本发明涉及荧光探针合成、谷胱甘肽和二氧化硫检测，特别涉及一种香豆素-苯并吡喃鎓盐衍生物及其合成方法和在区分检测谷胱甘肽和二氧化硫中的应用。
背景技术：
研究表明，谷胱甘肽是细胞内含量最为丰富的非蛋白硫醇，在维持细胞内氧化还原平衡中起着重要作用，其浓度失衡与一系列疾病有关：包括免疫反应、癌症和老年痴呆症等。毫无疑问，谷胱甘肽在细胞内的代谢异常是引起其浓度失衡的直接因素。线粒体内谷胱甘肽和硫代硫酸钠在硫代硫酸盐转移酶作用下生成二氧化硫。二氧化硫作为一种重要的小分子活性硫化物，具有多种病理活性，如抗菌、抗高血压、抗氧化以及对心肌缺血再灌注损伤的保护作用等，内源性产生的二氧化硫可以增强细胞抗氧化作用，并且在信号传导过程中起重要作用。然而，细胞内亚硫酸盐氧化酶缺乏会导致二氧化硫代谢异常，人体内亚硫酸盐累积会损害脑、神经系统等重要器官，甚至造成死亡。因此，开发有效的方法监测细胞内谷胱甘肽和二氧化硫代谢过程，对于生物研究和临床诊断起着至关重要的作用。
应生物体系中二氧化硫水平检测的要求，设计选择性好、准确度高且低细胞毒性的荧光探针，已成为生物医学发展中具有挑战性的前沿课题之一。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种香豆素-苯并吡喃鎓盐衍生物及其合成方法，以及将该衍生物作为探针用于区分识别检测谷胱甘肽和二氧化硫。
本发明提供的一种香豆素-苯并吡喃鎓盐衍生物，所述衍生物的中文名称为(e)-2-(4-(4-(2-氰基-3-(7-(二乙氨基)-2-氧代-2h-铬-3-基)丙烯酰基)哌嗪-1-基)苯基)-7-(二乙氨基)高氯酸铬，英文名称为(e)-2-(4-(4-(2-cyano-3-(7-(diethylamino)-2-oxo-2h-chromen-3-yl)acryloyl)piperazin-1-yl)phenyl)-7-(diethylamino)chromenyliumperchlorate，命名为cm-bp，结构式为：
本发明提供的一种香豆素-苯并吡喃鎓盐衍生物cm-bp的合成方法，包括如下步骤：
(1)按摩尔比1：1-1.5将4-醛基-7二乙氨基香豆素和氰乙酸溶解在无水乙醇中，加入少量哌啶做催化剂，将混合物在85℃加热反应3-4小时；反应完成后将溶剂减压旋干，所得橙色固体用体积比1:15的甲醇与二氯甲烷作洗脱剂经硅胶柱色谱分离得橙色固体粉末，即为(e)-2-氰基-3-(7-(二乙氨基)-2-氧代-2h-铬-3-基)丙烯酸；
(2)按摩尔比1：1-1.5将4-二乙氨基水杨醛和4-哌嗪基苯乙酮溶解在浓硫酸中，混合物在90℃搅拌回流6-8小时，冷却至室温后将反应液倒入冰水中，继续搅拌，所得沉淀过滤、洗涤、真空干燥得到黑色固体，即为7-(二乙氨基)-2-(4-(哌嗪-1-基)苯基)高氯酸铬；
(3)将(e)-2-氰基-3-(7-(二乙氨基)-2-氧代-2h-铬-3-基)丙烯酸，1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，1-羟基苯并三唑混合溶解于无水n，n-二甲基甲酰胺中，混合物在0℃惰性气体保护下反应0.5-1小时，然后向反应体系中分别加入7-(二乙氨基)-2-(4-(哌嗪-1-基)苯基)高氯酸铬和三乙胺，混合物在室温下反应24-30小时；反应结束后将混合物倒入冰水中，所得沉淀经过滤，洗涤、真空干燥得粗产物，粗产物用体积比15:1的二氯甲烷和甲醇作洗脱剂经硅胶柱色谱分离，得得到紫色粉末状目标产物(e)-2-(4-(4-(2-氰基-3-(7-(二乙氨基)-2-氧代-2h-铬-3-基)丙烯酰基)哌嗪-1-基)苯基)-7-(二乙氨基)高氯酸铬，其中e)-2-氰基-3-(7-(二乙氨基)-2-氧代-2h-铬-3-基)丙烯酸，1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，1-羟基苯并三唑，7-(二乙氨基)-2-(4-(哌嗪-1-基)苯基)高氯酸铬和三乙胺的摩尔比为1：3-5：3-5：0.8-1：3-5。
作为优选：
所述步骤(1)中的4-醛基-7二乙氨基香豆素和氰乙酸的摩尔比为1：1.5。
所述步骤(2)中的4-二乙氨基水杨醛和4-哌嗪基苯乙酮的摩尔比1：1。
所述步骤(3)中的e)-2-氰基-3-(7-(二乙氨基)-2-氧代-2h-铬-3-基)丙烯酸，1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，1-羟基苯并三唑，7-(二乙氨基)-2-(4-(哌嗪-1-基)苯基)高氯酸铬和三乙胺的摩尔比为1：4：4：0.8：4。
所述荧光探针可用于谷胱甘肽和/或二氧化硫检测。
本发明提供的一种检测谷胱甘肽的方法，步骤为：
(1)、配制ph＝7.4、浓度为10mm的pbs缓冲溶液，配制0.2m的谷胱甘肽溶液，将cm-bp溶于dmso配制成2mm的溶液；
(2)、取2ml含10％dmso的ph为7.4的pbs溶液、10μlcm-bp的dmso溶液加到一个荧光比色皿中，向荧光比色皿中加入谷胱甘肽，随着待测样谷胱甘肽的加入，638nm处的荧光强度逐渐增强；
(3)、在10个比色皿中，各加入2ml含10％dmso的ph为7.4的pbs溶液、10μlcm-bp的dmso溶液，分别向比色皿加入谷胱甘肽溶液的体积为0、2、4、6、8、10、12、14、16、18、20μl，然后在荧光光谱仪上测定638nm处的荧光强度的为402、469、525、588、648、713、777、826、879、925、953。以谷胱甘肽浓度为横坐标，以荧光强度为纵坐标绘制图，得到谷胱甘肽浓度的工作曲线；线性回归方程为：f638＝283.9c 416.5，c的单位为10-3mol/l；
(4)、测定样品溶液时，将测得的荧光强度代入线性回归方程，即可求得谷胱甘肽的浓度。
本发明提供的一种检测二氧化硫的方法，步骤为：
(1)、配制ph＝7.4、浓度为10mm的pbs缓冲溶液，配制2mm的二氧化硫溶液，将cm-bp溶于dmso配制成2mm的溶液；
(2)、取2ml含10％dmso的ph为7.4的pbs溶液、10μlcm-bp的dmso溶液加到一个荧光比色皿中，向荧光比色皿中加入二氧化硫水溶液，随着待测样二氧化硫的加入，638nm处的荧光强度逐渐降低；
(3)、在8个比色皿中，各加入2ml含10％dmso的ph为7.4的pbs溶液、10μlcm-bp的dmso溶液，分别向比色皿加入二氧化硫溶液的体积为0、5、10、15、20、25、30、35μl，然后在荧光光谱仪上测定638nm处的荧光强度的为268、230、189、145、114、90、62、44。以二氧化硫浓度为横坐标，以荧光强度为纵坐标绘制图，得到二氧化硫浓度的工作曲线；线性回归方程为：f638＝-6.51c 256.7，c的单位为10-6mol/l；
(4)、测定样品溶液时，将测得的荧光强度代入线性回归方程，即可求得二氧化硫的浓度。
本发明提供的一种同时检测谷胱甘肽和二氧化硫的方法，步骤为：
(1)、配制ph＝7.4、浓度为10mm的pbs缓冲溶液，配制0.2m的谷胱甘肽溶液，配制2mm的二氧化硫溶液，将cm-bp溶于dmso配制成2mm的溶液；
(2)、取2ml含10％dmso的ph为7.4的pbs溶液、10μlcm-bp的dmso溶液，向荧光比色皿中加入20μl谷胱甘肽的溶液，5分钟后观察到638nm处的荧光强度增强；在此基础上，我们向反应体系中加入二氧化硫的水溶液，随着待测样二氧化硫的加入，638nm处的荧光强度逐渐降低；494nm处荧光强度逐渐增强。
与现有技术相比，本发明具有如下优点和效果：
1、本发明香豆素-苯并吡喃鎓盐衍生物cm-bp制备方法简单；
2、本发明香豆素-苯并吡喃鎓盐衍生物cm-bp作为荧光探针可实现对线粒体谷胱甘肽和二氧化硫的准确检测，具有高的灵敏性和极好的选择性；
3、本发明检测手段简单，只需要借助荧光光谱仪即可实现；
4、本发明能够对细胞水平二氧化硫代谢过程可视化实时成像。
附图说明
图1实施例1制备的衍生物cm-bp核磁氢谱图
图2实施例1制备的衍生物cm-bp的核磁碳谱图
图3实施例1制备的衍生物cm-bp的质谱图
图4实施例2衍生物cm-bp与谷胱甘肽作用的荧光发射图
图5实施例3衍生物cm-bp测定谷胱甘肽的工作曲线
图6实施例4衍生物cm-bp与二氧化硫作用的荧光柱状图
图7实施例5衍生物cm-bp测定二氧化硫的工作曲线
图8实施例6衍生物cm-bp与各种分析物的荧光柱状图
图9实施例7衍生物cm-bp与谷胱甘肽和二氧化硫作用的荧光柱状图
图10实施例8衍生物cm-bp与谷胱甘肽细胞成像图
图11实施例9衍生物cm-bp与二氧化硫细胞成像图
图12实施例10衍生物cm-bp监测二氧化硫代谢细胞成像图
具体实施方式
下面结合实施例和附图对本发明做进一步说明，但本发明不受下述实施例的限制。
实施例1
香豆素-苯并吡喃鎓盐衍生物cm-bp的制备和表征
(1)将4-醛基-7二乙氨基香豆素(0.49g,2mmol)和氰乙酸(0.255g,3mmol)溶解在100ml无水乙醇中，将混合物在87℃加热反应4小时；反应完成后将溶解减压旋干，所得橙色固体用体积比1:15的甲醇与二氯甲烷作洗脱剂经硅胶柱色谱分离得橙色固体粉末(0.303g,产率：48.7％)；
(2)将4-二乙氨基水杨醛(0.386g,2mmol)和4-哌嗪基苯乙酮(0.408g,2mmol)溶解在10ml浓硫酸中，混合物在90℃搅拌回流8小时，冷却至室温后将反应液倒入冰水中，继续搅拌，所得沉淀过滤、洗涤、真空干燥得到黑色固体，所得橙色固体用体积比1:10的甲醇与二氯甲烷作洗脱剂经硅胶柱色谱分离得橙色固体粉末(0.62g,产率：67.3％)；
(3)将(e)-2-氰基-3-(7-(二乙氨基)-2-氧代-2h-铬-3-基)丙烯酸(0.156g,0.5mmol)，1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(0.26g,2mmol)，1-羟基苯并三唑(0.38g,2mmol)混合溶解于10ml无水n，n-二甲基甲酰胺中，混合物在0℃惰性气体保护下反应0.5小时，然后向反应体系中分别加入7-(二乙氨基)-2-(4-(哌嗪-1-基)苯基)高氯酸铬(0.184g,0.4mmol)和三乙胺(0.202g,2mmol)，混合物在室温下反应24小时；反应结束后将混合物倒入冰水中，所得沉淀经过滤，洗涤、真空干燥得粗产物，粗产物用体积比15:1的二氯甲烷和甲醇作洗脱剂经硅胶柱色谱分离，得得到紫色粉末状目标物(0.105g,产率34.3％)。1hnmr(600mhz,dmso)δ8.69(s,1h),8.63(d,j＝8.4hz,1h),8.28(d,j＝8.7hz,2h),7.98(d,j＝8.5hz,1h),7.90(d,j＝9.2hz,1h),7.77(s,1h),7.60(d,j＝8.8hz,1h),7.35(d,j＝9.7hz,1h),7.30(s,1h),7.18(d,j＝8.9hz,2h),6.83(d,j＝8.7hz,1h),6.64(s,1h),3.79(s,4h),3.73(s,4h),3.67(d,j＝6.9hz,4h),3.52(d,j＝6.7hz,4h),1.23(t,j＝6.7hz,6h),1.16(t,j＝6.8hz,6h).(图1)13cnmr(151mhz,dmso)δ148.39(s),143.66(s),132.24(s),131.26(s),117.29(s),117.25–116.77(m),114.20(s),110.94(d,j＝7.2hz),108.67(s),108.14(s),102.93(s),97.05(s),96.47(s),45.65(s),44.99(s),12.87(s).(图2)esi-ms:[m h] calcd.for656.3231,found656.3234.(图3)
实施例2
配制ph＝7.4、浓度为10mm的pbs缓冲溶液，配制0.2m的谷胱甘肽溶液，将cm-bp溶于dmso配制成2mm的溶液；取2ml含10％dmso的ph为7.4的pbs溶液、10μlcm-bp的dmso溶液加到一个荧光比色皿中，向荧光比色皿中加入谷胱甘肽，随着待测样谷胱甘肽的加入，638nm处的荧光强度逐渐增强；荧光发射图见图4。
实施例3
配制ph＝7.4、浓度为10mm的pbs缓冲溶液，配制0.2m的谷胱甘肽溶液，将cm-bp溶于dmso配制成2mm的溶液；在10个比色皿中，各加入2ml含10％dmso的ph为7.4的pbs溶液、10μlcm-bp的dmso溶液，分别向比色皿加入谷胱甘肽溶液的体积为0、2、4、6、8、10、12、14、16、18、20μl，然后在荧光光谱仪上测定638nm处的荧光强度的为402、469、525、588、648、713、777、826、879、925、953。以谷胱甘肽浓度为横坐标，以荧光强度为纵坐标绘制图，得到谷胱甘肽浓度的工作曲线；线性回归方程为：f638＝283.9c 416.5，c的单位为10-3mol/l；(见图5)。
实施例4
配制ph＝7.4、浓度为10mm的pbs缓冲溶液，配制2mm的二氧化硫溶液，将cm-bp溶于dmso配制成2mm的溶液；取2ml含10％dmso的ph为7.4的pbs溶液、10μlcm-bp的dmso溶液加到一个荧光比色皿中，向荧光比色皿中加入二氧化硫水溶液，随着待测样二氧化硫的加入，638nm处的荧光强度逐渐降低；荧光发射图见图6。
实施例5
配制ph＝7.4、浓度为10mm的pbs缓冲溶液，配制2mm的二氧化硫溶液，将cm-bp溶于dmso配制成2mm的溶液；在8个比色皿中，各加入2ml含10％dmso的ph为7.4的pbs溶液、10μlcm-bp的dmso溶液，分别向比色皿加入二氧化硫溶液的体积为0、5、10、15、20、25、30、35μl，然后在荧光光谱仪上测定638nm处的荧光强度的为268、230、189、145、114、90、62、44。以二氧化硫浓度为横坐标，以荧光强度为纵坐标绘制图，得到二氧化硫浓度的工作曲线；线性回归方程为：f638＝-6.51c 256.7，c的单位为10-6mol/l；(见图7)。
实施例6
配制ph＝7.4、浓度为10mm的pbs缓冲溶液，配制2mm的二氧化硫溶液，配制0.2m的谷胱甘肽溶液，将cm-bp溶于dmso配制成2mm的溶液；在荧光比色皿中，各加入2ml含10％dmso的ph为7.4的pbs溶液、10μlcm-bp的dmso溶液，再分别加入生理浓度的其它分析物和谷胱甘肽、二氧化硫的水溶液：gsh,cys,hcy,lys,arg,asp,clo-,h2o2,scn-,so42-,s2o32-,hs-,so32-在荧光分光光度仪上检测，绘制不同分析物对应的638nm处荧光强度值(见图8)。谷胱甘肽使探针在638nm处荧光强度增加，而二氧化硫使得检测体系在638nm处荧光强度明显降低，其它的分析物基本没有引起检测体系荧光强度的变化。
实施例7
配制ph＝7.4、浓度为10mm的pbs缓冲溶液，配制2mm的二氧化硫溶液，配制0.2m的谷胱甘肽溶液，将cm-bp溶于dmso配制成2mm的溶液；向荧光比色皿中加入20μl谷胱甘肽的溶液，5分钟后观察到638nm处的荧光强度增强；在此基础上，我们向反应体系中加入二氧化硫的水溶液，随着待测样二氧化硫的加入，638nm处的荧光强度逐渐降低；494nm处荧光强度逐渐增强；(见图9)。
实施例8
配制ph＝7.4、浓度为10mm的pbs缓冲溶液，配制2mmcm-bp的dmso溶液，取10μlcm-bp的dmso溶液加入到2ml的pbs中；将探针溶液加入hepg2细胞培养液中，使得其浓度为10μm，与hela细胞在37℃下孵育，探针在荧光成像仪下呈现红色荧光；随着孵育时间增加，探针红色荧光不断增强,见图10。
实施例9
配制ph＝7.4、浓度为10mm的pbs缓冲溶液，配制2mmcm-bp的dmso溶液，配制2mm二氧化硫的水溶液；把10μlcm-bp的dmso溶液加入到2ml的pbs中；将探针溶液加入hepg2细胞培养液中，使得其浓度为10μm，与hela细胞在37℃下孵育30分钟，探针在荧光成像仪下呈现红色荧光；向探针体系中加入50μm二氧化硫的水溶液，随着孵育时间增加，探针红色荧光不断降低,见图11。
实施例10
配制ph＝7.4、浓度为10mm的pbs缓冲溶液，配制2mmcm-bp的dmso溶液，配制2m硫代硫酸钠的水溶液；把10μlcm-bp的dmso溶液加入到2ml的pbs中；将探针溶液加入hepg2细胞培养液中，使得其浓度为10μm，与hela细胞在37℃下孵育30分钟，探针在荧光成像仪下呈现红色荧光；向探针体系中加入500μm硫代硫酸钠的水溶液，随着孵育时间增加，探针红色荧光不断降低,蓝色荧光不断增强，见图12。
1.一种香豆素-苯并吡喃鎓盐衍生物cm-bp，其特征在于，结构式为：
2.如权利要求1所述的一种香豆素-苯并吡喃鎓盐衍生物cm-bp的合成方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)按摩尔比1：1-1.5将4-醛基-7二乙氨基香豆素和氰乙酸溶解在无水乙醇中，加入少量哌啶做催化剂，将混合物在85℃加热反应3-4小时；反应完成后将溶剂减压旋干，所得橙色固体用体积比1:15的甲醇与二氯甲烷作洗脱剂经硅胶柱色谱分离得橙色固体粉末，即为(e)-2-氰基-3-(7-(二乙氨基)-2-氧代-2h-铬-3-基)丙烯酸；
(2)按摩尔比1：1-1.5将4-二乙氨基水杨醛和4-哌嗪基苯乙酮溶解在浓硫酸中，混合物在90℃搅拌回流6-8小时，冷却至室温后将反应液倒入冰水中，继续搅拌，所得沉淀过滤、洗涤、真空干燥得到黑色固体，即为7-(二乙氨基)-2-(4-(哌嗪-1-基)苯基)高氯酸铬；
(3)将(e)-2-氰基-3-(7-(二乙氨基)-2-氧代-2h-铬-3-基)丙烯酸，1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，1-羟基苯并三唑混合溶解于无水n，n-二甲基甲酰胺中，混合物在0℃惰性气体保护下反应0.5-1小时，然后向反应体系中分别加入7-(二乙氨基)-2-(4-(哌嗪-1-基)苯基)高氯酸铬和三乙胺，混合物在室温下反应24-30小时；反应结束后将混合物倒入冰水中，所得沉淀经过滤，洗涤、真空干燥得粗产物，粗产物用体积比15:1的二氯甲烷和甲醇作洗脱剂经硅胶柱色谱分离，得得到紫色粉末状目标产物(e)-2-(4-(4-(2-氰基-3-(7-(二乙氨基)-2-氧代-2h-铬-3-基)丙烯酰基)哌嗪-1-基)苯基)-7-(二乙氨基)高氯酸铬；其中e)-2-氰基-3-(7-(二乙氨基)-2-氧代-2h-铬-3-基)丙烯酸，1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，1-羟基苯并三唑，7-(二乙氨基)-2-(4-(哌嗪-1-基)苯基)高氯酸铬和三乙胺的摩尔比为1：3-5：3-5：0.8-1：3-5。
3.如权利要求2所述的cm-bp的合成方法，其特征在于，所述步骤(1)中的4-醛基-7二乙氨基香豆素和氰乙酸的摩尔比为1：1.5。
4.如权利要求2所述的cm-bp的合成方法，其特征在于，所述步骤(2)中的4-二乙氨基水杨醛和4-哌嗪基苯乙酮的摩尔比1：1。
5.如权利要求2所述的cm-bp的合成方法，其特征在于，所述步骤(3)中的e)-2-氰基-3-(7-(二乙氨基)-2-氧代-2h-铬-3-基)丙烯酸，1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，1-羟基苯并三唑，7-(二乙氨基)-2-(4-(哌嗪-1-基)苯基)高氯酸铬和三乙胺的摩尔比为1：4：4：0.8：4。
6.如权利要求1所述的cm-bp作为荧光探针用于谷胱甘肽和/或二氧化硫的检测。
7.一种检测谷胱甘肽的方法，其特征在于，步骤为：
(1)、配制ph＝7.4、浓度为10mm的pbs缓冲溶液，配制0.2m的谷胱甘肽溶液，将权利要求1所述的cm-bp溶于dmso配制成2mm的溶液；
(2)、取2ml含10％dmso的ph为7.4的pbs溶液、10μlcm-bp的dmso溶液加到一个荧光比色皿中，向荧光比色皿中加入谷胱甘肽，随着待测样谷胱甘肽的加入，638nm处的荧光强度逐渐增强；
(3)、在10个比色皿中，各加入2ml含10％dmso的ph为7.4的pbs溶液、10μlcm-bp的dmso溶液，分别向比色皿加入谷胱甘肽溶液的体积为0、2、4、6、8、10、12、14、16、18、20μl，然后在荧光光谱仪上测定638nm处的荧光强度的为402、469、525、588、648、713、777、826、879、925、953。以谷胱甘肽浓度为横坐标，以荧光强度为纵坐标绘制图，得到谷胱甘肽浓度的工作曲线；线性回归方程为：f638＝283.9c 416.5，c的单位为10-3mol/l；
(4)、测定样品溶液时，将测得的荧光强度代入线性回归方程，即可求得谷胱甘肽的浓度。
8.一种检测二氧化硫的方法，其特征在于，步骤为：
(1)、配制ph＝7.4、浓度为10mm的pbs缓冲溶液，配制2mm的二氧化硫溶液，将权利要求1所述的cm-bp溶于dmso配制成2mm的溶液；
(2)、取2ml含10％dmso的ph为7.4的pbs溶液、10μlcm-bp的dmso溶液加到一个荧光比色皿中，向荧光比色皿中加入二氧化硫水溶液，随着待测样二氧化硫的加入，638nm处的荧光强度逐渐降低；
(3)、在8个比色皿中，各加入2ml含10％dmso的ph为7.4的pbs溶液、10μlcm-bp的dmso溶液，分别向比色皿加入二氧化硫溶液的体积为0、5、10、15、20、25、30、35μl，然后在荧光光谱仪上测定638nm处的荧光强度的为268、230、189、145、114、90、62、44。以二氧化硫浓度为横坐标，以荧光强度为纵坐标绘制图，得到二氧化硫浓度的工作曲线；线性回归方程为：f638＝-6.51c 256.7，c的单位为10-6mol/l；
(4)、测定样品溶液时，将测得的荧光强度代入线性回归方程，即可求得二氧化硫的浓度。
9.一种同时检测谷胱甘肽和二氧化硫的方法，其特征在于，步骤为：
(1)、配制ph＝7.4、浓度为10mm的pbs缓冲溶液，配制0.2m的谷胱甘肽溶液，配制2mm的二氧化硫溶液，将权利要求1所述的cm-bp溶于dmso配制成2mm的溶液；
(2)、取2ml含10％dmso的ph为7.4的pbs溶液、10μlcm-bp的dmso溶液，向荧光比色皿中加入20μl谷胱甘肽的溶液，5分钟后观察到638nm处的荧光强度增强；在此基础上，我们向反应体系中加入二氧化硫的水溶液，随着待测样二氧化硫的加入，638nm处的荧光强度逐渐降低；494nm处荧光强度逐渐增强。
技术总结