本发明属于医药领域，具体涉及羧胺三唑类化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗或预防nlrp3炎症小体活化相关疾病的药物以及nlrp3炎症小体抑制剂中的应用。
背景技术：
固有免疫作为机体第一道屏障系统，对外来病原体的清除以及引导机体产生有效的适应性免疫应答具有至关重要的作用。固有免疫细胞可以通过模式识别受体(patternrecognitionreceptors,prrs)来识别病原相关分子模式(pathogen-associatedmolecularpattern,pamps)如脂多糖、肽聚糖、鞭毛蛋白等以及危险相关分子模式(danger-associatedmolecularpattern,damps)，如atp、尿酸、腺苷等。目前发现的prrs包括toll样受体(toll-likereceptor,tlr)、rig-i样受体(retinoicacid-induciblegenei(rig-i)-likereceptor,rlr)、nod样受体(nucleotide-bindingoligomerizationdomain(nod)-likereceptor,nlr)、黑色素瘤缺乏因子2(absentinmelanoma2,aim2)等。
炎症小体是一类在胞浆内由nlr或aim2参与组装的多蛋白复合物，是固有免疫的重要组成部分。当受体(nlr或aim2)识别pamp或damp时，能够招募asc(apoptosis-associatedspeck-likeproteincontainingacard)蛋白、caspase-1前体(pro-caspase-1)形成巨大的蛋白复合体即“炎症小体”，并使pro-caspase-1在其中被水解为有活性的caspase-1，活化的caspase-1能够将无活性的pro-il-1β、pro-il-18和pro-il-33切割为成熟形式分泌并引起细胞焦亡。炎症小体以受体命名，现已发现多种炎症小体，识别的外界信号各有不同，还有一些炎症小体的功能尚不清楚。目前研究较多的炎症小体包括nlrpl、nlrp3、nlrc4和aim2炎症小体，而其中对nlrp3炎症小体的研究最为系统和深入(非专利文献1～3)。
除了能被细菌或病毒等病原体激活，更为重要的是，炎症小体还会被多种危险信号或代谢产物等所激活，促进il-1β和il-18大量释放，从而引起组织损伤和慢性炎症。越来越多的研究发现，炎症小体的功能异常与多种疾病的发生发展密切相关。近年来，炎症小体在由先天性免疫失调介导的自身炎症性疾病以及自身免疫性疾病的研究中取得重大进展。此外，炎症小体也参与调控其他许多疾病，如代谢综合征、动脉粥样硬化、痛风、阿尔茨海默病等。研究证实，一些代谢产物和代谢效应物可以启动nlrp3炎症小体的活化，并导致代谢综合症的发生。同样，动脉粥样硬化也被证实与nlrp3炎症小体的活化密切相关，几种重要的动脉粥样硬化病理物质包括胆固醇结晶、氧化性低密度脂蛋白(oxldl)等都被证实参与到nlrp3炎症小体的活化，进而导致动脉粥样硬化血管病灶部位的慢性炎症累积以及血管形态病理学变化。此外，尿酸结晶、β淀粉样多肽(aβ)等也被证实激活nlrp3炎症小体，引起慢性炎症并导致痛风、阿尔茨海默病的病理发生(非专利文献4～6)。因此，靶向炎症小体已成为相关疾病治疗药物开发的前沿热点。
羧胺三唑已知是一种新型的抗肿瘤药物，化学名为5-氨基-1-{[3,5-二氯-4-(4-氯苯甲酰基)苯基]甲基}-1h-1,2,3-三唑-4-甲酰胺，化学结构式为：
在专利文献1中，公开了该化合物具有抗肿瘤作用。另外，在专利文献2中，公开了羧胺三唑或其可药用的盐具有预防和/或治疗矽肺的作用。
然而，迄今为止，并没有关于羧胺三唑类化合物或其药学上可接受的盐用于治疗炎症小体活化相关疾病以及作为nlrp3炎症小体抑制剂方面的报道。
现有技术文献
专利文献
专利文献1：欧洲专利ep0644880
专利文献2：中国专利cn101919843
非专利文献
非专利文献1：brozp,dixitvm.inflammasomes:mechanismofassembly,regulationandsignalling.natrevimmunol.2016,16(7):407-20.
非专利文献2：lua,wuh.structuralmechanismsofinflammasomeassembly.febsj.2015,282(3):435-44.
非专利文献3：vanajask,rathinamva,fitzgeraldka.mechanismsofinflammasomeactivation:recentadvancesandnovelinsights.trendscellbiol.2015,25(5):308-15.
非专利文献4：martinonf,pétrilliv,mayora,tardivela,tschoppj.gout-associateduricacidcrystalsactivatethenalp3inflammasome.nature.2006,440(7081):237-41.
非专利文献5：casselsl,eisenbarthsc,iyerss,sadlerjj,colegioor,tephlyla,carterab,rothmanpb,flavellra,sutterwalafs.thenalp3inflammasomeisessentialforthedevelopmentofsilicosis.procnatlacadsciusa.2008,105(26):9035-40.
非专利文献6：patelmn,carrollrg,galván-
技术实现要素：
发明所要解决的问题
如上所述，炎症小体参与并调控了多种疾病，因此，期望开发出新的以炎症小体为靶点的对于多种疾病的治疗有效的药物。即，本发明的目的在于，提供新的治疗或预防nlrp3炎症小体活化相关疾病的方法以及抑制nlrp3炎症小体的活化的方法，更具体而言，提供对nlrp3炎症小体活化相关疾病有效的预防/治疗剂以及nlrp3炎症小体抑制剂。
用于解决问题的方法
为了解决上述问题，本发明人经过反复深入研究后发现，羧胺三唑类化合物或其药学上可接受的盐对于抑制nlrp3炎症小体的活化以及nlrp3炎症小体活化相关疾病的预防/治疗有效，从而完成了本发明。即，本发明涉及下述的(1)～(4)。
(1)下述式(a)所示的羧胺三唑类化合物或其药学上可接受的盐在制备治疗或预防nlrp3炎症小体活化相关疾病的药物中的应用，
式中，x表示ch2、s、o或c＝o；r4表示cl、cf3、br或ch3；r5表示cl、br或no2。
(2)根据上述(1)所述的应用，其中，所述羧胺三唑类化合物为以下结构式所示的5-氨基-1-{[3,5-二氯-4-(4-氯苯甲酰基)苯基]甲基}-1h-1,2,3-三唑-4-甲酰胺，即羧胺三唑。
(3)根据上述(1)所述的应用，其中，所述药学上可接受的盐选自由乳清酸盐、盐酸盐、硫酸盐和醋酸盐组成的组中的任意一种以上。
(4)根据上述(3)所述的应用，其中，所述药学上可接受的盐为乳清酸盐。
(5)根据上述(4)所述的应用，其中，所述羧胺三唑类化合物的乳清酸盐为以下结构式所示的羧胺三唑的乳清酸盐，
(6)根据上述(1)～(5)中任一项所述的应用，其中，所述nlrp3炎症小体活化相关疾病为选自败血症、结肠炎相关性肿瘤(或炎症性肠病癌变)、慢性炎症癌变、代谢综合征、胰岛素抵抗、高脂血症与肥胖、高血压、心力衰竭、外伤性脑损伤、急性脑部感染、脑脓肿、自发性脑内出血、恶性胶质瘤、癫痫持续状态、实验性自身免疫性脑脊髓炎、闭塞性主动脉疾病、病毒性肝炎、扑热息痛诱导肝损伤、酒精性和非酒精性脂肪性肝病、酒精性肝损伤、肝纤维化与肝硬化、急性肾损伤、慢性肾脏疾病、慢性肾小球肾炎、高同型半胱氨酸血症相关的肾病、自身免疫性肾病、抗中性粒细胞胞质抗体相关性血管炎肾脏损伤、肾小管间质损伤、恶性间皮瘤、肺尘埃沉着症、哮喘、慢性阻塞性肺病、肺结核、嗜中性皮肤病、sweet综合征、坏疽性脓皮病、白癜风、寻常痤疮、反常性痤疮、红斑痤疮、化脓性汗腺炎、特应性皮炎、过敏性接触性皮炎、压力性溃疡、雄激素性脱发、黄斑变性、急性青光眼、干眼症、肿瘤的化疗耐药、热射病和热应激损伤中的任意一种以上。
(7)根据上述(6)所述的应用，其中，所述nlrp3炎症小体活化相关疾病为选自败血症、结肠炎相关性肿瘤、慢性炎症癌变中的任意一种以上。
(8)下述式(a)所示的羧胺三唑类化合物或其药学上可接受的盐在制备nlrp3炎症小体抑制剂中的应用，
式中，x表示ch2、s、o或c＝o；r4表示cl、cf3、br或ch3；r5表示cl、br或no2。
(9)根据上述(8)所述的应用，其中，所述羧胺三唑类化合物为以下结构式所示的5-氨基-1-{[3,5-二氯-4-(4-氯苯甲酰基)苯基]甲基}-1h-1,2,3-三唑-4-甲酰胺，即羧胺三唑。
(10)根据上述(8)所述的应用，其中，所述药学上可接受的盐选自由乳清酸盐、盐酸盐、硫酸盐和醋酸盐组成的组中的任意一种以上。
(11)根据上述(10)所述的应用，其中，所述药学上可接受的盐为乳清酸盐。
(12)根据上述(11)所述的应用，其中，所述羧胺三唑类化合物的乳清酸盐为以下结构式所示的羧胺三唑的乳清酸盐，
发明效果
根据本发明，能够提供含有羧胺三唑类化合物或其盐作为有效成分的对于nlrp3炎症小体活化相关疾病有效的新的预防/治疗剂。此外，根据本发明，能够提供新的治疗或预防nlrp3炎症小体活化相关疾病的方法。
附图说明
图1a～图1f显示了cai(carboxyamidotriazole，羧胺三唑)可直接与nlrp3结合。图1a：人nlrp3受体与模板蛋白(5irm的a链)序列比对图；图1b：人nlrp3受体模型拉氏图；图1c：人nlrp3受体与cai的autodockvina对接结果(亲和力：-9.8kcal/mol)；图1d：模拟过程中蛋白质骨架原子的均方根偏差(rmsd)；图1e和图1f：分子动力学模拟后所得构象。
图2显示了nlrp3受体与cai以及阳性药cy-09进行对接的比较图。图2a：人nlrp3受体与cai的对接图；图2b：参考文献中(identificationofaselectiveanddirectnlrp3inhibitortotreatinflammatorydisorders.jexpmed.2017，214(11):3219-3238.)人nlrp3受体与cy-09的对接图。
图3显示了cai对nlrp3atpase活性的影响。**p<0.01，***p<0.001。
图4显示了cai对lps atp诱导的小鼠骨髓来源巨噬细胞(bmdm)中nlrp3炎症小体活化的影响。图4a：酶联免疫吸附分析法(elisa)测定细胞上清中il-1β含量；图4b：蛋白质免疫印迹(westernblot)法检测caspase-1成熟体和il-1β的表达水平。**p<0.01，***p<0.001，****p<0.0001。
图5显示了cai对lps 尿酸盐晶体(msu)诱导的小鼠bmdm中nlrp3炎症小体活化的影响。*p<0.05，**p<0.01。
图6显示了cai对lps 尼日利亚菌素(nigericin)诱导的小鼠bmdm中nlrp3炎症小体活化的影响。*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001，****p<0.0001。
图7a～图7c显示了cai预给药对lps 尼日利亚菌素诱导的小鼠bmdm中nlrp3炎症小体活化及其导致的细胞焦亡的影响。图7a：elisa测定细胞上清中il-1β含量；图7b：westernblot法检测caspase-1成熟体和il-1β的表达水平；图7c：乳酸脱氢酶(ldh)细胞毒性检测试剂盒检测细胞焦亡。*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001。
图8显示了cai对lps 尼日利亚菌素诱导的正常人外周血单核细胞(pbmc)中nlrp3炎症小体活化的影响。*p<0.05，**p<0.01。
图9显示了cai对nlrp3基因突变导致的nlrp3炎症小体持续活化的影响。*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001。
图10显示了cai对lps atp刺激后小鼠bmdm中nlrp3炎症小体关键蛋白表达的影响。
图11显示了cai对lps诱导的c57bl/6小鼠中nlrp3炎症小体活化模型的影响。图11a：小鼠血清中il-1β水平。图11b：小鼠血清中tnf-α水平。*p<0.05，**p<0.01。
图12显示了cai对氧化偶氮甲烷(azoxymethane,aom)联合葡聚糖硫酸钠(dextransulfatesodium,dss)诱导的小鼠结肠炎相关性肿瘤(colitis-associatedcancer,cac)发生的影响。图12a：cac模型建立和给药方式的示意图；图12b：肿瘤的数量；图12c：肿瘤的大小(平均直径，tumorsize)；图12d：＞2mm肿瘤的数量；图12e：肿瘤的负荷量(直径之和，tumorload)。**p<0.01，***p<0.001,****p<0.0001。
图13显示了羧胺三唑乳清酸盐(carboxyamidotriazoleorotate,cto)对lps 尼日利亚菌素诱导的小鼠bmdm中nlrp3炎症小体活化的影响。图13a：elisa测定细胞上清中il-1β含量；图13b：westernblot法检测caspase-1成熟体和il-1β的表达水平。*p<0.05，**p<0.01。
具体实施方式
本发明中所述的羧胺三唑类化合物包括羧胺三唑及其类似物、衍生物。具体而言，本发明中所述的羧胺三唑类化合物包括具有下述式(i)所示结构的化合物：
其中，r1具有式(ii)结构：
其中，p为0到2的整数；m是0到4的整数；n为0到5的整数；x可以是o、s、so、so2、c＝o、chcn、ch2或c＝nr6；
其中，r6为氢、(c1-c6)链烷基、羟基、(c1-c6)链烷氧基、氨基、(c1-c6)链烷氨基、二烷氨基或氰基；
r4和r5分别为卤素、氰基、三氟甲基、(c1-c6)链烷酰基、硝基、(c1-c6)链烷基、(c1-c6)链烷氧基、羰基、烷酯基、三氟甲氧基、乙酰氨基、(c1-c6)链烷硫基、(c1-c6)链烷基磺酰基、三氯乙烯基、三氟甲硫基、三氟甲基亚磺酰基或三氟甲基磺酰基；
r2为氨基、(c1-c6)链烷氨基、二烷氨基、乙酰氨基、乙酰亚胺、脲基酰基、甲酰氨基、甲酰亚胺或胍基；
r3为胺甲酰基、氰基、氨基甲酰基、亚胺基或n-羟基氨甲酰基。
作为更具体的式(i)所示的羧胺三唑类化合物，在式(ii)中，n和m分别为0、1或2；p为1；x是o、s、c＝o或ch2；r4为氟、氯、溴、甲基、三氟甲基、氰基、甲氧羰基、三氟甲氧基、三氟甲硫基、硝基或三氯乙烯基；r5是氯、溴、氟、甲基、三氟甲基、氰基、烷酯基、三氟乙烯基或硝基。
作为更具体的式(i)所示的羧胺三唑类化合物，具有如下式(a)所示的结构式：
式中，x是ch2、s、o或c＝o；r4是cl、cf3、br或ch3；r5是cl、br或no2。
作为更具体的式(i)所示的羧胺三唑类化合物，为以下结构式所示的5-氨基-1-{[3,5-二氯-4-(4-氯苯甲酰基)苯基]甲基}-1h-1,2,3-三唑-4-甲酰胺，即羧胺三唑(carboxyamidotriazole，以下有时简称为cai)。
作为羧胺三唑类化合物的药学上可接受的盐，可以列举乳清酸盐、盐酸盐、硫酸盐或醋酸盐。与羧胺三唑类化合物相比，羧胺三唑类化合物的乳清酸盐的溶解度更高，具有更低的毒性、更高的口服生物利用度和血药峰浓度(cmax)，并且其血药浓度达峰时间更短(例如可参见comparativepharmacokineticprofileofcarboxyamidotriazoleandcarboxyamidotriazole-orotate.cancertherapy.2007；vol5:437–442等)，因此，本发明的羧胺三唑类化合物的药学上可接受的盐优选为羧胺三唑类化合物的乳清酸盐。其中，更优选为具有以下结构式的cai的乳清酸盐(carboxyamidotriazoleorotate,cto)。
本发明包括上述羧胺三唑类化合物或其药学上可接受的盐在制备治疗或预防nlrp3炎症小体活化相关疾病的药物中的应用。
目前发现的四种经典炎症小体分别是nlrp1，nlrp3，nlrc4和aim2，其中研究最为深入的是nlrp3炎症小体。其活化基本过程分为两步，分别受到两个信号的调控。首先toll样受体4(toll-likereceptor4,tlr4)识别第一信号(如脂多糖(lipopolysaccharide,lps)，激活下游的nf-kb通路从而启动il-1β前体(pro-il-1β)，pro-il-18的转录表达；nlrp3炎症小体识别第二信号如atp、细胞毒素尼日利亚菌素或尿酸盐晶体(monosodiumuratecrystals,msu)等，进而招募asc蛋白、caspase-1前体(pro-caspase-1)形成nlrp3炎症小体复合物并使pro-caspase-1被水解为有活性的caspase-1，活化的caspase-1能够将无活性的pro-il-1β、pro-il-18和pro-il-33切割为成熟形式并分泌。
目前，已经发现的与nlrp3炎症小体活化相关的疾病包括：败血症、结肠炎相关性肿瘤(colitisassociatedcancer，cac)(炎症性肠病癌变)、代谢综合征(metabolicsyndrome)，2型糖尿病(type2diabetes，t2d)及相关并发症，胰岛素抵抗，动脉粥样硬化(atherosclerosis)，高脂血症与肥胖(hyperlipidaemiaandobesity)，高血压(hypertension)，心力衰竭，痛风，痛风性关节炎(goutyarthritis)，缺血性脑损伤(ischemicbraininjury)，外伤性脑损伤(traumaticbraininjury)，急性脑部感染，脑脓肿，缺血性脑卒中(ischemiastroke)，自发性脑内出血(spontaneousintracerebralhemorrhage，ich)，恶性胶质瘤(malignantglioma)，癫痫持续状态(statusepilepticus，se)，实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimentalautoimmuneencephalomyelitis，eae)，阿尔茨海默病(alzheimer’sdisease，ad)，帕金森病(parkinson’sdisease，pd)，肌萎缩侧索硬化症(amyotrophiclateralsclerosis，als)，多发性硬化症(multiplesclerosis，ms)，闭塞性主动脉疾病(aorticocclusivedisease,aod)，结肠炎(colitis)，克罗恩病(crohn'sdisease，cd)，慢性炎症癌变，病毒性肝炎，扑热息痛诱导肝损伤(acetaminophen-inducedliverinjury)，酒精性和非酒精性脂肪性肝病，酒精性肝损伤，肝纤维化与肝硬化，急性肾损伤(acutekidneyinjury,aki)，慢性肾脏疾病(chronickidneydisease,ckd)，慢性肾小球肾炎(chronicglomerulonephritis，gn)，高同型半胱氨酸血症相关的肾病(hyperhomocysteinemicnephropathy)，自身免疫性肾病，抗中性粒细胞胞质抗体相关性血管炎肾脏损伤，肾小管间质损伤，恶性间皮瘤(malignantmesothelioma，mm)，肺尘埃沉着症(简称尘肺)，肺纤维化(pulmonaryfibrosis)，哮喘(asthma)，慢性阻塞性肺病(chronicobstructivepulmonarydiseases，copd)，肺结核，嗜中性皮肤病，sweet综合征(sweetsyndrome)，坏疽性脓皮病(pyodermagangrenosum)，银屑病(psoriasis)，白塞病(behcet’sdisease，bd)，白癜风，寻常痤疮，反常性痤疮，红斑痤疮(rosacea)，化脓性汗腺炎(hidradenitissuppurativa，hs)，特应性皮炎(atopicdermatitis)，过敏性接触性皮炎(allergiccontactdermatitis，acd)，压力性溃疡(pressureulcer)，雄激素性脱发(androgeneticalopecia)，黄斑变性，急性青光眼，干眼症，肿瘤的化疗耐药，放疗引起的放射性肺炎及肺纤维化，热射病(heatstroke，hs)，热应激损伤，缺血再灌注损伤等。
此外，本发明包括上述羧胺三唑类化合物或其药学上可接受的盐在制备nlrp3炎症小体抑制剂中的应用。
此外，本发明包括治疗患有nlrp3炎症小体活化相关疾病的患者的方法，该方法包括向患者给药有效量的羧胺三唑类化合物或其药学上可接受的盐的步骤。
所使用的剂量当然随被治疗的具体疾病以及其它因素而定，其它因素包括年龄、体重、健康状况、症状的严重程度、给药途径、治疗的频率和在治疗期间是否伴随其它的药物。通过本领域普通技术人员已知的常规方法可以容易地确定活性化合物的使用剂量。对于本发明的羧胺三唑类化合物或其药学上可接受的盐而言，成人日剂量通常在约10mg～300mg范围内，优选在约50mg～200mg范围内。例如，可以口服给予患有nlrp3炎症小体活化相关疾病的人日总剂量为50mg～200mg之间的本发明的羧胺三唑类化合物。或者，可以直肠给予患有nlrp3炎症小体活化相关疾病的人日总剂量在50mg～200mg之间的本发明的羧胺三唑类化合物。
此外，本发明还包括包含本发明的羧胺三唑类化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物。更具体地说，可以使用标准的本领域技术人员所熟知的药学上可接受的载体、填料、增溶剂和稳定剂等将羧胺三唑类化合物或其药学上可接受的盐配制成药物组合物。
包含羧胺三唑类化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物通过多种途径中的任一种给予需要这种药物的个体，包括但不限于，局部、口服、静脉内、肌内、动脉内、髓内、鞘内、心室内、经皮、皮下、腹膜内、鼻内、肠、局部、舌下或直肠方式。
口服制剂可以是固体制剂如片剂、胶囊、散剂、颗粒剂、或液体制剂如溶液、悬浮液等。适合口服给药的制剂可含有药学上可接受的载体或赋形剂。药学上可接受的适合于固体制剂(如片剂或胶囊)的载体或赋形剂可以是：例如粘合剂(如阿拉伯胶、明胶、糊精、羟丙基纤维素、甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮)、稀释剂(如乳糖、蔗糖、甘露醇、玉米淀粉、马铃薯淀粉、磷酸钙、柠檬酸钙、结晶纤维素)、润滑剂(如硬脂酸镁、硬脂酸钙、硬脂酸、滑石粉、无水硅胶)、崩解剂(如玉米淀粉、马铃薯淀粉、羧甲基纤维素、羧甲基纤维素钙、藻酸)和湿润剂(如十二烷基硫酸钠)。适合于液体制剂(如溶液或悬浮液)的药学上可接受的载体或赋形剂可以是：例如水性溶酶(如水)、悬浮剂(如阿拉伯胶、明胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、羟甲基纤维素、硬脂酸铝凝胶)、表面活性剂(如卵磷脂、山梨糖醇酐单油酸酯、单硬脂酸甘油酯)及非水性溶酶(如聚乙二醇400、甘油、丙二醇、植物油)。此外，液体制剂可含有防腐剂(如对羟苯甲酸甲酯、对羟苯甲酸丙酯)、调味剂和/或着色剂。
肠内灌注制剂(灌肠剂)可以是使用上述水溶酶或悬浮剂制备的水溶液或悬浮液剂型。必要时，灌肠剂可以是使用增稠剂如聚丙烯酸、明胶等而制备的溶胶或凝胶制剂。
栓剂可以用常规的方法通过混合羧胺三唑或其药学上可接受的盐、类似物、衍生物与市售油性基质如witepsole等或水溶性基质如聚乙二醇、甘油、明胶等制得。栓剂可以是胶囊剂型栓剂、片剂型栓剂或软膏剂型栓剂。
外用制剂可以包括外用散剂、软膏剂、乳膏剂等。
实施例
以下通过实施例的方式进一步说明本发明，但本发明不受下述实施例的限定。
首先，采用分子对接方法检测cai是否可直接与nlrp3结合并进而影响nlrp3atpase酶活性。
随后，分别在体外细胞水平和整体动物水平中，通过建立nlrp3炎症小体活化模型，检测cai对nlrp3炎症小体活化的影响。体外细胞水平的模型包括化学诱导剂诱导的模型以及由于nlrp3基因突变导致的nlrp3炎症小体持续活化模型：在化学诱导模型中选取了lps作为第一信号，atp或尼日利亚菌素或msu作为第二信号建立经典的nlrp3炎症小体活化模型；nlrp3基因突变导致的nlrp3炎症小体持续活化模型选择冷炎素相关周期热综合征(cryopyrin-associatedperiodicsyndromes,caps)-muckle-wells综合征(mws)患者外周血单核细胞(peripheralbloodmononuclearcell,pbmc)。动物水平上，在c57bl/6小鼠建立lps诱导的败血症模型。这些均是大量文献报道的具有代表性的细胞和动物水平nlrp3炎症小体活化模型。通过检测il-1β以及caspase-1成熟体的水平来评价nlrp3炎症小体的活化情况及cai对nlrp3炎症小体活化的抑制作用。
在明确cai对nlrp3炎症小体活化的抑制作用之后，建立了氧化偶氮甲烷(azoxymethane,aom)联合葡聚糖硫酸钠(dextransulfatesodium,dss)诱导的小鼠cac模型来评价cai的治疗作用，由此探讨cai在nlrp3炎症小体活化相关疾病治疗中的应用价值。。
实施例1cai可直接与nlrp3结合并抑制nlrp3atpase酶活性
使用nlrp3同源模建及与cai的分子对接来确定cai和nlrp3的相互结合。
以兔nod2inanadp-boundstate蛋白(pdb登记号为5irm)的a链为模板，运用同源模建的方法构建人nlrp3模型，利用拉氏图分析验证其模型的合理性。采用autodockvina将cai与nlrp3进行对接，受体文件由autodocktools软件经加氢、指定原子类型、加kollman电荷处理得到，配体文件同样通过autodocktools处理得到，采用vina进行对接，搜索空间设为
如图1a所示，将模板蛋白(5irm的a链)与nlrp3进行序列比对，序列同源性(sequenceidentity)为19％，序列相似性(sequencepositive)为31％。如图1b拉氏图所示，大部分残基都位于核心区域和允许区域(favoredregionandallowedregion)，说明构建结构合理。采用autodockvina将cai与nlrp3进行对接，图1c显示人nlrp3受体与cai对接图。对对接结果进行分子动力学研究，如图1d所示，在20ns的模拟时间中体系趋于平衡，说明所得轨迹可用于后续分析。图1e显示分子动力学模拟后所得构象，由图1f可见目标化合物与ile521,met523和thr524形成氢键，且其五元杂环与his522和arg351形成极性作用，另一侧含氯苯环则处于val162,ile234,pro412,trp416,phe446,phe575等残基形成的疏水口袋中。为与阳性药cy-09进行比较，调整角度，如图2所示，cai的作用位点与cy-09一致，均是在磷酸化位点，只是分子的朝向有所不同。上述结果提示，cai可以直接与nlrp3受体相结合，从而发挥作用。
进一步，检测cai与nlrp3的结合是否影响nlrp3atpase酶活性。将纯化的重组人nlrp3蛋白(0.105ug，novus公司，h00114548-p01-2ug)与不同浓度cai在25μl反应缓冲液中混匀，37℃孵育15分钟，然后加入250μmatp到反应体系中，37℃再孵育40分钟。采用adp-glo激酶检测试剂盒(promega公司，v9101)测定发光度值以确定atp转化为adp的量，从而反映nlrp3atpase的活性，具体操作按产品说明书进行。
如图3所示，cai(5、10、20、40μm)均可明显抑制nlrp3atpase活性(p<0.01和p<0.001)。上述结果说明cai可直接与nlrp3结合并抑制nlrp3atpase活性。
实施例2cai对lps atp诱导的小鼠骨髓来源的巨噬细胞(bonemarrow–derivedmacrophage,bmdm)中nlrp3炎症小体活化的抑制作用
在小鼠bmdm中建立lps atp诱导的nlrp3炎症小体活化模型，评价cai的作用。
分离培养c57bl/6小鼠bmdm，用含1％胎牛血清的rpmi-1640培养基配制细胞悬液，按终密度1×106个/ml接种于24孔板中，每孔500μl。实验分为：对照组(con)，nlrp3炎症小体活化模型组(即lps atp组)(lps：sigma公司，l4391；atp：sigma公司，a6419)和cai处理组(即lps atp cai5μm组，lps atp cai10μm组，lps atp cai20μm组以及lps atp cai40μm组)。对照组加入500μl培养基，nlrp3炎症小体活化模型组和cai处理组加入500ul含lps的培养基(lps的终浓度为10ng/ml)。置于37℃，5％co2细胞培养箱中培养3小时后，nlrp3炎症小体活化模型组加入atp(终浓度为5mm)，cai处理组加入atp(终浓度为5mm)和cai(终浓度分别为5μm、10μm、20μm和40μm)，继续孵育1小时后收集各组细胞上清，冻存于-20℃。采用elisa法测定细胞上清中白介素(il-1β)水平，并采用甲醇氯仿提纯法提取上清中蛋白后利用westernblot法检测caspase-1成熟体和il-1β的表达水平，以评价各组中nlrp3炎症小体的活化情况。
如图4a的elisa结果显示，bmdm细胞经lps和atp刺激后，其上清中il-1β含量与对照组相比显著增加(p<0.01)，而cai(20、40μm)处理组上清中il-1β水平明显减低，抑制率分别为27.40％(p<0.001)和64.86％(p<0.0001)。提示，cai对lps atp诱导的nlrp3炎症小体的活化具有明显抑制作用。
如图4b的westernblot结果所示，bmdm细胞经lps和atp刺激后，其上清中caspase-1成熟体和il-1β的表达水平与对照组相比显著增加，而cai各处理组的caspase-1成熟体以及il-1β的蛋白水平明显降低，且呈剂量依赖性下降。上述结果进一步证实，cai对lps atp诱导的nlrp3炎症小体的活化具有明显抑制作用。
实施例3cai对lps msu诱导的小鼠bmdm中nlrp3炎症小体活化的抑制作用
在小鼠bmdm中建立lps msu诱导的nlrp3炎症小体活化模型，评价cai的作用。
分离培养小鼠bmdm，用含1％胎牛血清的rpmi-1640培养基配制细胞悬液，按终密度1×106个/ml接种于24孔板中，每孔500μl。实验分为：对照组(con)，nlrp3炎症小体活化模型组(即lps msu组)(msu：santacruz公司，1198-77-2)和cai处理组(即lps msu cai5μm组，lps msu cai10μm组，lps msu cai20μm组以及lps msu cai40μm组)。对照组加入500μl培养基，nlrp3炎症小体活化模型组和cai处理组加入500μl含lps的培养基(lps的终浓度为10ng/ml)。置于37℃，5％co2细胞培养箱中培养3小时后，nlrp3炎症小体活化模型组加入msu(终浓度200μg/ml)，cai处理组加入msu(终浓度为200μg/ml)和cai(终浓度分别为5μm、10μm、20μm和40μm)，继续孵育12小时后收集各组细胞上清，冻存于-20℃。采用elisa法测定细胞上清中il-1β水平以评价nlrp3各组中炎症小体的活化情况。
如图5所示，bmdm细胞经lps和msu刺激后，其上清中il-1β含量与对照组相比显著增加(p<0.01)，而cai(10、20、40μm)可以明显抑制il-1β的释放，抑制率分别为40.32％(p<0.05)，49.70％(p<0.01)和38.38％(p<0.05)。结果提示，cai对lps msu诱导的nlrp3炎症小体的活化具有显著抑制作用。
实施例4cai对lps 尼日利亚菌素诱导的小鼠bmdm中nlrp3炎症小体活化的抑制作用
在小鼠bmdm中建立lps 尼日利亚菌素诱导的nlrp3炎症小体活化模型，评价cai的作用。
分离培养小鼠bmdm，用含1％胎牛血清的rpmi-1640培养基配制细胞悬液，按终密度1×106个/ml接种于24孔板中，每孔500μl。实验分为：对照组(con)，nlrp3炎症小体活化模型组(即lps 尼日利亚菌素组)(尼日利亚菌素：invivogen公司，tlrl-nig)和cai处理组(即lps 尼日利亚菌素 cai5μm组，lps 尼日利亚菌素 cai10μm组，lps 尼日利亚菌素 cai20μm组以及lps 尼日利亚菌素 cai40μm组)。对照组加入500μl培养基，nlrp3炎症小体活化模型组和cai处理组加入500μl含lps的培养基(lps的终浓度为10ng/ml)。置于37℃，5％co2细胞培养箱中培养3小时后，nlrp3炎症小体活化模型组加入尼日利亚菌素(终浓度为10μm)，cai处理组加入尼日利亚菌素(终浓度为10μm)和cai(终浓度分别为5μm、10μm、20μm和40μm)，继续孵育1小时后收集各组细胞上清，冻存于-20℃。采用elisa法测定细胞上清中il-1β水平以评价nlrp3各组中炎症小体的活化情况。
如图6所示，bmdm细胞经lps和尼日利亚菌素刺激后，其上清中il-1β含量与对照组相比显著增加(p<0.01)，而cai(10、20、40μm)可以明显抑制il-1β的释放，抑制率分别为10.83％(p<0.05)，15.02％(p<0.001)和50.78％(p<0.0001)。提示，cai对lps 尼日利亚菌素诱导的nlrp3炎症小体的活化具有显著抑制作用。
实施例5cai预给药对lps 尼日利亚菌素诱导的小鼠bmdm中nlrp3炎症小体活化及其导致的细胞焦亡的抑制作用
除cai给药方式以外，实验方法和分组同实施例4。本实施例中，cai给药方式为预给药，具体为：lps预处理小鼠bmdm3小时后，加入cai处理30分钟，然后再加入尼日利亚菌素孵育1小时。采用elisa法测定细胞上清中il-1β水平，并采用westernblot法检测上清中caspase-1成熟体和il-1β的表达水平，以评价nlrp3炎症小体的活化情况。
细胞焦亡实验中，按1×105个细胞/孔的密度在96孔板中接种bmdm，lps预处理3小时后，加入不同浓度cai(终浓度为5μm、10μm、20μm和40μm)处理30分钟，然后再加入尼日利亚菌素刺激1小时。用ldh细胞毒性检测试剂盒(promega公司，g1780)评估细胞焦亡情况。
如图7a～图7c所示，cai(10、20、40μm)预给药可以明显抑制lps 尼日利亚菌素诱导的il-1β的释放，抑制率分别为34.23％(p<0.05)，70.11％(p<0.001)和96.16％(p<0.0001)(图7a)，对caspase-1成熟体以及il-1β的蛋白水平的升高亦有明显降低(图7b)。另外，cai(20、40μm)预给药可以减少nlrp3炎症小体活化导致的细胞焦亡，抑制率分别为38.45％(p<0.01)和28.34％(p<0.05)(图7c)。该结果提示，cai预给药对尼日利亚菌素诱导的nlrp3炎症小体活化及其引起的细胞焦亡具有显著抑制作用。
实施例6cai对lps 尼日利亚菌素诱导的人pbmc中nlrp3炎症小体活化的抑制作用
上述nlrp3炎症小体活化模型均是在小鼠bmdm中建立，接着在人pbmc中建立lps 尼日利亚菌素诱导的nlrp3炎症小体活化模型，由此进一步确认cai对nlrp3炎症小体活化的抑制作用。
常规分离正常人pbmc，用含10％胎牛血清的dmem培养基配制细胞悬液，按终密度2×106个/ml接种于24孔板中，每孔500μl。实验分为：对照组(con)，nlrp3炎症小体活化模型组(即lps 尼日利亚菌素组)和cai处理组(即lps 尼日利亚菌素 cai40μm组)。对照组加入500μl培养基，nlrp3炎症小体活化模型组和cai处理组加入500μl含lps的培养基(lps的终浓度为10ng/ml)。置于37℃，5％co2细胞培养箱中培养3小时后，nlrp3炎症小体活化模型组加入尼日利亚菌素(终浓度为10μm)，cai处理组加入尼日利亚菌素(终浓度为10μm)和cai(终浓度为40μm)，继续孵育1小时后收集各组细胞上清，冻存于-20℃。采用elisa法测定细胞上清中il-1β水平以评价nlrp3炎症小体的活化情况。
如图8所示，pbmc细胞经lps和尼日利亚菌素刺激后，其上清中il-1β含量与对照组相比显著增加(p<0.01)，而cai处理组可以明显抑制il-1β的释放，抑制率为36.51％，具有统计学意义(p<0.05)。提示，cai对人pbmc中lps 尼日利亚菌素诱导的nlrp3炎症小体的活化具有显著抑制作用。
实施例2～6的结果证实，cai对小鼠bmdm以及人pbmc中三种经典的化学诱导剂(lps atp，lps msu，lps 尼日利亚菌素)诱导的nlrp3炎症小体活化模型均具有明显抑制作用，cai是nlrp3炎症小体的特异性抑制剂。
实施例7cai对nlrp3基因突变导致的nlrp3炎症小体持续活化的抑制作用
上述nlrp3炎症小体活化模型均是采用化学诱导剂诱导建立，接着在nlrp3基因突变导致的nlrp3炎症小体持续活化模型中，进一步确认cai对nlrp3炎症小体活化的抑制作用。
caps是由于nlrp3基因突变导致nlrp3炎症小体持续活化引起，其特点是il-1β增多，导致炎症的周期性发作。caps根据临床表现由轻到重，分为家族性寒冷性自身炎症综合征(fcas)、mws和慢性婴儿神经皮肤关节综合征(nomid/cinca)。本研究选取的是caps-mws患者pbmc。
常规分离正常人以及caps-mws患者pbmc，用含10％胎牛血清的dmem高糖培养基配制细胞悬液，以2×106个细胞/孔接种于24孔板中。实验分组如下：
(1)正常对照组(con)：正常人pbmc，只加入培养基，不作任何处理；
(2)caps组：caps只加入培养基；
(3)cai处理组：加入终浓度为40μm的cai；
(4)lps组：加入lps(终浓度1μg/ml)；
(5)lps cai10μm组：同时加入lps(终浓度1μg/ml)和cai(终浓度10μm)；
(6)lps cai20μm组：同时加入lps(终浓度1μg/ml)和cai(终浓度20μm)；
(7)lps cai40μm组：同时加入lps(终浓度1μg/ml)和cai(终浓度40μm)。
置37℃、5％co2培养箱培养3小时后收集细胞上清，冻存于-20℃。采用elisa法测定细胞上清中il-1β的水平以评价各组中炎症小体的活化情况。
如图9所示，与正常人pbmc相比，caps-mws患者pbmc分泌的il-1β水平明显升高(p<0.05)，给予40μmcai可以明显降低上清中il-1β的水平，抑制率为85.95％，具有显著性差异(p<0.01)。caps-mws患者pbmc细胞经lps刺激后，分泌的il-1β水平显著增加(p<0.01)，而cai(10，20，40μm)可以显著抑制lps诱导的il-1β的分泌，抑制率分别达到74.15％(p<0.001)，73.11％(p<0.01)以及93.42％(p<0.001)。提示，cai对由于nlrp3基因突变导致的nlrp3炎症小体的自发持续活化具有显著抑制作用。
实施例8cai不影响nlrp3炎症小体关键蛋白的表达
分离培养c57bl/6小鼠bmdm，用含1％胎牛血清的rpmi-1640培养基配制1×106个/ml细胞悬液，按每孔500μl接种于24孔板中，同时每孔加入500μl含lps的培养基(lps的终浓度为10ng/ml)。置于37℃，5％co2细胞培养箱中培养3小时后，nlrp3炎症小体活化模型组加入atp(终浓度为5mm)，cai处理组加入atp(终浓度为5mm)和cai(终浓度分别为5μm、10μm、20μm和40μm)，继续孵育1小时后收集细胞，westernblot法检测nlrp3、caspase-1前体(pro-caspase-1)和il-1β前体(pro-il-1β)的蛋白表达水平。
如图10所示，羧胺三唑不影响nlrp3、pro-caspase-1和pro-il-1β蛋白的水平，说明cai对nlrp3炎症小体活化的抑制并不是通过影响nlrp3炎症小体关键蛋白的表达来实现。
实施例9cai对lps诱导的c57bl/6小鼠中nlrp3炎症小体活化模型的抑制作用
建立lps诱导的小鼠败血症模型，这是一种nlrp3炎症小体活化的整体动物模型，在体内水平确认cai作为nlrp3抑制剂的作用。
将体重为18～22g的c57bl/6雄性小鼠70只随机分为6组，其中正常对照组为10只，其余组各为12只。实验分组如下：
(1)正常对照组(con)：动物不作任何处理；
(2)模型组(lps组)：小鼠腹腔注射lps(10mg/kg)制备nlrp3炎症小体活化模型，同时灌胃给予溶剂聚乙二醇400(peg400)0.2ml/10g；
(3)cai10mg/kg组：小鼠腹腔注射lps(10mg/kg)制备nlrp3炎症小体活化模型，同时灌胃给予cai(10mg/kg)；
(4)cai20mg/kg组：小鼠腹腔注射lps(10mg/kg)制备nlrp3炎症小体活化模型，同时灌胃给予cai(20mg/kg)；
(5)阳性药对照组：小鼠腹腔注射lps(10mg/kg)制备nlrp3炎症小体活化模型，同时腹腔注射给予nlrp3炎症小体抑制剂mcc950(10mg/kg，sigma公司，pz0280)。
上述各组小鼠进行相应处理2小时后，对小鼠进行摘眼球取血，冰上静置4小时后，离心15分钟(3000r/分钟，4℃)，收集上层血清。同样条件重复离心一次，最终获得的血清样本贮存于-20℃。采用elisa法测定血清中il-1β和tnf-α水平。
如图11所示，经lps刺激后，模型组小鼠血清中il-1β和tnf-α含量与con组相比显著增加(p<0.01)，出现系统性炎症因子风暴。cai20mg/kg和阳性药对照组的小鼠血清中il-1β的水平明显下降，抑制率分别达到28.92％(p<0.05)以及39.54％(p<0.01)，提示，cai能够抑制lps诱导的c57bl/6小鼠中nlrp3炎症小体的活化。而两个剂量cai以及mcc950给药对tnf-α水平的上升没有抑制作用，也说明cai对小鼠脓毒症的保护作用是通过抑制nlrp3炎症小体实现的。
实施例10羧胺三唑抑制aom联合dss诱导的小鼠cac的发生
炎性肠病(inflammatoryboweldisease,ibd)是引起cac的重要危险因素，利用aom和dss的联合诱导作用建立肠炎相关结直肠癌动物模型，这个模型可以很好的模拟病人的肠炎恶性转化过程，因此获得国际公认，成为广泛使用的研究cac的动物模型。
将体重为20～22gc57bl/6雄性小鼠随机分为4组，分别为：正常对照组(con)，aom dss模型组，cai低剂量组(20mg/kg)和cai高剂量组(40mg/kg)。con组8只小鼠，其余各组10只小鼠。在第0天(day0)，除con组腹腔注射生理盐水外，其余各组均腹腔注射7.5mg/kgaom。第5天(day5)，将con组外其余各组的动物饮水更换为含2.5％dss的溶液，con组饮用双蒸水，连续饮用5天，随后给予正常饮用水，连续饮用15天，上述20天作为一个循环，共反复3个循环以建立结肠炎相关结直肠癌模型。cai低、高剂量组在饮用dss的溶液的间隔期灌胃给予相应剂量的cai，1次/天；aom/dss模型组灌胃给予溶剂peg400。具体模型建立和给药方式如图12a所示。在第95天处死小鼠，剪开小鼠腹腔，剖取结直肠后，沿肠管纵轴纵向剖开，用预冷的中性pbs溶液清洗肠内容物。将冲洗干净的肠管黏膜面朝上平铺于大平皿内，观察肿瘤发生情况，评价指标包括：肿瘤的数量、肿瘤的大小(平均直径，tumorsize)和肿瘤的负荷量(直径之和，tumorload)。
con组小鼠的结直肠黏膜完整且光滑，aom dss模型组小鼠肠腔有大量粘性分泌物，形成大量肿瘤，且瘤体较大，分布密集，面积较大；cai能够在一定程度上缓解aom/dss诱导的cac的严重程度。如图12所示，20mg/kgcai能够降低肿瘤数量和肿瘤负荷量，抑制率分别为22.22％(p＜0.01)和28.10％(p＜0.01)。40mg/kgcai能够明显降低肿瘤数量、肿瘤大小、肿瘤负荷量，并能显著减少直径较大肿瘤(>2mm)的数目，抑制率分别为抑制率分别为46.91％(p<0.0001)、21.27％(p<0.01)、56.13％(p<0.0001)和31.15％(p<0.001)。由该结果可知，cai对aom联合dss诱导的小鼠cac的发生具有显著抑制作用，因此，cai作为nlrp3炎症小体活化的抑制剂，对nlrp3炎症小体活化相关疾病具有良好的预防或治疗作用。
实施例11羧胺三唑乳清酸盐(cto)对lps 尼日利亚菌素诱导的小鼠bmdm中nlrp3炎症小体活化的影响。
在小鼠bmdm中建立lps 尼日利亚菌素诱导的nlrp3炎症小体活化模型，评价cto的作用。
分离培养小鼠bmdm，用含1％胎牛血清的rpmi-1640培养基配制细胞悬液，按终浓度1×106个/ml接种于24孔板中，每孔500μl。实验分为：对照组(con)，nlrp3炎症小体活化模型组(即lps 尼日利亚菌素组)、cto组(即lps 尼日利亚菌素 cto40μm)和cai组(即lps 尼日利亚菌素 cai40μm)。对照组加入500μl培养基，其他组加入500μl含lps的培养基(终浓度为10ng/ml)。置于37℃，5％co2细胞培养箱中培养3小时后，cto组和cai组分别加入相应药物处理30分钟，然后，除对照组以外，各组加入尼日利亚菌素(终浓度为10μm)继续孵育1小时。收集各组细胞上清，冻存于-20℃。采用elisa法测定细胞上清中il-1β水平，并采用westernblot法检测上清中caspase-1成熟体和il-1β的表达水平，以评价各组中nlrp3炎症小体的活化情况。
如图13a所示，bmdm细胞经lps和尼日利亚菌素刺激后，其上清中il-1β含量与对照组相比显著增加(p<0.01)，而40μmcto和40μmcai可以明显抑制il-1β的释放，抑制率分别为84.21％(p<0.01)和76.96％(p<0.01)。该结果提示，cto对lps 尼日利亚菌素诱导的nlrp3炎症小体的活化亦具有显著抑制作用。
如图13b的westernblot结果所示，bmdm细胞经lps和尼日利亚菌素刺激后，其上清中caspase-1成熟体和il-1β的表达水平与对照组相比显著增加，而40μmcto和40μmcai均可明显降低caspase-1成熟体以及il-1β的蛋白水平。上述结果进一步证实，cto对nlrp3炎症小体的活化具有明显抑制作用。
由实施例1～11的结果可知，cai在体外细胞水平(包括atp、msu、尼日利亚菌素等化学诱导剂诱导以及由于nlrp3基因突变导致的自发持续活化)以及整体动物水平中均能有效抑制nlrp3炎症小体活化，cai通过直接与nlrp3结合并抑制其atpase活性来抑制nlrp3炎症小体的活化。同时，cai可以抑制lps诱导的败血症以及aom联合dss诱导的小鼠cac。另外，cto也可以抑制nlrp3炎症小体的活化。可见，羧胺三唑类化合物或其药学上可接受的盐均可以成为一种有效的nlrp3炎症小体的抑制剂，对nlrp3炎症小体活化相关疾病具有优良的预防或治疗作用，具有广泛的应用前景。
以上，用特定方式对本发明进行了详细说明，但对于本领域技术人员而言，显然可以在不脱离本发明的意图和范围的条件下进行各种变更及变形。
1.下述式(a)所示的羧胺三唑类化合物或其药学上可接受的盐在制备治疗或预防nlrp3炎症小体活化相关疾病的药物中的应用，
式中，x表示ch2、s、o或c＝o；r4表示cl、cf3、br或ch3；r5表示cl、br或no2。
2.根据权利要求1所述的应用，其中，所述羧胺三唑类化合物为以下结构式所示的5-氨基-1-{[3,5-二氯-4-(4-氯苯甲酰基)苯基]甲基}-1h-1,2,3-三唑-4-甲酰胺，即羧胺三唑，
3.根据权利要求1所述的应用，其中，所述药学上可接受的盐选自由乳清酸盐、盐酸盐、硫酸盐和醋酸盐组成的组中的任意一种以上。
4.根据权利要求3所述的应用，其中，所述药学上可接受的盐为乳清酸盐。
5.根据权利要求4所述的应用，其中，所述羧胺三唑类化合物的乳清酸盐为以下结构式所示的羧胺三唑的乳清酸盐，
6.根据权利要求1～5中任一项所述的应用，其中，所述nlrp3炎症小体活化相关疾病为选自败血症、结肠炎相关性肿瘤、慢性炎症癌变、代谢综合征、胰岛素抵抗、高脂血症与肥胖、高血压、心力衰竭、外伤性脑损伤、急性脑部感染、脑脓肿、自发性脑内出血、恶性胶质瘤、癫痫持续状态、实验性自身免疫性脑脊髓炎、闭塞性主动脉疾病、病毒性肝炎、扑热息痛诱导肝损伤、酒精性和非酒精性脂肪性肝病、酒精性肝损伤、肝纤维化与肝硬化、急性肾损伤、慢性肾脏疾病、慢性肾小球肾炎、高同型半胱氨酸血症相关的肾病、自身免疫性肾病、抗中性粒细胞胞质抗体相关性血管炎肾脏损伤、肾小管间质损伤、恶性间皮瘤、肺尘埃沉着症、哮喘、慢性阻塞性肺病、肺结核、嗜中性皮肤病、sweet综合征、坏疽性脓皮病、白癜风、寻常痤疮、反常性痤疮、红斑痤疮、化脓性汗腺炎、特应性皮炎、过敏性接触性皮炎、压力性溃疡、雄激素性脱发、黄斑变性、急性青光眼、干眼症、肿瘤的化疗耐药、热射病和热应激损伤中的任意一种以上。
7.根据权利要求6所述的应用，其中，所述nlrp3炎症小体活化相关疾病为选自败血症、结肠炎相关性肿瘤、慢性炎症癌变中的任意一种以上。
8.下述式(a)所示的羧胺三唑类化合物或其药学上可接受的盐在制备nlrp3炎症小体抑制剂中的应用，
式中，x表示ch2、s、o或c＝o；r4表示cl、cf3、br或ch3；r5表示cl、br或no2。
9.根据权利要求8所述的应用，其中，所述羧胺三唑类化合物为以下结构式所示的5-氨基-1-{[3,5-二氯-4-(4-氯苯甲酰基)苯基]甲基}-1h-1,2,3-三唑-4-甲酰胺，即羧胺三唑，
10.根据权利要求8所述的应用，其中，所述药学上可接受的盐选自由乳清酸盐、盐酸盐、硫酸盐和醋酸盐组成的组中的任意一种以上。
11.根据权利要求10所述的应用，其中，所述药学上可接受的盐为乳清酸盐。
12.根据权利要求11所述的应用，其中，所述羧胺三唑类化合物的乳清酸盐为以下结构式所示的羧胺三唑的乳清酸盐，
