本发明涉及五谷虫的新用途，具体地，是五谷虫或其提取物用于制备降低抗癌药物肝脏毒性的药物的用途。
背景技术：
肝脏是药物体内代谢的主要场所，在进行抗肿瘤治疗中，化疗药物、止痛药物造影剂以及控制感染而使用的抗生素等，均可能对肝脏产生不同程度的影响，严重的可导致死亡。药物尤其是口服药物，经消化道吸收后，通过酶的作用，由脂溶性药物转变为极性强的水溶性化合物，然后再从胆汁或尿排出体外。有的药物则不被转换成极性化合物，在肝脏中直接裂解或灭活。
抗肿瘤药物引起的肝脏损伤在出现临床症状前多数有潜伏期，时间视药物的种类、剂量、个体差异及健康状况、肝脏代谢能力、有无过敏体质等因素而定。有的与给药途径有关，一般来讲静脉给药较口服给药的潜伏期短。临床表现差异很大，绝大多数病人没有自觉不适，但轻重不等的化验室酶学异常相当多见。如果出现临床症状，可因肝损伤的类型和程度不同而异。以肝细胞损伤为主时，表现类似病毒性肝炎，有食欲不振、乏力、恶心、轻度黄疸，肝脏轻度肿大伴有触痛和叩击痛。严重者可出现重症肝炎样表现，发生出血倾向、腹水、肝性脑病。对症处理后需较长时间才能恢复。
以淤胆为主的称为药物性黄疸。单纯瘀胆病人起病较为隐匿，常无前驱症状或仅有转氨酶升高，停药后很快消失，通常无发热、皮疹或嗜酸性粒细胞增多。瘀胆伴有炎症型病人则呈瘀胆型肝炎表现，常有发热、畏寒、恶心、腹痛和皮疹等前驱症状，随后出现茶色尿、黄疸、瘙痒、粪色浅和肝肿大伴有压痛等。长期应用对肝脏损伤较大的化疗药物，可引起慢性肝病，表现为慢性肝炎、肝脂肪变、肝纤维化和肝硬化症状。
引起肝损伤的化疗药物主要有甲氨蝶呤(mtx)、氟尿嘧啶(5-fu)、氮烯咪胺(dtic)、环磷酰胺(ctx)，其他的如光辉霉素、苯丁酸氮芥、亚硝脲类、长春碱类、更生霉素、博莱霉素、阿霉素、丝裂霉素、足叶乙甙、紫杉醇、泰索帝、顺铂及卡铂等均对肝脏有不同程度的损害。
五谷虫是丽蝇科昆虫大头金蝇或其他近缘昆虫的幼虫或蛹壳，虫体呈扁圆柱形，长1-1.5cm，宽2-3mm，黄白色，有的略透明。五谷虫性寒、味甘、咸苦，五毒，入脾胃经，具有健脾化食、去热消疳等功能。现有研究发现，五谷虫提取物能够杀灭大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等，具有广谱抗菌活性，还能够促进创面愈合、抗动脉粥样硬化、降血脂，对白血病细胞、肺癌细胞、hiv-1整合酶等具有抑制活性。
原花青素，简称pc，是一种有着特殊分子结构的生物类黄酮混合物，其低聚物:低聚原花青素(opc)是目前国际上公认的清除人体内自由基有效的天然抗氧化剂。一般为红棕色粉末，气微、味涩，溶于水和大多有机溶剂。研究表明蓝莓叶提取物原花青素可阻止丙肝病毒复制。是一种有着特殊分子结构的生物类黄酮，是能够清除人体内自由基有效的天然抗氧化剂。一般为葡萄籽提取物或法国海岸松树皮提取物。原花青素(葡萄籽提取物)是一种新型高效抗氧化剂，具有很强的体内活性。实验证明，低聚原花青素opc的抗自由基氧化能力是维生素e的50倍，维生素c的20倍，并吸收迅速完全，口服20分钟即可达到最高血液浓度，代谢半衰期达7小时之久。
本申请发明人经过多年研究，发现五谷虫或其提取物具有降低抗癌药物肝脏毒性的良好作用。特别是再加入原花青素，会取得出人预料的协同作用。
技术实现要素：
本发明的一个方面，提供了一种用于降低抗癌药物肝脏毒性的药物组合物，包含五谷虫或其提取物。
本发明的另一个方面，所述药物组合物，其中五谷虫提取物按照如下方法制备：
(1)人工养殖五谷虫冷冻干燥，粉碎后过筛，用二氧化碳流体超临界萃取，得到粗产物；
(2)向步骤1得到的粗产物中加入3％的蒸馏水，搅拌混合；离心分离，去除沉淀物，得到脱胶油脂；
(3)向步骤2得到的脱胶油脂中加入氢氧化钠，搅拌，凝结，离心分离；向上清液中加入蒸馏水，搅拌，静置，分离，重复1-3次，直到下层水加酚酞不变色即可；取上清液备用；
(4)对上清液用活性炭吸附剂脱色：活性炭添加量为4％，脱色温度为90℃，脱色时间为90分钟，反复三次，即得五谷虫提取物。
本发明的另一个方面，所述药物组合物还包含能够引起肝脏毒性的药物。
本发明的另一个方面，所述能够引起肝脏毒性的药物包括但不限于抗癌药物甲氨蝶呤、氟尿嘧啶、氮烯咪胺、环磷酰胺，其他的如光辉霉素、苯丁酸氮芥、亚硝脲类、长春碱类、更生霉素、博莱霉素、阿霉素、丝裂霉素、足叶乙甙、紫杉醇、泰索帝、顺铂及卡铂。
本发明的另一个方面，所述药物组合物，其包含药学上可接受的载体。
本发明的另一个方面，所述药物组合物，其为片剂、胶囊、颗粒剂、注射剂、滴鼻剂、吸入剂、缓释剂、气雾剂或膜剂。
本发明的另一个方面，提供了所述药物组合物在制备降低抗癌药物肝脏毒性的药物中的用途。
本发明的另一个方面，提供了五谷虫或其提取物在制备降低抗癌药物肝脏毒性的药物中的用途。
本发明的另一个方面，提供了五谷虫或其提取物在制备降低抗癌药引起的肝脏毒性的药物中的用途。
本发明的另一个方面，所述抗癌药包括顺铂、甲氨蝶呤、阿霉素、紫杉醇等。
发明详述
本申请发明人通过多年研究，发现五谷虫或其提取物对于降低各种原因导致的肝脏毒性具有有效的药理活性。进一步地，将五谷虫或其提取物与原花青素以特定比例组合，能够进一步增强降低抗癌药物肝脏毒性的活性，具有协同作用。
如非特殊说明，本申请所述计量单位为质量。
本发明的一个方面，提供了一种用于降低抗癌药物肝脏毒性的药物组合物，包含五谷虫或其提取物。
本发明的另一个方面，所述药物组合物，其中五谷虫提取物按照如下方法制备：
(1)人工养殖五谷虫冷冻干燥，粉碎后过筛，用二氧化碳流体超临界萃取，得到粗产物；
(2)向步骤1得到的粗产物中加入3％的蒸馏水，搅拌混合；离心分离，去除沉淀物，得到脱胶油脂；
(3)向步骤2得到的脱胶油脂中加入氢氧化钠，搅拌，凝结，离心分离；向上清液中加入蒸馏水，搅拌，静置，分离，重复1-3次，直到下层水加酚酞不变色即可；取上清液备用；
(4)对上清液用活性炭吸附剂脱色：活性炭添加量为4％，脱色温度为90℃，脱色时间为90分钟，反复三次，即得五谷虫提取物。
本发明的另一个方面，所述药物组合物还包含能够引起肝脏毒性的药物。
本发明的另一个方面，所述能够引起肝脏毒性的药物包括但不限于抗癌药物甲氨蝶呤、氟尿嘧啶、氮烯咪胺、环磷酰胺，其他的如光辉霉素、苯丁酸氮芥、亚硝脲类、长春碱类、更生霉素、博莱霉素、阿霉素、丝裂霉素、足叶乙甙、紫杉醇、泰索帝、顺铂及卡铂。
本发明的另一个方面，所述药物组合物，其包含药学上可接受的载体。
本发明的另一个方面，所述药物组合物，其为片剂、胶囊、颗粒剂、注射剂、滴鼻剂、吸入剂、缓释剂、气雾剂或膜剂。
本发明的另一个方面，提供了所述药物组合物在制备降低抗癌药物肝脏毒性的药物中的用途。
本发明的另一个方面，提供了五谷虫或其提取物在制备降低抗癌药物肝脏毒性的药物中的用途。
本发明的另一个方面，提供了五谷虫或其提取物在制备降低抗癌药引起的肝脏毒性的药物中的用途。
本发明的另一个方面，提供了所述药物组合物在制备预防或治疗肝脏毒性的药物中的用途。
本发明的另一个方面，提供了五谷虫或其提取物在制备预防或治疗肝脏毒性的药物中的用途。
本发明的另一个方面，提供了五谷虫或其提取物在制备预防或治疗由抗癌药或放射引起的肝脏毒性的药物中的用途。
本发明的另一个方面，所述抗癌药包括顺铂、甲氨蝶呤、阿霉素、紫杉醇等。
本发明的另一个方面，所述五谷虫或其提取物在药物中的含量为0.1-99.9％。
本发明的另一个方面，所述药物包含五谷虫或其提取物和药学上可接收的载体。
本发明的另一个方面，提供了一种能够降低抗癌药物肝脏毒性的药物组合物，其中包含五谷虫或其提取物和原花青素。
本发明的另一个方面，提供了包含五谷虫或其提取物和原花青素的药物组合物在制备预防或治疗肝脏毒性的药物中的用途。
本发明的另一个方面，所述药物组合物中五谷虫或其提取物和原花青素的质量比例为1-200:1。
本发明的另一个方面，所述药物组合物中五谷虫或其提取物和原花青素的质量比例为1-100:1。
本发明的另一个方面，所述药物组合物中五谷虫或其提取物和原花青素的质量比例为2-80:1。
本发明的另一个方面，所述药物组合物中五谷虫或其提取物和原花青素的质量比例为80:1。
本发明的另一个方面，所述药物组合物中五谷虫或其提取物和原花青素的质量比例为50:1。
本发明的另一个方面，所述药物组合物中五谷虫或其提取物和原花青素的质量比例为40:1。
本发明的另一个方面，所述药物组合物还包含能够引起肝脏毒性的物质。
本发明的另一个方面，所述能够引起肝脏毒性的物质包括但不限于抗癌药物甲氨蝶呤、氟尿嘧啶、氮烯咪胺、环磷酰胺，其他的如光辉霉素、苯丁酸氮芥、亚硝脲类、长春碱类、更生霉素、博莱霉素、阿霉素、丝裂霉素、足叶乙甙、紫杉醇、泰索帝、顺铂及卡铂。
本发明的另一个方面，五谷虫或其提取物和原花青素的组合是“用于同时、分别或依次使用的联合剂或药物组合物”，尤其指的是一种“组分包”，意思是五谷虫或其提取物和原花青素可各自独立地施用或通过具有不同组分含量的不同固定组合施用，即在不同时间点或同时施用。组分包的组分可例如同时施用或按时间顺序间隔施用，即在不同时间点且以相同或不同的时间间隔施用组分包的任意组分。优选地，所选择的时间间隔应使联合使用组分对所治疗疾病或病症的效果高于仅使用任何单独的组分所获得效果。
术语“预防”指的是向健康患者预防性地施用所述组合以防止此处所述的疾病和病症发生。此外，术语“预防”还可以指向处于待治疗疾病前期的患者预防性施用所述组合。
治疗有效量的本发明组合中每种组分可以同时或以任何依次使用，并且所述组分可分别施用或作为固定组合施用。组合中的单个组分可以在治疗期间的不同时间分别施用或者以分开的或单一的组合形式并施用。此外，术语“使用”还包括使用可在体内转化为所选择的药物的任何药物的前药。因此，应将本发明理解为包括所有这些同时或交替治疗的方案，并应相应地对术语“使用”进行解释。
本发明剂量形式的优选施用途径为经肠内或优选口服途径。由于施用方便，片剂和胶囊代表了最佳的口服剂量单位形式。
组合治疗中所使用的每种活性成分的有效剂量可以随所使用的具体的药物组合物、使用方式或所治疗病症的严重程度而变化。
本发明药物所使用的药学上可接收的载体包括填充剂、稀释剂、赋形剂、稳定剂、抗氧剂、崩解剂、粘合剂、润滑剂、防腐剂、着色剂等。
优选地，填充剂选自淀粉、预交化淀粉、糊精、壳聚糖、甘露糖、微晶纤维素、聚酸酐类、聚磷酸酯类、聚氨酯类、纤维蛋白、脂质体、聚乙二醇、半乳糖、聚维酮中的至少一种。
优选地，稀释剂选自甘露醇、微晶纤维素、乳糖、淀粉、糖精中的至少一种。
优选地，稳定剂选自环糊精及其衍生物、聚乙二醇、吐温、司盘、右旋糖苷、甘露醇中的至少一种。
优选地，抗氧剂选自维生素c、焦亚硫酸钠、安息香酸、枸橼酸盐、山梨酸、亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、硫代硫酸钠中的至少一种。
优选地，崩解剂选自交联羧甲纤维素钠、交联聚维酮、羟丙基纤维素、羟丙基淀粉、聚山梨酯80、十二烷基硫酸钠等。
优选地，粘合剂选自羟丙基甲基纤维素、聚维酮、淀粉、糊精、微晶纤维素、海藻酸钠、甲基纤维素等。
优选地，润滑剂选自硬脂酸、硬脂酸镁、滑石粉、聚乙二醇、十二烷基硫酸钠等。
优选地，防腐剂选自苯甲酸、尼泊金、山梨酸、乙醇等。
附图说明
本申请小鼠肝脏病理切片图。
具体实施方式
实施例1：五谷虫提取物的制备
按照下述方法制备得到五谷虫提取物：
1.人工养殖五谷虫冷冻干燥，粉碎后过60目筛，用二氧化碳流体超临界萃取，萃取参数为压力25mpa，温度50℃，co2流量25l/h，萃取2小时，得到粗产物。
2.将步骤1得到的粗产物加热至80℃，加入粗产物体积3％的80℃的蒸馏水，搅拌30分钟，充分混合；5000r/min离心分离，去除沉淀物，得到脱胶油脂。
3.取步骤2得到的脱胶油脂，加热至60℃，加入0.3％(w/w)的氢氧化钠，搅拌1小时，出现细小的皂化物，升温至80℃，出现絮状物，凝结，5000r/min离心分离。取上清液，加热至80℃，加入上清液体积30％的80-85℃的蒸馏水，搅拌30分钟，静置，用分液漏斗分离，上清液再次加热加水搅拌静置，测分离出的下层水的ph值，重复3次，下层水加酚酞不变色即可。取上清液备用。
4.吸附剂脱色：添加上清液体积4％的活性炭，脱色温度为90℃，脱色时间为90分钟，反复三次，即得五谷虫提取物。
实施例2：五谷虫粉末的制备
人工养殖五谷虫冷冻干燥，粉碎后过100目筛，备用。
实施例3：包含五谷虫或其提取物和原花青素的药物组合物的制备
药物组合物1：活性成分中五谷虫提取物:原花青素为120:1(质量比)。
药物组合物2：活性成分中五谷虫提取物:原花青素为100:1(质量比)。
药物组合物3：活性成分中五谷虫提取物:原花青素为80:1(质量比)。
药物组合物4：活性成分中五谷虫提取物:原花青素为50:1(质量比)。
药物组合物5：活性成分中五谷虫粉末:原花青素为100:1(质量比)。
药物组合物6：活性成分中五谷虫粉末:原花青素为80:1(质量比)。
药物组合物7：活性成分中五谷虫粉末:原花青素为50:1(质量比)。
药物组合物8：活性成分中五谷虫粉末:原花青素为20:1(质量比)。
实施例4：氟尿嘧啶肝损伤保护实验
昆明种健康小白鼠，购自南京市江宁区青龙山动物繁殖场，饲养条件:室温22～26℃，通风，相对湿度50％～70％，每日光照12h，自由摄食饮水。
小白鼠90只，雌雄各半，体重20～25g，适应性喂养1周后随机分为正常对照组(10只)、五谷虫对照组(10只)和甲氨蝶呤模型组(70只)，分别灌胃给以0.7ml生理盐水、2.50g/kg五谷虫提取物和0.7ml生理盐水 30mg/kg甲氨蝶呤，连续经口灌胃7d后，将甲氨蝶呤组小鼠随机分为7组，每组10只，分别为模型组、阳性对照(联苯双酯)组、五谷虫提取物低、中、高剂量组、原花青素组ⅰ和原花青素组ⅱ(表1)。
表1肝损伤保护实验设计(n＝10)
各组按对应剂量每天灌胃1次，连续7d，在末次给予受试物24h后，处死小白鼠，分离肝脏，制备肝匀浆液。采用酶联免疫吸附法测定肝组织中谷丙转氨酶(alt)、谷草转氨酶(ast)、还原型谷胱甘肽(gsh)、谷胱甘肽过氧化物酶(gsh-px)、超氧化物歧化酶(sod)和丙二醛(mda)等指标。
五谷虫提取物对甲氨蝶呤致小鼠肝损伤作用的影响(见表2)。
表2五谷虫提取物对甲氨蝶呤致小鼠肝损伤作用的影响
由表2可以看出，与正常对照组比较，甲氨蝶呤模型组肝组织ast、alt、mda水平显著升高(p<0.05)，gsh、gsh-px、sod水平显著降低(p<0.05)，说明肝损伤模型复制成功。与模型组相比，除低剂量组对ast的降低无显著作用(p>0.05)外，阳性对照组和中、高剂量组对ast、alt、mda水平均有显著降低作用(p<0.05)，对gsh、gsh-px、sod水平的升高作用达到显著水平(p<0.05)。原花青素组ⅰ、原花青素组ⅱ相对中剂量组对ast、alt、mda水平均有显著降低作用，gsh、gsh-px、sod水平的升高作用达到显著水平。这表明五谷虫提取物对于清除自由基、减少脂质过氧化起到了积极作用，对甲氨蝶呤导致的小鼠肝损伤有明显的保护效果。五谷虫提取物各剂量组间比较显示，中、高剂量组降低ast水平的作用显著强于低剂量组，高剂量组降低ast水平的作用显著强于中剂量组(p<0.05)；各剂量组对其余指标的影响在组间无明显差异(p>0.05)。特别加入原花青素组的药物组合物的药理活性明显强于五谷虫粉末或其提取物，具有协同作用。
摘眼球取血，4℃，3000r/min，离心15min，取上清于-20℃保存。运用全自动生化分析仪测血清中alt和ast活性。脱臼处死动物，摘取肝脏，小心用剪刀剪取一块，置于10％甲醛溶液中固定，做病理组织切片观察；剩余肝脏、置于-80℃保存，用于其它指标检测。
小鼠肝脏病理切片(图1)显示，正常组小鼠的肝脏和肝细胞形态正常，肝细胞呈明显的放射状整齐排列，无炎症细胞浸润及坏死。口服五谷虫提取物对正常小鼠肝组织无明显改变。甲氨蝶呤模型组肝细胞出现严重的病变、坏死及炎症细胞浸润。而口服五谷虫提取物 原花青素后，可明显减轻甲氨蝶呤所致肝细胞组织病变、坏死程度，炎症细胞浸润也显著减少，表明五谷虫提取物 原花青素对甲氨蝶呤所致的肝脏损伤有明显的改善作用。
1.一种用于降低抗癌药物肝脏毒性的药物组合物，包含五谷虫或其提取物。
2.一种用于降低抗癌药物肝脏毒性的药物组合物，包含五谷虫或其提取物和原花青素。
3.如权利要求2所述的药物组合物，其中五谷虫或其提取物和原花青素的质量比例为1-200:1，优选1-100:1、2-80:1或者50:1。
4.如权利要求1-3任一项所述的药物组合物，还包含能够引起肝脏毒性的物质；所述能够引起肝脏毒性的物质包括但不限于抗癌药物甲氨蝶呤、氟尿嘧啶、氮烯咪胺、环磷酰胺，其他的如光辉霉素、苯丁酸氮芥、亚硝脲类、长春碱类、更生霉素、博莱霉素、阿霉素、丝裂霉素、足叶乙甙、紫杉醇、泰索帝、顺铂及卡铂。
5.如权利要求1-3任一项所述的药物组合物，其包含药学上可接受的载体。
6.如权利要求1-5任一项所述的药物组合物，其为片剂、胶囊、颗粒剂、注射剂、滴鼻剂、吸入剂、缓释剂、气雾剂或膜剂。
7.如权利要求1-6任一项所述的药物组合物在制备降低抗癌药物肝脏毒性的药物中的用途。
8.如权利要求1-6任一项所述的药物组合物在制备预防或治疗由抗癌药或放射引起的肝脏毒性的药物中的用途。
9.如权利要求8所述的用途，所述抗癌药包括顺铂、甲氨蝶呤、阿霉素、紫杉醇等。
10.如权利要求7-9任一项所述的用途，其中药物组合物为片剂、胶囊、颗粒剂、注射剂、滴鼻剂、吸入剂、缓释剂、气雾剂或膜剂。
技术总结