本发明涉及配合物，具体涉及一种新型白叶藤碱锌(ii)配合物。同时，本发明还涉及该配合物的合成方法和应用。
背景技术：
顺铂、卡铂和奥沙利铂等铂类药物在临床的抗癌应用，使得金属抗癌配合物的研究是无机药物研究的重点之一，促使抗癌配合物的设计合成和筛选成为热门课题，人们对于有希望用于临床医学上的无机抗癌化合物很感兴趣。然而，顺铂类药物的许多的限制性使得合成抗癌活性高、毒副作用低、抗癌谱广的非铂金属配合物的非常热门。
此外，白叶藤碱类化合物具有抗菌、抗病毒、抗高血糖等生理活性，是一类重要的生物碱。从目前的报道来看，未曾有以白叶藤碱及衍生物为配体报道的金属配合物。
技术实现要素：
本发明的目的之一在于提供一种新型白叶藤碱锌(ii)配合物。
具体地，一种新型白叶藤碱锌(ii)配合物，其化学式为[zn(t2)(h2o)cl2](t2-zn)，化学结构式如下式所示：
本发明的目的之二在于提供新型白叶藤碱锌(ii)配合物合成方法。
具体地，所述白叶藤碱锌(ii)配合物的合成方法，包括以下步骤：
(1)白叶藤碱衍生物(sm)与2-氨甲基吡啶在溶剂的存在下反应生成黄色固体粉末t2配体；
(2)t2配体和等物质的量的氯化锌(ii)在极性溶剂的存在下配位反应得到黄色的目标产物t2-zn。
本发明合成路线如下：
步骤(1)中，白叶藤碱衍生物(sm)与2-氨甲基吡啶的摩尔比为1:1-1.2。
步骤(1)中，白叶藤碱衍生物(sm)与2-氨甲基吡啶在45-60℃下反应15-18小时。
步骤(2)中，配位反应温度27-100℃，反应时间4-80h。
步骤(2)中，极性溶剂为甲醇、乙醇、二氯甲烷和三氯甲烷的任一种溶剂或者两两混合溶液，其中混合溶液中的两种溶剂为任意比。
本发明的目的之三在于提供所述白叶藤碱锌(ii)配合物的应用。具体地，提供所述白叶藤碱锌(ii)配合物在制备抗肿瘤药物中的应用。更具体地，提供所述白叶藤碱锌(ii)配合物在制备靶向治疗乳腺癌的药物中的应用。
本发明的有益效果在于：
与现有技术相比，本发明新型的药根碱衍生物t2活性配体，并以之为配体合成其锌配合物[zn(t2)(h2o)cl2](t2-zn)。经考察，它对人宫颈癌细胞hela、人乳腺癌细胞(mcf-7和mda-mb-231)、人卵巢癌耐药株sk-ov-3/ddp细胞和人正常肝hl-7702细胞的活性和毒性实验。mtt实验结果显示配合物t1-zn对人乳腺癌细胞mcf-7选择性的抑制，其ic50值为8.19±0.52μm，其体外抗肿瘤活性远远大于t2配体(30.89±0.44μm)和临床经典的金属基抗癌药物顺铂(11.24±0.47μm)；此外，配合物t1-zn对正常细胞hl-7702的毒性很小(ic50＞100μm)，体现出很好的靶向抑制人乳腺癌的增殖。总之，配合物t1-zn表现出优越的体内外抗肿瘤活性和靶向性，具有潜在的药用价值，有望用于抗乳腺癌药物的制备。
附图说明
图1为本发明实施例1制得的t2核磁共振氢谱图；
图2为本发明实施例1制得的t2核磁共振碳谱图；
图3为本发明实施例1制得的配合物t2-zn的电喷雾质谱图；
图4为本发明实施例1制得的t2-zn的核磁共振氢谱图；
图5为本发明实施例1制得的t2-zn的核磁共振碳谱图。
具体实施方式
下面以具体实施例对本发明作进一步说明，但本发明并不局限于这些实施例。
本发明所述合成方法中涉及的原料白叶藤碱衍生物sm，参照考现有文献(gu,l.-q.；etal.j.med.chem.,2005,48:7315-7321.)进行制备。
实施例1
1.配体t2的合成与表征：
在25.0ml的圆底烧瓶中，称取1.0mol的白叶藤碱衍生物sm与1.10mol2-氨甲基吡啶，溶解于含有5.0毫升苯酚溶液中，在50.0℃下反应16.0小时后，得到黄色固体粉末t2配体，产率为70.1％。
对所得t2进行鉴定：
(1)核磁共振氢谱图，如图1所示。
1hnmr(400mhz,chcl3-d)δ8.68(d,j＝4.6hz,1h),8.36(d,j＝7.7hz,1h),8.24-8.06(m,2h),7.76-7.64(m,2h),7.59(d,j＝3.7hz,2h),7.50(dt,j＝1.1,7.6hz,1h),7.46-7.39(m,2h),7.26(s,1h),6.79(brs,1h),5.38(d,j＝4.9hz,2h).
(2)核磁共振碳谱图，如图2所示。
13cnmr(101mhz,chcl3-d)δ158.30,156.88,149.08,147.18(d,j＝15.4hz,1c),136.76,134.06(d,j＝3.7hz,1c),130.29-129.35(m,1c),127.92,124.27-123.23(m,1c),123.03,122.47,122.01(d,j＝24.9hz,1c),120.51,118.28,111.88,49.48.
(3)元素分析结果，如表1所示。
表1实施例中化合物t2和t1-zn的元素分析结果
因此，可以确定所得黄色目标产物为化合物t2，其结构式如下：
2.配合物t2-zn的合成与表征：
称取1.0mmol配体t2和1.0mmol的氯化锌(ii)，溶解于10ml的甲醇和1ml的二氯甲烷溶液中，在80℃下进行配位反应4h，产物用5.0ml乙醚3次，在40℃的真空干燥箱中干燥，即得到黄色的目标产物t2-zn。产率为：85.0％。
对所得t1-zn进行鉴定：
(1)电喷雾质谱，其谱图如图3所示。
esi-msm/z:460.1[m-h-(h2o)] ，其中m为化合物t2-zn的分子量。
(2)核磁共振氢谱图，如图4所示。
1hnmr(500mhz,dmso-d6)δ8.58–8.52(m,2h),8.21(d,j＝7.7hz,1h),8.02(d,j＝8.5hz,1h),7.79(t,j＝7.8hz,1h),7.74(td,j＝7.7,1.8hz,1h),7.70–7.65(m,1h),7.65–7.57(m,2h),7.47(dq,j＝7.7,4.3hz,2h),7.26(dd,j＝7.4,4.9hz,1h),5.32(d,j＝6.3hz,2h).
(2)核磁共振碳谱图，如图5所示。
13cnmr(126mhz,dmso-d6)δ159.55,157.61,149.53,149.50,137.49,137.47,132.82,131.54,130.02,126.62,124.57,124.17,123.13,122.76,122.33,121.43,117.79,112.78,50.04,40.47,40.30,40.14,39.97,39.80,39.64,39.47.
(4)元素分析结果，如表1所示。
因此，可以确定所得黄色目标产物为配合物t2-zn，其结构式如下：
实施例2
称取1.0mmol配体t2和1.0mmol的氯化锌(ii)，溶解于100ml的二氯甲烷溶液中，在30℃下进行配位反应80h，产物用5.0ml乙醚3次，在40℃的真空干燥箱中干燥，即得到黄色的目标产物t2-zn。产率为：60.2％。
实施例3
称取1.0mmol配体t2和1.0mmol的氯化锌(ii)，溶解于50ml的乙醇溶液中，在100℃下进行配位反应80h，产物用5.0ml乙醚3次，在40℃的真空干燥箱中干燥，即得到黄色的目标产物t2-zn。产率为：75.0％。
实施例4
称取1.0mmol配体t2和1.0mmol的氯化锌(ii)，溶解于10ml的甲醇和10ml乙醇溶液中，在55℃下进行配位反应36h，产物用5.0ml乙醚3次，在40℃的真空干燥箱中干燥，即得到黄色的目标产物t2-zn。产率为：69.9％。
为了充分说明新型白叶藤碱锌(ii)配合物t2-zn在制药中的用途，申请人对其进行了体外抗肿瘤活性实验。
新型白叶藤碱锌(ii)配合物t2-zn对多种人肿瘤细胞株的增殖抑制活性实验
1.细胞株与细胞培养
本实验选用人宫颈癌hela细胞、人卵巢癌顺铂耐药sk-ov-3/ddp细胞、人乳腺癌细胞(mcf-7和mda-mb-231)以及人正常肝hl-7702细胞等5种人类细胞株。
所有人源细胞株均培养在含100u/ml青霉素、10wt％小牛血、100u/ml链霉素的rpmi-1640培养液内，置37℃含体积浓度5％co2孵箱中培养。
2.待测化合物的配制
所用的配体t2和配合物t2-zn的纯度均需≥95％，将它们的dmso储液用生理缓冲液稀释成20μmol/l的终溶液(dmso的终浓度≤1％)，测试该浓度下各个化合物对正常细胞或所选的肿瘤细胞生长的抑制程度。
3.细胞生长抑制实验(mtt法)
(1)取对数生长期的正常细胞或肿瘤细胞，经胰蛋白酶消化后，用含10％小牛血清的培养液配制成浓度为5000个/ml的细胞悬液，以每孔190μl接种于96孔培养板中，使待测细胞密度至1000～10000孔(边缘孔用无菌pbs填充)；
(2)5％co2，37℃孵育24h，至细胞单层铺满孔底，每孔加入一定浓度梯度的药物10μl，每个浓度梯度设4个复孔；
(3)5％co2，37℃孵育48小时，倒置显微镜下观察；
(4)每孔加入10μl的mtt溶液(5mg/mlpbs，即0.5％mtt)，继续培养4h；
(5)终止培养，小心吸去孔内培养液，每孔加入150μl的dmso充分溶解甲瓒沉淀，振荡器混匀后，在酶标仪用波长为570nm，参比波长为450nm测定各孔的光密度值；
(6)同时设置调零孔(培养基、mtt、dmso)，对照孔(细胞、培养液、mtt、相同浓度的药物溶解介质、dmso)。
(7)根据测得的光密度值(od值)，来判断活细胞数量，od值越大，细胞活性越强。利用公式：
计算各个化合物对所选细胞生长的抑制率，再以bliss法分别计算各受试化合物对所选的各个细胞株的ic50值。其结果如以下表2所示。
表2.配体t2和配合物t2-zn对各种细胞株的ic50值(μm)
从ic50活性筛选结果来看，配合物t2-zn对4种受测的人肿瘤细胞株，人宫颈癌hela细胞、人卵巢癌顺铂耐药sk-ov-3/ddp细胞、人乳腺癌细胞mcf-7和人乳腺癌细胞mda-mb-231的增殖抑制活性明显高于金属盐zncl2和配体2，体现了配体t2与锌中心原子的协同效应。其中，配合物t2-zn靶向抑制人乳腺癌细胞mcf-7，其ic50值为8.19±0.52μm，其体外抗肿瘤活性远远大于t2配体(30.89±0.44μm)和临床抗癌药物顺铂(11.24±0.47μm)；此外，配合物t2-zn对正常细胞hl-7702的毒性很小(ic50＞100μm)，体现出很好的靶向抑制人乳腺癌的增殖。总之，配合物t2-zn表现出优越的体内外抗肿瘤活性和靶向性，具有潜在的药用价值，有望用于抗肿瘤药物的制备。
1.一种新型白叶藤碱锌(ii)配合物，其特征是，其化学式为[zn(t2)(h2o)cl2]，化学结构式如下式所示：
2.权利要求1所述的新型白叶藤碱锌(ii)配合物的合成方法，其特征是，包括以下步骤：
(1)白叶藤碱衍生物与2-氨甲基吡啶在溶剂的存在下反应生成黄色固体粉末t2配体；
(2)所述t2配体和等物质的量的氯化锌(ii)在极性溶剂的存在下配位反应得到黄色的目标产物t2-zn。
3.根据权利要求2所述的白叶藤碱锌(ii)配合物的合成方法，其特征是，所述步骤(1)中，白叶藤碱衍生物与2-氨甲基吡啶的摩尔比为1:1-1.2。
4.根据权利要求2或3所述的白叶藤碱锌(ii)配合物的合成方法，其特征是，所述步骤(1)中，白叶藤碱衍生物与2-氨甲基吡啶在45-60℃下反应15-18小时。
5.根据权利要求4所述的白叶藤碱锌(ii)配合物的合成方法，其特征是，所述步骤(1)中，白叶藤碱衍生物与二甲基吡啶胺在50℃下反应16小时。
6.根据权利要求2或3所述的白叶藤碱锌(ii)配合物的合成方法，其特征是，所述步骤(2)中，配位反应温度27-100℃，反应时间4-80h。
7.根据权利要求2或3所述的白叶藤碱锌(ii)配合物的合成方法，其特征是，所述步骤(2)中，极性溶剂为甲醇、乙醇、二氯甲烷和三氯甲烷的任一种溶剂或者两两混合溶液；其中，混合溶液中的两种溶剂为任意比。
8.权利要求1所述白叶藤碱锌(ii)配合物在制备抗肿瘤药物中的应用。
9.权利要求1所述白叶藤碱锌(ii)配合物在制备靶向治疗乳腺癌的药物中的应用。
技术总结