本发明涉及植物提取，更具体地说，涉及一种汉麻籽多肽的制备方法及其应用。
背景技术：
1、汉麻(cannabis sativa l.)也称为火麻。汉麻籽具有较高的营养价值，含有丰富的氨基酸、不饱和脂肪酸、矿物质元素以及生物活性成分，其开发前景已经越来越受到人们的关注。汉麻全籽的蛋白质含量一般在20～25％之间，而脱壳后籽仁的蛋白质含量超过40％。汉麻种子是一种十分优异的蛋白质来源，具有很高的开发研究价值。
2、植物蛋白生产经济成本低，无动物养殖场地限制，不产生温室气体，伴随着世界人口增长，耕地面积减少、全球变暖等问题出现，使用植物蛋白替代动物蛋白正逐渐被越来越多的人所关注。植物蛋白常见的方法包括有机溶剂提取法、盐溶提取法、反胶束萃取法等。有机溶剂提取法主要针对不溶于水、酸液、碱液和稀盐溶液的蛋白质，因为这类蛋白质和脂质结合牢固，只溶解于乙醇、丙酮等亲脂性较强的有机溶剂，且必须在低温下进行操作以防止蛋白质变性。
3、植物蛋白多肽是植物蛋白在特定条件下水解后形成的一种小分子多肽。汉麻籽多肽是植物蛋白多肽的一种，目前还未有汉麻籽多肽在促进胶原蛋白分泌的相关报导。
技术实现思路
1、有鉴于此，本发明的目的在于提供一种汉麻籽多肽的制备方法及其应用，本发明的方法步骤简单、成本较低，得到的汉麻籽多肽，对促进胶原蛋白分泌有显著的效果。
2、为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：
3、一种汉麻籽多肽的制备方法，包括：用碱提酸沉法制得汉麻籽蛋白；对汉麻籽蛋白进行蛋白酶酶解处理，干燥，得到汉麻籽多肽；
4、所述蛋白酶包括中性蛋白酶；
5、所述酶解处理时，酶解的温度为50℃～65℃，ph为6.0～7.0，时间为60min～120min。
6、优选的，所述中性蛋白酶的用量为所述汉麻籽蛋白的8～15wt％，优选为8wt％、10wt％或15wt％。
7、优选的，所述酶解处理在超声条件下进行；所述超声的功率为100w～300w，温度为30℃～50℃，时间为20min～40min。
8、优选的，所述酶解处理包括以下步骤：将汉麻籽蛋白的水分散液与蛋白酶混合后进行酶解反应；所述汉麻籽蛋白的水分散液的制备方法包括以下步骤：将汉麻籽蛋白粉末和水混合；所述汉麻籽蛋白粉末和水的料液比为1：(6～10)g/ml。
9、优选的，所述汉麻籽蛋白粉末为脱脂汉麻籽蛋白粉末；所述脱脂汉麻籽蛋白粉末的制备方法包括：将汉麻籽粉末和石油醚按照1：(5～8)(g/ml)的比例混合，干燥。
10、优选的，所述汉麻籽蛋白粉末的细度为80目；所述汉麻籽蛋白粉末的制备方法，包括以下步骤：将汉麻籽进行粉碎过80目筛；所述汉麻籽优选为脱壳汉麻籽，更优选为干燥成熟的脱壳汉麻籽，长为4-5.5mm，直径为2.5-4mm。
11、优选的，所述酶解处理还包括以下步骤：对酶解后的体系进行灭酶处理。灭酶处理的温度为90℃～100℃，时间为15min～25min；
12、所述酶解处理还包括以下步骤：将灭酶处理后的体系进行离心处理，收集上清液得到酶解产物；灭酶处理后的离心的转速为4000r/min～8000r/min，时间为10min～20min。
13、优选的，所述碱提酸沉法包括以下步骤：
14、将汉麻籽与水混合，调节ph至9.0～9.5进行碱提处理，得到提取液；调节提取液的ph至3.5～4.0进行酸沉处理。
15、优选的，用氢氧化钠进行所述碱提处理；所述碱提处理的温度为30℃～50℃，时间为1h～3h。
16、优选的，所述碱提酸沉法还包括以下步骤：对碱提处理后的提取液进行离心处理，收集上清液；碱提处理后的离心的转速为4000r/min～8000r/min，时间为10min～20min。
17、优选的，酸沉处理采用加入酸溶液的方法调节ph，酸溶液优选为柠檬酸溶液；柠檬酸溶液的浓度优选为0.5mol/l～1mol/l；所述酸沉处理的时间为60min～90min；所述酸沉处理还包括以下步骤：对酸沉处理后的提取液进行离心处理，酸沉处理后的离心的转速为4000r/min～8000r/min，时间为10min～20min。
18、优选的，所述灭酶处理后的干燥为真空冷冻干燥；真空冷冻干燥具体为：将灭酶处理后的体系在-80℃～-60℃下预冻4h～6h，再在真空度≤40pa下干燥处理18h～20h。
19、本发明还提供了上述汉麻籽多肽的制备方法得到的汉麻籽多肽。
20、本发明还提供了上述汉麻籽多肽在制备促进胶原蛋白分泌的产品中的应用。
21、优选的，所述胶原蛋白包括i型胶原蛋白。
22、优选的，本发明提供了汉麻籽多肽在制备促进细胞胶原蛋白分泌的产品中的应用；所述细胞包括hff-1细胞。
23、优选的，所述产品的剂型包括溶液剂、洗剂、乳剂、粉剂、软膏中的一种或多种；所述产品可以应用在药物、宠物食品、宠物洗护等领域；所述药物包括外用药物；所述宠物洗护包括宠物洗发水、宠物染发剂、宠物沐浴露中的一种或多种；所述宠物食品包括宠物干粮、宠物湿粮、宠物零食中的一种或多种。
24、优选的，所述汉麻籽多肽包括分子量＜10kd的汉麻籽多肽和/或分子量＞100kd汉麻籽多肽。
25、优选的，所述分子量＜10kd的汉麻籽多肽的制备方法包括：
26、用碱提酸沉法制得汉麻籽蛋白；对汉麻籽蛋白进行蛋白酶酶解处理、灭酶处理，干燥，得到汉麻籽多肽；使用截留分子量为10kd的分离装置对所述汉麻籽多肽进行分离。
27、优选的，所述分子量＞100kd汉麻籽多肽的制备方法包括：用碱提酸沉法制得汉麻籽蛋白；对汉麻籽蛋白进行蛋白酶酶解处理、灭酶处理，干燥，得到汉麻籽多肽；使用截留分子量为100kd的分离装置对所述汉麻籽多肽进行分离。
28、优选的，所述汉麻籽多肽在产品中的浓度为50～100μg/ml，优选为50μg/ml或100μg/ml。
29、本发明的汉麻籽多肽的制备方法步骤简单、成本较低；首先用碱提酸沉法制得汉麻籽蛋白，再对汉麻籽蛋白依次进行蛋白酶酶解处理、灭酶处理，最后进行干燥，得到的汉麻籽多肽，对促进胶原蛋白分泌有显著的效果。经过本发明试验例证实，本发明的方法制得的汉麻籽多肽(分子量大于100kd与小于10kd)对hff-1细胞的i型胶原蛋白(col-i)分泌量呈现显著性上调的作用。
1.一种汉麻籽多肽的制备方法，其特征在于，包括：用碱提酸沉法制得汉麻籽蛋白；对汉麻籽蛋白进行蛋白酶酶解处理、灭酶处理，干燥，得到汉麻籽多肽；
2.根据权利要求1所述的汉麻籽多肽的制备方法，其特征在于，所述中性蛋白酶的用量为所述汉麻籽蛋白的8～15wt％。
3.根据权利要求1所述的汉麻籽多肽的制备方法，其特征在于，所述酶解在超声条件下进行。
4.根据权利要求3所述的汉麻籽多肽的制备方法，其特征在于，所述超声的功率为100w～300w，温度为30℃～50℃，时间为20min～40min。
5.根据权利要求1所述的汉麻籽多肽的制备方法，其特征在于，所述灭酶处理的温度为90℃～100℃，时间为15min～25min。
6.根据权利要求1所述的汉麻籽多肽的制备方法，其特征在于，所述碱提酸沉法包括以下步骤：
7.根据权利要求6所述的汉麻籽多肽的制备方法，其特征在于，所述碱提处理的温度为30℃～50℃，时间为1h～3h；
8.权利要求1～7任一项所述的汉麻籽多肽的制备方法得到的汉麻籽多肽。
9.权利要求8所述的汉麻籽多肽在制备促进胶原蛋白分泌的产品中的应用。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述汉麻籽多肽包括分子量＜10kd的汉麻籽多肽和/或分子量＞100kd汉麻籽多肽；
