本发明涉及干细胞检测，特别是涉及一种脐带间充质干细胞huc-mscs的检测方法。
背景技术：
1、间充质干细胞(mesenchymal stromal/stem cell，msc)，是一类存在于多种组织(如骨髓、脐带血、脐带组织、胎盘组织和脂肪组织等)，具有多向分化潜能，非造血干细胞的成体干细胞。这类干细胞具有向多种间充质系列细胞(如成骨、成软骨及成脂肪细胞等)或非间充质系列的细胞分化潜能，并具有独特的细胞因子分泌功能。
2、间充质干细胞的多能性(multipotent)是指具有形成机体内超过一种类型细胞的能力，在体外可诱导分化为骨和脂肪等多种功能细胞，并能表达调控细胞向其他组织细胞类型或器官分化的基因特性(如ssea-4、oct-4、sox-2和nanog基因均为多能性基因)。间充质干细胞是以细胞分裂的方式产生新细胞的特性，包括细胞周期中各不同阶段所占比例以及细胞分裂过程中细胞数量随时间变化的特征。需要对脐带间充质干细胞huc-mscs分泌的再生因子进行检测，以把控间充质干细胞的质量要求。
技术实现思路
1、为了解决上述问题，本发明提供了一种脐带间充质干细胞huc-mscs的检测方法。
2、为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
3、本发明提供了一种脐带间充质干细胞huc-mscs的检测方法，包括以下步骤：
4、1)提取脐带间充质干细胞huc-mscs的rna，反转录为cdna；
5、2)将所述步骤1)得到的cdna进行pcr扩增，得到扩增产物；
6、扩增ssea-4因子使用的引物对的上游引物的核苷酸序列如seq id no.1所示，下游引物的核苷酸序列如seq id no.2所示；
7、扩增oct-4因子使用的引物对的上游引物的核苷酸序列如seq id no.3所示，下游引物的核苷酸序列如seq id no.4所示；
8、扩增sox-2因子使用的引物对的上游引物的核苷酸序列如seq id no.5所示，下游引物的核苷酸序列如seq id no.6所示；
9、扩增nanog因子使用的引物对的上游引物的核苷酸序列如seq id no.7所示，下游引物的核苷酸序列如seq id no.8所示；
10、3)将所述步骤2)得到的扩增产物进行电泳检测，当所述扩增产物的扩增长度为121bp时，脐带间充质干细胞huc-mscs旁分泌ssea-4因子；
11、当所述扩增产物的扩增长度为137bp时，脐带间充质干细胞huc-mscs旁分泌oct-4因子；
12、当所述扩增产物的扩增长度为171bp时，脐带间充质干细胞huc-mscs旁分泌sox-2因子；
13、当所述扩增产物的扩增长度为94bp时，脐带间充质干细胞huc-mscs旁分泌nanog因子。
14、优选的，所述步骤1)反转录的体系为：10mm的dntp 1μl、2.5mm的oligo dt-接头引物1μl、模板rna 1μl、500u/μl的逆转录酶0.5μl、40u/μl的rna酶抑制剂0.5μl、5×rt-pcr缓冲液4μl和双蒸水12μl。
15、优选的，所述逆转录的扩增程序为：将所述dntp、oligo dt-接头引物、模板rna用双蒸水补足10μl，进行65℃预变性5min，再与逆转录酶、rna酶抑制剂、5×rt-pcr缓冲液、双蒸水混合，反应程序为：30℃，10min；42℃，15min～30min；70℃，15min；4℃，保存。
16、优选的，所述步骤2)pcr扩增的体系为：10×pcr缓冲液2μl、dntp mixture 0.8μl、20μm的上游引物0.4μl、20μm的下游引物0.4μl、ex taq hs 0.2μl、cdna 2μl，双蒸水补足至20μl。
17、优选的，所述pcr扩增的程序为：94℃预变性5min；94℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸30s，35个循环；72℃延伸10min，4℃保存。
18、本发明的有益效果为：
19、ssea-4基因检测意义：阶段特异性胚胎抗原基因，作为人未分化多能胚胎干细胞标志。
20、nanog基因检测意义：nanog基因在mscs中表达转录因子，调节细胞自我更新，但是在已分化的成纤维细胞中未发现其mrna。
21、oct-4基因检测意义：pou转录因子家族一员，表达于mscs，调控转录，起维持干细胞多潜能性和自我更新作用。基因缺失会导致干细胞分化。sox2基因物理特性：位于人体第3号染色体，全长9503bp，编码mrna长度为2520bp。
22、sox2基因检测意义：转录因子基因，同oct-4，nanog一样，作为干细胞未分化标志，随其分化，表达量下降，在成纤维细胞中不表达。
23、核酸电泳具有高效性、灵敏度高、分辨率高等特点，本方案采取核酸电泳对ssea-4、nanog、oct-4、sox2四个基因进行检测，可以在短时间内将其按核酸分子大小不同进行高效的分离和检测。
1.一种脐带间充质干细胞huc-mscs的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述步骤1)反转录的体系为：10mm的dntp 1μl、2.5mm的oligo dt-接头引物1μl、模板rna1μl、500u/μl的逆转录酶0.5μl、40u/μl的rna酶抑制剂0.5μl、5×rt-pcr缓冲液4μl和双蒸水12μl。
3.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述逆转录的扩增程序为：将所述dntp、oligo dt-接头引物、模板rna用双蒸水补足10μl，进行65℃预变性5min，再与逆转录酶、rna酶抑制剂、5×rt-pcr缓冲液、双蒸水混合，反应程序为：30℃，10min；42℃，15min～30min；70℃，15min；4℃，保存。
4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述步骤2)pcr扩增的体系为：10×pcr缓冲液2μl、dntp mixture 0.8μl、20μm的上游引物0.4μl、20μm的下游引物0.4μl、extaq hs 0.2μl、cdna 2μl，双蒸水补足至20μl。
5.根据权利要求1或4所述的检测方法，其特征在于，所述pcr扩增的程序为：94℃预变性5min；94℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸30s，35个循环；72℃延伸10min，4℃保存。
