本发明涉及医药，具体涉及一种包含淫羊藿的中药复方hplc-elsd指纹图谱构建方法及其应用。
背景技术：
1、蒸发光散射检测器(elsd)是一种高效的液态及固态分离技术，它广泛用于高效液相色谱(hplc)、超临界流体色谱(scf)、毛细管电泳(mce)和薄层色谱(tlc)等分析技术中。elsd是一种通用检测器，它可以检测大多数不具有紫外吸收性质的化合物，如糖类、脂肪酸、氨基酸、药物、天然产物和聚合物等。elsd原理的基本思想是通过将样品分离后，将其溶解在流动相中，并通过高速气流将样品喷雾蒸发，将样品转化为细小颗粒。这些颗粒会在一个特殊的散射器中被散射。与传统的hplc检测器不同，在elsd中，样品分离后的组分不被直接检测，而是将其转化为散射粒子。由于样品中的不同组分具有不同的光学特性，因此它们会在散射器中产生不同的散射角度和强度，elsd检测器通过将这些粒子的散射角度和强度转化为电信号来检测组分。
2、总之，elsd是一种非常有用的分析技术，通常用于hplc等分离技术的检测中。它可以检测到不具有紫外吸收性质的化合物，并且具有高度灵敏性、线性响应和通量稳定性。
3、现有技术中未见包含淫羊藿的中药复方hplc-elsd指纹图谱构建方法的相关报道。
技术实现思路
1、基于此，本发明提供了一种包含淫羊藿的中药复方hplc-elsd指纹图谱构建方法，该构建方法包括如下步骤：
2、供试品溶液的制备：称取适量的中药复方制剂，置于适当体积的第一容器中，加入第一溶剂之后进行超声提取，取出，放冷，称定重量，摇匀，过滤，得到第一滤液；移取该第一滤液置于第二容器中，使用第二溶剂进行萃取，合并萃取液层，蒸干，加入第三溶剂进行溶解并定容至第三容器中，摇匀，过滤，得到第二滤液；移取第二滤液，得到该供试品溶液；其中该中药复方包括淫羊藿、续断、知母、地黄、三棱、莪术、川芎、赤芍和牡蛎；
3、对照品溶液的制备：称取适量的木兰花碱、芍药内酯苷、芍药苷、朝藿定a、朝藿定b、朝藿定c、淫羊藿苷、知母皂苷bⅱ和川续断皂苷ⅵ对照品，添加甲醇溶液配制成木兰花碱、芍药内酯苷、芍药苷、朝藿定a、朝藿定b、朝藿定c、淫羊藿苷、知母皂苷bⅱ和川续断皂苷ⅵ浓度各为400～600μg/ml的该对照品溶液；
4、根据高效液相检测该供试品溶液和该对照品溶液的结果，获得中药复方hplc-elsd指纹图谱；
5、高效液相检测的色谱条件为：采用填料为十八烷基键合硅胶的色谱柱，流动相a选自乙腈、甲醇和四氢呋喃中的一种或多种，流动相b为水、酸水、碱水溶液和/或缓冲盐水溶液，梯度洗脱程序为：0min，10％a；60min，45％a；流速为0.5～1.5ml/min，柱温为25～45℃，进样量为10～30μl，漂移管温度为100～130℃，载气流速为2～4l/min。
6、进一步地，该供试品溶液的制备中，该第一溶剂为水，例如纯净水或蒸馏水。
7、进一步地，该第二溶剂为醇，例如水饱和的正丁醇。
8、进一步地，该第三溶剂为醇，例如甲醇。
9、进一步地，该第一容器为锥形瓶。
10、进一步地，该第一容器的体积为100ml。
11、进一步地，该第二容器为漏斗，例如分液漏斗。
12、进一步地，该第三容器为量瓶。
13、进一步地，该第三容器的体积为5ml。
14、进一步地，该中药复方制剂与该第一溶剂之间的质量/体积(g/ml)之比值为0.01～0.5，例如约0.08。
15、进一步地，该超声处理的时间为10～60min，例如约30min。
16、进一步地，该第一滤液的体积为10～40ml，例如25ml。
17、进一步地，该第一滤液与该第一溶剂之间的体积/体积(ml/ml)之比值为0.1～1.0，例如约0.5。
18、进一步地，该萃取的次数为2～5次，例如3次。
19、进一步地，该第二溶剂的体积为20～60ml/次，例如40ml/次。
20、进一步地，该第二溶剂与该第一溶剂之间的体积/体积(ml/ml)之比值为0.5～1.5，例如约0.8。
21、进一步地，该萃取液层为正丁醇层。
22、进一步地，该定容的体积为5ml。
23、进一步地，该过滤为微孔滤膜过滤。
24、进一步地，该微孔滤膜的孔径为0.45μm。
25、进一步地，该对照品溶液中木兰花碱的浓度为450～550μg/ml。
26、进一步地，该对照品溶液中芍药内酯苷的浓度为450～550μg/ml。
27、进一步地，该对照品溶液中芍药苷的浓度为450～550μg/ml。
28、进一步地，该对照品溶液中朝藿定a的浓度为450～550μg/ml。
29、进一步地，该对照品溶液中朝藿定b的浓度为450～550μg/ml。
30、进一步地，该对照品溶液中朝藿定c的浓度为450～550μg/ml。
31、进一步地，该对照品溶液中淫羊藿苷的浓度为450～550μg/ml。
32、进一步地，该对照品溶液中知母皂苷bⅱ的浓度为450～550μg/ml。
33、进一步地，该对照品溶液中川续断皂苷ⅵ的浓度为450～550μg/ml。
34、进一步地，该对照品溶液为木兰花碱约500μg/ml、芍药内酯苷约500μg/ml、芍药苷约500μg/ml、朝藿定a约500μg/ml、朝藿定b约500μg/ml、朝藿定c约500μg/ml、淫羊藿苷约500μg/ml、知母皂苷bⅱ约500μg/ml、川续断皂苷ⅵ约500μg/ml的混合溶液。
35、进一步地，该流速为0.8～1.2ml/min，例如约1.0ml/min。
36、进一步地，该柱温为30～40℃，例如约35℃。
37、进一步地，该进样量为15～25μl，例如约20μl。
38、进一步地，该漂移管温度为105～125℃，例如约115℃。
39、进一步地，该载气流速为2.5～3.5l/min，例如约3.1l/min。
40、进一步地，该对照品对应的色谱峰的理论塔板数为6000。
41、进一步地，该对照品对应的色谱峰的分离度大于1.5。
42、进一步地，该色谱柱为ultimate c18色谱柱、ymc c18色谱柱、caprisil c18 aq色谱柱或spursil c18色谱柱。
43、进一步地，该色谱柱为spursil c18色谱柱。
44、进一步地，该色谱柱的规格为：柱长250mm，内径4.6mm，粒径5μm。
45、进一步地，该流动相a为乙腈。
46、进一步地，该酸水溶液、碱水溶液和/或缓冲盐水溶液选自不同浓度的弱酸及其盐、弱碱及其盐中的一种或多种。
47、进一步地，该酸水溶液、碱水溶液和/或缓冲盐水溶液选自不同浓度的甲酸、冰乙酸、磷酸、三氟乙酸、甲酸和甲酸铵、乙酸和乙酸钠、乙酸和乙酸铵、磷酸氢二钠和磷酸二氢钠、磷酸氢二钠和磷酸二氢钾、磷酸氢二钠和柠檬酸、柠檬酸和柠檬酸钠、甘氨酸和盐酸、或者邻苯二甲酸和盐酸。
48、进一步地，该酸水溶液为0.08％～0.12％的酸水溶液。
49、进一步地，该酸水溶液为0.08％～0.12％的磷酸水溶液。
50、进一步地，该酸水溶液为约0.1％的磷酸水溶液。
51、进一步地，该缓冲盐水溶液为磷酸盐水溶液和/或醋酸盐水溶液。
52、进一步地，该缓冲盐水溶液的ph值不大于7.0。
53、进一步地，该流动相b为水。
54、进一步地，该中药复方制剂的制备方法包括：(1)称取适量的牡蛎，粉碎成牡蛎细粉；以及(2)称取适量的淫羊藿、续断、知母、地黄、三棱、莪术、川芎和赤芍，加水煎煮，滤过，滤液浓缩至清膏，加入该牡蛎细粉，混匀，干燥，粉碎成细粉，制成制剂，干燥。
55、进一步地，在步骤(2)中，在加入该牡蛎细粉的同时加入适量的淀粉和蔗糖。
56、进一步地，该淫羊藿、该续断、该知母、该地黄、该三棱、该莪术、该川芎、该赤芍和该牡蛎之间的质量之比为(500～1000):(20～100):(20～100):(20～100):(20～100):(20～100):(20～100):(20～100):(5～20)。
57、进一步地，该淫羊藿、该续断、该知母、该地黄、该三棱、该莪术、该川芎、该赤芍和该牡蛎之间的质量之比为约650:约50:约50:约40:约50:约50:约50:约50:约10。
58、进一步地，该牡蛎为煅牡蛎。
59、进一步地，该煎煮的次数为1～5次，例如3次。
60、进一步地，该煎煮的时间为0.5～3小时，例如1～2小时。
61、进一步地，该清膏在50℃下的相对密度为1.2～1.40，例如约1.35。
62、进一步地，该中药复方制剂的剂型为颗粒或胶囊。
63、进一步地，该颗粒为有糖型颗粒或无糖型颗粒。
64、进一步地，该指纹图谱包括1-22号峰，其中，3号峰为木兰花碱，5号峰为芍药内酯苷，6号峰为芍药苷，12号峰为知母皂苷bii，13号峰为朝藿定a，14号峰为朝藿定b，15号峰为朝藿定c，17号峰为淫羊藿苷，18号峰川续断皂苷vi。
65、进一步地，该指纹图谱包括1-22号峰，其中，3号峰、13号峰、14号峰、15号峰、17号峰为和21号峰归属于淫羊藿药味；5号峰、6号峰归属于赤芍药味；12号峰、19号峰归属于知母药味；1号峰、18号峰归属于续断药味。
66、进一步地，该指纹图谱包括22个特征峰，以6号峰芍药苷色谱峰为参比峰，其他21个特征峰的相对保留时间依次为1号色谱峰0.628±10％、2号色谱峰0.748±10％、3号色谱峰0.801±10％、4号色谱峰0.822±10％、5号色谱峰0.894±10％、7号色谱峰1.247±10％、8号色谱峰1.489±10％、9号色谱峰1.727±10％、10号色谱峰1.815±10％、11号色谱峰1.848±10％、12号色谱峰1.993±10％、13号色谱峰2.186±10％、14号色谱峰2.241±10％、15号色谱峰2.279±10％、16号色谱峰2.316±10％、17号色谱峰2.357±10％、18号色谱峰2.585±10％、19号色谱峰2.614±10％、20号色谱峰2.773±10％、21号色谱峰2.919±10％、22号色谱峰3.438±10％。
67、进一步地，该指纹图谱包括22个特征峰，以6号峰芍药苷色谱峰为参比峰，其他21个特征峰的相对峰面积依次为1号色谱峰0.106±10％、2号色谱峰0.047±10％、3号色谱峰0.153±10％、4号色谱峰0.042±10％、5号色谱峰1.137±10％、7号色谱峰0.065±10％、8号色谱峰0.142±10％、9号色谱峰0.991±10％、10号色谱峰0.170±10％、11号色谱峰0.147±10％、12号色谱峰0.326±10％、13号色谱峰0.107±10％、14号色谱峰0.121±10％、15号色谱峰2.494±10％、16号色谱峰0.557±10％、17号色谱峰0.652±10％、18号色谱峰0.654±10％、19号色谱峰0.182±10％、20号色谱峰0.285±10％、21号色谱峰0.062±10％、22号色谱峰0.306±10％。
68、根据本发明的另一个方面，提供了一种包含淫羊藿的中药复方的质量控制方法，该质量控制方法包括如下步骤：
69、(1)根据上述hplc-elsd指纹图谱构建方法建立中药复方基准样品标准hplc-elsd指纹图谱；
70、(2)取中药复方供试品溶液，根据上述hplc-elsd指纹图谱构建方法中的色谱条件进行检测，得到中药复方待测样品hplc-elsd指纹图谱；以及
71、(3)将步骤(2)所得到的该中药复方待测样品hplc-elsd指纹图谱与步骤(1)所得到的该中药复方基准样品标准hplc-elsd指纹图谱进行对比，符合要求的则为合格产品，不符合要求的则为不合格产品。
72、进一步地，该符合要求包括以下的一种或多种：
73、(1)该中药复方待测样品hplc-elsd指纹图谱中呈现出22个特征色谱峰，各特征色谱峰的保留时间在该中药复方基准样品标准hplc-elsd指纹图谱中相应的对照品色谱峰的保留时间值的±10％之内；
74、(2)以芍药苷峰为s峰，中药复方待测样品hplc-elsd指纹图谱中的各特征色谱峰与s峰的相对保留时间在该中药复方基准样品标准hplc-elsd指纹图谱的各特征色谱峰的相对保留时间值的±10％之内；以及
75、(3)按中药色谱hplc-elsd指纹图谱相似度评价系统，该中药复方待测样品hplc-elsd指纹图谱与该中药复方基准样品标准hplc-elsd指纹图谱经相似度计算，相似度不得低于0.90。
76、根据本发明的另一个方面，提供了一种上述构建方法或上述质量控制方法在包含淫羊藿的中药复方的质量检测或质量评价或质量控制中的用途。
77、本发明的有益效果：
78、本发明建立的液相色谱蒸发光检测(hplc-elsd)特征图谱，一共有22个特征峰，采用对照品指认了其中9个特征峰，通过药材归属了其余13个特征峰，本方法可以用于包含淫羊藿的中药复方的质量控制。
1.一种包含淫羊藿的中药复方hplc-elsd指纹图谱构建方法，其特征在于，所述构建方法包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述供试品溶液的制备中，所述第一溶剂为水，例如纯净水或蒸馏水；
3.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述对照品溶液中木兰花碱的浓度为450～550μg/ml；
4.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述流速为0.8～1.2ml/min，例如约1.0ml/min；
5.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述流动相a为乙腈；
6.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述中药复方制剂的制备方法包括：(1)称取适量的牡蛎，粉碎成牡蛎细粉；以及(2)称取适量的淫羊藿、续断、知母、地黄、三棱、莪术、川芎和赤芍，加水煎煮，滤过，滤液浓缩至清膏，加入所述牡蛎细粉，混匀，干燥，粉碎成细粉，制成制剂，干燥；
7.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述指纹图谱包括1-22号峰，其中，3号峰为木兰花碱，5号峰为芍药内酯苷，6号峰为芍药苷，12号峰为知母皂苷bii，13号峰为朝藿定a，14号峰为朝藿定b，15号峰为朝藿定c，17号峰为淫羊藿苷，18号峰川续断皂苷vi；
8.一种包含淫羊藿的中药复方的质量控制方法，其特征在于，所述质量控制方法包括如下步骤：
9.根据权利要求8所述的质量控制方法，其特征在于，所述符合要求包括以下的一种或多种：
10.根据权利要求1至7中任一项所述的构建方法或根据权利要求8或9所述的质量控制方法在包含淫羊藿的中药复方的质量检测或质量评价或质量控制中的用途。
