本发明属于中医药技术领域，具体涉及一种提高卵细胞质量和数量的中药组合物及其制备方法与应用。
背景技术：
卵巢储备功能反映卵巢皮质区卵泡生长发育形成可授精卵母细胞的能力，指的是卵巢内存留卵泡的数量和质量，反映了生育潜能，是女性生育力的重要标志。卵巢储备功能减退(diminishedovarianreserve，dor)是指卵巢内卵母细胞的数量减少和(或)质量下降，同时伴有抗苗勒管激素(anti-müllerianhormone，amh)水平降低、窦卵泡数(antralfolliclecount，afc)减少、fsh水平升高。患者生育力降低，但不强调年龄、病因和月经状态。该卵巢储备功能的高低可以直接影响患者的妊娠率和辅助生殖技术的妊娠结局。
近年来随着社会的发展，生活环境的改变和工作节奏的加快，dor的发病率有逐年上升的趋势，已经严重影响到了女性的生殖健康和生活质量，其发病因素复杂、尚未明确，且病情不易改变。因此，及时有效地干预dor，将有助于预防其进一步发展。
目前国际上对dor的诊断尚未设立标准，国内外的一些研究认为amh＜1.1ng/ml，afc＜5个，fsh＞10iu/l，e2＞80pg/ml，患者生育力降低是主要的临床表现。虽然dor不强调病因，但与衰老、遗传因素、医源性因素、免疫因素、以及不良生活习惯和饮食失衡有关。dor可能是早发性卵巢功能不全(primaryovarianinsufficiencypoi)的隐匿阶段。西医对dor所致不孕的治疗多应用激素、激素抑制剂或拮抗剂等调节卵巢轴以促排卵，并多结合辅助生殖技术来提高妊娠率，改善妊娠结局。但是，目前为止尚未有针对卵巢储备功能减退(dor)以导致的卵子质量和数量下降、适应范围明确、副作用少的药物。
中医认为dor导致不孕的主要病机是多种原因所致的肾精亏损。发明者认为肾主生殖，肾藏精。肾精亏损随着年龄的增长而日渐严重而表现为“阴虚内热”、“阴虚火旺”、“阴损及阳”、“阴阳俱虚”。阴虚是卵子质量与数量的下降到一定阶段，造成内分泌平衡失调引起的外在表现，与年龄和体质关系密切。由此建立了女性以肾为本，以阴为用，由阴及阳的中医生殖理论。本发明药物根据中年女性的中医生理病理特点，以治病求本的原则，选择具有养阴作用同时又具现代抗衰老为主体的中药组成新的组合物，通过对在海外上千例反复失败的试管婴儿患者进行全周期临床观察，从而筛选出的一个针对卵子质量和数量的有效药物。
技术实现要素：
针对上述情况，发明人针对提高卵子质量和数量的中药组合进行了进一步的研究，并获得一种新颖的，效果良好的中药组合物。本发明公开提供的中药组合物能够改善女性“肾精亏损”的状态，通过改善全身包括盆腔的内环境、调整卵巢和卵巢轴的功能，立足于填精养卵以治本，以提高卵子质量和数量，提高受孕几率。
为实现上述目的，本发明所采用的技术方案是：提高卵细胞质量和数量的中药组合物，所述中药组合物由下列原料药材组成：女贞子、枸杞子、桑椹子、五味子、菟丝子、白芍、黄精、地黄、淮山、大枣、当归、丹参、鸡血藤、云苓、车前子、陈皮、淫羊霍。
进一步的，中药组合物由下列重量份配比的原料药材制成：女贞子5-50份、枸杞子5-50份、桑椹子5-50份、五味子5-50份、菟丝子0-50份、白芍5-50份、黄精5-50份、地黄5-50份、淮山5-50份、大枣5-50份、当归5-50份、丹参5-50份、鸡血藤5-50份、云苓5-50份、车前子5-50份、陈皮5-30份、淫羊霍0-50份。
进一步的，中药组合物由下列重量份配比的原料药材制成：女贞子10-20份、枸杞子10-20份、桑椹子10-20份、五味子10-20份、菟丝子0-20份、白芍10-20份、黄精10-20份、地黄10-20份、淮山10-20份、大枣10-20份、当归10-20份、丹参10-20份、鸡血藤10-20份、云苓10-20份、车前子10-20份、陈皮5-15份、淫羊霍0-10份。
进一步的，中药组合物为颗粒剂、口服液、胶囊剂、浸膏剂、丹剂、丸剂、散剂、片剂中的一种或多种
提高卵细胞质量和数量的中药组合物的制备方法，包括以下步骤：
s1：将原料药材按重量比例分别置于各自容器中，加入清水泡浸1-5小时，然后清洗干净，切碎，混合；
s2：将s1中混合后的原料药材用热水浸提后进行过滤，沉淀15-24小时，得到上清液；
s3：将步骤s2中的上清液浓缩成相对密度为1.2-1.4的浸膏；
s4：将步骤s3中的浸膏与糊精混合，并加入乙醇，静置，过滤，得到浸膏和糊精的混合物；
s5：将步骤s4中的浸膏和糊精的混合物进行真空干燥，接着将干燥后浸膏和糊精的混合物压缩粉碎，过筛，得到颗粒状的中药组合物。
进一步的，步骤s2中热水浸提的温度为70-100℃。
进一步的，步骤s2中用热水浸提至少两次，每次浸提的水量为中药组合物重量的4-6倍，浸提时间为2-4小时。
进一步的，步骤s4中浸膏与糊精的重量比为1:1-2。
进一步的，制备方法还包括进一步将所述的中药组合物与药学上可接受的载体制备成药学上可接受的剂型，所述剂型包括颗粒剂、口服液、胶囊剂、浸膏剂、丹剂、丸剂、散剂、片剂中的一种或多种。
提高卵细胞质量和数量的中药组合物的应用，利用上述的中药组合物用于治疗非炎症性的不孕不育症。
本发明以中医经典方“五子衍宗丸”为基础，针对中年女性阴精亏损的生理和病理特点，用枸杞子、女贞子、五味子、桑椹子、莵丝子等籽类药物为君，以形补形，养精填精；辅以地黄、黄精、白芍、当归等养阴血、清虚热，以加强滋阴补血，养精填精功力为臣；佐以淮山、大枣、陈皮等药物以健脾益气行气；淫羊藿、菟丝子等以阳中求阴；以丹参、鸡血藤、云苓、车前子等以活血养血、健脾渗湿为使。全方通过改善全身包括盆腔的内环境、调整卵巢和卵巢轴的功能，立足于填精养卵以治本，以提高卵子质量和数量，同时该中药组合物以食品类有机中药为基本原料，无毒、无副作用，保证了母体和下一代的健康需求。
附图说明
图1为本中药组合物治疗前后窦卵泡数量(afc)的变化图；
图2为本中药组合物治疗前后抗穆勒管激素(amh)的变化图；
图3为本中药组合物治疗前后第三天胚胎的数量变化图；
图4为本中药组合物治疗前后囊胚(blastocysts)数量的变化图；
图5为本中药组合物治疗前后整倍体囊胚(uploid)数量的变化图；
图6为病人治疗前后抗穆勒管激素(amh)改变图；
图7为病人治疗前后抗穆勒管激素(amh)检验单原始数据图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。
实施例一
一种提高卵细胞质量和数量的中药组合物，用枸杞子、女贞子、五味子、桑椹子、莵丝子等籽类药物为君，以形补形，养精填精；辅以地黄、黄精、白芍、当归等养阴血、清虚热，以加强滋阴补血，养精填精功力为臣；佐以淮山、大枣、陈皮等药物以健脾益气行气；淫羊藿、菟丝子等以阳中求阴；以丹参、鸡血藤、云苓、车前子等以活血养血、健脾渗湿为使。全方通过改善全身包括盆腔的内环境、调整卵巢和卵巢轴的功能，立足于填精养卵以治本，解决中年女性阴精亏损的问题，以提高卵子质量和数量。
该中药组合物的原料药材由下列重量份配比组成：女贞子5-50份、枸杞子5-50份、桑椹子5-50份、五味子5-50份、菟丝子0-50份、白芍5-50份、黄精5-50份、地黄5-50份、淮山5-50份、大枣5-50份、当归5-50份、丹参5-50份、鸡血藤5-50份、云苓5-50份、车前子5-50份、陈皮5-30份、淫羊霍0-50份。优选地，女贞子10-20份、枸杞子10-20份、桑椹子10-20份、五味子10-20份、菟丝子0-20份、白芍10-20份、黄精10-20份、地黄10-20份、淮山10-20份、大枣10-20份、当归10-20份、丹参10-20份、鸡血藤10-20份、云苓10-20份、车前子10-20份、陈皮5-15份、淫羊霍0-10份。
该中药组合物可为颗粒剂、口服液、胶囊剂、浸膏剂、丹剂、丸剂、散剂或片剂等，本实施例并无具体限制，满足药学上可接受的剂型即可。
一种提高卵细胞质量和数量的中药组合物的制备方法，包括以下步骤：
s1：将原料药材按上述重量比例分别置于各自容器中，加入清水泡浸1-5小时，然后清洗干净，切碎，混合；
s2：将s1中混合后的原料药材用70-100℃的热水浸提至少两次，每次浸提的水量为中药组合物重量的4-6倍，浸提时间为2-4小时；浸提后进行过滤，沉淀15-24小时使得后续将上清液进行浓缩后更加透明、干净、无杂质，得到澄清的上清液；
其中优选地热水浸提的温度为80-100℃，使得原料药材的药用成分能够有效的浸泡至水中，每次浸提的水量为中药组合物重量的5倍，使得水能够最大化的溶解吸起原料药材中的有效成分；
s3：将步骤s2中的上清液浓缩成相对密度为1.2-1.4的浸膏，浓缩的加热温度为90℃，保证中药的有效成分，且该浸膏优选地相对密度为1.3，便于后续与糊精充分混合；
s4：将步骤s3中的浸膏与糊精混合，其中浸膏与糊精的重量比为1:1-2，优选地为1:1.5，并加入适量质量浓度70％乙醇，静置48-72小时，使得浸膏与糊精在乙醇溶液的作用下充分地相互渗透、融合；最后过滤，得到浸膏和糊精的混合物，同时回收乙醇；
s5：将步骤s4中的浸膏和糊精的混合物进行真空干燥，制成干品；接着将浸膏和糊精的干品进行压缩粉碎，用80-100目筛过滤2次，混合后得到颗粒状的中药组合物。
s6：将步骤s5中的中药组合物进一步与药学上可接受的载体制备成药学上可接受的剂型，所述剂型包括颗粒剂、口服液、胶囊剂、浸膏剂、丹剂、丸剂、散剂、片剂等。
一种提高卵细胞质量和数量的中药组合物的应用，利用上述的中药组合物用于治疗非炎症性的不孕不育症，该非炎症性的不孕不育症主要有：(1)35岁以上女性卵子质量和数量下降所导致的不孕不育症；(2)35岁以下女性患有卵巢储备下降、早发性卵巢功能不全等导致的不孕不育证；(3)试管婴儿备孕和辅助治疗；(4)以阴虚证型为主的不孕症患者；(5)流产，尤其是不明原因的习惯性流产患者；(6)冷冻移植手术后不明原因着床失败者。本药物具有十分显著的提高患者卵子质量和数量的效果。同时，本发明以食品类有机中药为基本原料，选择无毒、无副作用的药物，以保证母体和下一代的健康需要。
实施例二
临床观察和筛选
本发明的药物以中医理论为依据，针对女性“肾精亏损”的特殊生理阶段，在临床经验的基础上，借助现代中药药理学理论，经过长期的临床应用研究而成。发明人通过二十多年的临床反复观察和筛选而成的针对提高卵子质量和数量的中药复方。临床观察方法是通过患者自身前后对照的回顾性分析。纳入研究对象为服用刘氏育卵方和具有治疗前后观察数据的所有试管婴儿移植手术(ivf)患者。结果表明：刘氏育卵方对窦卵泡(afc)、第三天胚胎、囊胚(blastocysts)、整倍体囊胚(uploid)的数量增加有效。同时，改善反映卵巢储备功能关键指标抗穆勒管激素(amh)，对卵子的质量和数量的提高有显著影响。
(一)本中药组合物治疗前后窦卵泡数量(afc)的变化
如图1所示，窦卵泡是卵巢中成长出的最为原始的3级卵泡，是女性卵巢功能的重要指标。在阴道超声或者彩超的帮助下，医生可以对窦卵泡数量进行计数，以此来评估女性的卵巢功能以及生殖能力。窦卵泡数量与试管婴儿的成功率密切相关。窦卵泡数量越多，促排后所能得到的成熟卵泡数量也将越多，在取卵手术中获得的可用卵子几率也将会更多，进而可用来移植的胚胎也就越多，所以提高窦卵泡数量对于试管婴儿成功率至关重要。临床资料显示本药物能显著提高窦卵泡数量。治疗前后有窦卵泡计数资料的患者共43例，患者年龄在30到43岁之间，年龄中位数是39岁。通过用病人治疗前的窦卵泡数量与服用本药物3个月之后的窦卵泡数量进行自身前后比较。图1中结果显示，经治疗后afc有显著上升趋势。该结果提示，该药物可能通过阻断卵子凋亡通路来提高窦卵泡数量，以此来提高女性的生殖能力并且能够帮助提高试管婴儿的成功率。
(二)本中药组合物治疗前后抗穆勒管激素(amh)的变化
如图2所示，抗缪勒管激素(anti-müllerianhormone，amh)，是一种糖蛋白，amh由卵泡内颗粒细胞分泌，卵巢小卵泡数目越多，血清中amh的浓度则越高。amh上升既反映了卵泡颗粒细胞功能增强，又反映了窦卵泡数量增加。而颗粒细胞既是提供卵母细胞发育营养物质的来源，又是把雄激素芳香化，生成雌激素的场所。amh的改善提示了卵子质、量的改善。因此，生殖科医生常以它來作为卵巢库存量(ovarianreserve)的指标之一，可以用来预测女性的生殖能力以及ivf的成功率。通过收集了14例患者的临床资料，进行自身前后对比，患者年龄在32到41岁之间，年龄中位数是37.5岁。结果显示病人经过治疗后amh有显著上升趋势。
(三)本中药组合物治疗前后第三天胚胎的数量变化
如图3所示，在试管婴儿技术取卵并受精以后，胚胎发育情况如下：第1天：精子与卵子结合受精，出现两个原核；第2天：胚胎发育至4细胞；第3天：胚胎发育至8细胞；第4天：胚胎发育至桑椹胚阶段；第5、6天：胚胎发育至囊胚阶段。通过收集了16例患者治疗前后的三天胚胎计数，患者年龄在30到43岁之间，年龄中位数是37岁。结果显示经本药物治疗后，患者获取的三天胚胎数量均显著上升。该结果提示患者服用本方后卵子的质量有了明显的改善，尤其是增强卵子的线粒体功能，以此提供足够的能量来促进胚胎发育。
(四)本中药组合物治疗前后囊胚(blastocysts)数量的变化
如图4所示，与第三天胚胎相比，第五天囊胚则属于发育更加完善的胚胎。一般而言，第三天胚胎的著床率为20-30％，而第五天囊胚期胚胎的著床率为40-50％。因此，囊胚数量的增加是ivf的成功率的重要基础。治疗前后有囊胚计数资料的患者共17例，经过自身前后比较，患者年龄在33到46岁之间，年龄中位数是38岁。结果显示治疗后囊胚有显著上升趋势。这一结果进一步提示该方有阻断卵子凋亡和改善线粒体功能的作用。
(五)本中药组合物治疗前后整倍体囊胚(uploid)数量的变化
如图5所示，胚胎值入前遗传学筛查(preimplantationgeneticscreening，pgs)是指在试管婴儿治疗中，胚胎移植入子宫前，通过活检胚胎细胞对胚胎23对染色体进行分析，如果囊胚的染色体数量正常，则该胚胎被称为整倍体(uploid)囊胚。随着年龄的增长，女性的卵子质量逐渐下降，胚胎的非整倍率增加。而非整倍体是胚胎种植失败、自然流产、先天畸形的主要原因，也是导致ivf失败的重要因素，更是高龄女性早期流产的主要原因。为了进一步确认本方对卵子质量的改善作用，通过收集了14例患者的治疗前后整倍体囊胚数量的变化，患者年龄在32到42岁之间，年龄中位数是38.5岁。如图5所示，绝大多数患者在治疗前均无法获得整倍体囊胚(uploid)，因此导致ivf彻底失败。然而，在经过治疗之后，有11位患者获得了整倍体囊胚。其中有一名患者经本方治疗后，获取了12枚整倍体囊胚。这一结果进一步提示该方除抑制凋亡通路以及促进线粒体功能作用以外，还可能有保护卵子dna受损和防止基因突变的作用。
实施例三
临床试验
(一)患者一般情况：患者武某，女，38岁，已婚10年未孕，月经量正常。如图6和7所示，未治疗前病人fsh水平为11miu/ml，双侧卵巢基础卵泡计数共计仅3个，amh水平为0.78ng/ml，明显低于其年龄段平均水平。诊断为：卵巢储备功能减退。
(二)治疗经过
如图6和7所示，患者服用本药物颗粒剂，每天一次，每次4克。仅一个月后，fsh水平降至9.7miu/ml。继续服用本药物(同一剂量)，三个月后双侧卵巢基础卵泡计数增加到9个，amh增加至2.2ng/ml。
病人随后接受了一次微刺激周期试管婴儿(mini-ivf)治疗，促排方案为果纳芬200单位十天，取卵五枚，五天后获得2枚成熟囊胚，然而通过基因筛查未能获得整倍体囊胚。
患者继续服用同一剂量本药物颗粒，一个月后在接受第二次ivf治疗之前，发现自然怀孕。妊娠过程无任何并发症，足月顺产一名健康女婴。
(三)小结：患者服用本药物颗粒每天4克。一个月以后，促卵泡生成激素(fsh)水平回落，服药三个月以后基础卵泡(afc)增加，抗穆勒管激素(amh)也同样升高。随后患者接受了微刺激ivf治疗，获得2枚成熟囊胚，但未能获得整倍体囊胚。继续服药一个月后，自然怀孕，足月顺产。提示本药物的疗效与服药时间长短有关。
本发明公开的提高女性卵子质量和数量的药物，该药物是以中医理论治病求本的原则，以中医经典药物＂五子衍宗丸＂为基础，选择具有养阴作用同时又具现代抗衰老效果的中药组成新的组合物，通过对在海外上千例反复失败的试管婴儿患者进行全周期临床观察，筛选出的一个针对卵子质量和数量的药物，近十五年的临床观察表明，本药物对改善卵子质量和数量有显著疗效，而且无毒副作用。
上述仅为本发明的优选具体实施方式，但本发明的设计构思并不局限于此，凡利用此构思对本发明进行非实质性的改动，均应属于侵犯本发明保护范围的行为。
1.提高卵细胞质量和数量的中药组合物，其特征在于：所述中药组合物由下列原料药材组成：女贞子、枸杞子、桑椹子、五味子、菟丝子、白芍、黄精、地黄、淮山、大枣、当归、丹参、鸡血藤、云苓、车前子、陈皮、淫羊霍。
2.根据权利要求1所述的提高卵细胞质量和数量的中药组合物，其特征在于：所述中药组合物由下列重量份配比的原料药材制成：女贞子5-50份、枸杞子5-50份、桑椹子5-50份、五味子5-50份、菟丝子0-50份、白芍5-50份、黄精5-50份、地黄5-50份、淮山5-50份、大枣5-50份、当归5-50份、丹参5-50份、鸡血藤5-50份、云苓5-50份、车前子5-50份、陈皮5-30份、淫羊霍0-50份。
3.根据权利要求2所述的提高卵细胞质量和数量的中药组合物，其特征在于：所述中药组合物由下列重量份配比的原料药材制成：女贞子10-20份、枸杞子10-20份、桑椹子10-20份、五味子10-20份、菟丝子0-20份、白芍10-20份、黄精10-20份、地黄10-20份、淮山10-20份、大枣10-20份、当归10-20份、丹参10-20份、鸡血藤10-20份、云苓10-20份、车前子10-20份、陈皮5-15份、淫羊霍0-10份。
4.根据权利要求1-3任一所述的提高卵细胞质量和数量的中药组合物，其特征在于：所述中药组合物为颗粒剂、口服液、胶囊剂、浸膏剂、丹剂、丸剂、散剂、片剂中的一种或多种。
5.提高卵细胞质量和数量的中药组合物的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
s1：将原料药材按重量比例分别置于各自容器中，加入清水泡浸1-5小时，然后清洗干净，切碎，混合；
s2：将s1中混合后的原料药材用热水浸提后进行过滤，沉淀15-24小时，得到上清液；
s3：将步骤s2中的上清液浓缩成相对密度为1.2-1.4的浸膏；
s4：将步骤s3中的浸膏与糊精混合，并加入乙醇，静置，过滤，得到浸膏和糊精的混合物；
s5：将步骤s4中的浸膏和糊精的混合物进行真空干燥，接着将干燥后浸膏和糊精的混合物压缩粉碎，过筛，得到颗粒状的中药组合物。
6.根据权利要求5所述的提高卵细胞质量和数量的中药组合物的制备方法，其特征在于：所述步骤s2中热水浸提的温度为70-100℃。
7.根据权利要求5所述的提高卵细胞质量和数量的中药组合物的制备方法，其特征在于：所述步骤s2中用热水浸提至少两次，每次浸提的水量为中药组合物重量的4-6倍，浸提时间为2-4小时。
8.根据权利要求5所述的提高卵细胞质量和数量的中药组合物的制备方法，其特征在于：所述步骤s4中浸膏与糊精的重量比为1:1-2。
9.根据权利要求5所述的提高卵细胞质量和数量的中药组合物的制备方法，其特征在于：所述制备方法还包括进一步将所述的中药组合物与药学上可接受的载体制备成药学上可接受的剂型，所述剂型包括颗粒剂、口服液、胶囊剂、浸膏剂、丹剂、丸剂、散剂、片剂中的一种或多种。
10.提高卵细胞质量和数量的中药组合物的应用，其特征在于：利用权利要求1-4任一所述的中药组合物治疗非炎症性的不孕不育症。
技术总结