本申请要求2012年11月30日提交的英国临时申请1221638.8的权益，其全部内容通过引用纳入本文以用于所有目的。
本发明涉及衍生自绿脓假单胞菌(p.aeruginosa)的抗原及其在免疫中的应用。
背景技术：
绿脓假单胞菌(pseudomonasaeruginosa)是一种在大多数环境(包括水库和土壤)中都有发现的伺机性革兰氏阴性细菌病原体，其是全球范围内主要的医院病原体之一。该革兰氏阴性细菌最熟知的是作为囊性纤维化(cf)患者中患病和死亡的主要原因，有80％的成年cf患者在其肺中携带绿脓假单胞菌[1]，该细菌目前因被媒体归类为“超级细菌”而臭名昭著。后者源自该伺机性病原体具有针对抗生素的固有耐药性[2]，以及其是医院感染的主要原因(即在英国医院中每年估计有10000名病例)[3]。
虽然在抗微生物治疗中取得了重大进展，但有效地治疗和控制绿脓假单胞菌感染仍是一个持续的问题，主要是因为该生物体的天然耐药性及其通过多种机制对多种抗微生物剂获得耐药性的强大能力。
长期以来都在寻求针对绿脓假单胞菌的疫苗，但目前尚不可得。已在实验性动物和人中评估了若干疫苗候选物，包括亚细胞组分、荚膜组分(capsulecomponent)、纯化的和重组的蛋白。
宿主和病原体的独特特性使得疫苗研发变得复杂。
参考文献4报道了基于重组蛋白的疫苗方法，该疫苗方法通过融合两种外膜衍生蛋白(即oprf和opri)的两个片段获得的单个融合多肽。该疫苗正经历临床试验[5]，且参考文献6公开了进一步的细节。
因此，仍需要鉴定用作单个抗原或与绿脓假单胞菌疫苗联用的其他和改进的抗原，特别是可用于针对多种绿脓假单胞菌病理(包括例如囊性纤维化)的疫苗。总之，仍需要获得针对绿脓假单胞菌的有效疫苗。
技术实现要素：
发明人已鉴定了多种可单独或联合地用于免疫的绿脓假单胞菌多肽。这些多肽可与绿脓假单胞菌糖或其他绿脓假单胞菌多肽或来源于其他病原体(即金黄色葡萄球菌、大肠杆菌等)的抗原联用。该抗原可用于绿脓假单胞菌疫苗，但也可用作对多种病原体进行免疫的疫苗的组分。
发明人总共鉴定了以下多肽：
pse54(pa5340)抗原；pse44-4(pa3526)抗原；pse10-1(pa1178)抗原；pse21-5(pa5112)抗原；pse27-1(pa0328)抗原；pse52-1(pa4765)抗原；pse53-1(pa5047)抗原；pse11-3(pa1248)抗原；pse41-5(pa2407)抗原；pse47a-2(pa4082)；pse5-1(pa0595)；pse13-2(pa1954)；pse17-1(pa3692)；pse18-2(pa4370)；pse20-1(pa4735)；pse23-1(pa3647)；pse24-1(pa0126)；pse25-1(pa0189)；pse26-1(pa0274)；pse28-2(pa0537)；pse31-2(pa0737)；pse33-2(pa1086)；pse42-1(pa2793)；pse45-2(pa3535)；pse50-1(pa4578)；pse51-4(pa4667)；pse19-1(pa4710)；pse34-1(pa1106)；pse36-3(pa1324)；pse38-1(pa1777)。
在全套的所选抗原中，可以区分出“第一抗原组”，其被描述为先前未尝试测试其作为疫苗抗原的一组抗原。“第一抗原组”包含30种所选抗原中的25种。
具体而言，该“第一抗原组”包含以下抗原：pse54(pa5340)抗原；pse44-4(pa3526)抗原；pse21-5(pa5112)抗原；pse27-1(pa0328)抗原；pse53-1(pa5047)抗原；pse41-5(pa2407)抗原；pse47a-2(pa4082)抗原；pse5-1(pa0595)抗原；pse13-2(pa1954)抗原；pse17-1(pa3692)抗原；pse18-2(pa4370)抗原；pse20-1(pa4735)抗原；pse23-1(pa3647)抗原；pse24-1(pa0126)抗原；pse25-1(pa0189)抗原；pse26-1(pa0274)抗原；pse28-2(pa0537)抗原；pse31-2(pa0737)抗原；pse33-2(pa1086)抗原；pse42-1(pa2793)抗原；pse45-2(pa3535)抗原；pse50-1(pa4578)抗原；pse51-4(pa4667)抗原；pse34-1(pa1106)抗原；以及pse36-3(pa1324)抗原。
因此，本发明提供了一种免疫原性组合物，其包含一种或多种(即1、2、3、4、5或更多种)选自第一抗原组的抗原。
在第一抗原组中，抗原优选选自：pse54(pa5340)抗原；pse21-5(pa5112)抗原；pse27-1(pa0328)抗原；pse41-5(pa2407)抗原；pse44-4(pa3526)抗原；pse47a-2(pa4082)抗原；和/或pse53-1(pa5047)抗原。
在‘第一抗原组’中，抗原优选选自5种多肽的亚组，且在用作单个抗原或联用时可特别有用地在体内生成保护性免疫原性应答：pse54(pa5340)抗原；pse44-4(pa3526)抗原；pse21-5(pa5112)抗原；pse53-1(pa5047)抗原；pse42-1(pa2793)。
在第一抗原组中，所有列举的抗原都可被选择作为单一抗原用于针对绿脓假单胞菌，前提是可从该列表(‘第一抗原组’)中有利地省略pse27-1(pa0328)抗原。
“第二抗原组”定义为一组经鉴定的抗原，其已被提出作为可能的免疫原性单独疫苗抗原但从未考虑在体内实验中与至少两种(即2、3、4、5、6或更多种)抗原联用。“第二抗原组”的亚组定义为“其他抗原性多肽”组并包括已在体内广泛测试作为疫苗抗原的那些抗原性多肽。
第二抗原组包括以下抗原：pse10-1(pa1178)抗原；pse11-3(pa1248)抗原；pse52-1(pa4765)抗原；pse19-1(pa4710)抗原；和pse38-1(pa1777)抗原。
定义为“其他抗原性多肽”组的第二抗原组的亚组包括以下抗原：pila(pa4524)、oprf-opri、flic(pa1092)、flid(pa1094)和/或外蛋白a(pa1148)。因此，该“第二抗原组”总共包括10种多肽。
因此，本发明提供包含抗原组合的免疫原性组合物，所述组合包括选自下组的两种或多种(即2、3、4、5、6或更多种)抗原：pse54(pa5340)抗原；pse44-4(pa3526)抗原；pse10-1(pa1178)抗原；pse21-5(pa5112)抗原；pse27-1(pa0328)抗原；pse52-1(pa4765)抗原；pse53-1(pa5047)抗原；pse11-3(pa1248)抗原；pse41(pa2407)抗原；pse47a-2(pa4082)；pse5-1(pa0595)；pse13-2(pa1954)；pse17-1(pa3692)；pse18-2(pa4370)；pse20-1(pa4735)；pse23-1(pa3647)；pse24-1(pa0126)；pse25-1(pa0189)；pse26-1(pa0274)；pse28-2(pa0537)；pse31-2(pa0737)；pse33-2(pa1086)；pse42-1(pa2793)；pse45-2(pa3535)；pse50-1(pa4578)；pse51-4(pa4667)；pse19-1(pa4710)；pse34-1(pa1106)；pse36-3(pa1324)；pse38-1(pa1777)。
在第一抗原组中，抗原优选选自30种多肽中7种的亚组，即：pse54(pa5340)、pse47a-2(pa4082)、pse41-5(pa2407)、pse53-1(pa5047)、pse21-5(pa5112)、pse27-1(pa0328)或pse44-4(pa3526)抗原和“第二抗原组”的亚组，即：pse52-1(pa4765)、pse10-1(pa1178)、pse11-3(pa1248)和oprf-opri，其选自“第二抗原组”中定义为“其他抗原性多肽”组的亚组。因此，本发明提供包含抗原组合的免疫原性组合物，所述组合包括选自由这11种抗原组成的组中的两种或多种(即2、3、4、5、6或更多种)抗原。
在这11种选自第一、第二和其他抗原性多肽组的抗原中，存在55种可能的抗原组合对。
在‘第二抗原组’中，包含本文中称作“其他抗原性多肽”的5种多肽的亚组，总计有10种多肽。本发明提供了包含抗原组合的免疫原性组合物，所述组合包括选自“第一抗原组”的优选抗原中的任一种与“第二抗原组”或“其他抗原性多肽”组中的任一种的两种或多种(即2、3、4、5、6或更多种)抗原的混合物。
本发明提供了包含抗原组合的免疫原性组合物，所述组合包括选自来自第一抗原组和第二抗原组的任何抗原的两种或多种(即2、3、4、5、6或更多种)抗原的混合物。
在第一抗原组和第二抗原组的混合物的30种抗原中，存在435种可能的不同抗原对。所有这些对都在本文中公开并作为本发明的一部分。因此，本发明提供了包含一对抗原的免疫原性组合物，所述对是所述435种对之一。
在第一抗原组和第二抗原组的混合物的35种抗原中，存在595种可能的不同抗原对。所有这些对都在本文中公开并作为本发明的一部分。因此，本发明提供了包含一对抗原的免疫原性组合物，所述对是所述595种对之一。
在一个实施方式中，组合物包含至少一种(即1、2、3、4、5、6或更多种)选自第一抗原组的抗原和至少一种(即1、2、3、4、5、6或更多种)选自第二抗原组的抗原。来自第一抗原组的抗原可选自优选的亚组：pse54(pa5340)、pse47a-2(pa4082)、pse41-5(pa2407)、pse53-1(pa5047)、pse21-5(pa5112)或pse44-4(pa3526)，且来自第二抗原组的抗原可选自pse52-1(pa4765)、pse10-1(pa1178)或选自第二抗原组中其他抗原性多肽亚组中的任一种，优选融合体oprf-opri。.
本发明还提供了包含抗原组合的免疫原性组合物，所述组合包括选自下组的两种或多种(即2、3、4或5种)抗原：(1)pse54抗原；(2)pse10-1抗原；(3)pse44-4抗原；(4)pse52-1抗原；(5)pse53-1抗原；(6)pse21-5抗原；(7)pse27-1抗原；(8)pse47a-2抗原；和/或(9)oprf-opri抗原。
在选自第一抗原组、第二抗原组和/或其他抗原组的优选的9种抗原中，存在36种可能的不同抗原对。所有这类对都在本文中公开并作为本发明的一部分。因此，本发明提供了包含一对抗原的免疫原性组合物，所述对是所述36种对之一。
该组合物还可包含佐剂，例如氢氧化铝佐剂。
本发明的优选组合是两种或多种协同作用的抗原的组合。因此，通过它们的联合给予所实现的抵御绿脓假单胞菌疾病的保护效果超过其个体保护功效的简单叠加所预期的效果。
感兴趣的特定组合包括但不限于：
(1)包含pse54抗原、pse27抗原的免疫原性组合物
(2)包含pse54抗原和oprf-opri抗原的免疫原性组合物
(3)包含pse54抗原、pse27抗原和/或oprf-opri抗原的免疫原性组合物
(4)包含pse54抗原和/或pse44抗原的免疫原性组合物
(5)包含pse54抗原和/或pse21-5抗原的免疫原性组合物
(6)包含pse54抗原和/或pse52-1抗原的免疫原性组合物
(7)包含pse47a-2抗原和/或pse53-1抗原的免疫原性组合物
(8)包含pse54抗原和/或pse10-1抗原的免疫原性组合物
(9)包含pse54和pse53-1抗原的免疫原性组合物
(10)包含pse47a-2和pse52-1抗原的免疫原性组合物
(11)包含pse54抗原和/或pse44-4抗原和/或pse47a-2抗原的免疫原性组合物
(12)包含pse47a-2抗原、pse53-1抗原，或pse54抗原和/或pse27抗原的免疫原性组合物。
(13)包含(a)pse47a-2抗原与pse53-1抗原组合，或(b)pse54抗原与pse21-5抗原组合的免疫原性组合物。
(14)包含pse47a-2抗原和/或pse52抗原的免疫原性组合物。
在一些实施方式中，这些免疫原性和保护性组合物中的任一种可包含其他假单胞菌抗原，且这些其他抗原可以是多肽和/或糖。例如，其还可有利地包含属于包括“其他抗原性多肽”组的“第二抗原组”中的一种或多种假单胞菌抗原，该组包括融合多肽oprf-opri，抗原间为协同方式。
该免疫原性组合物还可包含佐剂。
其他多肽抗原组
除来自本发明的多种抗原组的抗原以外，免疫原性组合物还可包含一种或多种以下绿脓假单胞菌抗原(或包含其免疫原性片段的抗原)以增强组合物引发的免疫应答针对绿脓假单胞菌的效力：
·oprf-opri[4]
·pa4525，也称为pila
·pa1092，也称为flic
·pa1094，也称为flid
·pa1148，外蛋白a或外毒素a
“其他抗原性多肽”组定义为第二抗原组的亚组。该已知抗原的组可与1、2或更多种第一抗原组或第二抗原组的其他有用的抗原联用。
与其他绿脓假单胞菌来源抗原组合
本发明的抗原组中鉴定的单个抗原可与来自绿脓假单胞菌的其他抗原联用。在一些实施方式中，来自绿脓假单胞菌的其他抗原可以是与载体蛋白偶联的糖的形式。因此，本发明提供一种包含以下组合的免疫原性组合物：
(1)一种或多种选自第一、第二或其他抗原组(如上文所定义)的抗原；和/或其组合或混合物以及
(2)一种或多种糖部分和载体蛋白的偶联物。
组分(2)中所用的偶联物包括糖部分和载体部分。
在本发明的实施方式中，该组合物还包含绿脓假单胞菌5-己糖ps1多肽，其可以游离多糖和/或与载体蛋白偶联的形式存在。可选地，一种或多种本发明的融合蛋白和/或鞭毛蛋白佐剂作为运载蛋白并具有与其偶联的ps1多糖。例如，绿脓假单胞菌多糖的单体和/或二聚体可与一种或多种鞭毛蛋白佐剂和/或融合蛋白偶联。参见参考文献7。
组分(2)中所用的偶联物包括糖部分和载体部分。该糖部分是来自绿脓假单胞菌的表多糖。该糖可以是大小在从细菌中纯化期间形成的多糖，或者其可以是这类多糖片段化产生的寡糖。
本发明还提供一种包含以下组合的免疫原性组合物：
(1)一种或多种选自第一、第二或其他抗原组的抗原；
(2)一种或多种绿脓假单胞菌表多糖和载体蛋白的偶联物。
这些偶联物中的载体部分通常是蛋白质，但通常不是(1)中的抗原之一。
典型的载体蛋白是细菌毒素，如白喉或破伤风毒素，或者其类毒素或突变体或片段。可用crm197白喉毒素突变体[8]。其他合适的载体蛋白包括，脑膜炎奈瑟球菌外膜蛋白复合体[9]、合成肽[10]、热激蛋白[11]、百日咳蛋白[12]、细胞因子[13]、淋巴因子[13]、生长因子[13]、含有各种病原体衍生抗原的多种人cd4 t细胞表位的人造蛋白[14](如n19[15])、流感嗜血杆菌的d蛋白[16]、肺炎球菌溶血素[17]或其无毒衍生物[18]、肺炎球菌表面蛋白pspa[19]、铁摄取蛋白[20]、艰难梭菌(c.difficile)的毒素a或b[21]、重组金黄色葡萄球菌胞外蛋白a(repa)[22]等。在一些实施方式中，该载体蛋白是绿脓假单胞菌蛋白，如选自第一、第二或其他抗原组的抗原。
当组合物包含超过一种偶联物时，各偶联物可使用相同的载体蛋白或不同的载体蛋白。
偶联物可包含过量载体(w/w)或过量糖(w/w)。在一些实施方式中，偶联物可包含基本相同重量的载体和糖。
载体分子可与载体直接共价偶联，或通过接头偶联。可通过(例如)糖和载体之间的还原性胺化(如参考文献23和24所述)，实现与蛋白质的直接连接。首先需要激活糖，例如通过氧化来激活。可以用任何已知方法通过接头基团进行连接，例如参考文献25和26所述的方法。优选的连接类型是己二酸接头，这种连接可通过以下方式形成：将游离-nh2基团(如通过胺化引入葡聚糖中)与己二酸偶联(例如，利用二酰亚胺活化)，然后将蛋白质偶联于所得的糖-己二酸中间体[27]。另一种优选连接类型是羰基接头，这种连接可通过以下方式形成：使糖cdi的游离羟基发生反应[28]，然后与蛋白质反应形成氨基甲酸酯连接。其它接头包括β-丙酰胺基[29]、硝基苯基-乙基胺[30]、卤代酰基卤化物[31]、糖苷键[32]、6-氨基己酸[33]、adh[34]、c4至c12部分[35]等。也可采用碳二亚胺缩合反应[36]。
本发明抗原组中鉴定的个体抗原可用作表多糖的载体蛋白，以形成共价偶联物。因此，本发明提供了一种免疫原性组合物，其包含(1)选自第一、第二和其他抗原组的抗原和(2)绿脓假单胞菌表多糖的偶联物。这些偶联物可与本文所述抗原中的任一种组合。
与其他病原体来源(非假单胞菌)的抗原组合
本发明的抗原组中鉴定的单个抗原还可与其他病原体来源的抗原(即非假单胞菌抗原)联用，特别是与来自与医院感染相关细菌的抗原联用。因此，本发明提供一种包含以下组合的免疫原性组合物：
(1)一种或多种选自第一、第二和其他抗原组(如上文所定义)的抗原；以及
(2)一种或多种选自以下病原体组的抗原：金黄色葡萄球菌(包括一种或多种(i)金黄色葡萄球菌表多糖和/或一种或多种金黄色葡萄球菌的蛋白抗原的偶联物)；新洋葱伯克霍尔德氏菌(burkholderiacenocepacia)(例如o抗原脂多糖)；艰难梭菌(clostridiumdificile)；白色念珠菌(candidaalbicans)；和/或肠外致病性大肠杆菌。
第一抗原组
pa0328或pse27-1
‘pa0328’抗原标注为‘外膜自转运蛋白’。其在pao1菌株中标注为‘假拟蛋白’且具有氨基酸序列seqidno：1并在参考文献37中描述为pa0328。该序列在ncbi中标注为gi：15595525。最近已证明其是由绿脓假单胞菌通过其精氨酸特异性氨基肽酶活性使用的毒力策略中相关的自转运蛋白，如参考文献38中所述。有时，pa0328在本文中称作‘pse27-1’或‘pse27’。
有用的pa0328抗原可引发识别seqidno：1的抗体(例如给予人时)和/或可包含某氨基酸序列，所述氨基酸序列(a)与seqidno：1有50％或更高相同性(例如60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或更高)；和/或(b)包含seqidno：1的至少‘n’个连续氨基酸的片段，其中‘n’是7或更高(例如8、10、12、14、16、18、20、25、30、35、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250或更高)。这些pa0328蛋白包括seqidno：1的变体。(b)的优选片段包含来自seqidno：1的表位。其它优选片段缺少seqidno：1c末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸和/或自n末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、27、28、29、30、35、40、45、49、50或更多个)氨基酸，而保留seqidno：1的至少一个表位。seqidno：1的末40-50个c末端氨基酸可被有利地省去。可有利地省去seqidno：1的前22个n末端氨基酸。其它片段省去一个或多个蛋白结构域。
seqidno：36是seqidno：1的有用片段(‘pa032822-647’)。该片段省去n末端部分的前导肽以允许表达和纯化。
pa5112或pse21-5
‘′pse21-5’抗原标注为pao1菌株中的‘酯酶或esta’。在pao1菌株中，pse21-5被描述为‘pa5112’且具有氨基酸序列seqidno：3。在pao1菌株中，ncbi中其标签为gi：15600305，参见参考文献37。有时，pa5112在本文中称作‘pse21-5’或‘pse21’。
有用的pse21-5抗原可引发识别seqidno：3的抗体(例如给予人时)和/或可包含某氨基酸序列，所述氨基酸序列(a)与seqidno：3有50％或更高相同性(例如60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或更高)；和/或(b)包含seqidno：3的至少‘n’个连续氨基酸的片段，其中‘n’是7或更高(例如8、10、12、14、16、18、20、25、30、35、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250或更高)。这些pse21-5蛋白包括seqidno：3的变体。(b)的优选片段包含来自seqidno：3的表位。其它优选片段缺少seqidno：3的c末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸和/或n末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸，而保留seqidno：3的至少一个表位。seqidno：3的末40个c末端氨基酸可被有利地省去。可有利地省去seqidno：3的前24个n末端氨基酸。其它片段省去一个或多个蛋白结构域。天然情况下，pse21-5是长蛋白质，因此片段的使用有助于例如纯化、处理、融合、表达等。
seqidno：38是seqidno：3的有用片段(‘pse21-525-646)。该片段包括pse21-5的最暴露区域且更容易进行工业规模应用。
pa2407或pse41-5
‘＇pse41-5’抗原标注为‘可能的黏着蛋白’。在pao1菌株中，pse41-5的名称是pa2407且具有氨基酸序列seqidno：5(gi：15597603)。参见参考文献37。有时，pa2407在本文中称作‘pse41-5’或‘pse41’。有时，pa2407在本文中称作‘pse41-5’或‘pse41’。
有用的pse21-5抗原可引发识别seqidno：5的抗体(例如给予人时)和/或可包含某氨基酸序列，所述氨基酸序列(a)与seqidno：5有50％或更高相同性(例如60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或更高)；和/或(b)包含seqidno：5的至少‘n’个连续氨基酸的片段，其中‘n’是7或更高(例如8、10、12、14、16、18、20、25、30、35、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250或更高)。这些‘pse41-5’蛋白包括seqidno：5的变体。(b)的优选片段包含来自seqidno：5的表位。其它优选片段缺少seqidno：5的c末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸和/或n末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸，而保留seqidno：5的至少一个表位。seqidno：5的末40个c末端氨基酸可被有利地省去。可有利地省去seqidno：5的前37个n末端氨基酸。其它片段省去一个或多个蛋白结构域。天然情况下，‘pse41-5’是长蛋白质，因此片段的使用有助于例如纯化、处理、融合、表达等。
seqidno：40是seqidno：5的有用片段(‘pse41-538-317)。该片段包括‘pse41-5’的最暴露区域且更容易进行工业规模应用。其还降低抗原与人蛋白的类似性。
pa3526或pse44-4
‘pse44-4’抗原标注为‘可能的外膜蛋白前体’。在pao1菌株中，pse44-4是pa3526且具有氨基酸序列seqidno：6(gi：15598722)，参见参考文献37。有时，pa3526在本文中称作‘pse44-4’或‘pse44’。
有用的pse44-4抗原可引发识别seqidno：6的抗体(例如给予人时)和/或可包含某氨基酸序列，所述氨基酸序列(a)与seqidno：6有50％或更高相同性(例如60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或更高)；和/或(b)包含seqidno：6的至少‘n’个连续氨基酸的片段，其中‘n’是7或更高(例如8、10、12、14、16、18、20、25、30、35、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250或更高)。这些pse44-4蛋白包括seqidno：6的变体。(b)的优选片段包含来自seqidno：6的表位。其它优选片段缺少seqidno：6的c末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸和/或n末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸，而保留seqidno：6的至少一个表位。seqidno：6的前19个n末端氨基酸可被有利地省去。其它片段省去一个或多个蛋白结构域。天然情况下，pse44-4是长蛋白质，因此片段的使用有助于例如纯化、处理、融合、表达等。
seqidno：41是seqidno：6的有用片段(‘pse44-420-321’)。该片段包括pse44-4的最暴露区域且更容易进行工业规模应用。其还降低抗原与人蛋白的类似性。
pa4082或pse47a-2
pse47a-2抗原标注为‘黏着蛋白cupb5’或“丝氨酸蛋白酶”。在pao1菌株中，pse47a-2的名称是pa4082且具有氨基酸序列seqidno：7(gi：15599277)，参见参考文献37。有时，pa4082在本文中称作‘pse47a’或‘pse47a-2’(片段)。
有用的pse47a-2抗原可引发识别seqidno：7的抗体(例如给予人时)和/或可包含某氨基酸序列，所述氨基酸序列(a)与seqidno：7有50％或更高相同性(例如60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或更高)；和/或(b)包含seqidno：7的至少‘n’个连续氨基酸的片段，其中‘n’是7或更高(例如8、10、12、14、16、18、20、25、30、35、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250或更高)。这些pse47a-2蛋白包括seqidno：7的变体。(b)的优选片段包含来自seqidno：7的表位。其它优选片段缺少seqidno：7的c末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸和/或n末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸，而保留seqidno：7的至少一个表位。由于该蛋白的c末端部分对应于转运体结构域，其完全包埋在外膜中并因此完全不可能接触抗原，可被有利地省去。因此，seqidno：7的末435个c末端氨基酸可被有利地省去。seqidno：7的前53个n末端氨基酸可被有利地省去。其它片段省去一个或多个蛋白结构域。天然情况下，pse47a-2是长蛋白质，因此片段的使用有助于例如纯化、处理、融合、表达等。
seqidno：42是seqidno：7的有用片段(‘pse47a-254-583’)。该片段包括pse47a-2的最暴露区域且更容易进行工业规模应用。其还降低抗原与人蛋白的类似性。
pa5047或pse53-1
‘pse53-1’抗原标注为‘假拟蛋白’。在pao1菌株中，pse53-1是pa5047且具有氨基酸序列seqidno：9(gi：15600240)，参见参考文献37。有时，pa5047在本文中称作‘pse53-1’或‘pse53’。
有用的pse53-1抗原可引发识别seqidno：9的抗体(例如给予人时)和/或可包含某氨基酸序列，所述氨基酸序列(a)与seqidno：9有50％或更高相同性(例如60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或更高)；和/或(b)包含seqidno：9的至少‘n’个连续氨基酸的片段，其中‘n’是7或更高(例如8、10、12、14、16、18、20、25、30、35、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250或更高)。这些pse53-1蛋白包括seqidno：9的变体。(b)的优选片段包含来自seqidno：9的表位。其它优选片段缺少seqidno：9的c末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸和/或n末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸，而保留seqidno：9的至少一个表位。seqidno：9的末40个c末端氨基酸可被有利地省去。seqidno：9的前18个n末端氨基酸可被有利地省去。其它片段省去一个或多个蛋白结构域。天然情况下，pse53-1是长蛋白质，因此片段的使用有助于例如纯化、处理、融合、表达等。
seqidno：44是seqidno：9的有用片段(‘pse53-119-479’)。该片段包括pse53-1的最暴露区域且更容易进行工业规模应用。其还降低抗原与人蛋白的类似性。
pa5340或pse54
pse54抗原标注为‘可能的外膜蛋白前体’和‘假拟蛋白’。在pao1菌株中，pse54是pa3526且具有氨基酸序列seqidno：10(gi：15598722)，参见参考文献37。有时，pa5340在本文中称作‘pse54’。
有用的pse54抗原可引发识别seqidno：10的抗体(例如给予人时)和/或可包含某氨基酸序列，所述氨基酸序列(a)与seqidno：10有50％或更高相同性(例如60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或更高)；和/或(b)包含seqidno：10的至少‘n’个连续氨基酸的片段，其中‘n’是7或更高(例如8、10、12、14、16、18、20、25、30、35、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250或更高)。这些pse54蛋白包括seqidno：10的变体。(b)的优选片段包含来自seqidno：10的表位。其它优选片段缺少seqidno：10的c末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸和/或n末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸，而保留seqidno：10的至少一个表位。seqidno：10的末40个c末端氨基酸可被有利地省去。seqidno：10的前16个n末端氨基酸可被有利地省去。其它片段省去一个或多个蛋白结构域。天然情况下，pse54是长蛋白质，因此使用片段有助于例如纯化、处理、融合、表达等。
seqidno：45是seqidno：10的有用片段(‘pse5417-243’)。该片段包括pse54的最暴露区域，更容易工业规模应用。其还降低抗原与人蛋白的类似性。
pa0595或pse5-1
pse5-1抗原标注为‘有机溶剂耐受蛋白osta前体’。在pao1菌株中，pse5-1是pa0595且具有氨基酸序列seqidno：11(gi：15595792)，参见参考文献37。有时，pa0595在本文中称作‘pse5-1’或‘pse5’。
有用的pse5-1抗原可引发识别seqidno：11的抗体(例如给予人时)和/或可包含某氨基酸序列，所述氨基酸序列(a)与seqidno：11有50％或更高相同性(例如60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或更高)；和/或(b)包含seqidno：11的至少‘n’个连续氨基酸的片段，其中‘n’是7或更高(例如8、10、12、14、16、18、20、25、30、35、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250或更高)。这些pse5-1蛋白包括seqidno：11的变体。(b)的优选片段包含来自seqidno：11的表位。其它优选片段缺少seqidno：11的c末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸和/或n末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸，而保留seqidno：11的至少一个表位。seqidno：11的末40个c末端氨基酸可被有利地省去。seqidno：11的前33个n末端氨基酸可被有利地省去。其它片段省去一个或多个蛋白结构域。天然情况下，pse5-1是长蛋白质，因此片段的使用有助于例如纯化、处理、融合、表达等。
seqidno：46是seqidno：11的有用片段(‘pse5-134-924’)。该片段包括pse5-1的最暴露区域且更容易进行工业规模应用。
pa1954或pse13-2
pse13-2抗原标注为‘假拟蛋白’。在pao1菌株中，pse13-2是pa1954且具有氨基酸序列seqidno：12(gi：15597150)，参见参考文献37。有时，pa1954在本文中称作‘pse13-2’或‘pse13’。
有用的pse13-2抗原可引发识别seqidno：12的抗体(例如给予人时)和/或可包含某氨基酸序列，所述氨基酸序列(a)与seqidno：12有50％或更高相同性(例如60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或更高)；和/或(b)包含seqidno：12的至少‘n’个连续氨基酸的片段，其中‘n’是7或更高(例如8、10、12、14、16、18、20、25、30、35、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250或更高)。这些pse13-2蛋白包括seqidno：12的变体。(b)的优选片段包含来自seqidno：12的表位。其它优选片段缺少seqidno：12的c末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸和/或n末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸，而保留seqidno：12的至少一个表位。seqidno：12的末40个c末端氨基酸可被有利地省去。可有利地省去seqidno：12的前24个n末端氨基酸。其它片段省去一个或多个蛋白结构域。天然情况下，pse13-2是长蛋白质，因此片段的使用有助于例如纯化、处理、融合、表达等。
seqidno：47是seqidno：12的有用片段(‘pse13-225-340’)。该片段包括pse13-2的最暴露区域且更容易进行工业规模应用。
pa3692或pse17-1
pse17-1抗原标注为‘脂毒素f，lptf’。在pao1菌株中，pse17-1是pa3692且具有氨基酸序列seqidno：13(gi：15598888)，参见参考文献37。其已被描述为属于外膜蛋白和相关的低肽聚糖相关(脂)蛋白，如参考文献39所示。有时，pa3692在本文中称作‘pse17-1’或‘pse17’。
有用的pse17-1抗原可引发识别seqidno：13的抗体(例如给予人时)和/或可包含某氨基酸序列，所述氨基酸序列(a)与seqidno：13有50％或更高相同性(例如60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或更高)；和/或(b)包含seqidno：13的至少‘n’个连续氨基酸的片段，其中‘n’是7或更高(例如8、10、12、14、16、18、20、25、30、35、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250或更高)。这些pse17-1蛋白包括seqidno：13的变体。(b)的优选片段包含来自seqidno：13的表位。其它优选片段缺少seqidno：13的c末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸和/或n末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸，而保留seqidno：13的至少一个表位。seqidno：13的末40个c末端氨基酸可被有利地省去。seqidno：13的前19个n末端氨基酸可被有利地省去。其它片段省去一个或多个蛋白结构域。天然情况下，pse17-1是长蛋白质，因此片段的使用有助于例如纯化、处理、融合、表达等。
seqidno：48是seqidno：13的有用片段(‘pse17-120-261’)。该片段包括pse17-1的最暴露区域且更容易进行工业规模应用。
pa4370或pse18-2
‘pse18-2’抗原标注为‘胰岛素切割的金属蛋白酶外膜蛋白前体’。在pao1菌株中，pse18-2是pa4370且具有氨基酸序列seqidno：14(gi：15599566)，参见参考文献37。其已被描述为属于外膜蛋白且具体被描述为胰岛素切割的金属蛋白酶外膜蛋白(icmp)，如参考文献40所示。有时，pa4370在本文中称作‘pse18-2’或‘pse18’。
有用的pse18-2抗原可引发识别seqidno：14的抗体(例如给予人时)和/或可包含某氨基酸序列，所述氨基酸序列(a)与seqidno：14有50％或更高相同性(例如60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或更高)；和/或(b)包含seqidno：14的至少‘n’个连续氨基酸的片段，其中‘n’是7或更高(例如8、10、12、14、16、18、20、25、30、35、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250或更高)。这些pse18-2蛋白包括seqidno：14的变体。(b)的优选片段包含来自seqidno：14的表位。其它优选片段缺少seqidno：14的c末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸和/或n末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸，而保留seqidno：14的至少一个表位。seqidno：14的末40个c末端氨基酸可被有利地省去。seqidno：14的前20个n末端氨基酸可被有利地省去。其它片段省去一个或多个蛋白结构域。天然情况下，pse18-2是长蛋白质，因此片段的使用有助于例如纯化、处理、融合、表达等。
seqidno：49是seqidno：14的有用片段(‘pse18-221-446’)。该片段包括pse18-2的最暴露区域且更容易进行工业规模应用。
pa4735或pse20-1
‘pse20-1’抗原标注为‘假拟蛋白’。在pao1菌株中，pse20-1是pa4735且具有氨基酸序列seqidno：16(gi：15599929)，参见参考文献37。有时，pa4735在本文中称作‘pse20-1’或‘pse20’。
有用的pse20-1抗原可引发识别seqidno：16的抗体(例如给予人时)和/或可包含某氨基酸序列，所述氨基酸序列(a)与seqidno：16有50％或更高相同性(例如60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或更高)；和/或(b)包含seqidno：16的至少‘n’个连续氨基酸的片段，其中‘n’是7或更高(例如8、10、12、14、16、18、20、25、30、35、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250或更高)。这些pse20-1蛋白包括seqidno：16的变体。(b)的优选片段包含来自seqidno：16的表位。其它优选片段缺少seqidno：16的c末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸和/或n末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸，而保留seqidno：16的至少一个表位。seqidno：16的末40个c末端氨基酸可被有利地省去。seqidno：16的前19个n末端氨基酸可被有利地省去。其它片段省去一个或多个蛋白结构域。天然情况下，pse20-1是长蛋白质，因此片段的使用有助于例如纯化、处理、融合、表达等。
seqidno：51是seqidno：16的有用片段(‘pse20-120-1088’)。该片段包括pse20-1的最暴露区域且更容易进行工业规模应用。
pa3647或pse23-1
‘pse23-1’抗原标注为‘假拟蛋白’。在pao1菌株中，pse23-1是pa3647且具有氨基酸序列seqidno：17(gi：15598843)，参见参考文献37。其已被描述为可能的外膜蛋白前体或omph基因且其被描述为opri的纯化过程期间的污染物，如参考文献41所示。有时，pa3647在本文中称作‘pse23-1’或‘pse23’。
有用的pse20-1抗原可引发识别seqidno：17的抗体(例如给予人时)和/或可包含某氨基酸序列，所述氨基酸序列(a)与seqidno：17有50％或更高相同性(例如60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或更高)；和/或(b)包含seqidno：17的至少‘n’个连续氨基酸的片段，其中‘n’是7或更高(例如8、10、12、14、16、18、20、25、30、35、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250或更高)。这些pse20-1蛋白包括seqidno：17的变体。(b)的优选片段包含来自seqidno：17的表位。其它优选片段缺少seqidno：17的c末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸和/或n末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸，而保留seqidno：17的至少一个表位。seqidno：17的末40个c末端氨基酸可被有利地省去。可有利地省去seqidno：17的前22个n末端氨基酸。其它片段省去一个或多个蛋白结构域。天然情况下，pse23-1是长蛋白质，因此片段的使用有助于例如纯化、处理、融合、表达等。
seqidno：52是seqidno：17的有用片段(‘pse20-123-168’)。该片段包括pse23-1的最暴露区域且更容易进行工业规模应用。
pa0126或pse24-1
‘pse24-1’抗原标注为‘假拟蛋白’。在pao1菌株中，pse24-1是pa0126且具有氨基酸序列seqidno：18(gi：15595324)，参见参考文献37。有时，pa0126在本文中称作‘pse24-1’或‘pse24’。
有用的pse24-1抗原可引发识别seqidno：18的抗体(例如给予人时)和/或可包含某氨基酸序列，所述氨基酸序列(a)与seqidno：18有50％或更高相同性(例如60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或更高)；和/或(b)包含seqidno：18的至少‘n’个连续氨基酸的片段，其中‘n’是7或更高(例如8、10、12、14、16、18、20、25、30、35、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250或更高)。这些pse24-1蛋白包括seqidno：18的变体。(b)的优选片段包含来自seqidno：18的表位。其它优选片段缺少seqidno：18的c末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸和/或n末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸，而保留seqidno：18的至少一个表位。seqidno：18的前19个n末端氨基酸可被有利地省去。其它片段省去一个或多个蛋白结构域。天然情况下，pse24-1是长蛋白质，因此片段的使用有助于例如纯化、处理、融合、表达等。
seqidno：53是seqidno：18的有用片段(‘pse24-120-206’)。该片段包括pse24-1的最暴露区域且更容易进行工业规模应用。
pa0189或pse25-1
‘pse25-1’抗原标注为‘可能的孔蛋白’。在pao1菌株中，pse25-1是pa0189且具有氨基酸序列seqidno：19(gi：15595387)，参见参考文献37。有时，pa0189在本文中称作‘pse25-1’或‘pse25’。
有用的pse25-1抗原可引发识别seqidno：19的抗体(例如给予人时)和/或可包含某氨基酸序列，所述氨基酸序列(a)与seqidno：19有50％或更高相同性(例如60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或更高)；和/或(b)包含seqidno：19的至少‘n’个连续氨基酸的片段，其中‘n’是7或更高(例如8、10、12、14、16、18、20、25、30、35、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250或更高)。这些pse25-1蛋白包括seqidno：19的变体。(b)的优选片段包含来自seqidno：19的表位。其它优选片段缺少seqidno：19的c末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸和/或n末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸，而保留seqidno：19的至少一个表位。seqidno：19的前25个n末端氨基酸可被有利地省去。其它片段省去一个或多个蛋白结构域。天然情况下，pse25-1是长蛋白质，因此片段的使用有助于例如纯化、处理、融合、表达等。
seqidno：54是seqidno：19的有用片段(‘pse25-126-452’)。该片段包括pse25-1的最暴露区域且更容易进行工业规模应用。
pa0274或pse26-1
‘pse26-1’抗原标注为‘假拟蛋白’。在pao1菌株中，pse26-1是pa0274且具有氨基酸序列seqidno：20(gi：15595471)，参见参考文献37。有时，pa0274在本文中称作‘pse26-1’或‘pse26’。
有用的pse26-1抗原可引发识别seqidno：20的抗体(例如给予人时)和/或可包含某氨基酸序列，所述氨基酸序列(a)与seqidno：20有50％或更高相同性(例如60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或更高)；和/或(b)包含seqidno：20的至少‘n’个连续氨基酸的片段，其中‘n’是7或更高(例如8、10、12、14、16、18、20、25、30、35、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250或更高)。这些pse26-1蛋白包括seqidno：20的变体。(b)的优选片段包含来自seqidno：20的表位。其它优选片段缺少seqidno：20的c末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸和/或n末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸，而保留seqidno：20的至少一个表位。seqidno：20的前23个n末端氨基酸可被有利地省去。其它片段省去一个或多个蛋白结构域。天然情况下，pse26-1是长蛋白质，因此片段的使用有助于例如纯化、处理、融合、表达等。
seqidno：55是seqidno：20的有用片段(‘pse26-124-256’)。该片段包括pse26-1的最暴露区域且更容易进行工业规模应用。
pa0537或pse28-2
‘pse28-1’抗原标注为‘保守的假拟蛋白’。在pao1菌株中，pse28-1是pa0537且具有氨基酸序列seqidno：21(gi：15595734)，参见参考文献37。有时，pa0537在本文中称作‘pse28-1’或‘pse28’。
有用的pse28-1抗原可引发识别seqidno：21的抗体(例如给予人时)和/或可包含某氨基酸序列，所述氨基酸序列(a)与seqidno：21有50％或更高相同性(例如60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或更高)；和/或(b)包含seqidno：21的至少‘n’个连续氨基酸的片段，其中‘n’是7或更高(例如8、10、12、14、16、18、20、25、30、35、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250或更高)。这些pse28-1蛋白包括seqidno：21的变体。(b)的优选片段包含来自seqidno：21的表位。其它优选片段缺少seqidno：21的c末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸和/或n末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸，而保留seqidno：21的至少一个表位。seqidno：21的前19个n末端氨基酸可被有利地省去。其它片段省去一个或多个蛋白结构域。天然情况下，pse28-1是长蛋白质，因此片段的使用有助于例如纯化、处理、融合、表达等。
seqidno：56是seqidno：21的有用片段(‘pse28-120-202’)。该片段包括pse28-1的最暴露区域且更容易进行工业规模应用。
pa0737或pse31-2
pse31-2抗原标注为‘保守的假拟蛋白’。在pao1菌株中，pse31-2是pa0737且具有氨基酸序列seqidno：22(gi：15595934)，参见参考文献37。其已被描述为上调的脂蛋白。参见参考文献42。有时，pa0737在本文中称作‘pse31-2’或‘pse31’。
有用的pse31-2抗原可引发识别seqidno：22的抗体(例如给予人时)和/或可包含某氨基酸序列，所述氨基酸序列(a)与seqidno：22有50％或更高相同性(例如60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或更高)；和/或(b)包含seqidno：22的至少‘n’个连续氨基酸的片段，其中‘n’是7或更高(例如8、10、12、14、16、18、20、25、30、35、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250或更高)。这些pse31-2蛋白包括seqidno：22的变体。(b)的优选片段包含来自seqidno：22的表位。其它优选片段缺少seqidno：22的c末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸和/或n末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸，而保留seqidno：22的至少一个表位。seqidno：22的前19个n末端氨基酸可被有利地省去。其它片段省去一个或多个蛋白结构域。天然情况下，pse31-2是长蛋白质，因此片段的使用有助于例如纯化、处理、融合、表达等。
seqidno：57是seqidno：22的有用片段(‘pse31-220-151’)。该片段包括pse31-2的最暴露区域且更容易进行工业规模应用。
pa1086或pse33-2
pse33-2抗原标注为‘鞭毛钩相关蛋白1flgk’。在pao1菌株中，pse33-2是pa1086且具有氨基酸序列seqidno：23(gi：15596283)，参见参考文献37。有时，pa1086在本文中称作‘pse33-2’或‘pse33’。
有用的pse33-2抗原可引发识别seqidno：23的抗体(例如给予人时)和/或可包含某氨基酸序列，所述氨基酸序列(a)与seqidno：23有50％或更高相同性(例如60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或更高)；和/或(b)包含seqidno：23的至少‘n’个连续氨基酸的片段，其中‘n’是7或更高(例如8、10、12、14、16、18、20、25、30、35、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250或更高)。这些pse33-2蛋白包括seqidno：23的变体。(b)的优选片段包含来自seqidno：23的表位。其它优选片段缺少seqidno：23的c末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸和/或n末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸，而保留seqidno：23的至少一个表位。可有利地省去seqidno：23的第一个n末端氨基酸。其它片段省去一个或多个蛋白结构域。天然情况下，pse33-2是长蛋白质，因此片段的使用有助于例如纯化、处理、融合、表达等。
seqidno：58是seqidno：23的有用片段，其中仅除去该多肽第1位处的met以允许在常见的表达系统(即pet载体系统)中进行适当的克隆和表达。该片段包括pse31-2的最暴露区域且更容易进行工业规模应用。
pa2793或pse42-1
pse42-1抗原标注为‘假拟蛋白’。在pao1菌株中，pse25-1是pa2793且具有氨基酸序列seqidno：27(gi：15597989)，参见参考文献37。有时，pa2793在本文中称作‘pse42-1’或‘pse42’。
psort可得的程序通过lipop由残基20后的切割将该蛋白预测为脂蛋白和ii型(脂蛋白)输出信号。参见参考文献37。
有用的pse42-1抗原可引发识别seqidno：27的抗体(例如给予人时)和/或可包含某氨基酸序列，所述氨基酸序列(a)与seqidno：27有50％或更高相同性(例如60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或更高)；和/或(b)包含seqidno：27的至少‘n’个连续氨基酸的片段，其中‘n’是7或更高(例如8、10、12、14、16、18、20、25、30、35、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250或更高)。这些pse42-1蛋白包括seqidno：27的变体。(b)的优选片段包含来自seqidno：27的表位。其它优选片段缺少seqidno：27的c末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸和/或n末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸，而保留seqidno：27的至少一个表位。seqidno：27的前20个n末端氨基酸可被有利地省去。其它片段省去一个或多个蛋白结构域。天然情况下，pse42-1是长蛋白质，因此片段的使用有助于例如纯化、处理、融合、表达等。
seqidno：62是seqidno：27的有用片段(‘pse42-121-344’)。该片段包括pse42-1的最暴露区域且更容易进行工业规模应用。
pa3535或pse45-2
pse45-2抗原标注为‘可能的外膜蛋白前体’。在pao1菌株中，pse45-2是pa3535且具有氨基酸序列seqidno：28(gi：15598731)，参见参考文献37。有时，pa3535在本文中称作‘pse45-2’或‘pse45’。
有用的pse45-2抗原可引发识别seqidno：28的抗体(例如给予人时)和/或可包含某氨基酸序列，所述氨基酸序列(a)与seqidno：28有50％或更高相同性(例如60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或更高)；和/或(b)包含seqidno：28的至少‘n’个连续氨基酸的片段，其中‘n’是7或更高(例如8、10、12、14、16、18、20、25、30、35、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250或更高)。这些pse45-2蛋白包括seqidno：28的变体。(b)的优选片段包含来自seqidno：28的表位。其它优选片段缺少seqidno：28的c末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸和/或n末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸，而保留seqidno：28的至少一个表位。seqidno：28的前30个n末端氨基酸可被有利地省去。其它片段省去一个或多个蛋白结构域。天然情况下，pse45-2是长蛋白质，因此片段的使用有助于例如纯化、处理、融合、表达等。
seqidno：63是seqidno：28的有用片段(‘pse45-231-995’)。该片段包括pse45-2的最暴露区域且更容易进行工业规模应用。
pa4578或pse50-1
pse50-1抗原标注为‘假拟蛋白’。在pao1菌株中，pse50-1是pa4578且具有氨基酸序列seqidno：29(gi：15599774)，参见参考文献37。有时，pa4578在本文中称作‘pse50-1’或‘pse50’。
有用的pse50-1抗原可引发识别seqidno：29的抗体(例如给予人时)和/或可包含某氨基酸序列，所述氨基酸序列(a)与seqidno：29有50％或更高相同性(例如60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或更高)；和/或(b)包含seqidno：29的至少‘n’个连续氨基酸的片段，其中‘n’是7或更高(例如8、10、12、14、16、18、20、25、30、35、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250或更高)。这些pse50-1蛋白包括seqidno：29的变体。(b)的优选片段包含来自seqidno：29的表位。其它优选片段缺少seqidno：29c末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸和/或自n末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、19、20、25或更多个)氨基酸，而保留seqidno：29的至少一个表位。seqidno：29的前19个n末端氨基酸可被有利地省去。其它片段省去一个或多个蛋白结构域。天然情况下，pse45-2是长蛋白质，因此片段的使用有助于例如纯化、处理、融合、表达等。
seqidno：64是seqidno：29的有用片段(‘pse50-120-162’)。该片段包括pse50-1的最暴露区域且更容易进行工业规模应用。
pa4667或pse51-4
pse51-4抗原标注为‘假拟蛋白’。在pao1菌株中，pse51-4是pa4667且具有氨基酸序列seqidno：30(gi：15599862)，参见参考文献37。有时，pa4667在本文中称作‘pse51-4’或‘pse51’。
有用的pse51-4抗原可引发识别seqidno：30的抗体(例如给予人时)和/或可包含某氨基酸序列，所述氨基酸序列(a)与seqidno：30有50％或更高相同性(例如60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或更高)；和/或(b)包含seqidno：30的至少‘n’个连续氨基酸的片段，其中‘n’是7或更高(例如8、10、12、14、16、18、20、25、30、35、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250或更高)。这些pse51-4蛋白包括seqidno：30的变体。(b)的优选片段包含来自seqidno：30的表位。其它优选片段缺少seqidno：30c末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸和/或自n末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、19、20、25或更多个)氨基酸，而保留seqidno：30的至少一个表位。seqidno：30的前31个n末端氨基酸可被有利地省去。其它片段省去一个或多个蛋白结构域。天然情况下，pse51-4是长蛋白质，因此片段的使用有助于例如纯化、处理、融合、表达等。
seqidno：65是seqidno：30的有用片段(‘pse51-432-590’)。该片段包括pse51-4的最暴露区域且更容易进行工业规模应用。
pa1106或pse34-1
pse34-1抗原标注为‘假拟蛋白’。在pao1菌株中，pse34-1是pa1106且具有氨基酸序列seqidno：24(gi：15596303)，参见参考文献37。有时，pa1106在本文中称作‘pse34-1’或‘pse34’。
有用的pse34-1抗原可引发识别seqidno：24的抗体(例如给予人时)和/或可包含某氨基酸序列，所述氨基酸序列(a)与seqidno：24有50％或更高相同性(例如60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或更高)；和/或(b)包含seqidno：24的至少‘n’个连续氨基酸的片段，其中‘n’是7或更高(例如8、10、12、14、16、18、20、25、30、35、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250或更高)。这些pse34-1蛋白包括seqidno：24的变体。(b)的优选片段包含来自seqidno：24的表位。其它优选片段缺少seqidno：24的c末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸和/或n末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸，而保留seqidno：24的至少一个表位。seqidno：24的前20个n末端氨基酸可被有利地省去。其它片段省去一个或多个蛋白结构域。天然情况下，pse34-1是长蛋白质，因此片段的使用有助于例如纯化、处理、融合、表达等。
seqidno：59是seqidno：24的有用片段(‘pse34-121-237’)。该片段包括pse34-1的最暴露区域且更容易进行工业规模应用。
pa1324或pse36-3
pse36-3抗原标注为‘假拟蛋白’。在pao1菌株中，pse36-3是pa1324且具有氨基酸序列seqidno：25(gi：15596521)，参见参考文献37。有时，pa1324在本文中称作‘pse36-3’或‘pse36’。
pa1324被假定为生物膜形成期间参与肽聚糖基质相关糖或多糖的结合和转运[43]。
有用的pse36-3抗原可引发识别seqidno：25的抗体(例如给予人时)和/或可包含某氨基酸序列，所述氨基酸序列(a)与seqidno：25有50％或更高相同性(例如60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或更高)；和/或(b)包含seqidno：25的至少‘n’个连续氨基酸的片段，其中‘n’是7或更高(例如8、10、12、14、16、18、20、25、30、35、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250或更高)。这些pse36-3蛋白包括seqidno：25的变体。(b)的优选片段包含来自seqidno：25的表位。其它优选片段缺少seqidno：25的c末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸和/或n末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸，而保留seqidno：25的至少一个表位。seqidno：25的前19个n末端氨基酸可被有利地省去。其它片段省去一个或多个蛋白结构域。天然情况下，pse36-3是长蛋白质，因此片段的使用有助于例如纯化、处理、融合、表达等。
seqidno：60是seqidno：25的有用片段(‘pse36-320-170’)。该片段包括pse36-3的最暴露区域且更容易进行工业规模应用。
第二抗原组
pa1178或pse10
‘pse10’抗原标注为‘′phop/q和低mg2 诱导型外膜蛋白’。在pao1菌株中，pse10也被称为oprh[44]且具有氨基酸序列seqidno：2。在pao1菌株中，pse10标注为pa1178且其ncbi标签是gi：15596375。参见参考文献37。有时，pa1178在本文中称作‘pse10-1’或‘pse10’。
有用的pse10抗原可引发识别seqidno：2的抗体(例如给予人时)和/或可包含某氨基酸序列，所述氨基酸序列(a)与seqidno：2有50％或更高相同性(例如60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或更高)；和/或(b)包含seqidno：2的至少‘n’个连续氨基酸的片段，其中‘n’是7或更高(例如8、10、12、14、16、18、20、25、30、35、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250或更高)。这些pse10蛋白包括seqidno：2的变体。(b)的优选片段包含来自seqidno：2的表位。其它优选片段缺少seqidno：2c末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸和/或自n末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、35、40、45、50或更多个)氨基酸，而保留seqidno：2的至少一个表位。seqidno：2的前21个n末端氨基酸可被有利地省去。其它片段省去一个或多个蛋白结构域。片段的使用有助于例如纯化、处理、融合、表达等。
seqidno：37是seqidno：2的有用片段(‘pse1022-200’)。该片段包括pse10的最暴露区域且更容易进行工业规模应用。
pa1248或pse11-3
‘′pse11-3’抗原标注为‘碱性蛋白酶分泌外膜蛋白aprf前体’。在pao1菌株中，pse11-3是pa1248且具有氨基酸序列seqidno：4。在pao1菌株中，ncbi标签是gi：15596445。参见参考文献37和45。
有时，pa1248在本文中称作‘pse11-3’或‘pse11’。
有用的pse11-3抗原可引发识别seqidno：4的抗体(例如给予人时)和/或可包含某氨基酸序列，所述氨基酸序列(a)与seqidno：4有50％或更高相同性(例如60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或更高)；和/或(b)包含seqidno：4的至少‘n’个连续氨基酸的片段，其中‘n’是7或更高(例如8、10、12、14、16、18、20、25、30、35、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250或更高)。这些pse11-3蛋白包括seqidno：4的变体。(b)的优选片段包含来自seqidno：4的表位。其它优选片段缺少seqidno：4的c末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸和/或n末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸，而保留seqidno：4的至少一个表位。seqidno：4的前18个n末端氨基酸可被有利地省去。其它片段省去一个或多个蛋白结构域。天然情况下，pse11-3是长蛋白质，因此片段的使用有助于例如纯化、处理、融合、表达等。在参考文献45中，该抗原被描述为已知的毒力因子并作为抗原被测试。
seqidno：39是seqidno：4的有用片段(‘pse11-319-481’)。该片段包括pse11-3的最暴露区域且更容易进行工业规模应用。
pa4765或pse52-1
pse52-1抗原标注为‘外膜脂蛋白omla前体’。在pao1菌株中，pse52-1是pa4765且具有氨基酸序列seqidno：8(gi：15599959)，参见参考文献37。有时，pa4765在本文中称作‘pse52-1’或‘pse52’。
自从1999年以来，已将其描述为属于外膜蛋白家族，如参考文献46中所述。
有用的pse52-1抗原可引发识别seqidno：8的抗体(例如给予人时)和/或可包含某氨基酸序列，所述氨基酸序列(a)与seqidno：8有50％或更高相同性(例如60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或更高)；和/或(b)包含seqidno：8的至少‘n’个连续氨基酸的片段，其中‘n’是7或更高(例如8、10、12、14、16、18、20、25、30、35、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250或更高)。这些pse52-1蛋白包括seqidno：8的变体。(b)的优选片段包含来自seqidno：8的表位。其它优选片段缺少seqidno：8的c末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸和/或n末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸，而保留seqidno：8的至少一个表位。seqidno：8的末40个c末端氨基酸可被有利地省去。seqidno：8的前21个n末端氨基酸可被有利地省去。其它片段省去一个或多个蛋白结构域。天然情况下，pse52-1是长蛋白质，因此片段的使用有助于例如纯化、处理、融合、表达等。
seqidno：43是seqidno：8的有用片段(‘pse52-122-176’)。该片段包括pse52-1的最暴露区域且更容易进行工业规模应用。
pa4710或pse19-1
pse19-1抗原标注为‘heme/血红蛋白摄取外膜受体phur前体’。在pao1菌株中，pse19-1是pa4710且具有氨基酸序列seqidno：15(gi：15599904)，参见参考文献37。已提出来源于所述抗原的短肽显示一定的免疫原性，但该抗原尚未被测试作为组合形式的疫苗抗原[47]。有时，pa4710在本文中称作
‘pse19-1’或‘pse19’。
有用的pse19-1抗原可引发识别seqidno：15的抗体(例如给予人时)和/或可包含某氨基酸序列，所述氨基酸序列(a)与seqidno：15有50％或更高相同性(例如60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或更高)；和/或(b)包含seqidno：15的至少‘n’个连续氨基酸的片段，其中‘n’是7或更高(例如8、10、12、14、16、18、20、25、30、35、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250或更高)。这些pse19-2蛋白包括seqidno：15的变体。(b)的优选片段包含来自seqidno：15的表位。其它优选片段缺少seqidno：15的c末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸和/或n末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸，而保留seqidno：15的至少一个表位。seqidno：15的末40个c末端氨基酸可被有利地省去。seqidno：15的前25个n末端氨基酸可被有利地省去。其它片段省去一个或多个蛋白结构域。天然情况下，pse19-1是长蛋白质，因此片段的使用有助于例如纯化、处理、融合、表达等。
seqidno：50是seqidno：15的有用片段(‘pse19-126-764’)。该片段包括pse19-1的最暴露区域且更容易进行工业规模应用。
pa1777或pse38-1
pse38-1抗原标注为‘主要孔蛋白和结构性外膜孔蛋白oprf前体’。在pao1菌株中，pse38-1是pa1777且具有氨基酸序列seqidno：26(gi：15596974)。参见参考文献37和48。ep0297291首次描述了该蛋白作为有用的抗原。有时，pa1777在本文中称作‘pse38-1’或‘pse38’。
有用的pse38-1抗原可引发识别seqidno：26的抗体(例如给予人时)和/或可包含某氨基酸序列，所述氨基酸序列(a)与seqidno：26有50％或更高相同性(例如60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或更高)；和/或(b)包含seqidno：26的至少‘n’个连续氨基酸的片段，其中‘n’是7或更高(例如8、10、12、14、16、18、20、25、30、35、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250或更高)。这些pse38-1蛋白包括seqidno：26的变体。(b)的优选片段包含来自seqidno：26的表位。其它优选片段缺少seqidno：26的c末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸和/或n末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸，而保留seqidno：26的至少一个表位。可有利地省去seqidno：26的前24个n末端氨基酸。其它片段省去一个或多个蛋白结构域。天然情况下，pse38-1是长蛋白质，因此片段的使用有助于例如纯化、处理、融合、表达等。
seqidno：61是seqidno：26的有用片段(‘pse38-125-350’)。该片段包括pse38-1的最暴露区域且更容易进行工业规模应用。
其他抗原性多肽
pa4525或pila
pila抗原标注为‘4型菌毛前体pila’。在pao1菌株中，pila是pa4525且具有氨基酸序列seqidno：31(gi：15599721)。参见参考文献37。有用的pila抗原可引发识别seqidno：31的抗体(例如给予人时)和/或可包含某氨基酸序列，所述氨基酸序列(a)与seqidno：31有50％或更高相同性(例如60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或更高)；和/或(b)包含seqidno：31的至少‘n’个连续氨基酸的片段，其中‘n’是7或更高(例如8、10、12、14、16、18、20、25、30、35、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250或更高)。这些pila蛋白包括seqidno：31的变体。(b)的优选片段包含来自seqidno：31的表位。其它优选片段缺少seqidno：31的c末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸和/或n末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸，而保留seqidno：31的至少一个表位。其它片段省去一个或多个蛋白结构域。天然情况下，pila是长蛋白质，因此使用片段有助于例如纯化、处理、融合、表达等。
有用的片段包括pila的最暴露区域且更容易进行工业规模应用。其还降低抗原与人蛋白的类似性。已尝试了使用该抗原的疫苗和免疫治疗，如参考文献49和参考文献50中所示。
oprf-opri
ompf/i抗原是由杂合蛋白[met-ala-(his)6oprf(190-342)-opri(21-83)](“(his)6”公开为seqidno：70)组成的融合蛋白，其通过在大肠杆菌中表达并纯化的绿脓假单胞菌的oprf的氨基酸190-342与成熟的外膜蛋白i(opri)的融合来生成。
该融合蛋白已于参考文献4中作为seqidno006描述。出于参比目的，本文所述融合蛋白的全长氨基酸序列示为seqidno：32。该抗原可有利地以单个抗原的形式用作阳性对照，或与特定假单胞菌抗原联用时在体内实验中显示令人惊讶的增加疫苗效力的积极作用。
pa1092或flic(鞭毛蛋白)
鞭毛和主要鞭毛蛋白如flic(pa1092)或flid(pa1094)已在过去被广泛表征并用作单个疫苗抗原，如参考文献51所示。出于参比目的，flic的全长氨基酸序列在本文中示为seqidno：33。
pa1092抗原和/或pa1094抗原可有利地与“第一抗原组”或“第二抗原组”中的任一种抗原组合。
pa1094或flid(鞭毛蛋白)
鞭毛和主要鞭毛蛋白如flid(pa1094)已在过去被广泛表征并用作疫苗抗原，如参考文献51所示。出于参比目的，flid的全长氨基酸序列在本文中示为seqidno：34。
pa1094可有利地与“第一抗原组”或“第二抗原组”中的任一种抗原组合。
pa1148或外蛋白a或外毒素a
外蛋白a(也称作外毒素a)是已被广泛表征并主要在多肽偶联疫苗方法中用作载体蛋白的一种外蛋白，例如参考文献22。在pao1菌株中，其称为pa1148。参见参考文献37。
pa1148可有利地与“第一抗原组”或“第二抗原组”中的任一种抗原组合。
杂合多肽
本发明所用的抗原可以单个单独多肽的形式存在于组合物中。然而，使用多于一种的抗原时，它们不必以单独多肽的形式存在。而是，至少两种(如2、3、4、5或更多种)抗原可以表达为单一多肽链(“杂合”多肽)。杂合多肽具有以下两个主要优点：首先，本身不稳定或者表达较差的多肽可以通过加入能够克服该问题的合适杂合伴侣得到改善；其次，商业生产得以简化，因为只需利用一次表达和纯化以生产可作抗原应用的两种多肽。
杂合多肽可包含来自第一抗原组的两种或多种多肽序列。杂合多肽可包含来自第一抗原组的一种或多种多肽序列，和来自第二抗原组的一种或多种多肽序列。而且，杂和多肽可包含来自上述各抗原的两种或多种多肽序列，或在该序列在菌株之间有部分变化的情况下，可包含相同抗原的两种或多种变体。
可使用由两种、三种、四种、五种、六种、七种、八种、九种或十种抗原的氨基酸序列组成的杂合体。具体地，优选由两种、三种、四种或五种抗原，如两种或三种抗原的氨基酸序列组成的杂合体。
不同的杂合多肽可以在单一制剂中混合在一起。杂合体可与选自第一、第二或第三抗原组的非杂合抗原组合。在这类组合中，抗原可存在于超过一种杂合多肽和/或非杂合多肽中。然而，抗原优选以杂合体或非杂合体的形式存在，但不同时以两种形式存在。
杂合多肽也可与上述偶联物或非绿脓假单胞菌抗原组合。
杂合多肽可表示为nh2-a-{-x-l-}n-b-cooh，其中：x是绿脓假单胞菌抗原的氨基酸序列，如上所述；l是可选接头的氨基酸序列；a是可选的n末端氨基酸序列；b是可选的c末端氨基酸序列；n是2或更大的整数(如2、3、4、5、6等)。n通常是2或3。
如果-x-部分具有野生型形式中的前导肽序列，则在杂合蛋白中可以包含或者略去该序列。在一些实施方式中，前导肽可缺失，除非-x-部分位于杂合蛋白的n-末端，即保留x1的前导肽，但略去x2...xn的前导肽。这相当于删除所有前导肽并使用x1的前导肽作为-a-部分。
就{-x-l-}的各n示例而言，接头氨基酸序列-l-可存在或不存在。例如，当n＝2时，杂合体可以是nh2-x1-l1-x2-l2-cooh、nh2-x1-x2-cooh、nh2-x1-l1-x2-cooh、nh2-x1-x2-l2-cooh等。接头氨基酸序列-l-一般较短(如20个或更少的氨基酸，即20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、1)。示例包括有利于克隆的短肽序列，聚-甘氨酸接头(即包含glyn，其中n＝2、3、4、5、6、7、8、9、10或更大)(seqidno：71)，和组氨酸标签(即hisn，其中n＝3、4、5、6、7、8、9、10或更大)(seqidno：72)。其它合适的接头氨基酸序列对本领域技术人员而言是显而易见的。有用的接头是gsgggg(seqidno：67)或gsgsgggg(seqidno：68)，gly-ser二肽由bamhi限制位点形成，因而有助于克隆和操作，(gly)4(seqidno：73)四肽是常用的聚甘氨酸接头。其他合适接头，尤其用作最后一个ln的接头是asgggs(seqidno：69)或leu-glu二肽。
-a-是可选的n末端氨基酸序列。其一般较短(如40个或更少个氨基酸，即40、39、38、37、36、35、34、33、32、31、30、29、28、27、26、25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、1个)。示例包括指导蛋白质运输的前导序列，或有利于克隆或纯化的短肽序列(如组氨酸标签，即hisn，其中n＝3、4、5、6、7、8、9、10或更大)(seqidno：72)。有用的标签含有6个连续组氨酸的序列(seqidno：70)，在其起始处具有同源或异源的起始甲硫氨酸和/或丙氨酸，即seqidno66。其它合适的n-末端氨基酸序列对于本领域技术人员来说是显而易见的。如果x1缺少其自身的n末端甲硫氨酸，-a-优选是提供n末端甲硫氨酸的寡肽(例如，具有1、2、3、4、5、6、7或8个氨基酸)，如met-ala-ser或单个met残基。
-b-是可选的c末端氨基酸序列。其一般较短(如40个或更少个氨基酸，即39、38、37、36、35、34、33、32、31、30、29、28、27、26、25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、1个)。
本发明所用多肽
本发明所用多肽可采取各种形式(如天然多肽、融合多肽、糖基化多肽、非糖基化多肽、脂化多肽、非脂化多肽、磷酸化多肽、非磷酸化多肽、肉豆蔻酰化多肽、非肉豆蔻酰化多肽、单体、多聚体、颗粒、变性多肽等)。
本发明所用多肽可通过各种方式制备(如重组表达、由细胞培养物纯化、化学合成、从天然生物来源分离等)。优选重组表达的蛋白，特别是对于杂合多肽。
本发明所用多肽优选以纯化或基本纯化，即基本不含其它多肽(如不含天然存在的多肽)、特别是不含其它假单胞菌或宿主细胞多肽的形式提供，本发明多肽通常为至少约50％纯(重量)，通常至少约90％纯，即少于约50％，更优选少于约10％(如5％)的组合物由其它表达多肽构成。因此，组合物中的抗原与表达该分子的完整生物体分离。
本发明所用多肽优选是假单胞菌多肽。
术语“多肽”指任何长度的氨基酸聚合物。该聚合物可以是线性或支链聚合物，可包含修饰的氨基酸，可被非氨基酸介入。该术语也包括天然修饰或通过介入修饰的氨基酸聚合物；例如，二硫键形成、糖基化、脂化、乙酰化、磷酸化或任何其它操作或修饰，如与标记组分偶联。也包括，例如，含有一个或多个氨基酸类似物(包括例如，非天然氨基酸等)，以及本领域已知的其它修饰的多肽。多肽可以单链或结合链的形式出现。
本发明提供了包含序列-p-q-或-q-p-的多肽，其中：-p-是上述氨基酸序列，-q-不是上述序列，即本发明提供融合蛋白。-p-的n-末端密码子不是atg且此密码子未出现在多肽的n末端时，它将被翻译成该密码子的标准氨基酸，而不是met。然而，当该密码子位于多肽n末端时，它将被翻译成met。-q-部分的示例包括但不限于：组氨酸标签(即hisn，其中n＝3、4、5、6、7、8、9、10或更高)(seqidno：72)、麦芽糖结合蛋白或谷胱甘肽-s-转移酶(gst)。
本发明还提供产生本发明多肽的方法，该方法包括在诱导多肽表达的条件下培养用本发明核酸转化的宿主细胞的步骤。
虽然可以在假单胞菌中表达本发明多肽，但本发明通常使用异源宿主进行表达(重组表达)。该异源宿主可以是原核(例如细菌)或真核生物。其可以是大肠杆菌(e.coli)，但其他合适的宿主包括枯草杆菌(bacillussubtilis)、霍乱弧菌(vibriocholerae)、伤寒沙门菌(salmonellatyphi)、鼠伤寒沙门菌(salmonellatyphimurium)、乳酰胺奈瑟菌(neisserialactamica)、灰色奈瑟菌(neisseriacinerea)、分枝杆菌(mycobacteria)(例如结核分支杆菌(m.tuberculosis))、酵母等。与编码本发明多肽的野生型绿脓假单胞菌基因相比，改变密码子以优化这类宿主中的表达效率而不影响编码的氨基酸是有帮助的。
本发明提供一种产生本发明多肽的方法，所述方法包括通过化学方式合成至少部分所述多肽的步骤。
核酸
本发明也提供编码本发明多肽和杂合多肽的核酸。还提供包含编码一种或多种本发明多肽或杂合多肽的核苷酸序列的核酸。
本发明也提供所含核苷酸序列与这些核苷酸序列有序列相同性的核酸。序列之间的相同性优选通过smith-waterman同源性搜索算法(如上文所述)确定。这类核酸包括使用替代密码子编码相同氨基酸的那些核酸。
本发明还提供了可与这些核酸杂交的核酸。杂交反应可在不同“严谨性”的条件下进行。提高杂交反应严谨性的条件是本领域众所周知的且已发表。相关条件的示例包括(按严谨性提高的顺序)：25℃、37℃、50℃、55℃和68℃的孵育温度；10xssc、6xssc、1xssc、0.1xssc的缓冲液浓度(其中ssc是0.15mnacl和15mm柠檬酸盐缓冲液)和使用其它缓冲液体系的等同条件；0％、25％、50％和75％的甲酰胺浓度；5分钟至24小时的孵育时间；1个、2个或更多个洗涤步骤；1、2或15分钟的洗涤孵育时间；和6xssc、1xssc、0.1xssc或去离子水的洗涤溶液。杂交技术及其优化是本领域熟知的。
在一些实施方式中，本发明核酸与靶标在低严谨条件下杂交；在其它实施方式中，其在中等严谨条件下杂交；在优选实施方式中，其在高严谨条件下杂交。一组示例性的低严谨杂交条件是50℃和10xssc。一组示例性的中等严谨杂交条件是55℃和1xssc。一组示例性的高严谨杂交条件是68℃和0.1xssc。
本发明包括含有这些序列的互补序列的核酸(例如，用于反义或检测，或用作引物)。
本发明核酸可用于杂交反应(如northern或southern印迹，或核酸微阵列或‘基因芯片’)和扩增反应(如pcr、sda、sssr、lcr、tma、nasba等)和其它核酸技术。
本发明的核酸可采取各种形式(如单链、双链、载体、引物、探针、标记形式等)。本发明的核酸可以是环状或分支的，但通常是线性的。除非另有说明或要求，利用核酸的本发明任何实施方式可利用双链形式和构成该双链形式的两条互补单链形式中的每条链。引物、探针以及反义核酸通常是单链。
本发明的核酸优选以纯或基本纯的形式提供，即基本不含其它核酸(如不含天然产生的核酸)，特别是不含其它假单胞菌或宿主细胞核酸，通常其至少约50％纯(以重量计)，且通常至少约90％纯。本发明的核酸优选为假单胞菌核酸。
可以多种方式制备本发明的核酸，例如，完全或部分化学合成(例如dna的亚磷酰胺合成)、利用核酸酶(例如限制性酶)消化较长核酸、连接较短核酸或核苷酸(例如使用连接酶或聚合酶)、由基因组或cdna文库制备等。
本发明的核酸可连接于固体支持物(如珠、平板、滤器、膜、玻片、微阵列支持物、树脂等)。可用例如放射性或荧光标记、或生物素标记来标记本发明的核酸。这在将核酸用于检测技术时(例如核酸是引物或作为探针时)特别有用。
术语“核酸”通常包括任何长度的核苷酸聚合形式，其包含脱氧核糖核苷酸、核糖核苷酸和/或其类似物。它包括dna、rna、dna/rna杂交体。其也包括dna或rna类似物，如含有经修饰主链(如肽核酸(pna)或硫代磷酸酯)或经修饰碱基的类似物。因此，本发明包括mrna、trna、rrna、核酶、dna、cdna、重组核酸、分枝核酸、质粒、载体、探针、引物等。当本发明的核酸采取rna形式时，其可能具有或不具有5′帽。
本发明的核酸可以是载体的一部分，即设计用于转导/转染一种或多种细胞类型的核酸构建物的一部分。载体可以是，例如，设计用于分离、增殖和复制所插入核苷酸的“克隆载体”、设计用于在宿主细胞中表达核苷酸序列的“表达载体”、设计用于产生重组病毒或病毒样颗粒的“病毒载体”或具有多于一种载体类型的属性的“穿梭载体”。优选的载体是质粒。“宿主细胞”包括单个细胞或细胞培养物，其可以是或已经是外源核酸的受体。宿主细胞包括单个宿主细胞的后代，由于天然、偶然或有意的突变和/或改变，这些后代与原始亲本细胞(在形态或总dna互补方面)不必完全相同。宿主细胞包括体内或体外转染或感染有本发明核酸的细胞。
应理解，当核酸是dna时，rna序列中的“u”被dna中的“t”所替代。相似地，应理解当核酸是rna时，dna序列中的“t”被rna中的“u”所替代。
涉及核酸时，术语“互补”或“互补的”指沃森-克里克碱基配对。因此，c的互补物是g，g的互补物是c，a的互补物是t(或u)，t(或u)的互补物是a。也可使用诸如i(嘌呤肌苷)等碱基，例如与嘧啶(c或t)互补。
本发明的核酸可用于，例如：产生多肽；作为检测生物样品中的核酸的杂交探针；产生额外的核酸拷贝；产生核酶或反义寡核苷酸；作为单链dna引物或探针；或作为形成三链体的寡核苷酸。
本发明提供了生产本发明的核酸的方法，其中使用化学方式部分或完整地合成所述核酸。
本发明提供包含本发明核苷酸序列的载体(如克隆或表达载体)和用这种载体转化的宿主细胞。
本发明核酸扩增可以是定量扩增和/或实时扩增。
对于本发明的某些实施方式，核酸的长度优选为至少7个核苷酸(如8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、45、50、55、60、65、70、75、80、90、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、225、250、275、300个核苷酸或更长)。
对于本发明的某些实施方式，核酸长度优选至多为500个核苷酸(如450、400、350、300、250、200、150、140、130、120、110、100、90、80、75、70、65、60、55、50、45、40、39、38、37、36、35、34、33、32、31、30、29、28、27、26、25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15个核苷酸或更短)。
本发明的引物和探针以及用于杂交的其它核酸的长度优选为10-30个核苷酸(如10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、40或更多个核苷酸)。
菌株和变体
上文中通过参考现有命名(如“pa0328”)，参考“pse52”或“pse加显示克隆编号的天然编号，即pse52-1等”或各seqidno编号来定义各抗原。
下文表1将这三种命名/编号系统与现有的pao1公用编号关连。
pao1编号指绿脓假单胞菌菌株pao1的基因组，其以基因组分析的形式广泛描述于参考文献37中。
数据库中还给出各抗原的功能标注。
因此，可在来自pao1菌株的公共序列数据库中容易地发现这些抗原中任一个的示例性氨基酸和核苷酸序列，但本发明不限于来自pao1菌株的序列。可使用标准的搜索和比对技术在这些(或其他)基因组序列中鉴定来自pao1菌株的任何特定序列的同源物。而且，可使用的来自pao1菌株的已有序列来设计引物以扩增来自其他菌株的同源序列。因此，本发明不限于该菌株，而可包括来自绿脓假单胞菌的其他菌株的这类变体和同源物，以及非天然变体。通常，特定seqidno的合适变体包括其等位基因变体、其多态性形式、其同源物、其直向同源物、其旁系同源物、其突变体等。
因此，例如，与本文中的seqidno相比，本发明所用多肽可包括一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9个等)氨基酸取代，如保守取代(即用具有相关侧链的另一氨基酸取代某氨基酸)。遗传编码的氨基酸通常分为四类：(1)酸性，即天冬氨酸、谷氨酸；(2)碱性，即赖氨酸、精氨酸、组氨酸；(3)非极性，即丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、色氨酸；和(4)不带电的极性氨基酸，即甘氨酸、天冬酰胺、谷胺酰胺、胱氨酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸。有时将苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸一起归类为芳族氨基酸。通常，这些家族内部的单个氨基酸的取代不会对生物活性产生重要影响。相对于seqidno序列，该多肽还可包含一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9等)单个氨基酸的缺失。相对于seqidno序列，该多肽也可包含一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9个等)插入(如各1、2、3、4或5个氨基酸)。
类似地，本发明所用多肽可包含具有以下特征的氨基酸序列：
·与序列表公开的某一序列相同(即100％相同)；
·与序列表公开的某一序列具有序列相同性(如80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或更高)；
·与(a)或(b)的序列相比，含有1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个(或更多个)单个氨基酸改变(缺失、插入、取代)的序列，这些改变可以位于不同位置或连续出现；
·用逐对比对算法与序列表中的特定序列比对时，每个从n-末端向c-末端移动的x个氨基酸的窗口(使得在p(p＞x)个氨基酸上比对时，存在p-x 1个这种窗口)具有至少x·y个相同的比对氨基酸，其中：x选自20、25、30、35、40、45、50、60、70、80、90、100、150、200；y选自0.50、0.60、0.70、0.75、0.80、0.85、0.90、0.91、0.92、0.93、0.94、0.95、0.96、0.97、0.98、0.99；如果x·y不是整数，则四舍五入成最近的整数。优选的成对比对算法是needleman-wunsch全局比对算法[52]，使用默认参数(如缺口开放罚分＝10.0，缺口延伸罚分＝0.5，使用eblosum62积分矩阵)。用emboss软件包中的needle工具能方便地实施这种算法[53]。
使用杂合多肽时，杂合体内的多个单个抗原(即单个-x-部分)可来自一种或多种菌株。例如，n＝2时，x2可来自与x1相同的菌株，或来自不同菌株。当n＝3时，这些菌株可以是(i)x1＝x2＝x3(ii)x1＝x2≠x3(iii)x1≠x2＝x3(iv)x1≠x2≠x3或(v)x1＝x3≠x2等。
在组(c)内，缺失或取代可在n末端和/或c末端，或者可以在两个末端之间。因此，截短是缺失的一个示例。截短可包括在n末端和/或c末端缺失多达40个(或更多个)氨基酸。n末端截短可移除前导肽，从而例如有利于在异源宿主中重组表达。c末端截短可移除锚定序列，从而例如有利于在异源宿主中重组表达。
通常，当抗原包含与来自序列表的完整绿脓假单胞菌序列不同的序列时(例如，当它包含序列相同性<100％的序列或包含其片段时)，在各种单独情况下，优选地，该抗原可引发抗体，该抗体识别相应的完整绿脓假单胞菌序列。
突变细菌
本发明也提供敲除了来自本发明各种抗原组的一种或多种抗原的绿脓假单胞菌细菌(参见参考文献46)。生产敲除细菌的技术是熟知的，且已报道敲除来自绿脓假单胞菌菌株的基因，即参考文献54中。敲除突变可位于基因的编码区，或者可位于转录控制区内(如启动子内)。敲除突变会将编码抗原的mrna水平降低至野生型细菌产量水平的＜1％，优选降低至＜0.5％，更优选降低至＜0.1％，最优选降低至0％。
本发明还提供其中来自本发明各种抗原组的一种或多种抗原具有抑制其活性的突变的绿脓假单胞菌。编码该抗原的基因将具有改变所编码氨基酸序列的突变。突变可包括缺失、取代和/或插入，其中任何一种均可涉及一个或多个氨基酸。
本发明还提供了过表达本发明的多肽的细菌如绿脓假单胞菌细菌。
本发明还提供了组成型表达本发明的多肽的细菌如绿脓假单胞菌细菌。本发明还提供包含本发明抗原编码基因的大肠杆菌，其中所述基因在诱导型启动子的控制下。
突变细菌特别适用于制备包含可被用作免疫原的绿脓假单胞菌抗原(如本发明的抗原)的细菌外膜囊泡[55-57]。
免疫原性组合物和药物
本发明免疫原性组合物可用作疫苗。本发明疫苗可以是预防性(即预防感染)或治疗性(即治疗感染)疫苗，但一般是预防性疫苗。
因此，组合物可以是药学上可接受的。除抗原外，它们通常还包含其它组分，例如它们一般包含一种或多种药物载体和/或赋形剂。
组合物通常以水性形式给予哺乳动物。然而在给药前，该组合物可以是非水性形式。例如，虽然一些疫苗制备成水性形式然后以水性形式填装、分配和给药，但其他疫苗在制备过程中冻干，并在使用时重建成水性形式。因此，本发明组合物可以是经干燥的，例如冻干制剂。
该组合物可含有防腐剂，如硫柳汞或2-苯氧乙醇。然而，该疫苗优选应基本不含(即含有小于5μg/m1)含汞物质，如不含硫柳汞。更优选无汞的疫苗。特别优选不含防腐剂的疫苗。
为了提高热稳定性，组合物可包含温度保护剂。这种试剂的更多详情如下所述。
为了控制张力，优选包含生理盐(如钠盐)。优选氯化钠(nacl)，其浓度可以是1至20mg/ml，例如约10±2mg/mlnacl。可以存在的其它盐，包括氯化钾、磷酸二氢钾、无水合磷酸氢二钠、氯化镁、氯化钙等。
组合物的渗透压通常为200mosm/kg-400mosm/kg，优选为240-360mosm/kg，更优选为290-310mosm/kg。
组合物可含有一种或多种缓冲剂。典型的缓冲剂包括：磷酸盐缓冲剂；tris缓冲剂；硼酸盐缓冲剂；琥珀酸盐缓冲剂；组氨酸缓冲剂(尤其是含氢氧化铝佐剂时)；或柠檬酸盐缓冲剂。包含的缓冲剂的浓度一般为5至20mm的范围。
组合物的ph通常为5.0至8.1，更常为6.0至8.0，例如6.5至7.5，或者7.0至7.8。
组合物优选是无菌的。该组合物优选是无热原的，如每剂量含有小于1eu(内毒素单位，标准量度)，优选每剂量小于0.1eu。该组合物优选不含谷蛋白。
所述组合物可含有用于一次免疫的物质，或者可含有用于多次免疫的物质(即‘多剂量’药盒)。多剂量配置优选含有防腐剂。作为多剂量组合物中包含防腐剂的替代方案(或补充方案)，该组合物可包含在装有无菌接头以取出物质的容器中。
人疫苗的给药剂量体积一般为约0.5ml，但可将一半剂量(即约0.25ml)给予儿童。
本发明的免疫原性组合物也可包含一种或多种免疫调节剂。优选地，一种或多种免疫调节剂包括一种或多种佐剂。佐剂可包括th1佐剂和/或th2佐剂，或tlr7激动剂，详述见下。
因此，本发明提供一种包含以下组合的免疫原性组合物：
(1)一种或多种选自第一、第二和其他抗原组(如上文所定义)的抗原；以及
(2)佐剂，如氢氧化铝佐剂(例如，一种或多种抗原可吸附于氢氧化铝)。
例如，本发明提供了一种免疫原性组合物，其包含sta006抗原和佐剂(如氢氧化铝佐剂)的组合。类似地，本发明提供了一种免疫原性组合物，其包含sta011抗原和佐剂(如氢氧化铝佐剂)的组合。理想情况下，例如使用组氨酸缓冲液缓冲这些组合物。
可用于本发明组合物的佐剂包括但不限于：
a.含矿物质的组合物
适用作本发明佐剂的含有矿物质的组合物包括矿物盐，例如铝盐和钙盐(或其混合物)。钙盐包括磷酸钙(如参考文献58公开的“cap”颗粒)。铝盐包括氢氧化铝、磷酸铝、硫酸铝等，所述盐取任何合适形式(如凝胶、晶体、无定形态等)。优选吸附于这些盐(例如所有抗原可被吸附)。也可将含有矿物质的组合物制成金属盐的颗粒[59]。
可采用称为氢氧化铝和磷酸铝的佐剂。本发明可采用通常用作佐剂的任何“氢氧化物”或“磷酸盐”佐剂。称为“氢氧化铝”的佐剂一般是羟基氧化铝盐(通常至少部分为晶体)。称为″磷酸铝″的佐剂一般是羟基磷酸铝，也常常含有少量硫酸盐(即羟基磷酸硫酸铝)。其可通过沉淀获得，沉淀期间的反应条件和浓度影响磷酸根取代所述盐中羟基的程度。
氢氧化铝佐剂呈典型的纤维形态(例如电子透射显微照片所见的)。氢氧化铝佐剂的pi通常约11，即在生理ph下佐剂本身具有表面正电荷。据报道，ph＝7.4时氢氧化铝佐剂的吸附容量为1.8-2.6毫克蛋白质/毫克a1 。
磷酸铝佐剂的po4/al摩尔比通常为0.3-1.2，优选0.8-1.2，更优选0.95 0.1。磷酸铝通常是无定形的，羟基磷酸盐尤其如此。典型的佐剂是po4/al摩尔比为0.84-0.92的无定形羟基磷酸铝，包含0.6mgal3 /ml。磷酸铝通常是颗粒(如在透射电子显微镜照片上观察到的板状形态)。抗原吸附后颗粒直径一般是0.5-20μm(如约5-10μm)。据报道，ph7.4时磷酸铝佐剂的吸附容量为0.7-1.5mg蛋白质/mgal 。
磷酸铝的零电点(pzc)与磷酸根取代羟基的程度逆相关，且这种取代程度可根据用于通过沉淀制备盐的反应条件和反应物浓度而变化。也通过改变溶液中游离磷酸根离子的浓度(更多磷酸根＝更酸性pzc)或加入缓冲剂如组氨酸缓冲剂(使pzc碱性更强)来改变pzc。本发明所用的磷酸铝的pzc通常为4.0至7.0，更优选为5.0至6.5，例如约为5.7。
用于制备本发明组合物的铝盐悬浮液可以但不必定含有缓冲剂(如磷酸盐或组氨酸或tris缓冲剂)。优选所述悬浮液是无菌且无热原的。悬浮液可含有游离的水性磷酸根离子，如存在浓度为1.0-20mm，优选5-15mm，更优选约10mm。所述悬浮液也可含有氯化钠。
本发明可使用氢氧化铝和磷酸铝的混合物。在这种情况下，磷酸铝多于氢氧化铝，例如重量比为至少2∶1，例如，大于等于5∶1、大于等于6∶1、大于等于7∶1、大于等于8∶1、大于等于9∶1等。
给予患者的组合物中a1 的浓度优选小于10mg/ml，例如小于等于5mg/ml、小于等于4mg/ml、小于等于3mg/ml、小于等于2mg/ml、小于等于1mg/ml等。优选的范围是0.3至1mg/ml。优选最大值0.85mg/剂量。
b.油乳液
适合用作本发明佐剂的油乳液组合物包含角鲨烯-水乳液，如mf59[参考文献63的第10章；也参见参考文献60](5％角鲨烯、0.5％吐温80和0.5％司盘85，用微流化床配制成亚微米颗粒)。也可以使用完全弗氏佐剂(cfa)和不完全弗氏佐剂(ifa)。
已知各种水包油乳液，它们通常包括至少一种油和至少一种表面活性剂，所述油和表面活性剂是可生物降解的(可代谢的)和生物相容的。乳液中的油滴直径通常小于5μm，理想情况下具有亚微米直径，通过微流化床实现这种小尺寸以提供稳定的乳液。优选尺寸小于220nm的液滴，因为其可进行过滤灭菌。
所述乳液可以包含如动物(如鱼)或植物来源的油。植物油的来源包括坚果、种籽和谷物。最常见的坚果油的示例有花生油、大豆油、椰子油和橄榄油。也可使用例如从霍霍巴豆中得到的霍霍巴油。种籽油包括红花油、棉花籽油、葵花籽油、芝麻籽油等。在谷物油中，最常见的是玉米油，但也可以使用其它谷类的油，如小麦、燕麦、黑麦、稻、画眉草、黑小麦等。甘油和1，2-丙二醇的6-10碳脂肪酸酯虽然不天然存在于种籽油中，但可从坚果和种籽油开始，通过水解、分离和酯化合适物质来制备。来源于哺乳动物乳汁的脂肪和油类是可代谢的，因此可以用于实施本发明。获得动物来源的纯油所必需的分离、纯化、皂化和其它方法的过程是本领域中熟知的。大多数鱼类含有容易回收的可代谢油。例如，可用于本文的鱼油的几种示例有鳕鱼肝油、鲨鱼肝油和鲸油(诸如鲸蜡)。通过生化途径以5-碳异戊二烯单位合成许多支链油，其总称为萜类。鲨鱼肝油含有称为角鲨烯的支链不饱和萜类化合物，2，6，10，15，19,23-六甲基-2，6，10，14，18,22-二十四碳六烯，其是本文特别优选的。角鲨烯的饱和类似物角鲨烷也是优选的油。包括角鲨烯和角鲨烷在内的鱼油易于从市售来源获得，或可以通过本领域已知的方法获得。其它优选的油是生育酚(参见下文)。可以使用油的混合物。
表面活性剂可以按其“hlb”(亲水/亲脂平衡)分类。本发明优选的表面活性剂的hlb值为至少10，优选至少15，更优选至少16。可用于本发明的表面活性剂包括但不限于：聚氧乙烯脱水山梨糖醇酯表面活性剂(通常称为吐温)，特别是聚山梨酯20和聚山梨酯80；以商品名dowfaxtm出售的环氧乙烷(eo)、环氧丙烷(po)和/或环氧丁烷(bo)的共聚物，如直链ep/po嵌段共聚物；重复的乙氧基(氧-1，2-乙二基)数量不同的辛苯聚醇，特别感兴趣的是辛苯聚醇9(曲通x-100，或叔辛基苯氧基聚乙氧基乙醇)；(辛基苯氧基)聚乙氧基乙醇(igepalca-630/np-40)；磷脂，如磷脂酰胆碱(卵磷脂)；壬酚乙醇酯，如tergitoltmnp系列；衍生自月桂醇、鲸蜡醇、硬脂醇和油醇的聚氧乙烯脂肪醚(称为苄泽(brij)表面活性剂)，如三甘醇单月桂基醚(苄泽30)；以及脱水山梨糖醇酯(通常称为司盘(span))，如脱水山梨糖醇三油酸酯(司盘85)和脱水山梨糖醇单月桂酸酯。优选非离子型表面活性剂。乳液中包含的表面活性剂优选吐温80(聚氧乙烯去水山梨糖醇单油酸酯)、司盘85(去水山梨糖醇三油酸酯)、卵磷脂和曲通x-100。
可使用表面活性剂的混合物，如吐温80/司盘85混合物。聚氧乙烯去水山梨糖醇酯(如聚氧乙烯去水山梨糖醇单油酸酯(吐温80))和辛苯聚醇(如叔辛基苯氧基聚乙氧基乙醇(曲通x-100))的组合也是适用的。另一种有用的组合包括月桂醇聚醚-9加聚氧乙烯山梨糖醇酯和/或辛苯聚醇。
优选的表面活性剂含量(重量百分比)为：聚氧乙烯去水山梨糖醇酯(如吐温80)0.01-1％，特别是约0.1％；辛基-或壬基苯氧基聚氧乙醇(如曲通x-100或曲通系列的其它去污剂)0.001-0.1％，特别是0.005-0.02％；聚氧乙烯醚(如月桂醇聚醚9)0.1-20％，优选0.1-10％，特别是0.1-1％或约0.5％。
优选乳液佐剂的平均液滴大小为小于1μm，例如小于等于750nm、小于等于500nm、小于等于400nm、小于等于300nm、小于等于250nm、小于等于220nm、小于等于200nm或更小。可通过某些技术(如微流化)方便地获得这些液滴尺寸。
本发明所用的具体水包油乳剂佐剂包括但不限于：
·角鲨烯、吐温80和司盘85的亚微米乳液。所述乳液的体积组成可以是约5％角鲨烯、约0.5％聚山梨酯80和约0.5％司盘85。以重量计，这些比例为4.3％角鲨烯、0.5％聚山梨酯80和0.48％司盘85。这种佐剂称为‘mf59’[61-]，参考文献63的第10章和参考文献64的第12章有更详细的描述。mf59乳液优选包含柠檬酸根离子，例如10mm柠檬酸钠缓冲液。
·角鲨烯、生育酚和聚山梨酯80(吐温80)的乳液。该乳液可包含磷酸盐缓冲盐水。其还可包含司盘85(例如1％)和/或卵磷脂。这些乳液可含有2-10％角鲨烯、2-10％生育酚和0.3-3％吐温80，角鲨烯：生育酚的重量比优选小于等于1，因为这可提供更稳定的乳液。角鲨烯和吐温80的体积比可以约为5∶2，或者重量比约为11∶5。可通过下述方法制备该乳液：将吐温80溶解于pbs得到2％溶液，然后将90ml该溶液与5gdl-α-生育酚和5ml鲨烯的混合物混合，然后微流体化该混合物。所得乳液可含有如平均直径为100-250nm，优选约180nm的亚微米油滴。所述乳液也可含有3-脱-o-酰化单磷酰脂质a(3d-mpl)。此种类型的另一种有用乳液可包含(每人剂量)0.5-10mg角鲨烯、0.5-11mg生育酚和0.1-4mg聚山梨酯80[65]。
·角鲨烯、生育酚和曲通去污剂(如曲通x-100)的乳液。该乳液也可包含3d-mpl(见下文)。该乳液可包含磷酸盐缓冲液。
·含有聚山梨酯(如聚山梨酯80)、曲通去污剂(如曲通x-100)和生育酚(如琥珀酸α-生育酚)的乳液。该乳液可包含这三种组分，其质量比约为75∶11∶10(如750μg/ml聚山梨酯80、110μg/ml曲通x-100和100μg/ml琥珀酸α-生育酚)，且这些浓度应包括抗原中这些组分的任意贡献。该乳液还可包含角鲨烯。该乳液也可包含3d-mpl(见下文)。水相可包含磷酸盐缓冲液。
·角鲨烷、聚山梨酯80和泊洛沙姆401(“pluronictml121”)的乳液。该乳液可用ph7.4的磷酸盐缓冲盐水配制。该乳液是一种有用的胞壁酰二肽递送载体，已与苏氨酰基-mdp一起用于“saf-i”佐剂中[66](0.05-1％thr-mdp、5％角鲨烷、2.5％pluronicl121和0.2％聚山梨酸酯80)。也可不与thr-mdp一起使用，例如在“af”佐剂中[67](5％角鲨烷、1.25％pluronicl121和0.2％
聚山梨酸酯80)。优选微流体化。
·含有角鲨烯、水性溶剂、聚氧乙烯烷基醚亲水性非离子型表面活性剂(如聚氧乙烯(12)十六十八醚)和疏水性非离子型表面活性剂(如去水山梨糖醇酯或二缩甘露醇酯，如去水山梨糖醇单油酸酯或“司盘80”)的乳液。所述乳液优选为热可逆的和/或其中至少90％油滴(以体积计)小于200nm[68]。该乳液也可含有一种或多种以下物质：糖醇、低温保护剂(例如，糖，如十二烷基麦芽苷和/或蔗糖)和/或烷基糖苷。所述乳液可包含tlr4激动剂[69]。可将这类乳液冻干。
·角鲨烯、泊洛沙姆-105和abil-care的乳液[70]。含佐剂疫苗中这些组分的终浓度(重量)是5％角鲨烯、4％泊洛沙姆-105(普流罗尼克(pluronic)多元醇)和2％abil-care85(双-peg/ppg-16/16peg/ppg-16/16二甲硅油；辛酸/癸酸甘油三酯)。
·含有0.5-50％油、0.1-10％磷脂和0.05-5％非离子型表面活性剂的乳液。如参考文献71所述，优选的磷脂组分是磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰肌醇、磷脂酰甘油、磷脂酸、鞘磷脂和心磷脂。优选亚微米液滴尺寸。
·不可代谢油(如轻质矿物油)和至少一种表面活性剂(如卵磷脂、吐温80或司盘80)的亚微米水包油乳液。可包含添加剂，例如quila皂苷、胆固醇、皂苷-亲脂体偶联物(如通过葡糖醛酸的羧基将脂族胺加到脱酰基皂苷上而产生的gpi-0100，如参考文献72所述)、二甲基二-十八烷基溴化铵和/或n，n-二-十八烷基-n，n-双(2-羟乙基)丙二胺。
·皂苷(如quila或qs21)和固醇(如胆固醇)结合成螺旋胶束的乳液[73]。
·包含矿物油、非离子亲脂性乙氧基化脂肪醇和非离子亲水性表面活性剂(例如乙氧基化脂肪醇和/或聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物)的乳液[74]。
在一些实施方式中，可在递送时临时将乳液与抗原混合，因此所述佐剂和抗原可单独地保存在包装或分销的疫苗中，以便在使用时配制成最终制剂。在其它实施方式中，在生产过程中将乳液与抗原混合，因此所述组合物以液体佐剂形式包装。该抗原通常采用水性形式，从而最终通过混合两种液体来制备疫苗。两种液体的混合体积比可变(例如5∶1至1∶5)，但通常为约1∶1。在上述具体乳液说明中给出组分浓度时，这些浓度通常用于非稀释组合物，因此所述浓度在混合抗原溶液后会降低。
当组合物包含生育酚时，可采用α、13、γ、δ、ε或ξ生育酚中的任何一种，但优选α-生育酚。生育酚可取多种形式，例如不同的盐和/或异构体。盐包括有机盐，例如琥珀酸盐、乙酸盐、烟酸盐等。可同时采用d-α-生育酚和dl-α-生育酚。用于老年患者(如年龄大于60岁或更大的患者)的疫苗中宜包含生育酚，因为据报道维生素e在此患者群体中对免疫应答有正面作用[75]。它们也具有抗氧化特性，这种特性有助于稳定该乳液[76]。优选的α-生育酚是dl-α-生育酚，此种生育酚的优选盐是琥珀酸盐。发现琥珀酸盐在体内能与tnf相关配体协作。
c.皂苷制剂
皂苷制剂也可以用作本发明的佐剂。皂苷是在许多植物物种的树皮、叶、茎干、根甚至花中发现的甾醇糖苷和三萜糖苷的异质群体。已广泛研究了作为佐剂的来自皂树(quillaiasaponariamolina)树皮的皂苷。皂苷也可市售获自丽花菝葜(smilaxornata)(墨西哥菝葜)、满天星(gypsophillapaniculata)(婚纱花)和肥皂草(saponariaofficianalis)(皂根)。皂苷佐剂制剂包括纯化制剂如qs21，以及脂质制剂如iscom。qs21以stimulontm出售。
已采用hplc和rp-hplc纯化皂苷组合物。已鉴定了用这些技术纯化的特定纯化组分，包括qs7、qs17、qs18、qs21、qh-a、qh-b和qh-c。所述皂苷优选qs21。制备qs21的方法参见参考文献77。皂苷制剂也可以包含甾醇，如胆固醇[78]。
皂苷和胆固醇的组合可用于形成称为免疫刺激复合物(iscom)的独特颗粒[参考文献63的第23章]。iscom通常还包含磷脂，如磷脂酰乙醇胺或磷脂酰胆碱。任意已知的皂苷均可用于iscom中。iscom优选包含quila、qha和qhc中的一种或多种。参考文献78-中进一步描述了iscom。任选地，iscom可以不含额外去污剂[80]。
开发基于皂苷的佐剂的综述可参见参考文献81。
e.细菌或微生物衍生物
适用于本发明的佐剂包括细菌或微生物衍生物，如肠细菌的脂多糖(lps)的无毒衍生物、脂质a衍生物、免疫刺激性寡核苷酸和adp-核糖基化毒素及其脱毒衍生物。
lps的无毒衍生物包括单磷酰脂质a(mpl)和3-o-脱酰基mpl(3dmpl)。3dmpl是3脱-o-酰基单磷酰脂质a与4、5或6条酰化链的混合物。3脱-o-酰基单磷酰脂质a的优选“小颗粒”形式见参考文献82中所述。3dmpl的这种“小颗粒”小到足以在过滤除菌时通过0.22μm膜[82]。其它无毒lps衍生物包括单磷酰脂质a模拟物，如氨烷基氨基葡萄糖苷磷酸盐衍生物，例如rc529[83]。
脂质a衍生物包括大肠杆菌的脂质a衍生物，如om-174。例如参考文献84和85中描述了om-174。
适用作本发明佐剂的免疫刺激性寡核苷酸包括含cpg基序的核苷酸序列(含有通过磷酸键与鸟苷连接的非甲基化胞嘧啶的二核苷酸序列)。含回文或聚(dg)序列的双链rna和寡核苷酸也显示具有免疫刺激作用。
cpg可以包含核苷酸修饰/类似物如硫代磷酸酯修饰，且可以是双链或单链。参考文献86和87公开了可能的类似物取代，例如用2′-脱氧-7-脱氮鸟苷取代鸟苷。参考文献88中进一步讨论了cpg寡核苷酸的佐剂作用。
所述cpg序列可针对tlr9，例如基序gtcgtt或ttcgtt[89]。cpg序列可特异性诱导th1免疫反应，如cpg-aodn，或更特异地诱导b细胞反应，如cpg-bodn。参考文献90-中讨论了cpg-a和cpg-bodn。优选地，cpg为cpg-aodn。
优选地，构建cpg寡核苷酸从而使5’末端可被受体识别。任选将两个cpg寡核苷酸序列的3’端相连接形成“免疫聚体”。参见例如参考文献92-。
有用的cpg佐剂是cpg7909，也称为promunetm(科雷制药集团公司(coleypharmaceuticalgroup，inc.))。另一种是cpg1826。作为替代或补充，为了使用cpg序列，可使用tpg序列[94]，这些寡核苷酸可不含非甲基化cpg基序。免疫刺激性寡核苷酸可能富含嘧啶。例如，它可能含有一个以上的连续胸腺嘧啶核苷酸(例如，参考文献94所公开的tttt)，和/或它的核苷酸组成中可能含有＞25％胸腺嘧啶(例如＞35％、＞40％、＞50％、＞60％、＞80％等)。例如，它可能含有一个以上的连续胞嘧啶核苷酸(例如，参考文献94所公开的cccc)，和/或它的核苷酸组成中可能含有＞25％胞嘧啶(例如＞35％、＞40％、＞50％、＞60％、＞80％等)。这些寡核苷酸可不含未甲基化的cpg基序。免疫刺激性寡核苷酸通常包含至少20个核苷酸。其可包含少于100个核苷酸。
基于免疫刺激性寡核苷酸的特别有用的佐剂被称为ic-31tm[95]。因此，本发明使用的佐剂可以包含(i)和(ii)的混合物：(i)含有至少一个(优选多个)cpi基序(即胞嘧啶与肌苷相连形成二核苷酸)的寡核苷酸(例如15-40个核苷酸)，和(ii)聚阳离子聚合物，如含有至少一个(优选多个)lys-arg-lys三肽序列的寡肽(如5-20个氨基酸)。所述寡核苷酸可以是包含26-聚体序列5′-(ic)31-3′的脱氧核苷酸。
细菌adp-核糖基化毒素及其脱毒衍生物可以用作本发明的佐剂。优选所述蛋白衍生自大肠杆菌(大肠杆菌不耐热肠毒素“lt”)、霍乱菌(“ct”)或百日咳菌(“pt”)。参考文献96中描述了将脱毒的adp-核糖基化毒素用作粘膜佐剂，参考文献97中描述了将其用作胃肠道外佐剂。所述毒素或类毒素优选全毒素形式，包含a和b亚基。a亚基优选含有脱毒突变；b亚基优选不突变。佐剂优选脱毒的lt突变体如lt-k63、lt-r72和lt-g192。参考文献98-101中描述了将adp-核糖基化毒素及其脱毒衍生物，特别是lt-k63和lt-r72用作佐剂。一种有用的ct突变体是ct-e29h[102]。优选基于参考文献103中提出的adp-核糖基化毒素的a和b亚单位的比对对氨基酸取代进行编号，该参考文献具体地通过引用全文纳入本文。
f.人免疫调节剂
适合用作本发明佐剂的人免疫调节剂包括细胞因子，如白介素(如il-1、il-2、il-4、il-5、il-6、il-7、il-12[104]等)，干扰素(如干扰素-γ)、巨噬细胞集落刺激因子和肿瘤坏死因子。优选的免疫调节剂是il-12。
g.生物粘着剂和粘膜粘着剂
生物粘着剂和粘膜粘着剂也可以用作本发明的佐剂。合适的生物粘着剂包括酯化透明质酸微球[105]或粘膜粘着剂，如聚(丙烯酸)交联衍生物、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、多糖和羧甲基纤维素。壳聚糖及其衍生物也可以用作本发明的佐剂[106]。
h.微粒
微粒也可以用作本发明的佐剂。微粒(即直径～100nm至～150μm，更优选～200nm至～30μm，最优选～500nm至～10μm的颗粒)由生物可降解的无毒材料(例如聚(α-羟酸)、聚羟基丁酸、聚原酸酯、聚酐、聚己内酯等)形成，优选聚(丙交酯-乙交酯共聚物)，并任选经处理而具有带负电荷的表面(例如用sds处理)或带正电荷的表面(例如用阳离子去污剂处理，如ctab)。
i.脂质体
适合用作佐剂的脂质体制剂的示例参见参考文献107-。
j.聚氧乙烯醚和聚氧乙烯酯制剂
适合用于本发明的佐剂包括聚氧乙烯醚和聚氧乙烯酯[109]。该类制剂还包括聚氧乙烯脱水山梨糖醇酯表面活性剂和辛苯糖醇的组合[110]，以及聚氧乙烯烷基醚或酯表面活性剂和至少一种另外的非离子表面活性剂如辛苯糖醇的组合[111]。优选的聚氧乙烯醚选自：聚氧乙烯-9-月桂醚(月桂醇聚醚9)、聚氧乙烯-9-硬脂醚、聚氧乙烯-8-硬脂醚、聚氧乙烯-4-月桂醚、聚氧乙烯-35-月桂醚和聚氧乙烯-23-月桂醚。
k.磷腈
可使用磷腈，如参考文献112和113中所述的聚[二(羧基苯氧基)磷腈](poly[di(carboxylatophenoxy)phosphazene](“pcpp”)。
l.胞壁酰肽
适用作本发明佐剂的胞壁酰肽的示例包括n-乙酰基-胞壁酰-l-苏氨酰-d-异谷酰胺(thr-mdp)、n-乙酰基-正胞壁酰-l-丙氨酰-d-异谷酰胺(正-mdp)和n-乙酰胞壁酰-l-丙氨酰-d-异谷氨酰胺酰-l-丙氨酸-2-(1’-2’-二棕榈酰-sn-甘油-3-羟基磷酰氧基)-乙胺mtp-pe)。
m.咪唑并喹诺酮化合物。
适合用作本发明佐剂的咪唑并喹诺酮化合物的示例包括咪喹莫特(″r-837″)[114]，瑞喹莫德(“r-848”)[115]，以及它们的类似物和盐(如盐酸盐)。
n取代的脲
用作佐剂的取代的脲包括式i、ii或iii的化合物，或其盐：
如参考文献116所述，例如‘er803058’、‘er803732’、‘er804053’、er804058’、‘er804059’、‘er804442’、‘er804680’、‘er804764’、er803022或‘er804057’，如：
o.其他佐剂
可用于本发明的其他佐剂包括：
·氨烷基氨基葡糖苷磷酸衍生物，如rc529[117]。
·缩氨基硫脲化合物，如参考文献118所述的化合物。参考文献118中也描述了配制、制备和筛选活性化合物的方法。缩氨基硫脲在刺激人外周血单核细胞产生细胞因子如tnf-α方面特别有效。
·色胺酮化合物，如参考文献119所述的化合物。参考文献119中也描述了配制、制备和筛选活性化合物的方法。缩氨基硫脲在刺激人外周血单核细胞产生细胞因子如tnf-α方面特别有效。
·核苷类似物，如：(a)埃索他宾(isatorabine)(ana-245；7-硫杂-8-氧代鸟苷)：
及其前药；(b)ana975；(c)ana-025-1；(d)ana380；(e)参考文献120所公开的化合物洛索立宾(loxoribine)(7-烯丙基-8-氧代鸟苷)[122]。
·参考文献123公开化合物，包括：酰基哌嗪化合物、吲哚二酮化合物、四氢异喹啉(thiq)化合物、苯并环二酮化合物、氨基氮杂乙烯基化合物、氨基苯并咪唑喹啉酮(abiq)化合物[124]，水合酞酰胺(hydrapthalamide)化合物、苯并苯基酮化合物、异
·包含与含磷酸无环主链连接的脂质的化合物，如tlr4拮抗剂e5564[127]：
·聚氧
·甲基肌苷5′-单磷酸酯(″mimp″)[129]。
·多聚羟化吡咯双烷类化合物[130]，如下式化合物或其药学上可接受的盐或衍生物：
其中r选自：氢，直链或支链、未取代或取代、饱和或不饱和的酰基、烷基(如环烷基)、烯基、炔基和芳基。示例包括但不限于：木麻黄(casuarine)、木麻黄-6-α-d-吡喃葡萄糖、3-表-木麻黄、7-表-木麻黄、3，7-二表-木麻黄等。
·cd1配体，如α-糖基神经酰胺[131-](如α-半乳糖基神经酰胺)、含植物鞘氨醇的α-糖基神经酰胺、och、krn7000[(2s，3s，4r)-1-o-(α-d-吡喃半乳糖基)-2-(n-二十六烷酰氨基)-1，3，4-十八烷三醇、crony-101、3″-o-硫代-半乳糖基神经酰胺等等。
·γ菊糖[133]或其衍生物，如阿尔加穆林(algammulin)。
佐剂组合
本发明也还包含以上鉴定的一种或多种佐剂的组合。例如，可将以下佐剂组合物用于本发明：(1)皂苷和水包油乳剂[134]；(2)皂苷(如qs21) 无毒lps衍生物(如3dmpl)；(3)皂苷(如qs21) 无毒lps衍生物(如3dmpl) 胆固醇；(4)皂苷(如qs21) 3dmpl il12(可选 固醇)；(5)3dmpl与(例如)qs21和/或水包油乳液的组合[135]；(6)saf，含有10％角鲨烯、0.4％吐温80tm、5％普朗尼克-嵌段聚合物l121和thr-mdp，或微流体化成为亚微米乳液或涡旋振荡产生粒度较大的乳液。(7)ribitm佐剂系统(ras)(ri公司(ribiimmunochem))，含有2％角鲨烯、0.2％吐温80和一种或多种细菌细胞壁组分，所述组分选自单磷酰脂质a(mpl)、海藻糖二霉菌酸酯(tdm)和细胞壁骨架(cws)，优选mpl cws(detoxtm)；和(8)一种或多种矿物盐(如铝盐) lps的无毒衍生物(如3dmpl)。
特别优选使用氢氧化铝和/或磷酸铝佐剂，抗原通常吸附于这些盐。磷酸钙是另一种优选佐剂。其它优选的佐剂组合包括th1和th2佐剂的组合，如cpg和明矾或雷西莫特和明矾。可使用磷酸铝与3dmpl的组合。
本发明的组合物可引发细胞介导的免疫应答和体液免疫应答。该免疫应答优选诱导能在接触假单胞菌时迅速作出反应的持续性(如中和性)抗体和细胞介导的免疫。
通常认为两种t细胞类型(cd4和cd8细胞)是启动和/或增强细胞介导免疫和体液免疫所必需的。cd8t细胞可表达cd8共受体，通常称为细胞毒性t淋巴细胞(ctl)。cd8t细胞能够识别mhci型分子上展示的抗原或与之相互作用。
cd4t细胞可表达cd4共受体，并通常称为t辅助细胞。cd4t细胞能够识别结合mhcii型分子的抗原性肽。与mhcii型分子相互作用后，cd4细胞可分泌诸如细胞因子等因子。这些分泌的细胞因子可激活b细胞、细胞毒性t细胞、巨噬细胞和参与免疫应答的其它细胞。辅助t细胞或cd4 细胞可进一步分为两个功能不同的亚组：即细胞因子和效应功能不同的th1表型和th2表型。
活化的th1细胞能增强细胞免疫(包括抗原特异性ctl生产增加)，因而对响应胞内感染具有特定价值。活化的th1细胞可分泌il-2、ifn-γ和tnf-β中的一种或多种。th1免疫应答可通过激活巨噬细胞、nk(自然杀伤)细胞和cd8细胞毒性t细胞(ctl)导致局部炎症反应。通过用il-12刺激b和t细胞的生长，th1免疫应答也可用于放大免疫应答。th1刺激的b细胞可分泌igg2a。
活化的th2细胞提高抗体生成，因此对响应胞外感染具有价值。活化的th2细胞可分泌il-4、il-5、il-6和il-10中的一种或多种。th2免疫应答可引起生成igg1、ige、iga和记忆b细胞来用于未来的保护。
增强的免疫应答可包括增强的th1免疫应答和th2免疫应答中的一种或多种。
th1免疫反应可包括以下一种或多种：ctl增加，与th1免疫反应相关的一种或多种细胞因子(如il-2、ifn-γ和tnf-β)增加，活化巨噬细胞增加，nk活性增加，或者igg2a生成增加。增强的th1免疫应答优选包括igg2a生成增加。
可使用th1佐剂引发th1免疫应答。相对于不用佐剂的抗原免疫，th1佐剂通常引起igg2a生成水平增加。适用于本发明的th1佐剂可包括例如，皂苷制剂、病毒体和病毒样颗粒、肠细菌脂多糖(lps)的无毒衍生物、免疫刺激性寡核苷酸。免疫刺激性寡核苷酸，如含有cpg基序的寡核苷酸是本发明所用的优选th1佐剂。
th2免疫应答可包括以下一种或多种：与th2免疫应答相关的一种或多种细胞因子(如il-4，il-5，il-6和il-10)增加，或者igg1、ige、iga和记忆b细胞生成增加。增强的th2免疫应答优选包括igg1生成增加。
可使用th2佐剂引发th2免疫应答。相对于不用佐剂的抗原免疫，th2佐剂通常引起igg1生成水平增加。适用于本发明的th2佐剂包括例如，含矿物质组合物、油乳剂和adp-核糖基化毒素及其脱毒衍生物。含矿物质组合物如铝盐是本发明使用的优选th2佐剂。
本发明优选包括含th1佐剂和th2佐剂组合的组合物。这种组合物优选引起增强的th1和增强的th2反应，即igg1和igg2a的生成相对于不用佐剂的免疫均有增加。更优选地，相对于用单一佐剂的免疫(即，相对于只用th1佐剂的免疫或只用th2佐剂的免疫)，包含th1和th2佐剂组合的组合物引起th1增加和/或th2免疫反应增强。
该免疫应答可以是th1免疫应答和th2免疫应答之一或两种。免疫应答优选提供增强的th1反应和增强的th2反应之一或全部两种。
增强的免疫应答可以是全身免疫应答和粘膜免疫应答之一或全部两种。该免疫应答优选提供增强的全身免疫应答和增强的粘膜免疫应答之一或全部两种。优选粘膜免疫应答为th2免疫应答。粘膜免疫应答优选包括iga生成增加。
绿脓假单胞菌感染可影响机体的各个部分，因此可将本发明组合物制备成各种形式。例如，可将所述组合物制备为液体溶液或悬浮液形式的注射剂。也可制备适合在注射前溶解或悬浮于液体载剂的固体形式(如冻干的组合物或喷雾冻干的组合物)。该组合物可以制备用于局部给药，例如制成油膏、乳膏或粉末。该组合物可制备用于口服给药，如制成片剂或胶囊、制成喷雾剂或制成糖浆剂(可选调味)。该组合物可制备成采用细粉或喷雾以经肺部(例如通过吸入器)给药。所述组合物可制备为栓剂或子宫托。该组合物可以制备用于鼻部、耳部或眼部给药，例如作为滴剂。可将所述组合物设计为药盒的形式，从而在临对患者给予之前重建合并的组合物。此类药盒可包含一种或多种液体形式的抗原以及一种或多种冻干抗原。
组合物需临用前准备(例如，以冻干形式提供组分时)并以药盒形式存在时，该药盒可包括两个药瓶，或者可包括一个填充好的注射器和一个药瓶，注射器内容物用于在注射前重激活药瓶内容物。
用作疫苗的免疫原性组合物包含免疫有效量的抗原，以及需要的任何其它组分。“免疫学有效量”是指以单一剂量或一系列剂量的部分给予个体的对治疗或预防有效的量。该量取决于待治疗个体的健康和身体状况、年龄、待治疗个体的分类组(如非人灵长动物、灵长动物等)、个体的免疫系统合成抗体的能力、所需的保护程度、疫苗制剂、治疗医生对医学情况的评估和其它相关因素。预期该量将落入可通过常规试验测定的较宽范围内。组合物中包含一种以上抗原时，存在的两种抗原的剂量可以相同或不同。
如上所述，一种组合物可包含温度保护剂，此种组分可能在含佐剂组合物(特别是含有矿物质佐剂，如铝盐的组合物)中特别有用。如参考文献136所述，可将液体温度保护剂加入水性疫苗组合物中以降低其凝固点，例如将凝固点降低至0℃以下。因此该组合物可以储存于0℃以下但在其凝固点以上，以抑制热裂解。温度保护剂也允许在冷冻组合物的同时保护矿物盐佐剂在冻融后不发生团聚或沉降，还可在较高温度下(例如40℃以上)保护组合物。可混合初始的水性疫苗与液体温度保护剂使液体温度保护剂占最终混合物体积的1-80％。合适的温度保护剂应该是对人给药安全的、易于混溶/可溶于水并且不应破坏组合物中其它成分(如抗原和佐剂)。示例包括甘油、丙二醇和/或聚乙二醇(peg)。合适peg的平均分子量可为200-20,000da。在优选实施方式中，聚乙二醇的平均分子量可以约为300da(“peg-300”)。
本发明提供一种免疫原性组合物，其包含：(i)选自第一、第二、第三或第四抗原组的一种或多种抗原；和(ii)温度保护剂。形成该组合物可通过混合以下物质来形成：(i)包含选自第一、第二、第三或第四抗原组的一种或多种抗原的水性组合物，和(ii)温度保护剂。然后，该混合物可储存于例如0℃以下、0-20℃、20-35℃、35-55℃或更高温度。它可以液体或冻结形式储存。该混合物可以是冻干的混合物。或者，该组合物可通过混合以下组分形成：(i)包含选自第一、第二、第三或第四抗原组的一种或多种抗原的干燥组合物，和(ii)包含温度保护剂的液体组合物。因此，可利用组分(ii)重建组分(i)。
治疗方法和疫苗的给药
本发明还提供了引起哺乳动物免疫反应的方法，包括给予有效量的本发明组合物的步骤。该免疫应答优选为保护性免疫应答，并优选涉及抗体和/或细胞介导的免疫。所述方法可以产生加强应答。
本发明还提供联合用作药物从而例如在哺乳动物中产生免疫应答的至少两种本发明抗原。
本发明还提供至少两种本发明抗原在制备使哺乳动物产生免疫应答的药物中的应用。
通过这些应用和方法在哺乳动物中产生免疫应答，能保护该哺乳动物对抗绿脓假单胞菌感染，包括医院感染。更具体地，可保护哺乳动物对抗皮肤感染(包括烧伤、外伤和眼睛的那些感染，如参考文献137所示)、肺炎、脑膜炎和新生儿脑膜炎、骨髓炎、心内膜炎、假单胞菌毛囊炎、中毒性休克综合症和/或败血症和囊性纤维化。
本发明还提供了包含第一组分和第二组分的药盒，其中第一组分和第二组分均不是上文所述的本发明的组合物，但可将第一组分和第二组分组合以提供上文所述的本发明的组合物。所述药盒还可以包括含有下列一种或多种物质的第三组分：说明书、注射器或其它递送装置、佐剂或药学上可接受的制剂溶液。
本发明还提供了一种预填充本发明免疫原性组合物的递送装置。
所述哺乳动物优选人。当疫苗用于预防性用途时，人优选为儿童(如幼童或婴儿)或青少年；当疫苗用于治疗用途时，人优选为青少年或成人。旨在用于儿童的疫苗也可给予成年人，例如，以评估安全性、剂量、免疫原性等。可按照本发明进行免疫接种的其他哺乳动物是牛、狗、马和猪。
检测治疗性处理功效的一种方式包括在给予本发明组合物后监测绿脓假单胞菌感染。一种检查预防性治疗疗效的途径包括在给予组合物后监测针对本发明组合物中抗原的全身免疫应答(如监测igg1和igg2a产生水平)和/或粘膜免疫应答(如监测iga产生水平)。通常，在免疫后但在攻击前测定抗原特异性血清抗体应答，而在免疫后和攻击后测定抗原特异性粘膜抗体应答。
另一种评价本发明组合物免疫原性的方式是重组表达蛋白，用于通过免疫印迹和/或微阵列筛查患者血清或粘膜分泌物。蛋白和患者样品之间的阳性反应表明患者已经产生针对受试蛋白的免疫应答。该方法也可用于鉴定免疫显性抗原和/或抗原中的表位。
通过用疫苗组合物刺激绿脓假单胞菌感染动物模型(如豚鼠或小鼠)，可在体内测定疫苗组合物的效果。具体而言，有一种用于绿脓假单胞菌感染性疾病研究的有用的动物模型，其详细描述于标题为“功效测试”的章节中。致死感染模型观察经由气管内途径感染正常致死剂量的绿脓假单胞菌后存活的小鼠数量。不同抗原和不同抗原组合可对有效的疫苗的不同方面有贡献。
本发明的组合物通常直接给予患者。可通过胃肠道外注射(如皮下、腹膜内、静脉内、肌肉内或组织间隙)，或通过粘膜，如通过直肠、口腔(如片剂、喷雾)、阴道、局部、透皮或经皮、鼻内、眼、耳、肺或其它粘膜给药途径完成直接递送。
本发明可用于引发全身和/或粘膜免疫，优选引发增强的全身和/或粘膜免疫。
增强的全身和/或粘膜免疫优选表现为提高的th1和/或th2免疫应答。增强的免疫应答优选包括igg1和/或igg2a和/或iga生成增加。
th17细胞是一种最近描述的辅助t细胞系，其可增强抗细菌粘膜防御并能够潜在地介导保护性疫苗诱导的应答。参见参考文献138。
可通过单剂量方案或多剂量方案来进行给药。多剂量可用于初次免疫方案和/或加强免疫方案。在多剂量方案中，可通过相同或不同途径给予各剂量，例如采用胃肠外初次免疫和粘膜加强免疫、粘膜初次免疫和胃肠外加强免疫等。一般以至少1周(例如约2周、约3周、约4周、约6周、约8周、约10周、约12周、约16周等)的间隔给予多个剂量。
根据本发明制备的疫苗可用于治疗儿童和成人。因此，人患者可以小于1岁、1-5岁、5-15岁、15-55岁或至少55岁。接受疫苗的患者优选老年人(如大于等于50岁，大于等于60岁且优选大于等于65岁)、儿童(如小于等于5岁)、住院患者、保健护理人员、武装人员和军人、孕妇、慢性病人或免疫缺陷的患者。然而该疫苗不仅适用于这些人群，还可用于更广泛的群体。
本发明生产的疫苗可与其它疫苗基本同时给予患者(在健康护理专业人员或疫苗接种中心的同一用药咨询或就诊期间)，例如与流感疫苗、麻疹疫苗、腮腺炎疫苗、风疹疫苗、mmr疫苗、水痘疫苗、mmrv疫苗、白喉疫苗、破伤风疫苗、百日咳疫苗、dtp疫苗、偶联的b型流感嗜血杆菌疫苗、脊髓灰质炎病毒灭活疫苗、乙型肝炎病毒疫苗、脑膜炎球菌偶联疫苗(如四价a-c-w135-y疫苗)、呼吸道合胞病毒疫苗等基本同时给予。适用于共同给药的其他非假单胞菌疫苗可包含一种或多种抗原。
核酸免疫
上述免疫原性组合物包括来自绿脓假单胞菌的多肽抗原。然而，在所有情况下，可用编码这些多肽的核酸(通常是dna)替换多肽抗原，以得到基于核酸免疫的组合物、方法和用途。目前核酸免疫是一个成熟的领域。
编码免疫原的核酸在递送给病人后体内表达，然后所表达的免疫原刺激免疫系统。活性成分通常采用核酸载体形式，其包含：(i)启动子；(ii)可操作连接于启动子的免疫原编码序列；以及任选的(iii)选择标记物。优选的载体还可包含(iv)复制起点；以及(v)位于(ii)下游并与其可操作连接的转录终止子。通常，(i)和(v)为真核的，(iii)和(iv)为原核的。
优选的启动子是病毒启动子，如来自巨细胞病毒(cmv)的启动子。除了启动子，载体还可以包含与启动子功能性相互作用的转录调节序列(如增强子)。优选的载体包含立即早期cmv增强子/启动子，更优选的载体还包含cmv内含子a。将该启动子可操作连接于编码免疫原的下游序列，从而使免疫原编码序列的表达在该启动子的控制之下。
当使用标记物时，优选其在微生物宿主中(如原核生物中、细菌中、酵母中)具有功能。标记物优选原核选择标记物(如在原核启动子控制之下转录)。方便起见，典型的标志物为抗生素抗性基因。
本发明的载体优选自主复制附加型或染色体外载体，如质粒。
本发明的载体优选包含复制起点。该复制起点优选在原核生物中有活性而在真核生物中无活性。
因此优选的载体包含用于选择载体的原核标记物、原核复制起点以及驱动免疫原编码序列转录的真核启动子。因此载体(a)在原核宿主中扩增并选择，但不进行多肽表达，而(b)在真核宿主中表达，但不进行扩增。这种配置对于核酸免疫载体来说是理想的。
本发明的载体可以在编码序列下游包含真核转录终止序列。这能增强转录水平。当编码序列本身不包含聚腺苷酸化序列时，本发明的载体优选包含聚腺苷酸化序列。优选的聚腺苷酸化序列来自于牛生长激素。
本发明的载体可以包含多克隆位点。
除免疫原和标记物的编码序列外，载体可以包含第二真核编码序列。载体还可在所述第二序列上游包含ires，以从与该免疫原相同的转录物中翻译第二条真核多肽。或者，免疫原编码序列可以在ires的下游。
本发明的载体可以包含非甲基化cpg基序，如非甲基化dna序列，它们都在鸟苷之前有一个胞嘧啶，侧接有两个5′嘌呤和两个3′嘧啶。已证明非甲基化形式的这些dna基序是多种类型免疫细胞的强效刺激因子。
载体可以靶向方式进行递送。受体介导的dna递送技术为本领域已知。在基因治疗方案中，以约100ng至约200mgdna的范围局部给予包含核酸的治疗性组合物。在基因治疗方案中也能使用浓度范围是约500ng至约50mg，约1μg至约2mg，约5μg至约500μg以及约20μg至约100μg的dna。诸如作用方法(如提高或抑制编码基因产物的水平)以及转化和表达效力等因素是影响最终功效所需剂量的考虑因素。当需要在更大面积组织上更强表达时，可能需要更大量的载体或在后续给药方案中重复给予相同量，或对不同相邻或紧密组织部分多次给药，以实现积极的治疗效果。在所有情况下，临床试验中的常规实验方法可确定最优治疗效果的特定范围。
可用基因递送载剂来递送载体。基因递送载剂可以是病毒或非病毒来源(通常参见参考文献139)。
本领域熟知用于递送所需核酸并在所需细胞中表达的基于病毒的载体。示例性的基于病毒的载体包括但不限于：重组逆转录病毒(例如参考文献140至)，基于α病毒的载体(如辛德毕斯病毒载体、西门利克森林病毒(atccvr-67；atccvr-1247)、罗斯河病毒(atccvr-373；atccvr-1246)和委内瑞拉马脑炎病毒(atccvr-923；atccvr-1250；atccvr1249；atccvr-532)；还可以使用这些病毒的杂合体或嵌合体)、痘病毒载体(如牛痘、禽痘、金丝雀痘、改性安卡拉牛痘等)、腺病毒载体和腺伴随病毒(aav)载体(例如参见参考文献142至)。还能给予与杀死的腺病毒连接的dna[144]。
还能使用非病毒递送运载体和方法，包括但不限于：连接或不连接于杀死的腺病毒的聚阳离子浓缩dna[如144]，配体连接的dna[145]，真核细胞递送运载体细胞[如参考文献146-]和核电荷中和或与细胞膜融合。还能使用裸露dna。参考文献148中描述了引入裸露dna的示例性方法。参考文献149至中描述了可作为基因递送运载体的脂质体(如免疫脂质体)。参考文献151-512中描述了其它方法。
其它适用的非病毒递送包括机械递送系统，如参考文献152所述方法。而且，通过光聚合水凝胶材料沉积或使用电离辐射可对此编码序列和其表达产物进行递送[如参考文献153]。其它可用于递送编码序列的常规基因递送方法包括例如，使用手持式基因传递颗粒枪[154]或使用离子辐射激活转移的基因。
使用plg(乙丙交酯共聚物)微粒递送dna是一个尤其优选的方法，如将dna吸附于微粒上，微粒可选经处理表面带负电(如用sds处理)或带正电(如用阳离子去垢剂(如ctab)处理)。
抗体
针对绿脓假单胞菌抗原的抗体可用于被动免疫。因此本发明提供对第一、第二、第三或第四抗原组的抗原具有特异性的抗体。本发明还提供此类抗体在治疗中的应用。本发明还提供了此类抗体在药物制造中的应用。本发明还提供了一种治疗哺乳动物的方法，该方法包括给予有效量的本发明抗体的步骤。如上文关于免疫原性组合物部分所述，这些方法和应用能够保护哺乳动物对抗绿脓假单胞菌感染。
术语“抗体”包括完整的免疫球蛋白分子及其能结合抗原的片段。它们包括杂合(嵌合)抗体分子；f(ab′)2和f(ab)片段和fv分子；非共价异二聚体；单链fv分子(sfv)；二聚和三聚抗体片段构建物；微型抗体；人源化抗体分子；任何获自此类分子的功能片段，以及通过非常规工艺(如噬菌体展示)获得的抗体。优选所述抗体为单克隆抗体。获取单克隆抗体的方法为本领域熟知。优选人源化或完全人抗体。
概述
除非另有说明，本发明的实施将采用化学、生物化学、分子生物学、免疫学和药理学的常规方法，这些方法在本领域技术范围内。这些技术在文献中已有充分描述。
上文使用“gi”编号。gi编号，或者“基因信息识别号(geninfoidentifier)”，是ncbi将序列加入其数据库时，连续对每一序列记录指定的一串数字。gi编号与序列记录登录号没有相似之处。序列更新(如纠正或加入更多注释或信息)后，将接受新gi编号。因此与给定gi编号相关的序列是不变的。也可见参考文献37。
当本发明涉及“表位”时，该表位可以是b细胞表位和/或t细胞表位。可凭经验鉴定此类表位(如使用pepscan[155]或相似方法)，或可对其进行预测(如使用詹姆森-沃尔夫抗原性指数(jameson-wolfantigenicindex)[156]、基于矩阵的方法[157]、mapitope[158]、tepitope[159]、optimer和epimer[160]、adept[161]、t位点、亲水性、抗原性指数或本领域已知方法)。表位是由抗体或t细胞受体的抗原结合位点识别并与之结合的抗原某部分，它们也称作“抗原决定簇”。
当抗原“结构域”被省略时，可以包括省略信号肽、胞质结构域、跨膜结构域、胞外结构域等。
术语“包括”涵盖“包含”以及“由……组成”，例如，“包括”x的组合物可以仅由x组成或可包含其它物质，例如x y。
与数值x相关的术语“约”是可任选的，并且表示，例如x±10％。
两个氨基酸序列间的序列相同性百分数表示进行比对时所比较的两条序列中相同氨基酸的百分数。利用本领域所知软件程序，例如参考文献162的7.7.18部分所描述的软件程序，可进行比对并确定同源性百分数或序列相同性百分数。优选的比对通过史密斯-沃特曼(smith-waterman)同源性搜索算法使用仿射缺口搜索确定，其中缺口开放罚12分，缺口延伸罚2分，blosum矩阵计62分。参考文献163中公开了史密斯-沃特曼同源性搜索算法。
具体实施方式
本文提供了以下实施方式：
1.一种免疫原性组合物，其包含选自下组的一种或多种抗原：pse54(pa5340)抗原；pse44-4(pa3526)抗原；pse10-1(pa1178)抗原；pse21-5(pa5112)抗原；pse27-1(pa0328)抗原；pse52-1(pa4765)抗原；pse53-1(pa5047)抗原；pse11-3(pa1248)抗原；pse41-5(pa2407)抗原；pse47a-2(pa4082)；pse5-1(pa0595)；pse13-2(pa1954)；pse17-1(pa3692)；pse18-2(pa4370)；pse20-1(pa4735)；pse23-1(pa3647)；pse24-1(pa0126)；pse25-1(pa0189)；pse26-1(pa0274)；pse28-2(pa0537)；pse31-2(pa0737)；pse33-2(pa1086)；pse42-1(pa2793)；pse45-2(pa3535)；pse50-1(pa4578)；pse51-4(pa4667)；pse19-1(pa4710)；pse34-1(pa1106)；pse36-3(pa1324)；pse38-1(pa1777)。
2.如实施方式1所述的免疫原性组合物，其中抗原选自：pse54(pa5340)抗原；pse44-4(pa3526)抗原；pse21-5(pa5112)抗原；pse27-1(pa0328)抗原；pse53-1(pa5047)抗原；pse41-5(pa2407)抗原；pse47a-2(pa4082)；pse5-1(pa0595)；pse13-2(pa1954)；pse17-1(pa3692)；pse18-2(pa4370)；pse20-1(pa4735)；pse23-1(pa3647)；pse24-1(pa0126)；pse25-1(pa0189)；pse26-1(pa0274)；pse28-2(pa0537)；pse31-2(pa0737)；pse33-2(pa1086)；pse42-1(pa2793)；pse45-2(pa3535)；pse50-1(pa4578)；pse51-4(pa4667)；pse34-1(pa1106)；pse36-3(pa1324)。
3.如实施方式1所述的组合物，所述一种或多种抗原选自：pse54(pa5340)抗原；pse21-5(pa5112)抗原；pse27-1(pa0328)抗原；pse41-5(pa2407)；pse44-4(pa3526)抗原；pse47a-2(pa4082)抗原；pse53-1(pa5047)抗原，或pse52-1(pa4765)抗原；pse10-1(pa1178)抗原；pse11-3(pa1248)。
4.如实施方式1所述的组合物，其以组合形式包含选自下组的至少两种抗原：pse54(pa5340)抗原；pse44-4(pa3526)抗原；pse10-1(pa1178)抗原；pse21-5(pa5112)抗原；pse27-1(pa0328)抗原；pse52-1(pa4765)抗原；pse53-1(pa5047)抗原；pse11-3(pa1248)抗原；pse41(pa2407)抗原；pse47a-2(pa4082)；pse5-1(pa0595)；pse13-2(pa1954)；pse17-1(pa3692)；pse18-2(pa4370)；pse20-1(pa4735)；pse23-1(pa3647)；pse24-1(pa0126)；pse25-1(pa0189)；pse26-1(pa0274)；pse28-2(pa0537)；pse31-2(pa0737)；pse33-2(pa1086)；pse42-1(pa2793)；pse45-2(pa3535)；pse50-1(pa4578)；pse51-4(pa4667)；pse19-1(pa4710)；pse34-1(pa1106)；pse36-3(pa1324)；pse38-1(pa1777)。
5.如实施方式4所述的组合物，其还包含选自下组的任何其他抗原：pila、oprf-opri、flic、flid、exoa，且所述抗原之一是pse54。
6.如实施方式4所述的组合物，其包含选自下组的至少一种抗原：pse10-1(pa1178)、pse52-1(pa4765)、pse53-1(pa5047)、pse21-5(pa4765)，其中其他抗原是pse54(pa5340)。
7.如实施方式4所述的组合物，其包含选自下组的两种或多种抗原：pse54(pa5340)抗原；pse10-1(pa1178)抗原；pse44-4(pa3526)抗原；pse52-1(pa4765)抗原；pse53-1(pa5047)抗原；pse21-5(pa5112)抗原；pse27-1(pa0328)抗原；pse47a-2(pa4082)抗原或oprf-opri.
8.如前述实施方式中任一项所述的组合物，其中，一种或多种所述抗原吸附至氢氧化铝佐剂，且可选所述组合物包含组氨酸缓冲液。
9.如前述实施方式中任一项所述的组合物，所述组合物还包含：一种或多种(i)绿脓假单胞菌表多糖和(ii)载体蛋白的偶联物。
10.一种免疫原性组合物，其包含前述实施方式中任一项中的多肽，且还包含以下一种或多种物质：
(a)一种或多种(i)金黄色葡萄球菌表多糖的偶联物；
(b)一种或多种(i)金黄色葡萄球菌的蛋白抗原或
(c)一种或多种致病性大肠杆菌抗原
(d)一种或多种致病性新洋葱伯克霍尔德氏菌(b.cenocepacia)抗原
11.一种免疫原性组合物，其包含实施方式1或2中的多肽和一种或多种以下物质：(i)oprf-opri抗原；(ii)flic抗原；(iii)flid抗原和/或(iv)pila抗原。
12.如前述实施方式中任一项所述的组合物，其包含佐剂。
13.一种多肽，其包含与seqidno：1-35或seqidno：36-65中任一项的氨基酸序列具有80％或更高相同性的氨基酸序列。
14.一种药物组合物，其包含实施方式11-12或13中任一项所述的多肽。
15.前述实施方式中任一项所述的免疫原性组合物，其用于在哺乳动物中产生免疫应答。
16.前述实施方式中任一项所述的免疫原性组合物，其用作预防性或治疗性疫苗抵御医院感染。
17.一种在哺乳动物中产生免疫应答的方法，所述方法包括给予该哺乳动物有效量的前述实施方式中任一项所述的多肽或组合物的步骤。
抗原选择
已基于多种标准的组合选择绿脓假单胞菌蛋白用作疫苗组分，所述标准包括：
·细胞定位预测，通过其优先考虑被预测为“外膜”、“周质”、“胞外”和“未知”的蛋白。根据最新定义，预测为具有“未知”细胞定位的蛋白通常由多个结构域组成，其中之一可实际上是表面暴露的。
·对来自其他物种的已知毒力因子、疫苗候选物的显著同源性
·缺少对已测序的人基因组编码的人蛋白的显著同源性，以限制产生自身免疫应答或疫苗诱导的自身免疫应答的可能性。
·缺少对大肠杆菌蛋白的显著同源性，考虑到在致病性或非致病性的许多生物物种中具有对应物的蛋白有较高的可能性具有管家功能并因此不太可能是好的抗原
·7个完整测序的绿脓假单胞菌基因组中至少5个以上的保守性。
·有用的氨基酸序列长度，其被认为至少150aa
·微阵列数据。测试了绿脓假单胞菌pao1来源蛋白库的体外表达以分析在cf(囊性纤维化)患者粘液中所见厌氧条件下的基因表达相对于环境中所见好氧条件下基因表达的变化。优选考虑在好氧和厌氧细胞培养条件下都维持表达的蛋白。
该蛋白还可合理良好地吸附至氢氧化铝(也参见下文)，其对于用于递送至人的稳定制剂是有用的。
菌株覆盖率
为评估所选抗原的保守性，使用了多种绿脓假单胞菌临床分离物。从进入汉诺威医学院(medizinischehochschulehannover)的cf诊所的八名胰腺不足型cf患者中分离绿脓假单胞菌临床菌株。来自首次阳性培养物的绿脓假单胞菌菌株被指定为“早期”分离物，而在之后的1-5年收集的是中期分离物并且在建群后7-16年或死亡或肺移植前收集的是晚期分离物。测试的菌株列于下表。
菌株覆盖率的表格
符号°表示死亡或肺移植前最后的绿脓假单胞菌菌株。如pcr(聚合酶链式反应)所确认的那样，编码pse54、pse44-4、pse10-1、pse21-5、pse27-1、pse52-1、pse53-1、pse11、pse41、pse47-2的基因存在于所有测试的菌株中。
因此，考虑到以较宽跨菌株保护计的疫苗功效，表2中所测试的基于最佳组合/混合物中任一种的疫苗可以是有效的解决方案，以扩展针对假单胞菌来源感染的疫苗覆盖率。
绿脓假单胞菌重组蛋白的克隆和表达
通过标准方法进行抗原的克隆和表达。
使用特异性寡核苷酸和作为模板的pa染色体dna对来自pa菌株pao1的多肽抗原进行pcr扩增。使用pipe法[164]将所得的pcr产物克隆至pet15b(诺瓦基公司(novagen))，包括克隆载体的pcr扩增(v-pcr)和插入片段的pcr扩增(i-pcr)。随后，混合1μl的v-pcr和1μ1的i-pcr并将其转化至化学感受态hk100细胞中[165]。设定i-pcr反应，含有1μm各正向和反向引物、1x克隆pfudna聚合酶反应缓冲液、2.5单位的pfuturbodna聚合酶(司查塔基公司(stratagene))、200μm的各dntp(英杰公司(invitrogen))和50ng的基因组dna模板。按如下条件进行反应：95℃起始变性2分钟，随后进行95℃30秒、55℃45秒和68℃3分钟的25次循环，最后冷却至4℃。v-pcr反应与i-pcr反应相同，只是68℃的步骤持续14分钟并使用2ng的pet15b质粒作为dna模板。通过对载体-插入连接物的pcr筛选和dna质粒测序选择正确的转化子。随后从选择的hk100克隆中制备正确的质粒并用于转化bl21(de3)t1r细胞(西格玛公司(sigma))以进行蛋白质表达。
为表达克隆的蛋白，将含有pet15b构建体的bl21(de3)t1r克隆在37℃下在含有100μg/ml氨苄青霉素的lb培养基中生长直至od600＝0.5。随后通过加入1mmiptg诱导蛋白质表达并在相同温度下再生长3小时。进行常规蛋白质提取和sds-page以检查蛋白质表达。使用本领域已知的western印迹技术来确认所测试的绿脓假单胞菌抗原的正确表达。使用来自经免疫小鼠的特异性抗血清来确认蛋白表达。使用本领域已知的免疫荧光技术来确认所测试的绿脓假单胞菌抗原的表面定位，其中使用抗细胞壁抗体作为共定位剂和/或小鼠免疫后获得的特异性抗抗原血清。
佐剂配制
选定的绿脓假单胞菌蛋白抗原候选物单独或作为蛋白质组合来用氢氧化铝进行配制。已针对ph和渗透压对配方进行优化。
将抗原配制为氢氧化铝中的单价抗原或多价抗原组合。以10μg/制剂/动物使用各抗原。在10mm组氨酸缓冲液(ph6.5)中以终浓度2mg/ml使用氢氧化铝。使用氯化钠将渗透压调节至生理条件。以200μl/动物的最终疫苗组合物体积经气管内给予制剂。
可按所需ph和渗透压调节所有单价和组合制剂。这些制剂的ph范围为6.2-7.3，且渗透压范围为248-360mosm/kg。
所测试的大多数蛋白在各种单价和组合制剂中都良好地吸附于氢氧化铝佐剂。
单个pse54、pse10-1、pse21-5、pse27-1、pse44-4、pse52-1、pse53-1蛋白完全吸附，并可解吸附而不改变其吸附前电泳特征。
组合中的各抗原完全吸附，不存在针对佐剂的抗原间竞争。pse25 pse54、pse27-1 pse44、pse38-1 pse11-3、pse38-1 pse11-3、pse41-5 pse47a-2、pse41-5 pse53-1、pse47a-2 pse53-1、pse47a-2 pse52-1组合中的抗原也完全吸附。
所测试的全部制剂都对其ph和渗透压稳定。所有抗原都维持完全吸附于佐剂。所有抗原都保持其解吸附特征。解吸附后没有抗原降解或聚集增加的迹象。
功效测试
测试了表2所列单个抗原保护抵御5x106cfu的浮游性pao1菌株攻击所致气管内(it)致死感染的能力。结果示于图1。
使用重组蛋白免疫小鼠来进行针对绿脓假单胞菌(以参考菌株pao1的形式使用)的保护研究。在第0、21和35天使用不同抗原免疫每组10只小鼠(c57bl/6ncrlbr雄性5周龄，查尔斯河实验室(charlesriverlaboratories)，意大利)的组并在第50天时使用同源绿脓假单胞菌pao1参考菌株通过急性感染进行攻击。在各次加强中，各小鼠接受10μg或20μg吸附于铝(单独或与107cfu的热灭活pao1一起)的重组蛋白。为获得抗血清，在第-1、34和49天对所有组的小鼠进行取血。作为阴性对照，有10只小鼠每轮仅使用铝注射，而作为阳性对照，有10只小鼠每轮使用107cfu的热灭活pao1菌株加强。在第50天，经由气管内(it)途径使用5x106cfu(第一致死剂量)的浮游性绿脓假单胞菌pa01感染小鼠。处死小鼠并通过腹部中线切口直接呈现气管，使其暴露并插入与1ml注射器相连的无菌柔性22-g导管。将60μl浮游性细菌接种物经由该导管植入肺中。以12小时的间隔监测小鼠的存活，持续120小时，并将其与未接种疫苗和接种pao1的对照组比较。
表2列举了与对照相比显示能在存活曲线中给出增量转变的抗原，且使用pse21-5、pse47a-2、pse52-1、pse53-1或pse54、pse10、pse11-3、pse27-1、pse44-4和pse41-5时观察到最佳结果。
此外，在组合中测试个体抗原，如表2中报道的那样。
表2总结了动物小鼠模型中不同抗原在体内单独使用或联用所获得的结果。存活数据见表2。在统计学显著性栏中，相对阴性对照组计算mc(mantel-cox)检验中的p值。将各蛋白的存活曲线与测试该蛋白的同一轮中阴性对照的存活曲线比较。以12小时的间隔测量存活，持续120小时，并将其与未接种疫苗和接种pao1的对照组比较。36小时后的小鼠存活百分比表明体内阳性免疫结果。
在考虑30种测试的重组蛋白的不同轮中(表2)，与阴性对照相比，三种蛋白(pse10-1(pa1178)、pse47a-2(pa4082)和pse52-1(pa4765))也具有高度的统计学显著性不同的存活曲线(相对阴性对照的mc检验中的p值分别为0.0261、0.0364和0.0275)。
基于七种其他重组蛋白的存活曲线分析，预测还可通过增加体内测试的动物数目来显著加强结果，进一步确认pse11-3(pa1248)、pse41-5(pa2407)、pse44-4(pa3526)、pse53-1(pa5047)、pse21-5(pa5112)、pse-54(pa5340)、pse-27-1(pa0328)的初步阳性和出乎意料的数据。
此外，在单独使用已知的抗原(即oprf-opri)来免疫该动物模型中的小鼠时，获得了20％的存活，具有0.0446的统计学显著性。
为进一步改进该体内模型中的存活，还通过将最理想的蛋白合并在一起来测试特定组合以进一步提高疫苗功效。
组合对比其中单个多肽的比较
还使用单个制剂中的组合(也称为抗原混合物)来免疫小鼠。这些组合通常使用氢氧化铝作为佐剂(参见章节“佐剂配制”)并在第0、21和35天时给予。免疫发生于c57bl/6ncrlbr雄性5周龄小鼠中，每组10只。第50天时，使用致死剂量的热灭活细菌攻击小鼠且随后监测存活持续120小时。为进行比较，使用pbs作为阴性对照并使用热灭活的pao1作为阳性对照。
在进行免疫方案并进一步使用致死剂量的假单胞菌同源菌株感染后120小时的监测期间，与阴性对照组相比，使用下列组合进行测试时出乎意料地显示了存活增加的最佳结果(表2)：pse47a-2 pse53-1、pse47a-2 pse53-1、pse54 pse44-4和pse54 pse21-5是最理想的，而pse47a-2 pse52-1组合较不理想。
进行了多种测试以比较多种组合与其七种单个多肽(即pse54或pse21-5或pse27-1、pse44-4、pse52-1、pse53-1、pse47a-2)以及作为阳性对照的oprf/i或无抗原阴性对照。
使用两种不同蛋白的混合物免疫小鼠。八种混合物具有统计学上不同于阴性对照组的曲线(还考虑pse54 oprf-opri组合物)。
在第六轮中，测试了与pse47a-2组合的不同蛋白混合物：pse47a-2 pse52-1和pse47a-2 pse53-1显示相对于阴性对照组令人吃惊的统计学差异(mc检验中相对阴性对照组的p值分别为0.0374和0.0373)。
具体而言，使用混合物pse47a-2 pse53-1进行疫苗接种令人吃惊地导致30％的存活率，维持良好的统计学显著性。
在第十轮中，测试了与pse54组合的不同蛋白混合物。如表2中所报道的那样，与阴性对照组相比，八种混合物中的五种显示不同的死亡率曲线。具体而言，使用pse54 pse44-4和pse54 pse52-1的混合物进行疫苗接种生成非常好的动物保护，分别导致40％和33％的动物存活率(mc检验中相对阴性对照组的p值分别为0.0076和0.0142)。在第十一轮中再次测试时，pse54 pse44-4确认了显示57％的动物存活率升高的阳性结果。联用时显示更好疫苗功效的其他混合物是：pse54 pse21-5、pse54 pse53-1和pse54 pse10-1(mc检验中相对阴性对照组的p值分别为0.0332、0.0085和0.0025)。
此外，最后一种混合物pse54 pse10-1在两个不同的免疫轮次中具有可比的结果，证实了阳性和令人吃惊的结果，其在两轮中都显示相同的动物存活率(20％)。
最后，四种其他不同蛋白的混合物(pse27-1 pse44-4、pse53-1 pse41-5和pse53-1 pse52-1和pse54 pse27-1)可在进一步重复了实验的增加动物数量的确认性实验中变得更加显著。
为进一步改进保护能力并最终改进所选抗原的疫苗功效，测试了三种蛋白的组合。测试了七组，其维持两种固定蛋白pse54 pse44-4加一种可变蛋白，同时测试的其他组是使用pse47a-2 pse52-1 pse53-1、pse54 pse52-1 pse53-1和pse54 pse53-1 pse27-1。与阴性对照组相比，这些组合中的一些不显示显著的动物保护，而在考虑例如pse54 pse44-4 pse47a-2或pse54 pse53-1 pse27-1时，它们可能藉由简单地通过增加动物数目获得的确认性实验而给出显著的保护(参见表2)。因此，三蛋白组合中的一些不改进保护，相反地，其似乎比两种蛋白更差。
然而，在考虑向抗原混合物中添加的其他组合时，将阳性对照oprf-opri融合物也纳入所述其他组合中。
当oprf-opri用作单个融合蛋白抗原时，其显示20％的存活率，统计学显著性为0.0446，这类似于使用单个理想抗原的其他单独免疫，而在与pse54联用时，存活百分比出乎意料地增加至50％，统计学显著性类似。此外，以组合形式用以下抗原pse54 pse27 oprf-opri进行免疫令人吃惊地显示具有可比统计学显著性的60％存活率，而其他组合即pse54 pse53 oprf-opri与单种抗原免疫相比不显示任何叠加作用或显著的免疫原性疫苗功效，即使在使用减量的各单种抗原进行的单次免疫中也是如此(表2)。可以合理的预测，通过增加测试动物的数目，该特定组合也可提供显著增加的免疫保护。
应理解，仅以举例的方式描述了本发明，可对之进行修改而仍在本发明的范围和构思内。
表1：命名交叉参考
表2：小鼠动物模型结果总结
表2的注释：
#mc检验中相对阴性对照组的p值：将各蛋白的存活曲线与其中测试该蛋白的相同轮中阴性对照的存活曲线比较。以12小时的间隔测量存活，持续120小时，并将其与未接种疫苗和接种pao1的对照组比较。36小时后小鼠存活百分比显现体内的阳性免疫结果。
*使用增加的动物数目时t检验具有显著性：抗原对比阴性对照。
#t检验具有显著性：抗原对比阴性对照是显著的，但使用抗原免疫的小鼠在阴性对照前死亡。nd：未完成
参考文献
[1]femsmicrobiollett.2009年11月；300(2)：153-64.
[2]jantimicrobchemother.2009年8月；64(2)：229-38.
[3]clinmicrobiolrev.2009年10月；22(4)：582-610.
[4]ep0717106b1
[5]mansouri等，infect.immun.1999，67(3)：1461
[6]wo2012/084272.
[7]wo2010107778
[8]researchdisclosure，453077(2002年1月).
[9]ep-a-0372501.
[10]ep-a-0378881.
[11]wo93/17712.
[12]wo98/58668.
[13]wo91/01146.
[14]falugi等(2001)eurjimmunol31：3816-3824.
[15]baraldo等(2004)infectimmun72(8)：4884-7.
[16]ep-a-0594610.
[17]kuo等(1995)infectimmun63：2706-13.
[18]michon等(1998)vaccine.16：1732-41.
[19]wo02/091998.
[20]wo01/72337.
[21]wo00/61761.
[22]wo00/33882
[23]美国专利4,761,283.
[24]美国专利4,356,170.
[25]美国专利4,882,317.
[26]美国专利4,695,624.
[27]mol.immunol.，1985，22，907-919
[28]bethellg.s.等，j.biol.chem.，1979，254，2572-4
[29]wo00/10599.
[30]gever等，med.microbiol.immunol，165：171-288(1979).
[31]美国专利4,057,685.
[32]美国专利4,673,574；4,761,283；4,808,700.
[33]美国专利4,459,286.
[34]美国专利4,965,338.
[35]美国专利4,663，160.
[36]wo2007/000343.
[37]winsorgl，等nucleicacidsres.2011年1月；39(数据库版本)：d596-600
[38]luckett等，(2012)activity.plospathog8(8)：e1002854.
[39]damron等，(2009)microbiology155，1028-1038
[40]choi等，proteomics2011，11，3424-3429
[41]finke等，(1990)infectionandimunity，七月，第2241-2244页
[42]remans等，(2010)microbiology，156，2597-2607
[43]mercier等，(2009)proteinscience，18，606-618
[44]bell等，(1989)journalofbacteriology，171(6)，3211-3217
[45]montor等，infect.immun.2009，77(11)：4877.
[46]ochsner等，j.bacteriol.1999，181(4)：1099
[47]wo2009005040
[48]ep0297291b
[49]doring等，(2008)vaccine26，1011-1024
[50]kao等，chembioldrugdes2009；74：33-42
[51]campodonico等，infectionandimmunity，2010年2月，p.746-755
[52]needleman和wunsch(1970)j.mol.biol.48，443-453.
[53]rice等(2000)trendsgenet16：276-277.
[54]taniyama等，_j.bacteriol.-2012-1447-56
[55]bauman和kuehn(2006)microbesinfect.8：2400-8.
[56]ellis等(2010)infectimmun.78(9)：3822-31.
[57]tashiro等(2012)environmentalmicrobiology14：1349-62.
[58]美国专利6355271.
[59]wo00/23105.
[60]wo90/14837.
[61]wo90/14837.
[62]podda和delgiudice(2003)expertrevvaccines2：197-203.
[63]vaccinedesign：thesubunitandadjuvantapproach(《疫苗设计：亚基和佐剂方法》)(powell和newman编)普莱南出版社(plenumpress)1995(isbn0-306-44867-x).
[64]vaccineadjuvant：preparationmethodsandresearchprotocols(《疫苗佐剂：制备方法和研究方案》)(分子生物学方法系列第42卷)isbn1-59259-083-7，o’hagan编.
[65]wo2008/043774.
[66]allison和byars(1992)resimmunol143：519-25.
[67]hariharan等(1995)cancerres55：3486-9.
[68]us-2007/014805.
[69]us-2007/0191314.
[70]suli等(2004)vaccine22(25-26)：3464-9.
[71]wo95/11700.
[72]美国专利6,080,725.
[73]wo2005/097181.
[74]wo2006/113373.
[75]han等(2005)impactofvitamineonimmunefunctionandinfectiousdiseasesintheagedatnutrition(维生素e对老年人中免疫功能和感染性疾病的影响)营养、免疫功能和健康欧洲会议，巴黎，2005年6月9-10日.
[76]us-6630161.
[77]us5,057,540.
[78]wo96/33739.
[79]ep-a-0109942.
[80]wo00/07621.
[81]barr等(1998)advanceddrugdeliveryreviews32：247-271.
[82]ep-a-0689454.
[83]johnson等(1999)bioorgmedchemlett9：2273-2278.
[84]meraldi等(2003)vaccine21：2485-2491.
[85]pajak等(2003)vaccine21：836-842.
[86]wo02/26757.
[87]wo99/62923.
[88]krieg(2003)naturemedicine9：831-835.
[89]kandimalla等(2003)biochemicalsocietytransactions31(part3)：654-658.
[90]blackwell等(2003)jimmunol170：4061-4068.
[91]krieg(2002)trendsimmunol23：64-65.
[92]kandimalla等(2003)bbrc306：948-953.
[93]bhagat等(2003)bbrc300：853-861.
[94]wo01/22972.
[95]schellack等(2006)vaccine24：5461-72.
[96]wo95/17211.
[97]wo98/42375.
[98]beignon等(2002)infectimmun70：3012-3019.
[99]pizza等(2001)vaccine19：2534-2541.
[100]scharton-kersten等(2000)infectimmun68：5306-5313.
[101]pine等(2002)jcontrolrelease85：263-270.
[102]tebbey等(2000)vaccine18：2723-34.
[103]domenighini等(1995)molmicrobiol15：1165-1167.
[104]wo99/40936.
[105]singh等(2001)jcontrelease70：267-276.
[106]wo99/27960.
[107]us6,090,406
[108]us5,916,588
[109]wo99/52549.
[110]wo01/21207.
[111]wo01/21152.
[112]andrianov等(1998)biomaterials19：109-115.
[113]payne等(1998)advdrugdeliveryreview31：185-196.
[114]us4,680,338.
[115]wo92/15582.
[116]wo03/011223.
[117]johnson等(1999)bioorgmedchemlett9：2273-2278.
[118]wo2004/060308.
[119]wo2004/064759.
[120]us6,924,271.
[121]us2005/0070556.
[122]美国专利5,011,828.
[123]wo2004/87153.
[124]us6,605,617.
[125]wo2004/018455.
[126]wo03/082272.
[127]wong等(2003)jclinpharmacol43(7)：735-42.
[128]dyakonova等(2004)intimmunopharmacol4(13)：1615-23.
[129]signorelli和hadden(2003)intimmunopharmacol3(8)：1177-86.
[130]wo2004/064715.
[131]delibero等，naturereviewsimmunology，2005，5：485-496
[132]美国专利5,936,076.
[133]cooper(1995)pharmbiotechnol6：559-80.
[134]wo99/11241.
[135]欧洲专利申请0835318、0735898和0761231.
[136]wo2006/110603.
[137]molina等，bolasocmedpr.1991年4月；83(4)：160-3.
[138]weihui等，amjrespircritcaremed卷186，第5期，第420-427页，2012年9月1日
[139]jolly，cancergenetherapy(1994)1：51
[140]wo90/07936.
[141]wo94/03622.
[142]wo94/12649.
[143]wo93/03769.
[144]curiel，hum.genether.(1992)3：147
[145]wu，j.biol.chem.(1989)264：16985
[146]美国专利5,814,482.
[147]wo95/07994.
[148]美国专利5,580,859
[149]美国专利5,422,120
[150]wo95/13796.
[151]philip，mol.cellbiol.(1994)14：2411
[152]woffendin，proc.natl.acad.sci.(1994)91：11581
[153]美国专利5,206,152.
[154]美国专利5,149,655.
[155]geysen等(1984)pnasusa81：3998-4002.
[156]jameson，ba等1988，cabios4(1)：181-186.
[157]raddrizzani和hammer(2000)briefbioinform1(2)：179-89.
[158]bublil等(2007)proteins68(1)：294-304.
[159]delalla等(1999)j.immunol.163：1725-29.
[160]meister等(1995)vaccine13(6)：581-91.
[161]maksyutov和zagrebelnaya(1993)computapplbiosci9(3)：291-7.
[162]currentprotocolsinmolecularbiology(《新编分子生物学实验指南》)(f.m.ausubel等编，1987)增刊30
[163]smith和waterman(1981)adv.appl.math.2：482-489.
[164]klock，h.e.，等(2008).proteins71：982-994
[165]klock，h.e.，等(2005)j.struct.funct.genomics6，89-94
序列表
<110>葛兰素史密丝克莱恩生物有限公司(glaxosmithklinebiologicalssa)
圣拉斐尔医院有限公司(ospedalesanraffaelesrl)
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<220>
<221>来源
<223>/注=“人工序列的描述：合成多肽”
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<210>66
<211>8
<212>prt
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<220>
<221>来源
<223>/注=“人工序列的描述：合成肽”
<400>66
metalahishishishishishis
15
<210>67
<211>6
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<221>来源
<223>/注=“人工序列的描述：合成肽”
<400>67
glyserglyglyglygly
15
<210>68
<211>8
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<221>来源
<223>/注=“人工序列的描述：合成肽”
<400>68
glyserglyserglyglyglygly
15
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<211>6
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<221>来源
<223>/注=“人工序列的描述：合成肽”
<400>69
alaserglyglyglyser
15
<210>70
<211>6
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<221>来源
<223>/注=“人工序列的描述：合成的6xhis标签”
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hishishishishishis
15
<210>71
<211>10
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<221>来源
<223>/注=“人工序列的描述：合成肽”
<220>
<221>变体
<222>(3)..(10)
<223>/替换=""
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(10)
<223>/注=“该序列可包括2-10个残基，其中一些位置可缺失”
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(10)
<223>/注=“序列中列出的变体残基相对于变体位置的标注中的那些无偏好”
<400>71
glyglyglyglyglyglyglyglyglygly
1510
<210>72
<211>10
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<221>来源
<223>/注=“人工序列的描述：合成肽”
<220>
<221>变体
<222>(4)..(10)
<223>/替换=""
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(10)
<223>/注=“该序列可包括3-10个残基，其中一些位置可缺失”
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(10)
<223>/注=“序列中列出的变体残基相对于变体位置的标注中的那些无偏好”
<400>72
hishishishishishishishishishis
1510
<210>73
<211>4
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<221>来源
<223>/注=“人工序列的描述：合成肽”
<400>73
glyglyglygly
1
1.一种免疫原性组合物，其包含pse21-5(pa5112)抗原。
2.如权利要求1所述的组合物，其包含pse21-5(pa5112)抗原和选自下组的至少一种其他抗原：pse44-4(pa3526)抗原；pse10-1(pa1178)抗原；pse54(pa5340)抗原；pse27-1(pa0328)抗原；pse52-1(pa4765)抗原；pse53-1(pa5047)抗原；pse11-3(pa1248)抗原；pse41(pa2407)抗原；pse47a-2(pa4082)；pse5-1(pa0595)；pse13-2(pa1954)；pse17-1(pa3692)；pse18-2(pa4370)；pse20-1(pa4735)；pse23-1(pa3647)；pse24-1(pa0126)；pse25-1(pa0189)；pse26-1(pa0274)；pse28-2(pa0537)；pse31-2(pa0737)；pse33-2(pa1086)；pse42-1(pa2793)；pse45-2(pa3535)；pse50-1(pa4578)；pse51-4(pa4667)；pse19-1(pa4710)；pse34-1(pa1106)；pse36-3(pa1324)；和pse38-1(pa1777)。
3.如权利要求2所述的组合物，其还包含选自下组的一种或多种抗原：pila、oprf-opri、flic、flid和exoa。
4.如权利要求2所述的组合物，其包含选自下组的至少一种抗原：pse10-1(pa1178)、pse52-1(pa4765)、pse53-1(pa5047)和pse54(pa5340)。
5.如权利要求2所述的组合物，其包含选自下组的一种或多种抗原：pse54(pa5340)抗原；pse10-1(pa1178)抗原；pse44-4(pa3526)抗原；pse52-1(pa4765)抗原；pse53-1(pa5047)抗原；pse27-1(pa0328)抗原；pse47a-2(pa4082)抗原；或oprf-opri。
6.一种免疫原性组合物，其包含权利要求1所述的组合物和以下的一种或多种抗原：(i)oprf-opri抗原；(ii)flic抗原；(iii)flid抗原；和/或(iv)pila抗原。
7.如权利要求6所述的组合物，其中，所述一种或多种抗原是oprf-opri抗原。
8.如前述权利要求中任一项所述的组合物，其中，一种或多种所述抗原吸附至氢氧化铝佐剂。
9.如权利要求8所述的组合物，其中，所述组合物包含组氨酸缓冲液。
10.如前述权利要求中任一项所述的组合物，所述组合物还包含：一种或多种(i)绿脓假单胞菌表多糖和(ii)载体蛋白的偶联物。
11.一种免疫原性组合物，其包含前述权利要求中任一项所述的组合物，且还包含以下一种或多种物质：
(a)一种或多种金黄色葡萄球菌表多糖的偶联物；
(b)一种或多种金黄色葡萄球菌的蛋白抗原；
(c)一种或多种致病性大肠杆菌抗原；或
(d)一种或多种致病性新洋葱伯克霍尔德氏菌抗原。
12.如前述权利要求中任一项所述的组合物，其包含佐剂。
13.如权利要求1-12中任一项所述的免疫原性组合物，用于：
(i)在哺乳动物中产生抗绿脓假单胞菌感染的免疫应答；或
(ii)用作预防性或治疗性疫苗抵御由绿脓假单胞菌导致的医院感染。
14.一种药物组合物，其包含：
(i)一种多肽，其包含与seqidno：3具有80％或更高相同性的氨基酸序列，其可引发识别seqidno：3的抗体；或
(ii)一种多肽，其包含seqidno：38的氨基酸序列。
15.如权利要求14所述的组合物，还包含与seqidno：1-2、4-35或36-65中任一项具有80％或更高相同性的氨基酸序列。
技术总结