本发明属于生物医药,具体涉及一种结合冠状病毒sars-cov刺突蛋白(spike protein)rbd表位的中和抗体zj-6及其制备方法和应用。
背景技术:
1、sars-cov属于beta冠状病毒属中沙贝病毒亚属病毒(sarbecovirus),是可感染人类的高致病性冠状病毒,其病毒粒子的表面主要有三种结构蛋白,刺突蛋白(spikeprotein)、膜蛋白(membrane protein)、包膜蛋白(envelope protein)。其中s蛋白是一种180-200kda的跨膜糖蛋白,可以被靶细胞膜上的一些蛋白酶切割成s1和s2亚基。s1亚基包含n端结构域(ntd)和c端受体结合结构域(rbd),rbd介导sars-cov与人ace2受体结合。
2、中和抗体疗法是用于预防和治疗多种病原体感染引起疾病的重要手段,就sars-cov感染的防控而言,开发新的针对sars-cov的中和抗体临床意义重大。
技术实现思路
1、基于此,本发明的目的包括提供一种结合冠状病毒sars-cov刺突蛋白rbd的中和抗体zj-6,该中和抗体zj-6够特异性地与sars-cov刺突蛋白上rbd表位结合,从而阻止sars-cov对细胞的感染,最终实现保护效果。
2、上述发明目的可以通过如下的技术方案实现:
3、本发明的第一个目的是提供一种结合冠状病毒sars-cov刺突蛋白rbd的中和抗体zj-6,所述抗体的重链cdr1包含如seq id no.1所示的氨基酸序列、重链cdr2包含如seq idno.2所示的氨基酸序列、重链cdr3包含如seq id no.3所示的氨基酸序列;
4、所述抗体的轻链cdr1包含如seq id no.4所示的氨基酸序列、轻链cdr2包含氨基酸序列seq id no.5、轻链cdr3包含如seq id no.6所示的氨基酸序列。
5、优选地,所述抗体的重链可变区如seq id no.7所示。
6、优选地,所述抗体的轻链可变区如seq id no.8所示。
7、优选地,所述抗体的轻链恒定区如seq id no.9所示。
8、优选地,所述抗体的重链恒定区如seq id no.10所示。
9、优选地,所述抗体的恒定区的序列为igg1恒定区的序列。
10、优选地,所述抗体的恒定区的种属来源为人。
11、上述seq id no.7所示的重链可变区和seq id no.8所示的轻链可变区中,还包含了框架区域(fr),4个fr的氨基酸序列不直接参与结合反应。
12、本发明提供的抗体,其能够特异性地与sars-cov刺突蛋白rbd结合。
13、本发明的第二个目的,提供一种重组蛋白,所述重组蛋白包括在第一个目的中定义的所述重链cdr1、所述重链cdr2、所述重链cdr3、轻链cdr1、所述轻链cdr2、所述轻链cdr3所述重链可变区和所述轻链可变区中的一个或者多个。
14、本发明的第三个目的,提供一种检测试剂、检测试剂盒或者药物,包含在第一个目的中提供的中和抗体zj-6或者在第二个目的中提供的重组蛋白。
15、本发明的第四个目的,提供一种核酸,含有用于编码上述结合冠状病毒sars-cov刺突蛋白rbd表位的中和抗体zj-6的核酸序列。
16、本发明的第五个目的,提供一种重组表达载体,包含上述的核酸。
17、优选地,所述重组表达载体为抗体表达载体。
18、优选地,所述重组表达载体为abvec2.0-ighg1或abvec1.1-igkc。
19、本发明的第六个目的,提供一种宿主细胞,包含上述的特异性抗体,或上述的核酸,或上述的重组表达载体。
20、优选地,所述宿主细胞为freestyle 293-f细胞或expi293f细胞。
21、本发明的第七个目的,提供上述的结合冠状病毒sars-cov刺突蛋白rbd的中和抗体zj-6的制备方法,包括构建上述的宿主细胞,培养,收集结合冠状病毒sars-cov刺突蛋白rbd的中和抗体zj-6。
22、优选地,所述宿主细胞为freestyle 293-f细胞或者expi293f细胞。
23、相对于传统技术,本发明提供的上述技术方案至少具有如下的有益效果:
24、本申请提供的中和抗体zj-6,其包含特定的序列的cdrs,能够特异性地与sars-cov刺突蛋白rbd结合,从而阻止sars-cov对细胞的感染,最终实现保护效果。同时,本申请提供的中和抗体zj-6,中和活性较高。本申请为预防和治疗sars-cov感染提供了新的候选方案。
1.一种结合冠状病毒sars-cov刺突蛋白rbd的中和抗体zj-6,其特征在于,包括重链和轻链,
2.根据权利要求1所述的结合冠状病毒sars-cov刺突蛋白rbd的中和抗体zj-6,其特征在于,所述中和抗体zj-6满足如下条件中的一个或者多个:
3.根据权利要求1所述的结合冠状病毒sars-cov刺突蛋白rbd的中和抗体zj-6,其特征在于,所述抗体的恒定区的序列为igg1恒定区的序列;或/和,所述抗体的恒定区的种属来源为人。
4.根据权利要求1所述的结合冠状病毒sars-cov刺突蛋白rbd的中和抗体zj-6,其特征在于,所述抗体的轻链恒定区如seq id no.9所示;或/和,所述抗体的重链恒定区如seq idno.10所示。
5.权利要求1至4任一项所述的结合冠状病毒sars-cov刺突蛋白rbd的中和抗体zj-6在制备sars-cov检测产品或制备抗sars-cov药物中的应用。
6.一种检测试剂、检测试剂盒或者药物,其特征在于,包含权利要求1至4任一项所述的结合冠状病毒sars-cov刺突蛋白rbd的中和抗体zj-6。
7.一种核酸,其特征在于,包括编码权利要求1至4中任一项所述的结合冠状病毒sars-cov刺突蛋白rbd的中和抗体zj-6的核酸序列。
8.一种重组表达载体,其特征在于,包含权利要求7所述的核酸;
9.一种宿主细胞,其特征在于,包含权利要求1至4任一项所述的中和抗体zj-6,或权利要求7所述的核酸,或者权利要求8所述的重组表达载体。
10.一种权利要求1至4任一项所述的结合冠状病毒sars-cov刺突蛋白rbd的中和抗体zj-6的制备方法,其特征在于,包括构建权利要求9所述的宿主细胞,培养,收集结合冠状病毒sars-cov刺突蛋白rbd的中和抗体zj-6。
