本发明涉及鱼类繁育领域，具体涉及海洋模式生物海水青鳉优质受精卵的获得方法。
背景技术：
海水青鳉(oryziasmelastigma)，又名黑点青鳉、海水青鳉，原产于巴基斯坦、印度、缅甸和泰国沿海水域。在分类学上，海洋青鳉鱼与日本青鳉同属脊索动物门、辐鳍鱼纲、颚针鱼目、怪颌鳉科、青鳉属。海水青鳉鱼具有个体小、性别容易区分、世代周期短、产卵率高、盐度适应范围广等特点，目前已被推荐为“一种理想的海洋模式鱼种”。
由于对污染物干预敏感，海水青鳉越来越广泛的用于海洋生态毒理学研究，其胚胎已被国际生命科学学会健康和环境科学研究所认定为毒理学研究的重要工具。此外，海水青鳉的受精卵还可用于基因敲除试验研究，是研究基因编辑模拟人类疾病的极好材料。已有研究表明：海水青鳉胚胎作为毒理学和基因编辑研究模型，具有以下优势:(1)鱼卵易获得，世代周期短(3月龄即可达到性成熟)，条件适宜可每日产卵，产卵量较大；(2)鱼卵体积较大，颜色透明且不易破损，发育各阶段变化明显，极易进行各种实验观察和操作；(3)鱼卵对环境中各类污染物的干预较为敏感，可快速反映环境污染状况。
无论是用于毒理学还是基因编辑研究，都需要提供大批量、高受精率、发育良好的海水青鳉受精卵。然而目前，海水青鳉的相关专利主要围绕在养殖设备开发、受精卵孵化等方向上。有关室内养殖方法的专利仅见“海水青鳉的实验室周年养殖方法(公告号：102578006a)”和“一种青鳉鱼高效繁殖及孵化方法(公告号：105900879a)”。前者规定了海水青鳉的适养盐度、温度、密度、光照等养殖参数，解决了海水青鳉的室内周年养殖问题。后者则设计了一种孵化箱，将催产得到的受精卵放置孵化箱中孵化，得到较高的成活率和孵化率。已有方法并不能很好的解决如何在短时间内、大量获取、高受精率的海水青鳉鱼卵这一难题。因此，亟需一种能够快速、高效获取海水青鳉优质受精卵的室内养殖方法。
技术实现要素：
针对现有技术存在的问题，本发明的目的在于设计提供了一种快速、高效获取海水青鳉优质受精卵的室内养殖方法。
本发明所采用的技术解决方案如下：
一种获得海水青鳉优质受精卵的室内养殖方法，所述方法具体步骤如下：
(1)亲鱼养殖的理化条件
a.温度：26-28℃；
b.湿度：40-60％；
c.光强：63-125μmol·m-2·s-1；
d.光照周期：光暗比为14：10；
e.养殖水体：每条鱼活动水体约为5l；
(2)亲鱼挑选
a.月龄：6-8月龄；
b.体长：25-28mm；
c.雄鱼优势特征：臀鳍长占体长比约为0.18-0.25，需挑选臀鳍鳍条较长的雄鱼作为亲鱼，臀鳍长与体长比越大繁殖力越强。靠近腹部的臀鳍鳍条有2-3根延长至其他臀鳍鳍条的1倍，与体长比例0.4-0.6，此类雄鱼繁殖能力较强；
d.雌鱼优势特征：体高占体长比为0.24-0.38，需挑选腹部较大的雌鱼作为亲鱼，体高占体长比在0.24-0.38范围内，体高与体长比值越大繁殖力越强。
(3)雌雄比
雌鱼与雄鱼的比例为1:1；
(4)投饵
上午和下午定时投喂2次初孵卤虫的无节幼体，期间搭配1次人工饵料。
本发明与现有技术相比的有益效果：
本发明方法在养殖实践中对雌鱼和雄鱼的发育特征进行选择甄别，得到一套选择优质雌雄亲鱼的方法，并通过对养殖条件进行不断改进和调整，能够在短时间内得到高受精率的受精卵，为毒理学和基因编辑技术研究提供实验材料。
具体实施方式
下面通过实施例对本发明作进一步说明，但本发明的保护范围不受实施例任何形式上的限制。
一种获得海水青鳉(oryziasmelastigma)优质受精卵的室内养殖方法，所述室内养殖方法的条件如下：
亲鱼养殖用水：海水取自野外无污染海水，使用前经沉淀砂滤，脱脂棉过滤，亲鱼养殖的理化条件如下：
盐度控制为31±1；
养殖温度：26-28℃；
空气湿度：40-60％；
养殖光强：63-125μmol·m-2·s-1；
光照周期：光暗比为14：10，早6点至晚8点为照明期；
养殖水体：保证每条亲鱼的活动水体大于5l；
等到亲鱼性腺发育成熟后，对亲鱼进行筛选条件如下：
挑选6-8月龄的亲鱼，体长25-28mm，且保证雌鱼与雄鱼月龄相近，雄鱼体型稍大于雌鱼，其臀鳍能够很好包裹住雌鱼生殖孔，为亲鱼提供短暂稳定的繁殖微环境，提高受精率；在满足以上前提条件下，挑选臀鳍长占体长比为0.18-0.25，臀鳍鳍条较长的雄鱼作为亲鱼，臀鳍长与体长比越大繁殖力越强。靠近腹部的臀鳍鳍条有2-3根延长至其他臀鳍鳍条的1倍，占体长比例接近0.5，此类雄鱼繁殖能力较强；雌鱼体高占体长比为0.24-0.38，需挑选腹部较大的雌鱼作为亲鱼，体高与体长比越大繁殖力越强；雌雄比例为1：1，20l水体中的最适养殖密度为2雌和2雄。
室内亲鱼养殖方法的投饵策略如下：
每日的上午8点和下午5点定时投喂2次初孵卤虫的无节幼体，期间搭配1次的赛格林人工饵料(青岛赛格林生物工程有限公司)。在前一天采用孵化桶孵化卤虫卵，28-32h后收集无节幼体，用于亲鱼投喂。投喂量必须保证下次投喂前，水体中仍有少量剩余活体卤虫，但也不宜过高，避免卤虫大量死亡耗氧。
所述室内养殖方法的受精卵收集如下：
在亲鱼培养过程中，每日吸底、挑卵、换水，排除粪便和残饵，换水量1/2。将鱼缸底部海水吸入1-2l大烧杯中静止，待鱼卵沉至杯底，去除上层海水。将受精卵用塑料吸管小心吸出，转移至培养皿中，直接用于胚胎观察。观察完毕后，用吸管再次转移至500ml烧杯中，过滤海水培养，用于仔稚鱼孵化培养。
通过为期60天的实验观察，相同培养条件下，二雌二雄实验组的雌鱼平均产卵量最高，为29枚/天，其次为三雄一雌实验组(28枚/天)，显著高于三雌一雄实验组(21枚/天)。二雌二雄实验组单一雌鱼单日最高可产45枚卵。
二雌二雄亲鱼实验组的产卵受精率显著高于三雌一雄实验组和三雄一雌实验组。二雌二雄实验组的平均受精率高达92％，而其余两组的受精率仅为81％和72％。
1.一种获得海水青鳉优质受精卵的室内养殖方法，其特征在于所述方法具体步骤如下：
(1)养殖理化条件
a.温度：26-28℃；
b.湿度：40-60％；
c.光强：63-125μmol·m-2·s-1；
d.光照周期：光暗比为14：10；
e.养殖水体：每条鱼活动水体约为5l；
(2)亲鱼挑选
a.月龄：6-8月龄；
b.体长：25-28mm；
c.雄鱼优势特征：需挑选臀鳍长占体长比为0.18-0.25、臀鳍鳍条较长的雄鱼作为亲鱼，靠近腹部的臀鳍鳍条有2-3根延长至其他臀鳍鳍条的1倍，与体长比例0.4-0.6，此类雄鱼繁殖能力较强；
d.雌鱼优势特征：需挑选体高占体长比为0.24-0.38、腹部较大的雌鱼作为亲鱼，体高占体长比在0.24-0.38范围内，体高与体长比越大繁殖力越强；
(3)雌雄比
雌鱼与雄鱼的比例为1:1；
(4)投饵
上午和下午定时投喂2次初孵卤虫的无节幼体，期间搭配1次人工饵料。
技术总结