技术领域：
：本发明公开了核糖体蛋白sa抗体在免疫调节中的医用用途，涉及核糖体蛋白sa抗体在感染治疗、免疫调控新的应用，属于分子生物学和免疫学
技术领域：
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背景技术：
：：核糖体蛋白sa（简称：rpsa）是一种多功能的核糖体蛋白质，由人的rpsa基因（ncbigeneid:3921,accessionno.:ac_000135）编码产生。rpsa因其最初被鉴定为层粘连蛋白的结合蛋白且具有37kdalamr和67kdalamr两种分子形式，所以又被称为37/67-kda层粘连蛋白受体（37/67-kdalamininreceptor，lamr）。研究发现rpsa在细胞的胞核、胞浆以及胞膜上均有表达，与细胞骨架的重塑和核糖体的合成有关。rpsa还参与某些病原对细胞的粘附和入侵，文献报道其与口蹄疫病毒、肺炎链球菌，脑膜炎奈瑟菌，流感嗜血杆菌和大肠杆菌对bmec的粘附和入侵有关。rpsa是核糖体小亚基的重要组成成分，在细胞生长、逆境存活、细胞迁移、蛋白合成、细胞增殖和分化方面发挥着非常重要的生物学作用。但在免疫调节方面的应用未见报道。技术实现要素：：本发明公开了核糖体蛋白sa抗体在免疫调节中的医用用途，利用rpsa做为机体（或细胞）免疫调控的新靶点，针对rpsa进行调节感染免疫，通过制备抗rpsa抗体来抑制rpsa与病原微生物的作用，封闭或阻断其参与的免疫应答，从而调控机体的免疫应答强度；为核糖体蛋白sa抗体提供了一种新的应用领域。本发明还提供了一种利用rpsa抗体在体内或体外进行免疫调节的方法，包括以下步骤：1）表达纯化rpsa蛋白，按2-20mg/次，多位点皮下注射免疫动物，每周1次，4-6次后试血；2）elisa检测效价不低于10000时，进行无菌采血，经48-72小时沉淀，按总量的0.5%加入氯仿、1/万的2.5%的恩诺沙星水溶液，静置2-15℃冷暗处；3）分离血清，提取igg，elisa检测效价不低于512，制成rpsa抗体；4）将rpsa抗体皮下注射链球菌感染的动物，按体重1-5ml/kg用量，1次/天,连续3次（每次最多不超过20ml），可抑制炎症应答强度；或将rpsa抗体（按v/v=5%）添加至细胞培养液，抑制敏感细胞的炎症刺激，降低免疫应答。本发明的积极效果在于：公开了核糖体蛋白sa抗体新的医用用途，根据rpsa在病原粘附和侵袭宿主细胞中起到的重要作用，将rpsa作为靶点用于免疫调控，实现调控机体和细胞的免疫应答。本发明利用rpsa抗体能够有效阻止病原与rpsa的结合，降低某些病原对细胞的刺激和破坏，抑制细胞对病原做出的免疫应答；对某些免疫刺激较弱的病原，能适当增强免疫应答实现对免疫应答的调节作用；避免了由于病原感染经常发生而对于某些病原造成的过度免疫刺激往往加重病症的发生发展。附图说明图1：rpsa抗体封闭后猪肺巨噬细胞pam对app的吞噬情况；图2：rpsa抗体封闭对猪肺巨噬细胞pam和猪气管上皮细胞stec感染app后免疫相关细胞因子转录水平的影响（上排为pam结果，下排为stec结果）；图3：封闭rpsa对鼠小胶质细胞bv2感染猪链球菌（ss2）后细胞形态的影响；图4：rpsa抗体封闭对鼠小胶质细胞bv2和293t细胞感染猪链球菌（ss2）后免疫相关细胞因子转录水平的影响。具体实施方式通过以下实施例进一步举例描述本发明，并不以任何方式限制本发明，在不背离本发明的技术解决方案的前提下，对本发明所作的本领域普通技术人员容易实现的任何改动或改变都将落入本发明的权利要求范围之内。实施例11.封闭rpsa可增强猪肺泡巨噬细胞吞噬能力本实验培养猪肺泡巨噬细胞系（pam），待细胞完全贴壁后，分为三组，分别为rpsa抗体封闭组（proteintech），兔igg抗体同型抗体封闭组（proteintech）和对照组。所得结果如图1所示，实验结果表明，pam在被rpsa抗体封闭后，被吞噬的app数量显著上升，高于同型对照及单纯感染组。封闭rpsa增强猪肺泡巨噬细胞、气管上皮细胞炎性细胞因子分泌在上述实验发现rpsa抗体封闭后可影响pam对app的吞噬情况，以此为基础，通过荧光实时定量pcr实验进一步检测了pam和猪气管上皮细胞（stec）分泌典型细胞因子的变化情况。荧光实时定量pcr上下游引物由吉林省库美生物科技有限公司合成，具体见表1：表1上游引物下游引物白介素6（il6）ggagacctgcttgatgagaatccagcctcgacatttcccttat白介素8（il8）agagccaggaagagactagaactcacagagagctgcagaaa白介素10（il10）gggaaagctagtgggctattttcctatgagtgtaagcgactttg粒细胞集落刺激因子（gm-csf）aagccctgagccttctaaacggtcaaacatttcacagacgac荧光实时定量pcr实验结果如图2所示，从图2中可见rpsa抗体封闭组与同型抗体封闭组以及对照组相比，pam分泌的白介素6（il6）及白介素8（il8）的mrna表达水平显著升高；stec分泌的粒细胞集落刺激因子（gm-csf）和白介素10（il10）表达水平显著升高。封闭rpsa降低猪链球菌（ss）对鼠小胶质细胞的激活荧光实时定量pcr上下游引物由吉林省库美生物科技有限公司合成，具体见表2：表2：上游引物下游引物il-1βatgggcaaccacttacctatttgttctagagagtgctgcctaatgtnf-αctaccttgttgcctcctctttgagcagaggttcagtgatgtag本实验对bv2细胞上的rpsa受体进行封闭，检测封闭对细胞激活的影响。结果如图3所示，封闭细胞表面rpsa后，细胞形态显示一定程度上抑制了bv2细胞的活化。另外，细胞因子il-1β、tnf-α在抗体封闭rpsa后也表现为转录水平降低，如图4所示。进一步说明rpsa的阻断可以一定程度上抑制细胞的感染与炎症应答。．抗rpsa抗体增强对链球菌感染小鼠的保护本实验检测了rpsa抗体对小鼠抵抗链球菌感染的保护率，对照组和实验组各10只icr小鼠，实验组提前半小时腹腔注射rpsa抗体，对照组仅给予无特异抗体的血清，0.2ml/只，然后各组均腹腔攻菌，攻菌量为1×107cfus/100μl只。对照组小鼠在感染后36小时仅剩2只存活，存活率为20%，实验组感染后炎症反应较轻，72小时仍有4只存活，保护率达到40%，直至观察1周结束。结论：rpsa抗体可用于调节机体和细胞的免疫应答。实施例2将rpsa抗体添加到细胞培养液，再进行细菌感染实验，可调节炎症细胞因子的产生量。实施例3将rpsa抗体提取分离igg，浓缩，冻干保存。腹腔注射，可用于调节小鼠对病原感染的炎症反应。实施例4以核糖体蛋白sa抗体为活性成分制成医学上的任何药物制剂。当前第1页1 2 3
技术特征：1.核糖体蛋白sa抗体在免疫调节中的医用用途。
2.一种利用rpsa抗体在体内或体外进行免疫调节的方法，包括以下步骤：
1）表达纯化rpsa蛋白，按2-20mg/次，多位点皮下注射免疫动物，每周1次，4-6次后试血；
2）elisa检测效价不低于10000时，进行无菌采血，经48-72小时沉淀，按总量的0.5%加入氯仿、1/万的2.5%的恩诺沙星水溶液，静置2-15℃冷暗处；
3）分离血清，提取igg，elisa检测效价不低于512，制成rpsa抗体；
4）将rpsa抗体皮下注射链球菌感染的动物，按体重1-5ml/kg用量，1次/天,连续3次，每次15ml~20ml，可抑制炎症应答强度；
或将rpsa抗体（按v/v=5%）添加至细胞培养液，抑制敏感细胞的炎症刺激，降低免疫应答。
3.以核糖体蛋白sa抗体为活性成分制成医学上的任何药物制剂。
技术总结本发明公开了核糖体蛋白SA抗体在免疫调节中的医用用途，公开了核糖体蛋白SA抗体新的医用用途，根据RPSA在病原粘附和侵袭宿主细胞中起到的重要作用，将RPSA作为靶点用于免疫调控，实现调控机体和细胞的免疫应答。本发明利用RPSA抗体能够有效阻止病原与RPSA的结合，降低某些病原对细胞的刺激和破坏，抑制细胞对病原做出的免疫应答；对某些免疫刺激较弱的病原，能适当增强免疫应答实现对免疫应答的调节作用；避免了由于病原感染经常发生而对于某些病原造成的过度免疫刺激往往加重病症的发生发展。
技术研发人员：雷连成;朱日宁;雷斯瑀;吴桐;姜合祥;张晓光;刘洪涛;李子亨
受保护的技术使用者：吉林大学
技术研发日：2020.04.13
技术公布日：2020.06.09
