本发明属于生物，具体涉及单端孢二烯合酶致病基因irtri01及其应用。
背景技术：
1、
2、ilyonectria类物种是常见的土壤真菌、机会性植物根病原菌或无症状的根内生菌。ilyonectria真菌能引起葡萄黑脚病、苹果再植病和山毛榉溃疡病等，受影响的植物大部分是具有经济重要性的代表性寄主，尤其是多年生植物的木质化根。 因此，ilyonectria和类似ilyonectria的物种通常与木本和草本植物的腐烂和腐烂有关。对大量人参锈腐病样品的研究发现i. robusta为人参锈腐病的主要优势种。此外，人参锈腐病的致病因素与菌株间致病力的差异有关，强毒株和弱毒株在形态、最适生长温度、酶活性和遗传图谱等方面存在许多差异，这被认为与观察到的致病性差异有关。
技术实现思路
1、本发明的目的是为解决上述问题，而提供单端孢二烯合酶致病基因irtri01和一种crispr/cas9敲除载体。
2、单端孢二烯合酶致病基因irtri01，它的碱基序列如序列表seq no.1所示。
3、一种crispr/cas9敲除载体，其sgrna包括tri5-sgrna-0、tri5-sgrna-1和/或tri5-sgrna-2；
4、tri5-sgrna-0：caaccgaataaccttctcga；
5、tri5-sgrna-1：acttgttggagcgacacgat；
6、tri5-sgrna-2：aacgtcgggatagagcgctt。
7、左同源臂片段：
8、f：gacgacgatcttgtcggt；
9、r：cgaccgggaaccagttatcctacgtagtagcactaaggct；
10、潮霉素片段：
11、f：agccttagtgctactacgtaggataactggttcccggtcg；
12、r： gccagtagaataatgaatgtagcctttggtttagtcgtcaggc；
13、右同源臂片段：
14、f： gcctgacgactaaaccaaaggctacattcattattctactggc；
15、r： gagagctctgggtgtacac。
16、本发明提供了单端孢二烯合酶致病基因irtri01，本发明人在cblj-3 基因组中筛选出唯一一个单端孢二烯合酶（trichodiene synthase）基因家族的基因，命名为irtri01。通过crispr/cas9技术及 peg 介导的遗传转化成功在cblj-3中敲除该基因。在pda、cda、sna培养基上，δirtri01的菌丝生长速率高于cblj-3，而与edbh-2相似；在rbca上δirtri01比野生型（wt）产生更少的色素和更多的白色气生菌丝。致病性测定结果显示，δirtri01的致病力明显小于wt，证明irtri01正向调控 i. robusta 对人参的致病力。鉴于irtri01是在cblj-3中唯一一个单端孢二烯合酶基因家族的基因，所以irtri01的缺失可以切断单端孢霉烯在cblj-3中的合成途径，且δirtri01粗毒素对人参造成的腐烂程度明显弱于cblj-3。证明irtri01的缺失导致i. robusta 粗毒素毒力降低，单端孢霉烯类毒素为i. robusta 毒力因子。
1.单端孢二烯合酶致病基因irtri01，它的碱基序列如序列表seq no.1所示。
2.一种crispr/cas9敲除载体，它是针对权利要求1所述的单端孢二烯合酶致病基因irtri01设计的。
3.根据权利要求1所述的一种crispr/cas9敲除载体，其特征在于：
4.根据权利要求1所述的一种crispr/cas9敲除载体，其特征在于：
5.解淀粉芽孢杆菌（bacillus amyloliquefaciens）fg14菌株在制备抑制权利要求1所述的单端孢二烯合酶致病基因irtri01表达药物的应用。
