本发明涉及工业微生物领域，具体涉及抗生素pactamideg及其制备方法和在制备抗菌药物中的应用。
背景技术：
：：polycyclictetramatemacrolactams是一类吡咯烷-2,4-二酮的多环大环内酰类化合物，这一家族的化合物结构多样，具有抗菌生物活性。pactamideg是具有5/5/6多元碳环结构的新颖的polycyclictetramatemacrolactams家族化合物。技术实现要素：本发明的第一个目的是提供一种新的polycyclictetramatemacrolactams类化合物pactamideg或其药用盐。本发明的一种新的polycyclictetramatemacrolactams类化合物pactamideg，其结构如式(i)所示：化合物pactamideg，c2和c3间为顺式双键，c17和c18间为反式双键，c5为s构型，c6为r构型，c8为s构型，c10为r构型，c11为s构型，c12为s构型，c13为r构型，c14为s构型，c16为s构型，c23为s构型。本发明的第二个目的是提供一种新的polycyclictetramatemacrolactams类化合物pactamideg的制备方法。所述的化合物pactamideg是从链霉菌streptomycessp.zj306的突变株δbc306::sgr812::sgr813::sgr811的发酵培养物中制备分离得到的。具体的，所述的制备方法包括以下步骤：a、制备链霉菌突变株δbc306::sgr812::sgr813::sgr811的发酵培养物，将该发酵培养物的发酵液和菌丝体分离开，发酵液经丁酮萃取，丁酮层经蒸馏浓缩后得到浸膏a；菌丝体先用丙酮浸提，浸取液回收丙酮后剩余的水混合液再用丁酮萃取，丁酮层经蒸馏浓缩后得到浸膏b；b、将浸膏a和浸膏b合并的粗提物c经硅胶柱层析，用氯仿/甲醇作为洗脱剂，从体积比100:0～0:100进行梯度洗脱，收集氯仿/甲醇体积比80:20梯度洗脱下来的馏分fr.1，然后经lh-20凝胶柱，以氯仿/甲醇体积比1:1作为流动相洗脱，洗脱馏分再经hplc制备分离，得到化合物pactamideg。优选，上述a步骤的制备链霉菌突变株δbc306::sgr812::sgr813::sgr811的发酵培养物是通过以下方法制备：将活化的链霉菌突变株δbc306::sgr812::sgr813::sgr811接入种子培养基，28℃，200rpm，培养72h得种子液，将种子液以10％v/v的接种量接入到发酵培养基中，28℃，200rpm，振荡培养168h，即制得发酵培养物。所述的种子培养基和发酵培养基的配方均为：每升培养基中含有可溶性淀粉20g，葡萄糖10g，蛋白胨5g，酵母粉5g，caco35g，余量为海盐质量分数为3％的海水或陈海水。本发明的第三个目的是提供一种上述的化合物pactamideg或其药用盐在制备抗菌药物中的应用。本发明的第四个目的是提供一种抗菌药物，所述的抗菌药物含有有效量的上述的化合物pactamideg或其药用盐作为活性成分。本发明的第五个目的是提供上述的链霉菌streptomycessp.zj306的突变株δbc306::sgr812::sgr813::sgr811在制备上述的化合物pactamideg中的应用。本发明的有益效果为：本发明提供了一种新的polycyclictetramatemacrolactams类化合物pactamideg及其制备方法，polycyclictetramatemacrolactams是一类具有良好生物活性的复杂分子，进一步对化合物pactamideg或药用盐进行活性筛选，有望成为药物先导小分子。经试验证明，化合物pactamideg对所测的指示菌具有抑制活性，通过生物工程或化学修饰可望开发成为抑菌新药。本发明的链霉菌streptomycessp.zj306，于2014年3月13日保藏于中国典型培养物保藏中心(cctcc)，地址：中国武汉武汉大学，其保藏编号为：cctccno.m2014081，并公开于专利申请号为cn104073507a，发明名称为：一种斑鸠霉素的生物合成基因簇及其应用的中国发明专利中。附图说明图1是质粒pcsg8013示意图。图2是质粒pcsg3500和质粒pcsg3510示意图。图3是上清液的提取物-浸膏a和菌丝体的提取物-浸膏b合并后浸膏c的高效液相色谱图。图4是化合物pactamideg的关键的hmbc，1h–1hcosy及其晶体衍射结构。图5是化合物pactamideg的1h-nmr谱图。图6是化合物pactamideg的13c-nmr谱图。具体实施方式以下实施例是对本发明的进一步说明，而不是对本发明的限制。实施例1：构建活性代谢产物pactamideg的生产菌株(δbc306::sgr812::sgr813::sgr811)1、接合转移供体菌株的构建利用三对引物152-sgr812f/r、152-sgr813f/r和152-sgr811f/r(引物序列见表1)通过pcr方法从链霉菌streptomycesgriseus的基因组中扩增出三个基因sgr812、sgr813和sgr811(序列如seqidno.1-3所示)。利用三对引物erm1f/r、erm2f/r和erm3f/r(引物序列见表1)通过pcr方法从质粒ppww50(参考文献：m.doumith,p.weingarten,u.f.wehmeier,k.salah-bey,b.benhamou,c.capdevila,j.m.michel,w.piepersberg,m.c.raynal,mol.gen.genet.2000,264,477-485.)上扩增得到三条核酸片段erm1、erm2和erm3，分别作为基因sgr812、sgr813和sgr811的启动子。随后利用多片段一步克隆试剂盒(生产公司：南京诺唯赞生物科技有限公司)将片段erm1和基因sgr812首尾相连，连接到用限制性内切酶xbai线性化的载体pset152(参考文献：bierman,m.；logan,r.；o'brien,k.；seno,e.t.；rao,r.n.；schoner,b.e.,plasmidcloningvectorsfortheconjugaltransferofdnafromescherichiacolitostreptomycesspp.gene1992,116,43-9.)上得到质粒pcsg8010。随后质粒pcsg8010被限制性内切酶bamhi线性化，通过同样的方法将片段erm2和基因sgr813依次连接到质粒pcsg8010上形成质粒pcsg8011，同样的质粒pcsg8011被限制性内切酶maubi线性化后，片段erm3和基因sgr811依次连接到质粒pcsg8011上形成质粒pcsg8013(质粒图谱如图1所示)。将质粒pcsg8013转化到大肠杆菌e.coliet12567/puz8002中得到e.coliet12567/puz8002/pcsg8013，即作为接合转移的供体菌。表1.本发明中使用的引物2、接合转移受体菌株的构建利用引物c5f和c7r从streptomycessp.zj306的cosmid文库中筛选，获得包含斑鸠霉素生物合成基因簇(genbank登录号：kf954540)的cosmid质粒pcsg3500(图2)。通过pcr-targeting的方法(敲除所用到的引物为表1中的ifikabf/r和ikabdf/r)在质粒pcsg3500的基础上构建了ikab和ikac双基因缺失突变质粒pcsg3510(图2)。将质粒pcsg3510转化到大肠杆菌e.coliet12567/puz8002中得到e.coliet12567/puz8002/pcsg3510，并将其与野生型链霉菌streptomycessp.zj306进行结合转移实验，得到ikab和ikac双基因缺失突变株△bc306，即作为下一步接合转移的受体菌。3、通过接合转移获得pactamideg的生产菌株(δbc306::sgr812::sgr813::sgr811)接合转移过程具体说明如下：ikab和ikac双基因缺失突变株△bc306在sfm培养基(培养基配方：黄豆粉15g，甘露醇15g，氯化钠2g，碳酸钙5g，加水定容至1l，ph7.4，配制：将培养基各成分溶于水，搅拌溶解，灭菌，即得)平板中划线培养5-7天，长出的孢子用无菌棉签收集于tsb培养基(配方：取购买的tsb培养基粉末100g，加水定容至1l，ph7.4，配制：将tsb培养基粉末溶于水，搅拌溶解，灭菌，即得)中，涡旋振荡，使孢子分散。过滤分离菌丝体和孢子，孢子悬浮于5ml的tsb培养基中，50℃热激10min，然后于28℃萌发2h，作为接合转移的受体菌。供体菌e.coliet12567/puz8002/pcsg8013在50ml含50μg/ml阿泊拉霉素的lb液体培养基中于37℃生长至od600值约为0.8。取上述受体菌400μl和供体菌100μl混合均匀，涂布于不含任何抗生素的isp4固体培养基(培养基配方：可溶性淀粉10g，细菌学蛋白胨1g，酵母提取粉0.5g，磷酸氢二钾1g，硫酸镁1g，硫酸铵2g，氯化钠1g，海盐30g，碳酸钙2g，琼脂粉18g，加水定容至1l，ph7.4，配制：将培养基各成分溶于水，搅拌溶解，灭菌，即得)上，吹干后，于28℃培养18-20h。然后将平板取出，用含有抗生素的水覆盖平板，抗生素终浓度为50μg/ml阿泊拉霉素和100μg/ml甲氧苄氨嘧啶，吹干后，置于28℃培养箱中，培养5-7天后观察。当接合转移平板上长出菌落后，用无菌牙签将其转接到含有50μg/ml阿泊拉霉素和100μg/ml甲氧苄氨嘧啶的sfm平板上，28℃培养3天后，抽取各个突变株的基因组dna，利用引物erm1f和sgr811r(表1)通过pcr检测获得阳性克隆，即获得pactamideg的生产菌株δbc306::sgr812::sgr813::sgr811。实施例2：活性代谢产物pactamideg的分离和制备1、配制培养基：种子培养基配制，每升种子培养基中含有：可溶性淀粉20g，葡萄糖10g，蛋白胨5g，酵母粉5g，caco35g，余量为海盐质量分数为3％的海水或陈海水，ph7.4。将培养基各成分混合，搅拌溶解，于115℃，灭菌30min，即得种子培养基，备用；发酵培养基与种子培养基相同。2、发酵：种子培养：将在平板上活化的海洋来源的链霉菌(streptomyces)δbc306::sgr812::sgr813::sgr811接入种子培养基(800ml)中，28℃，200rpm，培养72h制得种子液。规模发酵培养：将种子液以10％v/v的接种量接入到发酵培养基中(10l)，28℃，200rpm，培养168h，制得链霉菌(streptomyces)δbc306::sgr812::sgr813::sgr811的发酵培养物。3、发酵液的萃取：发酵培养物先进行离心分离(3500r·min-1，8min)，得到10l体积的上清液(发酵液)和菌丝体。发酵液经丁酮萃取3次，丁酮层经蒸馏浓缩后得到上清液提取物-浸膏a(6.0g)；菌丝体用2l丙酮在室温下浸提3次，每次3小时，合并提取液，减压回收丙酮后剩余水混合液用6l丁酮萃取，丁酮层减压蒸馏得菌丝体提取物-浸膏b(0.7g)。将浸膏a与b合并为浸膏c(6.7g)。将浸膏c进行高效液相色谱检测。高效液相色谱(hplc)条件：色谱柱为phenomex150×4.6mm(sphereclonesax)，流动相包括a相和b相，流动相a相：10％(体积分数)的乙腈 0.08％(体积分数)的甲酸，溶剂为水，流动b相：90％(体积分数)的乙腈，溶剂为水；进样程序：0-18min，流动相比例为a相/b相(体积比)：95:5-0:100，18-23min，流动相比例为a相/b相(体积比)：0:100，23-25min，流动相比例为a相/b相(体积比)：0:100-95:5，25-30min，流动相比例为a相/b相(体积比)：95:5，检测波长320nm，流速1ml/min。浸膏c检测的高效液相色谱图见图3所示。4、化合物的分离：a)浸膏c经中压硅胶柱层析(300-400mesh)，从体积比100:0～0:100进行梯度洗脱，收集氯仿/甲醇体积比80:20梯度洗脱下来的馏分fr.1。b)500mg的馏分fr.1经凝胶sephadexlh-20柱层析，用体积比为1:1的氯仿-甲醇作为流动相洗脱，洗脱200ml，每20ml收集为一个馏分，先后依次得馏分fr.1a至fr.1j，把收集的第7个馏分fr.1g(100mg)通过使用半制备型高效液相色谱(乙腈：水体积比60:40，流速2.5ml/min)，运用c-18反相柱(250×10.0mmi.d.,5μm,phenomenex,usa)制备，收集保留时间为第10分钟的馏分，旋转蒸干制备获得化合物pactamideg(9.7mg)。5、化合物的鉴定：化合物pactamideg的关键的hmbc，1h–1hcosy及其晶体衍射结构见图4所示。化合物pactamideg的1h-nmr谱图见图5所示。化合物pactamideg的13c-nmr谱图见图6所示。通过结构分析，对本发明的从链霉菌(streptomyces)δbc306::sgr812::sgr813::sgr811的发酵培养物中制备得到的化合物pactamideg(式(i))进行鉴定，其鉴定结果如下：化合物pactamideg:白色晶体，uv(meoh)λmax(logε)322nm(4.99)；ecd(c2.4×10-5m,meoh)λmax(δε)212(8.34),239(-11.48),and325(4.24)nm；1hnmr(700mhz,dmso)and13cnmr(176mhz,dmso)data,seetables3-s4；hrms(esi-tof)m/z:[m-h]-,calcdforc29h39n2o6,511.2814,found511.2824。化合物pactamideg的负源高分辨电喷雾质谱图显示其准分子离子峰为m/z511.2824,[m-h]-，推测其分子式为c29h39n2o6(计算值为511.2814，不饱和度为11)。分析1h,13c和hsqc(表2)数据表明该化合物含有二个甲基(δh0.83,3h,m；δh1.07,3h,m),一个连氧的次甲基(δh3.29,1h,m)，二个碳碳双键(zδ2,3(j2,311.4hz)；eδ17,18(j17,1816.0hz))，碳谱显示有29个碳，包括2个甲基，8个亚甲基，9个sp3杂化的次甲基，4个sp2杂化的次甲基，和6个季碳。进一步的2dnmr分析，显示化合物1中有一个典型的tetramate环，和三个依次骈合的多元碳环(5元碳环a，5元碳环b，6元碳环c)，以上的这些信号说明化合物pactamideg是polycyclictetramatemacrolactams家族中的一员(jinh.；zhangw.；zhangg.；zhangl.；liuw.；zhangc.,.org.lett.2020)。表2.化合物pactamideg的nmr(700mhz)核磁数据归属table1.1hnmr(700mhz)and13cnmr(176mhz)assignmentsofpactamideg(jinhzwithinparentheses).arecordedat700mhzindmso-d6；assignmentswerebasedondept,hsqc,cosy,hmbc,andnoesyexperiments.根据上述数据结果，确认化合物pactamideg的结构如式(i)所示：实施例3：化合物pactamideg抗菌活性测定化合物pactamideg针对5株指示菌acinetobacterbaumanniiatcc19606，staphylococcusaureusatcc29213，escherichiacoliatcc25922，pseeudomonasaeruginosaatcc9027和methicillin-resistantstaphylococusepidermidiss等进行了抗菌活性的mic值测定，实验方法参考文献[zhang,w.liu,z.li,s.lu,y.chen,y.zhang,h.zhang,g.zhu,y.zhang,g.zhang,w.liu,j.zhang,c..fluostatinsi-kfromthesouthchinasea-derivedmicromonosporarosariascsion160.j.nat.prod.，2012，75,1937–1943]，以ampicillin作为阳性对照。结果表明化合物pactamideg对staphylococcusaureusatcc29213，pseeudomonasaeruginosaatcc9027和methicillin-resistantstaphylococusepidermidiss等的mic值分别为64μg/ml，128μg/ml，128μg/ml。pactamideg对所测的指示菌具有抑制活性，通过生物工程或化学修饰可望开发成为抑菌新药。表3.化合物pactamideg的抗菌mic值活性测定。aampicillin,positivecontrol.以上仅是本发明的优选实施方式，应当指出的是，上述优选实施方式不应视为对本发明的限制，本发明的保护范围应当以权利要求所限定的范围为准。对于本
技术领域：
：的普通技术人员来说，在不脱离本发明的精神和范围内，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。序列表<110>中国科学院南海海洋研究所<120>抗生素pactamideg及其制备方法和在制备抗菌药物中的应用<160>3<170>siposequencelisting1.0<210>1<211>1725<212>dna<213>链霉菌(streptomycesgriseus)<400>1gtgagcggcgacaggacagggacccggcccgggggcgcccgccggccccgggagacgatg60atcatcatcggggccggtctcggcgggctctccaccggctgctacgcccagatgaacggc120taccgcacccgcatcctggagatgcacgagatccccggcggctgctgcaccgcctgggag180cgcggcgggttcaccctggacgcctgcgtcagctggctcctgggcagcggccccggcaac240gagatgcaccagatctggctggagctcggcgccctccagggcaaggaaatccggcacttc300gacgtcttcaacatcgtgcgcggcacggacggccgggccgtccacttctactccgacccc360gaccggctcgaagcccacctcatcgacatctcacccgccgacgcccgcctcgtacggaag420ttctgcgcccagctccgcagcttccgcaaggcgctggcggtctaccccttcctcaagccc480gtcggactgatgggacgcagggagcggtggcggatgctcgcctcgttcctgccgtacttc540aacgccgtccgcaccacgatcaccgtcctgatgagcgacttctcccagaagttcaaggac600cccctcctccaggaggcgttcaacttcatcctgtacgagaagcacccggccttccccgtc660ctgcccttccacttccagctcgcctcgcacgccaacctctccgccggggtccccgagggc720ggctccctcggcctcgccgagtcgatcgaggcccgctaccgccggctcggcggcgaggtc780tcctacaacaccaaggtcgagacggtgatcgtcgaggacgaccgggcggtgggcgtccgc840ctcagcgacggccgggagatgcgcgccgacatcgtcgtgtcggcctgcgacggctacacc900acgaccatgaagttcctggagggcgagtacctgggcgaggactaccgcaagctctacacc960gagaccatccacgaacccggcatggtcttccccggctacttcaccctcttcctcggcctc1020tcccgccccttcccggagggagacccctgcaccacccacctcctcgacggggcgacggcc1080gcggagctgaccggcatccgccaccccagcatcaacgtccagttccgcagccgccactac1140cccgagctttccccggacggcaccaccgtcgtctacgccacctacttctgcgacatcgcc1200ccctggcgagccctggacgagggccccgaacagatcacccgcacccgcggcggccaggag1260ctgcacaccctgcccgtacgccacgggcgcggctactacgccgcgaaacggcgggcccgc1320gaggcactcatcggcttcctggaggagcgccaccccggactgcgggacgcgatcgtcgtc1380cgggacgtctccagccccctcacccaggtccgctacaccggcaactacgacgggaccgtg1440ctgggctggcagcccttcgtcgagagcggcgagaccctggaggagctgatcaagaagcac1500ggtccgggcctccccggactgcgcgacttctaccagtcgggcgtctgggccaccaccggc1560ggactcatccgggccgccgccgccggacgccacgtcatgcagttcgtctgccgcgacgac1620ggcaagcccttcaccgcgtcgctcgaccgcaccgcaccgccaccgacccaccgggtcatc1680cccgtgcccgttcgtcccgccgcaccgacggagaggaagtcatga1725<210>2<211>1683<212>dna<213>链霉菌(streptomycesgriseus)<400>2atggcggatgacgaccccaccgactggaccagcagggaacgcgccccggggaccccgccc60cgcgtcatcgtcgtcggcgcgggcgtggccggcctcgccaccggtgtgtacgcgcagatg120agcggggccaggactcgcatcttcgagaagcacgtgctgcccggtggctgctgcaccgcc180tggtcccgcgacggctacctcttcgactactgcatcgaatggctcatcggcaccgccccg240ggcaacgacgcccaccaggtgtggagcgagctcggcgcgttcgacggcaagaccgtcacc300aacttcgaactgttcaacaaggtcgaggacgcctcgggcaggtcggtgacgttctacaac360gaccccgaccggctggaggcccacctcctggaggtctcacccgccgacgccccgctcatc420cgcgccttcacccgggacctgcggcgcttcatcgacatcgagctgtacccgttcctgacc480gcgcccgcgctccggaccgtgggggagcgggcccggaccctgcgcacggtgctccccgcc540ttccggctgttctggcggaccgccgccaccccgatgcacgtgttcgccgaccggttccag600gacccgttgctgcgcagggcgttccgcaacatcttcttccaggaccccgagggcttcccg660atgctgccgtacctcttcaacatggcggccgcccaccacggcaacgcgggcttcccccag720ggcggttcgctcggcctcgcccgctccgtcgaggagcgctacaggagcctgggcggaacg780gtcacctaccgggcccgcaccgaacggatcctggtcgaggacgaccgggcgatcggcatc840gaactccgcaacggcaagcagtacttcgccgagcacgtggtctccgcctgcgacggccac900accaccgtctacgggctcctgggcggccggtacaccggcccccggatcgacaagctctac960accgacctgctgcaccgccccggcaccctcttccccgccgtcgtctccgccttcgtcggc1020ctgcgcggcgacctggaacccgaggaggcgcacagcaccacgcacctcctcggcccggag1080gacgcggcccacctcccgggcgccctccaggacagcatcgtcgtgcaggcacgctcccgc1140tactccggcggcttcgcaccgccgggccactccgtcctgcactgcacctacttcagcgac1200tacgcccactggaagaacctccgcaccagggaccgcaaggagtaccgccggcgcaagcgc1260gaagtcgccgacttcgtccgggacttcctggagcgccgcaccccgggcatcgcggagcgc1320atcgacatcgtcgaggtcgccacaccggccacgacccaccgctacacgggcaacctcggc1380ggctccatcctcgcctggaaggcgttctccgacgccgacgacgtcgcggcacgcctcgtc1440ggcaaggaccggatgcggctgccgggactgagcaacttctccatggccggacagtgggtc1500ggcatgggcggcctgatccgcgccgcctccaccggccgcttcgcggtccagtacctctgc1560cgcgacctgggcctggagttccgggcctgggagagcaagggcgccgaaccctggcatccg1620gggaagctggggcacctgccccagctcgaccggtggtccgcacgggagagcgaggaagcg1680tga1683<210>3<211>1056<212>dna<213>链霉菌(streptomycesgriseus)<400>3atgaagatcgcgaaatgggtggtccgcgaacacgtcgaaggagtccccgacgtggaccgc60gtctacgagaagatcgtcgagaacgtcgacgtgaggctcgcccccgacgagatgctcctg120cgcaccctgtacgtctccgtcgacccctacctccagggcatcgccctcgacaccccgatc180ggccggcacatgggcgccgactcgatcatggaggtggtggaggcgggaccgcgcgccgcc240caccgcgtcggcgacctcgtccagggcttcgggggctggcgcacccatgtggtctccacc300ggcgtccccgaactctggcagaccggcacgttccccatggtcttccccgcctaccgcagg360ctggacccccggtggtacgacgacgccctgccgctcccgaccgccctcagcgtgatgggc420ggccccggcatgacggcctgggggaccctgaccaagtacatgacgatcagccccggcgag480accctcgtcatcagcggggcctccgggccggtgggcgccctggtcgggcagctcgccgcg540ctcgccggggcccgggtgatcggcaccacctcctccccggagaaggcggactacctcacc600gggctcgggttcgacgccgtgatcgtctaccgccacggggacggtgcggacaccgtcggc660gacgcactcgtccgggccgcgcccgacggcgtcgaccgctacttcgacaacctcggcggc720gcggtcaccgacgccgtgttccccctgctcaacatcgggagccaggtggcggtgtgctgg780cagtgggcgacccaggtcggcaacgaggccaccggtccccggctcctgccctacctgatg840tttccccgcgccaccgtccgcggcatcttctccctggaatggttcaccgaacagaactgg900caggacctccacaccgagctgggcggccgcgtccgacgcggcgaggtcgtctgcgaccac960accctgcaccacggcttcgacgcgatccccgccgcctacggcagcctctacggcgaccgg1020gcggccaaccggggcaaggtactcgtcgaactctga1056当前第1页1 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技术特征：1.化合物pactamideg或其药用盐，其结构如式(i)所示：
化合物pactamideg，c2和c3间为顺式双键，c17和c18间为反式双键，c5为s构型，c6为r构型，c8为s构型，c10为r构型，c11为s构型，c12为s构型，c13为r构型，c14为s构型，c16为s构型，c23为s构型。
2.一种权利要求1所述的化合物pactamideg的制备方法，其特征在于，所述的化合物pactamideg是从链霉菌streptomycessp.zj306的突变株δbc306::sgr812::sgr813::sgr811的发酵培养物中制备分离得到的。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，具体步骤如下：
a、制备链霉菌突变株δbc306::sgr812::sgr813::sgr811的发酵培养物，将该发酵培养物的发酵液和菌丝体分离开，发酵液经丁酮萃取，丁酮层经蒸馏浓缩后得到浸膏a；菌丝体先用丙酮浸提，浸取液回收丙酮后剩余的水混合液再用丁酮萃取，丁酮层经蒸馏浓缩后得到浸膏b；
b、将浸膏a和浸膏b合并的粗提物c经硅胶柱层析，用氯仿/甲醇作为洗脱剂，从体积比100:0～0:100进行梯度洗脱，收集氯仿/甲醇体积比80:20梯度洗脱下来的馏分fr.1，然后经lh-20凝胶柱，以氯仿/甲醇体积比1:1作为流动相洗脱，洗脱馏分再经hplc制备分离，得到化合物pactamideg。
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述a步骤的制备链霉菌突变株δbc306::sgr812::sgr813::sgr811的发酵培养物是通过以下方法制备：将活化的链霉菌突变株δbc306::sgr812::sgr813::sgr811接入种子培养基，28℃，200rpm，培养72h得种子液，将种子液以10％v/v的接种量接入到发酵培养基中，28℃，200rpm，振荡培养168h，即制得发酵培养物。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述的种子培养基和发酵培养基的配方均为：每升培养基中含有可溶性淀粉20g，葡萄糖10g，蛋白胨5g，酵母粉5g，caco35g，余量为海盐质量分数为3％的海水或陈海水。
6.权利要求1所述的化合物pactamideg或其药用盐在制备抗菌药物中的应用。
7.一种抗菌药物，其特征在于，含有有效量的权利要求1所述的化合物pactamideg或其药用盐作为活性成分。
8.链霉菌streptomycessp.zj306的突变株δbc306::sgr812::sgr813::sgr811在制备权利要求1所述的化合物pactamideg中的应用。
技术总结本发明公开了一种抗生素pactamide G及其制备方法和在制备抗菌药物中的应用。所述的化合物pactamide G的结构如式(I)所示。本发明的化合物pactamide G是从链霉菌突变株ΔBC306::SGR812::SGR813::SGR811的发酵培养物中制备分离得到的，其是具有5/5/6多元碳环结构的新颖的polycyclic tetramate macrolactams家族化合物。polycyclic tetramate macrolactams是一类具有良好生物活性的复杂分子，进一步对pactamide G及进行活性筛选，有望成为药物先导小分子。
技术研发人员：张长生;金红波;张文军;张光涛;张丽萍;刘威
受保护的技术使用者：中国科学院南海海洋研究所
技术研发日：2020.02.11
技术公布日：2020.06.09
