本发明涉及医疗诊断用具中一种常规细胞学检验或组织病理学检验使用的载玻片，具体涉及一种防脱载玻片的前处理方法及其制备方法。
背景技术：
防脱载玻片又叫防脱片、离子修饰玻片和细胞捕获玻片等，是用化学或物理方法进行载玻片或盖玻片的表面修饰，常用于细胞培养、病理学组织和细胞制片、液基细胞学薄层制片，以防止操作过程中细胞或组织掉片现象的发生。
防脱载玻片在细胞学常用，如标本经细胞保存液作用后，因粘液被稀释而使得细胞在载玻片上粘附力下降，越是病变细胞粘附力下降越大，这就要求载玻片必须进行防脱处理。载玻片粘附力不够会引起细胞的选择性吸附，即密度低且带电荷多的表皮细胞易于吸附，而密度高且电荷少的底层和病变细胞造成脱落，发生假阴性诊断。
防脱载玻片在组织学，如免疫组化染色在肿瘤诊断及肿瘤预后推断中具有重要意义。免疫组化染色，组织切片必须经过高温、高压，或酶消化及多次洗涤等步骤，实践证明，免疫组化染色组织切片脱落，受许多因素影响。在载玻片上因黏附不牢易引起脱片，这样既浪费试剂和人力，又影响诊断质量，有些小标本脱落后甚至无法弥补。因此，防止脱片是整个免疫组化染色顺利进行的关键环节之一。
现有技术中，常见的防脱载玻片多是apes(3-氨丙基-乙氧基甲硅烷)或多聚左旋赖氨酸(poly-1-lysine)，其原理是apes黏附于载玻片，分子另一端通过非共价结合细胞及组织切片，或是使多聚赖氨酸(p-l-l)多聚阳离子分子与组织切片上的阴离子相互作用，从而产生较强的黏合力，如专利号cn201610988836.6的中国专利所公开的防脱载玻片及其制备方法，所述防脱层的组分包括apes和无水乙醇。又如申请号为201210487248.6的中国专利所公开的一种医用粘附载玻片，包括：免洗载玻片，设置在免洗载玻片上的多聚赖氨酸层，设置在多聚赖氨酸层上的标记层。apes须现配现用，捞片时易产生气泡影响染色结果；多聚赖氨酸的成本高，且制作时多采用棉签在载玻片上涂覆多聚赖氨酸层，涂覆不均匀影响使用效果。同时包载玻片被前清洁工作也十分重要,被污染的载玻片影响贴片，可造成诊断误导。载玻片的前处理效果差，残留于载玻片表面的油脂等各种污渍,包被时泛开空白区,包被不均匀晾干后载玻片表面留下斑驳的痕迹,防脱片剂难以黏附防脱效果差。
技术实现要素：
本发明针对现有技术的不足，创新性提供一种防脱载玻片的前处理方法及其制备方法，包括载玻片的前处理方法和设置在所述处理载玻片本体上的防脱层及其制备方法，解决现有技术中防脱载玻片制作成本高、防脱层涂覆不均匀影响使用效果、易产生污渍而影响防脱效果及检测效果。
本发明提供的防脱载玻片前处理方法，按照如下步骤进行：
s1：去除有破损、有划痕载玻片；
s2：每1000ml水加入加酶洗衣粉20g搅拌均匀,将s1选好单头磨沙优质载玻片浸泡2h,期间翻动玻片几次；
s3：清洗s2载玻片表面残留物,自来水冲洗洁净沥干；
s4：将s3的载玻片浸入重铬酸钾硫酸清洁剂(重铬酸钾100g,溶于500ml蒸馏水,取浓硫酸沿玻棒缓缓加至1000ml搅拌均匀)过夜；
s5：戴上橡胶手套小心捞出s4的载玻片,自来水冲洗后,逐片插至玻片架上,连玻片架一同置超声波清洗仪中清洗10min×2次；
s6：将s5处理的载玻片沥干浸入95％酒精2h,取出电吹风微风吹干或防尘晾干备用。
其中：加酶洗衣粉中含有表面活性剂能减弱污渍附着力；高活性生物酶制剂等有效地提高和改善清洁性能,可以大大增强清洁剂对油脂及特殊和难洗污渍的洗净能力；
重铬酸钾硫酸清洁剂具有强氧化性与强腐蚀性,可将玻片上较难除去的污物及霉菌等清除,操作需谨慎注意安全,其中含有的六价铬离子易被玻璃吸附,需用大量清水冲洗方能清除。
本发明还提供一种防脱载玻片的制备方法，按照如下步骤进行：
s1：将壳聚糖季铵盐和超纯水按照比例搅拌均匀成0.1-1.2mg/ml的壳聚糖季铵盐溶液；
s2：将s1所得壳聚糖季铵盐溶液抽滤处理；
s3：取两滴壳聚糖季铵盐溶液置经前处理载玻片的一端，以边缘平滑的推片一端，从壳聚糖季铵盐溶液前沿方向接触，使壳聚糖季铵盐溶液沿推片展开，推片与载玻片保持25-30°的平面夹角，平稳的向前推动，壳聚糖季铵盐溶液即在载玻片上形成一防脱层；
s4：将s3所得具有防脱层的载玻片水平放置于45-65℃鼓风干燥箱中，烘干0.5-2h；
s5：取出s4的防脱载玻片，每片之间加入白纸，即可堆叠包装。
其中：水速溶阳离子壳聚糖季铵盐是海洋生物壳聚糖经化学改性修饰而制得的壳聚糖高级衍生物具有良好的水溶性其吸湿性强相容性好、可生物降解具有良好的抗菌性、成膜性、阴离子吸附性、吸湿保湿性、絮凝性、抗静电性等性能，其抗菌性能优于壳聚糖及其它壳聚糖衍生物，能够适用于组织学以及细胞学，是防脱载玻片的理想黏附剂；
制备过程中须保持前处理过的载玻片清洁、无油渍、无指纹、无粉尘等。所有操作均在室温、20％＜rh(相对湿度)＜75％下进行，所涉及的沥干、风干等过程视情况适当延长或缩短时长，制备时建立不同环境中的标准。
本发明提供一种防脱载玻片的前处理方法及其制备方法，所述防脱载玻片包括载玻片本体和设置在所述载玻片本体上的防脱层，所述防脱层的组分包括壳聚糖季铵盐，且将壳聚糖季铵盐用超纯水溶解后制得。本发明的防脱层采用将壳聚糖季铵盐，相对于多聚赖氨酸的成本更低；制作时，将壳聚糖季铵盐和超纯水按照比例搅拌均匀成0.5-1mg/ml的壳聚糖季铵盐溶液然后抽滤处理，推片与载玻片保持25-30°的平面夹角，平稳的向前推动壳聚糖季铵盐溶液，壳聚糖季铵盐溶液即在载玻片上形成一防脱层；将具有防脱层的载玻片水平烘干即可，前处理清洗载玻片本体时采用洗衣液、蒸馏水等常见物，易于寻找，操作简单，使用方便，且成本较低。
附图说明
图1为本发明防脱载玻片与市面常用载玻片对比试验结构图。
具体实施方式
为了使本技术领域的人员更好地理解本发明中的技术方案，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都应当属于本发明的保护范围。
实施例：
s1：去除有破损、有划痕载玻片；
s2：每1000ml水加入加酶洗衣粉20g搅拌均匀,将s1选好单头磨沙优质载玻片浸泡2h,期间翻动玻片几次；
s3：清洗s2载玻片表面残留物,自来水冲洗洁净沥干；
s4：将s3的载玻片浸入重铬酸钾硫酸清洁剂，过夜，本实施例的清洁剂采用如下方法配制：重铬酸钾100g,溶于500ml蒸馏水,取浓硫酸沿玻棒缓缓加至1000ml搅拌均匀；
s5：戴上橡胶手套小心捞出s4的载玻片,自来水冲洗后,逐片插至玻片架上,连玻片架一同置超声波清洗仪中清洗10min×2次；
s6：将s5处理的载玻片沥干浸入95％酒精2h,取出电吹风微风吹干或防尘晾干备用。
s7:将壳聚糖季铵盐和超纯水按照比例搅拌均匀成0.1-1.2mg/ml的壳聚糖季铵盐溶液，壳聚糖季铵盐溶液浓度为1.0mg/ml防脱效果是最佳的，低于或高于此浓度范围防脱效果均较差，具有显著性意义，实验结果如表1所示；
s8：将s7所得壳聚糖季铵盐溶液抽滤处理，利用负压抽滤粘度较大的壳聚糖季铵盐溶液滤掉杂质及未溶解部分，保证壳聚糖季铵盐均匀溶解无胶体、自聚等聚团现象，确保壳聚糖季铵盐溶液粘附于载玻片时能够形成均匀无气泡无空白的防脱层；
s9：取两滴壳聚糖季铵盐溶液置经前处理载玻片的一端，以边缘平滑的推片一端，从壳聚糖季铵盐溶液前沿方向接触，使壳聚糖季铵盐溶液沿推片展开，推片与载玻片保持25-30°的平面夹角，平稳的向前推动，壳聚糖季铵盐溶液即在载玻片上形成一防脱层；
s10：将s9所得具有防脱层的载玻片水平放置于45-65℃鼓风干燥箱中，烘干0.5-2h获得防脱载玻片。水平利于防脱层的均匀形成，烘干利于固化，形成稳定的粘附薄层；
s11：取出s10的防脱载玻片，每片之间加入白纸，即可堆叠包装。
注：制备过程中须保持前处理过的载玻片清洁、无油渍、无指纹、无粉尘等。所有操作均在室温、20％＜rh＜75％下进行，所涉及的沥干、风干等过程视情况适当延长或缩短时长，制备时建立不同环境中的标准。
应用例：取严格按照本发明所制备的防脱载玻片与市面常用防脱载玻片同时按照sp法测试同一石蜡切片标本，重复测试十次。结果如图1(上面十个为市面常用多聚赖氨酸防脱载玻片、下面十个为本发明防脱载玻片含1mg/ml的壳聚糖季铵盐溶)、表1所示。
脱片情况分为三个等级：轻度脱片：切片边缘轻度卷曲至脱落面积＜10％；中度脱片：10％＜切片脱落面积＜80％；重度脱片：切片脱落面积＞80％(脱片指切片从载玻片上脱下或切片已与载玻片分离，悬浮但尚未脱下。
表1：不同防脱载玻片效果比较
本发明的防脱载玻片，有效地防止细胞或组织从载玻片脱落，并能较好维持细胞或组织原来的三维形态。
当然，上述说明也并不仅限于上述举例，本发明未经描述的技术特征可以通过或采用现有技术实现，在此不再赘述；以上实施例仅用于说明描述本发明的技术方案并非是对本发明的限制，参照优选的实施方式对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，本技术领域的普通技术人员在本发明的实质范围内所做出的变化、改型、添加或替换都不脱离本发明的宗旨，也应属于本发明的权利要求保护范围。
1.一种防脱载玻片的前处理方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤1：去除有破损、有划痕载玻片；
步骤2：每1000ml水加入加酶洗衣粉20g搅拌均匀,将s1选好单头磨沙优质载玻片浸泡2h,期间翻动玻片几次；
步骤3：清洗s2载玻片表面残留物,自来水冲洗洁净沥干；
步骤4：将s3的载玻片浸入重铬酸钾硫酸清洁剂过夜；
步骤5：戴上橡胶手套小心捞出s4的载玻片,自来水冲洗后,逐片插至玻片架上,连玻片架一同置超声波清洗仪中清洗10min×2次；
步骤6：将s5处理的载玻片沥干浸入95％酒精2h,取出电吹风微风吹干或防尘晾干备用。
2.根据权利要求1所述的防脱载玻片的前处理方法，其特征在于，重铬酸钾硫酸清洁剂采用如下方法配制：重铬酸钾100g,溶于500ml蒸馏水,取浓硫酸沿玻棒缓缓加至1000ml搅拌均匀。
3.一种防脱载玻片的制备方法，按照如下步骤进行：
s1：将壳聚糖季铵盐和超纯水按照比例搅拌均匀成0.1-1.2mg/ml的壳聚糖季铵盐溶液；
s2：将s1所得壳聚糖季铵盐溶液抽滤处理；
s3：取两滴壳聚糖季铵盐溶液置于经前处理载玻片的一端，以边缘平滑的推片一端，从壳聚糖季铵盐溶液前沿方向接触，使壳聚糖季铵盐溶液沿推片展开，推片与载玻片保持25-30°的平面夹角，平稳的向前推动，壳聚糖季铵盐溶液即在载玻片上形成一防脱层；
s4：将s3所得具有防脱层的载玻片水平放置于45-65℃鼓风干燥箱中，烘干0.5-2h；
s5：取出s4的防脱载玻片，每片之间加入白纸，即可堆叠包装。
4.根据权利要求3所述的防脱载玻片的制备方法，其特征在于，壳聚糖季铵盐溶液浓度为1.0mg/ml。
技术总结