1.本发明属于医药载体技术领域，具体涉及一种靶向peg药物载体的制备方法与应用。
背景技术：2.公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
3.癌症作为恶性肿瘤的总称已经成为危害全球居民健康的主要问题。目前治疗癌症的主要手段还是化学疗法，而化疗药物在杀伤肿瘤细胞的同时对正常细胞也有着极大地杀伤能力，存在着非常大的毒副作用，极大的限制了化疗药物的临床应用。
4.纳米载体在抗肿瘤药物递送和治疗癌症方面具有的独特优势，已经成为科学家们的重点研究对象，从而得到了迅速的发展。通过将传统的抗肿瘤药物通过物理包载、静电吸附、囊封等方式，负载到纳米尺度的颗粒中构建的“纳米载体系统”，能基于肿瘤组织的高通透性和长滞留性实现纳米尺度颗粒在肿瘤部位的富集，从而提高药物在生物体内的选择性，增强抗肿瘤药物的疗效，降低其毒副作用。
5.当纳米载体进入人体后要经历一系列的生理屏障才能够到达肿瘤部位。首先当纳米载体作为外源物质进入人体后，人体的免疫系统会对他进行识别并清除，这样就会降低药物的传输效率。因此，药物载体需要一个保护屏障来避免被免疫系统快速识别然后被机体快速清除，而抑制这种与机体非特异性作用从而降低药物清除率的最佳途径就是提高药物载体的生物防污性能(隐形作用)。最常用的办法就是在药物传递载体的外表面包被一层亲水性聚合物来抑制调理作用以及提高水溶性。在基于聚合物的药物递送系统中，聚乙二醇(peg)由于其独特的特性成为生物医学领域应用最广泛的生物防污材料。但是，peg在降低纳米颗粒与生物体非特异性相互作用的同时也会降低其与肿瘤细胞的相互作用，因此，增强peg化药物载体靶向肿瘤细胞的能力能够进一步提高药物利用率。同时，peg化的药物载体进入生物体后会引发peg相关抗体的产生，导致补体系统的激活以及药物载体的体内快速清除。因此，当重复注射peg化药物载体后会引起加速血液清除(abc)现象的产生，从而缩短peg化药物载体的血液循环时间，降低治疗效果。
技术实现要素：6.为了解决现有技术的不足，本发明提供了一种靶向peg药物载体及其制备方法与应用。以peg为矿化剂制备沸石咪唑酯骨架材料(zif-8)纳米颗粒，在酸性环境下对zif-8降解的同时实现peg分子间的交联，得到peg药物载体。本发明所制备的是完全由peg分子交联而成的载体，有效避免了现有的peg化的药物载体中peg修饰密度低的问题。在载体制备过程中可以引入靶向分子，例如透明质酸(ha)，从而制备靶向peg载体。本方法制备方法简便快速，并且可以大量制备。
7.具体提供如下技术方案：
8.本发明第一方面提供一种peg药物载体的制备方法：将peg溶解于2-甲基咪唑水溶液中形成溶液a，再加入金属盐进行反应，得到基于peg分子模板的zif-8纳米颗粒，然后将zif-8颗粒分散于酸性环境中进行降解，同时在交联剂的作用下peg分子之间发生交联，形成peg药物载体。
9.本发明第二方面提供一种上述制备方法得到的peg药物载体。
10.本发明第三方面提供一种靶向peg药物载体，具体为，在上述制备peg药物载体的过程中，将peg、ha一起溶解于2-甲基咪唑水溶液中形成溶液a，再加入金属盐进行反应。进一步通过后续交联反应，形成靶向peg药物载体。
11.本发明第四方面提供上述peg药物载体或上述靶向peg药物载体在药物递送领域中的应用，具体应用方式为：
12.在制备靶向peg药物载体过程中，将药物分子掺入金属盐溶液，最终得到载药的靶向peg纳米颗粒。
13.本发明的一个或多个实施方式至少具有以下有益效果：
14.(1)本发明所提供的靶向peg药物载体，制备过程中，以zif-8作为自牺牲模板由外向内制备得到peg纳米载体，在zif-8降解的同时实现peg分子间的交联，不需要额外的步骤对模板进行去除，制备方法简便快速，可操作性强并且可以大量制备。
15.(2)本发明可以通过改变peg的反应浓度或分子量等条件来实现对模板zif-8粒径的调控，通过制备得到一系列不同大小的zif-8纳米颗粒，从而得到不同尺寸的peg纳米药物载体，实现对载体颗粒尺寸的调控。
16.(3)本发明所提供的peg药物载体为尺寸可控、分散性好的球形结构，常温放置一年后仍保持其完整的形貌结构并且仍然具有良好的分散性。
17.(4)本发明所提供的peg药物载体在小鼠体内具有较长的循环时间，其血液半衰期为12小时左右，因此具有长循环的性质。
18.(5)本发明所提供的peg药物载体能够避免小鼠体内peg相关抗体的产生，并且在小鼠体内已经存在peg抗体的情况下仍然不会被加速清除，因此该peg药物载体能够避免abc现象的产生。
19.(6)本发明所提供的靶向peg药物载体具有优异的靶向能力，极大的提高了药物的递送效率。
20.(7)本发明所提供的靶向peg药物载体是由巯基和双硫键的交联反应得到，因此可以通过还原响应性实现在肿瘤部位的药物缓释，有效缓解药物的毒副作用。
21.(8)本发明所提供的靶向peg药物载体，内部以及表面带有丰富的巯基和双硫键，因此可以用来修饰一些功能性高分子，例如靶向分子、蛋白质和药物分子等，从而实现peg药物载体的功能化。
附图说明
22.构成本发明的一部分的说明书附图用来提供对本发明的进一步理解，本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明，并不构成对本发明的不当限定。
23.图1为以zif-8纳米颗粒为模板，制备dox@peg-hanps的过程示意图。
24.图2为在第1天(a)和第6天(b)分别注射pbs、peg nps、pegylated liposomes和pegylatedβ-glucuronidase后，不同时间点小鼠血清中anti-peg igm和anti-peg igg的含量。
25.图3中，a为peg nps在小鼠体内有无peg抗体存在情况下的循环时间；b为pegylated liposomes在小鼠体内有无peg抗体存在情况下的循环时间。
26.图4中，a为2.5mg ml-1
的8-arm-peg-sh制备得到的peg@zif-8nps的sem图；
27.b为5mg ml-1
的8-arm-peg-sh制备得到的peg@zif-8nps的sem图；
28.c为12.5mg ml-1
的8-arm-peg-sh制备得到的peg@zif-8nps的sem图；
29.d为2.5mg ml-1
的8-arm-peg-sh制备得到的peg@zif-8nps的tem照片；
30.e为5mg ml-1
的8-arm-peg-sh制备得到的peg@zif-8nps的tem照片；
31.f为12.5mg ml-1
的8-arm-peg-sh制备得到的peg@zif-8nps的tem照片；
32.图5为peg-ha nps在不同条件下的稳定性测试结果以及在gsh(10mm)条件下的响应性降解情况。
33.图6中，a和b分别为不同浓度的peg nps和peg-ha nps与raw 264.7细胞和4t1细胞的相互作用情况统计数据。
34.图7为小鼠经peg nps和peg-ha nps静脉给药1h、6h和12h后的活体荧光成像照片。
35.图8中，a为封装有靶向分子ha-sh和化疗药物dox的zif-8纳米颗粒的sem照片，b为dox@peg-ha nps的tem照片，c为dox@peg-ha nps的荧光显微镜照片。
36.图9为dox@peg-ha nps对4t1细胞的细胞毒性实验结果，左侧为dox，右侧为dox@peg-ha nps。
37.图10为dox@peg-ha nps与4t1细胞共培养48小时后的细胞活死染色照片。
38.图11为dox@peg-ha nps的小鼠肿瘤抑制实验结果。
具体实施方式
39.应该指出，以下详细说明都是示例性的，旨在对本发明提供进一步的说明。除非另有指明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同含义。
40.需要注意的是，这里所使用的术语仅是为了描述具体实施方式，而非意图限制根据本发明的示例性实施方式。如在这里所使用的，除非上下文另外明确指出，否则单数形式也意图包括复数形式，此外，还应当理解的是，当在本说明书中使用术语“包含”和/或“包括”时，其指明存在特征、步骤、操作、器件、组件和/或它们的组合。
41.正如背景技术所介绍的，现有peg化的药物载体还具有peg修饰密度低、合成方法复杂等问题。因此，开发新型的简便的方法制备完全由peg分子交联而成的载体，对于提高peg密度、降低载体的体内清除率并拓展peg载体在蛋白和药物等治疗剂的递送具有非常重要的应用价值。
42.为了解决如上的技术问题，本发明第一方面提供一种peg药物载体的制备方法：将peg溶解于2-甲基咪唑水溶液中形成溶液a，再加入金属盐进行反应，得到基于peg分子模板的zif-8纳米颗粒，然后将zif-8颗粒分散于酸性环境中进行降解，同时peg分子之间发生交联，形成靶向peg药物载体。
43.本方法以peg为模板，先制得zif-8纳米颗粒，后以zif-8作为自牺牲模板由外向内制备得到peg药物载体，在zif-8降解的同时实现peg分子间的交联，不需要额外的步骤对模板进行去除，制备方法简便快速，可操作性强并且可以大量制备。而且，本发明制备得到的peg药物载体为尺寸可控、分散性好的球形结构，常温放置一年后仍保持其完整的形貌结构并且仍然具有良好的分散性。
44.本发明所制备的peg药物载体，是完全由peg分子交联而成的载体，而非是现有的peg化的药物载体，进而摆脱了peg化药物载体所普遍存在的peg修饰密度低的问题。本发明所制备的peg药物载体具有优异的隐形性，并且可以避免abc现象的产生，有效提高药物递送效率。
45.在本发明的一个或多个实施方式中，所述peg为8-arm-peg-sh，分子量为10-40kda，优选为40kda；
46.进一步的，所述溶液a中8-arm-peg-sh的浓度为2.5～100mg ml-1
。
47.2-甲基咪唑和金属盐为构建zif-8结构的必要组成原料，二者的浓度会影响骨架结构的形成。
48.作为优选的实施方式，所述溶液a中2-甲基咪唑的浓度为120-200mm；进一步优选的，2-甲基咪唑的浓度为160mm。
49.所述金属盐包括硝酸锌、硝酸铜、硝酸钴、硝酸镍中的任意一种。
50.优选的，所述金属盐的浓度为：30-70mm，优选为40mm。
51.进一步的，所述金属盐为硝酸锌。
52.在本发明的一个或多个实施方式中，溶液a与金属盐溶液混合的体积比为(1-2)：(1-2)，优选为1:1。进一步的，加入金属盐后，置于旋转混匀仪上反应；反应时间为30-60min。
53.进一步的，zif-8颗粒进行离心、水洗后分散于水中，再分散于酸性环境中进行降解。
54.zif-8进行离心采用的离心速度为5000-11000rcf。
55.所述酸性环境的作用为了对zif-8结构进行降解，在降解的同时发生peg分子之间的交联，从而得到只含有peg的药物载体。
56.具体地，所述酸性环境通过溶于peg交联剂的酸性缓冲溶液来构建。
57.优选的，所述酸性环境通过溶有peg交联剂的醋酸钠缓冲溶液来构建，醋酸钠缓冲溶液的浓度为50mm，ph为5.5-6.0；
58.进一步优选的，所述peg交联剂为8-arm-peg-tnb，8-arm-peg-tnb的制备路线如下：
[0059][0060]
进一步优选的，8-arm-peg-tnb的分子量为10-40kda；优选的，8-arm-peg-tnb的分子量为10kda；
[0061]
进一步优选的，酸性缓冲溶液中8-arm-peg-tnb的浓度为1～20mg ml-1
，优选为5mgml-1
。
[0062]
为了在对zif-8结构进行降解时能够尽快得到peg交联的大分子，所述zif-8纳米颗粒降解过程在透析袋中进行，在降解的同时滤掉小分子杂质，进而获得纯净的peg药物载体颗粒。
[0063]
进一步的，先在截留分子量为1-7kda的透析袋中置于酸性缓冲溶液中透析4-5小时，然后转移至截留分子量为100-120kda的透析袋中置于水中透析3-4天。其中，前期在酸性缓冲溶液中进行透析，目的是为了使得zif-8进行充分降解，后期在水环境中进行降解，目的在于除去未反应的peg分子以及反应过程中的副产物
[0064]
本发明第二方面提供一种上述制备方法得到的peg药物载体。
[0065]
本发明第三方面提供一种靶向peg药物载体，具体为，在上述制备peg药物载体的过程中，将peg、靶向分子一起溶解于2-甲基咪唑水溶液中形成溶液a，再进行后续反应，形成靶向peg药物载体。
[0066]
所述靶向peg药物载体具有显著的靶向能力，从而可以很大程度的提高药物的利用率，同时利用该载体的gsh响应性能够实现药物在肿瘤部位的控制释放，对增强药物的半衰期及降低化疗药物的毒副作用具有非常重要的意义。
[0067]
优选的，所诉的靶向分子为叶酸、单糖或寡糖、ha、转铁蛋白或rgd肽，进一步优选为ha；
[0068]
所述ha优选为巯基化的ha(ha-sh)。
[0069]
所述ha的分子量为51-120kda，优选为51kda。
[0070]
本发明第三方面提供上述靶向peg药物载体在药物递送领域中的应用，具体应用方式为：
[0071]
在制备靶向peg药物载体过程中，将药物分子掺入硝酸锌溶液，最终得到载药的靶向peg纳米颗粒。
[0072]
所述的药物分子优选为阿霉素(dox)。
[0073]
所述的药物分子dox在硝酸锌溶液中的浓度为0.25-5mg ml-1
,进一步优选的，dox的浓度为2mg ml-1
。
[0074]
为了使得本领域技术人员能够更加清楚地了解本发明的技术方案，以下将结合具体的实施例详细说明本发明的技术方案。
[0075]
实施例1
[0076]
一种由zif-8复型制备peg药物载体的方法，步骤如下：
[0077]
将分子量为40kda的8-arm-peg-sh溶于2-甲基咪唑水溶液中得到溶液1；溶液1中peg的浓度为12.5mg ml-1
，2-甲基咪唑的浓度为160mm；
[0078]
将硝酸锌溶于水中得溶液2，溶液2中硝酸锌的浓度为40mm；
[0079]
将溶液1倒入等体积的溶液2中，置于旋转混匀仪上反应30min，将得到的产物进行离心，得到封装了peg的zif-8纳米颗粒(peg@zif-8nps)后用水洗三遍最终分散于300μl水中；
[0080]
将300μl的peg@zif-8nps分散液倒入溶有8-arm-peg-tnb的醋酸钠缓冲溶液(50mm，ph＝5.5)中，其中8-arm-peg-tnb的浓度为5mg ml-1
；
[0081]
将上诉混合液转移至截留分子量为3.5kda的透析袋中置于醋酸钠缓冲溶液(50mm，ph 5.5)中透析4小时，然后将混合液转移至截留分子量为100kda的透析袋中置于水中透析3天，得到由peg@zif-8nps复型的peg纳米颗粒(peg nps)。
[0082]
该方法制备peg纳米载体产率高，并且可以进行大量制备。
[0083]
性能测试：
[0084]
(1)血清中peg抗体检测
[0085]
以peg化的脂质体(pegylated liposomes)和peg化的β-葡萄糖醛酸酶(pegylatedβ-glucuronidase)作为阳性对照组，将pbs、peg nps、pegylated liposomes和pegylatedβ-glucuronidase分别通过尾静脉注射的方式，在第1天和第6天注入balb/c小鼠体内。在第6天、第11天和第16天对小鼠取血，然后对peg相关抗体(anti-peg igm和anti-peg igg)进行检测。结果如图2所示，与pegylated liposomes和pegylatedβ-glucuronidase组相比，peg nps组基本没有产生anti-peg igm和anti-peg igg。因此，peg nps可以有效避免peg抗体的产生。
[0086]
(2)体内循环时间测试
[0087]
将荧光标记的peg nps和pegylated liposomes通过尾静脉注射进小鼠体内，在给药后的1小时、3小时、8小时、12小时、24小时和48小时剪尾取血，将全血离心(3000rcf，10分钟)后获得血清，然后用酶标仪检测血清的荧光强度。为了进一步验证peg nps对abc现象的抑制作用，在第1天和第6天给小鼠尾静脉注射聚pegylatedβ-glucuronidase，使小鼠体内产生高水平的peg抗体，然后在第11天注射peg nps和pegylated liposomes，采用相同的方
法在上述不同时间点获取血清并检测血清的荧光强度。结果如图3所示，小鼠体内peg抗体的存在会显著降低pegylated liposomes的循环时间，而peg nps的循环时间没有受到明显的影响，证明了peg nps能够有效抑制abc现象的产生。
[0088]
实验例2
[0089]
通过改变peg的反应浓度调控peg颗粒的粒径：
[0090]
将不同质量的8-arm-peg-sh(40kda)溶于2-甲基咪唑水溶液(160mm)中得到分别具有不同8-arm-peg-sh(40kda)浓度的溶液1；将硝酸锌溶于水中得溶液2，溶液2中硝酸锌的浓度为40mm；将溶液1倒入等体积的溶液2中，置于旋转混匀仪上反应30min，将得到的产物进行离心，然后用水洗三遍最终分散于300μl水中；将300μl反应液倒入溶有8-arm-peg-tnb的醋酸钠缓冲溶液(50mm，ph＝5.5)中，其中8-arm-peg-tnb的浓度为5mg ml-1
；将上诉混合液转移至截留分子量为3.5kda的透析袋中置于醋酸钠缓冲溶液(50mm，ph 5.5)中透析4小时，然后将混合液转移至截留分子量为100kda的透析袋中置于水中透析3天，得到由peg@zif-8nps复型的peg nps。
[0091]
由peg@zif-8nps的sem(图4a-c)及peg nps的tem(图4d-f)结果证明，制备得到的peg纳米颗粒均具有非常好的分散性；8-arm-peg-sh(40kda)的反应浓度越大，得到的peg@zif-8nps的粒径越小，最终得到的peg nps的粒径就越小，因此，通过调整8-arm-peg-sh的反应浓度可以调控peg纳米颗粒的尺寸。
[0092]
实施例3
[0093]
一种靶向peg药物载体的制备，步骤如下：
[0094]
将8-arm-peg-sh(40kda)和ha-sh溶于2-甲基咪唑水溶液中得到溶液1，溶液1中8-arm-peg-sh的浓度为12.5mg ml-1
，ha-sh的浓度为0.25mg ml-1
，2-甲基咪唑的浓度为160mm；
[0095]
将硝酸锌溶于水中得溶液2，溶液2中硝酸锌的浓度为40mm；
[0096]
将溶液1倒入等体积的溶液2中，置于旋转混匀仪上反应30分钟，将得到的产物进行离心，然后用水洗三遍最终得到封装了peg和ha的zif-8纳米颗粒(peg-ha@zif-8nps)，将其分散于300μl水中；
[0097]
将300μl peg-ha@zif-8nps分散液倒入溶有8-arm-peg-tnb的醋酸钠缓冲溶液(50mm，ph＝5.5)中，其中8-arm-peg-tnb的浓度为5mg ml-1
；
[0098]
将上述混合液转移至截留分子量为3.5kda的透析袋中置于醋酸钠缓冲溶液(50mm，ph＝5.5)中透析4小时，然后将混合液转移至截留分子量为100kda的透析袋中置于水中透析3天，得到由金属有框架材料复型的靶向peg纳米载体(peg-ha nps)。
[0099]
性能测试：
[0100]
(1)载体的稳定性及响应降解性
[0101]
将上述peg-ha nps进行荧光标记，取出20μl分别将其加入到10ml的pbs(10mm)、细胞培养基1640及谷胱甘肽gsh(10mm)水溶液中，在不同时间点取出100μl通过流式细胞仪数出未降解的peg纳米颗粒的个数。结果如图5所示，peg-ha nps在pbs及细胞培养基中均具有非常好的稳定性，而在10mm的gsh的条件下就可以发生迅速降解。
[0102]
(2)细胞相互作用实验
[0103]
首先选用巨噬细胞raw 264.7研究其与两种颗粒的非特异性相互作用。在24孔板
中每个孔铺5万个细胞，培养过夜使细胞贴壁后加入不同浓度(25μg ml-1
、50μg ml-1
和100μg ml-1
)被荧光标记了的peg nps和peg-ha nps，培养12小时后用pbs清洗两遍，然后使用胰酶消化后将细胞收集起来使用流式细胞仪进行检测。检测结果如图6a所示，没有修饰靶向分子的pegnps与巨噬细胞之间的相互作用非常弱，而peg-ha nps与巨噬细胞之间的相互作用有略微增强的趋势。
[0104]
然后选用能被ha靶向的4t1细胞来研究peg-ha nps的特异性靶向效果。同样的方法，24孔板中每个孔铺5万个细胞，培养过夜使细胞贴壁后加入不同浓度(25μg ml-1
、50μg ml-1
和100μg ml-1
)被荧光标记了的peg nps和peg-ha nps，培养12小时后用pbs清洗两遍，然后使用胰酶消化后将细胞收集起来使用流式细胞仪进行检测。检测结果如图6b所示，修饰了靶向分子的peg-ha nps相比于没有修饰靶向分子的peg nps，与细胞的相互作用明显增强，证明其具有非常显著的靶向能力。
[0105]
(4)小鼠活体成像实验
[0106]
将被荧光标记的peg nps和peg-ha nps通过小鼠的尾静脉打入带有4t1肿瘤的balb/c小鼠体内，在1小时、6小时和12小时时将小鼠麻醉后进行活体成像。成像结果如图7所示，可以证明，修饰了靶向分子ha的peg-ha nps在肿瘤部位的富集明显强于peg nps，也证明了其靶向作用。
[0107]
实施例4
[0108]
一种负载药物的靶向peg纳米颗粒的制备，步骤如下：
[0109]
将8-arm-peg-sh(40kda)和ha-sh(51kda)溶于2-甲基咪唑水溶液中得溶液1，溶液1中8-arm-peg-sh的浓度为12.5mg ml-1，ha-sh的浓度为0.25mg ml-1，dox的浓度为2mg ml-1，2-甲基咪唑的浓度为160mm；
[0110]
将dox溶于硝酸锌水溶液中得溶液2，溶液2中dox的浓度为2mg ml-1；
[0111]
将溶液1倒入溶液2中，旋转混匀反应20-30分钟，反应产物经过离心、洗涤后，得到dox@peg-ha@zif-8nps，该颗粒的sem表征结果如图8a所示；
[0112]
然后将得到的zif-8分散于溶于peg交联剂的酸性缓冲溶液中，置于透析袋中在酸性缓冲溶液中进行透析反应，反应结束后将反应产物进行离心和洗涤，最终得到负载了ha-sh和dox的peg纳米颗粒(dox@peg-ha nps)，该颗粒的tem表征结果如图8b所示，dox@peg-ha nps的粒径为150nm左右。图8c为dox@peg-ha nps的荧光显微镜照片，能够证明该颗粒具有非常好的分散性。
[0113]
性能测试：
[0114]
(1)细胞毒性实验
[0115]
在96孔板中每个孔接8000个4t1细胞，在恒温二氧化碳培养箱中培养过夜使细胞贴壁。分别将不同浓度(0.5μg ml-1
、1μg ml-1
、2μg ml-1
和4μg ml-1
)的dox以及dox@peg-ha nps加入到孔板中共培养48小时。培养结束后，每个孔用pbs清洗两遍后各加10μl的mtt(5mg ml-1
)，作用4小时后，每孔再加入100μl的dmso溶解甲瓒。使用酶标仪检测吸光度，激发波长设置为570nm。结果如图9所示，从细胞毒性的结果来看，dox@peg-ha nps对肿瘤细胞具有明显的杀伤效果。
[0116]
(2)细胞凋亡实验
[0117]
在24孔板中的每个孔接种5万个4t1细胞，培养过夜使细胞贴壁。设置药物浓度为2
μg ml-1
，培养时间为48小时，然后去除培养基，每个孔加500μl含染料的培养基，2μmol l-1
的calcein-am和4μmol l-1
的pi。染色10分钟后，用倒置荧光显微镜观察，结果如图10所示，红色代表凋亡的细胞，绿色代表存活的细胞。其结果与细胞毒性结果相一致，dox@peg-ha nps组细胞凋亡的最多。
[0118]
(3)小鼠肿瘤抑制实验
[0119]
将pbs、dox以及dox@peg-ha nps在第0天、2天和6天通过微静脉注射进带有4t1肿瘤的balb/c小鼠体内，每隔一天测量一次小鼠肿瘤体积，在第14天处死小鼠后将每只小鼠的完整肿瘤解剖出来拍照，如图11所示，相比于pbs组和dox组，dox@peg-ha nps组对小鼠肿瘤生长的抑制效果最为显著。
[0120]
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
技术特征：1.一种peg药物载体的制备方法，其特征在于：将peg溶解于2-甲基咪唑水溶液中形成溶液a，再加入金属盐进行反应，得到基于peg分子模板的zif-8纳米颗粒，然后将zif-8颗粒分散于酸性环境中进行降解，同时peg分子之间发生交联，形成peg药物载体。2.根据权利要求1所述peg药物载体的制备方法，其特征在于：peg为8-arm-peg-sh，分子量为10-40kda；优选的，所述溶液a中8-arm-peg-sh的浓度为2.5-100mg ml-1
；优选的，所述溶液a中2-甲基咪唑的浓度为120-200mm。3.根据权利要求1所述peg药物载体的制备方法，其特征在于：所述金属盐选自硝酸锌、硝酸铜、硝酸钴或硝酸镍中的任意一种；优选的，所述金属盐的浓度为30-70mm；优选的，加入金属盐后，置于旋转混匀仪上反应，反应时间为30-60min。4.根据权利要求1所述peg药物载体的制备方法，其特征在于：所述酸性环境通过溶于peg交联剂的酸性缓冲溶液来构建；优选的，所述酸性环境通过溶有peg交联剂的醋酸钠缓冲溶液来构建，醋酸钠缓冲溶液的ph值为5.5-6.0。5.根据权利要求1所述peg药物载体的制备方法，其特征在于：peg交联剂为8-arm-peg-tnb，其分子量为10-40kda，酸性缓冲溶液中8-arm-peg-tnb的浓度为1～20mg ml-1
。6.根据权利要求1所述peg药物载体的制备方法，其特征在于：zif-8纳米颗粒降解过程在透析袋中进行，在降解的同时滤掉小分子杂质，进而获得纯净的peg药物载体颗粒；优选的，先在截留分子量为1-7kda的透析袋中置于酸性缓冲溶液中透析4-5h，然后转移至截留分子量为100-120kda的透析袋中置于水中透析3-4天。7.一种peg药物载体，其特征在于：由权利要求1-6任一所述制备方法制备而成。8.一种靶向peg药物载体的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：在权利要求7所述peg药物载体的制备的过程中，将peg和靶向分子一起溶解于2-甲基咪唑水溶液中形成溶液a，再进行后续反应，形成靶向peg药物载体；所述靶向分子为叶酸、单糖或寡糖、ha、转铁蛋白或rgd肽。9.一种靶向peg药物载体，其特征在于：由权利要求8所述靶向peg药物载体的制备方法制备而成。10.权利要求9所述靶向peg药物载体在药物递送中的应用；优选的，具体应用方法为：在制备靶向peg药物载体过程中，将药物分子掺入硝酸锌溶液，最终得到载药的靶向peg纳米颗粒；优选的，药物分子为dox，药物分子dox在硝酸锌溶液中的浓度为0.25-5mg ml-1
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技术总结本发明属于医药载体技术领域，具体涉及一种靶向PEG药物载体及其制备方法与应用。本方法同步实现了模板去除和PEG交联的过程，不需要额外步骤对模板进行去除，制备方法简便快速，可操作性强，并且可以大量制备。本发明所制备的是完全由PEG分子交联而成的载体，有效避免了现有的PEG化的药物载体中PEG修饰密度低的问题，并且能够有效抑制加速血液清除现象的产生，从而实现药物的高效递送。靶向分子的引入可以实现药物载体与肿瘤细胞的特异性相互作用，以及体内的肿瘤特异性富集，提高药物提送的效率。送的效率。送的效率。
技术研发人员：崔基炜 田媛 于群 郝京诚
受保护的技术使用者：山东大学
技术研发日：2022.09.14
技术公布日：2022/12/1
