本发明涉及生物,具体涉及一种促进真菌合成三萜类化合物的方法。
背景技术:
1、白蚁球菌(athelia termitophila)隶属于真菌门,担子菌纲,伞菌目,伞菌纲,阿太菌目,阿太菌科。于本实验室在西安地区散白蚁巢中所发现并对其进行了分离鉴定,证实其与在日本散白蚁巢中所发现的athelia termitophila为同一物种。经过前期实验室研究探索,发现白蚁球菌中含有多种药用化学成分。通过菌丝粉营养成分测定、毒理学实验、重金属与黄曲霉毒素检验等安全性检测,也证明白蚁球菌安全无毒,是一种符合人体各项氨基酸需求的潜在食品原料,其含有的三萜类化合物、真菌多糖、虫草素、虫草酸、腺苷等多种活性成分对人体有很好的的保健作用。
2、三萜类化合物是药食用真菌主要的生物活性成分,大多是由30个碳原子组成的萜类化合物,在食品、化妆品和制药领域具有广泛的工业应用,由于其强大的药理活性,包括免疫调节、抗氧化和抗肿瘤作用,目前受到科学界的广泛关注。由于三萜类化合物是生物次生代谢产物,在自然条件下它们的含量较低,因此如何通过干扰提高白蚁球菌三萜类化合物的合成亟待解决的问题。
技术实现思路
1、为提高白蚁球菌三萜类化合物的合成,本发明提供了一种促进白蚁球菌合成三萜类化合物的方法,本发明提供的方法显著提高了白蚁球菌合成三萜类化合物,通过本发明方法使得白蚁球菌中总三萜的含量为36.43mg/100ml,比对照组提高了49.5%。
2、本发明提供了一种促进真菌合成三萜类化合物的方法,利用白蚁球菌制备得白蚁球菌种子液,然后接种至发酵培养基,间隔0-6天后加入水杨酸至终浓度为50-300μmol/l,于24℃,转速160r/min条件下发酵培养7-11天。水杨酸的刺激对真菌合成三萜类化合物的能力有显著影响,通过设置水杨酸的不同浓度、加入时期以及加入后的作用时间发现各参数对三萜类化合物的合成都有影响,因此,建立了一种效率高的真菌合成三萜类化合物的方法。本发明的方法显著提高了白蚁球菌菌丝中总三萜的含量(36.43mg/100ml),总三萜的含量提高了49.5%。
3、进一步地,发酵培养基中加入水杨酸至终浓度为150-250μmol/l。
4、进一步地,发酵培养基中加入水杨酸至终浓度为200μmol/l。
5、进一步地,发酵培养基中加入水杨酸后发酵培养时间为9天。
6、进一步地,加入水杨酸之前间隔时间为2-6天。
7、进一步地,加入水杨酸之前间隔时间为6天。
8、进一步地,加入水杨酸后发酵条件为温度24℃,转速160r/min。
9、进一步地,白蚁球菌种子液制备过程为:将白蚁球菌接种到马铃薯固体培养基,于24℃活化培养7天,然后将活化好的白蚁球菌用打孔器打孔琼脂块接种到马铃薯液体培养基中,于24℃、转速160r/min、培养7天获得白蚁球菌种子液。
10、进一步地,所述发酵液体培养基配方为:蔗糖30g,酵母粉12g,磷酸二氢钾3g,1000ml蒸馏水。
11、进一步地,加入水杨酸的过程为:称取水杨酸固体0.2762g,加入10ml无水乙醇溶液进行溶解,配置为200mmol/l水杨酸母液,将水杨酸母液加入到培养基中,使其终浓度为50-300μmol/l。
12、与现有技术相比,本发明的有益效果在于:
13、1、本发明提供的方法在白蚁球菌液体发酵过程中加入水杨酸进行诱导能够显著提高白蚁球菌菌丝中总三萜的含量,经检测发现处理后的白蚁球菌中总三萜的含量为36.43mg/100ml,比未添加水杨酸诱导的白蚁球菌的对照组(即对比例1)提高了49.5%。
14、2、本发明还提出了一种对白蚁球菌总三萜的提取方法,而且操作简单成本低,有着重要的工业应用价值。三萜化合物是白蚁球菌中主要的药理活性成分,通过添加水杨酸对白蚁球菌诱导,能够有效的提高白蚁球菌总三萜的含量。
1.一种促进真菌合成三萜类化合物的方法,其特征在于,利用白蚁球菌制备得白蚁球菌种子液,然后按照体积分数为4-6%的接种量接种至发酵培养基,间隔0-6天后加入水杨酸至终浓度为50-300μmol/l,于22-24℃,转速150-160r/min条件下发酵培养7-11天。
2.根据权利要求1所述的促进白蚁球菌合成三萜类化合物的方法,其特征在于,发酵培养基中加入水杨酸至终浓度为150-250μmol/l。
3.根据权利要求2所述的促进白蚁球菌合成三萜类化合物的方法,其特征在于,发酵培养基中加入水杨酸至终浓度为200μmol/l。
4.根据权利要求1所述的促进白蚁球菌合成三萜类化合物的方法,其特征在于,发酵培养基中加入水杨酸后发酵培养时间为9天。
5.根据权利要求1所述的促进白蚁球菌合成三萜类化合物的方法,其特征在于,加入水杨酸之前间隔时间为2-6天。
6.根据权利要求5所述的促进白蚁球菌合成三萜类化合物的方法,其特征在于,加入水杨酸之前间隔时间为6天。
7.根据权利要求1所述的促进白蚁球菌合成三萜类化合物的方法,其特征在于,加入水杨酸后发酵条件为温度24℃,转速160r/min。
8.根据权利要求1所述的促进白蚁球菌合成三萜类化合物的方法,其特征在于,白蚁球菌种子液制备过程为:将白蚁球菌接种到马铃薯固体培养基,于24℃活化培养7天,然后将活化好的白蚁球菌用打孔器打孔琼脂块接种到马铃薯液体培养基中,于24℃、转速160r/min、培养7天获得白蚁球菌种子液。
9.根据权利要求1所述的促进白蚁球菌合成三萜类化合物的方法,其特征在于,所述发酵液体培养基配方为:蔗糖30g,酵母粉12g,磷酸二氢钾3g,1000ml蒸馏水。
10.根据权利要求1所述的促进白蚁球菌合成三萜类化合物的方法,其特征在于,加入水杨酸的过程为:称取水杨酸固体0.2762g,加入10ml无水乙醇溶液进行溶解,配置为200mmol/l水杨酸母液,将水杨酸母液加入到培养基中,使其终浓度为50-300μmol/l。
