本发明公开了一种抗发热伴血小板减少综合征病毒人源中和抗体及应用，属于多肽。
背景技术：
1、发热伴血小板减少综合征（severe fever with thrombocytopenia syndrome，sfts）是一种新发蜱媒传染病，由一种新的白蛉病毒——发热伴血小板减少综合征病毒（sfts virus，sftsv）感染引起，由于高病死率和潜在的人传人，sfts于2017年被世界卫生组织（who）列入急需研究的重点疾病清单。针对sftsv既无有效的预防性疫苗，也缺乏特异性的抗病毒药物。针对sftsv治疗，有潜在治疗价值的药物包括法匹拉韦、六氯酚、钙通道阻滞剂、2-氟-2脱氧胞苷、咖啡酸、阿莫地喹、γ-干扰素（ifn-γ）。此外，尽管体外试验显示利巴韦林对sftsv有抑制作用，但临床试验并无显著治疗效果，并且存在引发胰腺炎等副作用，因此目前不推荐使用利巴韦林治疗sfts。钙通道阻滞剂等药物的研究处于实验阶段，尚无应用于人体的报道。由于现在尚无特异性的抗病毒疗法，sfts的治疗主要以支持治疗为主，发展特异性抗sftsv感染的药物已成为亟待解决的技术问题。
2、中和抗体（neutralizing antibodies，nab）是感染病毒后机体产生的具有抗病毒特性的保护性抗体，在病毒感染过程中能直接中和病原体。nab可以阻断病毒包膜与宿主细胞受体相互作用，抑制病原体进入细胞及病毒基因组的释放，从而抑制病原体在机体内的复制传播过程，有效控制疾病进展。nab在病毒感染的预防及治疗过程中展现出巨大潜能。所以，抗病毒中和抗体的相关研究可能在sfts以及其它传染病治疗领域起到关键作用，目前针对人类免疫缺陷病毒（hiv）、埃博拉病毒、基孔肯雅病毒（chikv）、中东呼吸综合征冠状病毒（mers-cov）、严重急性呼吸综合征冠状病毒2型（sars-cov-2）等多种病毒的nab相关研究成果已广泛应用于疫苗效果评估和药物的研发过程中，随着病毒感染的烈性传染病越来越多（sars，mers，ebola，sfts等），抗病毒中和抗体的研究与开发对于临床治疗具有十分重大的意义。
3、本发明的目的是提供一种具有体内广谱中和活性的抗sftsv的中和抗体。
技术实现思路
1、基于上述目的，本发明首先提供了一种靶向发热伴血小板减少综合征病毒gn蛋白的单克隆抗体，所述抗体的重链可变区cdr1、cdr2和cdr3区氨基酸序列和轻链可变区cdr1、cdr2和cdr3区氨基酸序列分别如下述任一序列组合所示：
2、seq id no:1第26-33、51-58和97-104位和seq id no:3第27-32、50-52和89-97位氨基酸，或
3、seq id no:5第26-33、51-57、96-108位和seq id no:7第27-32、50-52、89-97位氨基酸，或
4、seq id no:9第26-33、51-58和97-110位和seq id no:11第27-32、50-52、89-98位氨基酸，或
5、seq id no:13第26-33、51-58和97-110位和seq id no:15第27-32、50-52、89-97位氨基酸。
6、在一个优选的实施方案中，所述抗体的重链可变区的氨基酸序列和抗体轻链可变区的氨基酸序列分别如下述任一序列组合所示：
7、seq id no:1和seq id no:3，在本发明中具有该重链可变区的氨基酸序列和轻链可变区的氨基酸序列的一个具体技术方案的抗体被命名为“jk-2”，或
8、seq id no:5和seq id no:7，在本发明中具有该重链可变区的氨基酸序列和轻链可变区的氨基酸序列的一个具体技术方案的抗体被命名为“jk-8”，或
9、seq id no:9和seq id no:11，在本发明中具有该重链可变区的氨基酸序列和轻链可变区的氨基酸序列的一个具体技术方案的抗体被命名为“jk-77”，或
10、seq id no:13和seq id no:15，在本发明中具有该重链可变区的氨基酸序列和轻链可变区的氨基酸序列的一个具体技术方案的抗体被命名为“jk-79”。
11、在一个更为优选的实施方案中，所述抗体的重链恒定区的氨基酸序列如seq idno:17所示，当所述抗体的重链可变区的氨基酸序列和抗体轻链可变区的氨基酸序列分别如seq id no:1和seq id no:3（jk-2抗体）或seq id no:13和seq id no:15（jk-79抗体）所示时，所述抗体的轻链恒定区的氨基酸序列如seq id no:19（所述轻链为kappa链），或者
12、当所述抗体的重链可变区的氨基酸序列和轻链可变区的氨基酸序列分别如seqid no:5和seq id no:7（jk-8抗体）所示时，所述抗体的轻链恒定区的氨基酸序列为seq idno:19的l84v突变体；
13、当所述抗体的重链可变区的氨基酸序列和轻链可变区的氨基酸序列分别如seqid no:9和seq id no:11时（jk-77抗体）所示时，所述抗体的轻链恒定区的氨基酸序列为seq id no:19的h91q突变体。
14、其次，本发明提供了一种编码上述单克隆抗体的重链和轻链的多核苷酸，编码所述抗体的重链可变区的多核苷酸序列和编码所述抗体的轻链可变区的多核苷酸序列分别如下述任一序列组合所示：
15、seq id no:2和seq id no:4，具有该重链可变区和轻链可变区编码序列的单克隆抗体为jk-2，或
16、seq id no:6和seq id no:8，具有该重链可变区和轻链可变区编码序列的单克隆抗体为jk-8，或
17、seq id no:10和seq id no:12，具有该重链可变区和轻链可变区编码序列的单克隆抗体为jk-77，或
18、seq id no:14和seq id no:16，具有该重链可变区和轻链可变区编码序列的单克隆抗体为jk-79。
19、在一个优选的实施方案中，编码所述抗体的重链恒定区的多核苷酸的序列如seqid no:18所示，当编码所述抗体的重链可变区的多核苷酸序列和编码所述抗体的轻链可变区的多核苷酸序列分别如seq id no:2和seq id no:4（jk-2抗体）所示时，所述轻链的恒定区的多核苷酸的序列如seq id no:20所示，或
20、当编码所述抗体的重链可变区的多核苷酸序列和编码所述抗体的轻链可变区的多核苷酸序列分别如seq id no:6和seq id no:8（jk-8抗体）所示时，所述轻链的恒定区的多核苷酸的序列如seq id no:21所示，或
21、当编码所述抗体的重链可变区的多核苷酸序列和编码所述抗体的轻链可变区的多核苷酸序列分别如seq id no:10和seq id no:12（jk-77抗体）所示时，所述轻链的恒定区的多核苷酸的序列如seq id no:22所示，或
22、当编码所述抗体的重链可变区的多核苷酸序列和编码所述抗体的轻链可变区的多核苷酸序列分别如seq id no:14和seq id no:16（jk-79抗体）所示时，所述轻链的恒定区的多核苷酸的序列如seq id no:23所示。
23、第三，本发明提供了一种表达上述编码单克隆抗体的重链和轻链的多核苷酸的载体。
24、在一个优选的实施方案中，所述载体为真核表达载体，在本发明的一个具体实施方案中，所述表达载体为pcdna3.1。
25、第四，本发明提供了含有所述载体的宿主细胞。
26、所述宿主细胞包括原核细胞、hek293细胞、真菌细胞、cos细胞、cho细胞、bhk细胞、昆虫细胞或人细胞的动物细胞；优选地，所述宿主细胞是哺乳动物细胞；在本发明的一个具体实施方案中，所述宿主细胞为hek 293f细胞。
27、第五，本发明提供了上述的单克隆抗体在制备发热伴血小板减少综合征检测试剂盒中的应用。所述试剂盒基于抗原抗体特异性结合的免疫学特性，可以用于检测标本中的特异性抗原，即，发热伴血小板减少综合征病毒颗粒，或其gn蛋白是否存在，所述检测方法包括但不限于：酶联免疫法、放射免疫法、化学发光免疫法等，检测可以为离体检测，也可以为原位检测。
28、第六，本发明提供了上述的单克隆抗体在制备发热伴血小板减少综合征预防和/或治疗药物中的应用。
29、最后，本发明提供了一种药物组合物，所述组合物含有上述的单克隆抗体。
30、本发明提供了一种全新的人源抗发热伴血小板减少综合征病毒的单克隆中和抗体，该抗体能够特异性结合sftsv gn，抗体jk-2、jk-8、jk-77和jk-79对sftsv gn具有优异的亲和力。而且，jk-2、jk-8、jk-77和jk-79针对不同基因型sftsv的ic50值均≤0.1 μg/ml，具有较高的体外中和活性，并且具有广谱中和活性。在对i型干扰素受体缺陷（ifnar1-/-）小鼠感染sftsv的预防性保护实验中，jk- 2和jk- 8给药组小鼠生存率均为100%，给药组小鼠血清中病毒载量在第3天和第5天显著低于对照组，而且第5天血清中病毒基本清除。在治疗性保护实验中，jk-2和jk-8对小鼠感染sftsv具有良好的治疗效果。本发明提供的人源抗发热伴血小板减少综合征病毒的单克隆中和抗体具有良好的应用前景。
1. 一种靶向发热伴血小板减少综合征病毒gn蛋白的人源单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体的重链可变区cdr1、cdr2和cdr3区氨基酸序列和轻链可变区cdr1、cdr2和cdr3区氨基酸序列分别如下述任一序列组合所示：
2. 根据权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体的重链可变区的氨基酸序列和轻链可变区的氨基酸序列分别如下述任一序列组合所示：
3. 根据权利要求2所述的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体的重链恒定区的氨基酸序列如seq id no:17所示，当所述单克隆抗体的重链可变区的氨基酸序列和轻链可变区的氨基酸序列分别如seq id no:1和seq id no:3或seq id no:13和seq id no:15所示时，所述单克隆抗体的轻链恒定区的氨基酸序列如seq id no:19所示，或者
4. 一种编码权利要求1-3任一所述单克隆抗体的重链和轻链的多核苷酸，其特征在于，编码所述单克隆抗体的重链可变区的多核苷酸序列和编码所述单克隆抗体的轻链可变区的多核苷酸序列分别如下述任一序列组合所示：
5. 根据权利要求4所述的多核苷酸，其特征在于，编码所述单克隆抗体的重链恒定区的多核苷酸的序列如seq id no:18所示，当编码所述单克隆抗体的重链可变区的多核苷酸序列和编码所述单克隆抗体的轻链可变区的多核苷酸序列分别如seq id no:2和seq idno:4所示时，所述单克隆抗体的轻链恒定区的多核苷酸的序列如seq id no:20所示，或
6.一种表达权利要求5所述编码单克隆抗体的重链和轻链的多核苷酸的载体。
7.一种含有权利要求6所述多核苷酸的表达载体。
8.一种含有权利要求7所述表达载体的宿主细胞。
9.权利要求1-3任一项所述的单克隆抗体在制备发热伴血小板减少综合征检测试剂盒中的应用。
10.权利要求1-3任一项所述的单克隆抗体在制备发热伴血小板减少综合征预防和/或治疗药物中的应用。
11.一种药物组合物，其特征在于，所述组合物含有权利要求1-3任一项所述的单克隆抗体。
