌钙蛋白i-c复合物水平或用于诊断受试者是否具有心肌细胞损伤。
