本发明属于药物研究，具体涉及一种鸢尾素在制备治疗乙型脑炎的产品中的用途。
背景技术：
1、流行性乙型脑炎(epidemic encephalitis b)，又称乙型脑炎，是由流行性乙型脑炎病毒，即日本脑炎病毒(japanese encephalitis virus,jev)感染引起的一种以脑实质炎症为主要病理改变的急性中枢神经系统疾病，主要通过三带喙库蚊传播。其主要临床表现包括高热、意识障碍、呼吸衰竭等急性病毒性脑炎综合征，且约半数存活者伴有认知或运动障碍等神经系统后遗症。乙型脑炎在中国部分地区、俄罗斯联邦东南部等东南亚、西太平洋地区呈季节性流行，热带地区全年发生，亚热带和温带地区多为7～9月。据世界卫生组织(world health organization,who)统计，乙型脑炎全球每年新发病例数约为6～7万例，是who公布的需要高度、优先预防的传染病之一。但目前尚无针对乙型脑炎的特异性药物。因此，深入研究jev感染致病机制将为临床药物研发提供新思路。
2、鸢尾素(irisin)是2012年由等研究发现的一种肌源性细胞因子，由纤维结合蛋白iii型结构域5(fndc5)经水解后加工成的112个氨基酸的肽类。目前，研究发现鸢尾素主要由骨骼肌释放，在心肌、肝脏、肺脏、脑等组织中也有表达。研究表明，鸢尾素可以保护线粒体功能，促进糖代谢、脂质代谢，在治疗代谢性疾病方面及心血管疾病、脑相关疾病、肿瘤防治中发挥着重要的作用。但鸢尾素对乙型脑炎是否具有保护作用目前尚不清楚。
技术实现思路
1、为了明确上述问题，本发明进行了三对共六组动物实验，采取第一对分别在jev感染小鼠2h后和jev感染小鼠1天前进行侧脑室注射鸢尾素；第二对分别在jev感染小鼠2h后和jev感染小鼠2天前进行侧脑室+尾静脉注射鸢尾素；第三对分别在jev感染小鼠2h后和jev感染小鼠5天前进行腹腔注射鸢尾素的方式，并分别与单纯jev感染进行对照。结果发现，在jev感染小鼠5天前进行腹腔注射鸢尾素的小鼠体重增加，行为学评分降低，死亡率降低，促炎因子il-1β及a1型星形胶质细胞活化标志物水平降低，a2型星形胶质细胞标志物升高，jev感染后的神经炎症减轻等现象最明显。表明鸢尾素对乙型脑炎具有一定的保护作用。
2、本发明提供的具体技术方案如下：
3、本发明第一方面，提供一种鸢尾素在制备治疗乙型脑炎的产品中的用途。
4、优选地，所述鸢尾素用于制备抑制日本脑炎病毒(jev)复制的药物。
5、优选地，所述鸢尾素用于制备减轻神经炎症的药物。鸢尾素处理后il-1β、il-6、il-10炎症因子表达明显降低。
6、优选地，所述药物包括药学上可接受的辅料或载体。可以理解的是，本发明所述的药物可以添加不同的辅料从而制备成合适的临床剂型，这些临床剂型可以为固体、半固体或液体制剂，例如颗粒剂、胶囊剂、口服液、糖浆剂、散剂、丸剂或其他溶液、悬浮液。也可以制备成经血液、肌肉等方式注射给药或静脉输液给药的制剂类型。也可以经局部、经皮内或经皮肤施用于皮肤或粘膜，例如凝胶、水凝胶、洗剂、膏剂、撒粉、薄膜、皮肤贴片、薄片、绷带或微乳液。也可以使用脂质体。本发明所述的辅料或载体是指与鸢尾素一起施用的稀释剂、佐剂或赋形剂，例如糖、淀粉、纤维素及其衍生物、环糊精、植物油、表面活性剂、碱土金属的硬脂酸盐等，也可以包括其他无毒的填充剂、润滑剂、调味剂、粘合剂、崩解剂、缓冲剂、防腐剂、抗氧化剂等常用于药物制剂中的载体。
7、优选地，所述产品为外泌体，该外泌体是按照以下步骤制备得到：
8、将所述鸢尾素的pcr扩增片段与cmv-lamp2b-rvg载体连接，连接产物转化至感受态细胞，培养并提取lamp2b-rvg-irisin质粒；将所述lamp2b-rvg-irisin质粒转染至工具细胞，分离，得到所述外泌体。
9、pcr扩增片段的扩增引物为：上游：5’-agagcatccaacgggtccggaatggacagtccctcagccccag-3’；下游：5’-ggtaccgagctcggatccttac tctttcatggttacctc-3’。
10、pcr扩增片段的扩增反应体系为：10x含mgso4的pfubuffer10μl、10mmol/ldntpmix 2μl、10μmol上下游引物各2μl、模板1μl、2.5u/μl pfu dna聚合酶1μl、ddh2o 82μl。
11、pcr扩增片段的扩增程序为：95℃预变性2min；95℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸3min，共30个循环；72℃延伸5min。
12、所述连接是按照以下步骤进行：将pcr扩增片段与所述cmv-lamp2b-rvg载体分别用bspe i及bamh i双酶切后纯化回收，回收产物用t4 dna连接酶连接。
13、优选地，所述外泌体用于制备改善jev感染导致的脑组织损伤或神经元坏死的产品。实验证明，经鸢尾素质粒(即所述外泌体)处理后，jev感染脑组织损伤和神经元坏死减轻。
14、对比现有技术，本发明的有益效果为：
15、本发明提供了鸢尾素在制备治疗乙型脑炎的产品中的用途。本发明研究发现，在感染jev后，小鼠出现竖毛、运动受限、肢体僵硬、后肢瘫痪、肌肉抽搐震颤等行为学评分升高的表现，并伴有体重下降，攻毒后8天内死亡率可高达80％。而在jev感染小鼠5天前对其进行腹腔注射鸢尾素质粒发现，小鼠相对于单纯jev感染体重增加，行为学评分降低，死亡率降低，提示鸢尾素质粒能够改善乙型脑炎；同时，通过对各组小鼠病理切片he染色、tunel染色及qrt-pcr测定不同处理方式对星形胶质细胞的影响，显示鸢尾素对乙型脑炎具有一定的保护作用。
1.鸢尾素在制备治疗乙型脑炎的产品中的用途。
2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述鸢尾素用于制备抑制乙型脑炎病毒复制的药物。
3.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述鸢尾素用于制备减轻神经炎症的药物。
4.根据权利要求2或3所述的用途，其特征在于，所述药物包括药学上可接受的辅料。
5.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述产品为外泌体，所述外泌体是按照以下步骤进行制备：
6.根据权利要求5所述的用途，其特征在于，pcr扩增片段的扩增引物为：上游序列：5’-agagcatccaacgggtccggaatggacagtccctcagcccca g-3’；下游序列：5’-ggtaccgagctcggatccttactctttcatggttacctc-3’。
7.根据权利要求5所述的用途，其特征在于，pcr扩增片段的扩增反应体系为：10x含mgso4的pfu buffer10μl、10mmol/l dntp mix 2μl、10μmol上下游引物各2μl、模板1μl、2.5u/μl pfu dna聚合酶1μl、ddh2o 82μl。
8.根据权利要求5所述的用途，其特征在于，pcr扩增片段的扩增程序为：95℃预变性2min；95℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸3min，共30个循环；72℃延伸5min。
9.根据权利要求5所述的用途，其特征在于，所述连接是按照以下步骤进行：将pcr扩增片段与所述cmv-lamp2b-rvg载体分别用bspe i及bamh i双酶切后纯化回收，回收产物用t4dna连接酶连接。
10.根据权利要求5所述的用途，其特征在于，所述外泌体用于制备改善日本脑炎病毒感染导致的脑组织损伤或神经元坏死的产品。
