本发明属于生物材料领域，涉及一种无需洗脱顺滑透明质酸钠交联凝胶的制备方法及应用。
背景技术：
1、透明质酸钠(hyaluronic acid，ha)是由d-葡萄糖醛酸和n-乙酰氨基-d-葡萄糖重复组成的天然线性多糖，在人体内广泛存在，无免疫原性，被认为是理想的软组织填充材料。
2、天然的透明质酸钠极易被透明质酸酶降解，难以长时间维持，因此需要对透明质酸钠进行交联修饰，目前常用的交联剂为1,4-丁二醇二缩水甘油醚(butanedioldiglycidyl ether,bdde)。天然的透明质酸钠溶液为粘稠溶液状态，经过交联修饰后的透明质酸钠呈现出块状，具有一定的力学性能，能够延长体内降解时间，达到理想的填充效果。但是交联剂在体内不能被降解，含量过多，会造成毒性反应，根据《yy/t 0962-2014整形手术用交联透明质酸钠凝胶》中要求bdde残留量应小于2.0μg/g，出于安全考虑，bdde残留量应越低越好。
3、透明质酸钠在碱液中的溶解度与碱液浓度有关，而碱性环境一方面会促进交联反应的发生，另一方面也会导致ha链的断裂。根据交联透明质酸钠凝胶制备的现有工艺，采用pbs缓冲液作为透析溶液，通过多次更换缓冲液达到去除残留的bdde的目的，不仅消耗大量的水和磷酸盐，而且在生产过程中耗时较长、生产效率较低。例如申请号为cn202311350011.8公开了一种通过改变pbs缓冲液的离子浓度以减少透析时间，该方法每一个小时更换一次pbs缓冲液，导致洗脱次数频繁，工艺繁琐，影响生产效率；申请号为cn202311166108.3公开了一种清洗交联剂的方法，该方法要求在65-80℃下对交联透明质酸钠凝胶进行洗脱，此方法虽然降低了bdde残留，但是高温处理会破坏透明质酸钠结构、影响交联透明质酸钠凝胶的性能。
技术实现思路
1、本发明的目的是克服现有技术的缺陷，提供一种无需洗脱顺滑透明质酸钠交联凝胶的制备方法，通过调整碱液浓度，透明质酸钠溶解量以及反应时间，无需洗脱和凝胶粉碎工艺即可获得交联剂残留量达标的凝胶，减少工艺步骤，提高工艺生产效率并降低生产过程中的污染风险。
2、本发明的另外一个目的是提供采用上述的制备方法制备的无需洗脱顺滑透明质酸钠交联凝胶在制备面部填充制剂中的应用。
3、实现上述目的一种技术方案是：一种无需洗脱顺滑透明质酸钠交联凝胶的制备方法，包括以下步骤：
4、s1，透明质酸钠溶液的制备：室温下，将透明质酸钠溶于碱性溶液中，制备成透明质酸钠碱溶液；
5、s2，透明质酸钠交联凝胶的制备：向步骤s1中的透明质酸钠碱溶液中添加交联剂，完全混匀后进行交联反应，交联温度为25℃，交联时间为2～6天，交联反应完成后得到交联凝胶；
6、s3，交联凝胶的溶胀：将步骤s2中得到的交联凝胶中加入酸性溶液和pbs缓冲溶液进行溶胀，调整渗透压和ph，得到交联的透明质酸钠凝胶；
7、s4，湿热灭菌步骤：将步骤s3获得的交联的透明质酸钠凝胶灌装装入预灌封注射器，湿热灭菌后得到透明质酸钠交联凝胶产品。
8、上述的一种无需洗脱顺滑透明质酸钠交联凝胶的制备方法，步骤s1中，所述碱性溶液中的溶质采用氢氧化钾、氢氧化钙、氢氧化钠、碳酸钠、碳酸氢钠、磷酸一氢钠和磷酸钠中的至少一种。
9、上述的一种无需洗脱顺滑透明质酸钠交联凝胶的制备方法，步骤s1中，所述碱性溶液中的溶质采用氢氧化钠，所述碱性溶液中氢氧化钠的质量分数为0.5％～5％。
10、上述的一种无需洗脱顺滑透明质酸钠交联凝胶的制备方法，步骤s1中，所述透明质酸钠的分子量为10,000～3,000,000da。
11、上述的一种无需洗脱顺滑透明质酸钠交联凝胶的制备方法，步骤s1中，所述透明质酸钠碱溶液中透明质酸的质量分数为0.1％-15％。
12、上述的一种无需洗脱顺滑透明质酸钠交联凝胶的制备方法，步骤s2中，所述交联剂采用1,4-丁二醇二缩水甘油醚、二乙烯基砜、乙二醇二缩水甘油醚、1,6-己二醇二缩水甘油醚和一缩二乙二醇二缩水甘油醚中的一种；所述交联剂的添加量为透明质酸钠质量的0.1％～15％。
13、上述的一种无需洗脱顺滑透明质酸钠交联凝胶的制备方法，步骤s2中，所述交联剂采用1,4-丁二醇二缩水甘油醚。
14、上述的一种无需洗脱顺滑透明质酸钠交联凝胶的制备方法，步骤s3中，所述酸性溶液采用盐酸溶液，所述pbs缓冲溶液的组成成分为：氯化钠、磷酸氢二钠和一水合磷酸二氢钠。
15、上述的一种无需洗脱顺滑透明质酸钠交联凝胶的制备方法，步骤s3中，所述盐酸溶液添加量为氢氧化钠溶液的5％～50％，所述pbs缓冲溶液的添加量为所述透明质酸钠碱溶液与盐酸溶液添加量总和的2-5倍。
16、本发明还提供了采用上述的制备方法制备的无需洗脱顺滑透明质酸钠交联凝胶在制备面部填充制剂中的应用。
17、采用本发明的无需洗脱顺滑透明质酸钠交联凝胶的制备方法的技术方案，省去透析洗脱交联剂的步骤，通过调整碱性溶液的浓度，选择适宜的透明质酸钠粉末投料比例以及反应时间，在交联反应过程中尽可能降低bdde残留量，无需多次更换pbs缓冲液，减少产品污染风险，提高生产效率，采用上述的制备方法制备的无需洗脱顺滑透明质酸钠交联凝胶可以应用在制备面部填充制剂中。
1.一种无需洗脱顺滑透明质酸钠交联凝胶的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.如权利要求1所述的一种无需洗脱顺滑透明质酸钠交联凝胶的制备方法，其特征在于，步骤s1中，所述碱性溶液中的溶质采用氢氧化钾、氢氧化钙、氢氧化钠、碳酸钠、碳酸氢钠、磷酸一氢钠和磷酸钠中的至少一种。
3.如权利要求2所述的一种无需洗脱顺滑透明质酸钠交联凝胶的制备方法，其特征在于，步骤s1中，所述碱性溶液中的溶质采用氢氧化钠，所述碱性溶液中氢氧化钠的质量分数为0.5％～5％。
4.如权利要求1所述的一种无需洗脱顺滑透明质酸钠交联凝胶的制备方法，其特征在于，步骤s1中，所述透明质酸钠的分子量为10,000～3,000,000da。
5.如权利要求1所述的一种无需洗脱顺滑透明质酸钠交联凝胶的制备方法，其特征在于，步骤s1中，所述透明质酸钠碱溶液中透明质酸的质量分数为0.1％-15％。
6.如权利要求1所述的一种无需洗脱顺滑透明质酸钠交联凝胶的制备方法，其特征在于，步骤s2中，所述交联剂采用1,4-丁二醇二缩水甘油醚、二乙烯基砜、乙二醇二缩水甘油醚、1,6-己二醇二缩水甘油醚和一缩二乙二醇二缩水甘油醚中的一种；所述交联剂的添加量为透明质酸钠质量的0.1％～15％。
7.如权利要求6所述的一种无需洗脱顺滑透明质酸钠交联凝胶的制备方法，其特征在于，步骤s2中，所述交联剂采用1,4-丁二醇二缩水甘油醚。
8.如权利要求1所述的一种无需洗脱顺滑透明质酸钠交联凝胶的制备方法，其特征在于，步骤s3中，所述酸性溶液采用盐酸溶液，所述pbs缓冲溶液的组成成分为：氯化钠、磷酸氢二钠和一水合磷酸二氢钠。
9.如权利要求8所述的一种无需洗脱顺滑透明质酸钠交联凝胶的制备方法，其特征在于，步骤s3中，所述盐酸溶液添加量为氢氧化钠溶液的5％～50％，所述pbs缓冲溶液的添加量为所述透明质酸钠碱溶液与盐酸溶液添加量总和的2-5倍。
10.采用如权利要求1所述的制备方法制备的无需洗脱顺滑透明质酸钠交联凝胶在制备面部填充制剂中的应用。
